实验六：子囊菌亚门、半知菌亚门真菌形态观察及所致病害症状观察
一、目的和要求
1、认识子囊菌亚门各个纲病原菌的形态特征，掌握子囊菌各主要属的分类依据及其所致主要病害的症状。
2、通过对半知菌中各类型代表菌的观察，了解半知菌的分类依据，掌握半知菌主要属的形态特征及其所致主要病害的症状特点
二、材料与方法
观看实验教学录像与标本
三、内容
子囊菌亚门
1 半子囊菌纲
外囊菌属（Taphrina）观察
桃缩叶病害（T.deformans）标本，注意受害叶片形态颜色有何变化？
2 不整囊菌纲
3 核菌纲
3．1 白粉菌目（Erysiphales）
观察几种白粉病标本。
3．2 球壳菌目（Sphaeriales）
4 腔菌纲（Loculoascomycetes）
5 盘菌纲（Discomyeetes）
半知菌亚门
1 丝孢纲（Hyphornycetes）
2 腔孢纲（Coelomycetes）
四、作业与思考题
1、子囊菌亚门各纲的主要区别是什么？
半子囊菌纲：无子囊果，子囊裸生。
不整囊菌纲：子囊果是闭囊壳，子囊无规律地散生在闭囊壳内，子囊孢子成熟后子囊壁消解。
核菌纲：子囊生在孔口有的子囊壳内，或有规律地排列在无孔口的闭囊壳基部形成子实层。
腔菌纲：子囊果是子囊座，子囊是双层壁的。
盘菌纲:子囊果是子囊盘。
虫囊菌纲:子壳果是子囊壳，营养体简单，大多无菌丝体，不产生无性孢子，均为节肢动物的寄生菌
2、白粉属和单丝壳属、叉丝壳属和叉丝单囊壳属的主
要区别是什么？
答：白粉属璧囊壳表面的附属丝菌丝状，发达，璧囊壳内有多个子囊。
单丝壳属璧囊壳表面的附属丝菌丝状，发达，璧囊壳内只有一个子囊。
叉丝壳属的附属丝刚直，顶端有一到数次二叉状分枝，璧囊壳内有多个子囊。
叉丝单囊壳属附属丝与单丝壳属相似，主要区别是璧囊壳内只有一个子囊。
微生物实验 微生物实验 细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌
细菌形态观察 一、实验目的 1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护 2.掌握细菌的三种形态 3.掌握临床常见细菌的形态及染色 4.掌握细菌的特殊结构 5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点 二、实验原理 1. 普通光学显微镜（油镜）的使用 1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头 2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时 停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰 3. 根据需要调节显微镜亮度 2. 普通光学显微镜的维护 1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前 2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最 后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头 3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内 4.做好使用记录 3．微生物知识 1．细菌按形态分类： 球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等） 杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等） 螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等） 2．细菌的基本结构 细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体 3．细菌的特殊结构 荚膜：如肺炎双球菌 鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌 菌毛 芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌 4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。 原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体 真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5．真菌 单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌
真菌的常规检验法 实验室检查： ?标本采集分离培养 ?直接镜检生化反应 ?染色镜检免疫学试验 一、临床标本的采集 ?1．皮肤的角质性物质：毛发、指(趾)甲、头屑、皮屑等。 2．各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。 ?3．血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。 4．脓汁及渗出物。 二、检验方法 （一）标本直接检查法
不染色标本检查 染色标本检查 （二）培养检查 （三）鉴定 ①KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如毛发、指甲、鳞屑等）。 ②墨汁：主要用于检查有荚膜的真菌（如新型隐球菌等） ③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。 ④生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替氢氧化钾溶液。 微生物学检查步骤： 取患部标本
（毛发、皮屑等）__置载玻片__加10%NaOH（或10%KOH）→微加温消化 →镜检（观察菌丝和孢子） 直接镜检的意义 ①有诊断意义，如浅部真菌病等； ②通过真菌的形态，可确定某些致病性真菌的属或种, 如假丝酵母菌的厚膜孢子等； ③判断某些真菌种的致病性等,如皮肤癣菌、曲霉等。 直接镜检的局限性： ①阴性结果不能排除真菌感染； ②有假阳性结果。 因此，对直接镜检可疑结果应作复查或用其他检验方法鉴定。 2. 染色标本检查 ?（1）革兰染色：各种真菌均染成革兰阳性。 ?（2）乳酸酚棉蓝染色
?（3）糖原染色： ?又称过碘Schiff（简称PAS或PASH）。真菌细胞壁由纤维素和几丁质组成，含有多糖。过碘酸使糖氧化成醛，再与品红－亚硫酸结合，成为红色，故菌体均染成红色。为真菌染色最常用的方法之一。 ?（4）嗜银染色（GMS）：染成黑色 ?（5）粘蛋白卡红染色法（MCS）：主要用于新生隐球菌荚膜的染色。隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核呈黑色。 ?（6）荧光染色：主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组织切片。 （二）培养检查法 ?本法可确定菌种，辅助直接检查的不足。 ①菌落性质：酵母菌还是霉菌； ②菌落大小：致病性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大； ③菌落颜色：病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；
实验五霉菌的形态观察、微生物的测微与计数 一．实验目的 1.学习并掌握观察霉菌形态的基本方法，初步了解霉菌的形态特征及鉴别依据。 2.学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。 3.了解血球计数板的构造和使用方法。学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。 4.总结并掌握细菌、放线菌和霉菌的鉴别方法。 二、实验原理 1. 霉菌定义及用途 ?霉菌不是真菌分类中的名词，而是丝状真菌的统称。 ?霉菌在自然界中广泛分布，与食品的关系密切，是人类在实践活动中最早利用的一 种微生物，如早期进行的酱和酱油的制作等。 ?霉菌也可以使食品发生腐败变质或产生毒素，影响人体健康甚至危及生命。 2.霉菌特征 ?霉菌可产生分支的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化 产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。 ?菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。 ?霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗的多（约3-10um)，常是细菌菌体宽 度的几倍至几十倍。因此，用低倍镜即可观察。 3.霉菌的菌落 ?松：由于霉菌的菌丝较粗较长，菌丝体疏松，因而形成的菌落也比较疏松，呈绒毛 状、棉絮状或蜘蛛网状； ?大：菌落形态较大，一般比细菌和放线菌的菌落大几倍到几十倍，有时会长满整个 培养皿； ?干：外观干燥，不透明； ?挑：菌落与培养基间的连接紧密，不易挑取； ?颜色：由于基内菌丝、气生菌丝、孢子颜色不同，不同的霉菌菌落表面呈现不同的 颜色，菌落正反面、边缘与中心颜色常不一致。 同一种霉菌在不同的培养基上或不同的培养条件下所形成的菌落特征可能有所不同。但同一种霉菌在相同的培养条件下和培养基上所形成的菌落特征相对稳定。菌落特征是霉菌鉴定的重要依据之一。 4、霉菌的菌丝形态 ?构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。菌丝的宽度一般为3-10μm，比放线菌菌丝宽 很多倍，其菌可伸长并产生分枝。 许多分枝的菌丝相互交织在一起，称为菌丝体。
细菌形态结构观察实验报告精品篇 生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟 学号055656565 指导教师:xxxxxx 学习中心培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作 用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面
实验一细菌形态观察(一) （基础实验，4学时） 一、实验目的和要求 1.掌握显微镜油镜的使用 2.验证三种类型细菌的形态，认识细菌的基本形态。 二、实验原理 普通光学显微镜由机械装置和光学系统两大部分组成，物镜的性能直接影响显微镜的分辨率。几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。使用油镜需在载玻片与镜头之间加滴镜油，主要有如下原因： 1.增加照明亮度； 2.增加显微镜的分辨率 细菌的形态微小（以μm计），个体基本形态为球形、杆状和螺旋形，其中以杆状细菌最为常见。 三、实验用具 光学显微镜、擦镜纸、细菌标本、滤纸、液体石蜡； 枯草杆菌、四联球菌、大肠杆菌、变形杆菌、细菌三型、八叠球菌等细菌的永久染色装片 四、实验步骤 （一）调试显微镜 显微镜左前方，镜罩叠放在右上方，插电源。聚光器上提至最上方，打开光圈；开电源，调光源。 （二）观察 1、放置标本于载物台上，用粗调节器上升载物台至最高位置。 2、低倍镜下，用粗调节器找到要观察的样品区域 3、换高倍镜，用细调节器找到要观察的样品区域 4、移开高倍镜，滴液体石蜡，从侧方注视，将油镜缓慢转至正下方，调至物像清晰，绘图 5、提起镜筒，换染色装片，观察，绘图。 （三）用后显微镜清理 1、观察后下降载物台，取下载玻片，将油镜转出，擦镜头3～5次。 2、将光线调至最小，关闭电源和光圈，下降聚光器。将显微镜各部分还原。 五、注意事项 1、使用油镜必须按先用低倍镜和高倍镜观察，再用油镜观察的程序操作。 2、转换镜头时，一定要从侧面注视，切忌用眼睛对着目镜，以免压碎玻片而损坏镜头。 六、作业 绘出观察到的几种细菌的个体形态视野图，注明总放大倍数。
霉菌的形态观察实验 一．实验目的 1．掌握配制合成马铃薯培养基（PDA）的一般方法。 2．学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。 3．了解并掌握四类霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青霉）的基本形态特征。 二．实验原理 1．霉菌 霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。 观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本节课用载玻片培养观察法。 2．载玻片培养法（小培养法） 用无菌操作将培养基琼脂薄层小块（约1cm2）置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。 三．实验器材 1．菌种：曲霉 ( Aspergillus sp. ) ，青霉（Penicillium sp.），根霉( Rhizopus sp. ) 和毛霉（Mucor sp. ）培养 2-5d 的斜面 培养物。 2. 培养基：马铃薯培养基（PDA） 3. 仪器或其他用具：超净台，无菌吸管，接种环，酒精灯，平皿，载玻片， 盖玻片， U 型玻棒，解剖刀，镊子， 50% 乙醇， 20% 的甘油，滤纸片，以及显微镜等。 四．实验步骤 载玻片培养观察法（小培养法） 1．培养小室的准备及灭菌 在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一 U 形玻棒，其上放一块洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖、包扎后于 110 ℃ 灭菌 20-30min ，不烘干，备用。 2．琼脂块的制作 取已灭菌的马铃薯培养基（PDA）无菌操作注入两个已灭菌平皿中，使之凝固成薄层。用解剖刀切成 0.5-1cm2的琼脂块，并用镊子将其移 至上述培养小室中的载玻片上（每片放两块 )。 3．接种
真菌学实验报告 一.实验目的： 1.1了解真菌形态的基本特征。 1.2掌握丝状真菌制片方法。 1.3掌握内生真菌的分离方法 1.4掌握真菌的鉴定方法。 二.前言： 真菌广泛分布于地球表面,从高山、湖泊到田野、森林，从海洋、高空到赤道、两极，到处都有真菌。真菌虽然不在空气中生长繁殖，但它的孢子却成群的漂浮在天空，只要稍微注意你会发现人类原来生活在真菌的汪洋大海中。 当今世界，生物技术已迈入世界经济的支柱产业，真菌学在生物技术的大潮中得到了长足的发展。真菌是原始的真核生物，具有广泛的多样性，真菌生长我繁殖迅速，在很短的时间内就可以得到比动物和植物多得多的后代，能够直接、快速地进行遗传性状分离的
分析。因此，真菌可以作为研究基础生物学过程中的一个重要工具，真菌基因的多样性以及真菌分子生物学的发展，为生物技术产业提供了一个广阔的天地。 植物的生长环境直接影响内生真菌的生物多样性，植物物种的年代越久远，其生物内生真菌的多样性越丰富：抗病原性能越强的植物，其所含的内生真菌具有抗菌活性的可能行就越大；其所含的内生真菌有可能产生与植物相同或相似的抗菌无知或产生抗菌活性物质可能参与了药用植物的抗菌过程，本实验通过植物病原真菌和G+、G-细菌的抑制实验发现茎，根，花，种子或果实内生真菌的代谢产物具有不同程度的抑菌能力，并且对G+、G-有普片遍的抑菌作用。研究和开发内生真菌的寻找新的抗菌活性物质具有广泛的应用前景。 三.材料与方法： 3.1.1材料： 在校园内采集银杏、喜树、桂花树样品包括叶、茎、根、花、种子或果实。 3.1.2.药品与试剂： 葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O，马铃薯、琼脂。孟加拉红，青霉素，链霉素，甲基蓝，蛋白胨，酵母膏，蔗糖，磷酸盐，葡萄糖，琼脂条，无菌水等。消毒剂：75%的乙醇，0.1%升汞（HgCl2），次氯酸钠溶液（含活性氯10%），30%双氧水。双
山东大学实验报告2017年11月6日 ________________________________________ _________________________科目：微生物学实验题目：霉菌的培养及形态观察姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。 2.了解四类常见霉菌的基本形态特征。 二、基本原理 霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗的多（约为3-10μm），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍镜即可观察。观察霉菌的形态有多种方法，常用的有下列三种： 1. 直接制片观察法：是将培养物置于乳酸石碳酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。用此染色制成的霉菌制片的特点是：细胞不变形；具有防腐作用，不易干燥，能保持较长时间；能防止孢子飞散；染色的蓝色能增强反差。必要时，还可用树胶封固，制成永久标本长期保存。 2．载玻片培养观察法：用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌就在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期培养物。 3．玻璃纸培养观察法：玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将霉菌接种于玻璃纸上，经培养，霉菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。这种方法既能保持霉菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。
实验七、细菌的显微观察（形态、大小） 一、实验目的和内容 目的：1.了解油镜的原理和使用方法。 2.掌握细菌形态观察的基本方法。 3.了解细菌的基本形态特征。 内容：1.学习显微镜（油镜）的使用方法。 2.学习细菌涂片和简单染色法。 3.用油镜观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片。 二、实验原理 油镜的放大倍数可达100Χ，但其焦距和直径很小，需要很大的光照强度。由于空气和玻璃的折射率不同，如果是镜与装片之间介质为空气时会发生折射，降低视野的照明度，而香柏油的折射率与玻璃相近，光线不会发生折射从而提高视野的照明度和分辨率。 单染色是用单一染色剂对细菌进行染色的方法。由于细菌在中性、弱酸性或碱性溶液中带负电荷，碱性染料在电离后染色离子带正电荷，因此使细菌着色。常用的染料有美篮、碱性复红、结晶紫、孔雀绿等。 三、实验材料和用具 （1）菌种：培养12-16h的苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）或者枯草杆菌（Bacillus subtilis），培养24小时的青枯假单胞杆菌。 （2）染色液和试剂：吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)，石炭酸复红染液、结晶紫、鲁哥尔碘液、95 %酒精、复染剂（蕃红）、二甲苯、香柏油。 （3）器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、打火机、记号笔、擦镜纸、显微镜。 四、实验内容及步骤 1、实验内容： （1）细菌单染色：分别制备标号为1、2及同学自己分离的细菌玻片并染色； （2）口腔内微生物形态观察 2、实验步骤： 清洗载玻片中心加半滴水无菌操作取菌涂布于水中（1cm左右）干燥火焰固定染色（1min）水洗吸水晾干显微镜下观察、记录图示/描述各菌形状 五、实验小结
霉菌的形态观察 一、【实验目的】 1、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法 2、了解四类常见霉菌（曲霉、毛霉、青霉、根霉）的基本形态特征 二、【实验原理】 1、霉菌 霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3~10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。 2、观察方法 观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。 3、载玻片培养观察法（小室培养法） 用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。 三、【实验器材】 1、菌种：曲霉 ( Aspergillus sp. ) ，青霉，根霉 ( Rhizopus sp. ) ，毛霉（ Mucor sp. ），培养 7d 的马铃薯琼脂平板培养物 2、培养基：马铃薯培养基（简称PDA）（配方见附表） 3、仪器或其他用具：平皿，载玻片，盖玻片，无菌吸管，U 型玻棒，解剖刀，镊子， 50%乙醇，20%甘油，显微镜，接种环，酒精灯等 四、【操作步骤】 1、载玻片培养观察法（小室培养法） （1）、培养小室的灭菌：在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一Ｕ形 玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，包 扎后于110℃灭菌20~30分钟，烘干备用。 （2）、琼脂薄片的制作：取已灭菌的马铃薯琼脂培养基各6~7ml 注入另两个灭菌 平皿中，使之凝固成薄层。通过无菌操作，用解剖刀将其 切成 1cmx1cm的琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻 片上（每片放两块 )。 （3）、接种：通过无菌操作，用接种环从斜面培养物上挑取很少量的孢子，接种
题目：真菌的培养及形态观察 动物科学1204班聂孝明 20121546 指导教师：邹玲 摘要：了解酵母菌和霉菌的菌落特征及在培养基中的生长表现，还有真菌的分离培养方法和载片培养，学习真菌水浸片的制备及形态观察。本实验通过真菌的固体培养，酵母菌水浸片旳制备观察及划线分离培养的方法进行形态观察。在固体培养基上，观察到A菌落成绿色比较光滑、有分生孢子、菌丝有横隔为青霉。D菌落有大量直立菌丝并且顶部发黑、有孢子囊、菌丝无横隔为根霉。B菌落大而光滑、显微镜下菌体较大、有假菌丝并且出芽生殖的为酵母菌。 关键词：酵母菌霉菌形态观察分离培养 引言：真菌在自然界中分布广、数量大、种类多。酵母菌是单细胞微生物，细胞核和细胞质有明显的分化，个体直径比细菌大10倍左右，多为圆形或卵圆形，无性繁殖为出芽生殖，可以形成假菌丝，有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。用美蓝染色液制成水浸片可以观察期外形和区分细菌的死活。霉菌的营养体是分支的丝状体，较大，分为基内菌丝和气生菌丝，不同的霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子，细胞易收缩变形，孢子容易分散。利用培养在玻璃纸上的霉菌作为观察材料，可以得到清晰，完整，保持自然状态的霉菌形态。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌种：酵母菌，青霉，根霉的斜面培养菌种 1.1.2试剂：沙堡培养基、美蓝染色液、70%酒精、无菌水等 1.1.3其他：解剖针、玻片、盖玻片、接种环、显微镜等 1.2方法 1.2..1真菌的划线分离培养 培养基：将沙堡琼脂培养基融化后，冷却至45摄氏度，注入无菌平皿中，每皿15~20ml，做成平板备用。 接种：取待分离的材料少许，投入无菌水试管中，振荡，使分离菌悬浮于水中，将接种环火焰灭菌后冷却，取上述悬液，进行平板划线分离。 培养与观察：划线完毕后，置于28摄氏度温箱培养2~5天，待形成子实器官后，取单个菌落部分，制片镜检。若只有一种菌，既得纯培养物。如有杂菌可取培养物少许制成悬液，用作划线分离，有时反复多次可获得纯种。也可在放大镜下观察，用无菌镊子夹取一段分离的真菌菌丝，在平板上分离培养，即可得到真菌的纯培养物。 1.2.2真菌在固体培养基上的生长表现： 酵母菌在固体培养基上菌落呈油脂状或蜡质状，表面光滑、湿润、粘稠，有的表面呈现粉粒状，粗糙或褶皱，菌落边缘整齐、缺损或带丝状。菌落颜色有乳白色、黄色、红色等。将不同的霉菌在固体培养基上培养2~5d，可见霉菌有绒毛状、絮状、绳索状等。大小依霉菌种类而异，很多霉菌的孢子和菌丝能产生色素，致使菌落表面、背面甚至培养基呈现不同的颜色，如黄色、绿色、黑色、橙色等。 1.2.3真菌的形态观察 1.2.3.1酵母菌水浸片的制备：将美蓝染色液或蒸馏水滴于干净的载玻片中央，用接种环以无菌及操作取培养48h的酵母菌少许，均匀涂于液滴中，染色2~3min后加盖玻片。注意切勿产生气泡，然后低倍镜和高倍镜观察其细胞形态、芽殖方式，注意酵母菌的形态、大小和芽体，同时可以根据是否染上颜色来区别死活细胞。 1.2.3.2挑取真菌孢子接入盛有灭菌水的试管中，震荡试管制成孢子悬液，用灭菌滴管吸取
实验四酵母菌和霉菌的形态观察 一、目的要求 1、观察酵母菌、老菌的个全形态以及它们之间的区别。 2、学会用水浸法观察酵母菌和霉菌的技术。 3、了解酵母菌和霉菌细胞的构造和繁殖方式的特点。 二、实验材料 1、接种针、接种杯、酒精杯、载玻片、盖玻片、吸管。 2、0.1%美蓝液、乳酸-石炭酸液（配方见附录）。 3、菌种啤酒酵母、假丝酵母、黑根霉、毛霉、青霉、木霉、曲霉。 三、方法步骤 （一）酵母菌的形态观察 酵终菌是单细胞真核核微生物，细胞核和细胞质有明显分化，个体比细菌大得多，有的能形成假菌丝。繁殖方式较复杂，无性繁殖以出芽生殖为主，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 1、酵母菌的形态与出芽生殖的观察在载片上滴一滴蒸馏水，以无菌操作，用接种环挑取少许啤酒酵母置于载片上蒸馏水中，取一块盖片，小心地将盖玻片一端与菌液接触，然后缓慢地将盖玻片放下；这样可避免产生气泡。先用低倍镜观察，再用高倍镜观察酵母细胞的形状、大小、构造、内含物及出芽方式。 2、子囊孢子的观察将啤酒酵母接种于麦芽汁液体培养中，于28-30℃培养24小时，连续传代3-4次，最后转接到培养子囊孢子的培养基上（也可用肉法蛋白胨培养基）。25-28℃培养3天左右，涂片
染色（按芽孢染色法）观察子囊孢子开关和特点，并注意每一个子囊内的孢子数等。 3、假丝酵母观察用划线法将假丝酵母接种在麦芽汁平板上。在划线部分加盖玻于25-30℃培养3天先观察菌落边缘，再取下盖玻片，在显微镜下观察呈树枝状分枝的假菌丝细胞的形状，或将皿盖打开，直接将培养皿放在载物台上，在低倍镜下观察。 4、酵母菌菌落观察取啤酒酵母、假丝酵母、园酵母以三点点植法接种于麦芽汁平板上，于28-30℃坟3天。观察菌落表面、高度、边缘、质地和颜色等。 5、酵母菌死活的检查在载片上加一滴0.1%美蓝，把酵母培养液滴加在美蓝液上，加盖玻片观察，死细胞为兰色，活细胞无色。 （二）霉菌形态观察 霉菌形态比细菌、酵母菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。在观察时要注意细胞的大小，菌丝构造和繁殖方式。菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性孢子是怎样着生在孢子梗上及有性孢子如何生成。 由于霉菌菌丝较粗大，孢子很容易飞出，如果放在水中观察时容易收缩变形，所以在制标本时不用水，而用乳酸-石炭酸溶液，使细胞不致变形，并有杀菌作用。 1、取培养有青老、木霉、毛霉、曲霉的平皿，挑取一团菌丝，置于滴有一滴乳酸-石炭酸液的载片上，加盖玻片，由于霉菌是由菌丝组成的，许多菌丝交错在一起形成菌丝体。在高倍镜下观察菌丝分隔情况，分成孢子着生情况（要求辨认分生孢子子梗、顶囊、小梗及
实验五霉菌形态及菌落特征的观察 一、目的要求 1.掌握观察霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征。 2.掌握常用的霉菌制片方法 二、基本原理 霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片其特点是：(a)细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；(c)溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。 霉菌自然生长状态下的形态，常用载玻片观察，此法是接种霉菌孢子于载玻片上的适宜培养基上，培养后用显微镜观察。此外，为了得到清晰、完整、保持自然状态的霉菌形态还可利用玻璃纸透析培养法进行观察。此法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取一小片，贴放在载玻片上用显微镜观察。 三、器材 曲霉（Aspergillussp．），青霉（Penicillium sp．），根霉（Rhizopus sp．），毛霉（Mucor sp．）； 乳酸石炭酸棉蓝染色液，20％甘油，查氏培养基平板，马铃薯培养基；无菌吸管，载玻片，盖玻片，U形棒，解剖刀，玻璃纸，滤纸等。 四、操作步骤 1．一般观察法 于洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝置染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。 2．载玻片观察法 (1)将略小于培养皿底内径的滤纸放入皿内，再放上U形玻棒，其上放一洁净的载玻片，然后将二个盖玻片分别斜立在载玻片的两端，盖上皿盖，把数套（根据需要而定）如此装置的培养皿叠起，包扎好，用1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟或干热灭菌，备用。 (2)将6—7ml灭菌的马铃薯葡萄糖培养基倒入直径为9cm的灭菌平皿中，待凝固后，用无菌解剖刀切成0．5—1cm2的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的培养皿内的载玻片上，每片上放置2块。 (3)用灭菌的尖细接种针或装有柄的缝衣针，取（肉眼方能看见的）一点霉菌孢子，轻轻点在琼脂块的边缘上，用无菌镊子夹着立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上，再盖上皿盖。
本课程，本课程是大学本科生物技术、生物科学专业的选修课程。介绍真菌分类现状、分类方法（包括传统与现代分类方法的比较）、分类依据及其原则。本课程的教学不限于介绍研究的成果，重在介绍分析和解决问题的方法，以培养学生分析问题和创新的能力。所以在理论学习的同时开设综合性实验，培养学生观察、分析和动手能力。基本掌握真菌分离、鉴定的方法，并应用于真菌其它领域的研究。 本指导书适用于生物技术和生物科学专业。
1、实验：内生真菌的分离及鉴定 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????3 2、实验报告基本内容要求 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????7 3、实验报告格式????????????????????????????????????????????????????????????????8
实验内生真菌的分离及鉴定 实验学时：18 实验类型：综合 实验要求：选修 一、实验目的 1.了解真菌形态的基本特征。 2.掌握丝状真菌制片方法和真菌鉴定方法。 二、实验内容 采集植物样品包括叶、茎、根、花、种子或果实，然后对分离样品的内生真菌，并进行形态和分子生物学方法的鉴定。 三、实验原理、方法和手段 （一）实验原理 根据真菌的形态特征和ITS序列等分子证据对分离到真菌进行归类和鉴定。 （二）实验手段和方法 1、内生真菌分离纯化方法 1.1样品的表面消毒及预处理 分别取根、茎、叶、果实，用洗涤剂在自来水下洗净。 老树皮用75%酒精进行表面消毒后，用镊子取出，于酒精灯上烧灼15秒至表面焦糊，切成1×1cm2大小置于PDA固体培养基上。 对于根、茎、叶、果实按下列程序进行表面消毒： 75%的酒精漂（浸）洗2-3min→无菌水冲洗4-6次→0.1%升汞不同的消毒时间（共设置7个梯度）→无菌水冲洗4-6次→用灭菌滤纸吸干多余水分→无菌刀片将材料切成小块 将根、茎的表皮、韧皮部、木质部大致分开，并切成0.5×0.5cm2大小。将果实的外种皮去掉，消毒之后将内种皮去掉。 灭菌时，沥干的植物材料转放到烧杯中，记好时间，倒入消毒溶液，不时用玻璃棒轻轻搅动，以促进材料各部分与消毒溶液充分接触，驱除气泡，使消毒彻
《食用药用真菌学》实验教学大纲 课程类型：选修课 适用专业：食品科学与工程和食品质量与安全及相关专业 总学时：10 一、制定本试验大纲的依据 根据2003级教学计划和《食用药用真菌学》的要求，为了达到食用药用真菌学的教学目的和要求制定此大纲。 二、食用药用真菌学实验课在教学中的作用 本实验课教学的目的是通过实验课教学，加深学生对所学食用药用真菌学理论的理解，提高学生的实际动手能力和分析问题和解决问题的能力。本课程对于学好食用药用真菌学，培养学生的实际动手能力能力具有非常重要的意义。 三、本课程实验教学的目的及学生能力标准 １、通过本实验课的教学，加强学生对食用药用真菌学所讲理论的理解和掌握。 ２、通过本实验的教学，使学生掌握食用药用真菌学的一些研究方法和基本操作技能。 ３、通过本实验的教学培养学生的动手能力和创新能力，提高他们分析问题和解决实际问题的能力。 ４、通过本实验的教学初步使学生能把食用药用真菌学的理论运用到生产实践中。 四、学时分配、教学形式及实验性质 学时分配：本实验课课程学时为10学时。 教学形式：实验前要求学生认真预习实验内容，并写好预习实验报告。实验课上指导教师讲述实验的基本原理和主要实验步骤， 演示主要的实验方法、操作技能和技巧；指导训练学生独立 完成实验操作，并进行实验数据的处理，报告实验结果，分 析和讨论实验过程中出现的问题。 实验性质：实验内容一部分为验证性实验，一部分为应用性实验。五、实验成绩评定 根据学生实验过程中的表现及实验完成情况给学生评分，实验成绩占食用药用真菌学总成绩的30%。
六、实验项目、内容及学时分配 七、教材 《中国菇类栽培手册》（赵根楠等，科学出版社，1990年8月）《食用菌栽培学》（郑稚莺等，哈尔滨出版社，1995年） 八、主要编写人员 郭德军 2004年4月28日
真菌学实验报告 一.实验目的： 1.1了解真菌形态的基本特征。 1.2掌握丝状真菌制片方法。 1.3掌握内生真菌的分离方法 1.4掌握真菌的鉴定方法。 二.前言： 真菌广泛分布于地球表面,从高山、湖泊到田野、森林， 从海洋、高空到赤道、两极，到处都有真菌。真菌虽然不在空气中 生长繁殖，但它的孢子却成群的漂浮在天空，只要稍微注意你会发 现人类原来生活在真菌的汪洋大海中。 当今世界，生物技术已迈入世界经济的支柱产业，真菌学 在生物技术的大潮中得到了长足的发展。真菌是原始的真核生物， 具有广泛的多样性，真菌生长我繁殖迅速，在很短的时间内就可以 得到比动物和植物多得多的后代，能够直接、快速地进行遗传性状 、管路敷设技术通过管线不仅可以解决吊顶层配置不规范高中资料试卷问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行 高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况 ，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。 、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。
细菌真菌实验过程 下列是“检测教室中的细菌和真菌”的实验步骤： ①用牛肉汁（或土壤浸出液、牛奶）与琼脂混合配制培养基； ②将配制好的培养基平铺在两个培养皿中进行高温处理，冷却后使用； ③在教室打开培养皿A，暴露在空气中10分钟，再盖上，封好．培养皿B不做任何处理． ④将两套培养皿同时放入恒温箱中培养，几天后观察培养皿中菌落的生长情况． （1）在第一步配置培养基的操作中，牛肉汁起什么作用？ D A、使培养基闻起来很香，容易吸引细菌 B、使培养基表面看起来很黏稠 C、为细菌等的生物的生活提供水分和无机盐 D、为细菌等生物的生活提供有机物 （2）在第2步操作中培养皿和培养基进行了高温处理，目的是 杀菌 ． （3）步骤3的操作，相当于细菌、真菌一般培养方法中的哪一个步骤？ 接种 ． （4）在实验过程中选取两套培养皿的目的是 进行对照 ． （5）如果实验成功，几天后观察培养皿中的菌落，会发现培养皿 B 中的没有菌落生长． 考点：检测不同环境中的细菌和真菌． 分析：此题考查的是“检测教室中的细菌和真菌”、细菌真菌的结构、繁殖、营养和与人类生活的关系．可以从细菌真菌的培养过程、每一步操作的目的原因、细菌真菌的结构特点、生殖方式、营养方式、与人类生活的关系方面来切入． 解答：解：Ⅰ、（1）细菌和真菌的生活需要一定的条件，如水分、适宜的温度、还有有机物．而细菌没有叶绿体，不能进行光合作用制造有机物，必须依靠现成的有机物生活．因此首先要配制含有营养物质的培养基，可以用牛肉汁加琼脂熬制．牛肉汁含有丰富的有机物，为细菌等生物的生活提供有机物．
（2）在第2步操作中培养皿和培养基进行了高温处理，目的是杀菌，杀死实验外其他的杂菌（意思相同即可）．以防杂菌对实验的干扰， （3）步骤③在教室打开培养皿A，暴露在空气中10分钟，让空气中的细菌真菌或孢子落入培养皿，因此相当于细菌、真菌一般培养方法中的接种． （4）为研究变量对研究对象的影响，需要设计对照实验，这样可以增强实验结论的说服力．在对照实验中，除了已选择的实验变量不同外，其他条件应完全相同．在实验过程中选取两套培养皿的目的是进行对照．提高实验结果的可信度． （5）在教室打开培养皿A，暴露在空气中10分钟，让空气中的细菌真菌或孢子落入培养皿，因此相当于细菌、真菌一般培养方法中的接种，再盖上，封好．培养皿B不做任何处理，表明没有接种细菌真菌，原来又进行了高温处理，因此会发现培养皿B中的没有菌落生长．培养皿A中的有菌落生长． 故答案为： （1）D； （2）杀菌； （3）接种； （4）进行对照；
微生物学实验报告 题目：霉菌的形态观察 姓名：学号：年级班级：组别： 同组者：时间： 【实验器材】 1．菌种 曲霉( Aspergillus sp. ) ，青霉，根霉( Rhizopus sp. ) 和毛霉（Mucor sp. ）培养2~5d 的马铃薯琼脂平板培养物。 2．培养基 马铃薯培养基（简称PDA） 3．仪器或其他用具 无菌吸管，平皿，载玻片，盖玻片，U型玻棒，解剖刀，镊子，50%乙醇，20%的甘油以及显微镜等。 【目的要求】 1．学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。 2．了解四类常见霉菌的基本形态特征。 【基本原理】 霉菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝组成，其菌丝比细菌及放线菌粗几倍到几十倍。可以采取直接制片和透明胶带法观察，也可以采取载玻片培养观察法，通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。 【操作步骤】 1．培养小室的灭菌 在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一U形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖、包扎后于110℃灭菌20~30min，烘干备用。2．琼脂块制备 通过无菌操作，用解剖刀由马铃薯琼脂薄层平板上切下1cm2左右的琼脂块，将其移至培养小室的载玻片上，每片两块。 3．接种 通过无菌操作，用接种针从黑曲霉或黑根霉马铃薯琼脂平板培养物中挑取很少量孢子，接种于小室中琼脂块边缘上，将盖玻片覆盖在琼脂块上。 4．培养 通过无菌操作，在培养小室中圆滤纸片上加3~5mL灭菌的20%甘油（用于保持湿度），盖上皿盖，于28℃培养7天。 5．镜检 取出载玻片用低倍镜和高倍镜镜检。 【实验结果】
实验二细菌的染色及形态观察 一、目的要求 1、了解细菌染色的基本原理。 2、掌握细菌的简单染、革兰氏染色及其他染色方法。 3、观察和识别细菌的形态及细菌细胞的特殊结构。 二、实验说明 细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下特别是在油浸物镜下几乎与背景无反差，很难看清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的细菌及其结构。 用于细菌染色的染色剂是苯环上含有发色基团和助色基团的化合物。发色基团使化合物本身具有染色之能力，助色基团有电离特性，可以于被染物结合，使被染物着色。 染色剂有三种：酸性染色剂（电离后分子带负电荷）；碱性染色剂（电离后分子带电荷）；复合染色剂（在电离后分子不带电荷，故也称为中性染色剂）。酸性染色剂主要用于染细胞质；碱性染色剂主要用于染核和异染颗粒等细胞结构；复合染色剂主要用来染螺旋体和立克次氏体。 三、实验材料 1、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸。 2、酒精灯、接种环、载玻片。 3、石炭酸复红染色液、革兰氏染色液、荚膜染色液、鞭毛染色液（配方见附录）。
四、方法步骤 （一）简单染色法 步骤：涂片干燥固定染色水洗干燥镜检。 1、涂片在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水，以无菌操作法，从斜面上挑取少量菌种，在载玻片上和水混合后，涂成一均匀薄层。 2、干燥固定涂片让其在空气中自然干燥，有时为使其干燥得快点，也可在酒精灯上加温，但勿贤紧靠火焰。 3、固定待涂片干燥徨，手持载玻片一端，有菌膜的一面向上，在酒精灯火焰上通过几次（用手背触载玻片背面，以不烫手为宜），待冷却后，再加染料。 4、染色玻片置于水平位置。加石炭酸复红液于菌膜部位。染1-2min。 5、水洗倾去染液，斜置玻片，用很细水流的自来水冲洗（切勿使水流直接冲刷在菌膜处），直至洗下水呈无色为止。 6、干燥自然干燥或用吸水纸吸干。 7、镜检。 （二）革兰氏染色法 步骤：涂片干燥固定结晶紫染色水洗吸干 95%酒精脱色水洗吸干蕃红复染水洗 干燥镜检。 1、涂片同简单染色法 2、干燥同简单染色法。
实验二、真菌形态观察（一）1 目的：认识真菌营养体及变态，认识真菌无性和有性孢子类型。 掌握鞭毛菌亚门和接合菌亚门的主要形态特征。 掌握临时玻片的制作方法和绘图技术。 2原理：真菌营养生长阶段的结构称为营养体，当营养生长进行到一定时期， 就开始转入繁殖阶段，形成繁殖体，即子实体。营养体主要为菌丝体，主要变态有吸器、假根、菌核、子座以及根状索菌等。繁殖体主要包括无性孢子和有性孢子。 通常制作临时玻片来观察病原物在植物上着生的情况以及病原物的形态特征。 3 材料用具 番茄晚疫病菌装片，辣椒疫霉病菌装片，黑根霉装片，酵母菌悬浮液等培养真菌，植物病害组织。挑针，刀片，木块，酒精灯，火柴，载玻片，盖玻片，纱布，乳酚油，二甲苯，显微镜，吸水纸，擦镜纸。投影仪，多媒体课件等4内容与方法（自己写，包括主要内容即可）4.1 临时玻片 4．1 .1浮载剂制作临时玻片都要使用浮载剂，浮载剂的作用是防止材料干燥和集中光线，以利于显微镜下观察。浮载剂的种类很多，最常用的是水和乳酚油，其次是甘油、甘油明胶，希尔浮载剂等。 （1 水：水浮载剂一般使用蒸馏水，应用最为方便。对细菌、真菌孢子等无不利影响。观察细菌、线虫活动，真菌孢子萌发都必须用水作浮载剂。测量真菌菌丝直径和真菌孢子大小时也以水作浮载剂为 好。但是用水作浮载剂制片时较易形成气泡，制成的玻片也易干燥而不能保存。 (2乳酚油：乳酚油长期以来一直是真菌学和植物病理学工作者习惯使用的浮载剂。乳酚油的组成如下：苯酚结晶(加热熔化20ml，乳酸20ml，甘油 40ml、水20ml。各成分混合后成为油状粘稠液体，具杀死和固定病原物的作
用，可使干瘪的真菌孢子膨胀复原，还可使病组织变得略为透明。如在乳酚油中加入0．05--0．1％的染料制成棉蓝乳酚油，藏红乳酚油等，还能使菌丝或孢子略微着色，更便于观察。用乳粉油制作的玻片可长期保持湿润不会干燥，它的缺点中，很难精确测量病原物的大小。另外，乳酚油能与许多封固剂起作用，盖玻片也易滑动，不易封固 4．1.2 临时玻片的制作临时玻片制作方法很多，如涂，撕、粘，挑和切片等，可根据病原物的类型选择使用。 (1涂抹法，细菌和酵母菌的培养物常用涂抹法制片。将细菌或酵母菌的悬浮液均匀地涂在洁净的载玻片上，在酒精灯火焰上烘干，固定，再加盖玻片封固。加盖玻片前还可进行染色处理，使菌体或鞭毛着色而易于观察。 (2 撕取法，用小金属镊子仔细撕下病部表皮或表皮毛制成临时玻片。此法可以观察着生在寄主或基物表面的菌丝和孢子，寄主表皮细胞内的真菌菌丝、吸器和休眠孢子囊堆，以及病毒病的内含体等。 试以小麦白粉病叶，烟草花叶病病叶，蚕豆花叶病叶，受禾谷多粘茵为害的小麦病根等为材料，用撕取法制作临时玻片，观察病原物的形态。 (3粘贴法：将塑料胶带纸剪成边长5mm左右的小块，使胶面朝下贴在病部，轻按一下后揭下制成玻片。粘贴法用于菌丝或子实体着生于病组织或基物衷面的材料制片，特别适用于观察分生袍子在分生抱子梗上的着生情况。 (4 挑取法，采用挑取法可以直接用挑针从病组织或基物(如培养基