用鸡胚成纤维细胞生产传染性喉气管炎活疫苗的工艺探索摘？要：《兽医生物制品规程》中规定鸡传染性喉气管炎活疫苗的生产及生产用种毒的繁殖都是接种spf鸡胚，收获绒毛尿囊膜来进行的。spf鸡胚价格昂贵，绒毛尿囊膜产量少，挑膜工艺容易污染，造成损失和浪费。用鸡胚成纤维（cef）二代细胞代替鸡胚绒毛尿囊膜制备生产用种毒及疫苗，所制备的种毒及疫苗各项指标均符合《规程》规定的标准，提高了疫苗的批产量，降低了生产成本。关健词：spf鸡胚；绒毛尿囊膜；cef传代细胞；疫苗批产量
鸡传染性喉气管炎（k317株）活疫苗的传统生产方法是接种spf 胚，收获感染的鸡胚绒毛尿囊膜制备而成，绒毛尿囊膜接种法工艺繁琐，制备人工气室不仅耗费时间长，而且合格率达不到100%，收获时污染率高，尤其是气候炎热的季节污染率更高，造成不必要的损失和浪费，加大了生产成本。用鸡胚成纤维传代细胞代替鸡胚绒毛尿囊膜生产该疫苗，生产工艺容易掌握和控制，可批量生产，节约了鸡胚的使用量，降低了生产成本。
1 材料
1.1 鸡传染性喉气管炎（k317株）基础种毒（膜毒），由本公司质管部提供。
1.2 spf鸡胚，购自北京梅里亚维通实验动物有限公司，25日龄、40日龄spf鸡，由生产车间孵化。
1.3 cef由细胞组制备。
2 方法
鸡肾型传染性支气管炎的防治措施 鸡肾型传染性支气管炎的防治措施 核心提示：鸡传染性支气管炎病毒属于冠状病毒科冠状病毒属，有囊膜，单股正链病毒，病毒粒子形态为多形性，但大多数为球形，直径约为80～120纳米，囊膜表面呈松散、均匀排列的冠状纤突，状如皇冠，其纤突不如副粘病毒的棒状纤突排列紧密，有的毒株离心力超过100000克时纤突会丢失。传染性支气管炎病毒能在10～11日龄的鸡胚中生长，用自然毒初次接种鸡胚，多数鸡胚存活，但随继代次数的增加，对鸡胚的毒力增强，到第10代时，可在接种后的第9天引起80%的鸡胚死亡。 肾型传染性支气管炎是鸡传染性支气管炎的一种病理表现形式。我国于1972年由邝荣禄首次报道在广东省有传染性支气管炎存在，随后绝大多数省份都有该病发生的报道，在此期间发生的传染性支气管炎也主要为呼吸型。1962
年等在美国发现了致肾病变型传染性支气管炎病毒,并将其命名为株,该型的代表毒株有株、株、56b株、株等,其中株是缓和型毒株。同年在澳大利亚分离出N1/62(T株),该病毒被认为是嗜肾型传染性支气管炎病毒的代表株。20世纪90年代以来，肾型传染性支气管炎在国内也相继爆发，流行十分广泛。尤其是最近几年，肾型传染性支气管炎在我国肉鸡群中大面积流行，给养鸡生产带来了严重的损失。 一、病原 鸡传染性支气管炎病毒( ，)属于冠状病毒科冠状病毒属，有囊膜，单股正链病毒，病毒粒子形态为多形性，但大多数为球形，直径约为80～120纳米，囊膜表面呈松散、均匀排列的冠状纤突，状如皇冠，其纤突不如副粘病毒的棒状纤突排列紧密，有的毒株离心力超过100000克时纤突会丢失。传染性支气管炎病毒能在10～11日龄的鸡胚中生长，用自然毒初次接种鸡胚，多数鸡胚存活，但随继代次数的增加，对鸡胚的毒力增强，到第10代时，可在接种后的第9天引起80%的鸡胚死亡。胚体的特征性变化是发育受阻，胚体卷成球形，脚变形压在头部，羊膜增厚，紧贴胚体，卵黄囊缩小，尿囊液增多，肾脏尿酸盐沉积。传染性支气管炎病毒也能在15～18日龄的鸡胚肾细胞()、鸡肾细胞()和鸡胚肝细胞()上生长，经多次传代(6～10代)后，可引起较明显的细胞病变，表现为胞浆融合，形成合胞体及细胞死亡。病毒经
鸡传染性喉气管炎活疫苗 Ji Chuanranxinghouqiguanyan Huoyimiao Infectious Laryngotracheitis Vaccine，Live 本品系用鸡传染性喉气管炎病毒K317株接种SPF鸡胚，收获感染的鸡胚绒毛尿囊膜，研磨后，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。用于预防鸡传染性喉气管炎。 【性状】海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。 【无菌检验】按附录3306进行检验，应无菌生长。如果有菌生长，应进行杂菌计数和病原性鉴定（附录3307）以及禽沙门氏菌检验（附录3303），应符合规定。每羽份疫苗非病原菌应不超过1个。 【支原体检验】按附录3308进行检验，应无支原体生长。 【鉴别检验】将疫苗稀释至100 EID50/0.1ml，分成2组。第1组，与等量抗鸡传染性喉气管炎病毒特异性血清混合作为中和组；另1组，与等量生理盐水混合作为病毒对照组。置室温中和1小时后，经绒毛尿囊膜接种11日龄SPF鸡胚，中和组和病毒对照组各接种5枚，置37℃孵育120小时。病毒对照组的鸡胚绒毛尿囊膜应有明显病斑，中和组的鸡胚应全部存活，且其绒毛尿囊膜应无任何病斑。 【外源病毒检验】按附录3305进行检验，应无外源病毒污染。 【安全检验】用21～35日龄SPF鸡5只，每只点眼或滴鼻接种疫苗0.1 ml（含10 羽份），观察14日，应无异常反应，或在接种后3～5日有轻度眼炎或轻微咳嗽，但应在2～3日后恢复正常。 【效力检验】下列方法任择其一。 （1）用鸡胚检验按瓶签注明羽份，将疫苗用灭菌生理盐水稀释成每1.0 ml含5 羽份，再继续作10倍系列稀释，取10－2、10－3、10－4 3个稀释度，经绒毛尿囊膜途径分别接种10～11日龄SPF鸡胚5枚，每胚0.2 ml，置37℃孵育5日，解剖，观察病变。鸡胚绒毛尿囊膜呈明显增厚，有灰白色病斑时，判为感染，按Reed-Muench法计算EID50，每羽份病毒含量应不低于102.7 EID50。 （2）用鸡检验按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水稀释疫苗，点眼或滴鼻接种35～56日龄SPF鸡5只，每只2滴（约0.06 ml，含0.2羽份）。接种21日后，连同对照鸡4只，每只气管内注射鸡传染性喉气管炎病毒强毒株0.2 ml（含104.0EID50），观察10日。对照鸡应至少有3只出现眼炎和呼吸道症状，免疫鸡应全部无症状。 【剩余水分测定】按附录3204进行测定，应符合规定。 【真空度测定】按附录3103进行测定，应符合规定。 【作用与用途】用于预防鸡传染性喉气管炎。适用于35日龄以上的鸡。免疫期为6个月。 【用法与用量】点眼接种。按瓶签注明羽份用生理盐水稀释，每羽1滴（0.03 ml）。蛋鸡在35日龄时第1次接种，在产蛋前再接种1次。 【注意事项】（1）疫苗稀释后应放冷暗处，限3小时内用完。
论文题目：鸡传染性支气管炎的诊断与防 治 本科生毕业论文 目录 摘要 (1) Abstract (2) 前言 (3) 综述部分 ......................................................................................................... 错误!未定义书签。 1 IBV的感染特征 (4) 1.1流行特点 (4) 1.2IBV的组织嗜性 (5) 1.3IBV感染的动力学 (5)
1.4继发感染 (5) 2 临床诊断 (5) 3 病理变化 (6) 4 免疫预防 (6) 4.1被动免疫 (6) 4.2弱毒苗免疫 (6) 4.3灭活苗免疫 (6) 4.4基因工程疫苗 (7) 4.5DNA疫苗 (7) 4.6载体疫苗 (7) 5 治疗 (7) 6 结论 (7) 参考文献 (8) 致谢 (9) 鸡传染性支气管炎的流行及防控 摘要 鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis，IB）是一种对鸡危害严重的急性、高度接触性传染病。本病是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectiouss bronchitis virus，IBV）引起的，主要侵害呼吸道、肠道和泌尿生殖道，某些毒株可引起肾脏和肠道疾病。IBV感染后可继发大肠杆菌、葡萄球菌等细菌性感染，给世界养禽业造成了严重的经济损失。本文从IBV 的感染特征入手，深入探讨临床诊断和病理变化、分析免疫预防和治疗该病的方法，为防控本病提供理论参考。
关键词：鸡传染性支气管炎；感染特征；预防；治疗 Prevalence and prevention of avian infectious bronchitis Abstract Chicken infectious bronchitis (Infectious bronchitis, IB) is a kind of harm of acute, highly contagious disease of serious of chicken. The disease is caused by avian infectious bronchitis virus (Infectiouss bronchitis virus, IBV) causes, mainly against the respiratory tract, intestinal tract and genitourinary tract, some strains can cause kidney and intestinal disease. After IBV infection may be secondary bacterial infection of Escherichia coli, Staphylococcus aureus,
传染性支气管炎 疾病概述： 传染性支气管炎是由冠状病毒引起的鸡的急性、高度接触性传染病。临床上分为呼吸道型和肾病理变化型两种类型。病原病毒能在发育的鸡胚中生长良好，也能在气管器官组织培养中增殖。病毒经56℃15分钟或45℃90分钟即被灭活，对乙醚敏感，50％氯仿室温下作用10分钟、0.1％去氧胆酸钠4℃作用18小时能使病毒完全失去感染性。病毒对常见消毒剂敏感，0.05％或0.1％的β戊酮内酯(BPL)或0.1％福尔马林均可使其失活。 流行病学：自然感染仅见于鸡、雉鸡，各种年龄的鸡均可感染，但以雏鸡发病最严重。传染源主要是病鸡和康复后带毒鸡，病鸡康复后可带毒49天。病毒主要存在于呼吸道渗出物中，也可在肾和法氏囊中增殖。传播途径通过飞沫经呼吸道传播，也可经污染的饮水、饲料和垫料传播。本病传播迅速，一旦感染几乎全群发病。一年四季都可发生，但以气候寒冷的季节较为严重。 临床症状： 人工感染的潜伏期为18～36小时，自然感染的潜伏期长，有母源抗体的幼雏潜伏期可达6天以上。雏鸡突然出现呼吸症状并很快波及全群，病鸡表现为气喘、咳嗽、打喷嚏、气管鸣音和流鼻涕，精神沉郁、畏寒、食欲减少、羽毛松乱、打堆，个别鸡鼻窦肿胀、流泪。6周龄以上的鸡症状不明显，主要是气管鸣音、喘气和轻微咳嗽等。蛋鸡产蛋量下降，并产软壳蛋、畸形蛋或粗壳蛋，蛋白稀薄如水样，蛋黄与蛋白分离以及蛋白粘壳等。肾病理变化型传染性支气管炎是目前发生多、流行范围较广的疾病，20～30日龄是其高发阶段。病初，病鸡表现怕冷、喷嚏和咳嗽，有的张口喘气及气管鸣音，2～3天后出明显的全身症状，表现为厌食、拱背、饮水量增大，拉白色水样粪便，粪便中含有大量尿酸盐。病鸡失水，肌
鸡胚成纤维细胞培养 1、准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、 75%酒精擦拭手至肘部。 2、布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3、选胚：取9-10日龄鸡胚，（注：鸡胚日龄越小，形成细胞活力越好，但产量较低）用新 洁尔灭消毒蛋壳10分钟后放净化台。用碘酒、酒精消毒蛋壳。用镊子打开气室。 4、用另一套镊子将壳膜打开将鸡胚夹起去头、爪、眼，放灭菌生理盐水中。 5、把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先 置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 6、剪切：用眼科剪把组织切成1~2毫米大小的块，以便于消化。 7、处理组织：将已剪碎的组织碎片倒入一个带玻璃珠的灭菌三角瓶中，其中加入0.25%的 胰酶，10个胚约7ml，或加组织消化液，一个胚1ml（组织消化液以及胰酶的配置见微生物指导）结扎瓶口或塞以胶塞。 8、消化：将其置入37℃水浴箱中或用恒温水浴，消化中应不停摇动，如用电磁恒温搅拌器 消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。消化10－15分钟。一般约12分钟。视鸡胚日龄大小而定。越小消化时间越短。见组织松软即可。一般不可消化时间太长否则容易导致细胞活力不足。 9、分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织 已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，加入0.5％的含5％犊牛血清双抗的的水解乳蛋白Hank，s液少许。（制法见微生物试验实习指导），用力震摇，或用吸管吹打。 使细胞分散，脱落。然后用纱布过滤或随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清（可以不离心吸掉上清），加入适量含有血清的培养液。 10、计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培 养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。分装在细胞培养瓶中。视细胞多少而定加入培养基。 培养基为0.5％的含5％犊牛血清双抗的的水解乳蛋白Hank，s液. 11、将其置入co2细胞培养箱中，37度。瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易 生霉菌，每次换液时需要换新塞。培养24小时进行观察。一般在24－48小时可形成单层细胞。 传代 1. 倾倒培养瓶内旧培养液。 2. 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。 3. 置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。 4. 吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。 5. 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。 6. 计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。
一、鸡胚成纤维细胞的体外培养 鸡胚成纤维细胞在病毒学研究中十分常用。孵化8－12d的鸡胚可用作培养的材料来源。 （一）实验材料 1. 鸡胚：孵化10d的受精蛋数个。孵化方法是将受精蛋放到38.5℃孵卵箱或恒温箱中，静置。每日翻动1—2次，以防止鸡胚粘连到蛋壳上影响发育。箱内湿度(40～70％)可通过在箱底放一盛水盘来维持。鸡胚的孵化期为2ld。孵化前，如遇蛋壳表面污物较多，可用刀片等器具刮除，不要用湿布擦拭，更不能用酒精棉球消毒或者用水洗蛋。孵育前可将受精蛋保存在10℃左右，保存期一般不超过10d。也有人将受精蛋保存在4℃冰箱中。 2. 消化液：含0.25％胰蛋白酶、青霉素100 1U／ml、链霉素100 μg/ml混合消化液。用Hanks 液或HEPES液配制。 3. 培养液：DMEM培养液，添加10％－20％的胎牛血清（FCS）、青霉素100 IU/ml、链霉素100 μg/mL。 4. 其它培养用品：手术器械、平皿、三角瓶或15ml血清瓶、离心管、100目不锈钢筛网、培养瓶或培养板、振荡水浴箱、离心机等。 （二）操作步骤 1)取孵化10d的鸡胚，分别用碘酒与酒精棉球擦拭消毒，晾干。用一已消毒金属器具将受 精蛋大头端击破，用镊子小心夹去破碎蛋壳，然后撕去气室外面的膜，暴露出尿囊绒膜及附着的血管。开口大小以受精蛋内容物不溢出为宜，但不宜太小。用镊子轻轻夹住鸡胚的颈部，小心取出鸡胚，放于无菌培养皿中，除去头部、四肢、内脏和皮肤。 2)胚体用Hanks液或生理盐水清洗3次，切成1－2 mm3的小块，然后转移到容积适中的 三角瓶或15ml血清瓶内。 3)加入适量消化液，一般每10个鸡胚加20 m1消化液，用胶塞密封瓶口。 4)在振荡水浴箱上37℃慢速搅拌5－10 min。加入少量血清钝化胰蛋白酶。然后通过100 目不锈钢筛网，制备细胞悬液，将细胞悬液转移到离心管中。 5)离心（800 rpm，10 min），弃上清液，将细胞沉淀用培养液洗2次。 6)加入培养液，用吸管吹打制成细胞悬液。用血球计数板计数细胞。 7)以0.2～1X06个细胞/ml的密度接种细胞。于37℃、5％CO2培养箱中培养。每2－3d换 液1次。待细胞汇合成片后，可行传代培养。 （三）结果 在倒置显微镜下观察，用8～12d龄鸡胚培养的细胞主要为具有长突起的梭形、星形或三角形的成纤维细胞。用I型和Ⅲ型胶原的抗体作免疫细胞化学分析，培养物以呈阳性反应的成纤维细胞为主。 （四）讨论 鸡胚成纤维细胞在普通培养液中具有生长优势，一般不需特殊处理，经几次传代后就可逐渐排除其它细胞，得到较纯的成纤维细胞。体外培养的胚胎细胞的形态与所取鸡胚的胚龄有关。若用体节前期的胚胎，培养的细胞不是典型的长的或星形的成纤维细胞，而为宽扁的细胞，这可能与胚胎细胞的分化状态有关。
鸡传染性支气管炎病毒的研究进展 鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis，IB)是鸡的一种急性、高度接触性传染病，它主要侵害呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统。本病呈世界性分布，对养鸡业的危害极大，它能使成鸡的增重和饲料报酬降低，鸡蛋的产量、质量和孵化率下降，并直接导致雏鸡死亡、肾脏病变和输卵管永久性退化；另外，IB还经常做为病因之一参与混合感染，例如诱发慢性呼吸道病(CRD)的爆发，近年来，该病的流行呈上升趋势，尤其肾病变型IB 已蔓延至全国各养鸡地区，造成了严重的经济损失。 本病最早由美国Schalk和Hawn报道，临床以患鸡咳嗽、喷嚏和气管哕音的呼吸道症状为主，之后陆续在世界各国发生，1936年Beach和Schalm确定病原为病毒(呼吸型IBV)，后命名为鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus，IBV)，归入冠状病毒科，是冠状病毒的代表株。 1972年邝荣禄等首次在广东证实我国也有该病发生。传染性支气管炎病毒血清型较多，常见的有Massachussetts、Connecticat、lowa97、Iowa609、Hotle、JMK、Clark333、SEl7、Florida、Arkanass99和Australian“T”。1962年Wintefield等首次报道了肾型IBV，可引起肾脏肿大、尿酸盐沉积等症状。1986年E1 Houadfi等在摩洛哥首次分离到以G株为代表的嗜肠型IBV，主要引起呼吸道、肾脏及肠道病变。Gough等首先报道了英国存在一种新的特殊IBV血清型793/B，而来自西班牙、德国、希腊和墨西哥可疑血清样本中亦可发现抗此血清型IBV的特异性抗体，法国、荷兰、意大利、泰国等均有此血清型IBV的存在。 IBV基因组核酸RNA复制的不连续机制及RNA聚合酶的不完全校对机制，使得病毒RNA在复制过程中易发生基因点突变、插入、缺失或重组，造成大量IBV变异株的出现，目前世界上已分离到的IB血清型已达30种之多，不同血清型毒株疫苗之间仅有部分或无交叉保护作用，IB的多血清型性为其免疫预防增加了难度。 1 IBV的基因组 鸡传染性支气管炎病毒是正链单股RNA病毒，直径为90～200nm，是所有RNA病毒中最大的，蔗糖浮密度值常在1.15～1.18g/ml范围内，病毒有囊膜，表面有间距较宽、呈放射性排列的杆状纤突，长约20nm，使病毒外观近似皇冠，纤突不稳定，易从病毒粒子上脱落，当离心力超过100000r/min，甚至有时在37℃孵育，都会导致某些纤突成分的丢失，IBV 是第一个测定了基因组全部序列的冠状病毒，长27～30kh，有感染性，5′末端为“帽子”结构，3′末端含有共价结合的poly(A)尾，至少有10个明显的开放阅读框架(ORF)，编码分子量6.7～440kDa蛋白，病毒RNA各基因的定位次序如下： 5’-F1-F2-S-3a-3b-3c-M-5a-5b-N poly(A)-3′。Boursnell等完成了对IBV-Beaudene株全基因组的测序，共有27608个核苷酸组成，不同IBV毒株的基因组长度略有差异。lBV被分为6个区域，由小到大分别被命名为MrnaA～F。 IBV含三种最主要特异性蛋白：纤突蛋白(Spike Glycoprotein，SGP，即S蛋白)、膜蛋白(Membrane Glycoprotein，MGP，即M蛋白)、核衣壳蛋白(Nucleocapsid Protein，NP，即N蛋白)，分别由mRNA E、C、A编码，三种结构蛋白的摩尔比为1:6:15，第四种小膜蛋白(sM)与病毒囊膜有关。病毒的血清型、血凝抑制和大多数的中和抗体均由S1蛋白决定和诱导。 2 IBV的主要结构蛋白及功能 2.1纤突蛋白(S) S蛋白由mRNA B编码，位于病毒粒子最表层的囊膜上,是构成病毒纤突的主要成分，是由2～3个相同的单体非共价连接构成的聚合物。S蛋白包含两种糖多肽S1和
细胞生物学实验报告 细胞原代培养 姓名： 学号： 班级： 专业： 同组成员： 一、实验原理
细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养的方法： 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。用Hanks 液洗涤2—3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20－30分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。 取材注意事项： 取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。 二、实验目的 1、理解细胞原代培养原理 2、熟悉细胞原代培养方法与过程 3、了解细胞原代培养的应用 4、独立进行细胞原代培养操作 三、实验材料 手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。 动物：9-12日龄的鸡胚蛋 四、实验步骤
鸡胚成纤维细胞的制备 一、材料和试剂 1、鸡胚：9-10日龄发育良好的SPF胚 2、试剂：0.25％胰酶，MEM培养基，新生牛血清，1万IU双抗，3%谷氨酰胺，7.5%碳酸氢钠 3、仪器和器材：，带6-8层纱布的100ml烧杯两个，直径9cm的平皿两个，中号镊子四把，倒置显微镜，培养箱，50ml细胞培养瓶，10ml刻度吸管两根、5ml刻度吸管，250ml生理盐水瓶两个，无菌的细胞培养瓶，灭菌好的PBS，酒精棉球，废液缸等 二、操作步骤 1、操作前的准备： ○1预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 ○2用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 ○3正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 ○4点燃酒精灯：注意火焰不能太小。 ○5准备好将要使用的消毒后的培养瓶。 ○6取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。 2、成纤维细胞制备： ①将选好的9-10日龄的发育良好的SPF胚用5%的碘棉消毒蛋壳气室部位，再用酒精棉脱碘。 ②无菌取出鸡胚，放入灭菌的玻璃皿内，用PH7.2的PBS冲洗一次，去头，四肢和内脏。 ③再用PH7.2的PBS冲洗两次。 ④用镊子捏成小块（2-3mm3）, 用PH7.2的PBS冲洗两次。 ⑤鸡胚约加4ml0.25%胰酶溶液，38℃消化30min，期间15min轻摇一次。 ⑥期间配制细胞培养液： 培养基：MEM 双抗：2% 7.5% 碳酸氢钠：2% 牛血清：6% 3% 谷氨酰胺：1% ⑦消化结束，弃掉胰酶消化液，用PH7.2的PBS冲洗两次，再用细胞生长液冲洗一次。 ⑧加入适量的细胞生长液，用刻度吸管反复吹打（使细胞充分分散）。 ⑨将细胞分散液倒入带6-8层纱布的100ml烧杯中（过滤之前先用少许细胞培养液润湿纱布），加入适量培养液（40ml/胚），过滤。 ⑩重复步骤⑨的操作重虑一遍。 11计数，要求每1ml滤液中约含活细胞100万-150万个。 ○ 12分装置个培养瓶中（7-8ml/瓶），置37℃培养箱培养。 ○
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/434859780.html, 浅析鸡传染性支气管炎、喉气管炎与禽流感的鉴别诊断要点 作者：乔保磊 来源：《农家科技下旬刊》2017年第12期 摘要：鸡传染性支气管炎、喉气管炎和禽流感都是危害养鸡业发展的重要疫病，临床上 极易出现错判误断，贻误病情，分析区别三种疫病临床症状、发病原因、流行特点、剖检变化等诊断要点，准确判别出鸡群所患的疫病，及时采取有效措施，防治疫病发生和流行。 关键词：支气管炎；喉气管炎；禽流感；鉴别；诊断 进入21世纪以来，养鸡业迅速发展，规模场不断增加，已经成为主要的养殖模式；同时养鸡业的快速发展丰富了人们的“菜篮子”，提高了人们的生活水平。养鸡业现已成为促进农业发展、增加农民收入的主要产业，很多贫困户依靠养鸡已经脱贫致富。然而，在养鸡生产中，疫病仍然是阻碍发展的最大“天敌”，很多疫病对养鸡业威胁很大，给养殖场户造成巨大损失。我们常见的鸡传染性支气管炎、喉气管炎、禽流感在整个养殖生产中是发病率、死亡率、危害率较高的疫病，可以说98%以上的养殖场都发生过这几种病，由于这几种病在流行特点、临床症状、发病规律、病理变化等方面极为相似，临床上容易出现误诊误判，以至于造成防治失败，给养殖场造成损失。 分析区别鸡传染性支气管炎、喉气管炎、禽流感的诊断要点，准确判断鸡群发生的疫病，有针对性地开展防治工作。笔者根据多年的积累，总结出三种疫病的鉴别要点，供大家在今后的养殖生产中借鉴。 一、流行特点 1.发病季节性。三种疫病的发病季节没有明显差异，都是秋末、冬季和早春季节多发，但是禽流感在春季的发病率高于传染性支气管炎、传染性喉气管炎，而传染性支气管炎、喉气管炎在冬季的发病率高于禽流感。 2.饲养条件不良。鸡群拥挤、通风不畅、阴雨潮湿、贼风侵袭、饲养管理不善、缺乏维生素、营养不良、寄生虫感染等因素能够引发三种疫病发生流行，这些因素可用来区别于其他疫病。 3.易感性。传染性支气管炎感染鸡，5周龄以内的鸡感染后症状明显，没有品种差异。 传染性喉气管炎主要侵害鸡，各种年龄及品种的鸡均可感染。但以成年鸡症状最为特征。
传染病进行精确到流行菌(毒)株的监控,并可根据病毒潜伏感染的情况判断疫病的流行状况及趋向,及早发现,及早防制。因此,核酸探针、PCR、寡核苷酸指纹图谱及限制性核酸内切酶酶切图谱分析等技术将具有广阔的应用前景。 参考文献 [1]Gunars E.V alk irset al.C lin Chem.1989,31(9): 1427—1431 [2]F reya Sp ielbery,et al.T he L ancet,1989,1: 580—584 [3]刘煜凯等,中华医学检验杂志,1995,18(6): 364—367 [4]Kenii Ho soda et al.J.I mm uno l.M ethods,1989, 121(1):121-128 [5]F reytag J.W.et al.J.I mm uno l m ethonds,1984, 70:133[6]HORJY,et al.J.I mm uno l,1985;134(6):4035-4040 [7]D uverlie G et al.J.V iru M ethods,1987,18:107 [8]K ieffer M,et al.C lin Exp i m m uno l,1982,50:65 [9]B rigata D.J.et al.V iro logy,1983,126:32-50 [10]罗满林等.中国兽医科技,1994,24(4):20—21, 34 [11]任少堂等.临床检验杂志,1995,13(1):45—47 [12]裴建武等.中国兽医杂志,1994,20(4):42—44 [13]邱孝高.中国兽医科技,1986,(96):24—26 [14]N agaraja,K.V,Am.J.V et.R es,1990,51(2): 107-210 [15]Purchast,H.G.A vian D is,1989,33(3):609-614 鸡传染性喉气管炎的研究进展 许伟琦 孙泉云 刘红 (上海市畜牧兽医站 201103) 鸡传染性喉气管炎(I L T)是由疱疹病毒科Α-疱疹病毒亚科的喉气管炎病毒引起鸡的一种急性呼吸道传染病[1],特征为明显的呼吸困难、咳嗽、气喘、咳出带血粘液,死亡率为5-70%,平均为20%。病变主要发生在喉头和气管部分。本病1925年由M ay 等首次报道发生于美国[2],Beaudette(1930)首先证实本病由病毒引起,1931年美国兽医协会正式命名为“传染性喉气管炎”。I L T随后逐渐蔓延至欧洲、澳大利亚等地,我国于1987年以后也分别报道了甘肃、北京、山东、江苏、广东等地区均有本病的存在与流行[3],给养鸡业造成严重损失。 1 病毒特征及分子生物学研究 I L TV是一种含1个DNA核心的囊膜病毒,核衣壳呈20面体对称。I L TV具疱疹病毒形态学特征,双股DNA,其G+C含量为45%,完整的病毒颗粒直径为195-200nm[4],I L TV仅一个血清型,病毒株之间差异不显著,浮密度为1.706g m l,病毒对乙醚敏感,热稳定性差,55℃10-15m in灭活。病毒能在鸡胚CEL、CEK、CK等细胞上增殖,病毒的基因组由155kb的线状DNA分子组成,而每一DNA 分子又由位于反向重复序列二侧的长独特性片断(U L)和短独特性片断(U S)所组成。Griffin(1987)已对I L TV DNA测序鉴定了21个基因。I L TV的回文结构和T K基因的测序数据证实了I L TV与其它Α-疱疹病毒具有相同的DNA水平,对I L TV与其它Α疱疹病毒的氨基酸同一性水平进行了比较,表明I L TV是这个家族的一古老成员。由于病毒糖蛋白能对其它疱疹病毒诱发产生体液及细胞结合性应答,因此对I L TV保护性抗原的研究集中于糖蛋白,通过测序已鉴定的有gB,gC,gD,gX,gK和一独特性糖蛋白gP60,经免疫沉淀试验、免疫转印试验和单克隆抗体技术证实了五种主要糖蛋白,其分子量分别为205、160、115、9、60KD[5]。处于U S序列的糖蛋白(gP60)和其它Α-疱疹病毒没有同源性,因而对I L TV来说是独特性的,虽然gP60是从I L TV感染鸡血清中得到证实的主要蛋白之一,但它在I L TV 发病机理中所充当角色尚未弄清。 2 发病机理与传播方式 33
鸡传染性喉气管炎 一、概述： 鸡传染性喉气管炎，英文简写ILT，是由一种急性、高度接触性、传染性呼吸道疾病，大多在秋末、冬春季节流行。不论各种日龄、各个品种的鸡都有可能感染这种疾病；尤其以成年鸡发病的症状最具代表性。传染性喉气管炎，在不同的鸡群之间传播速度比较慢，但是在同一鸡群中，传播速度却非常的快，一旦鸡群内有病鸡出现，就会在鸡群内迅速传播，发病率达60％至95％，感染率可达90%以上，不同的饲养条件和鸡群状况，死亡率有很大的差异，低的可达5%左右，高的可达50%至70%，给养鸡业带来了严重的经济损失。 鸡传染性喉气管炎是由传染性喉气管炎病毒引起的，传染性喉气管炎病毒主要存在于病鸡的气管组织及渗出物中。传染性喉气管炎病毒生命力比较顽强，在37摄氏度的温度下，可存活22到24小时，在55摄氏度的温度下，可存活10-15分钟，在100摄氏度的温度条件下，会立即死亡；用3%来苏尔或1%苛性钠消毒液消毒，1分钟可以把它杀死。 病鸡和康复后的带毒鸡是鸡传染性喉气管炎的主要传染源，病毒一般经呼吸道和眼睛侵入鸡体，被带毒鸡的呼吸器官和鼻腔分泌物污染的垫草、饲料、饮水及饲养用具都有可能成为病毒的传染媒介；如果产蛋鸡感染了传染性喉气管炎病毒，病毒也会通过产下的蛋进行传播。有少部分鸡感染了这种病毒，虽然症状已经康复，但病毒依然会在鸡的体内存活两年之久，一旦由于鸡群拥挤、通风不良、饲养管理不好、缺乏维生素和寄生虫感染等，这种携带病毒的鸡就有可能发病，并成为传染源。 二、主要症状 鸡传染性喉气管炎的潜伏期为6至12天，病鸡感染传染性喉气管炎病毒后，病程一般为7至15天，时间长的能拖延至30天。根据病毒毒力、侵害部位，传染性喉气管炎在临床上可分为喉气管型和眼结膜型，由于病型不同，所呈现的症状也不完全一样。 喉气管型喉气管炎，也叫急性喉气管炎，主要发生在成年鸡群内，传播迅速，一旦鸡群中有发病鸡出现，在短时间内整个鸡群就会感染。病鸡精神沉郁，羽毛松乱，鸡冠发绀，食欲减少，甚至拒绝吃食，有时排绿色稀便。病鸡在患病初期，鼻腔会流出浆液性或黏液性泡沫状鼻液，眼睛会流泪。随着病情加重，就会表现为特征性的呼吸道症状，咳嗽，呼吸时发出湿性啰音，就像气体通过液体，形成的水泡破裂而产生的声音。病鸡呈蹲伏，每次吸气时头和颈部向前向上升，张口尽力吸气。症状比较严重的病鸡，高度呼吸困难、痉挛、咳嗽、咳出带血黏液，污染喙角及头部羽毛。当我们打开鸡口腔时，将鸡的喉头用手向上顶，就会看到喉头周围有泡沫状液体，喉头出血，喉头会被血液或纤维蛋白凝块堵塞。产蛋鸡感染急性喉气管炎后，产蛋量会下降10％至20％，蛋壳褪色，软壳蛋会明显增多。 眼结膜型喉气管炎，也叫温和型喉气管炎，主要在30至40日龄雏鸡群内发生，症状比较轻。鸡患病初期，眼角会积聚泡沫性分泌物，流泪，并不断用鸡爪抓眼，致使眼睛轻度充血，眼睑肿胀和粘连，症状严重的会导致失明。鸡患病后期，会表现出眼角膜混浊，眶下窦肿胀，鼻腔有分泌物，也有部分病鸡会出现呼吸闲难，生长迟缓，死亡率能达到5％左右。
鸡胚成纤维细胞的制作及培养 鸡胚成纤维细胞培养 1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、 75%酒精擦拭手至肘部。 2、布局:点燃酒精灯，安装吸管帽。 3、选胚:取9-10日龄鸡胚，(注:鸡胚日龄越小，形成细胞活力越好，但产量较低)用新 洁尔灭消毒蛋壳10分钟后放净化台。用碘酒、酒精消毒蛋壳。用镊子打开气室。 4、用另一套镊子将壳膜打开将鸡胚夹起去头、爪、眼，放灭菌生理盐水中。 5、把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污;如怀疑组织可能污染，可先 置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 6、剪切:用眼科剪把组织切成1~2毫米大小的块，以便于消化。 7、处理组织:将已剪碎的组织碎片倒入一个带玻璃珠的灭菌三角瓶中，其中加入0.25%的 胰酶，10个胚约7ml，或加组织消化液，一个胚1ml(组织消化液以及胰酶的配置见微 生物指导)结扎瓶口或塞以胶塞。 8、消化:将其置入37?水浴箱中或用恒温水浴，消化中应不停摇动，如用电磁恒温搅拌器 消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。消化10,15分钟。一般约12
分钟。视鸡胚日龄大小而定。越小消化时间越短。见组织松软即可。一般不可消化时间 太长否则容易导致细胞活力不足。 9、分离:在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织 已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，加入0.5,的含5,犊牛血清双抗的的水 解乳蛋白Hank，s液少许。(制法见微生物试验实习指导)，用力震摇，或用吸管吹打。 使细胞分散，脱落。然后用纱布过滤或随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的 组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟，吸出上清(可以不离心吸掉上清)， 加入适量含有血清的培养液。 10、计数:用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培 养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄， 说明液体变酸，可用NaHCO调整。分装在细胞培养瓶中。视细胞多少而定加入培养基。3 培养基为0.5,的含5,犊牛血清双抗的的水解乳蛋白Hank，s液. 11、将其置入co2细胞培养箱中，37度。瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。培养24小时进行观察。一般在24,48小时可形成单
八种常见鸡呼吸道病的鉴别诊断 禽呼吸道病是禽病中的高发病之一，临床上呼吸道疾病很多，如传染性喉气管炎、传染性支气管炎、鸡慢性呼吸道病、传染性鼻炎、鸡新城疫、禽流感、鸡痘以及禽曲霉菌病等。对于这些疾病，临床中应注意区分，避免误诊，下面笔者介绍八种易发呼吸道疾病的诊断要点： 1、传染性喉气管炎 传染性喉气管炎是由疱疹病毒引起的各种日龄均可感染的鸡急性呼吸道病。 1.1临床症状最明显的症状是鸡呼吸困难，努力向前上方伸颈张口呼吸，发出“吼吼”的怪叫声，类似青蛙的叫声。病鸡呈痉挛性咳嗽并咳出带血的黏液或血块。 1.2剖检病变急性喉气管炎病鸡喉头和气管黏膜肿胀、充血、出血，严重者糜烂、坏死，气管内有多量的血样黏液及血凝块；慢性喉气管炎病鸡喉头、气管内有淡黄色干酪样渗出物。 2、传染性支气管炎 传染性支气管炎是由冠状病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性的传染病。 2.1临床症状本病分为4个类型：呼吸型传支、肾型传支、生殖型传支、腺胃型传支。在临床上以呼吸型和肾型传染性支气管炎多发。鸡突然出现呼吸道症状，经过3~4天呼吸道症状消失，鸡开始不食、精神萎靡，也可见到鼻窦肿胀或流泪。稍大日龄的鸡感染
后，呼吸道症状轻微，表现为精神萎靡，伏地不食，伸颈张口呼吸，极度困难。 2.2剖检病变呼吸道卡他性炎症，鼻腔、气管、支气管和鼻窦中有浆液性、黏性或干酪样分泌物，气管下部及支气管内有淡黄色干酪样栓塞物，病情严重者深入到肺部。 3、鸡慢性呼吸道病 鸡慢性呼吸道病又称败血性支原体，是由鸡败血支原体引起的鸡的一种慢性呼吸道病。 3.1临床症状病初鸡流鼻液，打喷嚏，后出现咳嗽、气喘、气管啰音，有吞咽动作，采食量减少，生长缓慢，眶下窦肿胀，眼睛变长，眼内有时有气泡。疾病后期如果鼻腔和眶下窦中蓄积分泌物，则导致眼睑肿胀，流出带泡沫的分泌物。病情严重时眼部突出，似“金鱼眼”样，眼内有一层厚薄不一的灰白色干酪样物，常造成一侧或两侧眼睛失明。 3.2剖检病变可见气囊增厚、浑浊，严重时形成卵黄性胸、腹膜炎，眶下窦内积有黏液或干酪样物，剥开肿胀的眼睛可挤出黄白色干酪样物，在鼻腔、眶下窦、喉头、气管内有多量灰白色或略带血色的黏液。 4、鸡传染性鼻炎 传染性鼻炎是由副鸡嗜血杆菌引起的一种鸡的急性呼吸道病。
辽宁农业职业技术学院毕业论文 系别：生物技术系 专业名称：兽药生产与营销 论文题目：鸡胚成纤维细胞传代 学生姓名：郐永琳 指导教师：裴春生 评阅人： 成绩： 二O一O年六月二十日
评阅人评语： 评阅人签字： 年月日
目录 摘要 (1) 关键词 (1) 前言 (1) 1材料 (1) 1.1仪器 (1) 1.2种蛋 (1) 1.3犊牛血清 (1) 1.4溶液 (1) 2方法 (2) 2.1鸡胚的选择与孵化 (2) 2.2鸡胚原代细胞制备 (2) 2.3细胞传代 (4) 3结果与分析 (4) 4讨论 (4) 4.1温度 (4) 4.2P H (5) 4.3气体 (5) 4.4细胞接种量 (5) 4.5无菌条件 (5) 5结论 (5) 参考文献 (6) 致谢 (6)
鸡胚成纤维细胞传代 摘要：采用10日龄SPF鸡胚，进行消化，制备原代细胞，当细胞长成良好单层时，按1:2比例进行细胞传代，找出鸡胚细胞传代方法和情况。其结果是：按本实验室方法进行鸡胚传代，传至20代以上细胞形态没有发成变化，细胞生长良好。细胞数量大大增加。为病毒的研究和疫苗生产提供条件。 关键词：鸡胚；传代；生长特性 前言 细胞培养的方法是将机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。细胞在培养瓶长成致密单成后，已基本饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须传代（再培养）。也是将细胞保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种操作的必经过程，在这个过程中可以掌握其操作过程又能观察到细胞的生长情况。 1 材料 1.1 仪器 培养箱、培养瓶、玻璃漏斗、吸管、移液管、纱布、水浴锅、手术剪、镊子、培养皿、烧杯、瓶塞、培养盘、蛋托、超净工作台、显微镜、三角烧杯、95%酒精、75%酒精棉、碘酒棉、废液缸等。 1.2 种蛋 SPF种蛋，由北京梅里亚维通实验动物技术有限公司提供。 1.3 犊牛血清 多用胎牛或犊牛血清。由颈动脉无菌放血。采血前先向瓶内加些等渗盐溶液湿润瓶避，采血后置室温或37℃温箱内待血液完全凝固后，有灭菌玻棒将血块自瓶壁分离。随后再置室温或4℃冰箱内一天，即可吸取血清，如有少量红细胞可离心沉淀除去。经滤过除菌分装，置-20℃冻存，使用前56℃水浴中灭活30min。 1.4 溶液 1.4.1 Hank，s液NaCl16g、Na2HPO40.304g、KCl 0.8g、KH2PO40.12g、MgSO40.4g、C6H12O6 2g、CaCl20.28g、酚红2mL、水解乳蛋白10g、加蒸馏水至2000mL高压灭菌116℃30min。 1.4.2 酚红苯酚红1g、NaOH0.12g加蒸馏水至200mL。
蛋鸡6种主要呼吸道病的区别与治疗 目前临床常见的危害鸡呼吸道的疾病主要有鸡传染性鼻炎、鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎、新城疫、禽曲霉菌病、以及支原体感染引起的鸡慢性呼吸道病，这些疾病均能引起鸡有呼吸道症状，临床上应注意鉴别和诊断。 1.传染性鼻炎的鉴别和诊断：本病是由副鸡嗜血杆菌所引起鸡的急性呼吸系统疾病。临床症状为面部肿胀，流鼻液、流泪等症状与慢性呼吸道相似，但通常无明显的气囊病变及呼吸罗音。鸡传染性鼻炎与支原体病不仅症状相似，容易误诊，而且常混合感染，不过，链霉素、强力霉素对这两种病都有良好疗效，不能做出可靠鉴别诊断时，宜选用这些药物。汇丰达用药：菌必治+呼支宁。 2.传染性支气管炎的鉴别和诊断：鸡传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病，临床表现鸡群急性发病，输卵管有特征性病变，成年鸡产蛋量大幅度下降并出现严重畸形蛋，各种抗菌药物均无直接疗效，这些均可区别于慢性呼吸道病。但鸡传染性支气管炎和慢性呼吸道病互相诱发，易造成混合感染。对蛋鸡传染性支气管炎选用药时不宜选用磺胺类药物，因为这类药物不仅会进一步影响产蛋量，而且对支原体病无效。汇丰达用药：汇丰达感康+清肺利肝口服液+卵管康，发病较重的产蛋鸡建议淘汰。 3.传染性喉气管炎的鉴别和诊断：鸡传染性喉气管炎是由传染性喉气管炎病毒引起的一种急性、接触性上部呼吸道传染病。其特征是呼吸困难、咳嗽和咳出含有血样的渗出物。剖检时可见喉部、气管粘膜肿胀、出血和糜烂，全群鸡急性发病，严重呼吸困难咳出带血的黏液，很快出现死亡，各种抗菌药物均无直接疗效，这些可与其他呼吸道疾病相区别。汇丰达兽药提示：打针治疗效果更快。 4.鸡新城疫的鉴别和诊断：鸡新城疫由副粘病毒引起的高度接触性传染病。又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟。病表现全群鸡急性发病，症状明显，但消化道严重出血，并且出现头颈扭转，仰头呈观星状以及跛行等神经症状。鸡新城疫病可诱发支原体病，而且其严重病症会掩盖其他呼吸道疾病，尤其是支原体病，往往是鸡新城疫症状消失后，支原体病的症状才逐渐显示出来。汇丰达综合用药方案：瘟疫康散+呼支宁 5.禽曲霉菌病的鉴别和诊断：禽曲霉菌病是真菌中的曲霉菌引起的多种禽类的真菌性疾病，主要侵害呼吸器官。各种禽类均易感，但以幼禽多发，常见急性、群发性暴发，发病率和死亡率较高，成年禽多为散发。本病的特征是在肺及气囊发生炎症和形成肉芽肿粟粒大小灰白色或黄色结节为主，要与鸡支原体病区分。另外结节偶见于眼、肝、脑等组织，故又称曲霉菌性肺炎。汇丰达用药推荐：气囊净+菌必治，建议饲料中常加普霉清 6.鸡支原体病的鉴别和诊断：鸡支原体病是由鸡败血性枝原体引起的鸡接触性传染性慢性呼吸道病。发病后病鸡先流出浆液性或粘性鼻液，打喷涕，炎症继续发展时出现咳嗽和呼吸困难，可听到呼吸罗音，到后期鼻腔和眶下窦蓄积多量渗出物，并出现眼脸肿胀，眼部突出。剖检时可见鼻腔、气管、支气管和气囊中含有粘液性渗出物，特征性病变是全身气囊特别是胸部气囊有不同程度混浊、增厚、水肿，随着病程发展气囊上有大量大小不等干酪样增生性结节，外观呈念珠状，少数大至鸡蛋，有的出现肺部病变。在慢性病例中可见病鸡眼部有黄色渗出物，结膜内有灰黄色似豆腐渣样物质。临床上应与其他呼吸道疾病区分。汇丰达用药