1实验容：
2显微镜油镜的使用与保护。
3细菌的形态与结构的观察。
4实验目的：
5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。
6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。
7熟悉细菌的特殊结构。
8实验材料：
显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。
4实验方法：
(1)显微镜油镜的使用与保护
显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。
1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。
2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。
3、调节焦距：选一细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。
⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。
⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。
4、显微镜的保护：
⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。
⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。
⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱。置于干燥处，以防受潮。
(二)细菌形态观察
1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌
2、细菌的特殊结构：
荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌
鞭毛：水弧菌（周毛菌）
芽胞：破伤风杆菌（芽胞位于菌体顶端，呈鼓槌状）
一、实验容：
3细菌标本片的制备（操作）
4革兰染色法（操作）
二、实验目的：
1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。
2掌握革兰染色的操作法，充分认识革兰染色的临床意义。
三、实验材料：
革兰染色液全套、擦镜纸、二甲苯、大肠杆菌培养物、葡萄球菌培养物、生理盐水、玻片、接种环、酒精灯。
四、实验方法：
㈠细菌标本片的制备（操作）
1、涂片：点燃酒精灯；取洁净玻片一，右手持接种环一酒精灯火焰中消毒，稍冷后取
1－2环生理盐水置于玻片中央；再次消毒后，用接种环取菌落中的细菌或菌液或标本少许，在生理盐水中涂匀制成约1cm左右的薄膜，并将接种环再次消毒后，置于试管架中。
2、干燥：在室温中自然干燥；天冷时可在酒精灯火焰上方略加温，不可高温加热，否则，细菌被破坏后染色效果差。
3、固定：右手持玻片一端，标本面向上，在酒精灯火焰上方快速地来回通过三次，约2妙种。固定的目的是杀死细菌，使细菌与玻片粘附较紧密。
㈡革兰染色法（操作）
1、初染：滴加结晶紫染液于标本上，以覆盖满为度，染1分钟后水洗，洒去积水。
2、媒染：加鲁格碘液，媒染1分钟后水洗，洒去积水。
7脱色：加95％酒精脱色（边加酒精边摇晃玻片，使酒精流去再加酒精，如此反复2 －3次）约30妙钟后水洗，洒去积水。
12复染：加复红染液染30妙钟后水洗，洒去积水，待干或用吸水纸吸干后镜检。先低倍镜观察效果，再用高倍镜看清物象，滴加镜油后用油镜观察。
结果：G＋菌呈紫色，G－菌呈红色。
一、实验容
1、培养基的制备（操作）
2、细菌的人工培养法（操作）
3、细菌代产物观察（示教）
4、药敏试验（示教）
二、实验目的
1、熟悉细菌的培养方法，进一步掌握人工培养细菌的临床意义。
2、了解细菌代产物在鉴别细菌中的意义。
三、实验材料
牛肉膏、蛋白胨、、氯化钠、琼脂、SS琼脂、蒸馏水、1molNaOH、0.1 molNaOH、粗天平、0.02%酚红指示剂、pH比色器、无菌培养皿、无菌试管、接种环、酒精灯、各种鉴别培养基、高压消毒灭菌器、量筒、三角烧瓶、吸管、剪刀、绳索、葡萄球菌菌液、大肠杆菌菌液、伤寒杆菌菌液、乙型副伤寒杆菌菌液等。
四、实验方法
㈠培养基的制备（操作）
1、培养基的制备程序
称量溶化pH测定与矫正分装灭菌检定保存。
2、液体培养基的制备
1）称量：称取牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g，置于1000ml三角烧瓶中，加入蒸馏水1000ml。2）混合溶解：加热溶化，待冷至40?50o C时，测定并矫正pH为77.6。
3）pH测定与矫正方法：
⑴准备工作：取pH7.4①、7.6③酚红标准比色管及蒸馏水管②各1支，按图示装好；取口径与比色管相同的试管3支，各加待测液体基5ml，分别编上④、⑤、⑥号，按图示装好。
⑵比色：将比色架对光目视比色，比较二排管的颜色是否相同，若基为酸性（一般呈酸性），则向⑤号管中加0.02%酚红指示剂0.25ml摇匀，取1ml吸管一支吸取0.1 molNaOH1ml，缓慢滴入⑤号管，边加边摇匀，直至与标准管其中一侧颜色相同，准确记录NaOH的用量。
⑶计算：5ml基矫正至pH7.6用去0.1 molNaOH0.2ml，剩余的培养基则需加入1 molNaOH为Xml。用比例公式计算。N1：V1＝N2：V2
5：975＝0.2：X
X＝0.2*975/5=39(ml)
0.1 molNaOH需要39ml，而加1 molNaOH只需3.9ml。
4）分装：分装十适当容器（试管），包装好，高压蒸气灭菌后备用。
㈡细菌的人工培养法（操作）
1、平板划线接种法：
1）点燃酒精灯，右手以握笔式持接种环，在火焰上灭菌后稍冷，挑取葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液一环。
2）用左手掌持琼脂平板，以左手拇指将平板盖启开，右手将取了菌液的接种环伸入平板，呈45O角，用分段划线法分离细菌（如图所示），盖好平板。
3）于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。
2、液体培养基接种法：
左手持液体培养基，按照平板划线取葡萄球菌少许，用右手小指拔开棉塞，夹于指间（示教），并将管口在火焰上灭菌，将细菌接种于液体培养基。再次灭菌管口，塞好棉塞。贴上标签，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。
㈢细菌代产物观察（示教）
1、糖发酵试验：细菌分解糖后产酸产气，产酸后使批示剂显色，产气后可见到气泡。产酸产气以“＋”表示，只产酸不产气以“＋”表示，不分解以“－”表示。大肠杆菌和伤寒杆菌分解糖的结果如下：
2、硫化氢试验：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生硫化氢气体。硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐反应，形成黑色的硫化铁或硫化铅沉淀，为阳性，无黑色沉淀为阴性。大肠杆菌硫化氢试验为阴性，乙型副伤寒杆菌为阳性。
㈣药敏试验（示教）
1、平板划线：
1）用密集划线法将细菌布满平板，方法同平板划线接种法。
2）在无菌接种箱，用左手启开平板盖，用无菌镊子夹取抗菌素纸片，间隔5cm放置平板培养基表面，盖好平板，贴上标签，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。
3）结果：观察抑菌区有无，测量抑菌区的直径。直径<5mm为阴性(不敏感)、直径5?10mm 为轻度敏感、直径10?15mm为中度敏感、直径>15mm为高度敏感。
一、实验容
1、空气中细菌的检查（操作）
2、皮肤消毒试验（操作）
3、咽喉部细菌的检查（操作）
4、常用消毒灭菌器械的使用（示教）
二、实验目的
1、证明在自然界和正常人体体表有许多细菌存在，以树立严格的消毒及无菌观念。
2、了解常用消毒灭菌器械的使用方法，初步掌握紫外线的灭菌方法护注意事项。
三、实验材料
普通琼脂平板、SS琼脂平板、血平板、接种环、酒精灯、高压消毒灭菌器、干烤箱、紫外线、大肠杆菌培养液、1％龙胆紫、2.5％碘酒，75％乙醇、无菌棉签、镊子等。
四、实验方法
㈠空气中细菌的检查（操作）
1、取普通琼脂平板4个，启开皿盖，培养基面向上，分别放在实验室、寝室、室外及无菌操作台等处，暴露10?20min后加盖。
2、于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。
3、结果：如实填写。
㈡皮肤消毒试验（操作）
1、取普通琼脂平板1个，在底部用玻璃蜡笔划线分区并标号，启开皿盖，用右手食指轻轻涂抹培养基表面。
2、用2.5％碘酒消毒右手食指后，再用消毒后的手食指轻轻涂抹培养基表面，加盖。
3、于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。
4、结果：如实填写。
㈢咽喉部细菌的检查（操作）
1、取血平板1个，启开皿盖，口对培养基表面（距离约10cm），深咳嗽三次（不可吹痰），加盖。
2、于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。
3、结果：如实填写。
㈣常用消毒灭菌器械的使用（示教、介绍）
1、紫外线杀菌试验
⑴点燃酒精灯，取普通琼脂平板1个，在底部用玻璃蜡笔划线分出二个区并标号，启开皿盖，右手持接种环在火焰上灭菌后，稍冷，取大肠杆菌培养液一环，密集划线，加盖。
⑵将培养基置于无菌接种箱，启开皿盖，将盖子盖于培养基上的一半，打开紫外线灯开头，
照射30min后，加盖。
⑶于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。
⑷结果：如实填写。
2、手提式高压蒸气灭菌器（介绍）
⑴构造：略
⑵用法：加水至规定的水平面、放入灭菌物品，加盖、旋紧，打开排气阀；通电加热、温度逐渐上升时，器冷空气由排气阀排出，待有大量蒸气逸出时，关闭排气阀，继续加热，直到压力表的指针指在所需的位置后，调节电源，控制温度，维持20?30min后，打开排气阀排气，待压力表指针指向“0”时，再开盖取物。
⑶注意事项：①灭菌开始时必须排尽冷空气；②灭菌完毕，切不可突然打开盖子排气减压，以免瓶液体等冲出外溢；③放置物品不应太挤。
⑷用途：用于耐高温和不怕潮湿的物品灭菌。
病原性球菌的检查
实验目的：
1掌握病原性球菌的形态、染色特性。
2了解脓汁标本的病原性球菌的分离鉴定的程序。
3了解抗“O”试验的原理、方法及临床意义。
实验容：
1、病原性球菌标本的观察。
2、脓汁标本中病原性球菌的分离鉴定的程序。
3、抗“O”试验
实验材料：
显微镜、细菌标本、玻片、试管、试管架、吸管、水浴箱、注射器、2.5%碘酒、棉签、
生理盐水、血平板、兔血浆、抗“O”试剂、血平板。
实验方法：
(2)病原性球菌标本的观察
1、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌、淋球菌的形态观察（操作）。
2、葡萄球菌、链球菌溶血现象观察（示教）。
(4)脓汁标本中病原性球菌的分离鉴定的程序
直接涂片革兰染色镜检
脓汁标本观察菌特征及溶液血情况
接种血平板24h培养后观察取菌落涂片革兰染色镜检
取菌落作生化反应、致病力试验
(5)抗“O”试验
原理：
乙型溶血性链球菌能产生溶血素“O”，能溶液解人和兔红细胞并有很强的抗原性，
能刺激机体产生抗溶血素“O”（抗体）。抗溶血素“O”能中和溶血素“O”的溶血作用。本法是将病人血清与已知溶血素“O”抗原先混合，作用一段时间后，再加入红细胞悬液。若红细胞不被溶解为阳性，溶解为阴性。
方法：
1、取小试管6支，分别编号，分两排置于试管架上（1-3为第一排，4-6为第二排）。
2、第一排试管加待检血清(0.25ml)分别稀释为200、400、800倍；第二排试管加待检血
清(0.25ml)分别稀释300、600、1200倍。
1.正常菌群对机体的益处不包括（ D ） A.刺激免疫系统成熟 B.抗肿瘤 C.抗致病菌生长 D.产生干扰素 E.提供营养 参考：教材164页三、微生物与人类的关系正常菌群 2.溶菌酶对G＋菌的作用是（ B ） A.破坏磷壁酸 B.裂解聚糖骨架 C.损伤细胞膜 D.抑制菌体蛋白合成 E.降解核酸 参考：教材169页尾行 3.可在细菌间传递DNA的物质是（ E ） A.鞭毛 B.中介体 C.荚膜 D. 普通菌毛 E. 性菌毛 参考：教材174页2。性菌毛 4.细菌致病性的强弱主要取决于细菌的（ E ） A.荚膜 B.菌毛 C.侵袭性酶 D. 毒素 E. 毒力 参考：教材192页，第三节细菌的毒力物质 5. .决定痢疾杆菌侵袭力的首要因素是( D ) A.内毒素 B.外毒素 C.侵袭性酶 D.菌毛 E.肠毒素 参考：教材252页，二、致病性与免疫性 6.湿热灭菌法中杀菌效果最彻底的是（ D ） A.煮沸法 B.巴氏消毒法 C.间歇灭菌法 D.高压蒸汽灭菌法 E.流通蒸汽灭菌法 参考：教材201页一、热力消毒灭菌法 7.可用于分离脑膜炎球菌的培养基是（ B ） A.血平板 B.巧克力平板 C.沙氏培养基 D.双糖培养基 E.碱性平板 参考：教材240页一、脑膜炎奈瑟菌2。培养特性
8.以内毒素为主要致病因素并可引起全身感染的肠道致病菌是（ A ） A. 伤寒杆菌 B. 志贺痢疾杆菌 C. 大肠杆菌 D.霍乱弧菌 E.肠炎杆菌参考：教材198页3）内毒素血症 9.不引起毒血症的毒素是（ B ） A.葡萄球菌肠毒素 B.霍乱肠毒素 C.志贺毒素 D.白喉毒素 E.破伤风痉挛毒素 参考：教材198页2）毒血症 10.在人体肠道正常菌群中占绝对优势的细菌是（ C ） A.大肠杆菌 B.变形杆菌 C.无芽胞厌氧菌 D.白色念珠菌 E.沙门菌 参考：教材164页三、微生物与人类的关系正常菌群 11.结核菌素试验的用途不包括（ C ） A.选择卡介苗接种对象 B.判断卡介苗接种效果 C.诊断Ⅳ型超敏反应? D.辅助诊断婴幼儿结核病 E.判断细胞免疫功能 参考：教材269页（三）结核菌素试验 12.引起败血症的细菌除外（ A ） A.白喉杆菌 B.金黄色葡萄球菌 C.绿脓杆菌 D.乙型溶血性链球菌 E.大肠杆菌 参考：教材198页4）败血症 13．一般不入血引起败血症的细菌是（ A ） A. 白喉杆菌 B. 大肠杆菌 C. 绿脓杆菌 D. 变形杆菌 E. 产气荚膜杆菌 参考：教材198页4）败血症 14. 与结核杆菌致病性有关的物质是( D ) A.外毒素 B.侵袭性酶 C.菌体表面构造 D.细胞壁类脂 E.内毒素
［实验名称］:沉淀反应 ［实验目的］:通过单向琼脂扩散测定待测血清Ig 含量 ［实验材 料］: 打孔器 (1) 将溶解后的离子琼脂冷却到4 5 °C ，加入适 当浓度的抗原混 合均匀，吸取3—4毫升加在载玻片上，使其均匀布满载玻片 而又 不流失。 (2) 琼脂凝固后制成凝胶板，然后隔适当距离打孔。 (3) 在孔内滴加待测可溶性抗体。 (4) 将凝胶平板放入带盖瓷盘中，下面垫一湿纱布以保持湿度，置 于3 7 °0恒温箱中2 4小时，观察沉淀环。 单向琼脂扩散是一种定量试验，主要用来测定标本中各种免疫球 蛋白或补体成分的含量。 在孔中加入待测抗体使其向四周扩散，经一定时间后抗体与琼脂 中抗原相遇，在比例适宜处生成白色沉淀环。 沉淀环直径与抗体浓度成正比。根据测试样品沉淀环直径的大 小，可从已知的标准曲线中查出样品中抗体的含量。 实验二 ［实验名称］:间接凝集抑制试验（妊娠试验） ［实验目的］:测定待检尿液中是否含HCG （绒毛膜促性腺激素）以诊断妊娠 ［实验材料］:孕妇尿液、非孕妇尿液、HCG 致敏乳胶抗原、抗HCG 血清、载 实验一 1%离子琼脂、白喉类毒素、白喉抗毒素、载玻片、毛细吸管 ［试验步骤］: ［实验结果］: (沉淀环直径) 测量沉淀环直径: 毫米 ［实验分析］
玻片等 ［试验步骤］: （1）取一片载玻片，标记出左右。 （2）在载玻片左侧加一滴待检尿液，右侧加一滴非孕妇尿液。 （3）在两侧尿液中分别加一滴抗HCG血清，摇动混匀2 —3分钟。 （4）在两侧液滴中分别再加一滴HCG致敏乳胶抗原，摇动混匀2 — 3分钟。 （5）观察判定结果。 ［实验结果］:（凝集和非凝集的描述） 左侧（待检尿液侧）呈现均匀的乳状液状态，无凝集颗粒。间接凝集抑制阳性。 右测（非孕妇尿液侧）出现明显的凝集颗粒。间接凝集抑制阴性。 ［实验分析］:（结合实验原理） 孕妇尿液中的HCG含量显著增高。尿液中的HCG与加入的抗HCG结合, 抗HCG被消耗，使得加入的HCG乳胶抗原不能再与抗HCG结合，不出现乳胶抗原间接凝集反应（凝集被抑制），所以液滴呈现均匀乳状液，为乳胶间接凝集抑制阳性反应。 非孕妇尿液中HCG含量极少，不足以抑制抗HCG与HCG乳胶抗原发生间接凝集反应，所以出现乳胶颗粒的凝集，为乳胶间接凝集抑制阴性反应。
1实验容： 2显微镜油镜的使用与保护。 3细菌的形态与结构的观察。 4实验目的： 5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。 6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。 7熟悉细菌的特殊结构。 8实验材料： 显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。 4实验方法： (1)显微镜油镜的使用与保护 显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。
1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。 2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。 3、调节焦距：选一细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。 ⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。 ⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。 4、显微镜的保护： ⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。 ⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。 ⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱。置于干燥处，以防受潮。 (二)细菌形态观察 1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌 2、细菌的特殊结构： 荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌 鞭毛：水弧菌（周毛菌） 芽胞：破伤风杆菌（芽胞位于菌体顶端，呈鼓槌状）
2012级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健 日期：2014.6.11
一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。
医学免疫学与微生物学》形成性考核册答案 作业一 １、免疫系统具有哪些功能，正常或异常时有何生物学效应？ 答：（１）免疫防御：指机体抵御外来抗原性异物入侵的一种保护功能。正常时可抵御病原微生物的感染和损害，即抗感染免疫。异常时如果防御功能过强出现超敏反应，免疫防御功能过低（免疫缺陷）会导致反复发生感染。 （２）免疫稳定：指维持体内环境相对稳定的生理机能。正常时可及时清除体内损伤、衰老、变性的细胞以及抗原－抗体复合物等抗原性异物，对自身成分耐受和保护。功能紊乱时会导致自身免疫疾病，失去了对自身抗原的耐受而对自身细胞发动攻击。 （３）免疫监视：指免疫系统及时识别、清除体内突变、畸变细胞和病毒感染细胞的一种生理保护功能。功能正常时可防止肿瘤产生，功能失调时可导致肿瘤发生，或病毒感染不能及时清除，造成病毒持续性感染。 ２、列出医学上重要的抗原物质 答：（１）微生物及其代谢产物：如细菌及细菌毒素、病毒等微生物，既可在感染时引起机体免疫应答清除病原微生物，也可人工利用这些抗原制备疫苗、类毒素、抗毒素用于人工免疫预防和治疗，或体外进行抗原抗体检测进行疾病的诊断。 （２）动物免疫血清：人工制备的抗毒素如破伤风抗毒素是由马血清制备，对人而言，既含有特异性抗体可中和毒素，又含有异种动物蛋白引起超敏反应。在应用抗毒素前应做皮试判断有无过敏现象。 （３）同种异性抗原：如血型抗原和组织相容性抗原。输血和器官移植前应进行血型鉴定或组织配型以避免发生输血反应和移植排斥反应。 （４）肿瘤抗原：分为肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原。如肝癌患者体内出现高水平ＡＦＰ（甲胎蛋白），可用于肝癌的普查和早期诊断。 ３、简述抗体的种类和主要功能 答：抗体依据重链抗原性不同分为五类：IgG IgA IgM IgD IgE。 IgG：血清中含量最高，是最重要的抗感染分子，包括抗菌、抗病毒、抗毒素 等。还能激活补体，增强巨噬细胞的吞噬功能（调理作用），穿过胎盘保护胎儿及新生儿免受感染。 IgA：分为单体和双体两种。单体存在于血清中，双体存在于粘膜表面及分泌物中，是粘膜局部抗感染的重要因素。 IgM：是分子量最大、体内受感染后最早产生的抗体，具有很强的激活补体作用和调理作用，时作重要的抗感染因子，且常用于诊断早期感染。 IgD：主要存在于成熟Ｂ细胞表面，是Ｂ细胞识别抗原的受体。 IgE：血清中含量最少，某些过敏性体质的人血清中可检测到，参与介导Ⅰ型超敏反应。４、简述补体的生物学活性 答：补体的生物学活性主要有： （１）溶菌和溶细胞。细菌等抗原物质和相应抗体结合形成抗原抗体复合物，可通过经典途径激活补体系统；革兰氏阴性菌的脂多糖可通过旁路途径激活补体，在细菌等靶细胞表面形成膜攻击复合物，最终导致细菌细胞或靶细胞裂解。 （２）促进抗体中和及溶解病毒。补体可明显增强抗体对病毒的中和作用，在没有特异性抗体存在的条件下，补体也可溶解灭活某些病毒。 （３）调理和免疫粘附。补体裂解产物与细菌及吞噬细胞结合，促进吞噬细胞的吞噬作用，即调理作用；若与红细胞、血小板结合可形成较大的聚合物利于吞噬细胞的吞噬，此即免疫粘附作用。
微生物实验报告模板 淀粉与微生物篇一：实验十分离产淀粉酶的微生物 第十次实验分离产淀粉酶微生物 学院：生命科学学院 专业：生物科学类 年级：20XX级 姓名： 学号：1007040085 20XX年XX月XX日 实验十分离产淀粉酶的微生物 一、实验目的 1、熟悉常用微生物培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。 2、学习各种无菌操作技术，并用此技术进行为微生物稀释分离、划线分离接种。 3、用平板划线法和稀释涂布平板发分离微生物。 4、认识为微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 5、掌握分离产淀粉酶微生物的试验方法和步骤，了解产淀粉酶的微生物种类及形态。 二、实验原理 土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般
在较干燥，偏碱性、有机质丰富的土壤中放线苗数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离产淀粉酶的微生物，应该取那些富含产淀粉酶的微生物的土样。从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一类型微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有 1、简单单细胞挑取法 2、平板分离法和稀释涂布平板法 此次实验采取的是平板分离法和稀释涂布平板法结合，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括： 1)稀释后的细胞悬液图不在平板上可以分离得单个菌株 2)在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 3)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。 以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后变透明），则产淀粉酶微生物被分离出来。本实验
山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物 大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测 微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每 格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于 矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有 等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以 测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大 倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺 测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放 大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物 细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直 径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接 计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前 国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。 后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间 的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除 了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法， 此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操
环境微生物学实验报告 一、实验目的 （1）了解普通光学显微镜的构造及原理，掌握显微镜的操作及保养方法。（2）观察、识别几种原核微生物。真核微生物的个体形态，学会生物图的绘制。 二、实验器皿与材料 （1）器皿：显微镜、擦镜纸、二甲苯。 （2）材料：示范片：细菌三形（球状、杆状、螺旋状）、弧状（硫酸盐还原菌）、丝状（浮游球衣菌等）、细菌鞭毛及细菌荚膜。放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。 三、实验步骤 （1）将标本片放在载物台上，使观察的目的物置于圆孔正中央。（2）将镜头换成低倍镜，将粗调节器向下旋转（或载物台向上旋转），眼睛注视物镜。当物镜的尖端距离载玻片约0.5cm 处时停止旋转。 （3）左眼对着目镜观察，将粗调节器向上旋转，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细调节器调节，直至目的物清晰。此时找到目的物并移至中央。（4）换成高倍镜，观察目的物，旋转细调节钮，直至视野清晰。（5）观察示范片，绘出其形态图。 四、思考题 （1）使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察？答：为了
找到目的物并移动到中央。 （2）要使视野明亮，除采用光源外，还可采取哪些措施？ 答：调大孔径光阑，调整光源。如果是用反光镜的显微镜，用凹面镜可使视野明亮。 五、生物图 实验二、微生物培养基的配制与灭菌 一、实验目的 （1）熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。 （2）了解配置微生物培养基的基本原理，掌握配置、分装培养基的方法。（3）学会各类物品的包装、配置（稀释水等）和灭菌技术。 二、实验器皿与材料 （1）实验器皿：高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培养皿、试管、刻度移液管、锥形瓶、烧杯、两桶、药物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉网、药匙、铁架、表面皿、pH试纸和棉花等。 （2）材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂等。 三、实验原理 培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水，按一定的体积分数配置而成。调整合适的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。由于微生物种类及代谢类型
山东大学实验报告2012年 12 月 4日 姓名系年级 2011级生科2班组别四 科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应 微生物的生理生化反应 一、【实验目的】 1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 二、【实验仪器与试剂】 菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄 糖蛋白胨水培养基； 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管 三、【实验原理】 1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种 微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。 2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质 分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。 3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说 明此中菌可产生分解油脂的酶。 4.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数 细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气. 例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。 5.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。 （1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并 非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测
《医学免疫学与微生物学》试题及答案 一、填空题（每空1分，共15分） 1．免疫防御功能正常时表现为_______________，如水平过低可导致 __________________。 2．具有____________性而缺乏 ____________性的物质称为半抗原。 3．经典的Ⅰ类基因和Ⅱ类基因的二个特点是__________________和 ___________________。 4．CK通常以___________的方式作用于产生CK的细胞本身，或以___________方式作用于邻近细胞。 5．TCR-CD3复合体中，TCR的功能是________________,CD3分子则通过胞浆内的______________结构，将抗原信号转导到细胞内。 6．细菌结构中缺乏_____________，称为细菌L型。 7．肠热症主要由______________引起。 8．可感染人的禽流感病毒亚型是________________。 9．汉坦病毒是_________________的病原。 10．细菌内毒素的化学成分是______________。 二、名词解释（每小题3分，共15分） 1．异嗜性抗原 2．单克隆抗体 3．细胞因子 4．败血症 5．微生态失调 三、单选题：从下列A、B、C、D 4个备选答案中，选出1个正确答案并将其英文字母填在括号内（每小题1分，共30分） 1．适应性免疫的特征是（） A．出生时即具有 B．反应迅速 C．特异性 D．无记忆性 2．下列对抗毒素的叙述中，错误的是（） A．类毒素免疫动物的免疫血清制成 B．注射前需作皮肤试验 C．既可中和外毒素，又可能引起超敏反应 D．用于人工自动免疫 3．下列哪类Ｉｇ升高可提示机体近期感染（） A．IgG B．IgM C．IgE D．IgA 4．遗传性血管神经性水肿患者血清中升高的补体成分是（）
微生物免疫学实验报告Newly compiled on November 23, 2020
1实验内容：
2显微镜油镜的使用与保护。 3细菌的形态与结构的观察。 4实验目的： 5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。 6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。 7熟悉细菌的特殊结构。 8实验材料： 显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。 4实验方法： (1)显微镜油镜的使用与保护 显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。 1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。 2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。 对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。 3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。 ⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。 ⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。 4、显微镜的保护： ⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。 ⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。 ⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。置于干燥处，以防受潮。
年级：2009 专业：医学检验班级：一班姓名：赵富海学号：2009221792 实验八、细菌的药物敏感试验 【K-B法】 菌种（均为幼龄菌）：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠埃希菌1.5×108/ml 药物纸片：青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星 方法： 1.涂菌（棋盘划线法），室温放10min； 2.贴药敏纸片，注意间距（大于24mm）和边距（大于15mm）； 3.置35℃24h判读结果。 结果如图所示： 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果 实验结论：金黄色葡萄球菌对青霉素耐药，对庆大霉素、新诺明、环丙沙星敏感。 【试管稀释法】 菌种：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠b1.5×108/ml 抗生素：庆大霉素32u/ml 方法： 1.对倍稀释抗生素
2.加菌液0.1ml/管，摇均35℃16—18h 3.判读MIC 试验操作如下图所示： 注意:设立对照管(肉汤对照管,待测菌生长对照管和质控菌生长对照管) 结果判断: 不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对该细菌的MIC. 如图： 实验结论：MIC=原药物浓度(32u/ml) ×稀释倍数(1:24)=2u/ml 【联合药敏试验】（示教） 金黄色葡萄球菌大肠b 结果判断： 金黄色葡萄球菌联合药敏试验结果判读：
①青+链=青单+链单→相加作用 ②青+红=青单+红单→相加作用 ③青+万=青单+万单→相加作用 ④青+林＞青单+林单→协同作用 大肠b联合药敏试验结果判读： ①青+红=青单+红单→相加作用 ②青+链=青单+链单→相加作用 ③青+林=青单或林单→无关作用 ④青+南＞青单+南单→协同作用 【实验讨论】 1．K-B法原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。 2. K-B法影响因素 ①培养基的质量，如PH、深度、硬度和表面湿度等； ②药敏纸片的质量，含药量和保存方式； ③接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于比浊标准的配制，正确使用和保存； ④试验操作质量：接种细菌后贴片时5~15分钟； ⑤孵育条件，温度和时间：培养时间16~18h,不要超过24h。 3．稀释法原理： 以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待测细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。 4. 稀释法影响因素：培养基、接种菌量、蛋白质结合率、抗菌药物的配制、结果观察的时间等因素均能影响本试验的结果。 5．抗生素药物敏感性试验（AST）的意义 ①可预测抗生素治疗的效果，既AST试验结果为“敏感”时，治疗可能有效；试验结果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失败； ②指导临床医生选择使用抗生素，AST的结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有效，若结果为“耐药”，即应更换药物； ③提供所选择药物的依据； ④监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐药菌感染的发生和流行。 6．通过此次实验掌握纸片扩散法（K-B法）、试管稀释法的原理、操作方法、结果的判读及其临床意义，并掌握联合药敏试验结果的观察、判断。
医学免疫学与微生物学各章练习题 第一篇医学免疫学 一、填空题 1．机体免疫功能正常时，可发挥——功能、——功能和——功能。 2．超敏反应的发生是由于机体免疫防御功能反应——；而发生肿瘤是由于——功能缺陷。 3．免疫是指机体免疫系统识别——和——物质并产生一系列生物学效应的过程。 4．免疫系统清除体内衰老、损伤、变性细胞的功能称为。该项功能失调可引起——。 5．医学免疫学的起源学科是——。 二、名词解释 1．免疫 三、问答题 1．简述基础免疫学的主要研究内容包括哪些? 2．免疫系统具有哪些功能?这些功能正常或失常表现出何种生物学效应? 参考答案 一、填空题 1．免疫防御，免疫自稳，免疫监视 2．过强，免疫监视 3．自己，非己 4．免疫自稳功能，自身免疫病 5．微生物学 二、名词解释 1．免疫：是指机体免疫系统识别“自己”与“非己”抗原物质，对“自己”耐受而排除“非己”抗原物质的生理过程。 三、问答题 1．基础免疫学的主要研究内容包括：(1)免疫系统的组成和功能。(2)抗原物质的种类和特点。(3)免疫应答的过程、规律和特点。(4)免疫学应用，包括免疫学防治和免疫学诊断。 2．免疫系统的功能及效应： (1)免疫防御：是机体抵御外来抗原性异物入侵的一种保护功能。功能正常可防止病原微生物的感染和损 害，即抗感染免疫。功能异常有两种情况：免疫防御功能过强出现超敏反应；免疫防御功能过低(免疫缺陷)会导致反复发生病原微生物的感染。 (2)免疫自稳：是机体免疫系统维持体内环境相对稳定的一种生理机能。功能正常可及时清除体内损伤、 衰老、变性的细胞，以及抗原抗体复合物等抗原异物，对自身成分耐受与保护。功能紊乱或失调会导致自身免疫病，即认己为敌，失去了对自身抗原的耐受而对自身细胞发起攻击。 (3)免疫监视：指机体免疫系统及时识别、清除体内突变、畸变细胞和病毒感染细胞的一种生理保护功能。 功能正常可防止肿瘤产生；功能失调可导致肿瘤发生，或病毒感染不能及时清除，造成病毒持续性感染。 第一章免疫器官 一、填空题 1．免疫系统的组成包括——、——和——。 2．人类中枢免疫器官包括——和——。 3．人类周围免疫器官包括——、——和——。 4．骨髓是——分化成熟场所；胸腺是——分化成熟场所。 5．免疫细胞接受抗原刺激并产生免疫应答的重要场所是——、——和——。 6．淋巴结中的B淋巴细胞主要存在于——区，而T淋巴细胞主要存在于淋巴结的——。 二、A型选择题 1．T细胞分化成熟场所是( )。 A．骨髓 B．胸腺 C．黏膜相关淋巴组织 D．脾 E．淋巴结 2．人类B淋巴细胞分化成熟场所是( )。 A．骨髓 B．胸腺 C．腔上囊 D．脾 E．淋巴结 3．中枢免疫器官的功能是( )。 A．T淋巴细胞成熟场所 B．B淋巴细胞成熟场所 C．T淋巴细胞居住及产生免疫应答场所 D．B淋巴细胞居住及产生免疫应答场所 E．免疫细胞分化成熟场所 4．周围免疫器官的功能不包括( )。 A．接受抗原刺激 B．产生免疫应答 C．过滤和清除病原微生物 D．造血及产生免疫细胞 E．过滤血液 三、问答题 1．简述免疫器官的组成和主要功能。 参考答案 一、填空题
培养基的配制和灭菌 细菌的纯种分离、培养 接种技术及菌落形态的观察 姓名：张世凡 学号：201330480123 课程名称：环境工程微生物实验
一、实验目的 1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。 2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。 3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。 4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。 5、学会几种接种技术。 6、平板菌落计数。 7、抗Cu菌的筛选。 8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。 9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。 二、实验原理 1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的 需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。 本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。 2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。加压蒸汽灭 菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。接种时对接种针等采用灼烧灭菌。 3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散 成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。此法加样量不宜太多，只能在 0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。平 板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。 4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另 一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。本次实验采取斜面接种法、穿刺接种法，使用到的接种工具是接种环，接种针。 5、菌落形态观察原理：由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动能力、生理 特性及产生色素的能力等各不相同，因而个体及它们的群体在固体培养基上生长状况各不一样。按照微生物在固体培养基上形成的菌落特征，可从菌落的形状、大小、表面结构、边缘结构、菌丛高度、颜色、透明度、气味、粘滞性、质地软硬、表面光滑粗糙等情况，初步辨别是何种类型的微生物。
免疫实验—抗血清制备及抗体效价检测 摘要：用具有抗原性的物质牛血清白蛋白（BSA)注入到健康动物例如鼠、兔的 机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。抗血清，是指含有免疫蛋白的血清。抗体效价指抗体的物理状态及其在体内滞留时间，以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果。此次实验主要是进行小鼠的牛血清白蛋白（BSA)抗血清的制备过程，并通过酶免疫吸附试验（ELISA）对其进行抗体效价检测。 关键字：牛血清白蛋白（BSA) 抗血清抗体效价免疫 实验过程： 本次实验一共分为三个分实验： 实验一：免疫 实验二：抽血、放血，分离抗血清 实验三：ELISA测定抗体效价 实验一：免疫 一、抗血清制备的原理 用具有抗原性的物质注入到健康动物的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。二、目的 制备高效价的抗血清 三、实验仪器、材料和试剂 实验仪器：1mL 注射器，酒精棉球，剪刀 材料：家兔，小鼠 试剂：3％～5％苦味酸溶液或80％～90％苦味酸，牛血清白蛋白（BSA) 三、方法和步骤 1、动物编号 左前腿上部为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6，右侧从前至后依次为7、8、9。红色表示十位数,用黄色表示个位数。免疫前用金属编号牌固定兔耳，或用染料涂沫在动物的背部，作出明确的标记。
如下图所示抓取目标动物 家兔为300～600 μg/次（400），每次不超过2mL；小鼠为10～100 μg /次（10-20，20~40 μg / ml），每次不超过0.5mL。 小鼠腹腔注射 以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推 0.5～1.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液， 为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。
微生物学实验报告格式 专业学号 姓名 实验一、???培养基的配制和高压蒸汽灭菌 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际用到哪些试剂、材料、玻璃器皿等都要写出，包括数量） 四、实验步骤（按照实际步骤填写,切忌抄袭） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、简述培养基的配制原则？ 2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？ 3.高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？ 实验二自生固氮菌的分离纯化 （这是个综合实验，请大家回顾三周来的所有操作步骤，将其整理成连贯完整的一份报告，注意每次实验的衔接，不要把其他的实验项目写进来，但也不要漏写该实验的相关步骤。） 一、实验目的
二、实验原理 三、实验材料（整个综合实验有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙每周所做的相关步骤） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 2、如何从自然界中分离自己所需要的纯培养？ 实验三平板培养测数法 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际操作有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙相关步骤） 五、实验结果 六、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 七、思考题 1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷却至45℃左右才能倒平板？
2、本次实验是否成功？如果失败，试分析原因。 实验四简单染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并描述所观察到的细菌的显微形态） 六、思考题 1、简单染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 实验五革兰氏染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并判断自己分离到的菌种是G还是G+-？） 六、思考题 1、革兰氏染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？
实验四环境中微生物的检测和分离纯化 一、实验目的 1.熟悉常用微生物培养基的配置方法。 2.学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。 3.用平板划线法和稀释法分离微生物。 4.认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 二、实验原理 土壤中有数量巨大、种类丰富的微生物，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法。 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。 三、实验器材 土样10g，牛肉膏蛋白胨培养平板20个，未知菌种平板，当天降雪； 平皿，涂棒，接种环，无菌200ul, 1000ul吸头，记号笔，酒精灯，取液器:1000ul 、200ul 各一支，培养箱； 0.9% 无菌生理盐水，250ml三角瓶中装99ml生理盐水,每瓶加约20粒玻璃珠，250ml 三角瓶中99ml生理盐水,作100倍稀释用。 四、实验步骤 1.配置培养基：取牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000ml配置培养基，调 pH至7.2，灭菌。于讲课前倒板20块。 2.采集野外样品：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~20cm深度的土壤数10g,装入烧杯,带 回实验室;取校河水装入烧杯，带回实验室；取新积雪中间层转入烧瓶，带回实验 室。 3.制备土壤稀释液：称取土样1.0g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中， 用手振荡5min使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。用200ul的无菌吸头从中吸 取0.1ml土壤悬液，注入事先分装有0.9ml无菌水的试管中，吹吸3次，摇匀（10-3）。 类推制得10-4、10-5的土壤悬液。 4.涂板： 1）土壤稀释液（9块）：用无菌吸头，分别吸取10-3、10-4、10-5浓度土壤稀释液100ul，较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃 涂棒涂匀。每个浓度做3个平板。 2）单菌落划线（4块）：用接种环挑取未知平班上的菌落，做单菌落划线分离，每人2板。 3）手指（1块）：分别用未洗过的手指头, 用自来水打湿的手指头，用自来水洗过的手指头，用肥皂洗过的手指头和用酒精棉球擦过的手指头(不用毛巾擦)在同 一平板的不同分区涂抹（用力一致）。
从土壤中分离纯化培养微生物并作初步观察鉴定 【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化，根据细菌在选择培养基的存活情况，确定该菌种的固氮解磷解钾属性。 【关键词】细菌芽孢杆菌培养基、选择培养基的配制高压蒸汽灭菌 前言： 在自然条件下，微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。群落是不同种类微物的混和体。为了生产和科研的需要，人们往往需要从自然界混杂的微生物群体中分离出具有特殊功能的纯种微生物；或重新分离被其他微生物污染或因自发突变而丧失原有优良性状的菌株；或通过诱变及遗传改造后选出优良性状的突变株及重组株。这种获得单一菌株纯培养的方法称为微生物的分离纯化技术。 分离纯化技术主要由采集样品、富集培养、纯种分离和性能测定等几个基本环节组成。 实验目的： 1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。 2、学习、掌握微生物的鉴定方法。 3、对提取的土样进行微生物选择培养、分离、纯化，根据菌落的存活状况来判断未知 菌的属性。 实验原理： 菌种来源:选择无机磷农药含量较高的土壤,有机磷农药化工厂 旁边的土壤和排污口区的污水. 培养基的选取：五组选择培养基，分别以辛硫磷、甲胺磷、敌敌畏、草甘膦及五种有机磷农药混合为微生物生长的唯一氮源磷源。 分离纯化微生物：稀释倒平板法、涂布平板法、稀释摇管法、平板划线分离法。 此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：（一）选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部
分不需要的微生物。（二）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。 微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。 1. 实验器材、试剂与实验方法： 1.1器材： 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、培养皿、自动立式压力蒸汽灭菌器、烘箱、玻璃珠、移液枪、枪头、称量纸、药匙、试管架、接种环、酒精灯、超净工作台, 粉碎机，接种环，移液枪配枪头。 1.2试剂： 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、1mol/L NaOH、1mol/LHCl、NaCl、95%乙醇、75%酒精，草甘膦，甲甘磷，敌敌畏，辛硫磷。 1.3土样、样品： 取自二十三冶草莓园的土壤，建设北路的大棚蔬菜菜地土壤，化工厂污水口。 1.4 实验方法 1.4.1配制培养基： (一）配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基200ml(用2个100ml三角瓶和2支试管分装）牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普遍的细菌基础培养基。 配方如下：牛肉膏 0.6g 蛋白胨 2g NaCl 1g 琼脂 3~4g 水 200ml pH 7.4-7.6 1、称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏和蛋白 胨可分别放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2、加热溶解在烧杯中加入少于所需的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用 玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，在此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补充所失水分。 3、调pH 用pH试纸或酸碱度计检测培养基的pH值，若pH偏酸，可滴加1mol/L NaoH， 边加边搅拌，并随时检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用１mol/l HCL进行调节。 pH调节通常放在加琼脂之前。注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的