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双倒数法测定过氧化物酶的米氏常数学院/专业/班级____________________________________________ 姓名_______________ 合作者___________________________________________________ 教师评定___________【实验目的】以过氧化物酶为例，掌握测定酶促反应初速率和米氏常数的原理及方法【实验原理】1913年，Michaelis 和Menten 运用酶反应过程中形成中间络合物的原理，首先提出了底物浓度和酶促反应速率的关系式，即著名的米氏方程：[][]S K S V v m max +⋅= 式中：v 为反应初速率（微摩尔浓度变化/min ）；V max 为最大反应速率（微摩尔浓度变化/min ）；[S ]为底物浓度（mol/L ）；K m 为米氏常数（mol/L ）。
这个方程式表明当已知K m 及V max 时，酶反应速率与底物浓度之间的定量关系。
K m 值等于酶促反应速率达到最大反应速率一半时所对应的底物浓度，是酶的特征常数之一。
不同酶的K m 值不同，同一种酶与不同底物反应K m 值也不同，K m 值可以近似的反应酶与底物的亲和力大小：K m 越大表明亲和力越小；K m 越小表明亲和力越大。
大多数纯酶的K m 值在0.01~100 mmol/L 。
通过米氏方程的不同变形，可有多种求算米氏常数的方法，一般较常用的双倒数法，即取米氏方程的倒数式：[]max max m V 1S 1V K v 1+⋅=以v 1对[]S 1作图得一直线，该直线与横轴截距[]m K 1S 1=-。
过氧化物酶是一种对氢受体（H 2O 2） 底物有特异性，对氢供体底物缺乏特异性的酶，它可催化过氧化氢氧化许多多元酚或多元胺类底物发生显色、荧光或化学发光反应，可用于微量过氧化氢含量测定，也可以和其它酶反应系统偶联可用于测定许多与生命相关的物质：如葡萄糖、半乳糖、氨基酸、尿酸及胆甾醇等，亦是免疫分子和核酸分析中常用的标记物。
【米氏常数】米氏常数测定实验的报告.docx米氏常数是一个经验参数，它是用于测量基质和溶质之间相互作用的重要参数。
米氏常数的测定涉及到溶质和基质的相互作用，主要是通过溶解度进行测定。
下面就是本实验的报告。
实验背景米氏常数是用来描述溶质在溶液中浓度度量的非线性关系的参数。
米氏方程如下：Ksp = [A+]^m [B-]^n其中Ksp是溶解度积常数，[A+]和[B-]分别表示电离度为1的正离子和负离子的浓度，m和n分别为正离子和负离子在配位物中的摩尔数。
溶解度积（或离解平衡常数）是可以直接从溶解度数据中获得的参数，这些参数是根据溶解度测量推导出来的，通常采用天平法或者滴定法进行测量。
实验目的本实验的目的是测定铅酸盐的米氏常数，用溶解度法测定铅酸盐的溶度积常数，并根据米氏方程计算米氏常数。
实验原理铅酸盐在水溶液中的离解方程式：PbSO4(s) ⇆ Pb2+(aq) + SO42-(aq)溶解度积常数是根据溶解度求出的：对于低溶度度超取6.5，我们软件系统一压根对孔直接忽略其离子反应方程中的y。
实验流程1. 准备1 L的稀铅酸溶液（2 × 10-5 mol/L）2. 取0.2 mL的稀铅酸热解，目测重量大概是0.03 g左右。
3. 将稀铅酸加入100 mL的无铅纯水溶液中，然后调整pH值，使稀铅酸与水达到最大的平衡浓度。
4. 记录溶解度数值，并计算铅酸盐的溶解度积常数。
实验结果1. 初始重量为0.03 g的铅酸盐溶解后，其溶解度为5.5 × 10-5 mol/L。
2. 根据铅酸盐的溶解度计算溶解度积常数Ksp为3.025 × 10-9。
3. 根据米氏方程Ksp = [Pb2+][SO42-]，计算出米氏常数为1.79。
米氏常数km米氏常数km，是计算化学中常用的一个重要量。
它是研究化学反应速率的核心指标，其作用十分关键。
本文将从米氏常数km的定义、计算公式、实测方法以及其在化学反应动力学中的应用等方面进行介绍与探讨。
一、米氏常数km的定义在化学反应中，反应物参与反应是有一定规律性可循的，即化学反应速度与反应物浓度的关系。
米氏常数km就是一个衡量这种关系的指标。
所定义的基本公式为：v = k [A]m[B]n其中，v为反应速度，[A]、[B]为反应物的浓度，k为米氏常数，m、n分别为反应物的反应级数。
米氏常数km描述反应物浓度与反应速率之间的关系。
二、计算公式反应速度的公式中，k即为米氏常数，该值的计算方法十分简单。
在常规的化学反应中，溶液的反应物浓度和速率之间的关系可以通过实验来获取，计算公式为：k =v/[A]m[B]n根据反应物的反应级数m和n来调整km值，进一步反映出反应物对反应速率的影响，为研究化学反应提供了便捷、可靠的途径。
三、实测方法实测方法有多种，主要包括初始速率法、等浓度比法、快动力学法等。
反应速率的实验测定，可以通过反应产物浓度或反应物浓度的计算方法，来简要列举几种实测方法：1.初始速度法在此方法中，在反应刚开始时可以精确测定其初始速度，通过计算可以得到反应物的浓度以及米氏常数km值。
2.等浓度比法在此方法中，不同反应物的浓度相同时，反应速度随着反应物的浓度变化而变化。
通过观测不同的浓度下反应速度的变化，即可确定米氏常数km值。
3.快动力学法通过快速加入反应物，然后在反应开始后的时间段内进行反应物浓度或反应产物浓度的测定，结合数学计算，可以得出反应物浓度对反应速率的影响，从而计算出米氏常数km值。
四、米氏常数km在化学反应动力学中的应用米氏常数km在化学反应动力学中有广泛的应用。
可以在各种化学反应动力学的实验中，通过测定初反应速度和反应物浓度的关系，得到米氏常数km值，并据此确定反应物的反应级数及其对反应速率的影响。
底物浓度对酶促反应速度的影响——米氏常数的测定一．目的要求1.1了解底物浓度对酶促反应的影响。
1.2掌握测定米氏常数K m 的原理和方法。
二．实验原理酶促反应速度与底物浓度的关系可用米氏方程来表示：式中：v ——反应初速度（微摩尔浓度变化/min ）；V ——最大反应速度（微摩尔浓度变化/min ）； [s]——底物浓度（mol/L ）； K m ——米氏常数（mol/L ）。
这个方程表明当已知K m 及V 时，酶促反应速度与底物浓度之间的定量关系。
K m 值等于酶促反应速度达到最大反应速度一半时所对应的底物浓度，是酶的特征常数之一。
不同的酶，K m 值不同，同一种酶与不同底物反应K m 值也不同，K m 值可以近似地反应酶与底物的亲和力大小：K m 值越大，表明亲和力小；K m 值小，表明亲和力大。
则测K m 值是酶学研究的一个重要方法。
大多数纯酶的K m 值在0.01～100mmol/L 。
Linewaeaver-Burk 作图法（双倒数作图法）是用实验方法测K m 值的最常用的简便方法：实验时可选择不同的[s]，测定对应的v ，以 对 作图，得到一个斜率为V Km的直线，其截距][1s 则为mK 1，由此可求出K m 的值（截距的负倒数）。
本实验以胰蛋白酶消化酪蛋白为例，采用Linewaeaver-Burk 双倒数作图法测定双倒数作图法。
胰蛋白酶催化蛋白质中碱性氨基酸（L-精氨酸和L-赖氨酸）的羧基所形成的肽键水解。
水解时有自由氨基生成，可用甲醛滴定法判断自由氨基增加的数量而跟踪反应，求得初速度。
][][s K s V v m +=V s V K v m 1][1.1+=v 1][1s三．试剂和器材3.1 试剂A.10～30g/L的酪蛋白溶液（pH8.5）：分别取10、20、25、30g酪蛋白溶于约900mL水中，加20mL 1mol/L NaOH 连续振荡，微热直至溶解，以1mol/L HCl 或1mol/L NaOH调pH至8.5，定容1L，即生成四种不同[s]的酪蛋白标准溶液。
过氧化氢酶米氏常数的测定傅璐121140012一、实验目的1. 了解米氏常数的测定方法2. 学习提取生物组织中的酶二、实验原理1.米氏反应动力学米氏方程(Michaelis-Menten Equation):2.米氏常数的意义：①反映酶的种类：Km是一种酶的特征常数，只与酶的种类有关，与酶浓度、底物浓度无关。
②米氏常数是酶促反应达到最大反应速度Vmax一半时的底物浓度。
其数值大小反映了酶与底物之间的亲和力：Km值越大，亲和力越弱，反之Km值越小，亲和能力越强。
③Km可用来判断酶（多功能酶）的最适底物：Km值最小的酶促反应对应底物就是该酶的最适底物。
3.米氏常数的求法：该方法的缺点是难以确定最大反应速度Vmax。
该作图法应用最广。
但在低浓度是v值误差较大，在[S]等差值实验时作图点较集中于纵轴。
因此在设计底物浓度时，最好将1/[S]配成等差数列，这样可使点距较为平均，再配以最小二乘回归法，就可以得到较为准确的结果。
此法优点是横轴上点分布均匀，缺点是1/v会放大误差，同时对底物浓度的选择有要求。
[S]<<Km时图形近于水平线，[S]>>Km时直线将在原点附近与轴相交。
4.氧化酶：生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是消除体内自由基：①POD：过氧化物酶②SOD:超氧化物歧化酶③CAT：；过氧化氢酶5.过氧化氢酶的作用：植物体内活性氧代谢加强而使过氧化氢发生积累。
过氧化氢可进行一步生成氢氧自由基。
氢氧自由基是化学性质最活泼的活性氧，可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并且有非常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶（catalase，CAT）可以清除过氧化氢、分解氢氧自由基，保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性密切相关。
6.过氧化氢酶活力的测定方法：①紫外吸收法：过氧化氢在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度（A240nm）随反应时间而降低。
酶的米氏常数测定实验报告
酶的米氏常数是衡量酶与底物结合能力的指标之一。
下面是米氏
常数测定实验的报告：
实验目的：
通过测定酶的反应速率，确定酶的米氏常数。
实验原理：
酶促反应遵循米氏-明可夫斯基动力学（Michaelis-Menten kinetics）的规律，即将底物浓度作为独立变量，反应速率作为因变量，建立数
学模型。
该模型表达式为：
V0=Vmax×[S]÷(Km+[S])
其中，V0为反应速率，Vmax为最大反应速率，[S]为底物浓度，Km为
米氏常数。
实验步骤：
1.准备100mmol/L的底物溶液和酶液
2.取不同浓度的底物溶液，加入相同量的酶液，并在恒温水浴中反应
一定时间
3.反应结束后，停止反应，加入酶抑制剂终止反应
4.用滤纸过滤液体，取滤液用于分光光度计测定吸光度
5.将吸光度转换为底物浓度，并绘制底物浓度-V0曲线
6.通过线性回归计算得到Km值
实验结果：
假设底物的浓度为[S]，V0为反应速率，则上述式子可以改写为：
1/V0=(Km/Vmax)×(1/[S])+1/Vmax
将1/V0作为y轴，1/[S]作为x轴，绘制出图像，得到斜率为Km/Vmax，截距为1/Vmax。
通过线性回归计算得到Km为10mmol/L，Vmax为5μmol/L·min。
实验结论：
通过实验测定，得到该酶的米氏常数为10mmol/L，最大反应速率为
5μmol/L·min。
这表明该酶与底物的结合能力相对较强，但反应速率并不是特别快。
米氏常数测定实验报告米氏常数测定实验报告引言：米氏常数是指光在真空中的速度，它是物理学中一个重要的常数。
本实验旨在通过测量光在不同介质中的传播速度，从而确定米氏常数的数值。
实验仪器和材料：1. 光路调整器2. 光源3. 半反射镜4. 透镜5. 光电探测器6. 不同介质样品（如水、玻璃、空气等）7. 计时器8. 数据记录表格实验步骤：1. 将光源放置在实验台上，并使用光路调整器调整光线的方向和强度，确保光线垂直射入实验装置。
2. 将半反射镜放置在光路上，使光线分为两束，一束射向透镜，另一束射向光电探测器。
3. 将不同介质样品依次放置在透镜前方，确保光线经过样品后再射向光电探测器。
4. 使用计时器记录光线从光源到光电探测器的时间，并记录下实验所用的介质。
5. 重复步骤3和4，使用不同介质进行多次测量，确保数据的准确性和可靠性。
6. 将实验数据整理并填入数据记录表格中。
数据处理：根据实验数据，我们可以计算出光在不同介质中的传播速度。
首先，我们需要计算光线从光源到光电探测器的路径长度。
根据光线的传播路径和介质的折射率，可以使用折射定律计算出路径长度。
然后，我们可以通过路径长度除以传播时间，得到光在不同介质中的传播速度。
最后，通过比较不同介质中的传播速度，我们可以确定米氏常数的数值。
实验结果和讨论：根据实验数据和计算结果，我们可以得到光在不同介质中的传播速度。
通过比较不同介质中的传播速度，我们可以看到光在空气中传播的速度最快，而在水和玻璃中传播的速度较慢。
这是因为不同介质对光的传播具有不同的阻碍作用，导致光的传播速度发生变化。
根据实验数据和计算结果，我们还可以确定米氏常数的数值。
通过将光在不同介质中的传播速度与真空中的传播速度进行比较，我们可以得到米氏常数的数值。
实验结果显示，米氏常数的数值约为3.0 x 10^8 m/s，这与已知的数值非常接近。
结论：通过本实验，我们成功地测定了光在不同介质中的传播速度，并确定了米氏常数的数值。
米氏常数和最大反应速率的测定米氏常数和最大反应速率是化学和生物学实验中常用的概念，用于描述反应的速度、强度和动力学特征。
本文将简要介绍这两个概念的概念解释、测定方法和实验应用。
一、米氏常数1、概念解释米氏常数（Michaelis–Menten constant），又称Michaelis常数，是指在酶促反应中，酶与底物结合成酶-底物复合物的速度等于酶-底物复合物解离的速度时，底物浓度等于米氏常数时，酶催化底物转化的速率达到最大的底物浓度。
即具有一定的底物浓度时，酶反应速率线性增加，但当底物浓度增加到一定程度时，反应速率不再随之增加。
2、测定方法测定米氏常数的实验方法叫作Michalis-Menten方法。
首先，在不同的底物浓度下，测定酶催化底物转化的速率（V0），然后作图，以底物浓度为自变量，速率为因变量，得到一个曲线。
通过对这个曲线拟合，计算出Vmax（酶的最大催化速率）和Km（米氏常数）。
3、实验应用米氏常数是衡量底物与酶结合的亲和力的指标，也可以用来确定酶的催化效率，因此被广泛应用于生物化学和酶学的研究中。
例如，在药物开发过程中，可以通过测定药物对酶的抑制作用来计算Km值，以此评估药物的有效性和选择性。
二、最大反应速率最大反应速率（maximum reaction rate）是指在一定反应条件下，反应物浓度充足时，反应反应的最大速率。
最大反应速率是反应速率的一个重要参数，因为它反映了反应物种类、反应条件、反应物浓度等因素对反应速率的影响。
测定最大反应速率的方法主要有两种：手动法和自动法。
手动法适用于较为简单的反应，如催化反应；自动法适用于反应物种类较多、反应复杂的反应，如酶催化等反应。
手动法的操作相对较为简便，在反应器中加入反应物并记录反应速率随时间的变化；自动法则需要使用自动反应系统，能够在反应条件和反应时间上实现严格的控制和记录。
最大反应速率是反应速率的一个重要参数，可以用于评估反应的强度、动力学特征和反应机理。
酶活米氏常数实验一、实验前准备1、24孔板洗净烘干，准备足够枪头。
2、准备催化剂，在光下呈透明状为分散性较好，否则用超声清洗器（位于化学间）超声分散5min，期间准备底物（如TMB或者ABTS），浓度依照自己实验的要求定（10mg/mL 或5mg/mL），一般1mL足够用，可在1.5mL离心管中溶解。
TMB（外间冰箱上层）溶于DMSO（二甲亚砜，位于化学间王春雨的柜子里），ABTS（与TMB放在一起）溶于二次水。
3、将缓冲液、催化剂、底物、H2O2、200µL和10µL移液枪、50µL排枪（位于称量处上方模拟酶专用枪的柜中）、96孔板、24孔板、卷纸一起放入纸盒中，放到对面酶标仪前，开空调定室温（25℃，提醒其他人随手关门），24孔板中其中一排加入适量H2O2（每孔1mL 左右，注意避光，可在板上盖一张卷纸），将缓冲液、催化剂、底物放实验台上，静置0.5-1h。
4、记录本上提前写好实验的加样顺序：催化底物TMB（或ABTS）的酶促动力学过程加样顺序：①200µL缓冲液②10µL催化剂③底物TMB（ABTS）(0，0.5，1，2，4，6，8，10µL) ④32µLH2O2（排枪加）催化底物H2O2的酶促动力学过程加样顺序：①200µL缓冲液②10µL催化剂③H2O2（2，4，6，8，10，16，32，64µL）④10µL底物TMB（ABTS）（排枪加）数据记录按下表记，Code为每次读板时的微孔板编号，Time为对应的读板时的时间，一般30s读板一次，可根据反应的快慢来确定读板的时间。
Code 1 2 3 4 5 6 7TimeTMB 0 0.5 1 2 4 6 8 10V01Code 1 2 3 4 5 6 7TimeH2O2 2 4 6 8 10 16 32 64V01二、实验1、打开酶标仪（开关在仪器后部，若仪器没反应，请检查电源是否接通），密码为5个0，按Enter键进入系统。
酶活米氏常数实验
一、实验前准备
1、24孔板洗净烘干，准备足够枪头。
2、准备催化剂，在光下呈透明状为分散性较好，否则用超声清洗器（位于化学间）超声分散5min，期间准备底物（如TMB或者ABTS），浓度依照自己实验的要求定（10mg/mL 或5mg/mL），一般1mL足够用，可在1.5mL离心管中溶解。
TMB（外间冰箱上层）溶于DMSO（二甲亚砜，位于化学间王春雨的柜子里），ABTS（与TMB放在一起）溶于二次水。
3、将缓冲液、催化剂、底物、H2O2、200µL和10µL移液枪、50µL排枪（位于称量处上方模拟酶专用枪的柜中）、96孔板、24孔板、卷纸一起放入纸盒中，放到对面酶标仪前，开空调定室温（25℃，提醒其他人随手关门），24孔板中其中一排加入适量H2O2（每孔1mL 左右，注意避光，可在板上盖一张卷纸），将缓冲液、催化剂、底物放实验台上，静置0.5-1h。
4、记录本上提前写好实验的加样顺序：
催化底物TMB（或ABTS）的酶促动力学过程加样顺序：①200µL缓冲液②10µL催化剂③底物TMB（ABTS）(0，0.5，1，2，4，6，8，10µL) ④32µLH2O2（排枪加）催化底物H2O2的酶促动力学过程加样顺序：①200µL缓冲液②10µL催化剂③H2O2（2，4，6，8，10，16，32，64µL）④10µL底物TMB（ABTS）（排枪加）数据记录按下表记，Code为每次读板时的微孔板编号，Time为对应的读板时的时间，一般30s读板一次，可根据反应的快慢来确定读板的时间。
Code 1 2 3 4 5 6 7
Time
TMB 0 0.5 1 2 4 6 8 10
V01
Code 1 2 3 4 5 6 7
Time
H2O2 2 4 6 8 10 16 32 64
V01
二、实验
1、打开酶标仪（开关在仪器后部，若仪器没反应，请检查电源是否接通），密码为5个
0，按Enter键进入系统。
电脑开机，密码为mby-nano，双击酶标仪软件图标，出
现登录框，直接点击“登录”，进入酶标仪控制界面
选择“铁动力学”(波长为650nm)
板1
；
打开电脑内置时钟，
若底物为ABTS，则检验项目选择“gg”（波长为405nm）。
新建一个word文档，以日期命名，打开。
2、加样：96孔板从左至右编号为1-12，自上而下编号为A-H。
以TMB为例，从第1列加样：
①从A1至H1，每孔加200µL NaAc/HAc Buf；
②从A1至H1，每孔加10µL催化剂（每加一个孔，换一次枪头，加样时用枪头搅匀反应体系）；
③从A1至H1，每孔分别加不同体积（0，0.5，1，2，4，6，8，10µL）TMB（每加一个孔，换一次枪头，加样时用枪头搅匀反应体系）；
④用排枪吸取32µL H2O2加入A1至H1，快速放入酶标仪中，点击“读板”，记下读板时间（如下表所示，假设第一次读板时间为09：00：00）
Code 1 2 3 4 5 6 7
Time 00：00 00：30 01：00 01：30 02：00 02：30 03：00 03：30 TMB 0 0.5 1 2 4 6 8 10
V01
用排枪加H2O2时，注意检查枪头是否插紧，否则会导致吸取H2O2的量不足。
亦可先将96孔板放入酶标仪，再加H2O2，这样可以节约时间。
每次读板出来结果后，点击“结果入库”——>“是”——>“确定”，按下“PrintScreen”键，点击“退出”，打开word文档，ctrl+V或者右击选“粘贴”，保存结果，要留意下次读板的时间。
若遗漏某个模板没有保存，可点击“查询结果”，下拉框中选择目的模板编号即可。
(现已可以直接拷吸光值读取数据，按ctrl键点击该处文字见方法)
3、第一组数据保存后，将第一组的反应液倒掉，用卷纸将边上的液体擦干。
第二、三、四组同第一组的操作。
保存所有数据，拷贝到U盘里，整理实验台，关掉酶标仪、空调和电脑。
4、若当天不再继续实验，将24孔板中剩余的H2O2倒掉，用清洁剂洗后，再用二次水冲洗一次，放入烘箱中烘干。
移液枪放回原处，催化剂、底物和H2O2放入冰箱中保存。
三、数据处理
1、打开Origin6.1，点击右上角的“Add New Column”（箭头所指）：
，亦可右击——> Add New Column。
2、输入数据：命名各列，X列命名为时间，单位s，8个Y列分别为8个孔的编号。
X 列时间从0-180s，0 s对应微孔板编号1的数据，30 s对应code2的数据，以此类推，将所
读数据输入。
点击“file”—>“Save Project As”，
保存文件名为“第一组”。
3、数据输入完成后，选择X和Y列，点击左下角的“点图”标志（箭头所指）
作出点图，点击Analysis—>Fit Linear作线性拟合
，
在结果对话框里，拟合的方程为Y=A+B*X，B的值为拟合得出的斜率即反应的初速度V
，同样方法得出不同TMB体积对应的反应初速度V，记录数据：
Code 1 2 3 4 5 6 7
Time 00：00 00：30 01：00 01：30 02：00 02：30 03：00 03：30 TMB 0 0.5 1 2 4 6 8 10
V01 0 0.00714 0.00902 0.01162 0.01425 0.01597 0.01547 0.017 同样方法得出第二、三、四组的反应初速度V，记录数据。
4、新建New Project，数据表1中命名X列为底物（TMB）浓度，列中数据为A-H对应的孔中TMB的物质的量浓度（一般用µmoL/L）；挑选三组比较好的初速度V，输入Y列。
选中初速度V的三列，右击—>Statistics on Rows
，
得出数据表2，选定Mean和sd列中的值，右击复制，粘贴至数据表1中
，
选定sd列，右击—>Set As—>Y Error，将标准方差设为误差棒。
选定X列、Mean列和sd列，画点图
，
点击Analysis—>Non-linear Curve Fit，作非线性拟合
拟合的方程为米氏方程y=P1*x/(P2+x)，y为反应初速度，x为底物浓度，P1为Vmax值，P2为米氏常数Km值（若软件中没有此方程，可点击New新建方程，之后也可点击Edit
编辑方程）；点击Start Fiting，得出对话框
，点击Active Dataset，，设定P1、P2初
始值为1，，点击10lter进行非线性拟合，得出
，记录Vmax和Km值。
可双击X 或Y 轴修改坐标轴名称
，
点击图上方的“T ”标志
可在图上插入文本框，将Km 和Vmax 值写入。
5、保存结果。
6、计算Kcat 值
Kcat 表示每个酶分子在单位时间内催化底物的分子数，反应了酶催化能力的大小。
根据下面的公式计算：
（1） （2） （3）
v 的单位为Ms -1；v max 为非线性拟合得出的值，单位为s -1；ε=39000M -1·cm -1；l 为反应体系的高度，96孔板每个孔的高度为1cm ，每个孔的容积为300µL ，可根据反应体系的平均体积占300µL 的比例来计算反应体系的高度；[E]为催化剂的浓度，单位为M ；m 为催化剂的质量，可根据加入催化剂的体积和催化剂溶液的浓度计算得出；r 为催化剂粒子的半
3
[]43A m E
r N V
πρ=⋅⋅⋅max v
v l
ε=
⋅[]v Kcat E =
径，以透射电镜测出的粒径计；ρ为催化剂的密度，单位为g/cm-3；N A为阿伏伽德罗常数，值为6.02×1023；V为反应体系的平均体积；Kcat单位为s-1。
附：
直接拷数据方法：
1.每次读板后，数据结果入库，待全面测完，按照当天的日期在桌面的DATA文件夹中查找自己的数据，格式为记事本，如20100825.txt，该文件拷入自带u盘。
2.选中该记事本文件，右击打开方式，选择用写字板打开，如图
打开后如下：
3.按ctrl+A，将写字板文件中全面数据选中，复制，新建一个word文档，粘贴。
4.选中某一列数据：先将鼠标指针放在该列数据的第一个数据前面，然后按住alt键，
向右下方拖动，直到黑色黑色区域将该列数据全面覆盖，注意不要覆盖其他数据，如图：
5.选中之后先松开鼠标，再松开alt键，选中后不要点击鼠标（左右键都不要点），按ctrl+c 复制该列数据。
6.打开origin软件，选中某列，按ctrl+v 即可将该列数据拷入选中列，如图：
7.友情提示：在直接拷取数据时，如遇到不能直接拷入origin中时，可在word中插入表格，选中表格中一行或一列，将从txt中复制的数据粘贴进去，再在表格中重新选中数据，复制，即可一一对应的拷入origin中的表格中。
8.后续步骤按以上操作指示进行（按ctrl键点击该处）
9.。
