2.2.1动物细胞培养和核移植技术
1.动物细胞培养过程的顺序是()
①原代培养②传代培养③用胰蛋白酶处理组织,形成分散的细胞悬液④剪碎组织
A.④①②③
B.①③②④
C.②①③④
D.④③①②
2.某研究小组对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行培养,下列叙述正确的是()
A.制备肝细胞悬浮液时先用剪刀剪碎肝组织,再用胃蛋白酶处理
B.肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2刺激细胞呼吸
C.为了防止培养过程中杂菌的污染,可向培养液中加入适量的干扰素
D.用血球计数板计数的方法,可推断乙细胞比甲细胞增殖周期长
3.下列关于动物细胞培养的叙述,不正确的是()
A.动物细胞培养的目的是诱导出相应组织、器官
B.通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养
C.细胞的癌变通常发生在传代培养过程中
D.传代培养的细胞在传至10~50代左右时,部分细胞的核型可能发生变化
4.下列关于动物细胞培养液的叙述,不正确的是()
A.为了防止培养过程中出现细菌污染,可以在培养液中添加抗生素
B.动物细胞培养液与植物组织培养的培养基相同
C.95%空气中再混入5%的CO2主要作用是维持培养液的pH
D.培养液应该定期更换,以防止代谢产物积累对细胞自身造成危害
5.乙马的卵细胞核被甲马的体细胞核置换后,这个卵细胞经过多次分裂发育成重组胚胎,再植入丙马的子宫内发育,结果产下一匹小马。下列叙述正确的是()
A.直接在体外对甲马的体细胞进行诱导也能培养出胚胎
B.小马的性状与甲马完全相同
C.此项技术可用于保护濒危物种
D.该过程可以很好地证明动物细胞具有全能性
6.某研究性学习小组的同学在研究细胞工程时,列表比较了植物细胞工程和动物细胞培养的有关内容,其中错误的是()
7.下列对动物核移植技术的描述中,错误的是()
A.哺乳动物核移植包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植
B.体细胞核移植的过程中可通过显微操作去除卵母细胞中的核
C.体细胞核移植过程中通常采用减数第二次分裂中期的卵母细胞作为受体细胞
D.通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是对供核动物进行了100%的复制
8.一只羊的卵细胞的核被另一只羊的体细胞核置换后,这个卵细胞经过多次分裂,再植入第三只羊的子宫内发育,结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途,但是不能()
A.有选择地繁殖某一性别的家畜
B.繁殖家畜中的优秀个体
C.用于保存物种
D.改变动物的基因型
9.下图为克隆羊“多利”的培育过程示意图。下列各项表述不正确的是()
A.由于细胞核基因完全来自甲羊,所以克隆羊“多利”的性状与甲羊完全一致
B.克隆羊“多利”的培育过程中采用的生物技术有核移植
C.乙羊的去核卵细胞为重组细胞基因表达提供了细胞内的环境条件
D.此过程说明高度分化的动物细胞的细胞核也具有全能性
10.某研究小组以动物肝细胞为材料,测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种,甲细胞为肝肿瘤细胞,乙细胞为正常肝细胞。请回答下列问题。
(1)若用动物的肝脏组织制备肝细胞悬液,需用处理,让组织分散成单个细胞。将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养,培养液及其他培养条件均相同。一段时间后,观察到甲细胞数量比乙细胞数量。
(2)在动物细胞培养时,通常需要在合成培养基中加入等一些天然成分。细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行,CO2的作用是。
(3)为了防止细胞培养过程中细菌的污染,可向培养液中加入适量的,此外,为防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害,应。
(4)在两种细胞生长过程中,当乙细胞铺满瓶壁时,其分裂增殖,通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中,这样可以,增加培养的细胞数量,也有利于空气交换。11.动物细胞体外培养时,通常要在培养液中补充一定浓度的某些物质。下图是血清对正常细胞和癌细胞培养的影响的实验结果,根据该图提供的信息不能得出的结论是()
A.正常细胞与癌细胞的增殖速率相同
B.有无血清对正常细胞培养的影响不同
C.培养基中补充血清有助于正常细胞的培养
D.培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大
12.下图为哺乳动物生殖过程,其中b为卵细胞,c为体细胞。下列叙述不正确的是()
A.形成动物①②的过程分别属于有性生殖和无性生殖
B.产生动物②的过程中可发生基因突变、基因重组等
C.动物②的产生表明动物细胞的细胞核具有全能性
D.a、b、c细胞的形成过程中,仅c细胞通过有丝分裂形成
13.下图是克隆羊的培育流程图,根据所学知识回答下列问题。
(1)培育克隆羊时用到的卵母细胞可以从屠宰场收集,并在体外培养到。
(2)从供体羊中取上皮细胞,用处理,然后进行分散培养。培养过程一般
在中进行,整个过程必须保证细胞处于的环境中,所需营养物质要与体内基本相同。
(3)通过法吸出卵母细胞中的细胞核,微型吸管除了将细胞核吸出外,往往还会
将一并吸出。
(4)去核的卵母细胞与供体细胞通过电刺激后融合,进入受体卵母细胞,构建成重组细胞,融合后的重组细胞,需要用物理或化学的方法进行激活,使其完成进程。
14.动物器官的体外培养技术对研究器官的生理、病理过程及其机制的意义重大。下图是一个新生小鼠的肝脏小块培养装置示意图。请回答下列问题。
(1)肝脏切成小薄片,这有利于肝脏细胞。
(2)气室中充入5% CO2的主要作用是。
(3)培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长,但要注意选择抗生素的,以保证抗生素对肝脏细胞无害。
(4)有机物X有毒性,可诱发染色体断裂。利用如图所示装置和下列提供的材料用具,探究肝脏小块对有机物X是否具有解毒作用。
材料用具:肝脏小块、外周血淋巴细胞、淋巴细胞培养液、植物凝集素(刺激淋巴细胞分裂);显微镜、载玻片、盖玻片、玻璃皿、滴管;吉姆萨染液(使染色体着色)、有机物X溶液等。
实验过程:
①在淋巴细胞培养液中加入植物凝集素培养淋巴细胞,取4等份,备用。
②利用甲、乙、丙、丁4组装置(与上图相同),按下表所示步骤操作(“√”表示已完成的步骤)。
表中还需进行的操作是。
③培养一段时间后,取4组装置中的等量培养液,分别添加到4份备用的淋巴细胞培养液中并继续培养淋巴细胞。
④一段时间后取淋巴细胞分别染色、制片。在显微镜下观察,并对比分析。若丙组淋巴细胞出现异常,而甲组的淋巴细胞正常,则说明。
15.(2018全国Ⅲ理综)2018年《细胞》期刊报道,中国科学家率先成功地应用体细胞对非人灵长类动物进行克隆,获得两只克隆猴——“中中”和“华华”。回答下列问题。
(1)“中中”和“华华”的获得涉及核移植过程,核移植是指。
通过核移植方法获得的克隆猴,与核供体相比,克隆猴体细胞的染色体数目(填“减半”“加倍”或“不变”)。
(2)哺乳动物的核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植,胚胎细胞核移植获得克隆动物的
难度(填“大于”或“小于”)体细胞核移植,其原因是
。
(3)在哺乳动物核移植的过程中,若分别以雌性个体和雄性个体的体细胞作为核供体,通常,所得到的两个克隆动物体细胞的常染色体数目(填“相同”或“不同”),性染色体组合(填“相同”或“不同”)。
动物细胞培养和核移植技术 备课日期2014年 3 月 4 日课型新授课 教学目标 知识与技能 1\简述动物细胞养的含义。 2\说出动物细胞养的所需条件。 3\简述动物细胞培养的基本程序。 4\简述动物细胞核移植的概念。 过程与方法 情感态度 与价值观 1\通过学习基因工程的概念，使学生认识到科学研究需要的严谨，激 发为祖国而奋斗的精神。 2\通过学习基因操作的工具，使学生树立结构与功能相统一的辩证唯 物主义观念。 教学重点 1\动物细胞培养的过程及条件； 2\用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景 教学难点用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 教学方法以探究法、谈话法、材料教学法相结合。 教学用具多媒体课件 课时安排1课时 教学内容设计与反思 板书设计:
教学内容设计与反思一、复习导入: 教师活动：投影幻灯片，引导学生思考、分析讨论。 （1）植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养 植物体细胞杂交 （2）植物体细胞杂交的结果是产生了？ （3）植物体细胞杂交过程中涉及的原理是？ 二、讲授新课: （一）动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段 动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体、动物细胞培养 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 （二）动物细胞培养 1.发展历史: 单20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形 成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问 题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的 脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神 经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验 不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后， 在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物 细胞培养。 2、动物细胞培养的应用和概念： 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关 的组织,将它分散成个细胞,然后,放在适宜的 培养基中,让这些细胞生长和增殖. 3、动物细胞培养过程： 引导学生阅读课文44--46面相关内容。
2.2 动物细胞工程 2.2.1动物细胞培养和核移植技术（第二课时） 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 教学目标： 知识目标：简述通过体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用 能力目标：运用动物细胞的基础知识，分析核移植技术的理论基础，搜集有关动物细胞核移植研究进展和应用方面的资料，进行整理、分析和交流情感目标：讨论动物细胞核移植的社会意义，关注动物细胞核移植的发展和应用前景。 旧课复习： 我们已经学习了植物的组织培养，植物体细胞杂交，知道植物细胞可以培养成一棵植株，这说明植物细胞具有全能性，而动物的体细胞离开了母体，却不能培养成一只动物个体难道是动物细胞没有全能性吗？不是。而是动物细胞高度分化，全能性比较低。 导入新课： 假如生活中我们碰到这样的问题,比如：（展示幻灯片，问题的提出） 1997年,美国威斯康星洲的一个奶牛场有一头高产奶牛叫“卢新达”,年产奶量为30.8吨,而我国奶牛年平均产奶量仅为3~4吨.用什么方法能得到更多的“卢新达”呢?学生回答克隆，其实克隆的研究从1938年就开始了。（幻灯片——克隆的历史，多利之后还有许多的动物被克隆，今天，我们要先从多利讲起） 听说过克隆羊多利吧，可以请一位同学来说说来多利的诞生过程。(学生上台讲述多利的培育过程)我们一起来看看多利的培育过程，请问多利像谁呢？母羊A，因为多利的核基因全部来自母羊A。100%象吗？，不，因为还有来自母羊B的细胞质基因。这里哪个细胞是供体细胞呢，乳腺细胞，它是高度分化的体细胞。
来看课本中对克隆的定义：请大家阅读，并划线。 教师板书：1、概念 克隆的定义：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体. 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物. 分类:体细胞核移植和胚胎细胞核移植（根据提供细胞核的供体不同而区分）多利羊之所以轰动全世界，并非因为它是首只克隆动物，你知道为什么它能一夜成名呢？请一位同学回答：（首先，它选用的细胞是高度分化的体细胞，其次，它是哺乳动物，意味着人可以进行体细胞核移植。所以它的诞生标志着体细胞核移植成功。胚胎时期的细胞进行细胞核移植比体细胞核移植更容易成功，这是为什么呢？原来胚胎细胞分化程度低，所以全能性较高，而体细胞分化程度高,所以全能性也就比较低了。其实我国早在20世纪70年代，就在童第周教授的带领下，克隆出了鱼，但是，多利一夜成名，中国的克隆鱼却默默无闻20年，这是为什么呢？（因为我们的闭塞，导致中国科学的进展不为世界所知。所以要与世界进行交流，同享科技进步成果）。 那么刚才那只卢新达奶牛能用胚胎细胞克隆吗？（请一位同学回答）。不行，本身自己已经过了胚胎期，如果用它的下一代的胚胎细胞，那么已经加入了另一只公牛的基因。所以用体细胞核移植技术。因此，说体细胞核移植技术比较常用于优秀动物个体的克隆。 下面我们通过我国成功克隆高产奶牛的过程来学习动物体细胞核移植的过程。请大家结合课本，看以下的幻灯片
综述 体细胞核移植的研究进展 核移植供体细胞与 受体细胞的选择 乔岩岩,史小林* (首都医科大学生殖医学研究中心,北京 100054) 摘要 根据近年来国外的研究进展,对核移植研究中的有关内容,如供体核的获得、受体卵母细胞与去核、核卵重组进行了综述,望能对核移植研究有所帮助。 关键词 核移植; 供体细胞; 受体细胞 中图分类号 Q243 文献标识码 A 文章编号 1004 3845(2005)02 0113 04 Advances in somatic cell nuclear transfer:the selection of donor cell and recipient cell QI A O Yan y an,S H I X iao lin* Rep roductive M edical Center,Cap ital Univ er sity of M edical Science,Beij ing100054 Abstract This article is to review the latest developm ent of nuclear tr ansfer,m ainly focusing on the selectio n of do no r cell and recipient cell and the reco mbinatio n of nucleus and o ocy te.We ho pe that it w ill be helpful to the pr ofessional researchers in this field. Key words Nuclear tr ansfer; Donor cell; Recipient cell (J R epr od M ed2005,14(2):113 116) 细胞核移植是通过显微操作和细胞融合技术,将单细胞核供体(卵裂球或体细胞的核)移入去核的受体(卵母细胞或受精卵)胞质的工程,细胞核移植结果是构成重组胚,通过对重组胚的激活、培养和移植,最后达到扩繁同基因型哺乳动物胚胎及其种群的目的。现将当今核移植供体细胞,受体细胞的研究进展综述如下。 一、核移植供体细胞 (一)供体细胞类型:核移植所用细胞包括动物干细胞、胎儿体细胞和成年体细胞等,供核细胞的类型可直接影响核移植的成功率。目前,核移植研究多用后两种细胞,成功的核供体细胞有乳腺细胞、肌细胞、性腺细胞和肝细胞等,特别是卵丘细胞与胎儿成纤维细胞,成功地用作多种动物核供体。 1 乳腺上皮细胞:1997年英国首次报道,采用血清饥饿法即先将成年母羊乳腺上皮细胞在含10%的胎牛血清(FCS)的培养基中培养,然后转入FCS含量仅为0.5%的培养基中连续培养5d,将其作为核供体克隆绵羊 多莉 成功,指出了高度分化的乳腺上皮细胞在导入受体卵母细胞后,可以去分化,恢复全能性。 2 卵丘细胞:1998年美国以小鼠卵丘细胞为核供体,采用吸移管注入,利用机械和化学激活方式进行细胞融合,成功培育出三代克隆小鼠。小鼠、牛体细胞移植的相关研究发现休眠(G0)的卵巢颗粒细胞核与去核M II期卵母细胞构成的体细胞重构胚,其发育率及克隆后代的能力远高于其他类型的休眠体细胞,这可能颗粒细胞存在着与卵母细胞紧密联系的胞质微绒毛桥有助于供体核同受体核胞质因子的交换。还有研究表明,以卵丘细胞组成的重构胚有较高的卵裂率和囊胚发育率[1]。卵丘细胞适宜于核移植的可能原因:(1)卵丘细胞是自然静止在G0/ G1期的细胞;(2)卵丘细胞是包围在卵母细胞周围的细胞,核移植后两者胞质更易互融;(3)卵丘细胞内端粒酶活性较高,不会因染色体端粒变短而老化。 3 颗粒细胞:用牛成熟卵周围的卵丘细胞核移 收稿日期 2004 09 06; 修回日期 2004 10 18 作者简介 乔岩岩(1974~),女,山东济宁人,硕士生,讲师,生殖医学专业(*:通讯作者)
2. 2. 动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 课标要求 1、能力要求 了解动物细胞培养的过程 比较动物细胞培养与植物组织培养区别 掌握动物体细胞核移植技术的过程和意义 2、内容要求 了解动物细胞培养的过程。 重难热点归纳 1 2、动物细胞培养与植物组织培养的区别。 动物细胞培养与植物组织培养有许多相似之处，也有许多不同点。一是它们用的培养基 不同，植物组织培养用的一般是固体培养基，而动物细胞培养用的一般是液体培养基。第二 是它们的培养基的成分不同。动物细胞培养的培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐和 维生素，另外还有动物血清。植物组织培养所需要的培养基包含植物生长和发育的全部营养 成分，如矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素和有机添加物，没有动物血清。第三是植物组 织培养最后一般得到新的植物个体，而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能 性，因此得到的是同一种的细胞。 3、把握动物体细胞移植的特点 动物体细胞移植依据的原理还是细胞的全能性，与植物组织培养一样属于无性生殖。虽 然细胞核内具有发展成为一个完整个体所需的全套基因，但动物体细胞分化程度较高，因 此很难表达全能性。卵细胞体积大，易于操作，含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条 件。将体细胞核移植入去核卵细胞内，既保证了重组细胞的完整性，又能刺激体细胞核表达 其全能性，发展成为一个新的个体。动物体细胞移植产生的新个体的亲本有三个：体细胞核 供体、卵细胞细胞质供体、代孕母体。新个体细胞核基因型与体细胞核供体完全一样，因此 新个体性状与体细胞核供体基本相同。卵细胞细胞质中也有少量的DNA ，新个体性状与卵 动物胚胎或幼物器官、组织 50代细胞 …… 细胞株 细胞系 传代培养
一、实验目的 1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2、学习并掌握细胞传代培养的方法。 3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。 二、实验原理 细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。 动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。 原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。 传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 三、细胞培养相关设施及材料 1、细胞培养室 无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。 孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。 制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。 储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。 清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。 2、细胞培养常用基本设施： 荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。 细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。 3、细胞培养用品的清洗、消毒 新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗： 硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水； 冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。 所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工
动物体细胞核移植技术和克隆动物 许昌实验中学万沛沛 一、教学目标： 1．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2．培养理解分析、信息获取、归纳总结和交流合作能力。 3．体验科学发现、技术发明和社会发展之间的关系。 二、教学重点和难点： 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 三、教学方法： 讲解讲述、阅读指导、讨论引导、归纳总结等。 四、课时安排：1课时 五、教学过程： Ⅰ、课前准备： 1、搜集相关电子图片（西游记的孙悟空）和克隆动物的图片，并制作成教学课件。 2．制定学生课前预习的学案，并及时检查，了解学生情况，制定上课计划。 Ⅱ、新课讲授： （屏幕展示课前寄语）上课前先送给同学们5个词：博学，审问，明辨，慎思，笃行，希望同学们在学习过程中能广览知识，对问题多思，多问多辩，并切实力行，用我们的努力开启“成功基因”的表达。 好，言归正传，今天我们共同探究的课题是关于克隆动物的培育过程。【导入】 投影幻灯片1——西游记插图 我们每个同学几乎都看过《西游记》，其实唐僧师徒西天取经途中，最大的一个科学发现就是——无性繁殖。他们发现女儿国的女人生孩子不需要与男人结婚，只要喝一口子母河的水，就可以如愿以偿。同时也开了男人也可以怀孕生子的科学先河。 在西游记中，人们最崇拜的一位偶像，怕是要数孙悟空了。孙悟空不但有神出鬼没的七十二变，更神奇的是：他只要从自己身上拔出一根毫毛，放在嘴边一吹，就可以变出无数个跟自己一模一样的小猴子。复制自身，这不就是克隆技术吗？所以说孙悟空是当之无愧的克隆技术的鼻祖。 这个克隆猴的古代神话如今正逐渐变成现实：2000年，科学家第一次成
动物细胞培养及无血清培养研究进展 摘要：细胞培养是生物学中一项重要技术，应用较为广泛，目前已渗透到细胞生物学、生物化学、临床检验学等多个领域。其中动物细胞培养是动物细胞工程中最常用的技术手段，而且动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。本文主要介绍了动物细胞培养和其中发展较快的无血清培养技术的研究应用进展。为未来实际的研究和生产作一些总结和展望。 关键词：动物细胞；细胞培养；无血清培养基 1 引言 组织培养技术创建于18世纪末，之后于1907 年美国生物学家Harrison在无菌条件下，以淋巴液为培养基在试管中培养蛙胚神经组织宣告成功后，才逐渐发展成为一种从机体获取细胞，模拟体内生存环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖并维持结构和功能的实验技术。这种技术为细胞学、遗传学、病毒学、免疫学的研究和应用做出了重要贡献。近年来生命科学迅速发展，各种在分子水平的实验如核移植、细胞杂交、DNA 介导的基因转移等，都是借助细胞培养技术而得以实现的。然而各领域的动物细胞培养技术发展并不平衡，存在许多的局限性，使用范围有限，还未出现适合整个生命科学研究领域的培养体系。因此本文对细胞培养及大规模培养、无血清培养做一些总结。 2动物细胞培养 动物细胞培养方式包括原代和传代培养。培养方式有贴壁、悬浮以及固定化培养等方式。 2.1动物细胞培养的基本概念 细胞培养指的是从体内组织取出细胞，并为其提供一个无菌、具有适当温度及酸碱度的环境，给予充分营养，使其生长繁殖并维持其结构和功能的一种培养技术。从体内取出的细胞进行的首次培养式细胞培养最初的阶段，也称为原代培养。原代培养式细胞培养当中重要的必经环节。原代培养细胞生长到一定时候后，由于受群体环境影响，需要转移到另一个容器，这种培养称为传代培养。传代后的动物细胞与原代培物形状一致的话，则表示传代成功，这些细胞称为细胞系或细胞株。 2.2动物细胞培养技术的内容
《动物细胞培养技术》复习思考题 1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果 器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？ 答：①离体细胞对各种毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未达到要求，各种毒物会损坏细胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅，121.3℃，20~30分钟，在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿，避免造成污染。③ 2.叙述超净工作台的工作原理？ 答：超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程，在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。 3.正压过滤器为何会除菌？ 答：正压式过滤器没有内置灭菌灯，正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜，这层膜可以将细菌阻挡在膜上，过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程 4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。 你认为精确配制各种溶液？ 答： 5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？ 答：配制后的液体应呈桃红色，PH值为7.4左右。苯酚红的变色域：1.2（橙）~3.0（黄），6.5（棕色）~8.0（紫色），若为黄色，则液体呈酸性，不利于细胞的生存。 6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制 答：Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。 7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？ 答： L－谷氨酰胺是细胞的能量来源；是一种必须氨基酸，是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体，也是蛋白质合成分解的调节物；是细胞内氨的清除剂，氨对一些细胞有毒性。 8.HEPES溶液的作用机理？ 答：它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养基pH迅速变动 9.平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？ 答：①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。②作用：a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某些低分子营养物质；b提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热源物质结合，起解毒作用；c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源；d起酸碱度缓冲液作用； e提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。 10.营养液制备后为什么要小剂量分装？ 答：避免营养液被污染后，全部的营养液都被污染。 营养液一次用完过后，下一次的实验就不能用，会引起污染，影响实验，若冷冻营养液，则营养液的营养成分会有所损失，影响细胞的生长 11.10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法？ 答：用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素，弃去2ml，用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素，配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。
细胞培养技术
细胞培养发展史及其应用 （一）前言 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harriso n)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 所谓动物细胞培养(亦称组织培养)既有别于植物细胞培养，又与微生物的培养完全不同。所谓动物细胞培养是指离散的动物活细胞在体外人工条件下的生长、增殖过程，在此过程中细胞不再形成组织。 由于动物细胞培养是在人工条件下进行的，便于调控和观察，因而成为现今研究动物的物质代谢过程、染色体的形态变化、以及遗传物质的表达调控等高难领域的既便利而又有效的新方法。同时，随着现代生物化学、分子生物学、分子遗传学、以及现代医学的发展，细胞培养也在许多应用领域充分展示了其巨大的发展潜力，并已为世人所关注。尽管如此，动物细胞培养仍是一门年轻的新学科，在发展之初被混淆于动物组织培养之中。 （二）细胞培养技术及其历史 细胞培养的历史最早可追溯到19 世纪末，据可考证的资料记载W ilhelm Roux是第一个进行动物组织培养实验的人。 1885年Wilhelm Roux 将鸡胚髓板放置于温热盐水中使之维持存活了数天，是有记录的第一个体外移植成功的例子。 1887年Arnold把恺木的木髓碎片接种到蛙的身上。当白细胞侵入这些木髓碎片后，他把这些白细胞收集在盛将盐水的小碟中，接下来观察到这些白细胞在运动，并存活了一个短的时间。
实验十五动物细胞培养技术及其应用 一．实验目的 通过本实验使学生掌握细胞培养、细胞检测和细胞表达等成套技术的原理和方法。 二. 实验内容 1.培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏等基本技术； 2.细胞生长曲线测定、细胞活性检测等常用技术； 3.细胞污染检测方法与技术； 4.病毒在细胞中的感染与增殖、重组病毒异源蛋白的细胞表达等实用技术。 三．实验用品 1. 材料：Sf 细胞、Hi5 细胞等 2. 器材：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、培养基抽滤装置、电泳仪、离心机、pH 计、液氮罐（含液氮）、水浴锅、温度计、培养瓶、血清瓶、5 ml和10 ml 移液 管、不锈钢移液管筒、大小不锈钢饭盒、酒精灯、吸耳球、血球计数板、96孔板、 24孔板、无菌冻存管、离心管、记号笔、一次性过滤器、微量加样器、精密pH 试纸、酒精棉球等 3. 试剂与药品：Grace培养基、胎牛血清、甘油、DMSO、双抗（青霉素、链霉素）100 u/ml、 Hank’s液、胰蛋白酶、台盼蓝、液氮、分析纯无水酒精、95%医用酒精、Tris 碱、硼酸、EDTA、琼脂糖粉（电泳用）、dNTPs、Taq酶、支原体检测试剂盒、 DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue kit （Qiagen）等。 四．实验方法与步骤 （一）培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏 1. 缓冲液及培养基配制 Hank’s液：KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml，高压灭菌。4℃下保存。 胰蛋白酶液： 称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s 液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。 4%台盼蓝染液：称取台盼蓝4克，加双蒸水至100 ml。 MTT溶液：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的Hank’s液中。4℃下保存。Grace培养基：取一份GIBCO公司的Grace培养基粉剂，按说明用量加入1000ml三蒸水100单位／毫升青、链霉素，充分混匀使溶解，调节pH值至6.8左右。 0.22 μm 滤膜抽滤除菌，4℃下保存。此为基础培养基。使用前加入10%胎牛 血清。 细胞冻存液：基础培养基加入10%DSMO，20%胎牛血清，用前配制。 PBS缓冲液：137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 8.1 mmol/L Na2HPO4, 1.5 mmol/L KH2PO4,
动物体细胞核移植技术和克隆动物 教学目标： 1．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2．培养理解分析、信息获取、归纳总结和交流合作能力。 3．体验科学发现、技术发明和社会发展之间的关系。 教学重点： 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 教学难点： 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 教学方法：讲解讲述、阅读指导、讨论引导、归纳总结等。 课时安排：1课时 教学过程： 【导入】 《西游记》中,孙悟空拔出身体上的毫毛,用嘴一吹,每根毫毛都能变成一个和自己一模一样的猴子来。这个克隆猴的古代神话如今正逐渐变成现实：2000年，科学家第一次成功地用猴的胚胎细胞克隆出了猴。2007年，又成功地用一只成年猴的体细胞克隆出了猴胚胎，离发育成猴只有一步之遥。你还知道哪些克隆动物？大家知道，将离体的植物组织或细胞在适当的条件下培养，可获得完整植株，我们称之为植物组织培养。克隆动物能采用类似的方法吗？（学生阅读P47第三段后回答）由此导入课题——动物体细胞核移植技术和克隆动物（红字作为板书，下同）。 【正课】 投影幻灯片1（什么是动物核移植和克隆动物），并讲述：用于核移植的核供体细胞既可以用分化程度较低的动物胚胎细胞，也可以用高度分化的成年动物的体细胞。胚胎细胞核移植和体细胞核移植的原理、方法基本相同，只是体细胞分化程度高，恢复其全能性比胚胎细胞困难得多。如何进行体细胞核移植呢？ （一）体细胞核移植技术过程 投影幻灯片2（体细胞核移植技术过程），以克隆高产奶牛为例，边讲解大致过程，边板书如下：
去核、移核、融合 取体细胞体外培养传至10代 核质重组细胞构建重组胚胎 取卵母细胞体外培养至MⅡ期 胚胎移植（至代孕母体假孕子宫）生出克隆动物 “听完了过程介绍，你有没有什么问题要问？”如果有，从中提炼出有价值的若干问题加以讨论；如果一时没有，投影幻灯片3（讨论题），组织学生讨论： 1.为什么通过核移植的方法能够克隆出完整的动物个体？ 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞。这是为什么？ 3.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么要对卵母细胞去核？卵母细胞起什么作用？（为什么选择卵母细胞作为核移植的受体细胞?） 4.你认为应用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 5. 和动物的自然繁殖相比，用体细胞核移植技术克隆动物有什么特点？ 过渡：如果你掌握了这套体细胞核移植技术，你想应用它来解决什么问题？ （二）体细胞核移植技术的应用前景 如果学生提出了一些应用体细胞核移植技术的合理设想，就据此进行小结，并对其在构建生物反应器和器官移植两方面的应用借助课件加以适当点拨；如果有学生提出克隆人引起课堂纷争，那就告诉他们以后会有专题涉及，本节暂不讨论；如果学生一时提不出设想，那就让他们阅读P49两段正文和P50第1段，通过下列问题进行引导，再做总结。 【问题1】在畜牧生产中，怎样保持良种家畜产奶量大、生长快、瘦肉多等优良性状？濒危动物自然繁殖率低，怎样增加这些动物的存活数量？能无限制地推广你的解决办法吗？ 【总结1】利用体细胞核移植技术克隆动物（生殖性克隆），可以—— ●促进优良畜群繁育 ●扩大濒危动物种群
课时跟踪检测(七) 动物细胞培养和核移植技术 (满分：50分时间：25分钟) 一、选择题(每小题2分，共20分) 1．在动物细胞培养过程中，使用胰蛋白酶的目的是( ) A．使动物组织分散为单个细胞 B．去掉细胞壁，使其成为原生质体 C．去掉细胞膜，暴露出原生质体便于细胞融合 D．促进蛋白质水解为多肽 2．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件( ) ①无毒的环境②无菌的环境③培养液中需加血浆④温度与动物体温相近⑤需要O2，不需要CO2⑥加CO2维持培养液的pH A．①②③④⑤⑥B．①②③④ C．①③④⑤⑥ D．①②③④⑥ 3．下列有关动物细胞培养的叙述，正确的是( ) A．动物细胞培养的目的就是获得大量的分泌蛋白 B．对动物组织块和分散的细胞进行培养，效果是基本相同的 C．细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中 D．培养高度分化的动物体细胞一般不能发育成幼体 4．动物细胞培养过程的顺序是( ) ①原代培养②传代培养③胰蛋白酶处理组织，形成单个细胞，制成细胞悬液 A．①②③ B．①③② C．②①③ D．③①② 5．一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能( ) A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优秀个体 C．用于保存物种 D．改变动物的基因型 6．右图为哺乳动物(羊)的生殖过程，下列叙述不．正确的是( ) A．个体2为克隆动物，c为高度分化的体细胞 B．个体2的遗传性状与提供c细胞的羊不完全相同 C．产生动物个体1与动物个体2的生殖方式是不同的 D．e细胞为完成减数分裂的卵细胞 7．用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是( )
专题二2.2.1动物细胞培养和核移植技术 一、教材分析 《动物细胞培养和核移植》是人教版高中生物选修三《现代生物科技专题》第2章第2节《动物细胞工程》第1节课的教学内容，主要学习叶绿体动物细胞培养这一基础技术和核移植技术的过程和应用。本节内容是本章的重点同时又是近几年的热点，，又是后面学习动物细胞融合和单克隆抗体的基础。 二、教学目标 1．知识目标： （1）．简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 （2）．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2．能力目标： (1)运用细胞的基础知识，分析细胞工程的理论基础 (2)通过小组间的交流与合作，提高学生的语言表达能力及思维的严密性。 3．情感、态度和价值观目标： (1)通过对动物细胞培养和核移植的学习体会生物科学技术的发展和进步。 (2)通过联系知识与生产实践的关系，激发学生对生物学科的兴趣热爱。 三、教学重点难点 重点：（1）动物细胞培养的过程及条件。 （2）用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 难点：用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 四、学情分析 我们的学生基础较差，有些学生必修模块的知识掌握不牢固，所以本节知识的学习有一定的难度，讲解时需要详细。并且这一节的知识离现实生活较远，需仔细分析，但学生对这一块的学习兴趣很浓厚。 五、教学方法 1．讲授法：对细胞培养和核移植的过程进行疑难讲解。 2．自学法：学生先自学基本知识。 3．学案导学：见后面的学案。 4．新授课教学基本环节：预习检查、总结疑惑→情境导入、展示目标→合作探究、精讲点拨→反思总结、当堂检测→发导学案、布置预习 六、课前准备 1．学生的学习准备：预习实验“动物细胞培养和核移植”，初步把握过程和条件及应用2．教师的教学准备：多媒体课件制作，课前预习学案，课内探究学案，课后延伸拓展学案。 七、课时安排：1课时 八、教学过程 (一)预习检查、总结疑惑 检查落实了学生的预习情况并了解了学生的疑惑，使教学具有了针对性。 （二）情景导入、展示目标。 教师首先提问：利用植物细胞可以培育成植物体，那么，你利用动物细胞能不能大量繁殖动物体，以提高繁殖率呢？这节课我们来学习动物细胞工程 （三）合作探究、精讲点拨。
2.2 动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 在治疗烧伤病人时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对一个大面积烧伤的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源不足，而且会产生排异反应。那么，怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢? 许多动物的细胞能够分泌蛋自质，如抗体等。但是，单个细胞产生的蛋白质量是很少的，怎样才能获得大量的分泌蛋白呢? 细胞工程中的动物细胞培养技术为解决这些问题找到了出路（图2-15）。 动物细胞培养 动物细胞培养(animal cell culture)就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。那么，动物细胞培养的过程是怎样的?培养时又需要提供哪些必要的条件呢? 动物细胞培养的过程 成块的组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了细胞的生长和增殖，因此，进行细胞培养时(图2-16)，首先将组织分散成许多单个细胞。方法是从健康动物体内取出组织块，剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，这样组织就会分散成单个细胞。然后，用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养瓶内，置于适宜环境中培养。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。培养贴附性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能生长增殖(图2-17)，这就要求培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒，易于贴附。以后，细胞进行有丝分裂，数量不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的培养过程通常被称为传代培养。传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去了。一般来说，细胞在传至10~50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。当继续传代培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性，这些细胞已经发生了突变，正在朝着等同于癌细胞的方向发展。目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。 △寻根问底： 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？ ？旁栏问题： 进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？
淮阳一高高效课堂自主学习型生物导学稿 高二年级班姓名编写人段芳编号 025 审核人日期20XX年3月31日课题：动物体细胞核移植课型设置【自研·互动45分钟+展示45分钟】 一、学习目标：1、理解动物体细胞核移植的概念 2、简述动物体细胞核移植的过程 二、重难点：动物体细胞核移植的过程
完成等级分 基础题： 1．一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能() A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优秀个体 C．用于保存物种 D．改变动物的基因型 2．英国科学家应用哪一种关键技术的细胞工程技术，培育出著名的克隆绵羊——多莉() A．细胞和组织培养B．细胞融合 C．动物胚胎移植D．细胞核移植 3.下列哪项不是体细胞核移植的应用： A.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 B.保护濒危物种 C.获得组织器官异体移植的供体 D.大量产生紫杉醇 发展题： 4.世界上第一只克隆绵羊“多利”和我国第一只转基因牛“滔滔”的培育程序分别如下图所示，请据图回答： (1)请写出培育克隆绵羊中①②所指的细胞工程技术名称： ①；②。 (2)培育克隆绵羊实施细胞工程①时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是。 (3)培育转基因牛过程中的关键环节是如图的() A．①B．②C．③D．④ (4)在转基因牛的培育中，图中D与亲本A、B牛的最根本区别是___________________________________________________________。 (5)继植物组织培养之后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细胞的细胞核也具有____________________。 (6)如果要使出生的动物整合率在理论上提高到100%，那么，应在什么时候进行鉴定？_______________________________________ 四、【培辅课】（附培辅单） 疑惑告知： 效果描述： 五、【反思课】： 今日心得： 今日不足：
核移植与体细胞克隆 教学目标 1．知识目标： （1）．简述克隆动物的概念含义和基本原理 （2）．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2．能力目标： 通过小组间的交流与合作，提高学生的语言表达能力及思维的严密性。 3．情感、态度和价值观目标： (1)通过对动物细胞核移植的学习体会生物科学技术的发展和进步。 (2)通过联系知识与生产实践的关系，激发学生对生物学科的兴趣热爱。 教学重点与难点 重点：（1）用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 难点：用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 教材分析 《核移植与体细胞克隆》是苏教版高中生物选修三《现代生物科技专题》第二章第3节《动物细胞工程》第2节课的教学内容，主要学习核移植技术的过程和应用。 教学设计建议 有了第二节的基础，学生对本节内容易于理解。因此，本节教学采用讲授、自学、讨论等相结合的教学方法。具体建议如下。 在动物体细胞核移植技术及克隆动物的教学中，可首先让学生列举所知道的克隆动物，调动学生已有的知识。随后可向学生提问：克隆动物的方法与植物组织培养一样吗？然后向学生说明目前动物体细胞克隆是通过核移植技术来实现的，以引入本节课的主题。关于核移植技术发展简史，可让学生在课堂上阅读，本节课的重点和难点是在动物体细胞核移植技术过程，教材中选用了一个非常好的素材──以诞生在我国的高产克隆奶牛为例，来说明体细胞核移植的过程。教师应充分利用和挖掘教材内容，带领学生一步步弄清动物体细胞核移植技术的过程。对于体细胞核移植技术的应用前景和存在的问题这部分内容，可结合本节教材“思考与探究”中的有关问题，以及“拓展视野”中的有关克隆羊多利的早衰问题等，让学生讨论。 教学过程设计 (一)预习检查、总结疑惑 检查落实了学生的预习情况并了解了学生的疑惑，使教学具有了针对性。 （二）情景导入、展示目标。 教师首先提问：利用植物细胞可以培育成植物体，那么，你利用动物细胞能不能大量繁殖动物体，以提高繁殖率呢？这节课我们来学习动物细胞工程
动物细胞培养在药物领域的应用 摘要：动物细胞培养开始于本世纪初 1962 年, 其规模开始扩大, 发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法, 利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单克隆抗体等, 已成为医药生物高技术产业的重要部分。本论文主要介绍动物细胞培养在药物领域的应用。 关键词：现代生物技术、动物细胞工程、动物细胞培养、药物领域、单克隆抗体 现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系，特别是在生物医药领域，细胞培养更具有特殊的作用。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的，基因工程乙肝疫苗大多是以CHO细胞作为载体；基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。细胞工程领域更离不开细胞培养技术，杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。 一、首先介绍下动物细胞特点及其培养的基本要求和技术 1、动物细胞特点 动物细胞没有细胞壁，只有细胞膜，细胞质，细胞核，而且大多数哺乳动物细胞只有附着在固体或者半固体的表面才能生长。 体外培养的动物细胞可分为原代细胞和传代细胞。原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。通常体外大量培养的动物细胞有哺乳动物细胞、昆虫细胞、禽类细胞和鱼类细胞等。 2、动物细胞培养的要求 动物细胞培养的条件：无菌、无毒的环境；营养物质（合成培养基）；温度和pH （36.5±0.5℃，7.2~7.4）；气体环境（氧气和二氧化碳）等。 其中动物细胞对营养要求更加苛刻，包括有氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或者半乳糖，除此之外还要有血清，因为由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶，可以促进细胞的发育。这些都是组成培养基的重要成分。 动物细胞培养还需要防止污染问题，细菌、真菌、病毒均可以导致动物细胞在培养过程中受到感染而死亡。而生物的组织材料、操作者自身、培养基、各种器皿以及环境均会引起污染。显著的污染标志是培养基的pH迅速改变，细胞外形模糊，甚至出现漂浮的集落。 3、动物细胞培养的步骤 ①无菌操作取出目的细胞所在组织，以培养液漂洗干净； ②以锋利无菌刀具割舍多余部分，切成小组织块； ③将小组织块置解离液离散细胞（解离液含有蛋白酶类）； ④低速离心洗涤细胞后，讲目的细胞吸移至培养瓶内培养。注意，哺乳动物细胞的大量培养需要提供较大的支持界面，原因前面已经说过，那是因为哺乳动物细胞只有附着在固体或者半固体的表面才能生长。 4、动物细胞培养的方法
2.2.1动物体细胞核移植技术和克隆动物 【学习目标】简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 【学习重点】用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 【学习难点】用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 【学习过程】 A 、 了解感知 1.通过动物细胞培养能产生一个个体吗?为什么？ 2.勾画动物体细胞核移植的概念。分类是什么？ 3.动物细胞核移植的原理是什么？ 4.体细胞核移植的过程 5、体细胞核移植技术的应用前景 ①在畜牧业中，加速优良种畜改良进程； ②保护濒危物种； ③作为生物反应器生产医用蛋白； ④转基因克隆动物作为异种移植供体； ⑤人核移植胚胎干细胞诱导分化后提供组织、器官用于移植； ⑥研究胚胎发育及衰老过程； ⑦做疾病模型。 6、体细胞核移植技术存在的问题 ①成功率非常低； ②绝大多数克隆动物存在健康缺陷等。 B 、深入学习 供体细胞（供核） 细胞培养 体细胞 卵巢卵母细胞（M Ⅱ中期：供质） 去核 无核卵母细胞注入 重组 细胞 构建重组胚胎 胚胎移植 代孕母牛 生出与供体奶牛遗传物质基本相同的个体
①为什么必须先去掉受体卵母细胞的细胞核？ ②受体细胞为___________时期的细胞，此时期的细胞为次级卵母细胞，与第一极体同时存在，去核要同时去除第一极体。注入受体细胞的是_________________。 ③动物体细胞核移植过程用到的具体技术有_________________、动物细胞融合、早期胚胎培养、胚胎移植。该过程有细胞融合体现了：生物膜的__________________特点。 ④动物体细胞核移植技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现的是___________的全能性而非动物细胞的全能性。 C、迁移运用 1.一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能（） A、有选择地繁殖某一性别的家畜 B、繁殖家畜中的优秀个体 C、用于保存物种 D、改变物种的基因型 2.从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状（） A、难以预测 B、像甲 C、像乙 D、像丙 3.世界上第一只克隆绵羊“多利”的培育程序如图所示， 请据图回答： （1）写出图中a、b所指的细胞工程名称：a ； b （2）实施细胞工程a时，所需的受体细胞大多采用动物卵母细 胞的原因是 （3）“多利”面部的毛色是。请根据遗传学原理说明 判断依据： （4）继植物组织培养之后，克隆绵羊的培育成功，证明动物 细胞核也具有。 （5）请试举一例，说明克隆绵羊培育成功的实际意义。