MS培养基配方
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ms培养基配方表ms培养基是一种常用的细胞培养基,用于无菌条件下培养哺乳动物细胞,特别是鼠胚胎成纤维细胞(Mouse Embryo Fibroblast,MEF)。
它是由多种有机和无机化合物组成的复杂混合物,可以提供细胞生长所需的必需氨基酸、糖类、维生素和微量元素等营养物质。
同时,它还包含有机缓冲剂和盐类,可以调节培养品的 pH 值和离子浓度,保持培养条件的稳定性。
下面介绍 ms培养基的配方表:MS培养基水相1. 将1L 去离子水(DI水)加入1mol/L NaCl 至5mL2. 加入HEPES缓冲液(1mol/L)27.7g,调节至pH7.2-7.43. 加入葡萄糖25.0g,混合直至葡萄糖完全溶解4. 加入 L-谷氨酸1.42g,细胞培养I 类和 II 类所需濃度5. 加入 L-苏氨酸0.07g,细胞培养所需濃度6. 加入 L-半胱氨酸0.16g7. 加入 L-赖氨酸0.07g8. 加入 L-缬氨酸0.07g9. 加入L-异亮氨酸0.07g10. 加入L-亮氨酸0.14g11. 加入L-丙氨酸0.14g12. 加入L-天冬氨酸0.15g13. 加入L-芸香氨基酸0.42g14. 加入 L-色氨酸0.03g15. 加入 L-酪氨酸0.03g16. 加入 L-精氨酸0.17g17. 加入 L-组氨酸0.03g18. 加入 L-甘氨酸0.10gMS培养基固相1. 加入 NaHCO3(7.5%)4mL,细胞培养所需濃度2. 加入 4-(2-羟乙基)吡啶盐酸盐(HEP)2g,细胞培养所需濃度;过度使用可导致凝块形成3. 加入 MgSO4(7H2O)0.94g,细胞培养所需濃度4. 加入 KH2PO4 0.17g,细胞培养所需濃度5. 加入 NaH2PO4(H2O,2. H2O)0.19g,细胞培养所需濃度6. 加入 Na2HPO4(7H2O)3.05g,细胞培养所需濃度7. 加入次黄嘌呤(NEAA)1mL,必需的非必需氨基酸,促进细胞生长8. 加入乳酸钠2.72g,利用减少氧淤积,促进细胞生长9.加入硫酸铜子(10-5M))1mL,为MEF的细胞类型提供最佳的增生所需注:以上配方根据MS原始文献略作调整,如果在实验中出现差异,请根据实际情况微调。
MS 培养基配方1、配置MS母液母液配置:加热都是用温水浴加热,全部都要避光保存,用装乙醇的棕色瓶来保存在4度即可表2.1大量元素母液药品20x g/L 500ml(20 x)KNO338g 19gNH4NO333 g 16.5gMgSO4•7H2O7.4 g 3.7gCaCl2 6.644g 3.322gKH2PO4 3.4g 1.7g溶于200ml蒸馏水,定容至500ml 需要加热才能完全溶解CaCL2.2H2O 4.4g/L表2.2微量元素母液药品100x g/L 500ml(100x g/L)KIH3BO3MnSO4.4H2OZnSO4.7H2ONa2MoO4.2H2OGuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 0.083g0.6222.3 g0.86 g0.025 g0.0025 g0.0025 g0.0415 g0.31 g1.115 g0.43 g0.0125 g0.00125 g0.00125 g溶于100ml蒸馏水,定容至500ml表2.3有机母液药品100x 1L500ml(100x)肌醇10g5g烟酸0.05g0.025gVB60.05g0.025gVB10.1g0.05g甘氨酸0.2g0.1g表2.4铁盐母液药品100x g/L500mlFeSO4•7H2O 2.78g 1.39gNa2-EDTA. 2H2O 3.73g 1.865g铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于100ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,加水定容至500ml,置于小口瓶中,贴上标签2、固体MS培养基材料•找到4种母液:大量元素,微量元素,有机微量元素,铁盐母液•蔗糖,琼脂锥形瓶MS培养基配方:母液都稀释至1xMS培养基配方(1L)母液体积或重量(1L) 200ml大量元素20x50mL 10ml铁盐100x 微量100x 10mL 2ml 10mL 2ml有机100x10mL 2ml 蔗糖15g(15g/L)3g琼脂8g(8g/L) 1.6gPH先调至 5.85-5.88,最终灭菌后pH接近5.81)。
MS 培养基一、大量元素母液1:大量A母液2:大量B母液3:Fe盐注:配制顺序如下1. 称取3.73 g Na2-EDTA•2H2O溶解于200 ml去离子水中,并置于70℃预热(A);2. 称取2.78 g FeSO4•7H2O溶解于200 ml去离子水中(B);3. 将B缓慢倒入A中混合,边倒边搅动,置于70 ℃水浴锅中螯合2 h;4. 冷却后定容至1 L。
二、微量元素母液4:微量三、有机物质母液5:有机(不含肌醇)℃注:配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel;肌醇也可加入有机母液。
四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp(氨苄青霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Km(卡那霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Str(链霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Cb(羧苄青霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌250 mg/ ml 6-BA (6-苄基嘌呤) 1M NaOH或盐酸溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml NAA(萘乙酸)1M NaOH溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml IAA 95% 乙醇溶解,双蒸水定容,过滤灭菌 1 mg/ ml五、乙酰丁香酮(Acetone-syringone, AS)称取196.2 mg AS用10 ml DMSO溶解,母液浓度100 mM,-20℃避光保存,工作浓度100 ~ 200 μM六、MS溶液的混合5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中,混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素(6-BA和NAA),定溶至1000 ml,用1M NaOH调pH至5.8。
最后加Phytagel (Sigma)4.4g或Agar 10g。
灭菌完后,在培养基凝固前加入AS或抗生素及不能高压灭菌的激素(IAA)。
植物组织培养MS培养基配方MS培养基主要包括两部分:无机盐和有机物。
无机盐部分的配方如下:1.氮源:氮源通常由硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钾(KNO3)和硫酸铵((NH4)2SO4)组成。
氮源的浓度通常为20-30mM。
2.磷酸盐:磷酸盐通常由二氢二钠磷酸盐(NaH2PO4)组成,浓度为10mM。
3.钠盐:MS培养基中含有钠盐,通常由硝酸钠(NaNO3)和硝酸钾(KNO3)组成。
钙盐的浓度为2.0mM,钾盐的浓度为1.0mM。
4.钠盐:MS培养基中含有钠盐,通常由硝酸钠(NaNO3)和硝酸钾(KNO3)组成。
钙盐的浓度为2.0mM,钾盐的浓度为1.0mM。
5.硫酸镁:硫酸镁(MgSO4)的浓度为1.0mM。
6.磷酸铵铁:磷酸铵铁(FeSO4·(NH4)2SO4)的浓度为27.8μM。
7.各种微量元素:包括锌、铜、锰、硼、钼、钴和镍等微量元素。
这些微量元素的浓度通常在微摩尔(μM)级别。
有机物部分的配方如下:1.蔗糖:蔗糖是植物培养基中最常用的碳源,浓度通常为30g/L。
2. 维生素:通常使用的维生素有二硝基地巴泼甲素(2,4-D)和吲哚-3-乙酸(IAA)。
它们的浓度通常在0.1-2.0 mg/L之间。
3. 激素:常用的激素包括植物生长素(BA)和乙烯利(2,4-D)。
它们的浓度通常在1.0-10.0 mg/L之间。
4.混合物:还可以加入一些有机物混合物,如胆固醇、烟酸和核酸酸等。
值得注意的是,这只是MS培养基的一个基本配方,根据具体的研究目的和植物种类的不同,还可以对该配方进行一些调整和优化。
总结起来,MS培养基是一种常用的植物组织培养基,主要用于植物生长和增殖。
其配方包括无机盐和有机物两部分,无机盐包括氮源、磷酸盐、钙盐、镁盐、磷酸铵铁和微量元素等;有机物包括蔗糖、维生素和激素等。
通过适当调整这些配方的浓度和比例,可以实现不同植物的生长和增殖需求。
ms培养基配方表MS(Murashige and Skoog)培养基是细胞培养中常用的基础培养基,其命名来源自培养基组合者Murashige和Skoog。
MS培养基呈现出广泛的适用性,可用于各种组织培养和植物组织培养的研究。
其配方主要采用无机盐和有机物的混合物,以下是MS培养基的详细配方表。
1. MS微量元素添加剂:ZnSO4.7H2O = 8.6 mg/LH3BO3 = 3.1 mg/LMnSO4.4H2O = 0.25 mg/LCuSO4.5H2O = 0.025 mg/LKI = 0.83 mg/LNa2MoO4.2H2O = 0.025 mg/LCoCl2.6H2O = 0.025 mg/LFeSO4.7H2O = 27.8 mg/L2. MS盐基:NH4NO3 = 1650 mg/LKNO3 = 1900 mg/LCaCl2.2H2O = 440 mg/LKH2PO4 = 170 mg/LMgSO4.7H2O = 370 mg/L3. MS综合维生素添加剂:Myo-inositol = 100 mg/LNicotinic acid = 50 mg/LPyridoxine.HCl = 10 mg/LThiamine.HCl = 10 mg/LGlycine = 2 mg/LL-Asparagine.H2O = 150 mg/L4. MS植物生长调节剂添加剂:2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) = 0.5 ~ 5 mg/Lα-Naphthaleneacetic acid (NAA) = 0.5 ~ 5 mg/L6-Benzylaminopurine (BA) = 0.5 ~ 5 mg/LKinetin (Kin) = 0.5 ~ 5 mg/LGibberellic acid (GA3) = 0.1 ~ 10 mg/LAbscisic acid (ABA) = 0.1 ~ 10 mg/L以上是MS培养基的配方表,各种配方的配比可以根据实验需要适当调整。
MS培养基配方列表MS培养基是一种经典的植物培养基,广泛应用于细胞、组织和器官培养研究中。
其配方很复杂,包含多种无机盐和有机物,下面就介绍一下MS培养基的配方列表。
1. 硝酸铵 (NH4NO3)硝酸铵作为氮源,在细胞的生长和分化过程中非常重要。
2. 磷酸一氢钾 (KH2PO4)磷酸一氢钾是植物生长的主要磷源。
3. 硫酸镁七水合物(MgSO4·7H2O)硫酸镁七水合物是植物生长中的必需元素,同样也是叶绿素合成的关键。
4. 硝酸钾 (KNO3)硝酸钾是一种重要的氮源,也是蛋白质合成的必需元素。
5. 硝酸钙 (Ca(NO3)2)硝酸钙是植物生长过程中不可或缺的钙源,在细胞分裂和细胞伸长过程中起着重要作用。
6. 硫酸铁 (FeSO4)硫酸铁是植物体内铁元素的重要来源,对叶绿素和细胞色素c等生物化学过程有着至关重要的作用。
7. 乙酸 (CH3COOH)乙酸可以被植物利用作为碳源,同时还可以促进细胞发育和生长。
8. 吲哚-3-乙酸 (IAA)吲哚-3-乙酸是一种重要的生长素,能够影响细胞分裂和扩散,促进细胞分化和器官发育。
9. 6-苄氨基嘌呤 (BA)6-苄氨基嘌呤是一种核酸类似物,可以促进细胞分裂和增殖,对重组DNA和RNA的生成和转录起着关键的作用。
10. 抗生素 (G418)抗生素G418能够抑制细胞生长和增殖,用于防止其它微生物的污染。
以上就是MS培养基的配方列表,每种成分的浓度和配比都需要根据具体的实验室需求进行调整。
在制备MS培养基过程中,需要严格控制pH值和温度,以确保培养基的有效性。
MS培养基是一种经典、可靠的植物培养基,使用得当可以为细胞、组织和器官培养研究提供强有力的支持。
MS培养基的配置一、母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点:(1)保证各物质成分的准确性;(2)便于配置时快速移取;(3)便于低温保藏。
1、MS大量元素母液(50X)称10升量溶解在200 ml蒸馏水中。
配1升培养基取20 ml。
注:CaCl2·2H2O单独配置2、MS微量元素母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
注:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10=2.5 mg)或100倍量(25 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml,即含0.25 mg的量。
3、MS铁盐母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
注:配制时,两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。
混合时,先取一种置容量瓶(烧杯)中,然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保存在棕色试剂瓶中。
4、MS有机物母液(200X)称10升量溶解在50ml蒸馏水中。
配1升培养基母液5ml。
二、MS固体培养基的配制1、将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出,按顺序排列,并逐一检查是否沉淀或变色,避免使用已失效的母液。
2、取少量的蒸馏水(约为配制培养基量的2/3)加入烧杯中。
注意:配500ml培养基用1000ml烧杯。
3、按母液顺序和规定量,用量筒、移液管或微量移液器取母液,依次放入烧杯中。
每1000ml培养基,需要:MS大量元素母液 20mlMS微量元素母液 10mlMS铁盐母液 10mlMS有机物母液 5ml4、通过计算,用微量移液器取所需的各种生长调节剂母液。
5、加入蔗糖(30g/L),溶解。
6、定容:用容量瓶。
7、调pH值:用0.1 N 和0.5N 的NaOH,一般pH=5.8。
注意:①经高温高压灭菌后,培养基的pH值会下降0.2—0.8,故调整后的pH值应高于目标pH值0.5个单位。
MS培养基母液的配制:20×MS大量元素(1 L):38 g KNO3,33 g NH4NO3,8.8 g CaCl2·2H2O,7.4 g MgSO4·7H2O,3.4 g KH2PO4。
200×MS微量元素(1 L):0.166 g KI,1.24 g H3BO3,4.46 g MnSO4·4H2O,1.72 g ZnSO4·7H2O,0.05 g Na2MoO4·2H2O,0.005 g CuSO4·5H2O,0.005 g CoCl2·6H2O。
200×MS维生素和氨基酸(1 L):20 g肌醇,0.1 g烟酸,0.1 g盐酸吡哆醇(VB6),0.02 g盐酸硫胺素(thiamine hydrochloride, VB1),0.4 g甘氨酸。
200×MS铁盐(1 L):5.56 g FeSO4· 7H2O,7.46 g Na2EDTA· 2H2O,先溶于500 mL ddH2O,加热,调pH至5.5,定容至1 L。
注意:配制大量元素母液时,为避免产生沉淀,要用纯度高的重蒸馏水溶解,药品采用分析纯。
化学药品先以少量重蒸馏水充分溶解后然后混合,混合时需注意边搅拌边混合。
CaCl2·2H2O要在最后单独加入,在溶解CaCl2·2H2O 时,蒸馏水需加热沸腾,除去水中的CO2,以防沉淀。
配制铁盐母液时,FeSO4和Na2-EDTA 应分别加热溶解后混合,并置于磁力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30 min),调pH值至5 .5,室温放置冷却后,再冷藏。
使用上述配好的母液,按照稀释倍数,配制基础MS培养液:1×MS大量元素,1×MS微量元素,1×MS维生素和氨基酸,1×MS铁盐,蔗糖30 g/L,定容后调节pH至5.8,高温高压灭菌。
ms培养基配方MS培养基是一种广泛用于植物细胞培养的抗生素添加的标准培养基,可以用于各种植物细胞生物学实验,是一种快速高效的植物细胞培养方法。
MS培养基(Murashige and Skoog,1962)主要由六种化学复配组成,包括氯化钾、磷酸钾、硝酸钾、谷氨酸、氯化钠和B5维生素混合液。
这六种补充物是培养细胞生长和发芽的重要成分,可以通过调整不同组分的比例来获得更高的营养价值,以满足不同植物的生长需求。
MS培养基的组成比例可以调整,以便满足不同植物的生长需求。
氯化钾是培养基中最重要的钾源,每克培养基含有0.5-2.0毫克氯化钾,磷酸钾作为钾的替代品,其含量为0.2-0.8毫克每克培养基。
硝酸钾是细胞生长所需的重要组分,每克培养基含有0.15-0.8毫克硝酸钾。
谷氨酸作为一种有机氮源,每克培养基含有0.1-0.4毫克谷氨酸;氯化钠可维持培养基的离子平衡,每克培养基含有0.1-0.5毫克氯化钠;B5维生素混合液通常为2-9%,用于维持正常细胞生长。
此外,MS培养基作为植物细胞培养的标准培养基,也可以添加24种氨基酸和多种无机盐,以满足细胞生长和发芽的需求。
24种氨基酸中,非必需氨基酸比饱和氨基酸高出2倍左右,作为某些特殊植物细胞特殊需要的氨基酸,如甘氨酸和苏氨酸,可以根据细胞的特殊需求以不同的比例添加进去。
常用的无机盐包括硫酸钾、硫酸钠、氟化钠、氯化钠、酸钠、硫酸胺和亚硝酸钠等,细胞在此无机盐环境中才能正常发芽。
MS培养基是根据美国科学家Murashige和Skoog(1962)提出的植物培养技术来配制的,是一种标准化的植物细胞培养基配方,由营养物质如钾、磷、氮和铁等成分通过恰当的比例混合而成。
它具有组成比例可调、配方固定、细胞发芽率高、培养效率高、平衡缺乏及对细胞有利等特点,常用于植物细胞的培养实验,广泛用于植物细胞的生物学实验和栽培。
MS培养基的制备和使用步骤要求严格,首先,经过精制的培养基配方应由专家进行审核,确保其品质和效果,然后将所有组分称量、混合、离心、灭菌并过滤后,使其具有良好的稳定性。
植物组织培养MS 培养基配方
(一)母液配制与保存
配制培养基时,如果每次配制都要按着杨成分表依次称量,既费时,又增加了多次称量误差。
为了提高配制培养基的工作效率,一般将常用的基本培养基配制成10~200倍,甚至1000倍的浓缩贮备液,即母液。
母液贮存于冰箱中,使用时,将它们按一定的比例进行稀释混合,可多次使用,并在配制较多数量的培养基时,降低工作强度,也提高试验的精度。
基本培养基的母液有四种:大量元素(浓缩20倍),微量元素(浓缩100倍),铁盐(浓缩200倍),除蔗糖之外的有机物质(浓缩100倍) 1大量元素
配制大量元素母液时要分别称量,分别溶解,在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中,以防出现沉淀。
倒入磨口试剂瓶中,贴好标签和做好记录后,可常温保存或放入冰箱内保存。
表1 大量元素母液(配1L20倍的母液)
序号 成分
配方用量/(mg.L -1)
称取量/mg 配1mL 培养基吸取量/mL 1 NH 4NO 3 1650 33000
50 2 KNO 3 1900 38000
3 KH 2PO
4 170 3400
4 MgSO 4.7H 2O 370 7400
5
无水CaCl 2 440 6644
2微量元素母液
在配制微量元素母液时,也应分别称量和分别溶解,定溶时不分先后次序,可随意加入溶量瓶中定容(表2),一般不会出现沉淀现象。
倒入磨口试剂瓶中,贴好标签和做好记录后,可常温保存或放入冰箱内保有存。
表2 微量元素母液(配制1L100倍母液)
成分 配方用量/(mg.L -1
)
称取量/mg
配制1L 培养基吸取量/mL
KI 0.83 83 10
MnSO 4.H 2O 22.3 1690 H 3BO 3 6.2 620 ZnSO 4.7 H 2O 8.6 860 Na 2MoO 4.2 H 2O 0.25 25 CuSO 4.5H 2O 0.025 2.5 CoCl 2.6H 2O
0.025
2.5
3铁盐母液
由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用,只有基螯合物才能被植物吸收利用,因此需要单独配成螯合物母液表3)。
配制方法:称取5。
56g 硫酸亚铁和7.46g 乙二胺乙酸二钠,分别用450ml 的去离子水溶解,分别适当加热不停搅拌,分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中,将两种溶液混合在一起,最后用去离子水定溶于1000mL ,倒入棕色贮液瓶中,贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
表3 铁盐母液(配1L200倍母液)
成分
配方用量/(mg.L -1
) 称取量/mg
配制1L 培养基吸取量/mL
4有机物母液
按表4中的量分别称取各种有机物,分别溶解后,用蒸馏水或去离子水定容于1000mL ,放入细口瓶中备用,贴好标签于4℃冰箱中低温保存。
5.Ms 培养基配制程序
配好各种母液后,就可以准备配制培养基,程序入下
1. 将已配好的的各种母液按顺序排好,根据母液倍数或浓度计算和吸取应相应时的各种母
液和生长调节物质;计算和称取琼脂和蔗糖.1L 培养基称蔗糖30g 琼脂7g.
2. 由于琼脂难溶解,所以先在烧杯中放入一定量的水,在微波炉里加热后搅拌,使之溶解. 3. 按照大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液的顺序倒入锅中加热至沸后把溶解的琼脂
加入。
4. 加入蔗糖,特蔗糖溶解后,定溶所要体积。
5. 调PH 到5.6~5.8
6. 分装到培养瓶中121℃ 21 min 灭菌后取出,放在水平台上凝固接种。
做愈伤组织时还应在每1L 培养基中加入2mg/m L 的2,4-D 1mL,对于不同的材料,加入的量不同,根据不同的材料选择不同的浓度。
还可加入不同生长调节素达到更好的目的。
表3有机物母液(配制1L100倍母液)
成分 配方用量/(mg.L -1
)
称取量/mg 配制1L 培养基吸
取量/mL 肌醇 100 10000 烟酸 0.5 50
盐酸硫胺素 0.1 10 10 盐酸多吡醇 0.5 50 甘氨酸
2
200。