间充质干细胞的免疫原性及其在移植中的应用目的：探讨研究间充质干细胞的免疫原性以及rMSCs在临床移植中的应用。 方法：使用免疫组化方法鉴定rMSCs表面rat LA-ABC、rat LA-DR、CD80、CD86分子，并使用流式细胞术检测其含量；免疫组化法rMSC表面MHCI、Ⅱ类分子的鉴定。结果：rat LA-ABC分子在大鼠间充质干细胞的表面的表达率为13.08%，同时rat LA-DR以及CD80、CD86分子在大鼠间充质干细胞的表面均未有不表达，而外周血淋巴细胞PBLs的表面对rat LA-ABC、rat LA-DR、CD80、CD86这些分子的表达率分别为92.71%、22.39%、14.08%、9.03%。光学显微镜下观察细胞染色情况，细胞核中有棕黄染色者为阳性细胞。结论：MSC具有多向分化潜能，特性稳定；MSC不表达MHCⅡ类分子,不表达或极低表达MHCI类分子，能逃脱宿主免疫系统的排斥，异基因MSC可以进入宿主细胞，并能长期存在。MSC具有低免疫原性，临床上大大降低移植排斥及移植物抗宿主病，提高临床移植的存活率。 [Abstract] Objective: To investigate the mesenchymal stem cells of the immunogenicity and rMSCs in clinical transplantation. Methods: Immunohistochemistry identified rMSCs surface rat LA-ABC, rat LA-DR, CD80, CD86 molecules, and using flow cytometry and their contents; immunohistochemistry rMSC surface MHCI, Ⅱmolecule identification. Results: rat LA-ABC molecules in rat mesenchymal stem cell surface expression was 13.08%, while rat LA-DR and CD80, CD86 molecules in rat mesenchymal stem cells are not expressed on the surface were not suits the week the surface of blood lymphocytes PBLs of rat LA-ABC, rat LA-DR, CD80, CD86 expression of these molecules were 92.71%, 22.39%, 14.08%, 9.03%. Cells were observed under light microscope staining, nuclei were stained in brown positive cells. Conclusion: MSC have multilineage differentiation potential, characteristics and stability; MSC did not express MHC Ⅱmolecules, did not express or very low expression of MHCI molecules, can escape the host immune system rejection, allogeneic MSC can enter the host cell, and long-term existence. MSC with low immunogenicity, greatly reduce the clinical transplant rejection and graft versus host disease, improve the survival rate of clinical transplantation. [Key words] Bone marrow-derived mesenchymal stem cells; Immunogenicity; Transplant; Clinical appication 间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）是指源自未成熟的胚胎结缔组织的细胞。是可形成多种细胞类型的多能干细胞[1]。大鼠间充质干细胞（Rats MSCs）作为中胚层发育的早期细胞，其具备自我更新与多向分化的能力，经体外培养后可以进一步分化为骨细胞、软骨细胞等[2]。rMSCs除了在骨髓中主要存在之外，在大鼠机体的脂肪、血液、肺以及脐血中都有存在，因此随着近年来组织细胞学的发展，间充质干细胞在临床移植方面的应用也正不断扩大[3]。为探讨研究间充质干细胞的免疫原性以及rMSCs在临床移植中的应用，本文将所
自体骨髓移植( 陆道培） 自体骨髓移植主要适用于治疗恶性淋巴瘤和多发性骨髓瘤，有时在急性白血病时，没有合适供者时也可采用。自体移植的基本过程主要有以下几个步骤：造血干细胞的动员、造血干细胞的采集和冻存、合适的机会进行自体移植、移植后的维持治疗。 自体骨髓移植治疗 (一) 急性白血病 异基因移植对急性白血病虽有很好的疗效，但多数患者缺乏适合的供髓者及高昂的移植费用，受到较大限制。自体骨髓移植作为异基因移植的一种替代治疗，在近10年内得到迅速的发展。目前虽已积累了不少临床资料，但由于各家的报告的疗效相差较远，至今对自体骨髓移植在急性白血病治疗中的地位尚有争议 (二)慢性粒细胞白血病 自体骨髓移植对慢性粒细胞白血病的疗效差，异体骨髓移植是最佳选择。 自体骨髓移植对恶性淋巴瘤有良好的治疗作用，故它已成为恶性淋巴瘤不可缺少的一种治疗方法，据统计，欧洲26国在1992年内共做自体骨髓移植3399例，其中恶性淋巴瘤1394例，为各病之首。同期用异基因骨髓移植治疗的淋巴瘤只有123例。北美于1992-1993年间所做的5492例自体骨髓移植中恶性淋巴瘤(霍奇金652例，非霍奇金淋巴瘤1417例)也多于白血病等其他病种。 自体移植的造血干细胞的动员 因为自体移植采集病人自己的造血干细胞，如果在疾病冶疗的早期进行干细胞采集，可能会有肿瘤细胞的污染。但是，如为了充分清除体内肿瘤细胞污染，在进行很多次的化疗后，再进行采集，叉可能采集不到充足量的造血干细胞。这是因为每次化疗都对骨髓有损害作用，其中的损害也包括对造血干细胞的损伤.削弱了骨髓的的储存能力。为了平衡这两点，自体移植采集+细胞的时机一般选择在进行几个疗程有效的化疗后，体内的肿瘤负荷比较步时，同时骨髓中的干细胞又损伤得不太严重时。具体到不同病种和不同病人，应因人而异，这应泼南有经验的临床医生来决定。 自体移植的时机 在采集出足够的造血干细胞后，应选择一合适的机会进行大剂量化疗和放疗然后回输干细胞。这个时机的选择也很重要。因为自体移植的治疗作用完全依赖于预处理方案中的化疗和/或敢疗，寄希望于这次化放疗能完全或接近完全清除体内的肿瘤细胞。如果在移植时，体内的肿瘤细胞残存较多，靠这一次的化放疗难以清除所有肿瘤细胞。所以，自体移植的时机最好应是在疾病得到完全缓解时，甚至在获得缓解后再进行巩固治疗一段时间后进行。在恶性淋巴瘤的病人，应尽力遵循这个原则，急性白血病亦是如此。在多发性骨髓瘤病人，固有些病人难以获得完全缓解，而且自体移植是取得完全缓解的重要手段，自体移植也不能彻底治愈多发性骨髓瘤。所以，在多发性骨髓瘤病人的自体移植时，可不必强求达到完全缓解状态。 自体骨髓移植的主要不足：复发 我们在前面已提到自体移植与异基因移植相比，有的病人年龄可放宽至65岁;移植过程中的并发症和移植相关死亡率低;移植后生活质量影响小;移植费用较低。有这么多的优点，那为什么不所有血液肿瘤均选用自体移植呢’自体移植与异基因移植相比，其主要的不足就是治疗作用弱，在恶性程度更高的疾病，如急性白血病，疗效不是很满意，移植后复发的几率较大。所以，不同的病种选用
自体外周血造血干细胞移植的护理 ［关健词］造血干细胞移植层流病房护理 ［目的］：造血干细胞移植期间如何将消毒隔离、预防感染和出血、心理护理贯穿整个护理过程中。方法：通过总结我科自2006年10月～2009年7月在我科行自体外周血造血干细胞移植共25人的护理过程。结果：25例行自体外周血造血干细胞移植病人成功出院。结论：造血干细胞移植过程中将消毒隔离、预防感染和出血、心理护理贯穿整个护理过程中至关重要。造血干细胞移植的成功护理工作有着不可抹灭的作用。 外周血造血干细胞移植,因其采集方法简便,移植后造血重建快,痛苦相对较少,易于被患者个人或供者接受,而广泛应用于临床治疗[1]。病人在入层流病房后，我们紧紧围绕加强消毒隔离、预防感染和出血、心理护理来护理病人。在护理自体干细胞移植病人中取的较满意的效果。现总结如下: 1、临床资料： 2006年10月～2009年7月在我科行自体外周血造血干细胞移植共25例。其中男性12例，女13例。其中淋巴瘤17例（霍奇金淋巴瘤2例、非霍奇金淋巴瘤15例）；急性白血病4例(M5型2例、M2型1例、M1型1例)；多发性骨髓瘤4例。 2、护理方法 2、1．五官及全身皮肤的护理 口腔粘膜、牙龈、眼结膜、鼻腔、肛周是造血干细胞移植过程中最
易发生感染的部位，做好口腔、眼睛、鼻腔、肛周的护理至关重要。具体做法：①1.口腔，每日用1：4朵贝氏液及4％碳酸氢钠液交替餐前、餐后漱口,之后以每3 h含漱1次,每次含漱时间为5 min左右,特别注意在两颊部和咽部要充分接触。口腔护理2次/日。②.眼睛、耳、鼻腔，每日用氯霉素和0.1%利福平眼药水交替点眼4次/日，75%乙醇擦外耳道4次/日,用1∶2000洗必泰液擦鼻腔4次/日。③. 会阴、肛周每天及每次便后用1∶2 000洗必泰溶液坐浴,并用红霉素软膏涂抹肛周。会阴抹洗2次/日。④.每日用1∶2 000洗必泰擦浴,饭前和便后用1∶1000洗必泰液毛巾擦手。护理过程中注意口腔粘膜、眼结膜、鼻腔、肛周有无异常。注意全身皮肤有无瘀点、瘀斑。有无血尿、黑便等。 2、2锁骨下静脉置管的护理 注意预防锁骨下静脉导管感染、防止空气栓塞、脱管、管腔堵塞。每日观察导管口有无渗血、渗液；在静脉置管处皮肤直径5 cm～10 cm 每日安尔碘消毒，每日更换无菌敷料及肝素锁。注意输液器与导管衔接紧密,液体不能输空,每日检查导管有无裂痕；各种治疗护理避免牵拉导管,静脉插管时导管插入深度作明确标记,并记录其长度数据。导管与皮肤的缝线要牢固,每日交接留置导管的情况；病人化疗反应恶心呕吐频繁时,特别注意局部固定[2]，导管外脱禁止送回。输入血制品及采集血标本后,立即用理盐水彻底冲洗导管。全天输液结束后用1∶1 000的肝素钠稀释液2～3ml封管。 2、3胃肠道的护理 患者的饭菜、饮料等必须新鲜,每日无菌饮食(食物需经微波炉消毒后方可食用,餐具每次也同时消毒)。进食高营养易消化食物。水果须先用清水洗过后,再用1∶2000洗必泰液浸泡30分,温开水冲洗后用无菌刀削皮食用；口服药片两面经紫外线各照射30min后供患者服用；进食不易
间充质干细胞移植治疗系统系性硬皮病 对一名安省的硬皮病（scleroderma）的患者来说，一个实验性的干细胞治疗方式为其健康状况带来180度的转变。安省圣托马斯（St. Thomas）的49岁居民慕斯卡特（Dan Muscat，图）于2014年患上系统性硬皮病，由于他皮肤胶原增生，导致他全身皮肤变硬变紧。作为一名珠宝商，他的工作也变得困难而痛苦。 他说：我的手卷成一团并且僵硬，我的脸上和脖子上的皮肤都变硬，我无法转动我的脖子，甚至不能转动身躯。步行超过20步几乎变得不可能。」他还失去了开车的能力，因为他的膝盖不能弯曲，无法踩到刹车或者油门。 之前没有任何治疗方法可以阻止这一疾病的发展。他的医生认为他只有几个月的活命时间。导致这种自身免疫性疾病原因不清楚，而疾病最终会袭击肺部和其他内脏。 慕斯卡特开始研究在加拿大、美国和欧洲进行的干细胞治疗测试。他通过加拿大干细胞基金会（Canadian Stem Cell Foundation）找到了艾金斯医生（Dr. Harry Atkins），艾金斯是渥太华医院（Ottawa Hospital）的干细胞治疗专家，他愿意为慕斯卡特治疗。 艾金斯表示，对于合适的病人来说，这一治疗方法确实对改善他们的生活质量有重要影
响。一旦免疫系统能够正常运作并且停止损伤皮肤，皮肤就会自愈。为硬皮病做干细胞移植在加拿大还是很新的事物。其他国家特别是在欧洲对此作出很多研究，而效果令人鼓舞。艾金斯医生曾经为其他自身免疫性疾病做过干细胞移植，例如多发性硬化病、僵硬人综合症、重症肌无力等。 慕斯卡特是加拿大首个运用在美国和欧洲得到测试的治疗方法的病例。该治疗方法从去年6月开始，医生们从慕斯卡特身上获取干细胞。然后使用强效的化疗药物，杀死导致他出现硬皮病的失效免疫系统。经过淨化的干细胞重新植入他身体内，目标是重新启动他的免疫系统，以便能够停止他的疾病。 慕斯卡特说，自从接受治疗以来，身体一天天好起来。他发现从6月以来，他的动作有所改善，紧绷情况已经消失。他逐渐可以恢复使用自己双手，现在又可以开始驾驶他心爱的赛车。 加拿大干细胞基金会的总裁兼首席执行官普莱斯（James Price）表示，对那些目前没有其他治疗方法的多种疾病患者来说，干细胞治疗能够给他们带来希望。普莱斯说，基金会的目标是能够在10年内令新的干细胞治疗方法得到运用。 该基金会指出，有证据显示，干细胞移植可以令其他严重自身免疫性疾病例如多发性硬化病、狼疮、类风湿关节炎等疾病的情况得到持续缓解。干细胞疗法现在也正在被研究用于治疗肌萎缩性侧索硬化、感染性休克、骨关节炎、糖尿病、黄斑变性等疾病。 在慕斯卡特的病情明显缓和之后，加拿大的其他干细胞治疗中心将会考虑为那些符合相关治疗条件的硬皮病患者提供这种治疗方法，为其他遭受这一疾病折磨的病人们带来希望。
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910216830.0 (22)申请日 2019.03.21 (71)申请人 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公 司 地址 510000 广东省广州市开发区广州国 际生物岛螺旋四路一号生产区第五层 502单元 (72)发明人 陈海佳 葛啸虎 王小燕 杨祖婷 (74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 代理人 温可睿 赵青朵 (51)Int.Cl. A01N 1/02(2006.01) A61K 35/28(2015.01) A61P 19/02(2006.01) A61P 19/08(2006.01) (54)发明名称 冻存液及其在脐带间充质干细胞冻存中的 应用 (57)摘要 本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及冻存 液及其在脐带间充质干细胞冻存中的应用。 本发明提供的组合物，能够显著性的提高脐带间充质 干细胞在冻存条件下的活性，而以其制得的干细 胞制剂，具有良好的成骨分化、成软骨分化的潜 能，从而能够具有良好的修复软骨损伤的作用， 从而起到治疗骨关节炎的效果。权利要求书1页 说明书6页 附图3页CN 110050780 A 2019.07.26 C N 110050780 A
1.一种冻存液， 其由如下体积份的液体组成： 2.根据权利要求1所述的冻存液，其特征在于， 由如下体积份的液体组成； 3.根据权利要求1或2所述的冻存液，其特征在于， 所述人血白蛋白注射液中人血白蛋白的质量分数为20％； 所述葡萄糖注射液中葡萄糖的质量分数为5％； 所述羟乙基淀粉注射液中羟乙基淀粉的质量分数为6％。 4.权利要求1～3任一项所述的冻存液在脐带间充质干细胞冻存中的应用。 5.一种脐带间充质干细胞冻存方法，其特征在于，以权利要求1～3任一项所述的冻存液重悬脐带间充质干细胞。 6.根据权利要求5所述的冻存方法，其特征在于，所述重悬至细胞密度为5×107cells/mL。 7.权利要求1～3任一项所述的冻存液在制备干细胞制剂中的应用。 8.一种干细胞制剂，其包括：脐带间充质干细胞和权利要求1～3任一项所述的冻存液。 9.根据权利要求8所述的干细胞制剂，其特征在于，所述脐带间充质干细胞的密度为5×107cells/mL。 10.权利要求7～9任一项所述的干细胞制剂在制备治疗骨关节炎的药物中的应用。 权 利 要 求 书1/1页2CN 110050780 A
脐带间充质干细胞概述 医学实验班70080103 王雪彤 脐带是胎儿时期连接母体与胎儿的索状结构,其外被羊膜,内含2条脐动脉、1条脐静脉,在动静脉之间含有特殊的胚胎粘液样结缔组织———华尔通氏胶(Whartonps Jelly) ,从华尔通氏胶分离得到的基质细胞即为人脐带间充质干细胞(HUMSCs) 。 1人脐带间充质干细胞(HUMSCs) 的形貌分析: 倒置显微镜下观察人脐带间充质干细胞贴壁生长, 为形态相对均一的梭形细胞,呈平行排列生长或旋涡状生长,低密度时较扁平, 密度增加趋于融合时细胞变细长。扫描电镜下观察呈长条状纤维样, 细胞膜表面不光滑, 有小结节状物, 细胞无明显突起,细胞间无网络状连接。透射电镜观察核大, 不规则, 核仁明显, 常染色质多, 异染色质少, 胞浆少。胞质内细胞器较少, 以粗面内质网和线粒体为主, 内有大量游离核糖体, 部分细胞可见内质网肿胀。 ——植块法培养获得的人脐带间充质干细胞(×200) 例如三代细胞的形态学特征——人体脐带间充质干细胞离体培养后，培养至第三代。第三代人脐带间充质干细胞以均一长梭形的细胞为主，细胞周边有较多的丝状伪足，见图1，2；并形成毗邻细胞之间的网状连接，见图3；细胞核较大，核膜清晰，含两三个核仁，核质比较小，见图4。 图1图
2图3 图4 2人脐带间充质干细胞(HUMSCs) 的生物学特性： HUMSCs既非胚胎干细胞又非成体干细胞,是别于两者之间的一类新的多能间充质细胞,它们之间既有联系又有差异。根据国际细胞疗法间充质与组织干细胞委员会( the Mesenchymal and Tissue Stem Cell Committee of the Internation2 al Society for Cellular Therapy)制定的最低标准, 脐带间充质干细胞（MSCs）需满足以下条件: 1)MSCs在标准培养条件下呈贴壁生长; 2 )MSCs表达CD105, CD73和CD90,不表达CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA2DR; 3)MSCs在体外至少能向成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞分化。和其他来源的 MSCs一样HUMSCs呈长条梭形贴壁生长,表达CD73、CD90、CD105、CD166、CD10、CD13、CD29、CD44 及HLA2ABC ,不表达CD34、CD45、CD31等造血干细胞标记或CD33、CD14、CD56及HLA2DR、2DA、2DP、2DQ ,体外诱导培养能向多种成体细胞分化。比照这些条件,表明华尔通氏胶来源的间质细胞具有MSCs特性。HUMSCs还表达原始干细胞标记,如白血病抑制因子受体通路、胚胎干细胞特异基因Ⅰ及端粒逆转录酶及Nanog、STAT3、AP、Oct24、BMP4、PAX6、ADAM12、Nestin、HLA2Ⅰ。另外, HUMSCs低表达移植相关的细胞表面标记CD80、CD86、CD40 和CD40 l等。在混合淋巴细胞检测中呈免疫抑制,并抑制T细胞的增殖,异体移植该细胞可产生免疫耐受性,表明其为一类免疫缺陷细胞,异基因移植不会发生免疫排斥反应。 3脐带间充质干细胞(UMSCs)的移植治疗作用: 骨髓MSCs用于改善心、脑功能的机制主要在于其分泌SDF一1和VEGF 等局部细胞因子, 诱导微血管的生成, 改善缺血组织微环境。UMSCs表达SDF 一1和VEGF, 提示了UMSCs治疗心脑梗塞、脊髓损伤的可能。 1)UMSCs对脑损伤的治疗作用 外源性UMSCs对脑组织的修复机理可能涉及到诱导内源性VEGF表达, 局部微血管增生, 抑制细胞凋亡等。利用液压冲击脑损伤模型, 证明
(一)1.Sections of 8–10 cm of umbilical cords, which are routinely discarded, were internally washed with phosphate-buffered saline (PBS), supplemented with 3% penicillin/streptomycin (Invitrogen-Gibco, Grand Island, NY, https://www.doczj.com/doc/304951416.html, ) and immediately immers ed in Dulbecco ’s modi fied Eagle ’s medium- low glucose (DMEM-LG; Invitrogen-Gibco) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS; Invitrogen-Gibco) and 3% penicillin/streptomycin (Invitrogen-Gibco). All samples were processed within 12 –15 h after collection. 2. UCs were fil led with 0.1% collagenase (Sigma-A ldrich, St. L oui s, https://www.doczj.com/doc/304951416.html,/sigma-aldrich/home.h tml) in PBS and incuba ted at 37°C for 20 min. Each UC was washed wi th proli feration medium, and the detach ed cell s were harvested after gentl e mass age of the UC. Cells were centr ifuged at 300 g for 10 min, resus -pended in prolifera tion medium, and seeded in 25-cm^ 2 flasks at a densi ty of 5 × 10^7 cells per ml.After 24 h of incubation, non-adherent cells were removed, and culture medi um was replace d every 3 days. （二）HuMSCs were prepared as previously described.8 Wharton's jelly was processed within 24 hours of collection and cut into pieces of about 1 mm3 for culture. These pieces were placed in 24-well plates and cultured in DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), 5 ng/ml EGF, 5 ng/ml basic fibroblast growth factor, 100 U/ml penicillin and 100 mg/ml streptomycin, and 1 μg/ml amphoterin B. The culture plate was placed in an incubator with saturated humidity at about 37°C containing 5% (v/v) CO2. The medium was changed every three days and the cells were passaged when they reaching 70% confluence. Adherent cells were recovered by treatment with 0.25% trypsin for 3 to 5 minutes then centrifuged. (三) 脐带间充质干细胞的分离：脐带自手术台取下后，浸入含抗生素的生理盐水中，4 ℃保存，在操净台内取出脐带，用D-PBS冲洗净脐动脉和脐静脉内的残余血液，用止血钳和剪刀剔除上述血管，将脐带剪成1 mm^3大小的组织块后放入200 mL 蓝盖试剂瓶，加入质量/ 体积比为0.1%的Ⅱ型胶原酶30 mL，置于恒温振荡仪内持续消化6 h ，100 目筛网过滤收集细胞。加入D-Hank’s液冲洗细胞3 次，用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12重悬细胞，调整细胞密度为(4.8×10^3~1×10^4)/cm^2，接种于6 孔板内，于37 ℃、体积分数为5%的CO2孵箱内培养，24 h 后换液。 脐带间充质干细胞在不同培养体系中的体外扩增：待原代培养的脐带间充质干细胞贴壁后，在两个6 孔板中进行3 种培养体系的生长对比实验。第1 个6孔板中细胞密度为1×10^7 L^-1，采用连续适应法使细胞由原代培养时使用的DMEM/F12分别逐步过渡到低糖DMEM、MesenPRO RS?Medium 和STEMPRO?MSC SFM 3 种培养体系，即用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基和相应的3种培养基按体积比1 ∶1 混合培养细胞，通过下列混合培养基的方式，连续几代减少当前培养基的量，即1 ∶2 ，1 ∶4 ，1 ∶16和100% 替代培养基，每次适应改变培养体系时，传代细胞一两次，其中孔 1 为原代培养时的DMEM/F12培养液，孔2为低糖DMEM，孔3 为MesenPRO RS?Medium ，孔4 为STEMPRO? MSC SFM。第2 个6孔板中细胞密度为2×10^7 L^-1，每孔培养液设置同上，目的是避免在不同时间消化传代间充质干细胞时出现实验操作上的误差。 (四)脐带间充质干细胞的体外分离培养 (1)脐带白手术台取下后，浸入含抗生素的0．9％生理盐水中，4"C保存； (2)在超净台内取出脐带，用生理盐水冲洗净脐动脉和脐静脉内的残余血液，用止血 钳和剪刀剔除上述血管，将脐带剪成1mm^3大小的组织块； (3)加入质量／体积比为0．1％的II型胶原酶至完全覆盖组织块，置于培养箱内持续消化
本文极具参考价值，如若有用请打赏支持我们！不胜感激！ 自体造血干细胞移植(专业知识值得参考借鉴) 一概述造血干细胞移植是取患者自身骨髓、异体骨髓或脐血转输给患者，通过移植物中的多能干细胞在体内定居、增殖、分化，使患者机体恢复造血功能、形成免疫力的一种治疗方法。自体造血干细胞移植指移植物供者为患者本人。 二适应证1.肿瘤性疾病 找不到合适供者的患者可藉此方法杀灭肿瘤细胞，延续生命。此类肿瘤有：非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、急性白血病、多发性骨髓瘤、乳腺癌、神经母细胞瘤、睾丸癌、卵巢癌、脑瘤等。 2.自身免疫疾病 使病情易于控制，症状改善的疾病：多发性硬化、系统性硬皮病、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、特发性血小板减少性紫癜、纯红再障等。 三禁忌证年龄＞65岁；心、肺、肝、肾功能不全；不可控制的感染；患其他致命危险疾病者；不能耐受预处理方案；无独立生活能力的精神病患者；无移植适应证者。 四自体造血干细胞移植的步骤1.自体骨髓采集 即应选择白血病已完全缓解，且再经3～4个疗程巩固治疗后，以保证患者骨髓内白血病细胞降至最低负荷，避免移植后白血病复发。抽取的骨髓所含有粒细胞数有严格的要求：①置4℃冰箱保存，72小时内回输，有核细胞数应达到（1～1.5）×108/kg（患者每公斤体重所要求的数量）；②如先冷冻保存，择期再回输，则有核细胞数应达到2×108/kg；③如先进行体外净化，则有核细胞数则应达到3×108/kg。采集骨髓通常是十分安全的，国外3万余例取髓发生严重并发症者仅占0.27%，且大多与麻醉有关，均能恢复，无致死、致残的报告。 2.外周血干细胞采集 近10余年90%的自体移植已从采集骨髓转移至采集外周血中的造血干细胞，因为外周血采集过程安全、简便、减少患者多部位骨髓穿刺的痛苦，也省去了麻醉，避免了麻醉的风险。同时外周血白血病细胞含量远少于骨髓，回输后造血恢复相对较快。但外周血所含造血干细胞仅为骨髓的1%～10%，因此，采集前必须经有效的动员。 （1）外周血干细胞动员大多采用大剂量化疗，继之以粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员的方案。急性白血病使用较多的化疗为中剂量阿糖胞苷（总量为每平方米体表面积3～4克）或大剂量依托
现代中西医结合杂志ＭｏｄｅｍＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ２０１０Ａｐｒ，１９（１２）?１５５１? 人脐带间充质干细胞移植治疗中枢神经系统 疾病的研究进展 李伟１，范存刚２ （１．北京市顺义区医院，北京１０１３００；２．北京大学人民医院，北京１０００３４） 【关键词】脐带；间充质干细胞；干细胞移植；中枢神经系统疾病 【中圈分．类号】Ｒ３３８．２［文献标识码】－Ａ【文章编号】１００８—８８４９（２０１０）１２—１５５１—０３ 神经系统疾病发生后，由于病变的神经细胞不能有效地进行再生修复，而使神经系统疾病成为致死率、致残率高居榜首的疾病之一。因此，中枢神经系统的修复与再生一直是研究热点，近年来干细胞在修复神经系统损伤中的作用备受关注。目前研究较多的于细胞主要有３类，即胚胎干细胞、胎儿干细胞和成体干细胞。虽然每类干细胞均有各自的优势，但不容忽视的是胚胎干细胞的应用不仅受到来源有限和伦理及法律约束等限制，还存在异体移植的免疫排斥、体外纯化和扩增的技术障碍以及形成畸胎瘤的风险等困扰；胎儿脑和脊髓中分离出的神经千细胞因取材困难和数量不足使其临床应用受限；经典的成体骨髓来源的间充质干细胞（ＭＳ岱）不仅在取材时会对患者造成一定的痛苦，有病毒感染的风险，还会随患者年龄的增长而出现增殖和分化能力显著下降，使其临床实用性受到一定限制。因此，细胞治疗的首要问题是寻找适宜的细胞来源。近５ａ来的研究表明，通常作为医疗废弃物的脐带组织中富含大量的ＭＳＣｓ，将体外培养扩增的脐带ＭＳＣｓ移植于中枢神经系统疾病的动物模型后，这些细胞能够部分地分化为神经元和胶质细胞，并促进动物的神经功能恢复，以下就这一方向的研究进展综述如下ｊ １体外研究 ２００３年，Ｍｉｔｃｈｅｌｌ等…自猪和人脐带中分离出脐带基质细胞。范存刚等【２］详细介绍了自剥除脐带动静脉的人脐带沃顿胶组织块中培养出形态均一的ＭＳｃｓ的方法。他们还发现，如以碱性成纤维细胞生长因子、脑源性神经营养因子和胰岛素一转铁蛋白一硒进行诱导后，可见到表达神经元特异性烯醇化酶、胶质原纤维酸性蛋白、髓磷脂碱性蛋白的各种神经元；如果多种化学诱导剂的组合方案进行诱导后神经元特异性烯醇化酶和髓磷脂碱性蛋白阳性细胞分别为（８０．８±３．９）％、（４．２±１．３）９６，但未能见到胶质原纤维酸性蛋白阳性细胞ｔ２】。此后，袁源等【３Ｊ以类似的方法获得了该细胞群，并以神经营养因子和丹参成功地将这些细胞分化为神经细胞。周剑云等【４Ｊ发现，在人脐带间充质干细胞向神经干细胞样细胞和神经细胞转化过程中整合素连接激酶的表达水平经历低水平一上调一降低的过程，其排列形式也同步地呈现出丝状一巢状一树枝状的变化，这表明ＩＬＫ可能在人脐带间充质干细胞向神经干细胞样细胞及神经细胞转化过程中的细胞形态重塑中发挥重要作用。Ｆｕ等【５Ｊ和Ｗｅｉｓｓ等【６Ｊ分别将人脐带ＭＳＣｓ分别诱导为多巴胺能神经元和胆碱能神经元。 ２治疗脊荫损伤 脊髓损伤，特别是高位横断性脊髓损伤。目前尚无理想治疗方案。细胞治疗已成为近年来研究的热点，移植的细胞可能通过分泌多种神经营养因子的神经救援作用、为宿主的轴突提供连接通道的桥接作用、中继作用以及分化为成熟神经细胞的替代作用发挥治疗作用。王革生等【７】发现，将６×１０５未经诱导的人脐带ＭＳＣｓ移植到脊髓半切模型大鼠损伤处的头尾两侧后，改良的Ｔａｒｌｏｖ评分表明大鼠的神经功能得到显著恢复，同时发现部分移植的细胞开始表达神经元特异性烯醇化酶（３．６％）和胶质细胞源性酸性纤维蛋白（１２．７％）。Ｙａｎｇ等【８Ｊ分别将约５×１０５未经处理的、经过３ｄ或６ｄ神经元条件培养基共培养的脐带ＭＳＣｓ移植到完全性横贯性脊髓损伤大鼠模型的损伤部位附近，３周后发现细胞移植组均有显著的运动功能改善，病变周围皮质脊髓束再生轴突和ＮＦ阳性纤维的数目也显著增加。移植的细胞能在宿主脊髓内存活１６周，并产生大量的人中性粒细胞激活蛋白一２、神经营养因子一３、碱性成纤维细胞生长因子等，这可能与移植细胞促进脊髓损伤的修复密切相关。 ３治疗脑梗死 当前随着人们工作方式和饮食结构的改变、社会生活压力的增加以及老龄化社会的步入，脑血管疾病的发病率呈逐渐增高趋势，成为危害人类健康的最主要的疾病之一。其中，缺血性脑血管病又占全部脑血管病的６０％～８０％。因此，细胞移植治疗以促进脑梗死区神经元再生或减少缺血半暗带内神经元死亡成为近年来研究的热点。Ｋｕｒｏｚｕｍｉ等【９Ｊ发现，移植于脑缺血模型的ＭＳＣｓ能产生神经营养因子并促进动物的神经功能恢复。Ｄｉｎｇ等【１０］将１×１０６人脐带ＭＳＣｓ移植到大脑中动脉栓塞模型大鼠的脑皮质内，结果发现接受ＨＵＣＭ．ＳＣｓ移植的大鼠躯体不对称最著减少，而自发活动显著增加；梗死区皮质神经元的神经生化活性显著增加；缺血半暗带内表达胶质原纤维酸性蛋白、微管相关蛋白一２和神经元核抗原的细胞比例分别为≈９％、≈６％和≈６％；缺血区的巨噬细胞／ｄ，胶质细胞数目和岛一整合索的表达水平显著增加；缺血区微血管灌注、半暗带内神经血管密度以及缺血区皮质脑血流均显著增加，且趋化因子一１、胶质酸ＧＤＮＦ和ＢＤＮＦ的表达水平为对照组的２～３．５倍。因此，认为移植细胞可能通过 万方数据
脐带间充质干细胞（MSCS）抗衰老的临床实验 作者：Simon Sun Isa Li 【摘要】目的：观察脐带间充质干细胞对人体衰老的影响和安全性，对比观察脐带间充质干细胞对衰老的逆转现象。方法：抽取20名健康人作为志愿者，进行脐带间充质干细胞静脉回输（其中男性6人，女性14人，年龄为50-80岁），实验组10名志愿者进行静脉滴注3个疗程脐带间充质干细胞，对照组滴注生理盐水。实验组和对照组志愿者均为双盲实验，疗程结束后3个月、6个月、12个月的对比观察。结论：治疗组有效率为90%，从外表、内分泌、精神状态、体能、睡眠均表现出有效性。 Abstract: Objective: To observe the effect and safety of umbilical cord mesenchymal stem cells (MSCs) on human aging. Methods: a total of 20 healthy volunteers, of umbilical cord mesenchymal stem cells reinfusion (6 males, 14 females, aged 50-80 years old), the experimental group of 10 volunteers were intravenous infusion of 3 cycles of umbilical cord mesenchymal stem cells, the control group of normal saline drip. The experimental group and the control group were double blind experiment, 3 months after the end of treatment, and the observation of 6 months and 12 months. Conclusion: the effective rate of the treatment group was 90%, which was effective from the appearance, endocrine, mental state, physical fitness and sleep. 对抗衰老延长寿命是人类的梦想，但以往的方法以失败见终，究其原因均是不能针对衰老的根本原因所致。而人类衰老的原因一是衰老的细胞不能被代替，正常的新陈代谢因为干细胞的补充不足所致。随着干细胞和研究的发展，以及进行临床治疗中所带来的抗衰老表现，提示脐带间充质干细胞会对衰老的过程产生正影响，具有良好的市场应用价值。本实验就是采取双盲实验的方法来进行对证，验证MSCS对衰老的逆转影响。 脐带间充质干细胞（Mesnchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，具有广阔的临床应