Masson 染色步骤
1.切片常规脱蜡至水。
2.配制好的Weigert铁苏木素染色5-10min。
染色A+染色B（临用前A+B等量混合，不宜提前配制，避光处理）。
3.用酸性乙醇分化液分化（分化1-2s），蒸馏水洗1min。
4.用Masson蓝化液返蓝（呈现出蓝色为止）、蒸馏水洗1min 。
5.丽春红品红染色5-10min。双蒸水冲洗。
6.上述操作中，蒸馏水：弱酸溶液=2:1配制，用弱酸工作液洗1min。
7.磷钼酸溶液洗1-2min。
8.直接入苯胺蓝染色液染色 1-2min。双蒸水冲洗。
9.用配制好的弱酸工作液洗1min。
10.95%乙醇快速脱水 5-10s。
11.无水乙醇脱水3次，每次5-10s。
12.二甲苯透明3次，每次1-2min。
13.中性树胶封固。
Masson三色染色液染色步骤及注意事项 号：G1340 规格：7×50ml/7×100ml 有效期：12个月有效 产品简介： 结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagen fiber）是分布最广、含量最多的一种纤维。Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。 Masson试剂盒的特点：◆染色稳定；◆分化时间短，1-2秒；◆色彩清楚鲜艳；◆使用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；◆所染切片保存时间长且不易褪色。 产品组成： 规格 名称 7×50ml7×100ml Storage 试剂(A):Weigert 铁苏木素染色液A1:Weigert染液A25ml50ml RT避光A2:Weigert染液B25ml50ml RT 临用时，取A1、A2等量混合，成为Weigert铁苏木素染色液，不可预先配制后放置。试剂(B):酸性乙醇分化液50ml100ml RT 试剂(C):Masson蓝化液50ml100ml RT 试剂(D):丽春红品红染色液50ml100ml RT避光
试剂(E):弱酸溶液50ml100ml RT 试剂(F):磷钼酸溶液50ml100ml RT避光 试剂(G):苯胺蓝染色液50ml100ml RT避光 使用说明书1份 自备材料： 固定液：选用甲醛升汞或甲醛盐溶液、蒸馏水、系列乙醇、二甲苯、染缸 操作步骤（仅供参考）： 1、切片常规脱蜡至水。 2、用配制好的Weigert铁苏木素染色液染色5min-10min。 3、酸性乙醇分化液分化5-15s，水洗。 4、Masson蓝化液返蓝3-5min，水洗。 5、蒸馏水洗1min。 6、丽春红品红染色液染色5-10min。 7、在上述操作过程中按蒸馏水：弱酸溶液=2:1比例配置弱酸工作液，用弱酸工 作液洗1min。 8、磷钼酸溶液洗1-2min 9、用配置好的弱酸工作液洗1min。 10、直接放入苯胺蓝染色液中染色1-2min。 11、用配置好的弱酸工作液洗1min。 12、95%乙醇快速脱水。 13、无水乙醇脱水3次，每次5-10s。 14、二甲苯透明3次，每次1-2min。
第一章染色基本知识 1. 什么叫染色？它的目的和要求是什么？ 2. 物体为什么会有颜色？物体具有颜色的基本条件是什么？ 3. 什么叫染色牢度？常见的染色牢度有哪些？ 4. 什么叫浸染？什么叫轧染？各适用于何种织物的染色？ 第二章染色基本理论 TOP 1. 亲和力和直接性有何不同？ 2. 酸性染料染羊毛或聚酰胺纤维有无饱和值？用什么法其求出它？ 3. 何谓平衡吸附等温线？它分为哪几种类型？有何特点，方程式如何？ 4. 什么叫上染？上染过程分哪几个阶段？它和染色过程是否相同？ 5. 什么叫上染百分率？平衡上染百分率？它们在上染速率曲线上各有何特征？ 6. 染料在纤维中的扩散与染色效果有什么关系？影响扩散速率的因素有哪些？染料的扩散活 化能大小对扩散有什么影响？ 7. 试从染料的扩散速率、扩散活化能以及平衡吸附等方面说明温度对上染的影响。 8. 什么扩散边界层？染色时染液的流动对其有何影响？ 9. 染料在水溶液中有几种存在形式？染色时染料是以何种形式上染色？ 10. 浓度、温度及中性电解质对染料在溶液中的聚集有何影响？ 11. 在一般上染过程中，△H0和△S0为何是负值？根据△H0、△S0和T的关系式，讨论染色温 度T对平衡上染百分率的影响？ 12. 试说明某些酸性染料上染蛋白质纤维时，△S0为正值，即整个染色体系混乱度增加的原 因。 13. 什么叫稳态扩散、非稳态扩散？写出对应的Fick扩散方程式及其物理意义。 14. 什么叫无限染浴、有限染浴？它们在染色过程中各有何特点？ 15. 什么叫半染时间？在不同的染色条件下，其变化和哪些因素有关？ 16. 何谓孔道扩散模型和自由体积扩散模型？根据其基本理论简述纤维微结构的差异对染料扩 散速率的影响。 17. 什么叫初染率、移染性？染料的标准亲和力及染料的扩散性能对其有何影响？ 18. 为获得满意的染色效果，一般可通过哪些工艺条件来控制染料的上染速率。 19. 什么叫泳移、半匀染时间？ 第三章直接染料的染色 TOP 1. 直接染料染色时加入中性电解质的作用是什么？说明其作用原理。 2. 直接染料分为哪几个类型？各类有何特点？分别用什么方法来控制上染过程以纠正染色不 匀的现象。 3. 直接染料为何须进行后处理，常用的固色剂及其固色原理如何？
苏木精-伊红染色方法 苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）染色方法，简称HE染色方法，是细胞与组织学最广泛的染色方法。 一、HE染色的基本原理 （一）细胞核染色的原理 细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的双螺旋结构中，两边链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。 （二）细胞浆染色的原理 细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH 值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染我以，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。（三）、二甲苯的作用
烤片后切片进入二甲苯是脱蜡的作用。组织处理和染色后进入二甲苯是透明作用。组织处理的透明是为了石蜡能进入到细胞中去，染色后透明是为了使细胞的折光率与玻璃相同，以便显微镜观察。（四）、酒精的作用 酒精用于苏木精染色前由高浓度至低浓度是为了洗脱用于脱蜡的二甲苯。 伊红染色以后的酒精由低浓度至高浓度酒精逐渐过度是为了彻底脱去组织中的水份。 （五）、水洗的作用 在脱蜡经酒精处理之后，水洗切片，是为了苏木精染液能更好的进入细胞核中去，使细胞核染色均匀。 染色之后的水洗作用是为洗去未与切片结合的染液。 分化以后的水洗则是为了除去分化液和脱下的染料，中止分化作用。 在伊红染色之后也可以水洗，是为了减少伊红染液进入脱水的酒精中。 （六）分化和蓝化作用 1、分化作用 苏木精染色之后，先用水洗去未结合在切片中的染液。然后用分化液1%盐酸酒精脱去细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附 的染料，这个过程称为染色的分化作用。 2、蓝化作用
4.2肺组织病理学观察 4.2.1石蜡切片的制作方法 (1)取材与固定:取各组小鼠左肺叶迅速用10%中性甲醛溶液固定24小时; (2)脱水:将标本放入PBS缓冲液(PH7.4)内12小时，中间更换两次，先 后入70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精I、100%酒精11各 30分钟，用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水分; (3)二甲苯透明:二甲苯I、11透明，用以替换出组织块中的酒精; (4)常规石蜡包埋:将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温， 石蜡I 15分钟、石蜡II25分钟、石蜡III 30分钟，待石蜡完全浸入组织块中后时 行包埋，常温凝固成块; (5)用石蜡切片机进行连续石蜡切片，厚5微米，切下的薄片放在45℃水中， 要尽量展开，再贴在载玻片上，放在45℃恒温箱中烘干，防水密封，低温保存 备用，用于HE染色、Masson染色、及IL一17A免疫组化。 4.2.2HE染色 (1)将切片分别置于二甲苯I、二甲苯II、100%酒精I、100%酒精II、95% 酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精各10分钟脱蜡，再浸入流动自来水中洗去 酒精; (2)苏木精染色1分钟，自来水冲洗; (3)1%盐酸分化10秒，褪去胞浆中的苏木精染色; (4)1%的氨水蓝化5秒，伊红染色2分钟; (5)梯度酒精脱水:70%酒精，80%酒精，90%酒精，95%酒精，各2分钟， 100%酒精I，100%酒精11，各10分钟; (6)二甲苯透明:二甲苯I 2分钟，二甲苯II 5分钟，二甲苯III 10分钟; (7)中性树胶封片。 4.2.3MaSSon染色 (l)切片常规脱蜡至蒸馏水; (2)将切片置于丽春红酸性品红液中染2分钟; (3)入0.2%冰醋酸水溶液2分钟; (4)5%磷铝酸水溶液酶染2分钟; (5)0.2%冰醋酸水溶液洗2分钟; (6)甲基绿染色3分钟，自来水冲洗; (7)95%酒精分色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 4.2.4小鼠肺组织的形态学分级标准 左肺石蜡切片进行染色后，由病理科医师在光学显微镜下观察肺组织病理 学改变。采用szapiel[25]等建立的方法评价肺泡炎(o一m级)和肺纤维化(0一111级) 程度。 (1)肺泡炎分级: ①O级:无炎症表现: ②工级:轻度肺泡炎，有少量炎症细胞浸润，肺泡间隔稍增宽; ③H级:中度肺泡炎，炎症细胞较前增多，肺泡形态更紊乱; ④111级:重度肺泡炎，大量炎症细胞浸润，病变呈弥漫性，肺泡结构完全破 坏。 (2)肺纤维化分级: ①0级(1分):正常肺组织，无或极少量细丝状胶原纤维;
Masson三色染色试剂盒说明书 Masson 三色染色试剂盒说明书（南京森贝伽生物科技有限公司） 【产品介绍】 Masson 染液是显示组织中纤维染色的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。淡绿分子量最大。因此Masson 染色肌纤维红色，胶原纤维绿色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。 【用途】主要用于胶原纤维染色。 【产品特点】 ①染色稳定；②分化时间短，1～2 分钟；③色彩清晰鲜艳；④适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；⑤所染切片保存时间长且不易褪色。 固定：甲醛升汞或甲醛盐溶液。 切片：所有类型。 【产品组成】 编号名 SBJ0126 （7×50ml）SBJ0126 （7×100ml） SBJ0126 （7×500ml） Storage 试剂（A） A1：苏木素染色液25ml 100ml 500ml RT A2：三氯化铁水溶液25ml 100ml 500ml RT 临用时取A1、A2 等量混合，成为试剂（A），不可预先配制后放置，因染色液的色素根与铁 会化合，形成不容性沉淀，等量混合后，一般24h 后失去染色力。 试剂（B）: 盐酸乙醇分化液50ml 100ml 500ml RT 试剂（C）: 氨水水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（D）: 丽春红酸性品红染色液50ml 100ml 500ml RT 试剂（E）: 乙酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（F）: 磷钼酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（G）: 苯胺蓝染色液50ml 100ml 500ml RT 【参考操作步骤】 1、切片脱蜡至水。 2、试剂（A）染色5min～10min。 3、试剂（B）分化、水洗，试剂（C）返蓝、水洗。 4、蒸馏水或者去离子水洗1min。 5、试剂（D）染色5～10min。 6、试剂（E）洗1min。 7、试剂（F）洗1～2min。 8、试剂（E）洗1min。
塑料着色原理 塑料着色就是利用加入着色剂对日光的减色混合而使制品着色。亦即通过改变光的吸收和反射而获得不同的颜色，如吸收所有的光时呈现黑色，如果只吸收一部分光(某一波长的光)，并且散射光的数量很小，那么塑料变成有色透明，而形成的颜色取决于反射光的波长；若全部反射则塑料呈白色。如未被吸收的光全部反射，那么塑料则变成“有色不透明”的，其颜色也取决于未被吸收光的波长。反射光表现为实色，散射光则为明色。通常将纯度较好，明度较大的红、黄、蓝三色称为原色，三原色中的任意两种相互调合，可以得到的各种不同颜色称为间色(二次色)，一种原色一种间色调合而成的颜色为再问色(三次色)，每个间色把合成它的二原色以外的原色称为干扰色，在配色时应防止干扰色的引入，否则使原有色光变得暗钝，影响颜色的明亮度。 用于塑料的着色物质有染料或颜料，染料一般能均匀溶于水中或特殊溶液中，或借助于适当化学药品而成可溶物，以达到着色的目的，它不单能使塑料表面着色，而且内部亦被浸入，颜料需调和于展色剂(油或树脂)中制成油墨、油漆等，涂于制品表面使其着色，也可将极细微的颗粒或膏状物等混于塑料内进行内外着色。 一、塑料的染色原理 塑料的染色与塑料的原液着色有很大区别，后者产生的颜色十分单调，不宜小批量多品种加工，尤其是对日用品如钮扣、发夹、玩具、装饰挂件以及机械配件等。塑料染色对色泽要求敏感的加工件无疑十分有用，并且大部分塑料都有染色官能团，可以用相应染料过仃染色而且其染色实际上是一种表面着色。 聚酯塑料的染色是靠温度或载体使结构紧密的聚酯链段出现“空隙”，让疏水性分散染料吸附-扩散-固着在被染基质内部，这种被染基质(固体)吸收的染料(固体)完全是处于溶解状态的。 聚酰胺用分散染料染色机理是依靠末端氨基和酰氨基对染料产生氢键和范德华力结合，上染率不受聚酰胺末端氨基的限制，加之染色时染浴的pH值适应范围较广，所以分散染料对聚酰胺有良好的覆盖性。再从大分子末端含有氨基的羧基看，还有类似羊毛的染色性质，可应用阴离子染料(酸性、直接、活性等染
改良Masson三色染色液使用说明 货号：G1345 规格：8×50ml/8×100ml 有效期：12个月有效 产品简介： 结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagen fiber）是分布最广、含量最多的一种纤维。Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。 改良Masson染色胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，胞核呈蓝褐色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。 改良Masson三色染色与常规Masson三色染色的区别在于采用天青石蓝苏木素淡染细胞核。其特点在于：分化时间短(1～2分钟)；色彩清晰鲜艳；适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；所染切片保存时间长且不易褪色。改良Masson染色胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，细胞核呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。 产品组成： 规格 8×50ml8×100ml Storage 名称 试剂(A):Bouin液50ml100ml RT 试剂(B):天青石蓝染色液50ml100ml4℃避光 试剂(C):Mayer苏木素染色液50ml100ml4℃避光
染色得基本原理 就是利用染料在组织切片上给与颜色,使其与组织或细胞内得某种成分发生作用,经过透明后通过光谱吸收与折射,使其各种微细结构能显现不同颜色,这样在显微镜下就可显示出组织细胞得各种成分。染色剂与组织细胞相结合而使组织细胞着色得过程与物理与化学作用两者都有关系。 一、染色得物理现象 1、溶解性: 这种染色最典型得例子就就是脂肪染色,苏丹类染色剂为脂溶性染料,它可以被脂质溶解,使脂质着色,就就是利用染色剂在脂质中得溶解度大于在酒精等溶剂中得溶解度这一特性。因此,当苏丹类得酒精溶液与组织细胞中得脂质接触时,染色剂就从溶液中“转移”到脂质中去,而使脂质着色。 2、吸附作用: 较大物体有从周围介质吸附小颗粒到自身得特性。有些染色则就是染色剂分子通过渗透与毛细管作用而被吸收或沉淀到组织,细胞得小孔中去而着色得。例如活性炭吸附各种分子,甚至胶质与微生物等较大得颗粒一样。 二、染色得化学反应 酸性染料与碱性染料得染色作用常就是对立得,而不就是一致得。任何染料均可电离,离解出阳离子或阴离子。酸性染料中得酸性部分有染色作用得就是阴离子;碱性染料中得碱性部分有染色作用得就是阳离子,细胞内同时含有酸性与碱性物质,酸性物质与碱性染料中得阳离子相结合,如细胞核(含有核酸)黏液与软骨基质呈酸性部分被盐基性染料苏木素所染、反之碱性物质与酸性染料得阴离子相结合,如细胞浆及其内部得某些颗粒物质被酸性染料伊红所染。染料得颜色基不就是在阳离子,就就是在阴离子上,这些离子将因组织反应不同而发生化学结合,如显示含铁血黄素得普鲁士兰反应就是最典型得例子。但就是,大量染色得化学反应并不像铁反应那样明确,实际情况远为复杂。这就是因为蛋白质分子就是个分子量自几万至几百万得大分子,每个分子中含有很多阳离子与阴离子基因,在等电点时能形成游离得两性离子,如: P为蛋白质,就是具有两性得胶体物质。它呈酸性或碱性与环境得PH值有关,如溶液得PH值小于该蛋白质得等电点则此溶液对该种蛋白质即为酸性,蛋白质就带正电,将被酸性染色剂所着色。反之,溶液得PH值大于蛋白质得等电点,则此溶液对该蛋白质来说即为碱性,蛋白质带负电,将被带有阳离子得染色剂所浸染。 在日常工作中,长久固定于甲醛得组织切片,往往染色不良,尤其就是核得着色欠佳。这就是因为固定液甲醛氧化生成甲酸,组织亦随之变为酸性,所以不易被苏木素所着色,补救得办法就是,先用流水冲洗组织块,然后用碱性溶液如稀氨酒精等处理使之中与,恢复正常PH值后再进行染色。 大多数染色得原理至今仍未搞清楚。有些可能就是物理得,有些可能就是化学得,有些
第二章染色基本理论 2-1概况 染色理论的研究内容： 1 染色热力学即染料能否对纤维上染； 2 上染可能达到的程度（染色平衡）； 3 染色动力学即染料上染纤维的快慢(上染速率)。 具体包括：染料浓度、浴比、温度、pH、电解质、染色助剂以及染色设备等对平衡上染程度及上染速率的影响。 通过染色理论的研究，对于合理选用染料及助剂、提高染料利用率、提高上染速率、改善匀染性、降低染色成本、减少废水的排放等染色工艺的制定以及设计制造生产效率高的染色设备具有重要指导意义。 2-2 染料的上染过程及特点 上染过程－是指染料舍染液(或其他介质)而向纤维转移并将纤维染透的过程。 上染过程和通常所指的染色过程不尽相同… eg：酸性染料、直接染料、活性染料、还原染料、活性染料… 一上染过程及特点 1 染料从染液向纤维表面扩散 2 染料在边界层中的扩散 3 染料吸附在纤维表面
纤维对染料分子的吸附主要是通过物理吸附及化学吸附等来完成的。 吸附速率受纤维表面的电荷性质、染料的分子结构及所带电荷、染料的溶解性质、亲和性以及染料分子在扩散边界层中的扩散速率等因素的影响。 染液与被染物相对运动的重要性… 扩散模型…吸附模型… 4 纤维表面的染料向纤维内部扩散直至平衡并结合 染料与纤维结合：染料的聚集、吸附、物理结合、化学结合… ＊染料的吸附与解吸 ①两个过程同时进行，不同染色阶段，二者程度不一； ②多数染色过程就是一个上染过程，而有些上染过程后还需经过一些化学处理，染色过程才能完毕；而另一些在上染过程中同时发生与纤维的化学反应。 上染的各个阶段均是可逆的！ [D]f,t / [D]s,t= k吸/ k解= K E = K / (K+L) K为直接性；L为染色浴比；E为平衡上染百分率 浴比L对染料上染百分率具有重要意义！
试剂名：改良 Masson 三色染色液货号：G1345 品牌：索莱宝 1、石蜡切片65℃烘烤1h（使组织更贴合玻片，并溶解石蜡。如果是刚切好的切片，则烘烤2-3h），立即放入脱蜡剂中脱蜡； 2、脱蜡：脱蜡剂Ⅰ（15min）、脱蜡剂Ⅱ（15min） 水化：无水乙醇I（5min）、无水乙醇 II（5min）、95%乙醇I（5min）、95%乙醇II （5min）、85%乙醇（5min）、75%乙醇（5min）脱蜡处理，蒸馏水3min 3、将 Bouin 液滴在组织上，于室温作用一晚或置入 37℃的温箱内 2h 进行媒染，然后流水冲洗至切片组织上的黄色消失。 4、天青石蓝染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。 5、Mayer 苏木素染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。（显微镜下观察，细胞核呈现深蓝色，细胞质有蓝色） 6、酸性乙醇分化液分化3-5s，流水冲洗 10min返蓝。（细胞核呈现灰蓝色，细胞质应相对透明无色） 7、丽春红品红染色液染 2-5min，稍水洗玻片上无染料即可。（容易造成深红或紫红色，基本看不清细胞核。建议先染色30s-1min，显微镜下观察，适当增加时间） 8、磷钼酸溶液浸泡10min，倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染 5- 10min。（如果丽春红染色过深，苯胺蓝也应该适当染久一些，最终应该是红蓝色分明，能明显分辨出胶原显微） 9、弱酸溶液处理 2min。 10、透明：切片直接依次放入无水乙醇 I（5min）-无水乙醇 II（5min）- 脱蜡剂Ⅰ（5min）- 脱蜡剂Ⅱ（5min）。然后用纸巾擦干玻片上残余脱蜡剂，或直接铺平玻片在通风橱内，干燥脱蜡剂。使用中性树脂封片。 注：masson染色不像HE可以把颜色洗脱再重复步骤，建议使用同一批切片，先摸索染色时间。
仅供科研版本号：170410 改良Masson三色染色液 【产品组成】 【保存条件】 4℃,避光,12个月 【产品概述】 结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维，而胶原纤维(collagen fiber)是分布最广、含量最多的一种纤维。Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量都很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色(淡绿)或蓝色(苯胺蓝)，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。 改良Masson三色染色与常规Masson三色染色的区别在于采用天青石蓝苏木素淡染细胞核。其特点在于分化时间短(1～2min)；色彩清晰鲜艳；适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；所染切片保存时间长且不易褪色。胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，胞核呈蓝褐色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。 【使用方法】 1、组织固定于10%福尔马林固定液，常规脱水包埋。切片厚4μm，常规脱蜡至水。 2、切片入Bouin液，室温作用一晚或置入37℃温箱内2h进行媒染，然后流水冲洗至切片上的黄色消失。 3、天青石蓝染色液滴染2~3min，稍水洗。 4、Mayer苏木素染色液滴染2~3min，稍水洗。 5、酸性乙醇分化液分化数秒，流水冲洗10min。 6、丽春红品红染色液滴染10min，蒸馏水稍冲洗。 7、磷钼酸溶液处理约10min。 南京森贝伽生物科技有限公司网址：https://www.doczj.com/doc/373741233.html,/ 第1页
Masson复合染色液的配制： 酸性复红1 g 丽春红2 g 橘黄G 2 g 0.25%醋酸300 ml 混匀，过滤后备用。 亮绿染色液的配制： 亮绿干粉0.1 g 0.2%醋酸100 ml 充分混匀，过滤后备用。 Masson染色 （1）常规脱蜡至水：二甲苯Ⅰ10 min→二甲苯Ⅱ10 min→100%酒精Ⅰ5 min→100%酒精Ⅱ5 min→95％酒精3 min→90％酒精3 min→80％酒精3 min→70％酒精3 min→蒸馏水1 min （2）Masson染色：Masson复合液5 min→自来水过洗2次→0.2%醋酸Ⅰ1 min→0.2%醋酸Ⅱ1 min→自来水过洗1次→1%磷钨酸6 min→自来水过洗1次→亮绿15min→自来水过洗2次→0.2%醋酸Ⅰ1 min→0.2%醋酸Ⅱ1 min→自来水过洗1次 （3）常规脱水透明：70%酒精30 s→80％酒精30 s→90%酒精30 s→95％酒精30 s→100%酒精Ⅰ5 min →100%酒精Ⅱ5 min→二甲苯Ⅰ5 min→二甲苯Ⅱ10 min→中性树胶封片 至于操作要点的话觉得就是在masson复合液和亮绿的染色时间得摸索一下，还有就是70，80酒精时间尽量短，脱色很厉害，不过要是实在脱得严重的话，还可以倒回来重新染色 附图一张，心肌梗死masson染色，肌纤维红色，胶原绿色，红细胞橘黄色
高倍镜下
脱水 4%多聚甲醛中固定，常规石蜡包埋切片； 切片脱蜡至水后入重铬酸钾—醋酸液或3%升汞处理1小时； 水洗后染Regaud氏苏木素10分钟； 自来水充分洗后，用2%盐酸酒精分化； 流水冲洗到蓝黑色； 1%丽春红酸性品红液中染5分钟； 蒸馏水洗； 1%磷钼酸水溶液媒染5分钟； 不经水洗入2%淡绿液3分钟； 1%醋酸液分色1分钟； 脱水、透明、中性树胶封固。 结果：细胞核染黑蓝色，胶原纤维呈绿色，神经胶质纤维、肌纤维、红细胞呈红色。
油红O染色及Masson染色 油红O染色 1. 染色液的配制 材料：油红染料棕色可密封瓶异丙醇研钵漏斗定性滤纸 称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml 混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。 2. 10%中性甲醛的配制 材料：中性甲醛（多聚甲醛）密封瓶 称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。 3.染色对象间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。 4.培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。 5.染色步骤： 5.1 先小心轻缓倒去培养夜。 5.2 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）。 5.3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。固定的是细胞膜。 5.4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。 5.5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。 5.6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。 5.7 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。 5.8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。 5.9 显微镜观察。注意事项： 脂肪油红染色，有的是动物/人体脂肪组织切片，或细胞爬片。各有操作差异。以下是各论坛方法小结，不全。 1.完全成熟饱满的脂肪细胞，容易破裂，脂滴泄漏，所以压片，切片都要考虑到这个问题。 2.细胞爬片细胞溶液脱落，特别是脂滴大的。操作务要轻柔。不要把细胞冲掉。 3.如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻温度比普通要低，切片厚度加厚。
第二章 染色基本原理 第一节 概述 一、何谓染色？ 染色是指染料舍染液而转移到纤维上，并在纤维上形成均匀、坚牢、鲜艳色泽的加工过程。 举例说明： 二.衡量染色品质量的指标 染料与纤维发生物理化学或化学结合 用化学方法使染料在纤维上生成沉淀 着色机理 染料溶液
第二节 染料在溶液中的存在形式 一、染料的电离 阴离子染料 DM D － (染料母体 )＋ M ＋（伴随的阳离子） 阳离子染料 DX D ＋（染料母体）+ X －（伴随的阴离子） 非离子染料染料 在水中不电离的称为非离子染料，如分散染料。 二、染料的溶解 染料的溶解性与染料的分子结构、温度、所加助剂有关。 （1）染料结构及所含水溶性基团的数目 染料分子量小、结构简单、亲水性基团含量高的溶解性好。 （2）染液的温度 温度高有利于染料的溶解。 （3）与染液中所加助剂有关 尿素及表面活性剂 溶解度增加 中性电解质 溶解度降低 用量多时，染料发生沉淀 （4）与染液的pH 值有关 色泽均匀性 染料在纤维上均匀分布的程度 色泽坚牢度 染料在纤维上固着力和稳定性的大小 色泽中染料光谱色含量的大小 又称匀染性 即染色牢度 饱和度，纯度
例如：冰染料在酸性条件下易溶解，还原染料在碱性条件下易溶解等。 三、染料的聚集 1.染料在溶液中的三种形态 ●离子型染料可以有三种不同形态的存在形式： （1）染料完全离解成正或负离子，如D＋或D－； （2）染料离子聚集成离子胶束，如(nD)n－或(nD)n＋； （3）染料分子聚集成胶核，然后再吸附一部分染料离子形成胶粒，在胶粒外再吸附电荷相反的离子形成胶团，如[m(DA)·nD] n－或[m(DM)·nD] n＋。以D－为例，三种形式呈下列关系。 ?非离子型染料三种不同存在形式： 2.影响聚集的因素： （1）染料分子结构 分子结构较大，分子成线形结构的，染料在溶液中的聚集倾向较大，聚集度较高。 （2）染色温度 提高染色温度，染料聚集度降低。 （3）染料的浓度 一般浓度大的聚集度高。 （4）所加助剂与电解质 ?加入过量食盐，染料聚集度增高，甚至还会发生沉淀。
精品文档 精品文档Masson三色染色液说明书 【产品名称】 Masson三色染色液 【包装规格】 货号：DC0032 套组包装规格：8×20ml/盒、8×100ml/盒、8×250ml/盒 【预期用途】 主要用于组织中结缔组织、肌肉和胶原纤维的组织细胞学染色。 【检验原理】 Masson三色染色又称马松染色，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法，所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织，苯胺蓝的分子量很大，染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。 【主要组成成分】 试剂组成主要成分 1、Weigert铁苏木素A液苏木素 2、Weigert铁苏木素B液三氯化铁 3、酸性乙醇分化液乙醇 4、蓝化液 碳酸盐 5、丽春红品红染色液丽春红、品红 6、乙酸溶液乙酸 7、磷钼酸溶液磷钼酸 8、苯胺蓝染色液 苯胺蓝 【储存条件及有效期】 5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为l8个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 组织片充分固定和脱蜡。 【检验方法】 1、组织固定于Bouin氏固定液(另购)或Zenker氏固定液(另购)或10%中性福尔马林固定液(另购)等，流水冲洗，常规脱水包埋； 2、切片常规脱蜡至水； 3、取适量的Weigert铁苏木素A液和Weigert铁苏木素B液等量混合,即为Weigert铁苏木素染色液，用Weigert铁苏木素染色液染色，流水稍洗； 4、酸性乙醇分化液分化数秒，流水冲洗数分钟； 5、蓝化液返蓝数秒，流水冲洗数分钟； 6、丽春红品红染色液染色数分钟，流水稍冲洗； 7、将蒸馏水:乙酸溶液按一定的比例配制乙酸工作液，用乙酸工作液洗切片； 8、磷钼酸溶液处理后，倾去玻片上磷钼酸溶液(不用水洗)；
染色的基本原理 文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-
染色的基本原理 是利用染料在组织切片上给与颜色，使其与组织或细胞内的某种成分发生作用，经过透明后通过光谱吸收和折射，使其各种微细结构能显现不同颜色，这样在显微镜下就可显示出组织细胞的各种成分。染色剂与组织细胞相结合而使组织细胞着色的过程与物理和化学作用两者都有关系。 一、染色的物理现象 1.溶解性： 这种染色最典型的例子就是脂肪染色，苏丹类染色剂为脂溶性染料，它可以被脂质溶解，使脂质着色，就是利用染色剂在脂质中的溶解度大于在酒精等溶剂中的溶解度这一特性。因此，当苏丹类的酒精溶液与组织细胞中的脂质接触时，染色剂就从溶液中“转移”到脂质中去，而使脂质着色。 2.吸附作用： 较大物体有从周围介质吸附小颗粒到自身的特性。有些染色则是染色剂分子通过渗透和毛细管作用而被吸收或沉淀到组织，细胞的小孔中去而
着色的。例如活性炭吸附各种分子，甚至胶质和微生物等较大的颗粒一样。 二、染色的化学反应 酸性染料和碱性染料的染色作用常是对立的，而不是一致的。任何染料均可电离，离解出阳离子或阴离子。酸性染料中的酸性部分有染色作用的是阴离子；碱性染料中的碱性部分有染色作用的是阳离子，细胞内同时含有酸性和碱性物质，酸性物质与碱性染料中的阳离子相结合，如细胞核（含有核酸）黏液和软骨基质呈酸性部分被盐基性染料苏木素所染、反之碱性物质与酸性染料的阴离子相结合，如细胞浆及其内部的某些颗粒物质被酸性染料伊红所染。染料的颜色基不是在阳离子，就是在阴离子上，这些离子将因组织反应不同而发生化学结合，如显示含铁血黄素的普鲁士兰反应是最典型的例子。但是，大量染色的化学反应并不像铁反应那样明确，实际情况远为复杂。这是因为蛋白质分子是个分子量自几万至几百万的大分子，每个分子中含有很多阳离子和阴离子基因，在等电点时能形成游离的两性离子，如： P为蛋白质，是具有两性的胶体物质。它呈酸性或碱性与环境的PH值有关，如溶液的PH值小于该蛋白质的等电点则此溶液对该种蛋白质即为酸性，蛋白质就带正电，将被酸性染色剂所着色。反之，溶液的PH值大于蛋白质的等电点，则此溶液对该蛋白质来说即为碱性,蛋白质带负电，将被带有阳离子的染色剂所浸染? ?? ?。
广州市外显子生物技术有限公司Http//https://www.doczj.com/doc/373741233.html, Masson染色液说明书 货号：S-1518 规格：20ml 产品组成： 名称规格保存 Weigert铁苏木素A液20ml RT避光 Weigert铁苏木素B液20ml RT避光 丽春红酸性品红染液20ml 2-4℃低温环境 磷钼酸溶液20ml 2-4℃低温环境 苯胺蓝染液20ml 2-4℃低温环境 盐酸酒精分化液1%冰醋酸溶液20ml 2-4℃低温环境20ml 2-4℃低温环境 简介： 利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关，根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。 储存条件：本试剂盒应贮存于2-4℃低温环境。 有效期：原包装未开封试剂有效期为12 个月，在有效期内的已开封试剂应在开封后 6 个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。操作步骤： 1.切片脱蜡至水。 2.Weigert铁苏木素使用前Weigert铁苏木素A、B 液等比例混合。染10-20分钟，流水稍洗。 3.盐酸酒精分化，流水冲洗数分钟。 4.丽春红酸性品红染液染5-10分钟，蒸馏水稍冲洗。 5.磷钼酸溶液处理约5分钟，去掉溶液，不用水洗，直接用苯胺蓝染液复染5分钟。 6.1%冰醋酸处理1分钟，95%酒精脱水。 7.无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封固。 注意事项： 1.Weigert铁苏木素分A、B两液，应于临用前将两液等份混合使用，而不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而逐渐失去染色力。 2.磷钼酸处理时可在镜下控制，见肌纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。 染色结果： 骨组织×200 结果判定： 胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，弹力纤维呈棕色，肌纤维、纤维素和红细胞染红色，细胞核染蓝黑色。
苏木素-伊红染色液(H-E)说明书 【产品名称】 苏木素-伊红染色液(H-E） 【型号】 苏木素染色液分别为：Mayer型、改良Harris型、型改良Lillie-Mayer型； 伊红染色液分别为：水溶型、醇溶型。 【包装规格】 货号：DH0006 单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml； 每套/盒包装规格分别为：2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。 【预期用途】 主要用于对细胞组织进行染色。 【检验原理】 苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色。 【主要组成成分】 试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或苏木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红 【储存条件及有效期】 5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。 【检验方法】 l、石蜡切片于二甲苯I、II中脱蜡； 2、经无水乙醇和95%乙醇，经8O%乙醇，自来水冲洗； 3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer或改良Harris)染色，自来水洗；或苏木素染色液(Mayer)染色； 4、苏木素染色后用l%盐酸乙醇溶液分化数秒(l%盐酸乙醇溶液配制：99m1 75%乙醇加1ml浓盐酸）；若用苏木素染色液(Mayer)染色后则不需分化； 5、自来水冲洗返蓝；亦可用碳酸锂水溶液返蓝，自来水洗； 6、入伊红染色液(水溶)染色，稍洗；若用伊红染液(醇溶），切片应先经80%乙醇脱水后，再入伊红染液(醇溶)染色(忌水洗）； 7、95%乙醇I、II中调色； 8、无水乙醇I、II中脱水，二甲苯I、II中透明； 9、封片胶封片，镜检。 【检验方法的局限性】 仅供细胞和组织形态学观察染色使用。 【注意事项】 1、温度较低时苏木素染色液不易着色，可适当延长染色时间。
胶原纤维染色（Masson三色染色法） 胶原纤维：是三种纤维中分布最广泛，含量最多的一种纤维。广泛分布于各脏器内。在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。胶原纤维染色主要用于和肌纤维的鉴别。应用意义： 定性定量胶原纤维在体内分布广泛。HE染色不能以不同颜色将其显示出来，而胶原纤维定性特染可作到这一点，故在多种疾病的病理诊断和研究用中具有实用价值. 如： 1．显示组织，器官的损伤或炎症的修复与纤维板化程度 2．判断心肌坏死后被除纤维结缔组织所取代的区域：HE染色时胶原纤维与心肌均为红色，胶原纤维染色则使胶原纤维呈红色，心肌纤维呈黄色。 3．鉴别心肌纤维化与心内膜弹纤维增生症。 4．区别胶原纤维透明变性与淀粉样变性。 5. 对肿瘤方面提供诊断和诊断鉴别的依据。 胶原纤维染色结果：胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈橘红色。 组织样品应为：4%多聚甲醛固定组织，石蜡切片。 天狼猩红：胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色，其它成分呈黄色。 V.G染色法 : 胶原纤维：鲜红色,肌纤维：黄色，红细胞：黄色。细胞核：蓝黑或灰色。 Nagar-Olsen染色 观察心肌缺氧早期改变，是早期心肌病变组织染色： 显色结果：缺氧心肌红细胞呈现红色，正常心肌呈黄色或棕黄色，细胞核呈蓝色。丽春红（Ponceau S）新法染色 首先采用维多利亚蓝将细胞核染成绿色，再用Ponceau S 丽春红复合物将胶原纤维染成红色，肌肉成黄色。 实验流程 一、实验试剂 1. Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml。将苏木精加入蒸馏水内加温溶解，冷却后加入酒精和甘油，放数日后即可应用； 2. Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml； 3. 0.2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0.2 ml，蒸馏水100 ml； 4. 1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml； 5. 苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml； 6. 1%光绿水溶液：光绿 1g，蒸馏水100 ml。
吉姆萨染色的原理 吉姆萨（Giemsa）染色法：吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。 嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。 PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。 一般性操作技术血涂片制备；细胞染色；显微检查；血液病诊断；染色不良；瑞特（Wright）染色法；酸性染料；伊红；碱性染料；亚甲蓝；吸附作用；PH对细胞染色的影响；甲醇；吉姆（Giemsa）染色法春天要常用润肤剂，它含有松香油脂酸和丰富维生素a，常用可加快皮肤血液循环，剌激面部细胞分泌，有效改善皮肤生理环境，减少气候对皮肤的危害。 第二节血涂片的制备和细胞染色 血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量，借以作为仪器结果分析后质控的参考。 但积压涂片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论。例如，血膜过厚细胞重叠缩小，血膜太薄白细胞多集中于边缘，细胞分布不匀；染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。因皮制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。 血涂片制备方法及注意事项将在实习指导中详细介绍。 1．瑞特（Wright）染色法：为发观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须嘲行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。目前常用瑞特染色法。（1）瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。市售美蓝中部分已被氧化为天青。伊红通常为钠盐。即伊红和伊混合后，产生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀，即瑞特染料。 （2）细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各种不同的