蚕豆根尖微核实验
摘要：本实验用洗发水诱导蚕豆根尖发生畸变，通过固定、酸解、，染色、压片、镜检等一系列过程观察蚕豆根尖细胞核及微核，通过微核的数量判断洗发水对人体毒害作用的大小。由于产生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，因此可用微核实验来评价各种诱变因子对生物遗传物质的影响程度。
关键词：蚕豆根尖微核卡诺固定液吉姆萨染液
前言：随着相关研究人员的一系列实验表明：日常用品中的一些物质会对植物细胞尤其是分生组织细胞产生明显影响，它们会破坏细胞中的遗传物质——染色体，导致微核的产生，破坏细胞正常的生命活动。
微核（micronucleus,简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下，着色与主核一致或稍浅，呈圆形或椭圆形。蚕豆根尖细胞的微核是由于根尖细胞在分裂时受到外界诱变因子作用，形成的不随细胞分裂进入细胞核的染色体片段。
以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒物，称为微核实验。利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
1．材料
1.1实验材料：
蚕豆（根尖细胞的染色体大，DNA含量高，对诱变因子反应敏感）
1.2实验药品：
1mol/L盐酸、固定液（乙醇、冰醋酸3：1配制）、吉姆萨染液
1.3实验用具：
显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、盆、纱布、烧杯、水浴锅等
2．步骤
2.1 浸种催芽
将试验所用适量蚕豆放入盛水烧杯盆中，在室温下浸泡1d。种
子吸胀后，用温润纱布松散包裹蚕豆置盆中，保持温度催芽2d，此时根长出将近约1.5cm。
2.2 毒性处理
选取根生长良好，根长一致的种子，分成两组，一组放入盛有被测洗发水的盆中，被测液浸没根尖即可。另一组放入盛有自来水的盆中培养，做对照组。两组均处理1d。
2.3恢复培养
处理后的种子用自来水浸洗，洗净后再置入盛有自来水的盆中，
恢复培养1d。
2.4 固定
将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用卡诺固定液
固定5-6h。
2.5 酸解
用蒸馏水浸洗干净固定好的幼根，吸净蒸馏水，加入1mol/L盐酸将幼根浸没，60℃酸解15分钟，幼根软化即可。
2.6 染色
用蒸馏水浸洗干净幼根，放入吉姆萨染液中，染色20-30min。
2.7 压片观察
从幼根上截下1-2mm左右长的根尖，盖上盖玻片，压片镜检。
3．结果
实验观察到的染色体图：
首先在显微镜低倍镜下找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察。微核大小在主核1/3以下，并与主核分离，着色与主核一致或稍浅，呈圆形或椭圆形。每一处理观察3个根尖，每个根尖数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，然后平均，即为微核千分率，以此可作一个检测指标。
实验组中，将近1000个细胞中，每个人（共八人）三次的平均数据是：6，4，8，10，10，13，24，17。
对照组中，制作了五个玻片，微核数分别为：0，0，0，0，1。
实验组微核千分率=具有微核的细胞数/观察统计的细胞数
6+4+8+10+10+13+24+17
=—————————————=11.5‰
8×1000
对照组微核千分率=具有微核的细胞数/观察统计的细胞数
0+0+0+0+1
=———————=0.2‰
5×1000
污染指数（PI）=样品实测微核率平均值/对照组微核率平均值=11.5/0.2=57.5
（污染指数在0～1.5区间基本没有污染，1.5～2区间为轻度污染，2～3.5区间为中度污染，3.5以上为重度污染。）
4．分析讨论
通过对照组与实验组对比，对照组（自来水）培养出的根尖细胞几乎没有微核，实验组（洗发水）培养出的根尖细胞中发现微核并且重度污染，由此说明市场出售的丝蕴洗发水对细胞有严重破坏作用，因此人类在使用时应尽量避免。
此次实验中，做毒性处理时加入的洗发水剂量无法确定，所以实验观察到数量较多的微核有可能是由于诱变剂加多了。实验中，我们要注意以下几点：（1）选择种子做毒性处理时要挑选发芽时间相同，芽长相近的种子。
（2）注意毒性处理时被测液的浓度，不能过高或过低。
（3）解离时间要适中，否则解离不充分会影响观察结果。
（4）要去根尖前端1-2mm左右长的根尖，适合观察。
（5）视野的选择最好选择细胞边缘清晰，不重叠的，并要避免同一视野重复计数，应随机选择。
（6）实验过程中，小组同学应互相配合，认真做好每一步，尤其是最后艰辛的计数工作，一定要耐心。
5．结论
经过此次实验我学会了运用微核实验检测不同诱变剂毒害作用的方法，也意识到了自己在理论知识及实验操作方面的一些不足，今后我一定在认真学习专业知识并努力锻炼自己的动手操作能力。
在此，向教会我理论知识并给予我实验技术指导的郝雪峰老师表示衷心的谢意，同时感谢太原师范学院细胞实验室为我提供实验地点和各种材料、用具、仪器、药品。谢谢！
参考文献：
[1]梁光萍，罗向东，陈渝，等.真菌代谢提取物对蚕豆根尖细胞微核的诱导效应［Q］.第四军医大学学报，2003,24（13）:1221-1223.
[2] 南晓光.蚕豆根尖细胞微核试验内蒙古民族大学学报Q31：自然科学版(NeiMengGuMinZuDaXueXueBao：ZiRanKeXueBan)，2002，56（2）：415-416.
[3] 吴安华.微核产生的原因和物质基础.中国科学院，2004，8(8)：19-22.
利用蚕豆根细胞微核技术检测洗发水的毒性 09生物技术宁伟王晓刚太红桥刘经源 摘要微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。[1] 蚕豆根尖细胞微核试验(Micronucleustest,MC-NT)技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核检测方法。它是一种应用于监测环境致突变物对人体和其他生物体的遗传物质产生危害的技术,并从细胞遗传学水平上探讨植物遗传物质的改变状况与环境污染，也可以检测淡水环境的质量。[2] 关键词蚕豆根尖微核洗发水千分率 蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。它的染色体为六对相当大的染色体，而且根尖含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察。目前，蚕豆根尖微核技术在环境致突变性检测/监测方面已经形成了一套完整的体系。它的可靠性和灵敏性较高，且本底较低，这对于一种致突变性检测方法是十分重要的。此外，它的检测物谱较广。目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核：
（1）凡主核大小1/3以下，与主核分离的小核； （2）小核的着色与主核相当或稍浅； （3）小核形态可为圆形，不规则等。[3] 1. 实验目的 掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗发水的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆根尖细胞MCN对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。 2. 材料与方法 2.1实验材料 蚕豆种子、洗发水、显微镜、镊子、培养皿、剪刀、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液、NaN3等。 2.2 毒液配制 选取所测洗发水，按平时所用比例与水混合均匀。 2.3实验方法 2.3.1 浸种 择饱满、均匀的20粒种子，洗净后用蒸馏水常规浸种24h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入干净的培养皿内培养。2.3.2 催芽 种子吸胀后，保持湿度，在室温下催芽2天。 2.3.3 被检测液处理根尖 各取10粒，分别用蒸馏水（自来水）和毒液培养种子1天。
蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性姓名：马丽同组者：李哲指导教师：郝雪峰 （太原师范学院生物系112班） 摘要微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。[1] Abstract Micronucleus (MCN, micronucleus) is eukaryotic cells by various physical and chemical factors caused by chromosome aberration, and in a form of interphase cells. In interphase cells micronucleus assumes the circular or elliptic, free from the main nuclear, nuclear 1/3 ~ 1/20 size should be in the main, dyeing and the main nuclear as or slightly shallow. Generally considered microkernel by acentric chromosome fragment or lagging chromosomes, in the late division could not enter the nucleus, formed the main nuclear nuclear block. When the cells into the next phase split between, they condense into main small nuclear nuclear, namely the microkernel. [1] 关键词蚕豆根尖微核洗衣粉染色体畸变千分率 Keyword Broad bean root tip Micronucleus Washing powder Chromosomal aberration Permillage 引言掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗衣粉的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆根尖细胞MCN对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。 蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。它的染色体为六对相当大的染色体，而且根尖含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察。目前，蚕豆根尖微核技术在环境致突变性检测/监测方面已经形成了一套完整的体系。它的可靠性和灵敏性较高，且本底较低，这对于一种致突变性检测方法是十分重要的。此外，它的检测物谱较广。目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核：
蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性 姓名：马丽同组者：李哲指导教师：郝雪峰 （太原师范学院生物系112班） 摘要微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。[1] Abstract Micronucleus (MCN, micronucleus) is eukaryotic cells by various physical and chemical factors caused by chromosome aberration, and in a form of interphase cells. In interphase cells micronucleus assumes the circular or elliptic, free from the main nuclear, nuclear 1/3 ~ 1/20 size should be in the main, dyeing and the main nuclear as or slightly shallow. Generally considered microkernel by acentric chromosome fragment or lagging chromosomes, in the late division could not enter the nucleus, formed the main nuclear nuclear block. When the cells into the next phase split between, they condense into main small nuclear nuclear, namely the microkernel. [1] 关键词蚕豆根尖微核洗衣粉染色体畸变千分率 Keyword Broad bean root tip Micronucleus Washing powder Chromosomal aberration Permillage 引言掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗衣粉的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆根尖细胞MCN对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。 蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。它的染色体为六对相当大的染色体，而且根尖含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察。目前，蚕豆根尖微核技术在环境致突变性检测/监测方面已经形成了一套完整的体系。它的可靠性和灵敏性较高，且本底较低，这对于一种致突变性检测方法是十分重要的。此外，它的检测物谱较广。目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核： （1）凡主核大小1/3以下，与主核分离的小核；
实验方案(蚕豆根尖微核技术) 一、实验题目 蚕豆根尖微核技术检测几种废旧电池夜 二、实验目的 1、利用植物压片技术和微核实验原理，设计实验方案，研究环境中存在的毒害物； 2、理解环境致突变因子对生物体DNA的损伤 3、掌握环境因子遗传毒性检测的微核实验方法 4、培养初步的科研能力 三、材料仪器与方法 1.1材料仪器 选取蚕豆大小均匀籽粒饱满无虫害100颗（安徽大学生物实验中心供给），N种品牌的废电池（安大李园宿舍楼收集） 滤纸若干，烧杯，剪刀，培养皿N*15个，量筒100ml，锥形瓶5个，胶头滴管，显微镜，卡诺固定液，5 mol/L盐酸，石炭酸品红溶液，天平（带砝码）1.2方法 1.2.1废电池浸泡液制备 采用浸泡方法处理废电池。随机取N种废电池各1节（用），称重后砸破外壳暴露内部填充物，尽量使外壳破损程度一致。每克填充物加70ml蒸馏水，薄膜覆盖浸泡3天，每天搅动1次。每种电池浸泡液配成未稀释，稀释10倍、50倍、100倍4组，设蒸馏水为对照组。 1.2.2蚕豆根尖的培养处理 将蚕豆用蒸馏水浸泡一天使其充分吸胀，然后用滤纸浸水放于培养皿中在25℃恒温箱中培养24h。每12小时换水一次。待蚕豆初生根长至2cm左右，选取长度一致的蚕豆，分别用蒸馏水，1倍稀释液，10倍，50倍，100倍，分别处理6h，其中蒸馏水作为阴性对照处理。然后再放于25℃恒温箱恢复培养24h。卡诺固定液固定24 h；固定好的幼根以蒸馏水浸洗两次，用5 mol/L的盐酸于28℃水解约25 min，至幼根被软化即可；然后用蒸馏水洗净切取0.5cm的根尖，用改良的石炭酸品红溶液染色5~10分钟。 1.2.3制片 用常规压片法制作临时装片。 1.2.4镜检计数 每剂量组选取5个根尖，每个根尖随机镜检1000个细胞，计算微核率MCN‰=观察到微核细胞数/观察细胞总数*1000‰。 1.3统计学方法 采用spss统计软件，对数据采用方差和t检验，以α=0.05为检验水准。
蚕豆根尖微核实验（诱导与检测部分） 一、实验目的 1、了解环境诱变物对微核产生的原理。 2、掌握微核试验技术。 3、了解毒理遗传学在环境监测中的应用及意义 二、实验原理 微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期由于不能向两极移动而游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，可在它附近看到若干个圆形的结构，直径大约是细胞直径的1/20到1/5，这就是微核。 微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。 由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们需要有一套高度灵敏、技术简单的测试系统来监视环境的变化。只有真核的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。且有研究显示以植物进行微核测试与以动物进行的一致率可达99%以上。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。 利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测。 微核产生的概率可与诱变因子的剂量成正比，因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。 三、实验器具、药品 1、实验材料 蚕豆种子 2、实验器材 光学显微镜、试管（10ml）、蚕豆发芽盒、镊子、手术刀、载玻片、盖玻片、滤纸等。 3、试剂 1）NaN3(叠氮钠) 2）卡诺氏固定液（乙醇和冰醋酸按照体积比3：1混合配制） 4）6mol/L盐酸： 配制：取49.5ml 37.5%的盐酸，再加入50.5ml水稀释至100ml容量瓶. 四、实验步骤 1、种子处理：
蚕豆根尖微核实验 摘要：本实验用洗发水诱导蚕豆根尖发生畸变，通过固定、酸解、，染色、压片、镜检等一系列过程观察蚕豆根尖细胞核及微核，通过微核的数量判断洗发水对人体毒害作用的大小。由于产生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，因此可用微核实验来评价各种诱变因子对生物遗传物质的影响程度。 关键词：蚕豆根尖微核卡诺固定液吉姆萨染液 前言：随着相关研究人员的一系列实验表明：日常用品中的一些物质会对植物细胞尤其是分生组织细胞产生明显影响，它们会破坏细胞中的遗传物质——染色体，导致微核的产生，破坏细胞正常的生命活动。 微核（micronucleus,简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下，着色与主核一致或稍浅，呈圆形或椭圆形。蚕豆根尖细胞的微核是由于根尖细胞在分裂时受到外界诱变因子作用，形成的不随细胞分裂进入细胞核的染色体片段。 以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒物，称为微核实验。利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。 1．材料 1.1实验材料： 蚕豆（根尖细胞的染色体大，DNA含量高，对诱变因子反应敏感）
1.2实验药品： 1mol/L盐酸、固定液（乙醇、冰醋酸3：1配制）、吉姆萨染液 1.3实验用具： 显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、盆、纱布、烧杯、水浴锅等 2．步骤 2.1 浸种催芽 将试验所用适量蚕豆放入盛水烧杯盆中，在室温下浸泡1d。种 子吸胀后，用温润纱布松散包裹蚕豆置盆中，保持温度催芽2d，此时根长出将近约1.5cm。 2.2 毒性处理 选取根生长良好，根长一致的种子，分成两组，一组放入盛有被测洗发水的盆中，被测液浸没根尖即可。另一组放入盛有自来水的盆中培养，做对照组。两组均处理1d。 2.3恢复培养 处理后的种子用自来水浸洗，洗净后再置入盛有自来水的盆中， 恢复培养1d。 2.4 固定 将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用卡诺固定液 固定5-6h。 2.5 酸解 用蒸馏水浸洗干净固定好的幼根，吸净蒸馏水，加入1mol/L盐酸将幼根浸没，60℃酸解15分钟，幼根软化即可。 2.6 染色
水质污染对蚕豆根尖细胞微核的影响 陆汉祥通州区新联中学 一前言 遗传伤害是污染物对人类和其他生物危害中最值得重视的问题，植物微核作为检测环境中致变因子的方法已得到肯定。最早的报道是美国马德修教授在70年代后期用紫露草（Tradescantia paludosa）花粉母细胞微核(Micronacleus,MCN)数量来测定环境的污染。现在，这一技术已被美国国家环境保护局定为检测环境污染的常规指标之一。 八十年代初，我国山东海鲜学院方宗熙教授等也用紫露草微核观察来检测空气和海水中的污染程度，取得了初步的成果。微核检测法代替染色体畸变分析法来检测环境对生物遗传物质的伤害具有简便、快速和灵敏性较高等特点。本文用蚕豆根尖为材料，通过观测环境中致变污染物对生物遗传物质作用所产生的微核，为环境污染程度提供细胞学指标，从而为保护水源、治理污染提供科学依据。 二实验材料与方法 1实验材料： 本实验所用材料是江苏南通市新联种子公司出售。 测试水样为南通市新联镇新韩河卞西村段污水，以及 1/1000g/L AgNO3溶液和1/2500g/L AgNO3溶液。 2实验方法： 2.1根尖培养 将蒸馏水浸湿的蚕豆包裹于潮湿的纱布中，25℃，培养2-3天。
2.2、根尖和染毒: 根尖长至0.5cm左右，将其放在泡沫塑料块的小孔中，根尖向下露出。再将泡沫塑料块放于不同的处理液中，使根尖染毒，染毒24小时。（处理液分别是：100%新韩河卞西村段污水，50%新韩河卞西村段污水。1/1000g/L AgNO3溶液、1/2500 g/L AgNO3溶液以及作对照用的蒸馏水。） 2.3恢复培养： 经染毒24小时的蚕豆根尖（长至1cm左右）转至蒸馏水，恢 复培养24小时。 2.4根尖固定 恢复培养的根尖长至1-2cm后，于下午1时左右，将根尖剪下，用新配的卡诺固定液（无水酒精：冰醋酸=3：1）固定24小时，于70%酒精溶液中保存，待用。 2.5根尖制片 从70%酒精中取出根尖，用蒸馏水漂洗，再放于1N的HCL中，在60%水浴中解离8-10分钟。酸解后的根尖，在载玻片上切 取0.5cm长用大头针挑开，滴上几滴苯酚品红染色液染色 15-30分钟，盖上盖玻片，压片。 2.6、观察与计数 选取根尖分生区平铺均匀的玻片置于高倍显微镜下观察，统计微核（Micronucleus,MCN）。每种处理液镜检10条根尖，每条根尖观察约1000个细胞，然后从各组观察的细胞总数中计算微核细胞率
实验六蚕豆根尖微核检测技术 一、实验目的 ⒈了解微核测试原理和毒理遗传学意义。 ⒉学习蚕豆根尖的微核测试技术。 二、实验原理 微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/10，染色与主核一样或稍浅。一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。 三、实验器材和药品 松滋青皮蚕豆、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、1mol／L盐酸、改良苯酚品红染液、NaN 3。 四、方法与步骤 ⑴浸种催芽：择饱满、均匀的种子，洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24～30h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入铺有干净、双层湿纱布的托盘内培养。 ⑵用被检测液处理根尖：当初生根长到1～2cm时，选初生根生长良好的蚕豆6～8粒，分别放入蒸馏水（CK）、0.４mmol／L、0.８mmol／L、1.2mmol／L 的NaN 3中染毒8～12h。
⑶根尖细胞恢复培养：处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于湿棉花上恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。以上温度均为25℃。 ⑷根尖细胞固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1～1.5cm长的幼根，用Carnoys固定液固定20～24h。固定后的根如不及时制片，可换入70%的酒精溶液中置4℃冰箱中保存备用。 ⑸酸解：用1mol／L盐酸在60±5℃下酸解8min，幼根软化即可。 ⑹染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1～2分钟。最后浸于水中。制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴1-2滴改良苯酚品红染液染色10～15min后，加上盖玻片，覆以吸水纸常规压片。 五、实验结果 在显微镜低倍镜下找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察微核。每一处理观察3个根尖，每个根尖数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，然后平均，即为该处理的MCN%，即微核千分率，以此可作一个检测指标。 根据你的实验安排列表填出你的实验结果。 污染指数（PI）=样品实测MCN%平均值/对照组MCN%平均值 污染指数在0～1.5区间基本没有污染；1.5～2区间为轻度污染；2～3.5区间为中度污染；3.5以上为重度污染。 六、作业 1.在蚕豆根尖细胞的微核测试中，为什么要进行恢复培养？ 2.产生微核的根尖细胞在产生前的分裂中期可能出现什么样的中期分裂图象？实验观察中请同时仔细观察每个分裂相细胞。
蚕豆根尖微核检测 指导老师：吴麟 组长：路青瑜 小组成员:何悦李婷陈鸿谭小娥刘清唐珍冯沁李双吴海林符方亮 摘要：本实验运用蚕豆根尖微核检测技术，分别用0.25mg/mL染发剂、0.5mg/mL 洗洁精对蚕豆根尖做处理，同时以0.25 mol/L叠氮化钠处理蚕豆根尖做阳性对照，自来水作阴性对照。镜检后测得其微核率分别为17.55%，19.82%，23.18%，11.16%；染发剂、洗洁精处理的污染指数分别为1.7、1.8，结果表明均属于轻度污染。 关键词：蚕豆微核检测微核率 Abstract：This experiment using vicia faba micronucleus test technology, respectively for 0.25 mg/mL colourants, 0.5 mg/mL of vicia faba detergent, at the same time to do processing mol 0.25 / sodium azide processing vicia faba do positive, negative control for water. After the microscopic micronucleus rate 17.55% respectively, 19.82%, 23.18%, 11.16%, Hair, detergent pollution index respectively with 1.7, 1.8, results show that belong to light pollution. Key word：Horsebean micronucleus test；micronucleus rate 引言：染发剂和洗洁精都是我们生活中的日用品，特别是洗洁精。化学去污剂主要分为阳离子型、阴离子型和非离子型3类(其中阴离子型表面活性剂使用频率最高)。国内学者采用该技术开展了水体污染物、环境污染物和合成洗涤剂方面的研究。生活洗涤剂侵人人体后与其它的化学物质结合后，毒性会增加数倍，尤其具有很强的诱发癌特性。据有关报导，人工实验培养胃癌细胞、注入化学洗涤剂基本物质LAS会加速癌细胞的恶化。LAS的血溶性也很强，容易引起血红蛋白的变化，造成贫血症。 染发剂主要成分为：氨水、对苯二胺。市场上绝大部分染发剂都含有致癌物“对苯二胺”，长期使用将导致白血病、皮肤癌、乳腺癌等疾病。对苯二胺是国
微核检测技术实验计划书 一、实验目的 了解微核测试原理和毒理遗传学意义。学习蚕豆根尖的微核测试技术。 二、实验原理 微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。 已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。所以许多人认为可用简易的周期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出等都存在污染环境的可能性，欲了解这些因素对机体潜在的
遗传危害，需要有一套高度灵敏，技术简单易行的测试系统来监测环境的变化。只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。目前国内外不少部门已把微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。 三、材料、仪器与试剂 1、材料：蚕豆根尖 2、仪器：10W紫外灯、显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、滤纸 3、试剂：卡诺固定液（95%酒精：冰醋酸=3:1）、70%乙醇、卡包品红染色剂、1.0mol/LCrO3、0.5mol/LNaN3、150mol/LEMS溶液、6mol/L盐酸。 四、实验步骤 1、浸种催芽（按讲义上的步骤） 2、根尖染毒处理 2.1 紫外光处理：取出五组蚕豆根尖，分别用10W紫外灯等距离照射，分别照射0min、15min、25min、35min、45min，制片观察微核数目。 2.2 诱变物处理：取出三组蚕豆根尖，分别放入盛有
蚕豆根尖微核检测汇总 蚕豆根尖微核检测 一、实验背景和目的 本组实验运用蚕豆根尖微核检测技术，分别用不同牌子0.25mg/mL洗发露(欧莱雅、力士、沙宣)对蚕豆根尖做处理，同时以0.25mg/mL的醋酸铅溶液处理蚕豆根尖做阳性对照，自来水作阴性对照。 洗发露是我们生活中的日用品，洗发露主要成分为:界面活性剂，也就洗干净的成分。以SLS及sls的乙基衍生物类:月桂醇聚醚硫酸酯钠盐、十二酯硫酸铵(月桂酸硫酸酯纳)为主，SLS争议很多，主要表现在对皮肤的刺激性，容易让你头皮变得敏感，虽然SLS也有用在牙膏中，但是在舒适达等国外牙膏中，是没有SLS的存在的，从这一点上，也看出SLS的刺激性是厂商的心知肚明的。 微核(micronucleus, 简称MCN)，也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。所以许多人认为可用简易的周期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出等都存在污染环境的可能性，欲了解这些因素对机体潜在的遗传危
学生设计性实验论文 毒物对蚕豆根尖细胞的微核诱变效应 姓名雷旭红学号2013131203 专业生物科学班级132 相关实验课程名称细胞生物学实验＿指导教师郝雪峰 实验学期2014-2015学年第二学期
太原师范学院教务处编印 洗衣粉、洗衣露诱发蚕豆根尖细胞微核实验研究 摘要掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。根据微核诱导的原理，利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗衣粉的毒性状况给出客观评价。结果表明：洗衣粉会诱导微核的产生，说明洗衣粉、洗衣露在超过一定浓度内对生物细胞是有毒的。 Abstract :Broad bean root tip cells micronucleus general method detection technology to master. According micronucleus induction principle, the use of nuclear civia toxicity testing technology gives an objective assessment of the situation detergent. The results showed that: detergent will produce micronuclei induction, indicating that exceed a certain concentration of detergent in a biological cell is toxic 关键词蚕豆根尖细胞洗衣粉洗发露微核诱导作用损伤 Key words : Civia detergent rinse micronuclei induced damage 引言人类在发展经济的同时，对自然生活资源的肆意了开发和对环境的无偿利用，已造成了全球生态破坏、资源浪费和短缺、环境污染等重大问题。为了探明环境污染物对生物机体是否有蓄积毒作用，必须从环境的一致性着手。所谓环境的一致性，即指环境中物理或化学污染物对生物的致畸、致癌、致突变性。目前环境污染中最主要的三致中的致突变、致畸、致癌的根本常常是致突变的结果。
一、检测目的基因 G6PD基因定位于X染色体长臂2区8带ⅶ因子及红-绿色盲基因之间（Xq28）,长18Kb，中国人G6PD基因目前依法显得突变种类很多，但能引起题目中所诉临床症状的突变点可能是G1376Ｔ和G1388A点突变（G6PD基因含13个外显子和12个内含子，编码515个氨基酸。G6PD cDNA1388、cDNA1376同属第12外显子，相距仅12个核苷酸，突变结果使459和463位的精氨酸分别被亮氨酸和组氨酸替代） 二、检测方法 （一）. ARMS检测法,具体步骤如下： 1. 临床实验室检查：（1）确定贫血程度［3］；（2）根据急性溶血的临床体征和既往史进行有关溶血的实验室 检查，以排除其他因素所致的溶血。（3）G6PD活性测定，酶活性单位以每克Hb含多少国际单位来表示（IU/g），正常值为4～7 IU/g。 2.基因检测：DNA制备：按常规法，蛋白酶K消化，酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)抽提，无水乙醇沉淀DNA，TE溶解。 PCR引物设计：ARMS法试剂盒,引物序列为： 上游引物1388L2：5′GACCTGACCTACGGCAACAGATAC3′
下游引物1388M2：5′GGTGCAGCAGTGGGGTGAAATTAT3′ 1376M：5′TGAAAATACGCCAGGCCTCAA 3′ 1388L2和1388M2特异性扩增G6PD基因第12外显子cDNA1388（G→A）突变，扩增出361bp片段，而1388L2和1376M扩增cDNA1376（G→T）突变，扩增出345bp片段。 基因扩增：30 μl聚合酶链反应含基因组DNA 1.0 μg，10×反应缓冲液3.0 μl，dNTPs（2 mmol/L）3.0 μl，5′上游引物和3′下游引物各20 ng，内对照引物40 ng。反应条件为97℃变性7分钟，在85℃下加1.5U GD Taq酶后，进入热循环。循环条件为：94℃30秒，59℃45秒，72℃50秒，共25个循环，72℃继续保温7分钟。PCR在自动PCR仪（英国HYADI公司Omn-E）中进行。 结果观察：6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，选用1 kb λDNA 作为DNA分子量标准。银染，固定，干燥保存。 (二) 此外,还可以用通过扩增葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因第10，11，12，13外湿子６３９ｂｐＤＮＡ片段结合寡核苷酸探针斑点杂交技术、PCR/SSCP分析法、DNA序列分析、探针技术等方法检测上诉基因的点突变（具
蚕豆根尖细胞染色体标本的制备及其染色体核型分析 摘要：利用Photoshop等软件对蚕豆根尖细胞的染色体照片进行整理，并对每个染色体进行测量分析和统计，计算染色体的相对长度、臂指数、着丝粒位置这三个重要参数，采用Levan 标准，对蚕豆的染色体进行分类，最后按染色体的大小和类型，配对排列后即得到蚕豆染色体的核型。结果表明，蚕豆的染色体数为12，核型公式为K（2n=12）=2m+6st+4t，染色体核型属于2A型。 关键词：蚕豆；核型分析；染色体 引言 蚕豆（Vicia faba Linn），属豆科，野豌豆属。由于其染色体大，制片较简单，容易观察。故蚕豆是研究有丝分裂、减数分裂和染色体形态结构的一种好材料。一个物种的核型反映了其染色体水平的整体特征，研究和比较物种的核型有助于判断和分析物种间的亲缘关系，揭示遗传进化的过程和机制。 核型（karyotype）又叫染色体组型，是指染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和。核型分析（Chromosome karyotype analysis）是指在对染色体进行测量计算的基础上，进行分组、排队、配对然后进行测量，计算得出三个重要指数：相对长度、臂指数、着丝粒指数后进行形态分析。本次实验对蚕豆进行了核型分析。 1 材料与方法 1.1制片 选取处理后的蚕豆种子根尖分生区，用无菌水冲洗过后，在60度水浴条件下用1mol／l 的HCL解离10min，用无菌水冲洗。用改良品红染色12～15min，盖上盖玻片，点着吸水纸用橡皮头敲打，制成玻片。 1.2镜检 选取分散较好的中期分裂相进行分析测量，取得核型数据，包括染色体的相对长度（单个染色体的长度/染色体组内染色体总长度*100）、臂比值（长臂臂长/短臂臂长）、着丝点指数（短臂臂长/该染色体全长）及类型遵循Levan等的命名系统；核型类型参照Stebbins的标准。 2 实验结果 2.1 蚕豆根尖细胞染色体核型分析