苏木素-伊红染色（HE）
【染色原理】
苏木素染液中带正电荷的蓝色色精与细胞核中带负电荷的脱氧核糖核苷通过
正、负电荷的极性吸附而守成染色；伊红是带负电荷的酸性染料，通过渗透或
弥散作用而使组织着色。
【组织固定与切片】
4%甲醛固定，石蜡切片厚度4~6μm。
【染色用具】
常规染色用具一套：染色皿或染色缸、刻字笔、标签、树脂胶、盖玻片、鸭嘴
镊、绸布或纱布。滴管数支。
【试剂配制】
1. Harris苏木素液苏木素
2.5g，无水乙醇25ml，钾明矾50g，蒸馏水
500ml，氧化汞1.25g，乙酸20ml。
将苏木素溶于乙醇（加热）后加入预先已加热溶解明矾的蒸馏水中，煮沸
1~2min，改用小火加热，慢慢加入氧化汞（注意防止产生大量气泡和溶液溅
出）再煮沸2min后立即浸于冷水中，冷却后加入乙酸，过滤后使用。
2. 伊红液
（1) 水溶性伊红染液：伊红0.5g，蒸馏水100ml。
（2）醇溶性伊红染液：伊红0.5~1g，80%~95%乙醇100ml。
3. 分化液: 盐酸0.5~1ml，80%乙醇100ml。
4. 返蓝液: 氨水1ml，蒸馏水100ml。
5. 各级乙醇、二甲苯
【注意事项】
1. 石蜡切片在脱蜡前要烘烤使组织与切片粘贴。烘烤温度50℃，时间30min 或30℃，24h。
2. 脱蜡要彻底，应定期更换脱蜡液。
3. 分化的时间要恰当掌握，可镜下观察着色情况。
4. 透明要充分。
【染色步骤】
1. 石蜡切片二甲苯Ⅰ脱蜡10~15min。
2. 二甲苯Ⅱ脱蜡10~15min。
3. 无水乙醇5min。
4. 95%乙醇5min。
5. 80%乙醇5min。
6. 自来水冲洗1min。
7. 蒸馏水洗1min。
8. 苏木素染液5~15min。
9. 自来水冲洗1~5min。
10. 化液分化数秒至数分钟。
11. 自来水冲洗1~3min。
12. 返蓝液返蓝30s~1min。
13. 自来水冲洗。
14. 伊红液5~10min。
15. 自来水冲洗。
16. 80%乙醇脱水30s。
17. 95%乙醇Ⅰ脱水1min。
18. 95%乙醇Ⅱ脱水1~3min。
19. 无水乙醇Ⅰ脱水2~5min。
20. 无水乙醇Ⅱ脱水2~5min。
21. 二甲苯Ⅰ透明2~5min。
22. 二甲苯Ⅱ透明2~5min。
23. 中性树胶封片。
【结果】
细胞核呈蓝色，软骨组织、钙盐呈深蓝色，黏液呈灰蓝色，细胞质呈粉红色，胶原纤维呈淡粉色，弹力纤维呈亮粉红色，红细胞呈桔红色。
have 和has的用法 用法：I, we, you, they 和复数名词后用have；he, she, it 后用has 练习：用be动词和have, has填空 1. ______ you a boy? No, I _____ not. 2. The girl______ Jack's sister. 3. I _ some red ink （一些红墨水）. 4. His father an old car. 5. The dog _______ tall and fat（又高又胖）. 6. ______ your brother（哥哥）in the classroom? 7. You two big eyes. 8. Their parents（他们的父母）many friends. 9. Mike and Liu Tao ______ at school（在学校）. 10. Whose dress（谁的裙子）______ this? 11. Whose socks（谁的袜子）______ they? 12. Who ______ I? 13. My sister a nice skirt（一条漂亮的裙子）. 14. The nurses （护士）white clothes. 15. The jeans （牛仔裤）______ on the desk. 16. He and she some bananas. 17. Look, the boy some apples. 18. Our school twelve classroom.（教室）. 19. The students many books. 20. Her sister（妹妹） a new bike（自行车）. 21. Their teacher some nice pictures. 22. LiMing’s mother_________big eyes. 23. My sister's name ______Nancy. 24. You, he and I ______ from China. 25. Jenny and Danny__________two black pens. 26. Our school________a big library（图书馆）. 27. How _______ your father? 28. ______ David and Helen from England? 29. Mary_________a doll（玩具）. 30. She _______ big eyes. 含have、has的句子变否定句、一般疑问句及肯定回答和否定回答 变否定句：have → don’ t have has → doesn’ t have 变一般疑问句：have → Do … have …? has → Does … have …? 注：I / we → you my / our → your 练习：把下列句子改为否定句、一般疑问句，并作出肯定回答和否定回答。 1. I have many friends. 2. He has a computer（电脑）.
HE（Hematoxylin & Eosin）染色基本流程 苏木精—伊红染色法简称HE染色法，它是最常用的普通染色方法。苏木精是阳离子染料，将细胞核内的嗜碱性物质染成蓝紫色。伊红是阴离子染料，将细胞质和胶原纤维等染成粉红色。 1、二甲苯脱蜡三道，每道30min 2、无水乙醇两道，每道5min 3、95%乙醇两道，每道5min 4、80%乙醇5min 5、70%乙醇5min 6、50%乙醇5min 7、蒸馏水3-5min 8、苏木素染色液5-10min，根据染色结果和气温调整时间 9、浸自来水冲洗多余的染色液 10、0.5%盐酸酒精分色（70%酒精配制）3-10seconds 11、水洗蓝化15-30min 12、50%乙醇5min 13、70%乙醇5min 14、80%乙醇5min 15、伊红染色液（95%乙醇配制）60seconds 16、95%乙醇两道，每道5min 17、无水乙醇两道，每道5min 18、乙醇+二甲苯（1:1）5min 19、二甲苯三道，每道5min 20、中性树胶封片
HE染色注意事项： 1. 染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，自来水中冲洗时间要长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。 2. 切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。 3. 切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。 4. 在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。 5. 切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。 6. 最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。 试剂配制： 0.5%盐酸酒精分色液 浓盐酸0.5～1 ml 70%酒精99 ml
have和has用法的区别： 在肯定句中，I,you,we,they,或复数做主语时用have，he,she ,it或单数作主语时用has。 在疑问句和否定句中无论什么人称作主语，都用have。 例如(肯定句)：1. I have some paper. 2. You have some staples. 3. We have some stamps. 4. They have some sugar. 5. He has a ruler. 6. She has some balloons. 7. It has four legs. has some books. 例如（一般疑问句）： 1. Do you have a bike 2. Do they have any salt 3. Does he have a bike 4. Does a rabbit have four legs ? 例如（否定句）：1. I don’t have any rice . 2. We don’t have any salt . 3. He doesn’t have a pen . 4. She doesn’t have any envelopes . have和has用法的区别： 在肯定句中，I,you,we,they,或复数做主语时用have，he,she ,it或单数作主语时用has。 在疑问句和否定句中无论什么人称作主语，都用have。 例如(肯定句)：1. I have some paper. 2. You have some staples. 3. We have some stamps. 4. They have some sugar. 5. He has a ruler. 6. She has some balloons. . 7. It has four legs. has some books. 例如（一般疑问句）： 1. Do you have a bike 2. Do they have any salt 3. Does he have a bike 4. Does a rabbit have four legs 例如（否定句）：1. I don’t have any rice . 2. We don’t have any salt . 3. He doesn’t have a pen . 4. She doesn’t have any envelopes . 【 have和has用法的区别： 在肯定句中，I,you,we,they,或复数做主语时用have，he,she ,it或单数作主语时用has。 在疑问句和否定句中无论什么人称作主语，都用have。 例如(肯定句)：1. I have some paper. 2. You have some staples. 3. We have some stamps. 4. They have some sugar. 5. He has a ruler. 6. She has some balloons.
Have与has的用法及区别 have与has都是“有”的意思,但二者用法是有区别的. 在陈述句中,当主语是单数第三人称（he、she、it）时,句子的谓语是“有”时,用has；当主语是其他人称（I、you、we、they）时,句子的谓语是“有”时,用have. 例句： I \ You have an apple . We\They have some apples . He\She has a pen . 但是,在疑问句中,当主语是就单数第三人称提问或否定句时用助动词does 和does not (doesn't),然后把has 变成have 如果不是第三人称,助动词就是do ,否定式do not (don't).特殊疑问句回答照样,该是has 还是has 该是have 还是have 但是当一般疑问句以do或does开头的时候,只能回答do don’t 或者does doesn't 例句： Do you have a book yes ,I do /No ,I don't What does a cat have the cat has a , He doesn’t have any coffee. 就是第二种：have本身也可以作为助动词,(作为完成时里的助动词)本身无词义,和do 一样,has 就相当于does 在单三情况下用,主要用于构成各种时态、语态、语气以及否定和疑问结构.（那此时的have还是has就要看具体的人称而定）完成时态是have/had + done (过去分词的形式) I have finished my work, she has finished her work have you finished your work? Has she finished her work?在一般疑问句里回答直接用have/has yes,I have/ No ,I haven't Yes,she has/ No,she hasn't(因为这里have/has是助动词)
苏木精-伊红染色方法 苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）染色方法，简称HE染色方法，是细胞与组织学最广泛的染色方法。 一、HE染色的基本原理 （一）细胞核染色的原理 细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的双螺旋结构中，两边链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。 （二）细胞浆染色的原理 细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH 值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染我以，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。（三）、二甲苯的作用
烤片后切片进入二甲苯是脱蜡的作用。组织处理和染色后进入二甲苯是透明作用。组织处理的透明是为了石蜡能进入到细胞中去，染色后透明是为了使细胞的折光率与玻璃相同，以便显微镜观察。（四）、酒精的作用 酒精用于苏木精染色前由高浓度至低浓度是为了洗脱用于脱蜡的二甲苯。 伊红染色以后的酒精由低浓度至高浓度酒精逐渐过度是为了彻底脱去组织中的水份。 （五）、水洗的作用 在脱蜡经酒精处理之后，水洗切片，是为了苏木精染液能更好的进入细胞核中去，使细胞核染色均匀。 染色之后的水洗作用是为洗去未与切片结合的染液。 分化以后的水洗则是为了除去分化液和脱下的染料，中止分化作用。 在伊红染色之后也可以水洗，是为了减少伊红染液进入脱水的酒精中。 （六）分化和蓝化作用 1、分化作用 苏木精染色之后，先用水洗去未结合在切片中的染液。然后用分化液1%盐酸酒精脱去细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附 的染料，这个过程称为染色的分化作用。 2、蓝化作用
骨组织石蜡切片制作 步骤： 1.固定：切取骨缺损出的骨组织，用PBS冲洗，放入4%多聚甲醛缓 冲液内固定12—24h。 2.脱钙：将固定好的骨组织放入脱钙液中侵泡脱钙24h. 3.脱水：将固定好的骨组织用蒸馏水冲洗3次，再用50%的酒精冲洗2 次，常规脱水，70%酒精（60min），80%酒精（40min）,95%酒精（30min）,100%酒精1（25min）,100%酒精II（25min）。 4.透明：二甲苯I(35min)，二甲苯II（35min）。 5.包埋：将透明处理后的骨组织依次侵入石蜡I 1小时，石蜡II 1小时。 6.切片：包埋后的组织块经修理后，用切片机切成4um的石蜡带，将组织石蜡块在50℃温水中展片，然后用干净的载玻片捞片。 7.烤片：将切好的组织片放入63℃恒温箱中烤片2小时。 免疫组化检测 步骤： 1.脱蜡：将组织切片放入62℃恒温箱中烘烤20min 二甲苯 1（10min）二甲苯2（10min）。 2.水化：100%酒精1（2min） 100%酒精（2min）95%酒精（2min）80%酒精（2min）70%酒精(2min) 。
3.PBS冲洗3次，每次5min.。 4.抗原修复：将组织片置0.01M的柠檬酸缓冲液（PH6.0）中煮沸 15min ,自然冷却至室温。 5.PBS冲洗3次，每次5min。 6.阻断：3%去离子水37℃孵育10min,以灭活内源性过氧化物酶活 性。 7.PBS冲洗3次，每次5min。 8.滴加1抗（GFP 1：100稀释, 4℃过夜） 9.PBS冲洗3次，每次5min。 10.滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂1，37℃孵育,20min, PBS 冲洗3次，每次5min。 11. 滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂2，37℃孵育,20min, PBS 冲洗3次，每次5min。 12.DAB显色5min。 13.自来水冲洗10min。 14.苏木精复染2min,盐酸酒精分化。 15.自来水冲洗10min。 16.常规脱水，透明，封片，镜检。 组织切片HE染色 步骤
Have 和has的用法 谓语动词have表示“有”，有两种形式：have和has，前者用于第一人称（I、we），第二人称（you）和第三人称（they），后者用于第三人称单数（he、she、it）或单数名词。 have/has句型与there be句型的比较：两者都表示“有”，但用法不同。前者表示所属关系，即表示“某人或某物有什么”，而后者表示存在，表示“某地有什么”。 一、用have, has填空。 1. I _ some red ink. 2. His mother an old house. 3. You _ two big eyes. 4. Their parents many friends. 5. My brother __ a nice T-shirt. 6. The doctors __ white clothes. 7. He and she __ some bananas. 8. Look, the child __ some sweets. 9. Our school twelve classroom. 10. The students many books. 11. His sister a new bike. 12. Their English teacher some nice photos.
13. Your brothers______a new bike. 14. LiMing’s mother_________two big eyes. 15. Jenny and Danny__________two black pens. 16. The dogs_______some meat in its mouth. 17. The students of Class One________a football. 18. Mary_________an old doll. 19. They _________some soup for supper. 20. Our school________a big library. 21.I a cat. 22.He a dog. 23. She long hair. 24. We a big house. 25. They a happy family.
一．Has/have简要说明 have的第三人称形式是has have:用于主语为I, you和所有人称复数 has：用于主语为第三人称单数[he, she,it, (Maria人名)] ※用have/has填空 1.She has along ruler and a short pencil. 2.I have two sisters and one brother. 3.This is mysister. She has big eyes. 4.We have threetoys cars and two toy buses. 5.Tom has a small nose and a wide mouth. 6.My Englishteacher has longhair. 7.Peter andMary have roundfaces. 8.I have an apple. My sister has anapple,too. 9.Lucy has short hair. 10.You have a long pencil. I have a short pencil. 二．巧思妙记 ◆动词have/has的用法： ?动词have表示“有”，肯定句中主语后；“三单”主语用has,其他人称用have;?一般疑问句容易变,does, do放句首；特殊疑问句怎么办，疑问词打前头； ?问句have用原形，这点一定要记清；否定句也不难，doesn’t, don’t 后添have. 肯定句I have… We/You/They have… He/She/It has… 否定句I do not hav e… I don’t have … We/You/They do not h ave… We/You/They don’t ha ve… He/She/It does not hav e… He/She/It doesn’t have… 一般疑问句及答语Do you hav e…? Yes, I do. No, I don’ t. Do you/they have…? Yes, we/they do. No, we/they don’t. Does he/she/it have…? Yes. he/she/it does. No. he/she/it doesn’t. （1）关于have 的否定句,一般疑问句及其回答 have的否定句在do后面加not。have的一般疑问句是在句首加上助动词”do” ,注意大小写的转换，其他的不变。（句中的“I”变为”you” ) 。 注意: “d o” 是助动词，无词义。“do” 是加上去的，不是原来句子里面的。
免疫组化H E染色步骤 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020
骨组织石蜡切片制作 步骤： 1.固定：切取骨缺损出的骨组织，用PBS冲洗，放入4%多聚甲醛缓冲 液内固定12—24h。 2.脱钙：将固定好的骨组织放入脱钙液中侵泡脱钙24h. 3.脱水：将固定好的骨组织用蒸馏水冲洗3次，再用50%的酒精冲洗2次，常规脱水，70%酒精（60min），80%酒精（40min）,95%酒精（30min）,100%酒精1（25min）,100%酒精II（25min）。 4.透明：二甲苯I(35min)，二甲苯II（35min）。 5.包埋：将透明处理后的骨组织依次侵入石蜡I1小时，石蜡II1小时。 6.切片：包埋后的组织块经修理后，用切片机切成4um的石蜡带，将组织石蜡块在50℃温水中展片，然后用干净的载玻片捞片。 7.烤片：将切好的组织片放入63℃恒温箱中烤片2小时。 免疫组化检测 步骤： 1.脱蜡：将组织切片放入62℃恒温箱中烘烤20min二甲苯1 （10min）二甲苯2（10min）。 2.水化：100%酒精1（2min）100%酒精（2min）95%酒精（2min） 80%酒精（2min）70%酒精(2min)。 冲洗3次，每次5min.。
4.抗原修复：将组织片置的柠檬酸缓冲液（）中煮沸15min,自然冷 却至室温。 冲洗3次，每次5min。 6.阻断：3%去离子水37℃孵育10min,以灭活内源性过氧化物酶活 性。 冲洗3次，每次5min。 8.滴加1抗（GFP1：100稀释,4℃过夜） 冲洗3次，每次5min。 10.滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂1，37℃孵育,20min,PBS冲洗 3次，每次5min。 11.滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂2，37℃孵育,20min,PBS冲洗 3次，每次5min。 显色5min。 13.自来水冲洗10min。 14.苏木精复染2min,盐酸酒精分化。 15.自来水冲洗10min。 16.常规脱水，透明，封片，镜检。 组织切片HE染色 步骤 1、将烘烤后的组织切片依次侵入二甲苯1，二甲苯II进行脱蜡各 10min。 2、脱蜡后的组织切片依次浸入无水乙醇I、无水乙醇II、95%酒精、80%酒精、70%酒精中各2min，PBS冲洗2次，每次5min。
have与has都是“有”的意思,但二者用法是有区别的. 在陈述句中,当主语是单数第三人称（he、she、it）时,句子的谓语是“有”时,用has；当主语是其他人称（I、you、we、they）时,句子的谓语是“有”时,用have. 例句：I \ You have an apple . We\They have some apples . He\She has a pen . 但是,在疑问句中,当主语是就单数第三人称提问或否定句时用助动词does 和does not (doesn't),然后把has 变成have 如果不是第三人称,助动词就是do ,否定式do not (don't).特殊疑问句回答照样,该是has 还是has 该是have 还是have 但是当一般疑问句以do 或does开头的时候,只能回答do dont 或者does doesn't 例句： Do you have a book yes ,I do /No ,I don't What does a cat have the cat has a , He doesnt have any coffee. 就是第二种：have本身也可以作为助动词,(作为完成时里的助动词)本身无词义,和do 一样,has 就相当于does 在单三情况下用,主要用于构成各种时态、语态、语气以及否定和疑问结构.（那此时的have还是has就要看具体的人称而定）完成时态是have/had + done (过去分词的形式) I have finished my work,she has finished her work have you finished your work?has she finished her work?在一般疑问句里回答直接用have/has yes,i have/ No ,i haven't Yes,she has/ No,she hasn't(因为这里have/has是助动词) have 是动词原形i have,we have,you have,they have,to have...
have的用法 陈述句——肯定句陈述句——否定句 I，We I，We You You have + 名词. don’t have + 名词. They They 名词复数名词复数 一般疑问句肯定回答 I，we I，we you you Do have + 名词 Yes, do. they they 名词复数名词复数 否定回答句中含有is/am/are一般疑问句变法： I，we 1、将is/am/are前提至句首，并大写 you 首字母。 No, don’t. 2、如陈述句中有I或We,变成一般疑问
they 句后要变成为You。My变成为Your。 名词复数3、将句尾“.”变成为“” 例：My brother is 、Is my brother 、Is your brother 、Is your brother tall完成 has的用法 陈述句——肯定句陈述句——否定句 He He She She has + 名词. doesn’t have + 名词. It It 名词单数名词单数 一般疑问句肯定回答 he he she she Does have + 名词 Yes, does. it it 名词单数名词单数
否定回答 He “对划线部分提问”四步骤解题法： She 1、变—将原陈述句变成一般疑问句No, doesn’t. 2、选—根据划线部分选出正确疑问词。 It 3、连—将2句+1句 名词单数4、去—将3句中划线部分去掉。 例：The apples are in the 、变—Are the apples in the box2、选—选定Where3、连—Where are the apples in the box4、去—去掉in the box 完成Where are the apples
HE染色 试剂配置 A：0.5~1%的伊红酒精溶液： 称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。 B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少) 苏木精6g 无水乙醇100ml 硫酸铝钾150g 蒸馏水2000ml 碘酸钠1.2g 冰醋酸120ml 甘油900ml 配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。 C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。 染色流程 (1)二甲苯（Ⅰ）15min (2)二甲苯（Ⅱ）15min （3）二甲苯：无水乙醇=1:12min (4)100%乙醇（Ⅰ）5min (5)100%乙醇（Ⅱ）5min (6)80%乙醇5min (7)蒸馏水5min (8)苏木精液染色5min (9)流水稍洗去苏木精液1-3s (10)1%盐酸乙醇1-3s (11)稍水洗10-30s (12)蒸馏水过洗1-2s (13)0.5%伊红液染色1-3min (14)蒸馏水稍洗1-2s (15)80%乙醇稍洗1-2s (16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s (17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s (18)无水乙醇5-10min (19)石炭酸二甲苯5-10min (20)二甲苯（Ⅰ）2min (21)二甲苯（Ⅱ）2min
(22)二甲苯（Ⅲ）2min (23)中性树胶封固 注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。 ②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。 *冷冻切片HE染色步骤： （1）冰冻切片固定10～30s （2）稍水洗1～2s （3）苏木精液染色（60℃）30～60s （4）流水洗去苏木精液5～10s （5）1%盐酸乙醇1～3s （6）稍水洗1～2s （7）促蓝液返蓝5～10s （8）流水冲洗15～30s （9）0.5%曙红液染色30～60s （10）蒸馏水稍洗1～2s （11）80%乙醇1～2s （12）95%乙醇1～2s （13）无水乙醇1～2s （14）石炭酸二甲苯2～3s （15）二甲苯（Ⅰ）2～3s （16）二甲苯（Ⅱ）2～3s （17）中性树胶封固。 注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。 染色结果：细胞核蓝色，胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。 4．12切片脱水透明切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。石碳酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。 5.H-E染色评定标准： （1）切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕； （2）染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。 4 染色结果编辑 细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。 着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。
have和has的用法（专项练习） have和has与主语搭配： I She We He You have… It has… They The boy Tony and Jenny Jenny 可见，主语为第三人称单数时用has，其余人称都用have。 have / has的含义及用法： 1.作“有”讲。如：I have a bag.我有一个包。 He has a red cup.他有一个红杯子。 2.作“吃、喝”讲。如：have breakfas t (吃早饭) have tea (喝 茶) have a biscuit(吃块饼干) have a drink(喝点 水)
( A)6Tom and I got a football. A. have B.has C. are ( B )7.It got big leaves. A. have B.has C.is ( A )8.Can he lunch now? A. have B.has C.is 关于have和has的练习其实也不是很难哦，不过上课的时候有的小朋友还是有些马虎哦，那么希望通过以下的练习能够加深印象！ 1.I ____ (have) a cat. 2.He ____ (have) a dog. 3.She ____ (have) long hair. 4.We ____ (have) a big house. 5.They ____ (have) a happy family. 6.It ____ (have) a short tail. 7.You ____ (have) a good teacher. 8.Elva ____ (have) two big eyes. 9.Tom ____ (have) a red pen. 10.My mother ____ (have) a beautiful nose. 11.Cats ____ (have) four legs. 12.Dogs ____ (have) two ears. 13.My father ____ (have) a blue car. 14.Everybody ____ (have) two hands. 15.I ____ (have) a model plane.
Have has 专项练习 班级：_______时间：_________ 姓名________ 分数_____________ have/has的用法： ①作“有”讲时，强调“所属关系”，表示“拥有”的意思。其主语常为人或物。如： My father has many new books．我爸爸有许多新书。 I have a new computer．我有一台新电脑。 ②“have＋表示一日三餐的名词”，意为“用餐”。 如：have breakfast／lunch／supper吃早饭／午饭／晚饭。 ③“have＋表示食品、饮料等名词”，意为“吃；喝”。 如：have bread吃面包 have eggs 吃鸡蛋 have tea 喝(一杯)茶。 一．填写正确的形式。 ____ (have) a cat. ____ (have) a dog. ____ (have) long hair. ____ (have) a big house. ____ (have) a happy family(家庭). ____ (have) a short tail. ____ (have) a good teacher. ____ (have) two big eyes. ____ (have) a red pen. mother ____ (have) a beautiful nose. ____ (have) four legs. ____ (have) two ears. father ____ (have) a blue car.（每个人） ____ (have) two hands. ____ (have) a toy plane. ____ (have) a football. ____ (have) many books. ____ (have) many skirts.
常规HE染色步骤 （1）二甲苯（Ⅰ） 5-10 min (2) 二甲苯（Ⅱ） 5-10 min (3) 95%乙醇（Ⅰ） 1-3 min （4）95%乙醇（Ⅱ） 1-3 min （5）80%乙醇 1 min （6）蒸馏水 1 min （7）苏木精液染色 5-15 min (8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s (9) 1%盐酸乙醇 1-3 s (10) 稍水洗 10-30 s (11)促蓝液返蓝 10-30 s (12) 流水冲洗 10-15 min （13）蒸馏水过洗 1-2 s (14) 0.5%曙红液染色 1-3 min (15) 蒸馏水稍洗 1-2 s (16) 80%乙醇稍洗 1-2 s (17) 95%乙醇（Ⅰ） 3-5min (18) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 min (19) 无水乙醇 5-10 min (20) 无水乙醇 5-10 min (21) 二甲苯（Ⅰ） 3-5 min (22) 二甲苯（Ⅱ） 2-5 min (23) 二甲苯（Ⅲ） 3-5 min (24) 中性树胶封固 结果：细胞浆红色，细胞核蓝紫色。 转：常规HE染色步骤 （1）二甲苯（Ⅰ） 5-10 min (2) 二甲苯（Ⅱ） 5-10 min (3) 95%乙醇（Ⅰ） 1-3 min （4）95%乙醇（Ⅱ） 1-3 min （5）80%乙醇 1 min （6）蒸馏水 1 min （7）苏木精液染色 5-15 min
(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s (9) 1%盐酸乙醇 1-3 s (12) 流水冲洗20-30min （13）蒸馏水过洗 1-2 s (14) 0.5%曙红液染色 1-3 min (15) 蒸馏水稍洗 1-2 s (16) 80%乙醇稍洗 1-2 s (17) 95%乙醇（Ⅰ） 2-3 s (18) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 s (19) 无水乙醇 5-10 min (20) 石炭酸二甲苯无水乙醇 5-10 min (21) 二甲苯（Ⅰ） 2 min (22) 二甲苯（Ⅱ） 2 min (23) 二甲苯（Ⅲ） 2 min (24) 中性树胶封固 注：①第（10）、（11）步可省去，（12）步冲水时间需延长至20-30min。 ②第（20）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。 1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。 2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min （各→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。 两次，然后把水吸干） 3．苏木素染色5min，自来水冲洗。（吸干水） 4．盐酸乙醇分化30s（提插数下）。 5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。（吸干水） 6．置伊红液2min。 7．常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min（省略）→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性树脂封固。
动词have(has)的用法 have用于第一人称（I, we)，第二人称(you), 及第三人称复数（they）；has用于第三人称单数（he, she, it)或单数名词。 1. have的用法总结 （1）have作“有”讲，强调“所属关系”，含有“拥有”之意。其主语一般是人，有时也可以是物。 They have many new books. 他们有许多新书。 Wei Hua has a little brother. 魏华有个小弟弟。 This table has four legs. 这张桌子有四条腿。 （2）have可以作“买”讲。 I want to have a kilo of beef. 我想买一公斤牛肉。 May I have a new pen 我可以买支新笔吗 （3）have作“用、使用”讲 Excuse me, may I have your bike, please 打扰了，我可以用（借用）你的自行车吗（4）have+表示动作的名词（这类名词常由同形的动词转化而来），意为“做（某事）”（=do sth. )。 have a drink (of…) 喝一点（……） have a look(at…) （朝……）看一眼 have a rest 休息一下 have a swim 游泳 这些短语常用于口语，这里的have可以用take替换。 （5）have+表示一日三餐的名词，意为“用餐”。 have breakfast/lunch/supper 吃早饭/午饭/晚饭。 have dinner吃饭，吃晚饭。 （6）have+表示食品、饮料等的名词，意为“吃；喝”（=eat, drink）。 如： have(some) bread 吃面包 have eggs(for breakfast) （早餐）吃鸡蛋 have(a cup of )tea 喝（一杯）茶 这里的have也可以用take替换。 （7）have+表示某种活动的名词，意为“进行；举行”。 如： have a class （学生）上课 have a sports meeting 开运动会 have a party 举行聚会 （8）have+表示疾病的名词，意为“患（病）”，有时也用have got。 have a bad cold 患重感冒 have (got) a cough 咳嗽 have(got) a headache 头痛 （9）have+表示一段时间的名词，表示“经历；度过”。 have a good time 度过快乐的时光，玩得愉快 have a good summer holiday度过愉快的暑假。 （10）have意为“邀请；招待”。 Thank you for having me. 感谢你们邀请我。 We are having friends for dinner. 我们要请朋友们吃饭。 2. have/has的句型转换： （1否定句主语+don't (doesn't)+have +…。 例： We don't have any water here. 我们这儿没有水。
病理片 HE染色步骤： 烤片80度半小时 (1)二甲苯（Ⅰ）5min (2)二甲苯（Ⅱ）5 min (3)二甲苯（III）5min (4)100%乙醇（Ⅰ）2min (5)90%乙醇（Ⅱ） 2 min (6)80%乙醇（III）2min (7)70%乙醇（IV）2 min (8) 流水冲洗5min (9) 苏木精液染色5 min (10) 流水稍洗去苏木精液1-3 s (11) 1%盐酸乙醇1-3 s (12)流水过洗至返蓝 (13) 0.5%伊红液染色1-3 min (14) 蒸馏水稍洗1-2 s (15) 80%乙醇稍洗1-2 s (16) 95%乙醇（Ⅰ）2-3 s (17) 100%乙醇（Ⅱ）3-5 s (18) 二甲苯（Ⅰ）2 min (19) 二甲苯（Ⅱ）2 min (20) 二甲苯（Ⅲ）2 min (21) 中性树胶封固
* 冷冻切片HE染色步骤： （1）冰冻切片固定10～30 s （2）水洗1～2 s （3）苏木精液染色（60℃）30～60 s （4）流水洗去苏木精液5～10 s （5）1%盐酸乙醇1～3 s （6）稍水洗1～2 s （7）促蓝液返蓝 （8）流水冲洗15～30 s （9）0.5%曙红液染色30～60 s （10）蒸馏水洗1～2 s （11）80%乙醇1～2 s （12）95%乙醇1～2 s （13）无水乙醇1～2 s （14）石炭酸二甲苯2～3 s （15）二甲苯（Ⅰ）2～3 s （16）二甲苯（Ⅱ）2～3 s （17）中性树胶封固。 H-E染色评定标准： （1）切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕；（2）染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。
陈述句——肯定句陈述句——否定句 I，We I，We You You have + 名词. don’t have + 名词. They They 名词复数名词复数 一般疑问句肯定回答 I，we I，we you you Do have + 名词? Yes, do. they they 名词复数名词复数 否定回答句中含有is/am/are一般疑问句变法： I，we 1、将is/am/are前提至句首，并大写 you 首字母。 No, don’t. 2、如陈述句中有I或We,变成一般疑问 they 句后要变成为You。My变成为Your。 名词复数3、将句尾“.”变成为“？” 例：My brother is tall.1、Is my brother tall.2、Isyour brother tall.3、Is your brother tall?完成
陈述句——肯定句陈述句——否定句 He He She She has + 名词. doesn’t have + 名词. It It 名词单数名词单数 一般疑问句肯定回答 he he she she Does have + 名词？ Yes, does. it it 名词单数名词单数 否定回答 He “对划线部分提问”四步骤解题法： She 1、变—将原陈述句变成一般疑问句No, doesn’t. 2、选—根据划线部分选出正确疑问词。 It 3、连—将2句+1句？ 名词单数4、去—将3句中划线部分去掉。 例：The apples are in the box.1、变—Are the apples in the box?2、选—选定Where3、连—Where are the apples in the box?4、去—去掉inthe box 完成Where are the apples?