植物组织石蜡切片技术是农学学生需要掌握的基本实验操作技术。
工具/原材料
药物：石蜡，酒精，二甲苯，藏红花/快速绿色染色溶液，胶，明胶，甲醛等
仪器：石蜡切片机，组织脱水器，载玻片台，培养箱，染料桶，载玻片，盖玻片，烧杯，量筒等
方法/步骤
1.取材
确定材料的来源和位置，纵向还是横向；
应尽快取走材料以防止进一步变化，并且材料量应适当。
下图显示了植物芽的实际采样。
石蜡切片的制备步骤（附图）
石蜡切片的制备步骤（附图）
2.固定
（1）固定剂的选择
最常用的固定剂是FAA。
该方法的优点是材料的固定时间不受限制。固定时间可以短至几个小时，也可以长达几个月或几年。（可用作材料保存溶液）
配方：50％或70％酒精90ml
冰醋酸5毫升
福尔马林5毫升
（含50％酒精的软质材料，含70％酒精的硬质材料）
（2）固定后材料的处理
洗涤或漂洗：固定后，应彻底清洗组织以去除固定溶液和残留在组织中的晶体沉淀，否则会影响染色效果。
（如果固定后该材料暂时无法进行下一步操作，则可以将其存储在70％的酒精溶液中或直接用FAA固定溶液在4℃的冰箱中存储。）
下图显示了浸泡在固定液中的组织切片。
石蜡切片的制备步骤（附图）
3.脱水
目的：水和透明剂不能互溶，只有除去水后，透明剂才能进入。
试剂：梯度酒精溶液
工艺：70％--- 85％--- 95％-100％--- 100％。每个步骤约为1h-2h。
注意：确保脱水梯度和脱水时间的每一步，都应将水彻底清除，但不要过度脱水（时间过长会使组织变脆和收缩，这时您可以根据自己的实验进行探索，不需要完全遵循此操作）。
下图显示了适用于大量样品脱水的自动组织脱水器。如果物料体积和样品体积较小，则可以将小烧杯用作逐步脱水的容器。
石蜡切片的制备步骤（附图）
4.透明度
目的：纯酒精不能与石蜡溶解，但需要用能与酒精和石蜡溶解的溶剂代替组织中的酒精。
（二甲苯是最常用的透明剂，可以与石蜡很好地混溶）
工艺：等体积的二甲苯和乙醇的混合物1H ---纯二甲苯1H ---纯二甲苯1H。
5.蜡浸和嵌入
目的：用石蜡代替石蜡。
蜡浸程序：（恒温）
（1）低温浸蜡（36℃）：接下来，将碎蜡逐渐与二甲苯和物料一起加入烧杯中，直至其过饱和（石蜡无法溶解），并放置过夜12-24小时。
（2）高温蜡浸（55-60℃，比石蜡熔点高3℃）
倒出二甲苯和石蜡的混合物，不要倒出材料，将纯石蜡加入烧杯中5-24h。纯石蜡需要更换三次。
关于石蜡熔点的选择：
对于硬质材料，使用熔点较高的石蜡包埋；
当切片较薄时（低于8μm），选择包埋的熔点更高的石蜡。
夏季应使用熔点较高（56.58℃）的石蜡，冬季应使用熔点较低（52.54℃）的石蜡。
石蜡切片的制备步骤（附图）
石蜡切片的制备步骤（附图）
石蜡切片的制备步骤（附图）
6.切片
传统的切片方法是用刀片将嵌入的蜡块切成规则的梯形，将其粘在小木块上，然后在机器上切割。
新的切片方法是用嵌入框架（参见下图）代替木块的支撑作用，然后在机器上切片。
切片的厚度可以根据我们自己的实验要求确定，通常在8μm-20μM的范围内。
（下图显示了传统的切片机和新的自动切片机）
石蜡切片的制备步骤（附图）
石蜡切片的制备步骤（附图）
石蜡切片的制备步骤（附图）
7.粘贴和烘烤
粘着：蜡片通过粘片牢固地固定在载玻片上，以防止材料掉入随后的操作。
在载玻片上涂抹粘性片剂（液体a），然后滴入蒸馏水（液体B），放在蜡载玻片上，并用滤纸吸收过量的水。
烘烤载玻片：将载玻片放在40℃的载玻片桌上干燥。
常用的粘合片是Haupt配方
液体A：明胶1g；溶液B：甲醛4毫升
蒸馏水100ml蒸馏水100ml
甘油15毫升
苯酚2G
石蜡切片的制备步骤（附图）
8.脱蜡，补水和染色
脱蜡的目的：干燥后的切片需要在水溶性染料染色之前进行脱蜡和补水。
补水的目的：脱蜡后的物料，如果不补水，直接进入染料中，会使物料严重变形，甚至难以染色。
染色目的：使细胞组织中的不同结构呈现出不同的颜色和足够强的差异，以便于观察。
整个过程：二甲苯→1/2二甲苯+ 1/2纯酒精→100％酒精→95％酒精→85％酒精→藏红花（4小时以上）→95％酒精→坚牢绿色（快）→95％酒精（快速）→100％酒精→1/2二甲苯+ 1/2纯酒精→二甲苯→二甲苯。以上水平大约需要5-10分钟