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稀释涂布平板法计数公式

稀释涂布平板法计数公式
稀释涂布平板法计数公式

“微生物数量测量”是2017年高考大纲中的新内容,也是教学中的重要难点。稀释涂板法是计数微生物的常用方法,用于计数样品中活菌的数量。当样品的稀释度足够高时,在培养基表面上生长的菌落来自样品稀释液中的活细菌。通过计算平板上的菌落数,我们可以猜测样品中有多少种活细菌。

但是,菌落计数结果的处理常常成为学生容易出错的地方。典型示例:在从土壤中分离产生脲酶的细菌的实验中,将10g土壤样品溶液进行梯度稀释,并将0.1mL稀释倍数为105的土壤样品溶液接种在三个中板上。培养一段时间后,平板上的细菌菌落数分别为42、200和256。1g土壤样品中的细菌数为。

在PEP高中生物学选修课“生物技术实践”中,有这样一条陈述:用稀释包被板法计数菌落:为了确保结果的准确性,菌落数在30到30之间通常选择300和300进行计数。但是,如果我们理所当然地认为42、200和256个数据都在30?300范围内,那么直接对它们求平均并乘以稀释倍数就可以得出错误的结果1.66×108。这也是许多学生犯错误的原因。

实际上,教材中的相关表述仅说明了可计数菌落数的适当范围。在一定稀释度下,三个平板中的菌落数不能简单地直接平均,应注意稀释度的设定和计数结果的允许差异。

为了确保准确确定有效活菌计数,必须设置三个稀释度并进行分级,并且每个梯度应设置三个重复。为了确定土壤中细菌的数量,通常使用104、105和106倍的稀释剂进行平板培养。为了确定放线菌的数量,通常使用103、104和105倍的稀释度。为了确定真菌的数量,通常使用102、103和104倍的稀释度。

如果平板中的菌落数太少,必然会导致计数误差太大;相反,如果培养皿中的菌落太多,将导致计数困难。因此,世界上菌落计数的基本原理是对稀释的平板进行计数,其中平板上有30?300个菌落。同时,相同稀释度重复3次的平板上菌落数的标准差应小于允许的差。也就是说,在平板计数试验中,如果在相同稀释度下三个重复菌落的数量在30?300之间,但是数据相差很大,则需要将其丢弃。

如果在平板上重复3次的平均菌落数少,则容许误差也小。相反,如果平均菌落数较大,则允许误差将较大。如果选择了适当的稀释计数,则三个重复的标准差应小于规定的允许差。如果三个重复的标准差大于指定的允许差,则无法正确计算它们,必须重新测量。

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