水貂肠炎细小病毒分子流行病学研究
闫喜军1，张海玲1，陈
涛2，柴秀丽1，赵建军1，罗国良1，吴
威3，王凤雪1，邵西群1
(1.中国农业科学院特产研究所，吉林吉林132109；2.吉林农业大学，吉林长春130118；
3.吉林中特生物技术有限责任公司，吉林吉林132109)
摘要：对国内分离的9株水貂肠炎细小病毒结构蛋白2基因进行扩增，获得了全长1755bp 的基因序
列，其编码584个氨基酸；应用DNAStar 分析软件对9株MEV 与7株MEV 参考毒株的核苷酸和氨基酸进行同源性分析表明，不同时间和地域分离毒株VP2基因核苷酸同源性为98.7%～99.9%，氨基酸同源性为97.4%～99.7%，说明国内外分离的MEV 的
2基因遗传变异率较低；系统发生树分析表明国内分离的8株MEV(包
括疫苗株)属于同一个组群；16株MEV 氨基酸进化分析表明，MEV 第80、93、103、323、564、568位的6个关键氨基酸相对保守，并发现国内外分离株在第300位氨基酸存在差异。
关键词：水貂肠炎细小病毒；分子流行病学；
2基因
基金项目：科研院所社会公益研究专项(2005DIB4J048)
作者简介：闫喜军(1970～)，男，吉林大安人，博士，研究员，主要从事野生动物传染病研究.
水貂病毒性肠炎(Mink virus enteritis ，MVE)是由水貂肠炎细小病毒(MEV)引起水貂的一种急性、烈性和高度接触性传染病，主要以剧烈腹泻为主要特征。1949年加拿大学者首次发现该病[1]，之后在美国、丹麦等水貂养殖国家发生。我国1981年首次报道了水貂病毒性肠炎[2]，目前该病在我国广泛流
行，给养貂业带来巨大的经济损失[3，4]
。吴威等[5]用
单克隆抗体对国内分离的水貂肠炎细小病毒进行系统分型，确定我国水貂肠炎细小病毒流行型为B 型。
水貂肠炎细小病VP2蛋白是该病毒的主要结构蛋白，病毒的主要抗原位点在VP2蛋白上，VP2几个碱基和氨基酸的改变就会影响病毒的生物学特
征[6，7]。本研究在前期研究工作基础上[8]对近几年国
内分离的水貂肠炎细小病毒2基因进行克隆和序
列分析，并与上世纪八十年代分离毒株和国外分离毒株的核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性比较分析，为水貂肠炎细小病毒分子流行病学调查和水貂病毒性肠炎的防治提供理论依据。
1
材料和方法
水貂肠炎细小病毒分离株MEV/
SD02/06、MEV/SD06/07、MEV/SD13/07、MEV/
SD22/07、MEV/SD27/07、MEV/DL05/07、MEV/DL08/07共7株，为2006年～2007年中国农业科学院特产研究所人兽共患病研究室由山东省和辽宁省大连地区发病水貂肠内容物中分离获得；SMPV-11株和MEV Vaccine 株(疫苗生产毒种MEVB 株)为1985年～1986年中国农业科学院特产研究所分离、鉴定和保
存。
参照GenBank 中水貂肠炎
细小病毒全基因序列，利用Primer Premier5.0软件设计一对特异性引物，扩增包含MEV VP2基因序列的目的片段，片段长度为2023bp ，引物上游：5'-GCCGGTGCAGGACAAGTAAAAAGAG-3'，下游：5'-CAACCACCCACACCATAACAACATAC-3'，引物由上海英骏生物技术有限公司合成
。
取水
貂肠炎细小病毒分别接种CRFK 细胞，37℃培养，待细胞病变达70%以上收获病毒培养物，-20℃/室温冻融两次；取病毒培养物，按照TIANamp 提取试剂盒说明提取病毒基因组DNA 作为PCR 反应的模板，-20℃保存
备用
取5μL 上清溶液作为模版，依次
加入10倍PCR buffer 5μL ，2.5mmol/L dNTP 4μL ，上下游引物各1μL ，Ex
DNA Polymerase 1μL ，
加水补足50μL并混匀。PCR扩增条件为：95℃5min，94℃45s，52℃30s，72℃50s，34个循环，72℃延伸6min。取5μL PCR产物，在1%琼脂糖凝胶上进行电泳，观察产物扩增效果和片段大小
。
PCR产物分别经低溶
点胶回收纯化后，将回收产物克隆到pMD18-T载体
中，转化DH5α大肠杆菌感受态细胞，挑取白色菌
落进行增菌培养，小剂量提取质粒进行酶切鉴定
。
将PCR鉴定和酶切
鉴定正确的重组质粒送交上海英骏生物技术有限公
司进行序列测定。用DNAStar生物软件对各株水貂
肠炎细小病毒2基因序列与国外发表的水貂肠炎
细小病毒2基因序列和推导的氨基酸序列进行同
源性分析，并构建系统发生树。
2结
果
对分离
的9株水貂肠炎细小病毒2基因进行克隆和鉴定，
序列分析结果表明，9株细小病毒2全基因序列
长度均为1755bp，编码584的氨基酸。SMPV-11
和MEV vaccine株2基因序列登录号分别为
EF428258和EU137663
。
将9株病毒2全基因序列与GenBank
中MEV antigenic type2(M24001)、MEV-Ⅰ(M23999)、
MEV-d(U22190)、MEV-e(U22191)、Abashiri
(D00765)、Rodniki-Biocentr(AY665657)、Beregovoj-
Biocentr(AY665656)共7个已知参考毒株核苷酸和
氨基酸序列进行同源性比较分析，由图1可以看
出，分离于不同时间和地域的水貂肠炎细小病毒
2基因具有很高的同源性。来源于国内不同时间
分离毒株2基因核苷酸同源性为98.7%～99.9%，
氨基酸同源性为97.4%～99.7%；8个分离株与目
前国内使用的疫苗生产毒株核苷酸同源性为99.0%
～99.7%，氨基酸同源性为97.9%～99.1%，说明
目前国内流行的水貂肠炎细小病毒2基因相对保
守，遗传变异率较低。
与不同国家分离株比较分析结果表明，其核苷
酸同源性为98.9%～99.5%，氨基酸同源性为97.9%
～99.7%，具有很高的同源性
。
用
DNAStar软件对16株水貂肠炎细小病毒2基因绘
制了系统进化树(图2)，根据系统进化树将MEV分
为两个组群：组群Ⅰ以SMPV-11株为代表，包括除
MEV/SD02/06株外所有的国内分离株以及MEV
antigenic type2和MEV I两个美国分离株；组群Ⅱ以
MEV Abashiri株为代表，包括美国、俄罗斯和日本
分离株以及国内MEV/SD02/06株。其中组群Ⅰ中10
株分离株又分为4个亚群，2007年6个分离株属于
第1、3亚群，疫苗株MEV vaccine属于该组群第2
亚群
。
通过对国内9株水貂肠炎细小病毒与7个参考
毒株VP2蛋白16个关键氨基酸进行比较分析表明，
水貂肠炎细小病毒VP2的第80、93、103、323、
564、568位氨基酸是决定宿主范围的关键氨基酸，
相对比较保守；不同分离株主要在第5、232、234、
236、300、377、411、426位氨基酸发生了替换，
MEV/SD06/07、MEV/SD13/07、MEV/SD22/07、MEV/
SD27/07株在第5位发生A→T替换、第236位发生
S→T替换、第377位发生R→K替换、第426位发
生N→K替换，四株病毒第300位发生了V→I的
转
图116株MEV的2基因核苷酸和氨基酸同源性
比较分析
图216株MEV的系统进化
树
MEV/SD06/07
MEV/SD13/07
MEV/SD27/07
MEV/SD22/07
MEV/SMPV-Ⅱ(EF428258)
MEV Vaccine(EU137663)
MEV/DL05/07
MEV-DL08/07
MEV antigenic type2(M24001)
MEV-I(M23999)
MEV-d(U22190)
MEV Abashiri(D00765)
MEV-e(U22191)
MEV Rodniki-Biocentr(AY665657)
MEV eregovoj-Biocentr(AY665656)
MEV/SD02/06
0.9
Nucleotide Substitutions(×100)
换。此外与国内其他毒株比较，MEV/SD02/06株在第232位发生V→I替换、第411位发生E→A替换；MEV/DL05/07和MEV/DL08/07在第234位发生H→Y的替换，见表1。
表19株病毒与Genbank中已知毒株的关键氨基酸比较
结果毒株
Stains
MEV/SD02/06
MEV/SD06/07
MEV/SD13/07
MEV/SD22/07
MEV/SD27/07
MEV/DL05/07
MEV/DL08/07
SMPV-11
MEV vaccine MEV antigenic type2
MEV-d
MEV-e
MEV Rodniki-Biocentr
MEV Abashiri
MEV-Ⅰ
MEV Beregovoj-Biocentr 5
A
T
T
T
T
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
80
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
93
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
103
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
232
I
V
V
V
V
V
V
V
V
V
I
I
V
I
V
V
234
H
H
H
H
H
Y
Y
H
H
Y
H
H
H
H
Y
H
236
T
S
S
S
S
T
T
S
S
T
T
T
T
T
T
T
297
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
S
300
V
I
I
I
I
V
V
V
V
A
A
A
L
A
A
L
305
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
323
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
377
R
K
K
K
K
R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
411
A
E
E
E
E
E
E
E
E
E
A
E
A
A
E
A
426
N
K
K
K
K
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
546
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
568
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
关键氨基酸位置(The sites of key amino acids)
3讨论
3.1通过对水貂肠炎细小病毒国内分离株与国外分离株2基因同源性分析表明，不同时间和地域分离毒株2基因核苷酸同源性为98.7%～99.9%，氨基酸同源性为97.4%～99.7%，说明国内外分离的水貂肠炎细小病毒2基因遗传变异率较低；8个分离株与目前国内使用的疫苗生产毒株MEV vaccine株核苷酸同源性为99.0%～99.7%，氨基酸同源性为97.9%～99.1%；尤其通过基因进化树分析结果表明，国内大部分分离株与疫苗生产毒株属于同一个组群，说明分离驯化于二十年前的疫苗毒株仍适用于目前水貂病毒性肠炎的防制。
3.2肉食动物细小病毒的主要抗原位点在VP2蛋白上，VP2上几个碱基和氨基酸的改变就会影响抗原特征和宿主范围[7，9，10]，研究表明肉食动物细小病毒的宿主差异由第80、93、103、323、564、568位的6个氨基酸不同引起的，其中93N、103A、323N 对犬细小病毒能在犬体内繁殖是关键的，而80K、564N、568A对细小病毒能在水貂和猫体内繁殖是关键的，通过16株MEV氨基酸序列比较分析，6个关键氨基酸是保守的。同时发现国内外分离株在第300位氨基酸存在差异，国内分离株为V或I，国外分离株为A或L。尤其值得注意的是MEV/ SD06/07、MEV/SD13/07、MEV/SD22/07、MEV/ SD27/07株四个分离株在第5位、第236位、第377位、第426位与其他毒株比较发生一致性的替换，并在第300位与国外分离株发生了V→I的转换，这些变异对毒株生物学特性的影响需要进一步探讨。
参考文献：(略)
今天来和大家聊一聊一种非常经典的疾病，“细小病毒”很经典也很致命； 细小病毒是什么？ 细小病毒在分类上属细小病毒科（Parvovirdae），细小病毒属（Parvovirus）。病毒粒子呈圆形，直径为21-24nm，呈二十面体立体对称，无囊膜，病毒核衣壳由32个长为3-4nm的壳粒组成。病毒基因组为单股线状DNA。 细小病毒在抗原上与猫泛白细胞减少症病毒（FPV）和水貂肠炎病毒（MEV）密切相关。细小病毒对多种理化因素和常用消毒剂具有较强的抵抗力。在4-10℃存活180天，37℃存活14天，56℃存活24h，80℃存活15min。在室温下保存90天感染性仅轻度下降，在粪便中可存活数月至数年。甲醛，次氯酸钠，丙内酯，羟胺，氧化剂和紫外线均可将其灭活。犬感染细小病毒发病急，死亡率高，常呈暴发性流行。不同年龄、性别、品种的犬均可感染，但以刚断奶至90日龄的犬较多发，病情也较严重，尤其是新生幼犬，有时呈现非化脓性心肌炎而突然死亡。纯种犬比杂种犬和土种犬易感性高，病犬是主要的传染来源。 细小病毒怎么来的？ 细小病毒于1928年首次在猫体内检测到抗原（FPV），1967年在健康犬只身上检测出CPV-1，FPV与1978年犬细小病毒（CPV-2）有密切相关性，推测犬细小病毒是猫细小病毒在犬体内的变种，但CPV-2，只感染犬、不感染猫； 病毒随时间也开始慢慢变异1979—1981发现CPV-2a，1982年发现CPV-2b，2006年发现CPV-2c 以上提到的犬细小病毒的亚型（2a、2b、2c）均可感染猫； 细小病毒会怎样？ 本病一年四季均可发生,以每年的冬、春季节发病率最高,是一种急性、致死性传染病，暂无特效疗法，病死率高达10～50%。犬是本病的自然宿主，各种年龄的犬和不同性别的犬均易感染。纯种犬及2～4月龄幼犬易感性最强，病死率也最高。3-4周龄犬感染后呈急性致死性心肌炎的最多，8-10周龄则以肠炎为主。本病主要由直接和间接接触而传染。感染犬和康复犬带毒犬是传染源病犬从粪便尿液和呕吐物中排毒，而康复犬可能从粪便尿液中长期排毒污染周围环境,一般认为传染途径主要是消化道。同时当天气寒冷、温度骤变、饲养密度大、卫生水平差、和并发感染，可加重病情和增加病死率18-19%。 临床症状 1 、肠道病变： 1）精神沉郁、厌食、呕吐、喜睡 2）发烧（40℃—41℃） 3）初期腹泻物呈灰色或黄灰色，直至带有血丝，甚至出现大量血性腹泻（呈番茄汁样） 4）出现胃肠道症状24~48h后开始出现脱水，体重减轻 5）白细胞数目减少 6）本病不分年龄，均可感染，主要感染幼犬，潜伏期7-14天 7）如果动物顺速衰竭，可在24~48h内死亡 8）骨髓抑制 2、心肌病变： 1）多发于90日龄以内幼犬 2）发现犬先天性心衰症状 上病例 病例Ⅰ 基本资料：腊肠犬，雄性，8月龄 主诉：就诊两天前拉稀便，最近两天有多次呕吐，但没有大便，精神变差，不食，做过两针疫苗，从未做过驱虫，昨天在其他医院做的CBC都正常，按照胃肠炎治疗一天无效遂转院； 就诊时症状：精神沉郁，流涎但量不多，触诊腹部无明显异常，T：37.5℃（体表）心律，呼吸正常BW：6KG；实验室检查：采血进行CBC检查，采集粪便、唾液等使用韩国安捷Anigen Rapid CPV/CCV Ag Test Kit与Anigen Rapid CDV Ag Test Kit
水貂等非食用动物检疫规程（试行） 1. 适用范围 本规程规定了水貂、银狐、北极狐、貉等非食用动物检疫的对象、合格标准、检疫程序、检疫结果处理和检疫记录。 本规程适用于中华人民共和国境内人工饲养的水貂、银狐、北极狐、貉及其皮张的检疫。 2. 检疫对象 犬瘟热、细小病毒性肠炎、狂犬病、狐狸脑炎、传染性肝炎、炭疽、水貂阿留申病、伪狂犬病。 3. 检疫合格标准 3.1 动物检疫合格标准 3.1.1来自未发生相关动物疫情的区域。 3.1.2 养殖档案相关记录符合规定。 3.1.3 临床检查健康。 3.1.4本规程规定需进行实验室疫病检测的，检测结果合格。 3.2皮张检疫合格标准 3.2.1皮张按有关规定消毒。 3.2.2本规程规定需进行实验室疫病检测的，检测结果合格。 4. 检疫程序
4.1 申报受理。动物卫生监督机构在接到检疫申报后，根据当地相关动物疫情情况，决定是否予以受理。受理的，应当及时派出官方兽医到现场或到指定地点实施检疫；不予受理的，应说明理由。 4.2 查验资料 4.2.1查验动物有关资料 4.2.1.1 官方兽医应查验饲养场《动物防疫条件合格证》和养殖档案，了解生产、免疫、监测、诊疗、消毒、无害化处理等情况，确认饲养场6个月内未发生相关动物疫病。 4.2.1.2 官方兽医应了解散养户养殖情况，确认动物6个月内未发生相关动物疫病。 4.2.2查验皮张有关资料：主要查验皮张的消毒记录。 4.3 临床检查 4.3.1 检查方法 4.3.1.1 群体检查 从静态、动态和食态等方面进行检查。主要检查动物群体精神状况、外貌、呼吸状态、运动状态、饮水饮食情况及排泄物状态等。 4.3.1.2 个体检查 通过视诊和触诊等方法进行检查。主要检查动物个体精神状况、体温、呼吸、皮肤、被毛、可视黏膜、胸腹部及体表淋巴结，排泄动作及排泄物性状等。 4.3.2 检查内容 4.3.2.1出现体温升高，呈间歇性；有流泪、眼结膜发红、眼分泌物液状或粘脓性；鼻镜发干，浆液性鼻液或脓性鼻液；病畜有干咳或湿咳，呼吸困难。脚
一例犬细小病毒的病例 犬细小病毒属主要对犬类感染性强，尤其是抵抗力较弱的幼犬，一旦发病死亡率比?^高。主要传染源为犬类的粪便、尿液以及呕吐物，这其中又以粪便为甚。症状分为出血性肠炎型及心肌炎型。出血性肠炎型一般常发生在犬子刚换环境后，潜伏期3～5天，患病后初期病犬厌食、精神不振、偶见发热伴随轻度呕吐，随后呕吐频繁、剧烈腹泻、呕吐物从食物到胃液，甚至有胆汁，呈顽固性呕吐；造成体液大量散失和不食；腹泻则从正常腹便变成水泻，病重时甚至从肛门喷出带有血的粪便，恶臭味非常重。病犬迅速脱水、消瘦、毛色暗淡、毛型凌乱、四肢冰凉，再往后不及时诊疗犬往往死亡，病程一般不超过1周。心肌炎症型多见于4～6周幼犬，通常没有先兆性，或仅表现轻微腹泻，继而突然衰弱、呻吟、黏膜发绀、呼吸极度困难、脉搏快而弱，对心脏听诊常见杂音，尸体剖检可见心脏扩张，心肌有苍白条纹，几天内死亡，也有的幼犬仅见轻度腹泻后即死亡。 2017年12月，蒙自市的一对夫妇带着一只金毛犬来诊，该犬10公斤，性别：母，年龄：4个月。主人叙述，该犬已有5天没有进食，又吐又泻，拉出大便成番茄汁样。该犬体态极度消瘦，四肢冰凉，乏力体温39.6℃，眼神呆滞，鼻镜
发干，黏膜苍白，严重贫血，严重脱水，在检查时又吐出带血的黄绿色黏液，用细小病毒试纸测试显示为阳性，诊断结果为细小病毒性肠炎。 对症治疗，大量补液，抗病毒，止血，止吐，消炎，补充营养，注射犬用免疫球蛋白，让主人对犬舍环境进行消毒。抗病毒，犬细小病毒单克隆抗体按2毫升/公斤体重皮下注射，每24小时1次。犬免疫球蛋白5毫升/次皮下注射，每天1次。补充营养，50%葡萄糖20毫升，维生素C2毫升（0.5克），静脉注射，每天2次。止吐，维生素B60.2克，静脉注射，每天2次。止血，止血敏4毫升/次，每天3次，2次静脉注射，1次肌肉注射。消炎，头孢曲松钠100毫克/公斤体重静脉注射，每天1次。经过1天治疗，第2天病犬眼神略有好转，呕吐物里的带血量也有所减少，呕吐次数也有所减少。治疗4天后，病犬能自己走动，不吐不泻，并且有吃食欲望，少喂一点糊状食物；治疗6天后痊愈，间隔2周后打防疫针，已恢复正常。 犬细小病毒病发病急、死亡快，如果治疗不及时死亡率极高，在治疗过程中一定要注意补充营养，悉心照料，可使治愈率明显提高。病犬刚刚恢复食欲时，不能一次喂得太多，否则肠胃难以适应又会导致呕吐，引起病情复发，少量多餐，喂糊状温热食物2天后，恢复正常饮食。
狗狗细小病毒拉稀肠粘膜都脱落了吃什么好？ 常在论坛看到小狗拉稀便血的帖子，很多人自然会想到细小，其实是多种因素引发小狗稀便，总体说4种情况可以概括。 狗狗细小 1，食量不规律，很多小狗是吃7分饱，对于初生的狗狗，如果饲主在饮食上控制不合格，很有可能出现呕吐，腹泻的情况，在这个时候，如果饲主没有引起一定的重视，病情继续恶化下去，甚至引起翻肠子，也就是我们所说的细小病毒，还有一种就是换环境后暴饮暴食患肠炎引起，从而导致细小病毒的发生。 2，改变生活环境对狗狗影响很大，一般不太严重的症状就是人们常说的应激反应，对于部分体质较弱的幼犬来说，它们自身的免疫力一般都不高，在这个时候，如果外界环境的突然改变，导致自身免疫力下降，就给予了疾病，病菌的可乘之机。 3，驱虫不到位，肠道寄生虫引发，体内寄生虫对于幼犬的危害大于成犬，在狗狗年幼的时候，由于没有驱虫，体内寄生虫过多多引发肠胃型肠炎，如果没有得到有效的控制，会转变为犬细小病毒。 4，病毒性肠炎，也就是细小，冠状引起。 以上123条中任何一条都会诱发细小，即从细菌性肠炎转化为病毒性肠炎，饲养狗狗过程中主人一定要注意到这些问题所在！ 不管是哪种原因导致的狗狗细小病毒都是一样的结果，当发现细小病毒应立即进行隔离饲养。防止病犬和病犬饲养人员与健康犬接触，对犬舍及场地用2%火碱水或10-20%漂白粉等反复消毒。要特别提醒的是，如果您家曾有发生此病的小狗，即使环境已经消毒，也千万不要再把没有打过全部疫苗的其他小狗带回家，否则很快就会传染发病。 细小狗狗拉稀拉出肠粘膜怎么办?
犬细小病毒恢复周期长，狗狗精神萎靡不振，拉稀是典型的症状，当狗狗病情最严重时可能会将肠粘膜拉出来，这让很多主人不知道如何才好，对于这种情况，多数医师都会建议使用一款宠儿香的肠乐宝，肠乐宝在普通益生菌的基础上多了粘膜修护的作用，临床上多用于细小病毒或者肠粘膜受损后的恢复期，用于帮助宠物恢复肠胃功能。 附：肠乐宝说明书 肠乐宝是由肠道粘膜营养剂、粘膜修复和促生长因子、高效益生菌组合而成的新型肠道调理制剂，能修复被损伤的肠道粘膜，增加粘膜同上皮细胞的链接强度；恢复粘膜对水、盐分、营养物质的转运功能；为益生菌提供更有效的定植位点，形成菌膜屏障。 产品采用现代生物高技术制造，有益菌的活性在常温条件下可长期保存。经多年研究和临床应用，产品具有更好的肠道菌群调节作用，可提高消化功能、抑制应激反应、控制腹泻、缓解便秘、解毒和除臭。 【功能作用】 （1）促进肠道细胞氨基己糖、粘蛋白的生物合成，提高粘膜的保水与粘附作用，有利于益生菌定植； （2）修复上皮细胞损伤，促进细胞再生，巩固肠粘膜基础，充分发挥肠道的免疫屏障和菌膜屏障作用； （3）抑制致病菌生长繁殖，避免肠道病态反应，防治细菌性肠炎； （4）促进多种消化酶类的产生，有利于食物的消化；保持肠道正常的酸碱环境，有利于营养物质的吸收；产生B族维生素，平衡营养； （5）分解、转化、利用代谢产生的有害物质，减少其在体内的积累，保护肝脏；降低粪便中氨、氮浓度，减少排泄物的臭气； （6）刺激肠道粘膜细胞产生多种免疫因子，促进肠道分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的分泌，
水貂病毒性肠炎 1发病特征 水貂病毒性肠炎，又称水貂泛白细胞减少症，水貂传染性肠炎，貂细小病毒性肠炎。以胃肠粘膜炎症、出血、坏死所致持续性剧烈腹泻，粪便中含灰白色管状物及白细胞显著减少为特征。本病是水貂的一种急性、高度接触性传染病，病貂多以死亡告终，尤以幼龄水貂的发病率和死亡率更高，是世界公认的对养貂业具重大危害的病毒性传染病之一。 2病原 细小病毒科、细小病毒属的水貂肠炎病毒(MEV)单股DNA；耐热性较强，56℃100min、80℃30min不失活；含病毒的粪便在土壤中达1年以上，毒力不减弱；对乙醚、氯仿、胆汁等不敏感；0.5％福尔马林、20％漂白粉溶液作用24小时方可灭活；MEV能在4℃条件下凝集猪和猴的RBC，并能被水貂的特异性抗血清所抑制；病毒可在猫肾细胞系(CRFK)、猫肾细胞株(FKC)、水貂肾、脾、心肌细胞株上增殖，CPE不明显；但在CRFK及FKC上增殖可形成核内大型包涵体。 3流行病学 3.1易感动物：水貂，不同品种、年龄、性别的水貂都易感，以幼貂，特别是刚断乳的仔貂最易感，发病率和死亡率都较成年水貂高。MEV虽能使猫、犬、貉发病，但却难在猫、犬、貉体传代，未见MEV感染人的报道。 3.2传染源：患病水貂和患泛白血球症的猫是主要传染源，耐过病毒性肠炎的水貂一年内由粪便内排毒。 3.3传播途径：本病可经交配、嘶咬等直接传播，又可经被病原污染的饲料、饮水及易感水貂所能接触的所有物品而间接传播，还可经苍蝇、鼠类、乌鸦等媒介传播。 3.4流行特点：我国于1983～1984年开始大规模暴发流行，病原是随国外购入种貂、检疫不当携入的本病。秋季多发，但我国南方6～7月多发，一旦发病，如不采取有效综合防制措施，会引起地方性、周期性流行（常在第二年仔貂断乳分窝前后再次发生）。发病率：幼貂50～60％、成貂20～30％，最高达83.4％，幼貂死亡率可达90％。 4临床症状 4.1病程：潜伏期4～9d，多在4～5d，人工感染，最急性型为24h以内死亡，急性型感染多在7～14d死亡，亚急性型多在14～18d死亡，病初精神沉郁，食欲下降或废绝，渴欲明
支持项目：山东省特种经济动物产业技术体系创新团队项目（SDAIT-21-17） 作者简介：刘长浩，男，硕士研究生，齐鲁动物保健品有限公司技术服务部毛皮技术总监；2010年至今一直从事于毛皮动物2017年国内水貂疾病检测分析 刘长浩 赵远 张小能* 齐鲁动物保健品有限公司 支持项目：山东省特种经济动物产业技术体系创新团队项目（SDAIT-21-17） 一、前言 近几年我国水貂市场行情低位徘徊，利润趋于稳定，市场对优质皮张的需求倒逼养殖业进行品种的改良换代以提升貂皮品质，养殖同仁忙于种群选育和品种改良的同时，水貂养殖过程中也出现了新的变化，尤其在以营养和管理为代表的生产因素还未细致掌握的前提下，水貂的疫病也发生了变化。正确把握疾病的发生发展规律，才能避免在养殖过程中发生各式疾病，使养貂业健康可持续发展，产出更多优质皮张。 二、检测概况及分析 2017年齐鲁动物保健品有限公司研发检测中心共计接诊234例水貂病例，主要来自山东、河北、辽宁、江苏、河南等地，病料来源以养殖场/户为主；其中病毒性案例67例，非病毒性案例168例，非病毒性案例中消化道病例87例，呼吸道病例62例，神经系统案例25例，生殖系统案例2例，皮肤病1例。 图一.水貂不同类型疾病检测概况
图二.每月水貂不同类型疾病检测情况 就每个月检测情况来看（图二），消化道疾病的案例在每个月均有检出，5~9月份为检测高峰时段，最高时每月检测16份；呼吸道疾病检测具有明显的季节特性，主要集中在7~9月份，最多时每月检测30份；病毒性疾病2月份开始有检出，6月份检出14份；生殖系统疾病集中检出在4~5月份，每月1~2份；皮肤病在9~10月份有检出，每月1~3份。 图三.水貂病毒性病原检测情况 2.1病毒性病原检测概况及分析 2017年水貂病例中主要的病原主要是以病毒性脑炎、阿留申病、犬瘟热、病毒性肠炎为主，以病毒性脑炎检出率最高（37%）。（见图三）
水貂卡他性肠炎的诊治 水貂卡他性肠炎是水貂胃肠黏膜的一种表面炎症，主要表现为胃肠分泌运动机能紊乱，黏膜渗出和黏膜上皮细胞变性。由于食物通过胃肠异常发酵变酸产生有毒物质，这些产物刺激胃肠黏膜，呈现毒害作用引起水貂拒食和呕吐。本病呈慢性经过，但不出现腹泻症状，易误诊为其他疾病而影响治疗，最后导致死亡。 1.病因 （1）饲料配比不当，谷物和蔬菜给量过大，或饲料转换突然。 （2）饲喂食物过量或喂零食，胃内容物异常增多，机械的障碍引起胃肠运动，胃肠机能不适应。 （3）气候突变，饲料酸败发霉，卫生条件不良。 （4）慢性胃肠消化不良延续，或由损害黏膜的细菌、病毒、寄生虫和其些传染病引起。 2.症状 病初食欲不好经常剩食，不愿活动但行动灵活，反应敏锐，大小便无异常变化，不腹泻，易被忽略。后期拒食，不出小室，鼻干燥，体温升高，腹部卷缩，
口干舌燥，口色发白，舌有白苔，打呵欠，个别出现呕吐，只饮不食，弓腰腹痛，双眼半闭无神，排出白色蛋清或黄色黏稠冻样棒状形的粪便，出现神经症状，体温下降，昏迷而死。 3.剖检 尸僵完整，口腔黏膜苍白，皮下没有脂肪，胃肠空虚，个别直肠内有少量煤焦油状黏稠粪便。胃肠黏膜增厚有褶皱，有点状或条状出血、黏膜溶解和脱落，有的在胃底和幽门部出现不规整的溃疡。肝、脾微肿或萎缩；肺呈淡黄色。 4.治疗 （1）小诺霉素或庆大霉素注射液+穿心莲注射液+复合维生素B注射液+ 胃复安注射液和维生素B12注射液混合肌肉注射，每日1～2次。 （2）穿心莲+胃复安片+多酶片混合内服，或拌饲料喂服，每日 2 次。 （3）仙人掌50克加水500毫升煮15分钟，加适量白糖溶解，让貂自饮，数量不限。
兽类学报，2015，35（1）：102－109Acta Theriologica Sinica 基金项目：科技基础性工作专项：畜禽重要疫病流行病学调查（2012FY111000）；公益性行业（农业）科研专项：宠物疫病快速诊断 与疫苗研究与示范（201303042）；山东省农业重大应用技术创新项目：水貂犬瘟热、细小病毒防制技术研究 作者简介：于永乐（1988－），男，硕士研究生，主要从事动物传染病防治与生物制品学研究.收稿日期：2014－06－11； 修回日期：2014－12－04 *通讯作者，Corresponding authors ，E-mail ：zhangchuanmei100@https://www.doczj.com/doc/3215575693.html, ；shanhu67@https://www.doczj.com/doc/3215575693.html, 水貂肠炎病毒SYBＲGreen I 荧光 定量PCＲ检测方法的建立 于永乐张传美 * 杨海燕杨瑞梅张洪亮单虎 * （青岛农业大学山东省预防兽医学重点实验室，青岛266109） 摘要：根据GenBank 登录的水貂肠炎病毒（MEV ）VP2蛋白基因的保守序列设计了1对特异性引物，经PCＲ扩增出146bp 的目的片段，并克隆到pMD 18－T 载体上，提取重组质粒经PCＲ及测序鉴定正确后，以10倍梯度稀释质粒作为阳性标准品，绘制荧光定量标准曲线，以此建立一种基于SYBＲGreen 荧光染料的定量PCＲ特异性检测水貂肠炎病毒的方法。结果表明：该方法对MEV 有很好的特异性，检测灵敏度为34拷贝/μL ，且重复性试验变异系数均小于2%。临床检测中，在80份样品中检测到30份阳性样品，高于普通PCＲ和电镜观察方法的检出率。该方法的建立实现了对MEV 临床早期快速诊断和定量分析，为毛皮动物MEV 的防控提供了可靠的检测方法。 关键词：水貂肠炎病毒；SYBＲGreen I ；荧光定量PCＲ中图分类号：Q16 文献标识码：A 文章编号：1000－1050（2015）01－0102－08 Development of a SYBＲGreen I real-time quantitative PCＲassay for the detection of Mink enteritis virus YU Yongle ，ZHANG Chuanmei *，YANG Haiyan ，YANG Ｒuimei ，ZHANG Hongliang ，SHAN Hu * （Shandong Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine ，Qingdao Agricultural University ，Qingdao 266109，China ） Abstract ：A quantitative PCＲassay was developed for specific and sensitive detection of mink enteritis virus.The primer pair targeting a 146bp fragment of the conserved VP2gene was selected based on alignment of viral sequences available at GenBank.The analytic sensibility of this assay was 34copies of plasmid DNA ，and it had high repeatability with CV ＜2%．The assay was evaluated by testing 80fecal samples collected from suspicious cases.The results showed that 30sam-ples were found positive for the virus infection ，which was higher than that of routine PCＲand electron microscopy.There-fore the new assay provides a useful method for the rapid diagnosis of mink enteritis and the prevention and control of the disease. Key words ：Fluorescence quantitative PCＲ；Mink enteritis virus ；SYBＲGreen I 水貂病毒性肠炎是由水貂肠炎细小病毒（Mink enteritis virus ，MEV ）引起的一种腹泻、血便等肠炎症状的烈性传染病，与水貂犬瘟热、阿留申病并称为水貂养殖业三大疫病（高云等，1984）。Schofield （1949）首次发现本病，Wills （1952）分离鉴定了病原，并命名为水貂肠炎病毒。姜廷秀等（1981）首先报道了我国发生水貂细小病毒性肠炎。目前，MEV 引起的水貂病毒性肠炎仍广泛流行，严重阻碍毛皮动物养殖业的健康 发展，特别是给水貂养殖业带来巨大的经济损失（闫喜军等，2008）。 MEV 属于细小病毒科（Parvoviridae ）细小病毒属（Parovirus ），它是目前动物病毒中形态最小、结构最简单的单链线状病毒之一（Parrish ，1994）。该病毒对外界环境变化具有极高的耐受性，在粪便中可存活数年之久，易造成貂场的持续感染。目前针对MEV 的鉴定和检测已经有许多方法，如电镜观察、血凝及血凝抑制试验、荧光抗体染色技术、
一、自咬症 1、微量元素（硒，钴，铬，镍）的缺乏是造成自咬的主要原因之一，建议补充微量元素。 2、除了微量元素缺乏,还要考虑含硫氨基酸,尤其是蛋氨酸缺乏,以及氨基酸平衡问题。建议使用毛皮大王预混合饲料。 治疗:只能对症治疗和防止继发感染 目前疗效较好的方法： 盐酸氯丙嗪25毫克，乳酸钙0.5克，复合维生素B0.1克，葡萄糖粉0.5克，适量钴，铬，镍添加剂，混合后每日2次； 地塞米松、扑尔敏、维生素E和维生素B等综合治疗的。 青霉素，维生素B1，葡萄糖酸钙 局部双氧水断掉犬齿 预防：注意日粮全价优质 发生过的不能留做种用。 二、貂狐貉为什么食毛？怎么防治？ 食毛主要是： A、由于维生素或微量元素不足或缺乏时 B、微量元素硒，钴，铜，锰和常量元素钙，磷等不足或缺乏； C、蛋白质缺乏或太高，蛋白质低于25%或高于45%都可以引起该症的发生；
D、脂肪氧化及肝脏功能紊乱均能造成的消化吸收障碍，除出现表皮角化，毛绒发脆外，也能导致食毛症的发生； E、肛门腺分泌阻塞，酸中毒，皮下蜂窝质炎等也可导致。 预防：使用毛皮大王预混合饲料和貂配合饲料。 三、仔貂成活率低 1、吃初乳 2、搞好笼舍和窝箱的卫生 要及时清除箱内剩存的饲料和粪便， 保持清洁干燥。 仔貂在单纯哺乳期间，其粪便由母貂舔食，但20天左右开始采食饲料后，母貂不再吃粪便，这是要及时清理卧内的粪便、湿草、剩饲料等污物，并及时消毒。 3、仔貂20 ~ 25日龄即开始吃食，为了便于母貂给仔貂叼送饲料，饲料应调制的稠一些。 4、仔貂生后40―45天应及时离乳分群，提早或推迟离乳对母貂和仔貂均无益处。 5、饲料要干净，无酸败，防止着凉，拉稀等 6、免疫 3周打犬瘟热，细小病毒疫苗