315对3组茎皮和木心的测定结果显示,木心中刺五加苷E的量在当年新枝中可达茎皮的两倍以上,而在老枝中约为茎皮的一半。推测刺五加苷E在嫩枝中木质部的积累速度高于皮部,随着枝条的生长,刺五加苷持续积累,但木质部的细胞增长速率高于韧皮部,因此老枝中茎皮的刺五加苷E的量高于木心。木心一直被认为是非药用部位而弃去,本实验结果显示木心中的刺五加苷E量较高,应加以利用,对于扩大药源、保护资源有积极意义。
316本实验另对15批不同来源的红毛五加叶进行了定量测定,其中仅有7批样品中含有刺五加苷E,其量在01025~01503mg/g。
参考文献:
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[3]党月兰,骆勤,李淑玉1红毛五加总苷的抗炎作用[J]1中
药药理与临床,2000,16(1):14-181
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术出版社,19951
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方编1第2册1北京:北京大学医学出版社,19951
HPLC法测定赶黄草中槲皮苷、槲皮素和乔松素-7-O-葡萄糖苷
贺晓华1,2,王小淞1,曾建国1,2*,罗丽娟1,铃木万荣3
(11湖南省中药提取工程研究中心,湖南长沙410331;21湖南中医药大学,湖南长沙410007;
31日本丸荣贸易株式会社,日本东京1010032)
摘要:目的建立测定赶黄草中槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷等黄酮类成分的分析方法。方法用HP LC法;色谱柱为L una-C18柱;流动相为乙腈-011%磷酸水,梯度洗脱;检测波长267nm;体积流量018mL/min。结果槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷获得良好分离,在1018~21610、1014~20810、1014~20710L g/mL与峰面积积分值线性关系良好;重现性试验RSD分别为0119%、0119%、0112%;加样回收率分别为100117%、100106%、99187%。结论本方法简便快速,精密度、分离度良好,为赶黄草及其制剂质量标准的制定提供了可供借鉴的方法。
关键词:赶黄草;槲皮苷;槲皮素;乔松素-7-O-葡萄糖苷;高效液相色谱
中图分类号:R28216文献标识码:A文章编号:0253-2670(2009)06-0981-03
赶黄草是虎耳草科扯根菜属植物扯根菜Pentho-r um chinense Pursh的干燥地上部分[1],为苗族民间的草药,具有清热解毒、退黄利湿、活血散瘀、利水消肿之功效[2],广泛用于治疗各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等[3]。赶黄草中含有黄酮类、有机酸类等成分,其中已知并且稳定存在的为没食子酸、槲皮素[4],另外还有槲皮苷(槲皮素-3-O-鼠李糖苷)、乔松素-7-O-葡萄糖苷等其他黄酮成分[5]。已有文献报道采用H PLC 法测定赶黄草中槲皮素。本研究采用RP-H PLC法对赶黄草中槲皮苷、槲皮素和乔松素-7-O-葡萄糖苷3种黄酮成分进行了测定。实验结果表明,该方法分离度好,具有良好的精密度和重现性,可为赶黄草质量标准建立提供定量测定指标。
1仪器与试药111仪器:高效液相色谱仪(岛津20A);色谱工作站(岛津LC-Solutio n系统);超声清洗仪(昆明市超声仪器有限公司);电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。
112试药:槲皮素(中国药品生物制品检定所,质量分数为98%,批号100081-200406);槲皮苷(中国药品生物制品检定所,质量分数为98%,批号111538-200403);乔松素-7-O-葡萄糖苷(自制,经核磁共振、质谱等技术分析鉴定,峰面积归一化法计算质量分数大于98%)。实验用甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯,试验用水为自制二次重蒸水。
113药材:赶黄草药材采于四川古蔺(药材原产地)和湖南浏阳(由四川古蔺引种,浏阳自种),经湖南中医药大学周日宝教授鉴定为扯根菜P1chinense
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中草药C hinese Traditional and Herbal Drugs第40卷第6期2009年6月*收稿日期:2008-10-19
基金项目:湖南省科技厅重点项目(2007w k2003)
作者简介:贺晓华(1983)),女,湖南省长沙市人,硕士生,研究方向为中药及其复方化学成分研究。
T el:013574875497E-mail:hexiaohualuck@1631com
*通讯作者曾建国T el:(0731)4686478E-mail:ginkgo@w orld-way1net
Pursh。
2方法与结果
211色谱条件:色谱柱为Luna-C18柱(250mm@ 416mm,5L m),广州菲罗门科学仪器有限公司;检测波长:267nm;体积流量:018m L/min;柱温:35 e;进样量:5L L;流动相为乙腈(A)-011%磷酸水(B)二元线性梯度洗脱(0~45min,有机相先增大至45%,在逐步回到起始状态)。按上述色谱条件,对照品溶液理论塔板数以槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷峰计算,均不低于5000;槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷与相邻峰之间的分离度均大于115;对称因子均在0195~1105。
212对照品溶液的制备:精密称取于五氧化二磷真空干燥24h至恒重的对照品槲皮苷、槲皮素和乔松素-7-O-葡萄糖苷适量于50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成槲皮苷、槲皮素和乔松素-7-O-葡萄糖苷分别为01216、01208、01207mg/mL 的混合溶液。
213供试品溶液的制备:取赶黄草药材细粉(过四号筛),约110g,精密称定,精密加入甲醇50mL于具塞锥形瓶中,称质量,超声处理30m in,放冷,再称质量,用甲醇补足损失的质量,摇匀,经0145L m 微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
214标准曲线的制备:取对照品溶液015、110、210、510、810、1010mL,分别置于1010mL量瓶中,加入甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取5L L进样分析。以各成分峰面积为纵坐标,相应质量浓度为横坐标,进行线性回归分析,得槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷的回归方程分别为:Y=4126@ 104X+81630,r=019999;Y=6144@104X+ 01949,r=019999;Y=1124@104X-81160,r= 019998。结果表明,槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷分别在1018~21610、1014~20810、1014~ 20710L g/mL与峰面积积分值线性关系良好。
215精密度试验:精密吸取上述对照品溶液5L L,连续重复进样6次,槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷峰面积的RSD分别为0110%、0110%、0113%。
216重现性试验:精密称取同一批样品(产地四川古蔺,批号080201),共6份,按/供试品溶液的制备0项下方法操作,在上述色谱条件下进样,槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷质量分数的平均值分别为2112、0173、0153mg/g,RSD值分别为0119%、0119%、0112%。217稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液(产地四川古蔺,批号080201)各5L L,分别在0、4、8、12、24、48h进样分析,测得槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷峰面积的RSD值分别为0115%、0113%、0117%,表明供试品溶液在48h稳定性良好。
218加样回收率试验:精密称取赶黄草药材(产地四川古蔺,批号080201)9份,每份011g,每3份为一组,每组分别加入相应对照品,按/供试品溶液的制备0项下方法操作制成所需溶液,在上述色谱条件下进样分析。结果槲皮苷低、中、高3个加入量的平均回收率为100117%;槲皮素低、中、高3个加入量的平均回收率为100106%;乔松素-7-O-葡萄糖苷低、中、高3个加入量的平均回收率为99187%。219样品测定:取四川古蔺原产地和湖南浏阳自种(四川古蔺引种)的赶黄草药材粉末各约10g,精密称定,按/供试品溶液的制备0项下方法进行操作,在上述色谱条件下进行分析,用外标法计算样品中槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷的量。药材中槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷的定量测定结果见表1,色谱图见图1。结果表明,槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷的量较高;在所收集的药材中槲皮苷的量明显高于其他成分,说明从量上看槲皮苷为主要黄酮成分;湖南浏阳产地的赶黄草药材的量与四川古蔺产地的药材的量存在差别,这些差别可能是由气候、生长环境、降水量等因素不同引起的。
表1不同产地赶黄草药材中槲皮素、槲皮苷、
乔松素-7-O-葡萄糖苷的测定结果(n=3) Table1Determination of quercetin,quercitrin,
and3-pinocembrin-7-O-glucopyranoside
of P1chinense from various habitats(n=3)产地批号
槲皮苷/
(mg#g-1)
槲皮素/
(m g#g-1)
乔松素-7-O-葡萄糖苷/
(mg#g-1)
四川古蔺080201211201730153
080301218501801137
080401310111021172
湖南浏阳080701019401450141
080801115001710167
080901210001831105
3讨论
311检测波长的选择:试验过程中通过对槲皮苷、槲皮素、乔松素-7-O-葡萄糖苷对照品溶液在200~ 400nm波长处扫描,结果显示槲皮素、槲皮苷在267、360nm有最大紫外吸收,乔松素-7-O-葡萄糖苷在267nm处有最大紫外吸收,故选择267nm为检测波长。
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#中草药C hinese Traditional and Herbal Drugs第40卷第6期2009年6月
图1对照品(A)与样品(B)色谱图
Fig11Chromatograms of reference substances(A)
and samples(B)
312流动相的选择:试验过程中选择了多种流动相,如甲醇-011%磷酸水、乙腈-011%磷酸水、乙腈-水、甲醇-水等。结果表明,用乙腈-011%磷酸水溶液作流动相,基线稳定,分离度好,峰形对称,确定采用乙腈-011%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。313提取方法的选择:对冷浸法、热回流法、超声法等进行考察,结果表明,热回流法与超声法提取效率均较高,但由于超声法操作简便,故选择超声提取法。
参考文献:
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型肝炎病毒体外实验研究[J]1中西医结合肝病杂志,2002,
2(1):51
高效液相色谱法测定乌药中乌药醚内酯
余翠琴,陈方亮*
(台州市中心医院,浙江台州318000)
摘要:目的采用反相高效液相色谱法测定天台乌药中乌药醚内酯。方法色谱柱为Symmetry C18柱(250mm@ 416mm,510L m);流动相为乙腈-水(57B43);体积流量1mL/min;检测波长235nm。结果该方法下乌药醚内酯线性范围为01051~2155L g,平均回收率为99196%。结论本法简便、经济,结果准确,可用于天台乌药的质量控制。关键词:乌药;乌药醚内酯;反相高效液相色谱
中图分类号:R28216文献标识码:A文章编号:0253-2670(2009)06-0983-02
乌药为樟科山胡椒属植物乌药L inder a ag-gr egata(Sims)Ko sterm1的干燥块根,5本草纲目6记载,乌药具散寒、补中、顺气、开郁,具有增加肠胃蠕动、兴奋大脑皮层、加速血液循环等功效,能上理脾胃元气,下通少阴肾经。主产浙江、江西、湖南等地,历代医家都评价/以浙江天台所产者品质最佳0,元、明时曾作为朝廷贡物,历史上著名医家朱丹溪的养生药补方中常用天台乌药。被誉为/长生不老药0的天台乌药,历史悠久,品质超群,享誉中外,是我国名贵地道药材之一。乌药中主要含有挥发油、异喹啉类生物碱、黄酮类及倍半萜类成分[1],其中最能体现乌药特征的成分应是呋喃倍半萜及其内酯类成分,5中国药典6中以乌药醚内酯为指标性成分对乌药进行定性鉴定和定量测定[2]。本实验建立简便快速的H PLC法测定乌药中乌药醚内酯。1仪器和试剂
111仪器:Waters2695高效液相色谱仪(包括2695四元梯度泵,在线脱气机,自动进样器,柱温箱,2487紫外检测器,Empow er色谱工作站);Met-tler AE200电子分析天平;UV)Vis8500紫外可见光分光光度计;XW)80A型旋涡混合器;0412)1型台式离心机;H S2060型超声波清洗器。
112药品与试剂:乌药产自浙江天台,由天台山乌药生物工程有限公司提供,经本院中药房主任黄瑞平副主任药师鉴定为樟科山胡椒属植物乌药L1 aggr egata(Sims)Kosterm1的干燥块根;乌药醚内酯对照品(中国药品生物制品检定所,批号1568-200201);甲醇、乙腈为色谱纯;水为双重蒸馏水;其他试剂为分析纯。
2方法与结果
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中草药C hinese Traditional and Herbal Drugs第40卷第6期2009年6月
*收稿日期:2008-12-03
基金项目:台州市科技计划基金资助项目(061KY25)
槐花米中芦丁的提取与鉴定 背景知识 芦丁（Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。 芦丁具有维生素P样作用。能维持血管的正常通透性，减低血管的脆性，缩短流血时间，可作为高血压病的辅助治疗剂。亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。
一、实验目的 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作；熟悉芦丁、槲皮素的结构性质和检识方法。 二、实验要求 独立完成实验，从槐花米中提取出芦丁并进行鉴定。 三、实验原理 芦丁属黄酮类化合物，分子中有较多酚羟基，具弱酸性，易溶于热碱中，酸化后又析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁，又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。 四、实验材料和器皿 【器皿】 烧杯（500ml）2个，试管2个，布氏漏斗1个，玻璃棒1根，抽滤瓶1个，滴管，移液管（10ml）1根，洗耳球1个，滤纸，pH试纸，电热炉，真空抽滤机。 【材料】 槐米花30 g，饱和石灰水，0.4%硼砂水溶液，镁粉，pH试纸，浓盐酸，95%乙醇，10% α萘酚乙醇溶液，浓硫酸，蒸馏水。 五、实验内容 操作步骤： 称取30g槐花米于研钵中研成粉状物，置于500mL烧杯中，加入饱和石灰水，加热至沸，并不断搅拌，煮沸30分钟后，趁热抽滤。然后用浓盐酸调节pH值为4~5。放置1-2h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用水洗涤2~3次，得到芦丁的粗产物。 流程图：
2011届本科生毕业论文 题目芦丁的提取分离及鉴定作者单位陇东学院化学化工学院指导老师胡浩斌 作者姓名张娜娜 专业班级2007级化学本科(2)班提交时间二〇一一年四月
2011届本科生毕业论文 芦丁的提取分离及鉴定 张娜娜，胡浩斌 （陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳745000）摘要：目的以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法，掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甙，甙元和糖的部分鉴定方法。方法采用水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法对芦丁进行提取分离，并对其进行定性分析及色谱鉴定。结果水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法，三种方法均可制的芦丁，且质量合格。结论从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流是较理想的提取方法。制得芦丁产率高，且测定方法简单、迅速、灵敏度高。 关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定 Extraction, Seperation and Identification of Rutin Zhang Nana, Hu Haobin (College of Chemistry and Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 745000, Gansu) Abstraction: Objection Rutin as an example to learn the extraction of flavonoids square. Grasp the main properties and flavonoids ingredients flavonoids glucoside. Method W ith the water extraction method, buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) extraction to extraction and separation of rutin and chromatographic identification. Result With water formulation,Buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) method of extraction rutin backflow separation,three methods are made rutin and obtaining rutin quality qualified. Conclusion From improve yield and purity of rutin angle, ethanol refluxing was ideal extraction method. Preparation of rutin of high yield,high sensitivity. determination method is simple to rutin rapid. Key word: Sophora japonica; rutin; quercetin; extraction; separation; identification 引言 随着人们生活水平及质量的不断提高，心脑血管病的发病率也呈上升趋势，而且死亡率居各种疾病之首，因此，对治疗和预防心脑血管病的药品与保健品的开发研究就显得尤为重要， 1
实验二芦丁的提取及鉴定 （一）概述 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。实验目的和要求 实验目的 ①通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 ②通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 ③了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 要求 ①要拿到以下三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰化合物。 ②能够拿根据化学试验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解。 试验方法 芦丁的提取与分离（见下图） 芦丁的鉴定 ①芦丁的定性反应 取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，分成三份作下述试验： A. 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，在酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。 B. 取上述溶液1~2ml，然后滴加2%柠檬酸的甲醇溶液，注意观察颜色变化情况，在继续向试管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。 C. 取上述溶液1~2ml，然后再加入10%α-等体积的萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化。 ②芦丁的紫外光谱解析 取芦丁溶于色谱纯甲醇中，加入规定的试剂，测定其UV光谱，试解析光谱并初步判断其结构。
HPLC法测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量 李启彬1，刘涛2，曹晓庆，李青丽（1．河南省驻马店市药品检验所，驻马店463000；2．河南天方药业股份有限公司，驻马店463000） 摘要：目的利用HPLC测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量。方法采用Zorbox SBC18 色谱柱，流动相为水-甲醇-乙酸（45:50 :5），流速1.0ml ·min-1,检测波长256nm。 结果芦丁在60 ~ 140μg · ml-1 浓度范围内，线性关系良好，r =1.00 000，槲皮素在2.4 ~ 5.6μg ·ml-1 浓度范围内, 线性关系良好，r=0.99998。芦丁的平均回收率为99.3%，RSD为0.6%，槲皮素的平均回收率为99.6%，RSD为0.4%。结论本法结果 准确，重复性良较好，方法简便可行。 关键词：芦丁；槲皮素；HPLC Determinaition of Rutin and Its Quermination by HPLC LI Qi-bin1，LIU Tao2，CAO Xiao- qing，LI Qing-li（1. Zhumadian Institute of Quality Control of Drug, Zhumadian 463000,China；2. Henan Topfond Pharmaceutical Co.,Ltd Zhumadian463000,China） ABSTRACT: OBJECTIVE A HPLC method for the determination of rutin and its quermination was established. METHODS A zorbox SBC18 column was used，with the mobile phase of water-methanol-Vinegar(45：50：5)，at the flow rate of 1.0ml · min-1，the detection wavelength was 256nm. RESULTS The linear range of rutin (r=1.00000) was 60~140ug·ml-1，and quermination (r=0.99998) was 2.4~5.6μg ·ml-1，The average recovery of Rutin was 99.3%，RSD0.6%，and quermination was 99.6%，RSD0.4%.CONCLUSION It was accurate and rapid. KEY WORDS：rutin；quermination；HPLC 芦丁又名芸香苷、芸香苷是从槐米中提取的一种浅黄色或微绿色针状结晶或粉末。它具有降低毛细血管的异常通透性和脆性的作用。主要用于防治高血压病的辅 助治疗。同时，它又是合成曲克芦丁的主要原料。现行卫生部药品标准采用紫外分 光光度法测芦丁含量，用纸层析法测槲皮素的含量，方法复杂，操作费事，并且槲 皮素无法定量，而用HPLC法操作简便，结果准确。
综合化学实验: 芦丁的提取分离和鉴定 芦丁简介: 芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。 中药槐米（炒碳）味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。西医研究其主要有效成分为有机化合物“芦丁”而中药槐米中芦丁的含量可高达12~16%，是主要的芦丁天然来源。槐米中还含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。研究文献证明芦丁具有VitP（维生素P）样作用（VitP具有生物类黄酮的功能，可防止维生素C被氧化而受到破坏，增强维生素功效；增加毛细血管壁强度，防止瘀伤。有助于牙龈出血的预防和治疗，有助于因内耳疾病引起的浮肿或头晕的治疗等）。而芦丁具有类似作用如可降低毛细血管脆性和调节通透性等，在医学临床上常将其用作毛细血管脆性引起的出血症以及防治高血压病等的辅助治疗药物。 芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinose，一种由葡萄糖glucose与鼠李糖rhamnose组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无结晶水时188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 补充知识:
槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定 槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L ．）的未开放花蕾。味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。 槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁具有Vitp 样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。 [目的要求] 1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握槲皮素的制备原理及操作。 3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用 4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 [实验原理] 芦丁（rutin ）：C 27H 30O 16·3H 2O ，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素（quercetin ）：C 15H 10O 7·2H 2O ，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。 芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇， 较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择
槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备 杨翊涵（2013级中药学一班） 【摘要】本文整理总结了两次实验的操作过程与实验结果。包括从槐米中提取芦丁、芦丁的分离和检识，以及槲皮素的制备和检识。通过碱溶酸沉的方法提取芦丁，再利用稀酸水解生成槲皮素。通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用。通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法熟悉重结晶技巧。了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。 【关键词】芦丁、槲皮素、提取分离、检识鉴定、结构、性质。 1. 1 芦丁的提取原理 利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的 性质，可用碱性溶剂进行提取，提 取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉 法）。也可利用芦丁在冷水中溶解 度小，在热水中溶解度大的性质进 行提取。 1.2. 芦丁的分离原理 利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热
溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。 1.3. 芦丁的鉴定原理 （1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。 （2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。 1.4 实验原理 芦丁浅黄色针状结晶，难溶于冷水，可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素黄色结晶，能溶于冷乙醇 （1：290），易溶于沸乙醇（1：23）， 可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡 啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚 等溶剂。
综合实验槐花米中芦丁的提取与鉴定 （一）实验目的 (1)通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。 (2)掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷的检识方法。 (3)掌握薄层层析法的操作。 (4)掌握由芦丁水解制取槲皮素的方法。 （二）实验原理 芦丁((rutin)亦称芸香苷（rutinoside），为黄酮苷，广泛存在于植物中，其中以槐花米(为槐树Sophora japnica，的花蕾)和乔麦叶中含量较高。芦丁的主要药理作用有抗炎作用、维P样作用及抗病毒作用，具有维持血管抵抗力，释低其通透性，减少脆性的作用；对脂肪肝有去脂的作用，与谷胱甘肽合去脂作用更明显；对于放射性伤害所引起的出血症也有一定治疗作用；临床上只要作防治高血压的辅助药物，毛细血管性止血药。芦丁水解后可生成槲皮素，槲皮素有一定的平喘作用；此外还有降低血压，增强毛细血管抵抗力，减少毛细血管脆性，降血脂，扩张冠动脉，增加冠状动脉血流量的作用。 槐花米中含芦丁8%~28%，槐花米甲素sophorin A 14% ，槐花米乙素sophorin B 1. 25%，槐花米丙素sophorin C 0. 35%，也含槲皮素quercetin、白桦脂醇betulin，槐二醇sophoradiol等。 本实验以常用中药槐花米为原料，对其主要成分芦丁进行提取分离及鉴定。根据芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提液加酸后加酸酸化则芦丁游离析出(碱溶酸沉法)，然后也可通过快速柱层析法对粗品进行纯化。 (三)实验步骤 1.芦丁的提取 （1）于250mL烧杯中加入120 mL石灰水溶液，0. 5 g硼砂，置于石棉网上加热至微沸后，加入10g槐花米粗粉，保持微沸60 min(不断搅拌)后，趁热用纱布包裹挤压过滤。滤渣再用100mL石灰水溶液同法操作一次。合并滤液，然后在60∽70℃保温情况下，以15%盐酸液调节pH为3∽4。静置过夜，使沉淀完全。 （2）将静置过夜的滤液的上层清液小心倾倒到烧杯中，剩下的少量液体和沉淀混合物用离心分离法得到沉淀，小心倒出离心管上层清液，再加入蒸馏水，用玻棒搅拌洗涤沉淀，离心，倒出上层清液，重复上述操作，直至倒出的蒸馏水洗液为中性，将离心管和沉淀一起放入烘箱中干燥，称量。
槐米中主要成分是芦丁。从槐米中提取芦丁可用乙醉提取法、水提取法、碱溶酸沉提取法。碱溶酸沉提取法是依据芦丁结构中有游离的酚羟基, 显弱酸性, 遇碱成盐溶解，加酸又游离析出的原理设计的, 此法成本低、收率高, 所得产品质童好, 是实际生产中常用的方法 芦丁 碱溶酸沉（alkali-solution and acid-isolation）碱溶酸沉法，中药化学中常用于黄酮类、蒽醌类、酚性,内酯结构的木脂素、香豆素类提取分离等实验。原理：利用混合物中各组分酸碱性差异而进行分离。 具体操作将总提物溶于亲脂性有机溶，用碱水提取，调节PH值后用有机溶剂萃取，还可用PH梯度法进一步分离各碱度或酸度不同的成分。 注意：提取过程中料液比、浸提碱液pH值、浸提时间等条件都对提取率及纯度有影响。注意酸性或碱性的强度，与被加热分离成分接触的时间，加热温度和加热时间等，避免在剧烈条件下某些化合物结构发生变化或结构不能回复到原本存在于中药的状态。 1．溶剂萃取法去杂 原理：利用黄酮类与其它杂质极性不同，选不同溶剂进行萃取。 石油醚：除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和非极性苷元。 2．碱水提酸沉淀法 原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出 适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。 注意事项： ①酸碱度不宜过大 ②邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易被氧化，加硼砂保护 ③石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂质 3．炭粉吸附法 适用于苷类的精制工作。 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。
实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定 一、概述 槐米系豆科植物槐树（Sophora japonicaL.）的花蕾（槐米）。具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。近年来被用作治疗高血压的辅助药物。 药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。 主要化学成分的结构及理化性质： xx（rutin）：C 27H 30O 16·3H 2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素（quercetin）：C 15H 10O 7·2H 2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
二、实验部分 （一）实验目的 1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。 2、掌握酸水解将芦xx生成槲皮素的方法。 3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。 （二）实验原理 1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。 2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。 3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf值也应不同。 （三）实验药材、仪器与试剂 1、药材：槐米50g(每组)。 2、仪器：电炉子、不锈钢锅、量杯、1000ml烧杯、冰箱、滤纸、PH试纸、减压抽滤装置、锥形瓶、玻璃漏斗、纱布、电子天平、聚酰胺薄膜。 3、试剂：0.4%硼砂水溶液、石灰乳、2%硫酸溶液、浓盐酸、蒸馏水、镁粉、浓硫酸、甲醇、90%乙醇、1%三氯化铝醇溶液、醋酸镁乙醇液等。 （四）实验方法 1、xx的提取：（碱提酸沉法） 取槐米50g，加0.4%硼砂水溶液400ml至小锅中，加热煮沸，用石灰乳调节PH=9，加热微沸30min，随时补充失去的水分及控制PH值，四层纱布过
实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别 一、实验目的 （1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。 （2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。 二、实验原理 芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。 芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。溶解度情况如下： 水：1:10000(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:300(冷)，1:30(热) 吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。 三、实验内容 （一）芦丁(芸香苷)的提取 1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。称取槐米20g，于1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤
槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定 实验名称：槐米中卢丁和槲皮素的提取分离与鉴定 实验目的： 1）掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理及操作，学会芦丁的精制与水解方法。 2）能运用化学法、色谱法鉴定芦丁。 实验器材： 槐花粗粉石灰乳硼砂烧杯纱布蒸馏水抽滤装置盐酸硫酸三角 烧杯镁粉α-萘酚硅胶ＧBa(OH) 2 FeCl 3 K 3 [Fe(CN) 6 ]苯胺-联苯 二甲酸芦丁标准品 槲皮素标准品葡萄糖标准品鼠李糖标准品 参考文献： （一）主要成分的结构及性质 槐花系豆科植物Sophora japonica L.的干燥花蕾。其主要有效成分为芦丁，芦丁在槐花花蕾中含量高，《药典》规定槐花中芦丁含量不得少于20.0％。其结构为槲皮素-3-O-芸香糖苷。 （二）基本原理 芦丁分子中有较多的酚羟基，有弱酸性，可与碱成盐而溶于水中，加酸酸化后可沉淀析出，因而用碱溶酸沉法提取芦丁。 芦丁的精制是利用它在冷热水中的溶解差异进行的。 （三）操作步骤 １．芦丁的提取 称取槐花粗粉，置500ml烧杯中，加入0.4％硼砂沸水溶液200ml，在搅拌下加入石灰乳，调至pH8～9,加热微沸20分钟（注意保持pH8～9），并随时补充蒸发的水分，趁热用四层纱布滤过。同样操作再提取一次，合并两次滤液。滤液在60~70oC用浓HCl调至pH３~４，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗２~３次，抽干，置空气中晾干，得芦丁粗品。 2．芦丁的精制 称量粗品芦丁，按1:200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使芦丁全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，结晶置空气中晾干或60～70oC干燥，得精制芦丁，称重，计算收率。 3．芦丁的水解 取芦丁，研细后置于250ml三角烧杯中，加入2%H 2 SO4溶液100ml，直火加热微沸约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15ml）重结晶得精制槲皮素。 4．芦丁鉴定 (１)化学鉴别分别取芦丁和槲皮素少许，加乙醇５～６ml使溶解，作以下试验： ①盐酸-镁粉反应取上述溶液１～２ml，滴加２滴浓盐酸，再加入少许镁粉，振摇，观察颜色变化情况。 ②Molich反应取上述溶液１～２ml，加10％等体积的α-萘酚乙醇溶液，摇匀，
实验二 槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素 一、概述 植物来源：槐米系豆科植物槐树（sophora japonica L.）的花蕾（槐米），芦丁含量高达12%~20%。荞麦中含量也较高。含芦丁成分的植物高达70种以上。 功效：芦丁经药理实验证明具有调节毛细血管渗透作用，具有维生素P 样作用。在临床上用作毛细血管止血药，常作为高血压病的辅助用药。芦丁为槐米中主要有效成分。 主要化学成分的结构及理化性质：芦丁（Rutin ）也称芸香苷，是槲皮素3位上的羟基与芸香糖脱水缩合形成的苷(芸香糖为葡萄糖与鼠李糖组成的双糖)。分子式：C 27H 30O 16·3H 2O ，淡黄色针状结晶，含三分子结晶水，熔点174～178℃,无水物为188~190℃。易溶于碱液，显橙黄色，酸化后又析出。在冷水中的溶解度为1：10000，热水中为1：200，在冷乙醇中为1：650，在热乙醇中为1：60，在吡啶中为1：12。微溶于乙酸乙酯和丙酮，难溶于苯、三氯甲烷、石油醚等极性小有机溶剂，可溶于硫酸和盐酸，加水稀释又可析出。UV EtOH m ax λ：259，299，359nm 。芦丁用20%H 2SO 4水溶液水解可得槲皮素（芦丁的苷元），呈黄色结晶，313～314℃，C 15H 10O 7·2H 2O ，在热乙醇中溶解度为1：23，冷乙醇中1：290，难溶于水和苯等极性小的有机溶剂，可溶于极性较大的有机溶剂如甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。UV EtOH m ax λ：255，269sh,301sh,370nm 。 其他成分理化性质：皂苷（saponin ）粗品为白色粉末，m.p.210～220℃。易溶于吡啶。能溶于200倍的甲醇，酸水解后获得两种苷元（白桦酯醇、槐花二醇）及糖（糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄糖醛酸内酯）。白桦酯醇（betulin ）无色针晶，m.p215～217℃,能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、三氯甲烷、苯等；难溶于石油醚。槐花二醇（Sophoradiol ）无色针晶，m.p219～220℃或224℃，溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇，难溶于水。芦丁和槲皮素结构式如下所示。 芦丁 MW664.6 (含三分子水) 槲皮素 MW338.3 （含二分子水） O O O OH OH OH O H O CH 3OH OH OH O O C H 2OH OH OH O O OH O H OH OH OH
槐米中芦丁及槲皮素的提取、分离、鉴定及含量测定 实验策划 [实验背景] 槐米为豆科植物槐树(Sophora japonicaL)的花蕾，具有清热、凉血、止血的功效。现代药学研究表明，槐米中主要含有芦丁，槲皮素和粘液质等，其中芦丁是有效成分。芦丁(Rutin)，又名芸香甙 (Rutio side)，属黄酮类化合物[1]，其化学名称为∶5，7，3，4'-四羟基一3一芸香糖黄酮，性状为黄色结晶粉末或无晶形粉末，有苦味，略溶于水，能溶于热水及乙醇。芦丁具有维生素P样作用，能降低毛细血管通透性和脆性，促进细胞增生和防止血细胞凝聚，临床上用于治疗毛细管脆性引起的出血症，有助于恢复毛细血管弹性，如治疗脑血管出血、高血压、视网膜出血、急性出血性肾炎等;芦丁还具有抗心肌缺氧、缺血、抗心律失常、降低血清胆固醇、抑制血小板集聚、抗溃疡、抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗衰老、抗辐射、抗病毒和增强免疫力等功能，是预防和治疗糖尿病、心绞痛、慢性心功能不全、高血脂和预防动脉硬化[2]、心机梗死、脑血栓等疾病的天然绿色药物。因此，目前芦丁已被广泛用于医药、保健食品和化妆品中，具有很高的开发价值。我国芦丁生产主要以槐米(槐花的花蕾)为原料进行提取。 [目的要求] 1．通过芦丁的提取与精制掌握黄酮类化合物的不同提取方法及操作。2．掌握槲皮素的制备原理及操作。 3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用 4．通过芦丁的结构检识，熟悉它的主要性质、检识方法和含量测定。[实验内容] 1、芦丁的提取方法：碱提取酸沉淀法 1.1、原料与试剂 槐米（100g），石灰水（硼砂缓冲液饱和），亚硫酸钠，盐酸，op-10，水。 1.2、仪器
芦丁的提取分离和鉴别 槐花米系豆科槐属植物槐树（Sophora japonica L）的花蕾。味苦性凉，入肝、大肠经。具有清热凉血、止血的功效，常用于治疗便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血和赤血下痢等，常炒炭应用。槐花米主要化学成分为芦丁（芸香甙），具有维生素P样作用，可降低毛细血管脆性、调解其渗透性。临床用于防治高血压脑病、视网膜出血和慢性气管炎等。芦丁羟基化衍生物曲克芦丁能抑制血小板聚集，防止血栓形成的作用，同时能对抗内源性血管损伤，增加毛细血管抵抗力，降低其脆性，防止水肿，对急性缺血性脑损伤有显著保护作用，临床用作抗血小板药物。 一、实验目的： 1．掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法； 2．掌握黄酮类成分的主要性质及鉴别方法。 二、仪器与试药 （一）仪器 SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器 圆底烧瓶（250mL） ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）（二）试药 槐花米粗粉硼砂氧化钙乙醇盐酸浓硫酸硅胶 CMC-Na 镁粉 α-萘酚甲醇乙酸乙酯脱脂棉三氯化铝试液芦丁和槲皮素对照品 甲酸丙酮 三、主要成分的结构与性质：
* 皂苷（Saponin ），粗品为白色粉末，mp 210～220℃，易溶于吡啶，能溶于200倍的甲醇中， 酸水解得上述两种苷元及糖。糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。 R=H 槲皮素 R=–glu –rha 芦丁 白桦脂醇 槐花二醇 四、实验原理： 1．芦丁分子结构中含有酚羟基，具有弱酸性，能与碱反应生成盐而溶于水，此盐加酸酸化，又析出芦丁，利用此性质进行提取。并可利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差悬殊，用水重结晶。 2．芦丁在酸性溶液中可被水解，生成槲皮素和糖。 五、实验内容 O O RO OH OH O H O H O H CH 2OH O H OH
实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定 槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L．）的未开放花蕾。味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。 槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁具有Vitp样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。 [目的要求] 1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握槲皮素的制备原理及操作。 3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用 4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
[实验原理] 芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。 +鼠李糖+葡萄糖 芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进
实验一 芦丁的提取、精制与鉴定 一、实验目的与要求 l 、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法； 2、掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷，苷元和糖部分的鉴定方法。 R=-glu-rha 芦丁 R=H 槲皮素 芦丁溶解度：冷水1：8000 热水1：200 冷乙醇1：300 热乙醇1：30 难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。 槲皮素溶解度：冷乙醇1：650 热乙醇1：60 可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、 乙醚、氯仿和水中。 二、实验原理 本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质，用热水提取和 精制；芸香苷属于苷类化合物，可被稀酸水解成槲皮素（苷元），葡萄糖和鼠李 糖。芦丁和槲皮素通过化学反应，色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。 三、实验内容 （一）提取分离和纯化 l 、芦丁的提取： 2、精制（重结晶）： 3、芦丁的水解： O O OH OH OR OH HO
流程图如下： 槐米（20g ） 研碎，于500ml 烧杯中， 加350，250ml 水煮沸15min,10min 棉花过滤 150ml ，1%H 2SO 4 直火加热水解30min 放置 1-1.5h ，抽滤 精品芦丁 （水浴浓缩至2ml ） (二)鉴定 l 、化学检识 取芦丁和槲皮素少量，置2支试管中分别加乙醇8ml 使溶解 (1)盐酸—镁粉反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加浓 盐酸5滴，再加少量镁粉，观察颜色变化。 (2)Molish 反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加10%α —萘酚0.5ml 摇匀，倾斜试管，沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml ，静置，观察二层 溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。 (3)FeCL 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯 化铁乙醇液几滴，观察颜色变化。 (4) AlCl 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯 化铝乙醇液几滴，先置可见光下观察后，置紫外灯下观察颜色变化。
槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定 一、实验目的 1．掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。 2．掌握重结晶及过滤等基本操作。 3．学习芦丁及槲（hū）皮素的鉴定方法。 二、实验原理 芦丁（Rutin）亦称芸香苷，广泛存在于植物组织中，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，槐米中含量高达12~16％，是提取芦丁的最佳原料。芦丁有减少毛细血管通透性的作用，临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。近年来，芦丁及槲皮素作为抗癌药物的研究，取得了大量成果。芦丁属黄酮苷，其结构如下： 芦丁为淡黄色针状结晶，含有三分子结晶水（C27H36O16· 3 H2O），熔点为177～178 ℃，无水物熔点为190~192 ℃，难溶于冷水，微溶于冷乙醇，可溶于热水和热乙醇中。此外，还难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱性溶液中呈黄色，酸化后又析出。本实验利用芦丁在冷热水和冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。 芦丁在不同溶剂中的溶液度：
芦丁的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259mm，266nm sh，299nm sh，359nm。 槲皮素（Quercetin）是芦丁水解得到的黄酮苷元，是芦丁药用功能的主要部分，大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。 槲皮素为黄色结晶，含两分子结晶水（C15H10O7·2 H2O），熔点 313~314 ℃，无水物熔点为316 ℃。可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。在沸腾的无水乙醇中溶解度为 4.4 ，在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。槲皮素的结构式如下： 槲皮素的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259nm，266nm，299nm ， 359nm。 三、实验步骤 （一）芦丁的提取 取15 g槐米研成粉状，置烧杯中，加水300 mL，煮沸30分钟（注意适量加水，补充蒸发损失），趁热过滤，滤渣再提取两次（每次用水250 mL，煮沸15分钟），过滤，合并滤液，放置24小时，使沉淀完全析出。过滤，粗产物用少量水洗涤，得芦丁粗品，烘干，称重，计算提取率。
槐米中芦丁的提取、纯化和鉴定 摘要:芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。 关键词:芦丁提取纯化鉴定 Ａbsｔract: ruｔin ａs flaｖoｎoｉd gｌyｃosiｄｅｓ,witｈｐｈe ｎｏlic hydｒoｘyl groｕｐs in mｏｌeculeｓ, acid，soｌuｂle in ｄiluｔe ｌｙe，ｐrecipｉtateｄｉn theａcid，canｕse tｈe ｐｒｏｐeｒｔiｅs oｆeｘtraｃtion and separａｔiｏn. Solubｌe ｒｕtｉｎｕsing hｏt waｔｅr, hｏt etｈａｎol and difｆicuｌｔｔo soｌuble ｉn ｃｏlｄwａter, cold etｈａｎｏｌnatuｒｅｏｆseleｃting recｒｙsｔalｌiｚation meｔhod fｏｒrefiｎiｎｇ．Ｒutin ｑｕercｅtin ｃan bｅgeneｒａtｅd ｂy dilｕte ａcｉd hydrｏlysiｓaｎd the gｌucose,rhamnoｓe, ｉn accordａnｃｅwith the ｐrepａration ｏf queｒcｅtin. Bｙｐａper cｈromatoｇｒaphy and ｕｌtraｖiolet sｐｅctroｓcopy identifｉｃation ｏf fｌａvonoｉｄs ａnd suｇaｒ. Keｙwｏrds：identificａtiｏn of ｒutiｎextrａctioｎａnd purification 二)实验的基本原理 １.芦丁的提取原理 利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质,可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出(碱溶酸沉法)。也可利用芦丁在冷水中溶解度小,在热水中溶解度大的性质进行提取。 2. 芦丁的分离原理 利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大,以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。
槐米中芦丁的提取、纯化和鉴定 摘要：芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。 关键词：芦丁提取纯化鉴定 Abstract: rutin as flavonoid glycosides, with phenolic hydroxyl groups in molecules, acid, soluble in dilute lye, precipitated in the acid, can use the properties of extraction and separation. Soluble rutin using hot water, hot ethanol and difficult to soluble in cold water, cold ethanol nature of selecting recrystallization method for refining. Rutin quercetin can be generated by dilute acid hydrolysis and the glucose, rhamnose, in accordance with the preparation of quercetin. By paper chromatography and ultraviolet spectroscopy identification of flavonoids and sugar. Keywords: identification of rutin extraction and purification 二）实验的基本原理 1.芦丁的提取原理 利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。 2. 芦丁的分离原理 利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。 3芦丁的鉴定原理 （1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。