药敏试验结果解读及临床应用
一、药敏试验的目的
药敏试验是使用体外试验的方法检测细菌的耐药性，预测抗菌药物的临床治疗效果，在药物种类的选择上为临床医生提供帮助，以实施个体化治疗。
当前，“对症下药”已经变得难以奏效。首先，致病菌的种类发生了改变，一种疾病可以由多种病原菌所引起，包括致病菌和条件致病菌；其次，感染人群发生变化，从健康人群到老年人、长期使用激素、免疫抑制剂及放疗、化疗的人群，临床症状常常不典型；最后，早期不规范使用抗生素，也会导致临床症状不典型。
与此同时，“对菌下药”又难以获得满意效果。耐药菌尤其是多重耐药菌的出现，使临床医师按照抗生素的作用机制选择1～2种抗菌药物不能覆盖常见的病原菌。因此，药敏试验成为临床工作的重要手段之一。
二、哪些细菌需要做药敏试验？
对任何分离的可疑病原菌，若不能从该菌的种属特征可靠地推知其对抗菌药物的敏感性，就需要进行药敏试验。以下情况不必进行药敏试验：正常定植菌与感染的关系不明确时；污染菌；已知细菌对某种抗生素天然耐药；已知细菌对某种抗生素全部敏感。检验地带网
三、药敏试验中药物的选择
主要根据细菌种类和抗生素作用机制选药。选择试验的药物应具有确切的临床疗效，试验药物的体外试验结果可以接受，并且试验药物具有代表性。
目前我国临床实验室采用美国国家标准化委员会（NCCLS）/美国临床实验室标准化研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute , CLSI）药敏试验执行标准选药。
NCCLS抗生素选择分组为：
A组：为首选药物，作常规试验和报告。
B组：为首选药物，可与A组药物平行作药敏试验，但只在以下情况下进行选择性报告：细菌对A组抗生素耐药，病人对A组抗生素过敏，严重感染或多部位、多种细菌混合感染，要获得耐药性监测资料。
C组：为备选药物，作为替代或补充，在下列情况下使用：对一个或多个首选药耐药的地区流行株感染，对不常见菌感染的治疗，控制传染病的流行，获得耐药性监测资料。
U组：为备选药物，仅用于尿路感染的治疗。
四、药敏试验所采用的方法
常用的试验方法包括纸片扩散法、稀释法、自动化仪器法、E-TEST（浓度梯度法）。
五、细菌的主要耐药机制
1、产生水解酶，如β－内酰胺酶、钝化酶。
2、细菌上与抗生素的结合靶位改变，如青霉素结合蛋白2a。
3、细菌表面通道蛋白改变，可以使其渗透性发生改变。
4、细菌产生泵出机制。
5、其他机制，如病原菌产生生物被膜、休眠状态等。
六、临床常见病原菌的归属和分类
临床常见病原菌主要包括以下四大类：
1、革兰阳性球菌：如葡萄球菌属、肠球菌属。
2、革兰阴性杆菌：如肠杆菌科细菌（大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肠杆菌属、枸橼酸杆菌属）和非发酵菌（铜绿假单孢菌、不动杆菌）。
3、革兰阴性球菌：如奈瑟菌。
4、革兰阳性杆菌：如棒状杆菌。
七、关于葡萄球菌
（一）葡萄球菌药敏试验板
葡萄球菌药敏试验板包含的抗生素见表1。检验地带网
表1葡萄球菌药敏试验板检验地带网
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药敏试验结果解读及临床应用(2)
（二）葡萄球菌药敏试验结果解释及抗生素选择
1、结果的判定
主要根据青霉素、苯唑西林及万古霉素的结果进行判断和选药，可分为：青霉素（S）；青霉素（R）苯唑西林（S）；青霉素（R）苯唑西林（R）万古霉素（S）。
2、抗生素的选择
（1）青霉素（S）：表示对青霉素类、头孢菌素类均敏感。因此，青霉素为首选抗生素，可选择一代头孢。
（2）青霉素（R）苯唑西林（S）：表示对不耐酶的青霉素耐药，但对耐酶青霉素头孢类抗生素敏感。可使用耐酶青霉素，如苯唑西林，氯唑西林；或使用酶抑制剂组成的复方制剂，如氨苄西林＋舒巴坦；或使用一代、二代头孢。
（3）青霉素（R）苯唑西林（R），即MRS，约占40%-70%。为对所有的青霉素类、头孢类
和其他β－内酰胺类抗生素均耐药，此外对喹诺酮类和大环内酯类抗生素交叉耐药，严重感染唯一有效抗生素是万古霉素。因此，对于轻症感染可选择喹诺酮类、四环素类、复方磺胺、磷霉素等联合用药；重症感染可选择糖肽类，如万古霉素或替考拉宁联合利福平；尿路感染可以选择呋喃妥因、复方磺胺、环丙沙星。
3、临床应用
对于以葡萄球菌感染为主的医院获得性肺炎、细菌性脑膜炎的治疗可以参见以下表2及表3。检验地带网
表2 医院获得性肺炎的病原治疗https://www.doczj.com/doc/3c5664509.html,
表3 细菌性脑膜炎的病原治疗检验地带网
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八、关于肠球菌属
（一）肠球菌属药敏试验板
肠球菌属药敏试验板所选择的抗生素见表4。https://www.doczj.com/doc/3c5664509.html,
表4 肠球菌属药敏试验板https://www.doczj.com/doc/3c5664509.html,
药敏试验结果解读及临床应用(3)
（二）肠球菌属药敏结果解释及抗生素选择
1、结果的判定
根据青霉素、万古霉素和高浓度氨基糖肽类抗生素敏感试验结果判断，可分为：青霉素（S）；青霉素（R）万古霉素（S）；青霉素（R）万古霉素（R）；高浓度氨基糖苷类（S）；高浓度氨基糖苷类（R）。
2、抗生素的选择
（1）青霉素（S）/氨苄青霉素（S）：轻症感染可选择青霉素、氨苄青霉素；重症感染可选择高剂量青霉素或氨苄青霉素联合，氨基糖苷类，亚胺培南。
（2）氨苄青霉素（R）万古霉素（S）：其严重感染可以选择万古霉素联合氨基糖苷类抗生素。
（3）氨苄青霉素（R）万古霉素（R）：即VRE，可以选择壁霉素/新生霉素联合庆大霉素、氟喹诺酮类治疗；或利福平、四环素、红霉素、氯霉素也可作为联合用药；或可选择奎奴普丁/达福普丁、泰利霉素等。
（4）尿路感染：可以选择喹诺酮类、呋喃类。
（5）高浓度氨基糖苷类（S）：表示可以用青霉素、氨苄青霉素或万古霉素与氨基糖苷类联合用药。
（6）高浓度氨基糖苷类（R）：表示青霉素、氨苄青霉素或万古霉素与氨基糖苷类联合用药无效。
3、临床应用见表5。检验地带网
表5 肠球菌属感染临床治疗检验地带网
九、关于革兰阴性菌
（一）革兰阴性菌药敏试验板
革兰阴性菌药敏试验板所用抗生素见表6。检验地带网
表6 革兰阴性菌药敏试验板https://www.doczj.com/doc/3c5664509.html,
药敏试验结果解读及临床应用(4)
（二）肠杆菌科细菌药敏结果解释及抗生素选用
1、结果的判定
主要根据头孢菌素类、氨基糖苷类及头霉素药敏结果进行判断，可分为：一代头孢菌素类(S)，氨基糖苷类（S）；一代（二代）头孢(R)，三代头孢（S）；三代头孢（R），头孢西丁（S）；三代头孢（R），头孢西丁（R），亚胺培南（S）。
2、抗生素的选择
（1）头孢菌素类(S)，氨基糖苷类（S）：轻症感染可选择庆大霉素，氨苄青霉素，哌拉西林，一代头孢；重症感染可选择三代头孢。
（2）一代（二代）头孢(R)，氨基糖苷类（R），三代头孢（S）：可以选用三代头孢。
（3）三代头孢（R）头孢西丁（S）：提示可能为ESBLs，对所有青霉素类、头孢菌素类和氨曲南均耐药。可以选择碳青霉烯类（如亚胺培南、美洛培南），头霉素类（如头孢西丁），β－内酰氨酶抑制剂组成的复方制剂（如哌拉西林/舒巴坦（舒普深））。易产生ESBLs的菌株主要是：大肠埃希菌、克雷伯菌和奇异变性杆菌。
（4）三代头孢（R），头孢西丁（R）：提示可能为高产AmpC酶，对所有青霉素类、头孢菌素类和氨曲南及头霉素均耐药。可以选用碳青霉烯类（如亚胺培南、美洛培南）或四代头孢（头孢吡肟）。易产生诱导型AmpC酶的菌株主要有：肠杆菌属、沙雷菌属、枸橼酸杆菌属。而高产AmpC酶的产生与抗生素诱导有关，三代头孢、克拉维酸、亚胺培南均为强诱导剂。检验地带网
3、临床应用
与肠杆菌科相关的医院获得性肺炎和败血症的治疗见表7和表8。https://www.doczj.com/doc/3c5664509.html,
（三）关于非发酵菌感染
1、非发酵菌感染的特点
非发酵菌感染以铜绿假单胞菌感染最多见，其次有不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克菌。是最常见也是最严重的医院感染，该菌很容易产生耐药性，所以治疗很困难，需根据药敏试验结果选药。
2、铜绿假单胞菌药敏结果解释及抗生素选用
（1）该菌有多种耐药机制存在，应根据药敏试验结果选择治疗药物。并且该菌在治疗过程中很容易产生耐药性，所以治疗3～4天后需重新分离细菌做药敏。
（2）由于该菌耐药率高，一般选择联合用药，可以选择以下联合用药方案：三代、四代头孢＋氨基糖苷类（以头孢他啶最好）；亚胺培能＋氨基糖苷类；脲基青霉素（羧苄、哌拉、替卡、美唑西林）＋氨基糖苷类；酶抑制剂的复合制剂＋氨基糖苷类。
（3）临床应用见表9。https://www.doczj.com/doc/3c5664509.html,
表9 铜绿假单胞菌感染治疗
3、关于不动杆菌属
（1）不动杆菌属感染特点
不动杆菌是医院感染科重要条件致病菌，可引起严重的感染，该菌的耐药率很高，对多数抗生素呈多重耐药，因此对不动杆菌感染的治疗，药敏试验是重要的参考指标。
（2）不动杆菌属药敏试验所采用的抗生素
A组：头孢他啶，美洛培能、亚胺培能。B组：阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、阿莫西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林/克拉维酸、头孢吡肟、头孢曲松、头孢噻肟、氧氟沙星，环丙沙星、四环素、米洛环素、多西环素、美洛西林、替卡西林、哌拉西林、复方磺胺。另外，对常规药物均耐药时可试验多粘菌素/粘菌素敏感性。
（3）根据药敏试验监测结果，目前对不动杆菌敏感性较高的是亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦和喹诺酮类。
（4）临床应用见表10。
表10 不动杆菌感染指导原则https://www.doczj.com/doc/3c5664509.html,
青霉素类抗生素仍有活性，但是氨苄西林，羧苄西林和哌拉西林药敏试验结果为耐药。
4、如果葡萄球菌对红霉素结果为I或R，对任何一种林可霉素敏感，则可能是对红霉素诱导耐药，对其他大环内酯类抗生素可出现交叉耐药。
5、如果葡萄球菌对红霉素结果为I 或R，对任何一种林可霉素为I 或R，则几乎对全部大环内酯类抗生素耐药。
6、如果葡萄球菌对任何三代喹诺酮药物为I 或R，或对环丙沙星为I 或R，则很可能全部喹诺酮药物结果为I 或R。
7、如果葡萄球菌对庆大霉素为R，对苯唑西林为S或对庆霉素为S 对苯唑西林为R，则为罕见生物型，因为两者存在协同耐药。试验结果需要进一步证实。
8、如果葡萄球菌对青霉素结果为敏感或β内酰胺酶阴性并对苯唑西林耐药，则为罕见表型。对苯唑西林耐药的菌株通常耐受青霉素和或β内酰胺酶阳性，试验结果应加以证实。
9、如果葡萄球菌对苯唑西林耐药，而对全部氨基糖苷类抗生素，全部喹诺酮类抗生素，红霉素均是敏感，则是罕见表型，反之亦然。
10、金黄色葡萄球菌对SMZco耐药，则为罕见表型，试验结果需要进一步证实。
11、金黄色葡萄球菌对青霉素为敏感或β内酰胺酶阴性，并且苯唑西林为敏感，则为罕见表型，因为对青霉素敏感的金黄色葡萄球菌很少见。试验结果需要进一步证实。
12、如果凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）对替考拉宁为I或R，除表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌外，CNS对替考拉宁耐药的菌株很少见。需重复试验。
13、粪肠球菌或屎肠球菌对林可霉素的结果为敏感或任何头孢菌素的结果为敏感，则是罕见表型。通常粪肠、屎肠球菌对林可霉素和头孢菌素天然耐药。
注：参考美国临床实验室标准化委员会文件
表1A.美国临床微生物学实验室在非苛养菌常规试验和报告中应考虑的具有FDA临床适应证的抗菌药物建议分组总注释： A.对四环素敏感的菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。然而，某些对四环素中介或耐药的 菌株可能对多西环素、米诺环素或二者敏感。 B.利福平不能单独用于抗菌治疗。 C.分离于泌尿道菌株不被常规报告。 D.头孢噻吩仅被用于预报口服药物结果，包括头孢氨苄、头孢泊肟、头孢氨苄和氯碳头孢。以前 关于头孢噻吩结果可预报其他头孢菌素敏感性建议仍然正确，但近年来还没有数据证实此建议。 E.当测试粪便中分离的沙门菌和志贺菌株时，只有氨苄西林、一种氟喹诺酮类和复方新诺明可用 于常规报告。另外，对肠道外感染沙门菌粉分离株，应测试并报告一种三代头孢菌素，假如需要，也可测试和报告氯霉素。分离于肠道内和肠道外伤寒样沙门菌（伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌A-C）需进行药敏试验。分离于肠道内非伤寒样沙门菌不需进行常规药敏试验。 F.从CSF中分离菌株，试验和报告头孢噻肟和头孢曲松，以取代头孢唑林。 G.其他非肠杆菌科细菌包括假单胞菌和其他非苛养、非发酵葡萄球菌的革兰阴性杆菌，但不包括 铜绿假单胞菌、不动杆菌、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌，因为对这些菌种的建议试验和报告药物表格已分开。 鼻疽伯克霍尔德菌和假鼻疽伯克霍尔德菌试验和报告药物建议请参阅CLSIM45文件。 H.仅对金黄色葡萄球菌包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA） I.青霉素敏感的葡萄球菌对葡萄球菌感染具有临床疗效的其他β-内酰胺类药物也敏感。青霉素耐 药葡萄球菌对青霉素酶不稳定青霉素类耐药。除具有抗-MRSA活性新的头孢菌素外，苯唑西林耐药葡萄球菌对当前所有使用的β-内酰胺类药物均耐药。因此，仅测试青霉素和头孢西丁或苯唑西林二者中任一种，则可推测对各种β-内酰胺类药物的敏感或耐药性。除具有抗-MRSA 活性药物外，不建议常规测试其他β-内酰胺类药物。 J.分离于呼吸道菌株不报告达托霉素结果。 K.头孢西丁纸片扩散法或MIC试验结果可用于预报金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌分离株是否存在mecA介导的苯唑西林耐药。对凝固酶阴性葡萄球菌(除路登葡萄球菌外)，检测mecA介
2. 性能指标 2.1 外观与结构 a）外观应端正、清洁，表面涂、镀层应无明显剥落、擦伤、露底及污垢； b）铭牌及标志应清晰、准确、牢固，所有紧固件不得松动；控制器件操作应灵活、可靠。 2.2 功能要求 2.2.1 系统功能要求 a) 细菌鉴定及药敏分析系统（以下称：“系统”）可以自动读取试剂板细菌生化鉴定和抗菌药物MIC半定量测定的阴、阳性结果； b) 应用程序经分析应可得出被鉴定菌株的名称和抗菌药物MIC结果； c) 应能生成检验报告单； d) 应能打印检验报告单。 2.2.2 软件临床功能纲要 2.2.2.1 检测功能 2.2.2.1.1标本资料录入 提供输入或选择的方式录入标本的姓名、类型及来源等资料。 2.2.2.1.2 出具细菌检测报告 在软件的指引下，用户可选择出具无菌报告或者有菌报告，出具有菌报告时，软件支持自动对试剂板进行检测并生成相应的判读结果，也支持手工录入细菌检测结果，用户可根据实际情况选择。 2.2.2.2 查询功能 根据不同的查询条件，用户可对历史报告单及其相关信息进行查询。 2.2.2.3 设置功能 软件提供各种类型的参数设置，用户可根据实际情况进行预设。 2.2.2.4 统计功能 根据不同的统计条件，用户可对历史数据进行统计分析。 2.2.2.5 WHONET功能 根据不同的WHONET数据要求，用户可将历史数据按要求导出。 2.3细菌鉴定及药敏分析系统性能要求
2.3.1准确性 2.3.1.1 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株鉴定准确性的符合率应≥95%；2.3.1.2 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株抗菌药物MIC半定量测定准确性 的符合性应≥95%。 2.3.2重复性 2.3.2.1 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株鉴定重复性的符合率应≥95%；2.3.2.2 细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株抗菌药物MIC半定量测定重复性 的符合率应≥95%。 2.4 温育系统性能要求（适用96A，不适用于D2Mini/D2Plus） 温度准确度及波动 a) 细菌鉴定及药敏分析系统温度稳定后，准确度偏差应不超过±1.5℃； b) 细菌鉴定及药敏分析系统温度波动应不超过3.0℃。 2.5 环境试验要求 细菌鉴定及药敏分析系统应符合GB/T14710-2009中气候环境试验I组，机械环境试验I组及表2的要求。系统的运输试验、电源电压适应能力试验应分别符合GB/T14710-2009中第4章、第5章的要求。 2.6 安全要求 应符合GB4793.1-2007、GB4793.9-2013和YY 0648-2008的要求。 2.7电磁兼容性要求 应符合GB/T 18268.1-2010和GB/T 18268.26-2010的要求 2.8网络安全要求 2.8.1数据接口：应有通用的标准有线网络接口，使用标准TCP/IP协议； 2.8.2用户访问控制：用户应输入与用户名相匹配的密码才能登录使用系统； 用户类型：分为管理员，普通用户两种； 用户身份鉴别方法及权限：系统根据登录的用户名匹配权限； 管理员有检验操作、数据查询、系统管理权限； 普通用户有检验操作、数据查询权限。
VITEK2 COMPACT全自动鉴定药敏分析标准操作规程 1.目的 规范VITEK2 COMPACT全自动鉴定药敏分析仪的操作规程，确保微生物鉴定药敏分析的准确性。 2.授权操作人 经培训并通过考核的检验科微生物检验实验室工作人员。 3.工作原理 细菌理化性质不同，分解底物导致PH改变而产生不同颜色。经光电比色法测定来判断反应结果，不同种类的鉴定卡上有不同数量和类别的生化反应，采用连续检测法，每隔一段时间仪器会自动判读结果，最后结合仪器内部微生物数据库得出鉴定及药敏结果。 4.工作环境 相对湿度:20%-80%无凝集水;室温:15-30度，避免日光直射。 5.操作程序 5.1卡片选择 5.1.1鉴定卡 GN 革兰阴性杆菌鉴定卡 GP 革兰阳性菌鉴定卡
NH 奈瑟菌嗜血杆菌鉴定卡 YST 酵母菌鉴定卡 ANC 厌氧菌鉴定卡 5.1.2 药敏卡 AST-GN 革兰阴性菌药敏卡 AST-GP 革兰阳性菌药敏卡 AST-YST 真菌药敏卡 5.2菌悬液配置及稀释 5.2.1悬浮液：0.45% NaCL液，PH 4.5-7.2 5.2.2.菌悬液浓度： 鉴定卡GN 0.5 - 0.63 麦氏单位 GP 0.5 - 0.63 麦氏单位 NH 2.7 - 3.3 麦氏单位 YST 1.8 - 2.2 麦氏单位 ANC 2.7-3.3 麦氏单位 药敏卡AST-GN 3.0ml 盐水+ 145μl 0.5 –0.63 麦氏单位菌悬液 AST-GP 3.0ml 盐水+ 280μl 0.5 –0.63 麦氏单位菌悬液 AST-YST 3.0ml 盐水+ 280μl 1.8 –2.2 麦氏单位菌悬液 5.2.3药敏卡稀释方法
一、纸片扩散法 该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。 二、稀释法 稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC. 2.1 琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。再接种待测菌株，然后是结果判读。 2.2 肉汤稀释法 三、抗生素浓度梯度法 四、自动化仪器法 一、实验材料 普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）
细菌：待做药敏试验的细菌 仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 二、实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。 2.2 药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。此稀释液即为用于做药敏试验的药液。 三、实验操作方法 3.1 药敏片法 3.1.1 在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密） 3.1.2 将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。 3.1.3 将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。 3.2 牛津杯法 3.2.1 在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，
来自：杨传松,胡雪飞,廖晚珍. 2379例女性患者支原体感染情况与药敏分析[J]. 实验与检验 医学,2010,01:77-78. 2379例女性支原体感染情况与药敏分析 杨传松⒈胡雪飞⒉廖晚珍⒉ 【摘要】目的了解女性生殖道支原体（Mycoplasma）感染（主要为南昌地区）与药物敏感试验情况，为临床治疗提供依据。方法采用支原体试剂盒对2379例疑诊为生殖道感染女性患者的宫颈分泌物进行支原体培养、鉴定及药敏试验。结果2379份标本中，支原体检测阳性1503例，阳性率63.2%，其中解脲支原体（UU）46.0%（1094/2379），UU+ MH（人型支原体）混合感染及MH分别为15.4% (367/2379)、1.8%（42/2379）。药敏结果：支原体对强力霉素（Dox）、交沙霉素（Jos）、美满霉素（Min）的敏感率均在70%以上,另外,UU对克拉霉素（Cla）、四环素（Tet）也较敏感，分别为92.3%、84.7%，但Cla在MH及UU+ MH混合感染时，敏感率较低,仅为2.4%和7.4%；耐药率较高的是环丙沙星（Cip）、壮观霉素（Spe）等。结论本地区女性生殖道支原体感染以UU 为主，其次是UU+ MH混合感染，较敏感的抗菌药为：Dox、Jos、Min，仅UU 感染时还可选用Cla。为减低支原体的耐药率，建议临床根据药敏结果用药。 【关键词】支原体感染药敏非淋球菌尿道炎 支原体（Mycoplasma）是一类无细胞壁、形态上呈高度多形性，能通过除菌滤器，在无生命培养基中能生长繁殖的最小原核细胞微生物，由于它们能形成有分枝的长丝，故称之为支原体［1］。感染人类的支原体有十余种，女性生殖道以人型支原体(MH)及解脲支原体（UU）最常见。MH感染多引起阴道炎、宫颈炎和输卵管炎，UU多引起非淋球菌性尿道（non-gonococcal urithritis,NGU）。支原体多与宿主共存，不表现感染症状，仅在某些条件下引起机会性感染，且常和其他致病菌共同致病［2］。大量的研究证明UU与自然流产、先天缺陷、死胎和不孕症有关［3］。支原体感染还是一种性传播疾病，近年来其发病率日趋上升且耐药株增多，受到医务工作者的关注。为了解本地区女性生殖道支原体感染与耐药情况，为临床用药提供参考，作者对来我院就诊的2379位女性患者宫颈分泌物做支原体检测，现将结果报告如下： ----------------------------------------------------- 作者单位：1. 南昌大学公共卫生学院2005级医学检验系 2. 南昌大学第一附属医院检验科 作者简介: 杨传松(1984.04.21),男, 南昌大学公共卫生学院2005级医学检验系学生. 通讯作者: 胡雪飞,E-mail:hxf123666@https://www.doczj.com/doc/3c5664509.html, 1资料与方法 1.1一般资料选自2009年1月~6月来我院妇产科门诊及住院的2379例女性 患者，进行宫颈分泌物检测。
药敏结果的准确判读 A.对临床感染相关及可疑的致病菌做药敏试验 B.只对与临床感染相关及可疑的致病菌做药敏试验 C.只对可疑的致病菌做药敏试验 D.只对无菌标本的致病菌做药敏试验 A.标本来源 B.患者年龄 C.独特的宿主因素 D.患者性别 3.关于无需做药敏试验的情况的说法中，错误的是： C.不能预测治疗用药的敏 感性时无需常规做药敏 A.对于临床少见菌不必常规做药敏实验 B.腐生葡萄球菌引起的尿路感染无需常规做药敏 C.不能预测治疗用药的敏感性时无需常规做药敏 D.天然耐药的细菌或抗菌药物组合无需做药敏试验 4.检测mecA-介导的苯唑西林耐药的最好的方法是：B.头孢西丁纸片法 A.MIC方法 B.头孢西丁纸片法
C.MIC方法+头孢西丁纸片法 D.其他方法 5.开始对某种抗菌药物敏感的菌株在治疗多久后可发展为中介或耐药： A.3-4天 A.3-4天 B.1-2周 C.5-8天 D.10-12天 准确判读细菌药敏试验的结果 A.苯唑西林：仅MIC B.头孢西丁：纸片法、MIC（仅对金葡菌） C.青霉素：纸片法或MIC D.苯唑西林：纸片法、MIC 2.有关碳青霉烯的耐药特点的说法中错误的是： C.碳青霉烯类药物耐药的肠杆菌科 菌通常为单一耐药 A.产碳青霉烯酶 B.头孢菌素酶合并通道缺失，例如某些头孢菌素酶 (如 AmpC ?--内酰胺酶或 ESBLs) 有低水平的碳青霉烯酶活性和通道蛋白的缺失减少了碳青霉烯类药物进入 细菌菌体 C.碳青霉烯类药物耐药的肠杆菌科菌通常为单一耐药 D.目前在我国大家比较关注碳青霉烯酶为A类酶KPC和B类酶ND M-1
B.氨苄西林 C.阿莫西林 D.以上都是 4.产前筛查克林霉素诱导试验，如果结果为阴性（即没有诱导耐药），用于预防分娩期链球菌感染的抗生素应为：A.克林霉素 A.克林霉素 B.头孢他啶针 C.万古霉素 D.青霉素 5.制备菌液，要挑选的菌落数至少为： A.3个 A.3个 B.1-2个 C.5个 D.10个 抗菌药物敏感性试验的标准化 1.不属于，临床实验室常用的抗菌药物敏感性试验的是: C.肉汤稀释法 A.纸片扩散法 B.Etest法 C.肉汤稀释法
c l s i m s药敏试验解读 This manuscript was revise d on November 28, 2020
表1A. 美国临床微生物学实验室在非苛养菌常规试验和报告中应考虑的具有FDA 临床适应证的抗菌药物建议分组 总注释： A.对四环素敏感的菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。然而，某些对四环素 中介或耐药的菌株可能对多西环素、米诺环素或二者敏感。 B.利福平不能单独用于抗菌治疗。 C.分离于泌尿道菌株不被常规报告。 D.头孢噻吩仅被用于预报口服药物结果，包括头孢氨苄、头孢泊肟、头孢氨苄和氯 碳头孢。以前关于头孢噻吩结果可预报其他头孢菌素敏感性建议仍然正确，但近年来还没有数据证实此建议。 E.当测试粪便中分离的沙门菌和志贺菌株时，只有氨苄西林、一种氟喹诺酮类和复 方新诺明可用于常规报告。另外，对肠道外感染沙门菌粉分离株，应测试并报告一种三代头孢菌素，假如需要，也可测试和报告氯霉素。分离于肠道内和肠道外伤寒样沙门菌（伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌A-C）需进行药敏试验。分离于肠道内非伤寒样沙门菌不需进行常规药敏试验。 F.从CSF中分离菌株，试验和报告头孢噻肟和头孢曲松，以取代头孢唑林。 G.其他非肠杆菌科细菌包括假单胞菌和其他非苛养、非发酵葡萄球菌的革兰阴性杆 菌，但不包括铜绿假单胞菌、不动杆菌、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌，因为对这些菌种的建议试验和报告药物表格已分开。 鼻疽伯克霍尔德菌和假鼻疽伯克霍尔德菌试验和报告药物建议请参阅CLSIM45文件。 H.仅对金黄色葡萄球菌包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA） I.青霉素敏感的葡萄球菌对葡萄球菌感染具有临床疗效的其他β-内酰胺类药物也敏 感。青霉素耐药葡萄球菌对青霉素酶不稳定青霉素类耐药。除具有抗-MRSA活性新的头孢菌素外，苯唑西林耐药葡萄球菌对当前所有使用的β-内酰胺类药物均耐
药敏试验方法： K-B法： 1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。 2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。 3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。 6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidexpneumo-kit)于室温。 3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。 4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。 5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。 药敏纸片的选择 1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科） 头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ） 氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN） 头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM） 庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA） 头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB） 奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ） 亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC） 2、铜绿假单孢菌/不动杆菌 妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT） 头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟 头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ） 左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦 3、金黄色葡萄球菌 苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN） 红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP） 万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦 头孢噻吩（CF） 4 、肠球菌 氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP） 庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL） 5、除肺炎链球菌外链球菌 氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素
临床常见念珠菌的分布及其药敏分析 随着抗菌药物的不断应用及免疫缺陷的病人的不断增加，真菌感染不断增加，尤其是念珠菌 的感染。抗真菌药物可有多种选择，而致病性真菌容易出现耐药性，抗真菌药物敏感实验显 得日趋重要，并成为指导临床医师用药手段之一。为了解我院从临床标本中分离的常见念珠 菌的分布及其对常用抗真菌药物的敏感情况，为临床正确选择抗真菌药物，回顾性分析了我 院临床标本中分离的念珠菌306株的临床分布及其常见四种念珠菌对五种抗真菌药物的敏感性。 1材料方法 1.1一般资料2011年1月—2011年12月门诊及住院患者送检的痰液、尿液、胸水、腹水、粪便、分泌物、脑脊液、等标本3052份。检出真菌306株，剔除重复菌株。 1.2培养基：沙保弱培养基（自制）按全国临床检验操作规程第三版配方进行配制。 1.3质控菌株：近平滑念珠菌A7CC22019.克柔念珠菌A7CC6258。 1.4菌种鉴定及其药敏实验。鉴定及药敏实验用珠海迪尔生物有限公司提供的真菌测定系统 及随机体外诊断鉴定及药敏试剂反应板进行检测。 2结果 2.1真菌分布306株真菌中，痰液标本检出最多，为184株，检出率为60.1%。见表1。 2.2真菌种类 306株真菌中，分布最多的是白色念珠菌，热带念珠菌，近平滑念珠菌，光滑 念珠菌。真菌种类分布构成比见表2。 2.3药敏分析念珠菌对两性霉素和5-氟胞嘧啶的敏感性最高，达100%。对伊曲康唑，伏立 康唑，氟康唑的敏感性不一。四种常见念珠菌对抗菌药物的敏感率见表3。 3讨论 经统计，最常见的念珠菌依然为白色念珠菌，所占比例最高，达63.1%，与朱向葵等[1]报道 的基本一致。在我院送检的真菌感染标本中，痰标本占居首位。占60.1%，这说明院内的真 菌感染还是以下呼吸道感染为主，其中以念珠菌肺部感染最为常见。这主要与下呼吸道感染 以老年人为主，他们常期使用抗生素，导致菌群失调，再加上免疫力下降。另外呼吸系统的 解剖特点决定了呼吸道粘膜的温度，湿度，酸碱度菌宜于真菌的生长。[2] 念珠菌有黏附粘膜组织的特性，其中白色念珠菌对组织的黏附力尤强，故致病力较其他念珠 菌更为严重。近年来，非白念珠菌有增高的趋势，[3]这就需要我们也要加强对非白念珠菌耐 药性的监测。 从体外药物敏感性实验结果可以看出，念珠菌对两性霉素，5-氟胞嘧啶的敏感性最好，抗菌 效果达100%。与徐洪绪等[4]报道的一致。念珠菌对氟康唑，伏立康唑的敏感性在71.9%-72.5%之间，低于窦红涛报道的97.79-100%，可能与地区差异和实验方法有关。对伊曲康唑的敏感 率在73.5%-85%，高于李华信等[5]报道的57.1%-50%。 随着肿瘤，血液病，老年呼吸道疾病，艾滋病等病人的不断增加，以及器官移植，各中介入 性诊治手段的应用，由此而伴发的真菌感染呈不断增长趋势。所以临床微生物实验室应不断 提高真菌培养与药敏的检测技术，为临床正确选择抗真菌药物提供依据。 表1 真菌感染标本分布构成比（%）
首先，准确鉴定病原菌、报告药敏试验结果，给临床选择用药提供科学的参考依据，是我们微生物实验室不可推卸的责任，但在药物的选择和实际应用过程中多了解一些微生物及药理方面的知识，可能会对临床治疗起到事半功倍的效果。特别是在痰及咽拭子的培养鉴定中，由于多种条件致病菌的存在，是否引起感染、是否需要抗菌治疗，都需要临床医生综合分析后判断，以下几点是临床工作中可能会遇到的问题： 1、有些临床常用药物药敏试验中没有 例：头孢哌酮/舒巴坦为广谱抗菌药物，主要用于治疗革兰氏阴性杆菌，如大肠埃希菌等。CLSI 规定其对肠杆菌科细菌的判定折点为≤15 耐药，≥21 敏感，所以我们将其加入到肠杆菌科细菌药敏谱中，但由于头孢哌酮/舒巴坦对葡萄球菌等革兰氏阳性球菌CLSI 没有判定折点，所以无法判定其对于葡萄球菌敏感或是耐药，也不应该加入葡萄球菌药敏试验中。 2、有些新药没有列入药敏谱 首先，新药由于刚刚推广，还没有列入CLSI 的监测范畴，没有依据加以判断。其次，药敏谱中各类各代抗生素都具有一定代表性，不能面面俱到，如喹诺酮类二代抗菌药物环丙沙星在药敏试验中敏感，那么对于三代超光谱抗生素左氧氟沙星、司帕沙星等临床医生可根据需要加以选择。 3、细菌的天然耐药有些菌属或菌种对某些抗菌药物天然耐药或固有耐药，该耐药性具有种属特异性。 ⑴肠球菌：对除青霉素、氨苄西林以外的所有青霉素类、头孢菌素类抗生素天然耐药。 ⑵嗜麦芽窄食单胞菌：对亚胺培南（泰能）、美罗培南天然耐药。 ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药。 ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然耐药。 ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、复方新诺明、头孢 1 代、头孢2 代天然耐药。 更为特殊的是，铜绿假单胞菌对三代的头孢噻肟和头孢曲松即使药敏试验敏感，在实际临床治疗中也需要超大剂量才会取得疗效，但人体对超大剂量的三代头孢不具有长时间的耐药性。铜绿假单胞菌有对很多药物的诱导耐药性，在初期可能没有表现出来，一旦接触某种抗生素，沉睡的基因被激活，耐药性表现出来，这种特性在β-内酰胺类抗生素中尤为明显，可能在体外试验敏感，在实际治疗中却无效，所以采用头孢噻肟和头孢曲松进行治疗时就要冒险，这在临床上是首先要规避的。 充分了解抗菌药物体内疗效与体外药敏试验的差异和药敏试验的局限性，意在找到一定的原因和规律性，在使用广谱抗菌药物之前，应先采集标本送检，再根据药敏试验结果和临床疗效调整给药方案，使临床应用抗菌药物趋向合理，减少用药的盲目性和随意性，提高疑难危重病人的救治成功率。 合理使用抗菌药物需要综合考虑多方面因素，绝不是一份药敏试验报告所能完全概括的，其中的临床思维和临床操作都十分复杂，要想使我们的抗生素应用更加科学、合理、有效，这需要微生物实验室和临床科室的共同努力，我们也将不断学习、更新微生物检测、试验及药理方面的知识，力争为临床科室提供更有价值的参考依据。
微生物培养及药敏结果解 读内容 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
微生物培养、药敏试验的流程及意义 一、微生物培养及药敏试验的总述 微生物培养就是使用体外试验的方法检测可能导致感染的病原菌，并给以药敏结果，为临床医生针对某一特定的临床感染提供依据。而药敏试验则是承接微生物培养的一项工作，即对于培养得到的病原菌进行体外试验检测细菌对于抗菌药物的耐药性，来预测抗菌药物的临床治疗效果，从而为临床医生提供选用抗菌药物的依据来治疗感染。 对于检测到的可能的致病菌进行药敏试验时选择的药物是参照美国的CLSI推荐的标准制定的。尤其，使用全自动微生物分析仪进行药敏试验时有固定的药敏组合，不是人为可以随意添加或减少的。 （一）微生物的培养和药敏试验的流程基本为： ①将标本进行处理（不是所有的标本都需要处理）； ②将标本接种于不同的培养皿中在不同条件的培养箱中进行培养（不同的标本所含菌的种类不同，不同菌的生长条件不同，因此需要接种于不同的培养皿中）； ③24h后观察培养皿中细菌的生长情况： a.此时若无细菌培养，继续放回培养箱中培养24h，若仍然无细菌生长则判定为阴性结果，因此阴性结果出具的时间为48h以后。 b.若有细菌生长，要根据形态和气味等对细菌进行初步的判定，若能判定出细菌的种类，则进行相应的药敏试验。贴有药敏片的培养皿在培养箱中培养24h后进行药敏结果的解读，然后报告结果，这种微生物培养及药敏结果报告出具的时间就是48h以后。
由于不同的细菌的生长的速度不同，有些细菌在培养24h后不能完全判定结果甚者24h培养后无法观察到明显的细菌生长的则需要继续培养24h，即连续培养48h后同样根据菌落的形态、气味等来观察判定细菌的种类然后进行药敏试验。这种微生物培养和药敏试验结果出具需要72h以后。 而血液、骨髓等标本则是利用不同于上述培养方式的方法进行培养。它有专门的培养瓶和仪器。这种仪器会自动监测培养瓶中的变化来判定有无细菌生长，若有细菌生长仪器会发出警报。在培养5天内任何时间发出警报的培养瓶都要抽取瓶中的物质在培养皿中进行接种培养，同样在菌种鉴定后进行药敏试验；若在培养5天内不发出警报的培养瓶则视为阴性结果。因此血培养出具结果的时间为5～7天。 菌落的鉴定需要有雄厚的工作经验和熟练的相关基础知识。常规鉴定的方法有形态特征和理化特性。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应。在微生物室学习时发现，很多时候在不太确定细菌的种类时，检验人员也会结合理化特性来判定细菌种类。 （二）革兰氏染色、应用及意义 由于微生物的生长有时间限定，因此微生物培养和药敏试验没有急查的说法。最快的结果也只能是通过涂片来判定有无细菌生长和细菌染色后的颜色和形态，来给临床医生的用药提供依据。 革兰氏阳性菌和阴性菌因为细胞壁的结构不同，在革兰氏染色时染成不同的颜色。革兰氏阳性菌显示紫色、革兰氏阴性菌显红色或粉色。由于细胞壁的结构不同，导致这两类细菌在染色性、抗原性、毒性、对某些药物的敏感性等方面均有较大差异。一般情况下，大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们差生内毒素，靠内毒素使人致病。
药敏试验结果解读及临床应用 一、药敏试验的目的 药敏试验是使用体外试验的方法检测细菌的耐药性，预测抗菌药物的临床治疗效果，在药物种类的选择上为临床医生提供帮助，以实施个体化治疗。 当前，“对症下药”已经变得难以奏效。首先，致病菌的种类发生了改变，一种疾病可以由多种病原菌所引起，包括致病菌和条件致病菌；其次，感染人群发生变化，从健康人群到老年人、长期使用激素、免疫抑制剂及放疗、化疗的人群，临床症状常常不典型；最后，早期不规使用抗生素，也会导致临床症状不典型。 与此同时，“对菌下药”又难以获得满意效果。耐药菌尤其是多重耐药菌的出现，使临床医师按照抗生素的作用机制选择1～2种抗菌药物不能覆盖常见的病原菌。因此，药敏试验成为临床工作的重要手段之一。 二、哪些细菌需要做药敏试验？ 对任何分离的可疑病原菌，若不能从该菌的种属特征可靠地推知其对抗菌药物的敏感性，就需要进行药敏试验。以下情况不必进行药敏试验：正常定植菌与感染的关系不明确时；污染菌；已知细菌对某种抗生素天然耐药；已知细菌对某种抗生素全部敏感。检验地带网三、药敏试验中药物的选择 主要根据细菌种类和抗生素作用机制选药。选择试验的药物应具有确切的临床疗效，试验药物的体外试验结果可以接受，并且试验药物具有代表性。 目前我国临床实验室采用美国国家标准化委员会（NCCLS）/美国临床实验室标准化研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute , CLSI）药敏试验执行标准选药。NCCLS抗生素选择分组为： A组：为首选药物，作常规试验和报告。 B组：为首选药物，可与A组药物平行作药敏试验，但只在以下情况下进行选择性报告：细菌对A组抗生素耐药，病人对A组抗生素过敏，严重感染或多部位、多种细菌混合感染，要获得耐药性监测资料。 C组：为备选药物，作为替代或补充，在下列情况下使用：对一个或多个首选药耐药的地区流行株感染，对不常见菌感染的治疗，控制传染病的流行，获得耐药性监测资料。 U组：为备选药物，仅用于尿路感染的治疗。 四、药敏试验所采用的方法 常用的试验方法包括纸片扩散法、稀释法、自动化仪器法、E-TEST（浓度梯度法）。 五、细菌的主要耐药机制 1、产生水解酶，如β－酰胺酶、钝化酶。 2、细菌上与抗生素的结合靶位改变，如青霉素结合蛋白2a。 3、细菌表面通道蛋白改变，可以使其渗透性发生改变。 4、细菌产生泵出机制。 5、其他机制，如病原菌产生生物被膜、休眠状态等。 六、临床常见病原菌的归属和分类 临床常见病原菌主要包括以下四大类： 1、革兰阳性球菌：如葡萄球菌属、肠球菌属。 2、革兰阴性杆菌：如肠杆菌科细菌（大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肠杆菌属、枸橼酸杆菌属）和非发酵菌（铜绿假单孢菌、不动杆菌）。
表1A. 美国临床微生物学实验室在非苛养菌常规试验和报告中应考虑的具有 FDA 临床适应证的抗菌药物建议分组
总注释： A.对四环素敏感的菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。然而，某些对四 环素中介或耐药的菌株可能对多西环素、米诺环素或二者敏感。 B.利福平不能单独用于抗菌治疗。 C.分离于泌尿道菌株不被常规报告。 D.头孢噻吩仅被用于预报口服药物结果，包括头孢氨苄、头孢泊肟、头孢氨苄 和氯碳头孢。以前关于头孢噻吩结果可预报其他头孢菌素敏感性建议仍然正确，但近年来还没有数据证实此建议。 E.当测试粪便中分离的沙门菌和志贺菌株时，只有氨苄西林、一种氟喹诺酮类 和复方新诺明可用于常规报告。另外，对肠道外感染沙门菌粉分离株，应测试并报告一种三代头孢菌素，假如需要，也可测试和报告氯霉素。分离于肠道内和肠道外伤寒样沙门菌（伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌A-C）需进行药敏试验。分离于肠道内非伤寒样沙门菌不需进行常规药敏试验。 F.从CSF中分离菌株，试验和报告头孢噻肟和头孢曲松，以取代头孢唑林。 G.其他非肠杆菌科细菌包括假单胞菌和其他非苛养、非发酵葡萄球菌的革兰阴 性杆菌，但不包括铜绿假单胞菌、不动杆菌、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌，因为对这些菌种的建议试验和报告药物表格已分开。 鼻疽伯克霍尔德菌和假鼻疽伯克霍尔德菌试验和报告药物建议请参阅CLSIM45文件。 H.仅对金黄色葡萄球菌包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA） I.青霉素敏感的葡萄球菌对葡萄球菌感染具有临床疗效的其他β-内酰胺类药 物也敏感。青霉素耐药葡萄球菌对青霉素酶不稳定青霉素类耐药。除具有抗-MRSA活性新的头孢菌素外，苯唑西林耐药葡萄球菌对当前所有使用的β-内酰胺类药物均耐药。因此，仅测试青霉素和头孢西丁或苯唑西林二者中任一种，则可推测对各种β-内酰胺类药物的敏感或耐药性。除具有抗-MRSA 活性药物外，不建议常规测试其他β-内酰胺类药物。
药敏试验： 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物
疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 纸片扩散法 该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。 稀释法 稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.
德州市中医院2018年第一季度 细菌培养及药敏分析 2018年第一季度全院细菌培养送检165次（非重复送检），检出50株病原菌，标本阳性率为30.3%。其中革兰阴性菌35株（70%），主要为铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌；革兰阳性菌11株（22%），主要为葡萄球菌。酵母菌4株（8%），主要为热带假丝酵母菌。 一、主要致病菌分布 二、送检标本分布
三、主要致病菌科室分布 四、主要致病菌耐药率 1、主要肠杆菌科耐药率
7株大肠埃希菌药敏分析 11株肺炎克雷伯菌药敏分析 2、主要非发酵菌耐药率
12株铜绿假单胞菌药敏分析 3、主要阳性球菌耐药率 7株屎肠球菌药敏分析
五、分析 （一）致病菌构成2018年第一季度细菌培养阳性致病菌以革兰阴性菌为主（35株），占70 %，主要为铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌；其次为革兰阳性菌（11株），占22%，主要为屎肠球菌；最后为真菌（4株），占8 %。全院前三位致病菌依次为铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌。 （二）主要致病菌耐药率分析 1、肠杆菌科细菌：肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物敏感率为100%，大肠埃希菌对碳青霉烯类药物敏感率为87.5%。肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对阿米卡星敏感性均能达到100%。本季度培养出的11株肺炎克雷伯菌对氨苄西林已经100%耐药，对大多数头孢类药物敏感性尚可，能达到60%以上。而培养出的7株大肠埃希菌对氨苄西林也已经100%耐药对，对头孢类药物敏感性不一，其中头孢他丁87.5%敏感、头孢西丁100%敏感，但是对头孢唑林耐药率达100%，对环丙沙星的耐药率也为100%，对左氧氟沙星和复方新诺明的耐药率均达到87.5%。临床医生经验用药时应注意。 2、非发酵革兰阴性菌：2018年年1季度分离出12株铜绿假单胞菌，数量有增多的趋势。但其对对碳青霉烯类敏感度尚可，其中对泰能的敏感率为75%，对美罗培南的敏感率为91.7 %。对头孢类药物敏感度也可以，其中对三代中的头孢他啶敏感度达91.7%，对马斯平的敏感率达83.3%。 2018年第一季度细菌培养和耐药性分析提示：主要致病菌对头孢类抗菌药的耐药率呈现不一致，对左氧氟沙星、复方新诺明等药物的耐药性也逐渐增多。多重耐药菌的比例依然有增高趋势，各临床医师还是应注意细菌耐药情况，重视细菌培养，根据药敏结果合理选择抗菌药物，提高诊疗效果，减缓细菌耐药的发生。
微生物培养、药敏试验的流程及意义 一、微生物培养及药敏试验的总述 微生物培养就是使用体外试验的方法检测可能导致感染的病原菌，并给以药敏结果，为临床医生针对某一特定的临床感染提供依据。而药敏试验则是承接微生物培养的一项工作，即对于培养得到的病原菌进行体外试验检测细菌对于抗菌药物的耐药性，来预测抗菌药物的临床治疗效果，从而为临床医生提供选用抗菌药物的依据来治疗感染。 对于检测到的可能的致病菌进行药敏试验时选择的药物是参照美国的CLSI推荐的标准制定的。尤其，使用全自动微生物分析仪进行药敏试验时有固定的药敏组合，不是人为可以随意添加或减少的。 （一）微生物的培养和药敏试验的流程基本为： ①将标本进行处理（不是所有的标本都需要处理）； ②将标本接种于不同的培养皿中在不同条件的培养箱中进行培养（不同的标本所含菌的种类不同，不同菌的生长条件不同，因此需要接种于不同的培养皿中）； ③24h后观察培养皿中细菌的生长情况： a.此时若无细菌培养，继续放回培养箱中培养24h，若仍然无细菌生长则判定为阴性结果，因此阴性结果出具的时间为48h以后。 b.若有细菌生长，要根据形态和气味等对细菌进行初步的判定，若能判定出细菌的种类，则进行相应的药敏试验。贴有药敏片的培养皿在培养箱中培养24h后进行药敏结果的解读，然后报告结果，这种微生物培养及药敏结果报告出具的时间就是48h以后。 由于不同的细菌的生长的速度不同，有些细菌在培养24h后不能完全判定结果甚者24h 培养后无法观察到明显的细菌生长的则需要继续培养24h，即连续培养48h后同样根据菌落的形态、气味等来观察判定细菌的种类然后进行药敏试验。这种微生物培养和药敏试验结果出具需要72h以后。 而血液、骨髓等标本则是利用不同于上述培养方式的方法进行培养。它有专门的培养瓶和仪器。这种仪器会自动监测培养瓶中的变化来判定有无细菌生长，若有细菌生长仪器会发出警报。在培养5天内任何时间发出警报的培养瓶都要抽取瓶中的物质在培养皿中进行接种培养，同样在菌种鉴定后进行药敏试验；若在培养5天内不发出警报的培养瓶则视为阴性结果。因此血培养出具结果的时间为5～7天。 菌落的鉴定需要有雄厚的工作经验和熟练的相关基础知识。常规鉴定的方法有形态特征和理化特性。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应。在微生物室学习时发现，很多时候在不太确定细菌的种类时，检验人员也会结合理化特性来判定细菌种类。 （二）革兰氏染色、应用及意义 由于微生物的生长有时间限定，因此微生物培养和药敏试验没有急查的说法。最快的结果也只能是通过涂片来判定有无细菌生长和细菌染色后的颜色和形态，来给临床医生的用药提供依据。 革兰氏阳性菌和阴性菌因为细胞壁的结构不同，在革兰氏染色时染成不同的颜色。革兰氏阳性菌显示紫色、革兰氏阴性菌显红色或粉色。由于细胞壁的结构不同，导致这两类细菌在染色性、抗原性、毒性、对某些药物的敏感性等方面均有较大差异。一般情况下，大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们差生内毒素，靠内毒素使人致病。 在治疗上，大多数革兰氏阳性菌对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感），革兰氏阴性菌对青霉素不敏感（但奈瑟氏菌中德流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感），