第6课时土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
[学习导航] 1.通过分析具体培养基的配方，归纳选择培养基的选择作用，理解筛选微生物的原理。2.结合实验设计，分析微生物数量测定实验中产生偏差的原因及解决措施，学会微生物的计数方法，并对培养结果进行分析和评价。
[重难点击] 1.研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。2.能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数问题。
一、研究培养基对微生物的选择作用
1.筛选菌株
(1)自然界中目的菌株的筛选
①原理：根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
②实例：能产生耐高温的Taq DNA聚合酶的Taq细菌就是从热泉中筛选出来的。
(2)实验室中目的菌株的筛选
①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
②实例：从土壤中筛选能分解尿素的细菌。
③方法：利用选择培养基进行微生物的筛选。
2.选择培养基
(1)概念：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
(2)举例：筛选土壤中分解尿素的细菌的选择培养基是以尿素为唯一氮源，按物理性质归类为固体培养基。
1.筛选分解尿素的细菌的选择培养基
下面是本课题使用的培养基的配方，请分析：
(1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？
答案碳源是葡萄糖，氮源是尿素。
(2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择的？
答案该选择培养基的配方中，尿素是培养基中的唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。
(3)为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？
答案分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可将尿素分解成氨，从而为微生物提供氮源。
2.设计对照实验
(1)如何设计对照实验验证该选择培养基的确筛选到了能分解尿素的细菌？
答案增设牛肉膏蛋白胨基础培养基并进行涂布平板操作，如果牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，则说明选择培养基的确起到了筛选能分解尿素的细菌的作用。
(2)如何设计对照实验验证所用的选择培养基没有受到污染？
答案设置一个未涂布平板的能筛选分解尿素的细菌的选择培养基。
归纳总结选择培养基的分类
(1)利用营养缺陷型选择培养基进行的选择培养：通过控制培养基的营养成分，使营养缺陷型微生物不能正常生长。
(2)利用化学物质进行的选择培养：在完全培养基中加入某些化学物质，利用加入的化学物质抑制某些微生物的生长，同时选择所需的微生物。
(3)利用培养条件进行的选择培养：改变微生物的培养条件(如高温、特殊pH等)，筛选特定微生物。
1.下列有关微生物筛选的叙述中，不正确的是()
A.用全营养牛肉膏蛋白胨培养基筛选大肠杆菌
B.用高NaCl的培养基筛选抗盐突变菌株
C.含酚红的尿素培养基筛选鉴别出分解尿素的菌株
D.利用高温条件筛选耐热的Taq细菌
答案 A
解析全营养牛肉膏蛋白胨培养基常用于大肠杆菌的培养，该培养基对微生物无选择作用，A项错误。抗盐突变菌株具有耐高盐的能力，因此可以利用高NaCl的选择培养基进行选择培养，B项正确。分解尿素的菌株会分解尿素形成氨，使培养基pH升高，因此可以利用含酚红的尿素培养基筛选鉴别出分解尿素的菌株，C项正确。利用高温条件可以筛选耐热的Taq 细菌，D项正确。
2.下表是微生物培养基的成分。下列有关说法错误的是()
A.此培养基可用来培养自养型微生物
B.此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源
C.若除去①，此培养基可培养圆褐固氮菌
D.培养基中若加入氨基酸，则它可充当碳源、氮源和生长因子
答案 C
解析由题知，该培养基成分中含有水、无机盐、氮源，但不含含碳有机物，可用来培养自养型微生物，选项A、B均对；圆褐固氮菌同化类型为异养型，培养基中必须存在含碳有机物，所以该培养基不能用来培养圆褐固氮菌，C错。
技巧链接选择培养基的常见类型
(1)分离微生物所用的选择培养基一定是固体培养基，因为菌落只能在固体培养基上形成。
(2)常见的选择培养基
①加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
②加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。
③无氮源培养基可以分离固氮微生物。
④以石油为唯一碳源的培养基，可以分离能消除石油污染的微生物。
⑤将培养基放在高温环境中培养，可以分离耐高温的微生物。
二、进行微生物数量的测定
1.统计菌落数目
(1)方法：活菌计数法、显微镜直接计数法。
(2)统计依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(3)操作
①设置重复组，增强实验的说服力与准确性。
②为保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
③统计的菌落数往往比活菌实际数目低。
(4)计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
2.设置对照
(1)对照实验：是指除了被测试条件以外，其他条件都相同的实验。
(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。例如，为了确认培养基是否被杂菌污染，需以不进行接种的培养基培养作为空白对照。
3.实验操作流程
(1)土壤取样
①取样原因：土壤有“微生物的天然培养基”之称，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。
②土壤要求：富含有机质，pH接近中性且潮湿。
③取样部位：距地表约3～8 cm的土壤层。
(2)样品稀释
①稀释原因：样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目。
②稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间，便于计数。
(3)微生物的培养与观察
①培养：根据不同微生物的需要，控制适宜的培养温度和培养时间。
②观察
a.观察方法：每隔24 h统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
b.菌落的特征：包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等。
(4)菌种鉴定
①原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强。
②方法：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，若指示剂变红，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
4.操作提示
(1)无菌操作
①取土样的用具在使用前都需要灭菌。
②实验操作均应在火焰旁进行。
(2)做好标记：本实验使用的平板和试管比较多，为避免混淆，使用前应标明培养基的种类、培养日期以及平板上培养样品的稀释度等。
(3)制定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先制定计划，以便提高工作效率。
下面是土壤中尿素分解菌的分离与计数的实验流程示意图，请结合教材提供的资料分析回答下列问题。
1.试写出分离土壤中分解尿素的细菌的实验流程
答案土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物培养→观察并记录结果→细菌计数。
2.统计菌落数目
甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
(1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？
答案不真实。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下涂布3个平板，统计结果后计算平均值。
(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？
答案不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果不一致的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地舍弃后进行计数。
(3)某同学在三种稀释度下吸取0.1 mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到以下的数据，试计算1 g样品的活菌数。
答案105的稀释度下取0.1 mL涂布的三个平板上的菌落数在30～300之间，计算其平均值为(212＋234＋287)/3≈244。进一步可以换算出 1 g样品中活菌数为(244÷0.1)×105＝2.44×108。
(4)为什么统计的菌落数比活菌的实际数目低？
答案当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
3.对照实验设计的分析
分析教材P22“设置对照”中的实例，探讨下列问题：
(1)在A同学确定自己操作无误的情况下，A同学得出的菌落数多于其他同学的原因可能有哪两种？
答案可能是他选择的土壤样品不同于其他同学；也可能是培养基受到了污染或操作失误。
(2)如何设计对照实验帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素？
答案①其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A同学操作无误；如果结果不同，证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题；②将A同学配制的培养基在不加土样的情况下培养作为空白对照，以判断培养基是否受到污染。
4.微生物数量测定的实验设计
(1)为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？
答案土壤中各种微生物的数量是不同的，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离。
(2)本实验中应如何统计培养基上生长的菌落数？
答案每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
(3)实验中的无菌操作主要有哪些？
答案①培养基、锥形瓶、试管、铲子、信封等，需要进行灭菌。②称取土壤要在火焰旁进行。③稀释土壤溶液的每一步操作都要在火焰旁进行。
归纳总结分离尿素分解菌操作中的注意事项
(1)在实验操作中，每个步骤都要注意无菌操作，以防培养基被污染，影响实验效果。
(2)样品稀释液的最佳浓度为获得每个平板上有30～300个菌落，这个稀释度细菌一般为104、105、106倍稀释液，放线菌一般为103、104、105倍稀释液，真菌一般为102、103、104倍稀
释液。
(3)为排除非测试因素(培养基)的干扰，实验需设置牛肉膏蛋白胨培养基进行空白对照。
(4)每一稀释倍数的菌液都至少要涂布3个平板，作为重复实验，求其平均值，若其中有菌落数与其他平板悬殊过大的，需要对该平板重新制作。
3.如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析下列叙述正确的是()
A.4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数一定恰为5号的10倍
B.5号试管的结果表明每克该土壤中的菌株数目为1.7×108个
C.在用移液管吸取菌液进行梯度稀释时，可用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与无菌水充分混匀
D.某一稀释度下至少涂3个平板，该实验方法统计得到的结果常会比实际活菌数目高
答案 C
4.自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。
(1)实验步骤
①制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。
②为了得到更加准确的结果，应选用法接种样品。
③适宜温度下培养。
(2)结果分析
①测定大肠杆菌数目时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，与事实更加接近的是。
A.一个平板，统计的菌落数是230
B.两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240
C.三个平板，统计的菌落数分别是400、212和256，取平均值289
D.四个平板，统计的菌落数分别是210、260、240和250，取平均值240
②一同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上菌落数的平均值为212，那么每毫升样品中的菌落数约是(涂布平板时所用的稀释液体积为0.2 mL) 。
③用这种方法测定菌体密度时，实际活菌数量要比测得的数量(填“多”或“少”)，因为
。
问题导析(1)因为题中操作的目的是对大肠杆菌进行数量的测定，所以接种的方法是稀释涂布平板法。
(2)测定活菌数量时，选择的平板越多误差越小，且选择的平板要能形成30～300个菌落。
(3)所做的多个平板中，如果其中一个平板中菌落的数目明显多于或少于其他几个平板，则说明该平板不符合要求，应重做或舍弃。
答案(1)②稀释涂布平板(2)①D②1.06×109个
③多当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
解析(1)若对大肠杆菌进行计数，则需要用稀释涂布平板法接种样品。(2)①应选取多个菌落数相差不大的平板进行计数，取其平均值。②212÷0.2×106＝1.06×109(个)。③因为一个菌落可能由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。
一题多变
(1)如果某同学的稀释倍数仅为104，则测定的数值要比题中测定的数值高还是低？为什么？答案低。因为稀释倍数太低，则大部分菌落是由多个细菌繁殖而成，所以测定的菌落的数值要偏低。
(2)第(2)问第①小题C项中菌落数为400的平板不符合要求，试分析该平板中菌落数目多于其他平板的可能的原因。
答案①培养基被污染，一些菌落是由杂菌繁殖而成的；②接种过程中由于操作不当感染了杂菌；③取菌液时没有摇晃，导致所取菌液中细菌个体浓度偏大等。
技巧链接用稀释涂布平板法计数微生物的方法
(1)稀释涂布平板操作要求：按照平行重复的原则，每一稀释度的菌液涂布3个或3个以上的平板。
(2)计数的时机：当各平板上菌落数目稳定时进行计数。
(3)选择可用于计数的平板：选择菌落数在30～300之间的平板(相同稀释度的平板均符合该特点)进行计数，然后取平均值。
1.选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为()
A.伊红美蓝培养基、含青霉素的培养基
B.含青霉素的培养基、含氨的无机培养基
C.含氨的无机培养基、含青霉素的培养基
D.含青霉素的培养基、伊红美蓝培养基
答案 B
解析酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素能够抑制细菌生长，但不能够抑制真菌生长。硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸所释放的能量把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无机培养基可进行选择培养。
2.下列操作步骤顺序正确的是()
①土壤取样②称取10 g土样，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1 mL土壤溶液进行平板涂布④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度
A.①→②→③→④
B.①→③→②→④
C.①→②→④→③
D.①→④→②→③
答案 C
3.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是()
A.筛选出能分解尿素的细菌
B.对分离的菌种作进一步鉴定
C.作细菌的营养成分
D.如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素
答案 B
解析筛选出能分解尿素的细菌用选择培养基即可，不需要加指示剂。加入指示剂的培养基，目的是对要分离的菌种作进一步的鉴定。
4.从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的是()
A.将土壤用无菌水稀释，制备103～106倍的土壤稀释液
B.将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上
C.用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌
D.从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株
答案 C
解析用加入酚红指示剂的鉴别培养基可以鉴别分解尿素的细菌。
5.尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如图所示。请分析回答下列问题：
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL。
(1)此培养基(填“能”或“不能”)用于植物组织培养，理由是。
(2)培养基中加入尿素的目的是，这种培养基属于培养基。
(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的和，实验需要振荡培养，原因是。
(4)图中将细菌转到固体培养基上时，可采用或在含尿素的培养基上接种，获得单菌落后继续筛选。初步筛选出来的菌种还需要用生化的方法作进一步的鉴定：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入指示剂，接种并培养初步筛选的菌种，若指示剂变成色，则可准确说明该菌种能够分解尿素。
(5)在实验中，下列材料或用具需要灭菌的是，需要消毒的是。(填序号)
①培养细菌用的培养基与培养皿②玻棒、试管、锥形瓶和吸管③实验操作者的双手
(6)实验结束后，使用过的培养基应该进行处理后，才能倒掉。
答案(1)不能缺少植物激素(或缺少植物需要的一些营养成分)(2)筛选目的菌选择(3)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(4)平板划线法稀释涂布平板法酚红红(5)①②③(6)灭菌
解析(1)植物组织培养的培养基中需要含有氮、磷、钾及锌、铜、钼、铁等元素，需要蔗糖为植物细胞提供能量，还需要细胞分裂素和生长素等植物激素。(2)该培养基中尿素是唯一的氮源，只有能利用尿素的微生物才能生长，属于选择培养基。(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的尿素和葡萄糖，分解尿素的微生物是需氧型微生物，所以在培养过程中需振荡。(4)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养利用尿素的细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，由此可准确地鉴定该种细菌能够分解尿素。(5)微生物培养时，一切环境、物质、用具、器材都要消毒或灭菌。(6)为避免实验后培养基中的微生物污染环境，使用过的培养基必须经过灭菌处理后才能丢弃。
课时作业
[学考达标]
1.在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做()
A.鉴别培养基
B.加富培养基
C.选择培养基
D.基础培养基
答案 C
解析选择培养基可选择目标微生物，同时抑制或杀死其他微生物。
2.可以分离并鉴定出分解尿素的细菌的方法是()
A.以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂
B.以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂
C.以尿素为唯一氮源的培养基中加入刚果红试剂
D.以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂
答案 A
解析尿素在尿素分解菌的作用下分解产生氨和CO2，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，
酚红指示剂变红。
3.分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()
①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐
⑧不加硝酸盐
A.①③⑤⑦
B.②④⑥⑧
C.①③⑤⑧
D.①④⑥⑦
答案 C
4.产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是()
A一个细菌、液体培养基
B.许多细菌、液体培养基
C.一个细菌、固体培养基
D.许多细菌、固体培养基
答案 C
解析在液体培养基中生活的细菌，无论是一个还是许多，肉眼都是看不见的。在固体培养基上生活的细菌，当数目较少时也是看不见的。当固体培养基上有许多细菌并且集中在较小范围内时，肉眼可见。而菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体，形成于固体培养基上，有一定的形态结构，所以肉眼可见。同种细菌形成的菌落，形态结构是相同的。如果有许多细菌形成的菌落，就不可能有比较标准的形态，因为这些细菌不可能是同一种细菌，也不可能在培养基的同一个点上。
5.下列关于土壤取样的叙述，错误的是()
A.土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤
B.先铲去表层土，选取距地表3～8 cm左右的土壤层
C.取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌
D.应在火焰旁称取土壤
答案 C
解析土壤取样过程中，为防止杂菌污染，取样用的小铁铲和信封在使用前必须灭菌。
6.某同学对101、102、103倍稀释液中的细菌进行计数，平均菌落数分别为2 760、295和16，则样品中菌落总数为(所用稀释液体积为0.1 mL)()
A.2.76×104个/mL
B.2.95×105个/mL
C.4.6×104个/mL
D.3.775×104个/mL
答案 B
解析为保证结果准确，一般选择菌落数在30～300间的平板进行计数，因此只有295符合要求，其稀释倍数为102，所用稀释液体积为0.1 mL，套入计算公式得样品中菌落总数为2.95×105个/mL。
[高考提能]
7.在“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”课题中，以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是()
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②从土壤中分离出能够分解氨的细菌③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌④统计所取土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌
A.①③
B.②④
C.①②
D.③④
答案 A
解析从土壤中分离分解尿素的细菌并对其计数，统计的是每克土壤样品中含多少分解尿素的细菌，用公式“每克样品中菌株数＝(C/V)×M”进行推测，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
8.给无氮培养基接种土壤稀泥浆的正确方法是()
A.打开培养皿盖，取一根接种环沾取少许稀泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上
B.取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀泥浆，略微打开培养皿盖，在培养基的表面轻点
C.打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点
D.略微打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌，冷却后沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点
答案 D
解析接种过程中要防止外来杂菌的入侵，左手将培养皿打开一条缝隙，右手将接种环在火焰上灭菌，冷却后沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点，用未冷却的接种环沾取稀泥浆会杀灭菌种。
9.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于37 ℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析，以下叙述不正确的是()
A.链霉素能阻止结核杆菌的生长
B.链霉素对结核杆菌比对霍乱菌更有效
C.链霉素对结核杆菌比对伤寒菌更有效
D.链霉素可以用于治疗伤寒病人
答案 D
解析从图中可以看出，这是含有链霉素的选择培养基，接种的三种细菌中，霍乱菌和结核杆菌都可以被杀灭，并且链霉素对结核杆菌杀灭的有效程度大于对霍乱菌的有效程度，而伤寒菌照常生长不受影响，所以选项D错误。
10.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()
A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨固体培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上
C.将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养
D.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
答案 D
解析检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，A项正确；取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于不同的平板上，B项正确；接种后要将培养皿倒置，置于37 ℃恒温培养，C项正确；在确定对照组无菌后，应选择菌落数在30～300之间的平板进行计数，D项错误。
11.广东省是我国甘蔗生产区之一。甘蔗是一种高光效的C4植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗→榨汁(蔗糖)―→酵母发酵→蒸馏→成品(燃料酒精)。
(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。
步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意和，加琼脂后灭菌，制成固体平板。
步骤3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。
步骤4：根据 ，筛选出突变菌。
(2)上述步骤2、3和4的依据分别是 。
答案 (1)添加高浓度蔗糖(葡萄糖) 调低pH 是否能在选择培养基上生长 (2)提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性
解析 (1)要筛选耐高糖和耐酸的菌种，培养基中必须加入高浓度蔗糖和调低pH ，能在选择培养基上生长的即为所需菌种。(2)步骤2是给其提供高糖或酸性的筛选环境；步骤3是为了获得单菌落；步骤4是根据能生长的菌株具有耐高糖和耐酸的特性筛选出突变菌。
12.请回答下列有关微生物的问题：
(1)微生物的分布：微生物主要分布在富含 的土壤表层；不同微生物对pH 的要求不同，细菌常生活在酸碱度 的潮湿土壤中。
(2)微生物的消毒和灭菌：在微生物培养中，对培养基常用 法进行灭菌。如果要检测灭菌是否彻底，可以采用的方法是 。
(3)微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生酵母菌发酵产生酒精，请写出该过程的化学反应式： 。 在果醋制作时，运用醋酸菌在 和糖源充足的条件下，将糖分解成醋酸。
(4)微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是 和 。
(5)微生物的鉴定：为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的 (选择、鉴别)培养基中加入 指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变 色。
答案 (1)有机质 接近中性 (2)高压蒸汽灭菌 将灭过菌的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生 (3)C 6H 12O 6――→酶
2C 2H 5OH ＋2CO 2 有氧 (4)平板划线法 稀释涂布平板法 (5)选择 酚红 红
解析 (1)微生物主要分布在有机质丰富的土壤表层，细菌常生活在酸碱度接近中性的潮湿土壤中。(2)对培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌；可通过在适宜的温度下放置灭过菌的培养基，看其是否有菌落产生来确定培养基灭菌是否彻底。(3)醋酸菌为需氧型微生物。(4)最常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(5)用选择培养基筛选目的菌——尿素分解菌，加入酚红指示剂，若存在尿素分解菌，指示剂将变红色。
[真题体验]
13.(2016·四川，10)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA
部分序列。请据图回答下列问题：
(1)图中选择培养基应以为唯一氮源；鉴别培养基还需添加作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色。
(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是，每克土壤样品中的细菌数量为×108个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较。
(3)现有一菌株产生的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示的位置增加了70个核苷酸，使图乙序列出现终止密码(终止密码有UAG、UGA和UAA)。突变基因转录的mRNA中，终止密码为，突变基因表达的蛋白质含个氨基酸。答案(1)尿素酚红红
(2)稀释涂布平板法 1.75少(3)UGA115
14.(2015·浙江自选模块，17节选)某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，对该酶菌株进行筛选，其流程如下图所示。
土样中的菌种筛选→菌株鉴定→优良菌株扩大培养→植酸酶提纯→植酸酶固定化→植酸酶特性分析
请回答下列问题：
(1)土壤悬液首先经80 ℃处理15分钟，其目的是筛选出。
(2)在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行，然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到，其周围出现透明水解圈，圈的直径大小与强弱相关。
(3)筛选获得的菌株经鉴定后，将优良菌株进行液体扩大培养。培养时需要振荡，其主要目的是。液体培养基与固体培养基相比，不含有的成分是。
答案(1)耐高温菌株(2)稀释单菌落植酸酶的活性(3)供氧琼脂
解析(1)土壤悬液首先经80 ℃处理15分钟，杀死不耐高温的菌株，筛选出耐高温菌株。(2)将处理过的土壤悬液在无菌条件下稀释，降低细菌浓度，以便得到相互分离的单菌落。用含
有植酸钠的培养基培养细菌，植酸酶活性高的菌株分解植酸钠多，其周围出现较大的透明水解圈。(3)菌株的扩大培养一般用液体培养基，它与固体培养基成分基本相同，但不含琼脂。用液体培养基培养优良菌株时，需要振荡，以便使液体培养基底部有较高的含氧量，有利于细菌生长繁殖。
专题二微生物的培养与应用 课题一微生物的实验室培养 ·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 ·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。 ·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。 ·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。 ·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。 ·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。 ·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。 ·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件 ·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
课题1 植物芳香油的提取
1．知道植物芳香油的来源与提取方法。(重点) 2．了解提取玫瑰精油和橘皮精油的实验流程。(难点)
一、植物芳香油的来源及特点 1．来源 植物芳香油可以从植物中提取，如玫瑰花用于提取玫瑰油，樟树树干用于提取樟油。 2．特点 (1)具有很强的挥发性。 (2)成分比较复杂，主要包括萜类化合物及其衍生物。 二、植物芳香油的提取方法 1．不同方法的选用依据：植物原料的特点。 2．提取方法 (1)水蒸气 蒸馏法 ? ? ? ? ? ? ?原理：利用水蒸气将挥发性较强的植物芳 香油携带出来，形成油水混合物，冷 却后，混合物又会重新分出油层和水层 分类 ? ? ?依据：蒸馏过程中原料放置的位置 类型：水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏局限性：由于水中蒸馏会导致原料焦糊和 有效成分水解等问题，因此对有些原 料不适用 (2)压榨法：主要适用于柑橘、柠檬芳香油的制备。
(3)萃取法??????? 原理：植物芳香油不仅挥发性强，而且易溶于有机溶剂步骤：将粉碎、干燥的植物原料用有机溶剂浸泡 ↓ 芳香油溶解于有机溶剂 ↓ 蒸发出有机溶剂注意事项：有机溶剂必须事先精制，除去杂质 [合作探讨] 探讨1：水溶性的有机溶剂可以从水溶液中萃取某物质吗？ 提示：不能。萃取物能溶于有机溶剂，由于有机溶剂溶于水，导致水和有机溶剂不能分层，无法萃取，达不到分离的效果。 探讨2：植物芳香油的哪些特点有助于将其从大量植物组织中提取出来？ 提示：芳香油具有易于挥发，难溶于水，易溶于有机溶剂等特点。 探讨3：橘皮精油的提取能否选用水中蒸馏法？为什么？ 提示：不可以。因为水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题。 [思维升华] 1．植物芳香油各种提取方法的比较 方法 水蒸气蒸馏法 压榨法 萃取法
高二生物选修一专题一二测试卷 学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________ 一、选择题（35x2=70） 1．关于果酒的制作过程，下列叙述中正确的是 A．先去烂子粒和枝梗，再用清水冲洗掉污物 B．发酵的温度维持在18～25 ℃最好 C．发酵过程中需要适时打开瓶盖放气，以防止发酵瓶破裂 D．需要不断地充入氧气 2．下列关于果酒和果醋制作的叙述，正确的是 A．在制作果酒和果醋实验中，一直保持厌氧环境 B．当氧气、糖源充足时，醋酸菌能将果汁中的糖发酵为醋酸 C．由于酵母菌的繁殖能力很强，不需对所用装置进行消毒 D．温度对酵母菌酒精发酵的影响很大，而对醋酸菌的发酵影响不大 3．对制葡萄酒和葡萄醋发酵条件的控制中，错误的是 A．葡萄汁装入发酵瓶时，要留有的空间 B．用清水冲洗葡萄除去污物，应反复多次冲洗 C．制葡萄酒的过程中，除在适宜的条件下，时间应控制在10～12d D．制葡萄醋的温度要比葡萄酒的温度高些，但时间一般控制在7～8d左右 4．下列关于果酒和果醋的制作原理、发酵过程的叙述中，错误的是 A．果酒和果醋的发酵菌种不同，但代谢类型相同 B．制作果酒和果醋时都应用体积分数为70%的酒精对发酵瓶消毒 C．变酸果酒的表面观察到的菌膜可能是醋酸菌的菌落 D．果酒和果醋的制作可用同一装置，但需控制不同发酵条件 5．下列叙述错误的是 A．酵母菌在无氧条件下利用葡萄汁产生酒精 B．醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸 C．泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸发酵 D．腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪 6．与醋酸发酵有关的微生物是 A．一种细菌和另一种细菌 B．丝状真菌和细菌 C．酵母和细菌 D．酵母和丝状真菌 7．下列对腐乳实验操作过程的叙述，错误的是 A．前期发酵，将笼屉中的温度控制在15～18 ℃ B．豆腐块分层摆放，逐层加盐，层数加高盐量不变 C．卤汤中的酒量应控制在12%左右 D．腌制腐乳的玻璃瓶冲洗后要用沸水消毒，装瓶后密封，瓶口通过酒精灯火焰8．某同学在制作腐乳的过程中，发现豆腐腐败变质，下列不属于其原因的是A．用盐腌制时，加盐量太少 B．用来腌制腐乳的玻璃瓶，没有用沸水消毒 C．制作卤汤时，料酒加的量较多 D．装瓶后，没有将瓶口密封 9．下列关于腐乳制作的叙述，错误的是 A．毛霉可利用其体内的酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸
生物选修一全国高考近六年试题汇总
选修一生物技术实践历年全国卷（2010-2016）考题汇总 （2011年）39．【生物——选修1：生物技术实践】（15分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题： （1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。 （2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。 （3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈说明该菌株的降解能力。 （4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 39.【答案】（1）原油选择（2）平板划线法稀释涂布平板法（3）强（4）干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰 （2013年）39.[生物——选修1：生物技术实践] 临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题： （1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本借种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。 （2）取该单菌落适当稀释，用______法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。 （3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素 B_____；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。 （4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。 答案：（1）划线稀释涂布（或涂布）（2）涂布（3）敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A弱耐药菌（4）A （2012年）39．（15分）为了探究6-BA和IAA对 某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组 在ＭＳ培养基中加入6-BA和IAA，配制成四种培养基 （见下表），灭菌后分别接种数量相同、生长状态一 致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条件下培养一段时
高中生物选修一生物技术实践 专题一传统发酵技术的应用 课题1 果酒和果醋的制作 1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。 2、有氧发酵：醋酸发酵谷氨酸发酵·无氧发酵：酒精发酵乳酸发酵 3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌·酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要) 分裂生殖孢子生殖 4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O6＋6O2→6CO2＋6H2O 5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。C6H12O6→2C2H5OH＋2CO2 6、20℃左右最适宜酵母菌繁殖酒精发酵时一般将温度控制在18℃-25℃ 7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在发酵过程中,随着酒精 浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。 8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂 9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙 醛，再将乙醛变为醋酸。2C2H5OH＋4O2→CH3COOH＋6H2O 10、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入 氧气，也会引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。③有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。 11、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋） 12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反 应呈现灰绿色。先在试管中加入发酵液2ｍL，再滴入物质的量浓度为3mol/L的H2SO43滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观察颜色 13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵 时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲 的胶管与瓶身相连接，其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下的目的 是有利于二氧化碳的排出。使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时， 应该充气口连接气泵，输入氧气。 疑难解答 （1）你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？ 应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。 （2）你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染？ 如：要先冲洗葡萄，再除去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗干净，并进行酒精消毒；每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。 （3）制葡萄酒时，为什么要将温度控制在18～25℃？制葡萄醋时，为什么要将温度控制在30～
专题二课题1 一、选择题 1．菌种鉴定的重要依据是(B) A．细菌的大小、形状和颜色B．菌落的大小、形状、颜色 C．有无鞭毛D．培养基的不同 [解析]不同种类的细菌所形成的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定特征，所以，每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。单个的细菌用肉眼是看不见的，故细菌的个体特征不能作菌种鉴定的依据。 2．下列生物与灭菌无关的是(C) A．接种前用火焰灼烧接种环B．接种前用酒精擦拭双手 C．将平板倒置，放入培养箱中培养D．接种在酒精灯的火焰旁完成 [解析]接种用具、器皿、空气中都充满了微生物，都有污染的可能，必须严格地消毒灭菌。A、B、D都是实验操作过程中灭菌或防止杂菌污染的措施。将平板倒置，放入培养箱中培养与灭菌无关。 3．下列关于平菇培养的操作程序，正确的是(D) A．配制牛肉膏蛋白胨培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养 B．配制牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养 C．配制棉子壳培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养 D．配制棉子壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养 [解析]平菇的代谢类型属于异养型，需要提供现成的有机物才能成长。在题目给出的选项中，B选项是实验中培养细菌等的方法，D选项则是人们常用的培养平菇的方法，为了避免杂菌污染，应在接种前先进行灭菌处理。 4．下图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1,2,3,4,5。下列操作方法正确的是(D) A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌 B．划线操作必须在火焰上进行
C．最可能得到所需菌落的区域是1 D．在1,2,3,4,5区域中划线前后都要对接种环灭菌 [解析]操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌；划线操作必须在火焰旁进行，而不是火焰上；最可能得到所需菌落的区域是5。 5．制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，关于倒平板的具体描述正确的是(C) ①待培养基冷却至40℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板 ②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞 ③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰 ④用左手的拇指和食指完全打开皿盖 ⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 ⑥等待平板冷却5～10s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上 A．①③④⑤B．④⑤⑥ C．③⑤D．①②④⑥ [解析]琼脂是一种多糖，在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不能及时操作，琼脂会凝固。无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基。 6．(2017·西宁四中高二月考)下列有关细菌培养的叙述，正确的是(D) A．在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌 B．在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长 C．向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长 D．在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动 [解析]菌落是指单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，所以单个菌落中通常只有一种细菌，A错误；青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成，所以青霉素培养基抑制细菌生长而促进真菌生长，B错误；破伤风杆菌的代谢类型属于异养厌氧型，向其培养基中通入氧气会抑制其生长，C错误；在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动，D正确。 7．平板冷凝后要将平板倒置，其意义是(D) A．利于大肠杆菌的接种B．防止杂菌污染 C．利于培养基的冷却D．防止皿盖冷却水倒流入培养基 [解析]平板倒置可避免凝集在皿盖上的水流入培养基。
高中生物选修一专题2微生物的培养与应用经典练习 1、（2014新课标2,39,15分）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题： （1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；然后，将水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为。 （2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的 是 。 （3）示意图A和B中，表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 （4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比
静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高的利用率。 【答案】 (1)检测培养基平板灭菌是否合格 (2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 (3)B (4)溶解氧营养物质 2、（2014理综，10,11分）有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。 ⑴微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、______________四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是________________________________________。 ⑵与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和________________，这些植物激素一般需要事先单独配制成___________保存备用。 ⑶纯化菌株时，通常使用的划线工具是____________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_________________________________________。
精心整理 专题二微生物的培养与应用 课题一微生物的实验室培养 ·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 ·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。 ·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。 ·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。 ·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。 ·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHC3O等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）
2019年－9 月
精心整理蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。 只有固氮微生物才能利用N2 。 ·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。无菌技术除 了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目 的？ 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 ·消毒与灭菌的区别 消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。 灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。 灭菌方法： ①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法； ②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱； 2019 年－9月
专题一课题1果酒和果醋的制作 (二）果醋制作的原理 ⑴当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成。 ⑵当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为，再变为。 反应式为：。 （三）、果酒和果醋的制作过程 挑选葡萄→冲洗→→→ ↓↓ 果酒果醋 （二）、果酒和果醋的发酵装置 1、装置中的充气口、排气口和出料口分别有哪些作用？ 2、为什么排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接？ 3、发酵瓶为什么要留有1/3的空间？ 4、装置的使用：在进行酒精发酵时应关闭口，在进行果醋发酵时，充气口应连续充气，输入 专题一课题2 腐乳的制作 (一)制作腐乳的实验流程: (二)毛霉的生长:
1.腐乳制作时,温度应控制在 ,并保持一定的湿度。自然条件下毛霉的菌种来自 中的。 一、腐乳的制作过程 1、前期发酵——让豆腐上长出毛霉 （1）前期发酵的作用是什么？ （2）前期发酵的温度为什么为15～18 ℃？ 2、后期发酵——加盐腌制、加卤汤装瓶、密封腌制 专题一课题3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 （二）亚硝酸盐含量的测定 1.原理 （1）在条件下，亚硝酸盐与发生反应后，与结合形成色染料。 （2）将显色反应后的样品与已知浓度的进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量 2.测定方法：比色法 3.测定步骤 配制溶液→→制备样品处理液→ 3、制备样品处理液 称取泡菜榨汁→加入蒸馏水、提取液、氢氧化钠过滤→加入氢氧化铝乳液问题2：提取剂、氢氧化钠、氢氧化铝乳液的作用？ 5、测定结果：泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量的变化
、 （2）消毒：是指使用的物理或化学方法杀死物体表面或内部的微生物，（不包括和）常用的方法有：、、 灭菌：是指使用的理化因素杀死物体内外的微生物。包括芽孢和孢子 常用的方法有、、， 此外，实验室里还用或进行消毒。 三、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 （1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤： →→→→倒平板 四、纯化大肠杆菌 （1）微生物接种的方法中最常用的是和。 五、菌种的保存 为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用法；对于需要长期保存的菌种，可以采用法。 课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．尿素只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。土壤中的微生物之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成。 2．设置对照：主要目的是排除实验组中因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
专题二练习 一、选择题 1．微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是（）A．细菌的大小、形状、颜色 B．菌落的大小、形状、颜色 C．有无鞭毛 D．培养基的不同 2．下列4种生物中，哪一种生物的细胞结构与其他3种生物的细胞有明显的区别（）A．酵母菌B．乳酸菌C．青霉菌D．蘑菇 3．下列有关平板划线接种法的操作错误的是（） A．将接种环放在火焰上灼烧 B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液 C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连 4．细菌培养基通常在121℃压力锅中灭菌。如果只有在100℃的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活（） A．大肠杆菌B．一种青霉菌 C．枯草芽孢杆菌D．鼠伤寒沙门氏菌 5．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（） A.接种针、手、培养基 B.高压锅、手、接种针 C.培养基、手、接种针 D.接种针、手、高压锅 6．关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是（） Ａ．操作顺序为计算、称量、熔化、倒平板、灭菌 Ｂ．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 Ｃ．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板 Ｄ．待平板冷却凝固约5~10min后将平板倒过来放置 7.某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是（） A.培养基分装到培养皿后进行灭菌 B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D.培养过程中每隔一周观察一次 8．获得纯净培养物的关键是（） A.将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 B.接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养 D.防止外来杂菌的入侵
《微生物发酵及其应用》教学设计与案例 目标的确定 与本节对应的课程标准具体内容是“举例说出发酵与食品生产”，而本节标题定为《微生物发酵及其应用》。事实上，微生物发酵在现实生活中远远超出了食品工业的范畴。因此，本节内容一开始时并没有局限于食品生产，而是从比较大的视角──发酵工程史话引入，然后探秘发酵过程，再举例说出发酵与食品生产的关系。为此，本节主要教学目标确定为：通过了解发酵工程发展的历史，体验科学、技术、社会三者间的关系；说出微生物发酵生产的基本过程；举例说出微生物发酵与食品生产的关系；关注与微生物发酵有关的社会问题等。教学设计思路 教学实施的程序 教学 内容 教学活动教学手段和方法预期目标 1.复习提问，引入新课。 师：同学们在初中时学习过微生物发酵与食品， 我们的日常生活中也接触到许多发酵食品，请同学们思 考这样一个问题：哪些食品是由微生物发酵生产的？相 应的发酵种类是什么？ 生：酸奶、泡菜，它们都是乳酸发酵。 学生很可能 回答不全，教师可提 示。 投影或板书： 第一节微生物发酵 联系日常生活 的实例，在回忆旧知识 的基础上，引入新课， 以激发学生的学习兴 趣，强化从社会中来的 意识。
师：很好！还有其他食品吗？想一想，我们每天 吃的主食有通过发酵制作的吗？ 生：馒头、面包。 师：对，实际上，我们经常食用的许多食品，以 及使用的一些药品，它们的生产过程都离不开微生物发 酵。那么，微生物发酵是如何发展起来的？其生产过程 怎样？它还可应用在哪些方面？现在我们就一起来解 答这些问题。 及其应用 2.新课──发酵工程史话的学习。 师：现在人们能够利用微生物发酵来大规模地生 产食品、药品等许多产品，那么，人们今天的成绩是如 何一步步取得的呢？下面我们先来学习第一个问题：发 酵工程史话。 首先，请大家阅读教材发酵工程史话标题下的第 一自然段。 从这段文字的叙述中，能够看出，人类的祖先很 早就会在不知微生物发酵原理的情况下，利用微生物发 酵技术来生产多种产品，这个方面还有我们中华民族的 贡献。由此可见，发酵技术是从生产实践中一步步产生 的。 师：下面请同学们继续阅读第二自然段。 第二自然段的核心内容是，随着两位科学家研究 出发酵现象的本质和人们对微生物的认识不断深入后， 诞生了传统的发酵工业。这充分说明了发酵技术需要基 础科学研究的指导，即科学研究促进了技术的发展。 师：好，请大家继续阅读后四个自然段的内容。 从中能够看出，发酵技术随着时代的发展而不断向前 发展，从传统的发酵工业到现代发酵工业，再到微生 物工程，它不仅成为生物技术产业的重要支柱，而且 和基因工程技术的结合使它如虎添翼。由此看来，生 物技术产业的核心是技术，同时科学技术又是一个不断 发展的过程。 投影或板书： 一、发酵工程 史话 学生先阅读教 材相应的段落，教师 就此段落提炼出有 关科学价值观的教 育素材 自然过渡到发酵 工程史话。 让学生体验科学 技术是从生产实践中 产生的。 让学生体验技术 需要以基础科学研究 作指导，科学、技术间 存在相互作用。 让学生认同生物 技术产业的核心是技 术，以及科学技术是 一个不断发展的过程。 3.新课──发酵生产过程探秘。 师：在很多家庭的日常生活中，味精是不可缺少 的调味品，那么，你知道它的化学成分是什么吗？ 生：谷氨酸钠。 师：对！有人认为食用味精对人体有毒害作用， 投影或板书： 二、发酵生产 过程探秘──以味 精生产为例 让学生了解发 酵生产的基本过程。
专题五蛋白质技术血红蛋白的提取和分离 【典例1】下列有关血红蛋白的提取的叙述，错误的是 ( ) A．凝胶色谱法是一种根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法 B．电泳只是利用待分离样品中各种分子带电性质不同，从而迁移速度不同来分离蛋白质的 C．血红蛋白的提取和分离一般按照样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定的顺序进行 D．装填色谱柱时要尽量紧密，减小颗粒间隙；避免出现气泡；洗脱液不能断流 【答案】B 【解析】电泳法依据的原理：①在一定pH下，蛋白质分子的某些基团解离后会带上正电或负电。在电场的作用下，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。②待分离样品中各种分子间存在带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，这使得带电分子在电场作用下会产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 【变式1】如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请据图回答下列问题： (1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，它在红细胞中的作用体现了蛋白质具有________功能。 (2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是________ ；乙装置中，C溶液的作用是________________。 (3)甲装置用于________，目的是___________________________________________。 用乙装置分离蛋白质的方法叫________，是根据________________分离蛋白质的有效方法。 (4)用乙装置分离血红蛋白时，待________________时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。 【答案】(1)运输 (2)磷酸缓冲液洗脱血红蛋白 (3)透析(粗分离) 去除样品中分子量较小的杂质 凝胶色谱法相对分子质量的大小 (4)红色的蛋白质接近色谱柱底端 【解析】(1)红细胞中含有血红蛋白，血红蛋白可以运输氧，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有运输功能。(2)由血红蛋白提取和分离的实验原理可知，甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是磷酸缓冲液，其可抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定；乙装置中，C溶液的作用是洗脱血红蛋白。(3)甲装置用于透析，目的是去除样品中分子量较小的杂质。用乙装置分离蛋白质的方法叫凝胶色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，分子量大的流动速度快。(4)用乙装置分离血红蛋白时，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。 专题六植物芳香油的提取 【典例1】下列是与芳香油提取相关的问题，请回答： (1)用于提取玫瑰精油的玫瑰花要在花开的盛期采收，大约是每年的5月上、中旬，原因是在此阶段____________________。 (2)玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取，其理由是玫瑰精油具有___________的性质。蒸馏时收集的蒸馏液________(填“是”或“不是”)纯的玫瑰精油，原因是________________。
1 家庭制作果酒、果醋和腐乳三种传统发酵食品的共同点是（A） A. 菌种均可来自自然环 B. 均需在相同温度下进行发酵 C. 保证在无氧环境下发酵 D. 均需要给发酵装置适时排气 2 如图表示果酒和果醋制作过程中的物质变化过程，下列叙述正确的是（C） A. 过程①和②都只能发生在缺氧条件下 B. 过程①和都③只发生在酵母细胞的线粒体中 C. 过程③和④都需要氧气的参与 D. 过程①～④所需的最适温度基本相同 3 关于发酵过程产物的说法，正确的是（B） A. 果汁发酵是否进行了无氧呼吸，可观察是否产生气泡来检验 B. 检验醋酸产生的简单易行的方法是品尝或用pH试纸鉴定 C. 当缺少氧气和糖源时，醋酸菌可以将糖分解为醋酸 D. 测定果酒、果醋的产生和亚硝酸盐的含量均可用品尝法 4 利用如图装置制作果酒和果醋，下列叙述正确的是（A） A. 制作果酒时应关闭阀b，适时打开阀a几秒钟 B. 制作果酒时如果关闭阀a，打开阀b，会导致爆瓶 C. 制作果醋时需打开阀a通气，打开阀b排 D. 制作果醋时把发酵装置放到25℃环境中比较适宜 5 在果酒、果醋和腐乳制作中，都要防止微生物污染，下列有关叙述正确的是（B） A. 果醋发酵阶段应封闭充气口，防止杂菌进入 B. 腌制腐乳的卤汤应含有适当浓度的酒精以抑制细菌的增殖 C. 用自然菌种发酵酿酒时，需将封有葡萄汁的发酵瓶高压灭菌 D. 将长满毛霉的豆腐放在瓶中加盐时，接近瓶口部分的盐要铺薄 6 下列是有关腐乳制作的几个问题，其中正确的是（ A ） ①腐乳的制作主要是利用了微生物发酵的原理，起主要作用的微生物是青霉、曲霉和毛霉 ②含水量为70%左右的豆腐适于做腐乳，含水量过高的豆腐制作腐乳，不宜成形，且不利于毛霉的生长 ③决定腐乳特殊风味的是卤汤 ④腐乳的营养丰富，是因为大分子物质经过发酵作用分解成小而且易于消化的物质 ⑤卤汤中含酒量应该控制在21%左右，酒精含量过高，腐乳成熟的时间会延长；含量过低，不足以抑制微生物的生长 A.②③④ B.②③④⑤ C.①②③④ D.①④⑤ 7 某人利用乳酸菌制作泡菜，因操作不当泡菜腐烂。下列原因中正确的是（ D ） ①罐口密闭缺氧，抑制了乳酸菌的生长繁殖 ②罐口密闭不严，氧气抑制了乳酸菌的生长繁殖 ③罐口密闭不严，氧气抑制了其他腐生菌的生长和繁殖 ④罐口密闭不严，促进了需氧腐生菌的生长繁殖 A. ①③ B. ①④ C. ②③ D. ②④
人教版高中生物选修二整理 小组：第七组成员：魏杨魏旭珂潘瑞 本书分为4大章，17小节： 第1章生物科学与健康 1、抗生素的合理使用 2、基因诊断与基因治疗 3、人体的器官移植 4、生殖健康 第2章生物科学与农业 1、农业生产中繁殖控制技术 2、现代生物技术在育种上的应用 3、植物病虫害的防治原理和方法 4、动物疫病的控制 5、绿色食品的生产 6、设施农业 第3章生物科学与工业 1、微生物发酵及其应用 2、酶在工业生产中的应用 3、生物技术药物与疫苗 第4章生物科学与环境保护 1、生物性污染及其预防 2、生物净化的原理及其应用 3、关注生物资源的合理利用 4、倡导绿色消费 第一章生物科学与健康，分为4个小节 健康是大家都很关心的问题。在本章第一节中，我们将会学习如何合理使用抗生素。随着医疗水平的不断提高，越来越多的医疗手段将会用到我们的生物技术。在本章第二节中，我们将会学习基因诊断和基因治疗的基本方法。大家经常看到，一些人在生命垂危时仍想着为社会奉献，他们希望在自己死后，将身上有用的器官捐献给需要的人，这样的人是可敬的。那么大家知道被移植后的器官在新的身体中是怎样的吗？在本章第三节中，我们将学习到人类的器官移植，了解如何减轻免疫排斥。在本章的最后一节中，我们将学习生殖健康方面的知识。 第二章生物科学与农业，分为6个小节 民以食为天，农业是十分重要的。在本章第一节中，我们将学习农业生产中的繁殖控制技术。在第二节中，我们将学习现代生物技术在育种上的应用。在本章第三节中，我们将学习植物病虫害的防治原理和方法，做到防患于未然。最近，H7N9病毒的爆发，让很多人寝食难安，作为经历过非典的我，深知动物疫情的恐怖，那么动物疫情一旦爆发，该如何控制，将在本章第四节中学习。在本章第五节中，我们将学习绿色食品的生产，看看我们吃的绿色食品是怎么生产出来的。大家知道什么是设施农业吗？不知道了吧，在本章的最后一节中，我们将会给大家讲解。 第三章生物科学与工业，分为3个小节 在本章中我们将会学习了解生物科学在工业上的运用。本章将作出3种介绍。在第一节中，我们会学习到微生物发酵及其应用，具体点说，我们喝的酒，厨房用的醋，以及美味腐乳等等，全是利用微生物发酵做出来的。在本章第二节中，我们将学习酶在工业生产中的应用，大家想想我们用的洗衣粉，为什么有的洗衣粉洗的衣服要白一些，因为其中加有酶。在本章最后一节中，我们将学习生物技术药物与疫苗，抗生素
选修一生物技术实践历年全国卷（2010-2016）考题汇总 （2011年）39．【生物——选修1：生物技术实践】（15分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题： （1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。 （2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。 （3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈说明该菌株的降解能力。 （4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 39.【答案】（1）原油选择（2）平板划线法稀释涂布平板法（3）强（4）干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰（2013年）39.[生物——选修1：生物技术实践] 临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题： （1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本借种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。 （2）取该单菌落适当稀释，用______法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。 （3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_____；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。 （4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。 答案：（1）划线稀释涂布（或涂布）（2）涂布（3）敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A弱耐药菌（4）A （2012年）39．（15分）为了探究6-BA和IAA对某菊花品 种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组在ＭＳ培养基中加 入6-BA和IAA，配制成四种培养基（见下表），灭菌后分别接 种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条 件下培养一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率（m），以及 再生丛芽外植体上的丛芽平均数（n），结果如下表。 回答下列问题： （１）按照植物的需求量，培养基中无机盐的元素可分为和两类。上述培养基中，6-BA属于类生长调节剂。（２）在该实验中，自变量是，因变量是，自变量的取值范围是。 （３）从实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是号培养基。 （４）为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入（填“6-BA”或“IAA”）。 【答案】（１）大量元素微量元素细胞分裂素（２）IAA浓度丛芽外植体的比率及丛芽平均数０～０.５mg/L （３）１（４）6-BA （2010年）37．【生物——选修模块1：生物技术实践】(15分)下列 是与芳香油提取相关的问题，请回答： （1）玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取，其理由是玫瑰精油具有的 性质。蒸馏时收集的蒸馏液(是、不是)纯的玫瑰精油，原因是。 （2）当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，蒸馏过程中，影响精油提取
高中生物选修一生物技术实践知识点总结 专题一传统发酵技术的应用 课题一果酒和果醋的制作 1、果酒菌种：附在葡萄皮上的野生型酵母菌（真菌，兼性厌氧，主要出芽生殖还有孢子生殖） 2、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。 在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。 3、制酒条件：温度（18～25℃），发酵液缺氧呈酸性（酵母菌可以生长繁殖，而其他微生物无法适应这一环境）。 4、葡萄酒呈现深红色的原因：红葡萄皮的色素进入发酵液。 5、果醋菌种：醋酸菌（原核生物），代谢类型异养需氧型。 6、有两条途径生成醋酸：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O 7、制醋条件：①深层发酵时，短时间不通氧，醋酸菌死亡。②温度：30～35℃。 8、流程： 9、装置：充气口制酒时关闭；制醋时，连续输入氧气。 排气口长而弯曲的胶管目的是防止空气中微生物的污染；开口 向下的目的是排出酒精发酵时产生的二氧化碳。出料口是用来 取样检测。 葡萄汁只装2/3，留1/3空间的目的是让酵母菌先有氧呼 吸进行繁殖。 10、若用瓶子做装置：制酒时，要每天拧松瓶盖2～4次，目的是排二氧化碳；制醋时，将瓶口打开，盖上纱布。 挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→醋酸发酵 果酒果醋
11、所有用具清洗后晾干或清洗后用70%的酒精消毒。 先冲洗葡萄再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。 12、酒精检验：酸性（3mol/L的H2SO4）重铬酸钾→灰绿色。醋酸检验：嗅味和品尝（比较pH） 13、从哪些方面防止发酵液被污染？ 榨汁机要清洗干净，并晾干。发酵瓶要清洗干净，用体积分数70%的酒精消毒，或用洗洁精洗涤。装入葡萄汁后，封闭充气口。 课题二腐乳的制作 1、菌种：多种微生物如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，主要是毛霉（真菌，代谢类型是异养需氧型。孢子生殖。）传统制作毛霉来自空气；现代生产将优质毛霉菌种直接接种在豆腐上。 2、原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。 3、实验流程：让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制（加盐之前为前期发酵，目的是创造条件让毛霉生长，使毛霉形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。后期发酵主要是酶与微生物协同作用，生成腐乳的香气。） 4、所用豆腐的含水量为70％左右，水分过多则腐乳不易成形。豆腐生长的白毛是毛霉的白色菌丝。 5、温度：15～18℃。 6、加盐：逐层加盐，随着层数的加高而增加盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些。控制盐的用量（豆腐：盐=5:1）：盐的浓度过低，不足以抑制微生物的生长，可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高会影响腐乳的口味。 食盐的作用：1.抑制微生物生长，避免腐败变质2.析出水分，是豆腐变硬 3.调味 7、卤汤：由酒及各种香辛料配制而成的。 8、卤汤中酒的含量：12%左右。作用：1.防止杂菌污染 2.赋予腐乳风味3.酒精含量过高，对蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低，不足以抑制微生物生长，导致豆腐腐败。 9、香辛料的作用：1.调味 2.杀菌 10、防止杂菌污染的措施：①玻璃瓶，洗净后用沸水消毒。②加卤汤后，用胶条将瓶口密封。③封瓶时，将瓶口通过酒精灯的火焰。 11、影响腐乳风味的因素：盐、酒、香辛料、豆腐含水量。 12、腐乳外部致密的“皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的毛霉菌丝，它能形成