常见霉菌的代表属
（一）根霉（Rhizopus)
分类：与毛霉同属接合菌纲毛霉目。
分布:分布于土壤、空气中，常见于淀粉食品上，可引起霉腐变质和水果、蔬菜的腐烂。
形态特征：
很多特征与毛霉相似，菌丝也为白色、无隔多核的单细胞真菌，多呈絮状。——与毛霉主要区别在于根霉有假根和匍匐枝，与假根相对处向上生出孢囊梗。孢子囊梗与囊轴相连处有囊托，无囊领。
繁殖：无性繁殖产孢囊孢子，有性繁殖产生接合孢子。根霉的孢子囊和孢囊孢子多为黑色或褐色，有的颜色较浅。
代表种：米根霉（R.oryzae)
黑根霉(R.nigrican)等。
应用：①根霉能产生一些酶类，如淀粉酶、果胶酶、脂肪酶等，是生产这些酶类的菌种。在酿酒工业上常用做糖化菌。
②有些根霉还能产生乳酸、延胡索酸等有机酸。③有的也可用于甾体转化。
（二）毛霉（Mucor)
分类地位
分布
形态特征
繁殖方式
代表种—总状毛霉、高大毛霉、
鲁氏毛霉、梨形毛霉
应用
在分类系统中属于接合菌纲、毛霉目。
分布:广泛分布于土壤、空气中，也常见于水果、蔬菜、各类淀粉食物、谷物上，引起霉腐变质。
形态特征：菌丝发达、繁密；白色无隔多核，为单细胞真菌。
形态特征：毛霉的孢子囊梗有单生的，也有分枝的。
分枝有单轴、假轴两种类型。
毛霉的菌丝多为白色，孢子囊黑色或褐色，孢子囊孢子大部分无色或浅兰色，因种而异。繁殖：可形成孢囊孢子、厚垣孢子、接合孢子。
无性繁殖：
孢子囊梗直接从菌丝体上发出，单生或分枝，顶端产生膨大的孢子囊，孢子囊为球形，囊壁上常有针状的草酸钙结晶。在囊轴与孢子囊梗相连处无囊托，但孢子囊壁破裂时，留有残迹—囊领。
经济价值：蛋白酶、淀粉酶、
有机酸、甾体转化
毛霉的应用：
能产生蛋白酶，具有很强的蛋白质分解能力，多用于制作腐乳、豆豉。
有的可产生淀粉酶，把淀粉转化为糖。在工业上常用作糖化菌或生产淀粉酶。
有些毛霉还能产生柠檬酸、草酸等有机酸，有的也可用于甾体转化。
（三）曲霉(Aspergillus)
分类地位
分布
形态特征
繁殖方式
代表种
应用
分类：多数属于子囊菌亚门，少数属于半知菌亚门。
分布：广泛分布于土壤、空气和谷物上，可引起食物、谷物和果蔬的霉腐变质，有的可产生致癌性的黄曲霉毒素。
.形态特征：
菌丝发达多分枝，有隔多核，分生孢子梗由特化了的厚壁而膨大的菌丝细胞——（foot cell 足细胞）上垂直生出；分生孢子头状如“菊花”。
曲霉的菌丝、孢子常呈现各种颜色，黑、棕、绿、黄、橙、褐等，菌种不同，颜色各异。繁殖：无性繁殖产分生孢子；大多数有性阶段不明，归为半知菌类。少数种可形成子囊孢子，归为子囊菌亚门。---大多数为无性世代产分生孢子；少数种可形成子囊孢子。
代表种：黑曲霉(Asp . Niger）、黄曲霉(Asp.flavus)
应用：①是制酱、酿酒、制醋的主要菌种。
②是生产酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、果胶酶）的菌种。
③生产有机酸（如柠檬酸、葡萄糖酸等）
④农业上用作生产糖化饲料的菌种。
危害：黄曲霉毒素（aflatoxin):一种肝毒素，毒性为二甲基亚硝胺的75倍。有十几种，均含一个糠酸呋喃的基本结构和一个氧杂奈邻酮的结构。
（四）青霉（Penicillum):
分类地位
分布
形态特征
繁殖方式
代表种
应用
分类：多数属于子囊菌亚门，少数属于半知菌亚门。
分布：广泛分布于土壤、空气、粮食和水果上，可引起病害或霉腐变质
形态特征：与曲霉类似。但无足细胞，分生孢子梗从基丝或气丝上生出，有横隔，顶端生有扫帚状的分生孢子头。
形态特征：与曲霉类似，菌丝也是由有隔多核的多细胞构成。但青霉无足细胞，分生孢子梗从基内菌丝或气生菌丝上生出，有横隔，顶端生有扫帚状的分生孢子头。分生孢子多呈蓝绿色。扫帚枝有单轮、双轮和多轮，对称或不对称。
繁殖：无性繁殖产分生孢子；大多数有性阶段不明，归为半知菌类。少数种可形成子囊孢子，归为子囊菌亚门。
代表种：产黄青霉(Pen.chrysogenum) 桔青霉（Pen.citrinum) 展青霉(Pen.patulum)
应用：是生产抗生素的重要菌种，如产黄青霉和点青霉都能生产青霉素。
生产有机酸，如葡萄糖酸、柠檬酸
危害：霉变、疾病
实验五霉菌的形态观察、微生物的测微与计数 一．实验目的 1.学习并掌握观察霉菌形态的基本方法，初步了解霉菌的形态特征及鉴别依据。 2.学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。 3.了解血球计数板的构造和使用方法。学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。 4.总结并掌握细菌、放线菌和霉菌的鉴别方法。 二、实验原理 1. 霉菌定义及用途 ?霉菌不是真菌分类中的名词，而是丝状真菌的统称。 ?霉菌在自然界中广泛分布，与食品的关系密切，是人类在实践活动中最早利用的一 种微生物，如早期进行的酱和酱油的制作等。 ?霉菌也可以使食品发生腐败变质或产生毒素，影响人体健康甚至危及生命。 2.霉菌特征 ?霉菌可产生分支的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化 产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。 ?菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。 ?霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗的多（约3-10um)，常是细菌菌体宽 度的几倍至几十倍。因此，用低倍镜即可观察。 3.霉菌的菌落 ?松：由于霉菌的菌丝较粗较长，菌丝体疏松，因而形成的菌落也比较疏松，呈绒毛 状、棉絮状或蜘蛛网状； ?大：菌落形态较大，一般比细菌和放线菌的菌落大几倍到几十倍，有时会长满整个 培养皿； ?干：外观干燥，不透明； ?挑：菌落与培养基间的连接紧密，不易挑取； ?颜色：由于基内菌丝、气生菌丝、孢子颜色不同，不同的霉菌菌落表面呈现不同的 颜色，菌落正反面、边缘与中心颜色常不一致。 同一种霉菌在不同的培养基上或不同的培养条件下所形成的菌落特征可能有所不同。但同一种霉菌在相同的培养条件下和培养基上所形成的菌落特征相对稳定。菌落特征是霉菌鉴定的重要依据之一。 4、霉菌的菌丝形态 ?构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。菌丝的宽度一般为3-10μm，比放线菌菌丝宽 很多倍，其菌可伸长并产生分枝。 许多分枝的菌丝相互交织在一起，称为菌丝体。
1.菌种特点： 米曲霉( 属于真菌菌落生长快，10d直径达5~6cm，质地疏松，初白色、黄色，后变为褐色至淡绿褐色。背面无色。分生孢子头放射状，一直径150~300μm，也有少数为疏松柱状。分生孢子梗2mm左右。近顶囊处直径可达12~25μm，壁薄，粗糙。顶囊近球形或烧瓶形，通常40~50μm。上覆小梗，小梗一般为单层，12~15μm，偶尔有双层，也有单、双层小梗同时存在于一个顶囊上。分生孢子幼时洋梨形或卵圆形，长大后多变为球形或近球形，一般μm，粗糙或近于光滑。（半知菌亚门丝孢钢丝孢目从梗孢科曲霉属真菌中的一个常见种）。菌落生长较快，质地疏松。初呈白色、黄色，后转黄褐色至淡绿褐色，背面无色，分布甚广，主要在粮食、发酵食品、腐败有机物和土壤等处。是我国传统酿造食品酱和酱油的生产菌种。也可生产淀粉酶、蛋白酶、果胶酶和曲酸等。会引起粮食等工农业产品霉变。米曲霉(Aspergillus oryzae)具有丰富的蛋白酶系,能产生酸性、中性和碱性蛋白酶,其稳定性高,能耐受较高的温度,广泛地应用于食品、医药及饲料等工业中。米曲霉也是美国食品与药物管理局和美国饲料公司协会1989年公布的40余种安全微生物菌种之一。 米曲霉 米曲霉是一类产的，除产蛋白酶外，还可产淀粉酶、、、等。在淀粉酶的作用下，将原料中的直链、支链降解为糊精及各种低分子糖类，如、等；在蛋白酶的作用下，将不易消化的大分子蛋白质降解为、及各种，而且可以使辅料中、等难吸收的物质，提高营养价值、保健功效和消化率，广泛应用于、、生产曲酸、等发酵工业，并已被安全地应用了1000多年。米曲霉是理想的生产不能表达的真核生物活性蛋白的。米曲霉所包含的信息可以用来寻找最适合米曲霉发酵的条件，这将有助于提高食品酿造业的生产效率和产品质量。米曲霉基因组的破译，也为研究由曲霉属真菌引起的曲霉病
霉菌的形态观察实验 一．实验目的 1．掌握配制合成马铃薯培养基（PDA）的一般方法。 2．学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。 3．了解并掌握四类霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青霉）的基本形态特征。 二．实验原理 1．霉菌 霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。 观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本节课用载玻片培养观察法。 2．载玻片培养法（小培养法） 用无菌操作将培养基琼脂薄层小块（约1cm2）置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。 三．实验器材 1．菌种：曲霉 ( Aspergillus sp. ) ，青霉（Penicillium sp.），根霉( Rhizopus sp. ) 和毛霉（Mucor sp. ）培养 2-5d 的斜面 培养物。 2. 培养基：马铃薯培养基（PDA） 3. 仪器或其他用具：超净台，无菌吸管，接种环，酒精灯，平皿，载玻片， 盖玻片， U 型玻棒，解剖刀，镊子， 50% 乙醇， 20% 的甘油，滤纸片，以及显微镜等。 四．实验步骤 载玻片培养观察法（小培养法） 1．培养小室的准备及灭菌 在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一 U 形玻棒，其上放一块洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖、包扎后于 110 ℃ 灭菌 20-30min ，不烘干，备用。 2．琼脂块的制作 取已灭菌的马铃薯培养基（PDA）无菌操作注入两个已灭菌平皿中，使之凝固成薄层。用解剖刀切成 0.5-1cm2的琼脂块，并用镊子将其移 至上述培养小室中的载玻片上（每片放两块 )。 3．接种
山东大学实验报告2017年11月6日 ________________________________________ _________________________科目：微生物学实验题目：霉菌的培养及形态观察姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。 2.了解四类常见霉菌的基本形态特征。 二、基本原理 霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗的多（约为3-10μm），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍镜即可观察。观察霉菌的形态有多种方法，常用的有下列三种： 1. 直接制片观察法：是将培养物置于乳酸石碳酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。用此染色制成的霉菌制片的特点是：细胞不变形；具有防腐作用，不易干燥，能保持较长时间；能防止孢子飞散；染色的蓝色能增强反差。必要时，还可用树胶封固，制成永久标本长期保存。 2．载玻片培养观察法：用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌就在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期培养物。 3．玻璃纸培养观察法：玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将霉菌接种于玻璃纸上，经培养，霉菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。这种方法既能保持霉菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。
常见种类介绍 据统计，己知的霉菌毒素有300多种，常见的毒素有： 黄曲霉毒素（Aflatoxin）玉米赤霉烯酮/F2毒素（ZEN/ZON, Zearalenone） 赭曲毒素（Ochratoxin）T2毒素（Trichothecenes） 呕吐毒素/脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON，deoxynivalenol） 伏马毒素/烟曲霉毒素（Fumonisins，包括伏马毒素B1、B2、B3）黄曲霉毒素（Aflatoxin） 特征：1.主要由黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生。 2.由约20种结构相似的化学物质组成，其中以B1、B2、G1、G2及M1最为重要。 3.国家法规规定饲料中这种毒素的含量不得超过20ppb. 4.敏感性：猪>牛>鸭>鹅>鸡 黄曲霉素对猪的影响： 1.采食量降低或拒食。 2.生长迟滞，饲料报酬变差。 3.免疫功能降低。 4.造成肠道及肾脏出血。 5.肝胆肿大、受损和癌变。 6.影响生殖系统，胚胎坏死，胎儿畸形，盆血。 7.母猪泌乳量下降。乳汁中因含有黄曲霉毒素，从而对哺乳小猪产生影响。 黄曲霉毒素对家禽的影响： 1.黄曲霉毒素对所有品种的家禽都有影响。 2.导致肠道、皮肤出血。
3.肝胆肿大、受损和癌变。 4.高水平摄入时可导致死亡。 5.生长不良，产蛋性能变差，蛋壳品质恶化，蛋重减轻。 6.抗病能力、抗应激能力和抗挫伤能力降低。 7.影响鸡蛋品质，现已发现在蛋黄中有黄曲霉毒素的代谢产物出现。 8.低水平（低于20ppb）仍可产生不良影响。 黄曲霉毒素对其它动物的影响： 1.降低生长速度和饲料报酬。 2.奶牛产奶量下降，另外黄曲霉毒素可以将黄曲霉毒素M1的形态分泌到牛奶中。 3.可引起犊牛直肠痉挛、脱肛。 4.高水平黄曲霉毒素也可引起成年牛肝脏的损害，抑制免疫功能，导致疾病爆发。 5.致畸、致癌。 6.影响饲料适口性，降低动物免疫力。 玉米赤霉烯酮（ZEN） 特征：1.主要由粉红色镰刀菌产生。 2.主要来源是玉米，热处理不能破坏此毒素。 3.敏感性：猪>>牛、畜类>禽类 危害： 玉米赤霉烯酮是一种具有雌激素类物质活性的毒素，主要危害种用畜禽，其中青年母猪对之最为敏感。 ◆1～5ppm：后备母猪阴部红肿，假发情。 ◆>3ppm: 母猪和后备母猪不发情。 ◆10ppm：保育及育肥猪增重减缓，仔猪脱肛，八字腿。 ◆25ppm：母猪偶发性不孕。
常见霉菌毒素的种类及危害分析 霉菌毒素是一些霉菌在基质上生长繁殖过程中产生的有毒次级代谢产物。霉菌产毒仅限于少数产毒霉菌的部分菌株。不同的霉菌可产生同一种霉菌毒素，而一种霉菌可产生几种霉菌毒素。 霉菌根据生长条件划分为田间霉菌和仓储霉菌两种。田间霉菌是指镰孢菌属、青霉菌属和麦角菌属等野外菌株，这类霉菌通常是谷物在生长过程中就已感染。仓储霉菌主要是指饲料或原料在储存过程中产生的霉菌，以曲霉菌属为主。 黄曲霉毒素 黄曲霉毒素主要是曲霉菌产生的，其他曲菌、放线菌、镰孢霉菌和青霉菌也能产生黄曲霉毒素。所有动物均对黄曲霉毒素敏感，不过不同动物的敏感性差异较大。在家畜中以仔猪最为敏感。低浓度的黄曲霉毒素污染导致采食量下降、饲料转化率降低和引起机体的免疫抑制。母猪饲喂黄曲霉毒素污染严重的饲料，毒素会通过母乳传播而造成仔猪生长迟缓甚至死亡。此外，黄曲霉毒素还会干扰肝脏的解毒功能以及损害免疫系统。 赭曲霉毒素 赭曲霉毒素是由赭曲霉菌等所产生的一种毒素，分为A、B两种类型。赭曲霉毒素A的毒性较大，主要侵害猪的肾脏和肝脏。赭曲霉毒素可以造成猪的精神沉郁，食欲减退，体重下降，消化功能紊乱，肠炎，甚至腹泻，脱水多尿，伴随蛋白尿和糖尿。妊娠母畜子宫黏膜出血，往往发生流产。中毒后的病理变化以肾脏为主，可见肾脏肥大，呈灰白色，表面凹凸不平，有小泡，肾实质坏死，肾皮质间隙细胞纤维化;近曲小管功能退化，肾小管通透性变差，浓缩能力下降。 呕吐毒素 呕吐毒素属于单端孢霉烯族化合物，主要由禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌等镰刀菌产生。其危害主要是造成猪只的呕吐，同时降低采食量。呕吐毒素也属于一种很强的免疫抑制剂，它在猪体内可以抑制蛋白质的合成，对快速生长的组织(如皮肤和黏膜)和免疫器官均可产生影响，降低猪群的抵抗力。 玉米赤霉烯酮 玉米赤霉烯酮(F2毒素)由禾谷镰孢霉菌产生，是具有类似雌激素作用的霉菌毒素，临床症状因感染剂量和年龄不同而异。玉米赤霉烯酮对猪影响最大的部位是生殖系统。较低的浓度会诱发女性化现象，较高浓度会干扰排卵、受孕、植入及胚胎的发育。可造成后备母猪或小母猪出现假发情和阴道脱垂或脱肛。该毒素会造成怀孕母猪的流产和死胎、初生仔猪出现八字腿及外阴部肿胀。 T-2毒素
霉菌的形态观察 一、【实验目的】 1、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法 2、了解四类常见霉菌（曲霉、毛霉、青霉、根霉）的基本形态特征 二、【实验原理】 1、霉菌 霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3~10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。 2、观察方法 观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。 3、载玻片培养观察法（小室培养法） 用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。 三、【实验器材】 1、菌种：曲霉 ( Aspergillus sp. ) ，青霉，根霉 ( Rhizopus sp. ) ，毛霉（ Mucor sp. ），培养 7d 的马铃薯琼脂平板培养物 2、培养基：马铃薯培养基（简称PDA）（配方见附表） 3、仪器或其他用具：平皿，载玻片，盖玻片，无菌吸管，U 型玻棒，解剖刀，镊子， 50%乙醇，20%甘油，显微镜，接种环，酒精灯等 四、【操作步骤】 1、载玻片培养观察法（小室培养法） （1）、培养小室的灭菌：在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一Ｕ形 玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，包 扎后于110℃灭菌20~30分钟，烘干备用。 （2）、琼脂薄片的制作：取已灭菌的马铃薯琼脂培养基各6~7ml 注入另两个灭菌 平皿中，使之凝固成薄层。通过无菌操作，用解剖刀将其 切成 1cmx1cm的琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻 片上（每片放两块 )。 （3）、接种：通过无菌操作，用接种环从斜面培养物上挑取很少量的孢子，接种
食品卫生微生物学检验标准-4789 名称 ?12/08GB 4789.9-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌检验 ?12/08GB 4789.11-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验 ?12/08GB 4789.14-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验 ?12/13GB 4789.7-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验 ?12/13GB 4789.26-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验商业无菌检验 ?12/13GB 4789.28-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求 ?12/13GB 4789.31-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验 ?12/13GB 4789.39-2013 食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数 ?06/12GB 4789.38-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数 ?06/12GB 4789.34-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌的鉴定 ?06/12GB 4789.13-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验 ?06/12GB 4789.5-2012 食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验 ?06/11现行有效的4789系列食品微生物学检验标准汇编（2012年7月更新） ?04/23食品安全国家标准食品微生物学检验标准汇编 GB4789系列（2010版，已根据卫生部2010年5月26日的勘误公告进行更新） ?04/22GB 4789.40-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验 ?04/22GB 4789.35-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验 ?04/22GB 4789.30-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验 ?04/22GB 4789.18-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验乳与乳制品检验 ?04/22GB 4789.15-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数 ?04/22GB 4789.10-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 ?04/22GB 4789.4-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验 ?04/22GB 4789.3-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数 ?04/22GB 4789.2-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定 ?04/22GB 4789.1-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验总则 ?03/19GB/T 4789.39-2008 食品卫生微生物学检验粪大肠菌群计数 ?03/19GB/T 4789.38-2008 食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数 ?03/19GB/T 4789.34-2008 食品卫生微生物学检验双歧杆菌检验 ?03/19GB/T 4789.30-2008 食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验 ?03/19GB/T 4789.27-2008 食品卫生微生物学检验鲜乳中抗生素残留检验 ?03/19GB/T 4789.10-2008 食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 ?03/19GB/T 4789.9-2008 食品卫生微生物学检验空肠弯曲菌检验 ?03/19GB/T 4789.8-2008 食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验 ?03/19GB/T 4789.2-2008 食品卫生微生物学检验菌落总数测定 ?03/19GB/T 4789.1-2008 食品卫生微生物学检验总则 ?09/28GB/T 4789.36-2008 食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌O157：H7/NM检验 ?09/28GB/T 4789.4-2008 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验
曲霉菌的鉴定与应用 发表时间：2010-07-15T14:38:22.890Z 来源：《中外健康文摘》2010年第10期供稿作者：柴淼潘宇罗晓慧袁国明[导读] 这种营养菌丝与组织结合非常牢固，因此在留取标本时，一定要嘱咐病人要用力咳痰并要咳到带盖的容器中。柴淼潘宇罗晓慧袁国明（黑龙江省哈尔滨市第一医院黑龙江哈尔滨 150000） 【中图分类号】R563 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)10-0046-02 曲霉菌以腐物寄生的形式广泛存在于自然界中，为条件致病菌。引起人类感染的约20多种，常见的有8种。烟曲霉菌、黄曲霉菌是引起肺曲霉病最重要的两个菌种。近几年，由于广谱抗生素的广泛使用及联合使用是造成肺曲霉病的重要原因之一。特别是2008年以来，肺曲霉病的发病率突然在全国范围内迅速上升。临床上治疗时机的延误是造成死亡的主要原因。对于曲霉病的诊断，找到病原体为金标准。检验科微生物工作者如何配合临床应对这种突如其来的事件，迅速制定和建立实验室的快速检测方法成为当务之急。多年培养出的应急意识及工作经验，使我们在短时间内迅速制定出了曲霉菌实验室快速鉴定的最有效、最可靠的检测方法。 1 方法 1.1标本留取真菌的菌丝分为两种：一种为气中菌丝，另一种叫营养菌丝。这种营养菌丝与组织结合非常牢固，因此在留取标本时，一定要嘱咐病人要用力咳痰并要咳到带盖的容器中。 1.2培养曲霉菌的培养一般接种在沙保弱培养基中，但实践经验告诉我们，接种在血平板中最好。因为在血平板中培养18～24小时后生长出的菌落会产生特殊的颜色，它是鉴别曲霉菌的重要特征之一。如，曲霉菌的菌落为灰绿色，黄曲霉菌的菌落呈棕黄色，菌落的背面还可见到皱褶。 1.3涂片由于营养菌丝与组织粘膜结合牢固，直接留取痰液涂片检查很难查到。即使找到了也只是一些子囊及壳细胞，而被误认为是酵母菌。这也是造成临床治疗延误的重要原因，因此涂片检查应在培养后进行，挑取菌落时一定是刮取而不是沾取，染色后应先用低倍镜找视野（即蒲公英花样结构），再换油镜观察。各种曲霉菌有它特有的形态特点。 正确留取标本是曲霉菌能够检出的前提条件，培养选择血平板是24小时内出现典型曲霉菌菌落的保障，镜下查到完整曲霉菌结构是一步鉴定到种的关键。掌握了这三个方面，实验室查到病原体就有了可靠的依据。 2 结论 为什么肺曲霉菌病比以往以8倍的速度上升，最重要的原因就是抗生素的广泛使用和联合应用后细菌，甚至是正常菌群被抑制或杀死使真菌得以生长繁殖导致菌群失调，造成真菌感染。许多抗生素对人体中的白细胞有抑制和杀灭作用。中性粒细胞可组织曲霉菌菌丝的形成，单核细胞则主要影响分生孢子，中性粒细胞和吞噬细胞功能的降低及数量的减少，加大了曲霉菌感染的风险。曲霉菌的检测以找到病原体为金标准，美国国家免疫变态感染疾病学提供IPA诊断标准是组织病理学检查检到曲霉菌菌丝。侵袭性操作，如：纤支镜、经皮肺穿、开胸手术等方法，所取组织培养阳性。国内目前实验室对曲霉菌检测的标准没有报道，临床发表文章普遍认为曲霉菌的分离难度大，培养时间长（需一周）。PCR检测为曲霉菌的最佳选择，实际上这种方法是不值得提倡的，其原因是曲霉菌广泛分布在自然界中，空气中也存在。实验室不是在真空中，假阳性不可避免。PCR对曲霉菌基因片段的扩增加大了对环境污染的危险性。由于过去IPA的诊断较晚，治疗困难，病死率极高，未经治疗几乎100%死亡，仅部分免疫损害因素消除的患者可以存活。在肝脏、骨髓移植和严重的白细胞减少的患者中，至临床出现症状到死亡一般仅10～14天，故治疗成功的关键在于早期诊断，尽早应用合理的抗真菌药物。 作为微生物室工作者，今后的工作会更复杂、更艰难，应对更艰巨的挑战是我们应该承担的责任和义务。
黑曲霉详细说明 产品英文名称：Aspergillu s niger CAS编 号： 6826- 42-2 别名： 山东黑曲霉孢子粉|培养物载体销售|发酵菌种厂家|高孢 子数菌种供应商|饲料发酵菌种报价 分子式：c11h1204 EINECS 编号： 6826- 42-2 有效物质 含量： 75 % 品牌：康丰源产品规 格： 500克 执行标 准： QS9001：2008 黑曲霉孢子粉 一、黑曲霉在发酵饲料方面的应用： 《2014年饲料添加剂目录》有关于黑曲霉可以直接添加使用的决定。 1、黑曲霉能够提高发酵后饲料的营养水平和消化吸收率。本品所含的微生物能分解饲料中的大分子糖类为单糖和寡糖,并生成多种有机酸、维生素、生物酶、未知生长因子，大大提高了发酵饲料的营养水平和消化吸收率； 2、使饲料脱毒。通过微生物自身的生命活动，使饲料内所含的有毒有害物质被降解而脱除，从而大大提高了饲料的安全性； 3、提高动物的抗病力。本品所含的微生物直接参与动物肠道的屏障作用，补充动物肠道有益微生物的数量，通过生物竞争机制阻止病原微生物的定植和生长繁殖.恢复和维护动物肠道的微生态平衡，从而提高动物的免疫力和抗病能力； 4、提高饲料的适口性，显著增加食欲。在饲料中添加本产品可以提高饲料利用率、提高动物的生产性能，降低生产成本，改善养殖环境。 黑曲霉在发酵剂方面还能发酵能量饲料、蛋白饲料、粗饲料等所有种类饲料。发酵的饲料既适用于猪、牛、羊等家畜动物，又适用于鸡、鸭、鹅等家禽动物，而且适用于鱼虾水产、黄粉虫昆虫等各种动物。发酵饲料能使饲料解毒脱毒，大大提高饲料的安全性，而且在发酵的过程中会产生淡淡的香味，从而增加了动物的适口性；发酵过程中还能生成多种有机酸、维生素、生物酶、氨基酸及其他多种未知生长因子，大大提高了发酵饲料的营养水平和消化利用率；提高动物的抵抗力，降低饲料成本。 二、黑曲霉孢子粉使用说明： 《2014年饲料添加剂目录》有关于黑曲霉可以直接添加使用的决定。 产品优势：1.孢子含量高，便于产品的存放 2.产品有效菌对环境的适应性强 3.孢子的发酵再生能力高 产品用途：1.用于生物肥料秸秆腐熟剂等发酵时添加； 2.用于复合微生物肥料接种剂； 3.用于禽畜的粪便、有机垃圾发酵剂； 4.用于动物饲料发酵时添加； 产品配方：麦片、豆皮、微量元素、纯种米曲霉/黑曲霉菌株等。 使用量：万分之三到万分之五，即每吨加300克——500克 （根据实际菌孢子量和生产工艺的要求添加）。
【实验题目】 放线菌的形态观察 【实验目的】 1、掌握放线菌观察方法—插片法 2、了解放线菌的基本形态 【实验器材】 1、菌种： 青色链霉菌、弗氏链霉菌 2、培养基： 灭菌的高氏Ⅰ号琼脂培养基 3、仪器和用具： 显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种环、镊子、培养皿等 【实验原理】 1．高氏I号培养基 高氏I号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如高氏I号培养基中，需要加入FeSO4。 2．放线菌 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基内菌丝而无气生菌丝。在显微镜下直接观察时，气生菌丝在上层、基内菌丝在下层，且气生菌丝较暗，基内菌丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
图1：链霉菌一般形态和构造（模式图） 1-直形，交叉分枝 2-丛生，波曲 3-顶端形成大螺旋 4-松螺旋 5,6-紧螺旋 7-短而直，轮生 图2：链霉菌属孢子丝的主要类型 3．插片法 将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 1-盖玻片 2-琼脂层 图3 【实验内容及步骤】 1、高氏I号培养基的制备（100ml） 1)根据配方按照一定比例称取可溶性溶粉、及其他成分溶解。 2)待将所有药品溶解后，补充水分到所需的总体积，进行pH调节到7.2～7.4 3)材料灭菌：将所配溶液装在三角烧瓶中并加棉塞，棉塞外包一层牛皮纸，并用麻绳捆好，
WOIRD格式 1.菌种特点： 米曲霉(Asp.oryzae)属于真菌菌落生长快，10d直径达5~6cm，质地疏松，初白色、黄色， 后变为褐色至淡绿褐色。背面无色。分生孢子头放射状，一直径150~300μm，也有少数为 疏松柱状。分生孢子梗2mm左右。近顶囊处直径可达12~25μm，壁薄，粗糙。顶囊近球 形或烧瓶形，通常40~50μm。上覆小梗，小梗一般为单层，12~15μm，偶尔有双层，也 有单、双层小梗同时存在于一个顶囊上。分生孢子幼时洋梨形或卵圆形，长大后多变为球形 或近球形，一般4.5μm，粗糙或近于光滑。（半知菌亚门丝孢钢丝孢目从梗孢科曲霉属真 菌中的一个常见种）。菌落生长较快，质地疏松。初呈白色、黄色，后转黄褐色至淡绿褐色， 背面无色，分布甚广，主要在粮食、发酵食品、腐败有机物和土壤等处。是我国传统酿造食 品酱和酱油的生产菌种。也可生产淀粉酶、蛋白酶、果胶酶和曲酸等。会引起粮食等工农业 产品霉变。米曲霉(Aspergillusoryzae)具有丰富的蛋白酶系,能产生酸性、中性和碱性蛋白酶, 其稳定性高,能耐受较高的温度,广泛地应用于食品、医药及饲料等工业中。米曲霉也是美国食品与药物管理局和美国饲料公司协会1989年公布的40余种安全微生物菌种之一。 米曲霉 米曲霉是一类产复合酶的菌株，除产蛋白酶外，还可产淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、 植酸酶等。在淀粉酶的作用下，将原料中的直链、支链淀粉降解为糊精及各种低分子 糖类，如麦芽糖、葡萄糖等；在蛋白酶的作用下，将不易消化的大分子蛋白质降解为 蛋白胨、多肽及各种氨基酸，而且可以使辅料中粗纤维、植酸等难吸收的物质降解， 提高营养价值、保健功效和消化率，广泛应用于食品、饲料、生产曲酸、酿酒等发酵 工业，并已被安全地应用了1000多年。米曲霉是理想的生产大肠杆菌不能表达的真 核生物活性蛋白的载体。米曲霉基因组所包含的信息可以用来寻找最适合米曲霉发酵 专业资料整理
产毒真菌的检测方法 产毒真菌大部分属于曲霉菌、青霉菌属和镰刀菌属中的一些种，这些霉菌在自然界分布广泛，对储粮、动物饲料和食品侵染的机会较多，通过检测这些霉菌和毒素反映食品的安全性。 1、材料和试剂 （1）、器材：温箱（25—28℃）、目镜测微尺、物镜测微尺、显微镜、超净工作台、放大镜、三角瓶、试管、平皿、酒精灯、载物玻片、盖玻片等。 （2）、培养基和试剂：察氏培养基、马铃薯一葡萄糖琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基、玉米粉琼脂培养基、灭菌蒸馏水、乙醇。 2、方法 （1）、采样采取有代表性的样品250—500g，尽快检验。 （2）、表面除杂菌如为粮粒样品，取样品10—20，放入灭菌的150ml三角瓶中，无菌条件下加入无菌水超过样面1—2cm左右，塞好塞子充分振摇1—2min；将水倒净后，再加水振荡，反复洗涤10次，弃去水后。将粮粒倒于无菌平皿中备用；原粮样品应先用75%酒精浸泡1—2min，脱去粮粒表面蜡质，倾去酒精后，再用上法洗涤，备用。 （3）、接种与培养：用无菌镊子将已处理好的粮粒胚部向下，均匀地插种在高渗察氏平板上（粮粒的一部分插入培养基中）、，小粒样品如大米接种10粒/皿，大粒的样品如玉米、大豆等接种5粒/皿，每份样品须接种100粒。将种有样品的平皿置25—28℃孵箱培养5—7d，培养后期应每天观察菌落生长情况，以免生长较快的霉菌将其他的菌覆盖，影响观察及检验结果。（4）、计数：记录100粒粮食中长霉菌的数量，同时记录每一粒所生长的霉菌数，计算霉菌侵染的粒数和菌落生长的总数。在计数时，只计数与粮粒相连接的菌落。 （5）、镜检与初分离：用接种钩在平皿上钩取一小块稍带少许培养基的培养物，放在已滴加1—2滴乳酸苯酚液的载玻片上，再用两支接种钩轻轻地将培养物分开，然后盖上盖玻片，先在低倍镜下找到培养物。再将显微镜的聚光器位置降低，光圈调小，转至高倍镜下观察。如为曲霉属可见典型的分生孢子头；青霉属的真菌镜下可见有鉴别意义的帚状枝；而镰刀菌属可见镰刀状的大分生孢子等。将它们分别转种于相应的鉴别培养基平板和斜面，25—28℃孵箱培养5 中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。
实验五霉菌形态及菌落特征的观察 一、目的要求 1.掌握观察霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征。 2.掌握常用的霉菌制片方法 二、基本原理 霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片其特点是：(a)细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；(c)溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。 霉菌自然生长状态下的形态，常用载玻片观察，此法是接种霉菌孢子于载玻片上的适宜培养基上，培养后用显微镜观察。此外，为了得到清晰、完整、保持自然状态的霉菌形态还可利用玻璃纸透析培养法进行观察。此法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取一小片，贴放在载玻片上用显微镜观察。 三、器材 曲霉（Aspergillussp．），青霉（Penicillium sp．），根霉（Rhizopus sp．），毛霉（Mucor sp．）； 乳酸石炭酸棉蓝染色液，20％甘油，查氏培养基平板，马铃薯培养基；无菌吸管，载玻片，盖玻片，U形棒，解剖刀，玻璃纸，滤纸等。 四、操作步骤 1．一般观察法 于洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝置染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。 2．载玻片观察法 (1)将略小于培养皿底内径的滤纸放入皿内，再放上U形玻棒，其上放一洁净的载玻片，然后将二个盖玻片分别斜立在载玻片的两端，盖上皿盖，把数套（根据需要而定）如此装置的培养皿叠起，包扎好，用1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟或干热灭菌，备用。 (2)将6—7ml灭菌的马铃薯葡萄糖培养基倒入直径为9cm的灭菌平皿中，待凝固后，用无菌解剖刀切成0．5—1cm2的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的培养皿内的载玻片上，每片上放置2块。 (3)用灭菌的尖细接种针或装有柄的缝衣针，取（肉眼方能看见的）一点霉菌孢子，轻轻点在琼脂块的边缘上，用无菌镊子夹着立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上，再盖上皿盖。
《食品微生物学》实验教学大纲 课程名称食品微生物学 课程编码1002527032 课程类别专业课 所属学科预防医学（食品卫生） 实验总学时40 开课学期春季 开课单位流行病教研室 一．制定实验教学大纲的依据 依据郑州粮食学院教材《食品微生物学》教学大纲自编。 二．本课程实验教学在人材培养实验能力中的地位和作用 本课程实验教学可使学生掌握食品中微生物的各项检测技术，是应用性较强的重要的实验课程。通过实验课的学习，可使学生为将来所从事的食品卫生检测和食品卫生监督奠定牢固的基础。 三．本课程实验教学应达到的基本要求 ⒈掌握常用培养基配制技术，了解各种消毒灭菌方法。 ⒉掌握食品中细菌活菌计数方法及原则。 ⒊掌握食品卫生指标菌检测技术。 ⒋熟悉各种食品检样的采样方法。 ⒌掌握食品检样中致病菌或条件致病菌的检测方法。 四．学时、教学文件及教学形式 学时总学时80学时，实验教学40学时，实验教学占总学时的50%。 教学文件郑州粮食学院主编《食品微生物学》教材自编实习指导。实验报告学生自拟 教学形式验证性实验 五．实验成绩评定 实验成绩占本门课程10%，现场考核实际操作能力
六．实验项目、适用专业及学时分配 序号实验项目学时适用专业（食品卫 生方向） 1 食品中（饮料、牛 奶等）菌落总数的测定4 必修 2 食品中（饮料、牛 奶等）大肠菌群的测定6 必修 3 食品中沙门菌的 检验 6 必修 4 食品中副溶血弧 菌的检验 8 必修 5 食品中蜡样芽胞 杆菌的检验 8 必修6 食品中常见产毒 霉菌的检验 8 必修
卫生微生物实验室实验教学项目表 课程名称：食品微生物学 课程编码：1002527032 实验课开课学期：春季学期 开课单位：公共卫生学院流行病学教研室 实验依据：专业自编教学大纲 成绩考核：考试 实验项目的内容及要求：
第十五章其他病原微生物 引起动物发生传染病的病原除了上述介绍的细菌和病毒以外，还有许多其他病原微生物，在这里主要介绍曲霉菌、分支杆菌、牛放线菌、猪痢疾蛇形螺旋体、钩端螺旋体、猪肺炎支原体、鸡败血支原体等。 第一节曲霉菌 曲霉菌主要存在于稻草、秸秆、谷壳、木屑及发霉的饲料中，菌丝及孢子以空气为媒介污染笼舍、墙壁、地面及用具。致病性曲霉菌有多种，常见的有烟曲霉和黄曲霉。 一、烟曲霉 （一）生物学特性烟曲霉（Aspergillus fumigatus）为需氧真菌，室温下能正常生长，最适温度37～40℃。在马铃薯培养基、糖类培养基和血琼脂培养基上都能生长。烟曲霉的菌丝为有隔菌丝，菌丝纵横交错。在固体培养基上生长时，菌丝初期为无色到灰白色。经24～30h开始形成孢子，成熟时孢子逐渐变为浅黄色、草绿色、灰绿色甚至黑色。气生菌丝末端分化出厚壁的足细胞，在足细胞上生出直立的分生孢子梗，梗的顶部膨大形成顶囊，形似倒置的烧瓶。顶囊上长满辐射状排列的小梗，小梗顶端长出成串的球形分生孢子。孢子呈蓝绿色，2.5～3.0μm，分生孢子梗长250～300μm。菌落呈绒毛状，初期为白色、圆形，后期变为暗绿色或黑绿色，菌落边缘仍呈白色，菌落反面无色或带褐色。 曲霉菌孢子抵抗力强，120℃干热1h或煮沸5min才能被杀死，常用消毒剂为5%甲醛、石炭酸、过氧乙酸和含氯消毒剂，曲霉菌在消毒剂中一般经1～3h 才能死亡。 （二）致病性烟曲霉的孢子广泛存在于空气、水和土壤中，极易在潮湿垫草和饲料中繁殖，同时产生毒素。烟曲霉孢子导致家畜发病较少。孢子和菌丝进入家禽腔性器官并增殖，常造成器官机械性堵塞，加之毒素的作用，常表现为曲霉菌性肺炎，尤其是幼禽敏感性极高。潮湿环境下，曲霉孢子穿过蛋壳进入蛋内，不仅引起蛋品变质，而且在孵化期间造成死胚，或者雏鸡发生急性曲霉菌性肺炎。 （三）微生物学诊断烟曲霉的检查主要根据菌丝及孢子形态而确定。 取病禽肺、气囊或腹腔上肉眼可见的小结节，尽量剪碎，置载玻片上，加10%～20%氢氧化钾溶液1～2滴，加盖玻片镜检，可见短的分支状有隔菌丝，直径4～6μm，长可达300μm。据此可做出初步诊断。经过病原分离才能确诊。分离培养时，取肝脏、肺脏、禽类气囊等组织，接种于马铃薯培养基上，37℃下培养3d，可见菌丝生长，根据繁殖菌丝末端是否膨大，分生孢子的形态大小及排列特征加以确诊。 （四）防治主要措施是加强饲养管理，保持禽舍通风干燥，不让垫草发霉，不用发霉的饲料和垫料。环境及用具保持清洁，发病时可使用制霉菌素。 二、黄曲霉 （一）生物学特性黄曲霉（Aspergillus flavus）的生物学特性和培养特征与烟曲霉相似，菌丝形态和孢子排列特征也与烟曲霉相似，但分生孢子梗壁厚而
实验一微生物形态观察 一、实验目的 1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用； 2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构； 3．练习手绘微生物图片。 二、实验原理 1．细菌基本形态 细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多的。螺旋菌分为弧菌和螺菌。 除此之外，还有一些特殊形态的细菌。 2．细菌特殊结构 细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状体，与细菌吸附或性结合有关。芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。 3．真菌的结构特征 菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。比如吸器、假根、子实体。 4．放线菌的结构特征 放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。不久，大部分气生菌丝成熟，分化成孢子丝，并通过横隔分裂方式，产生成串的分生孢子。 5．微生物菌落 菌落是在固体培养基上（内）以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态和构造等特征的子细胞集团。细菌的菌落有其自己的特征，一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易调取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等。不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映。 三、实验器材
微生物学实验报告 题目：霉菌的形态观察 姓名：学号：年级班级：组别： 同组者：时间： 【实验器材】 1．菌种 曲霉( Aspergillus sp. ) ，青霉，根霉( Rhizopus sp. ) 和毛霉（Mucor sp. ）培养2~5d 的马铃薯琼脂平板培养物。 2．培养基 马铃薯培养基（简称PDA） 3．仪器或其他用具 无菌吸管，平皿，载玻片，盖玻片，U型玻棒，解剖刀，镊子，50%乙醇，20%的甘油以及显微镜等。 【目的要求】 1．学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。 2．了解四类常见霉菌的基本形态特征。 【基本原理】 霉菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝组成，其菌丝比细菌及放线菌粗几倍到几十倍。可以采取直接制片和透明胶带法观察，也可以采取载玻片培养观察法，通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。 【操作步骤】 1．培养小室的灭菌 在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一U形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖、包扎后于110℃灭菌20~30min，烘干备用。2．琼脂块制备 通过无菌操作，用解剖刀由马铃薯琼脂薄层平板上切下1cm2左右的琼脂块，将其移至培养小室的载玻片上，每片两块。 3．接种 通过无菌操作，用接种针从黑曲霉或黑根霉马铃薯琼脂平板培养物中挑取很少量孢子，接种于小室中琼脂块边缘上，将盖玻片覆盖在琼脂块上。 4．培养 通过无菌操作，在培养小室中圆滤纸片上加3~5mL灭菌的20%甘油（用于保持湿度），盖上皿盖，于28℃培养7天。 5．镜检 取出载玻片用低倍镜和高倍镜镜检。 【实验结果】
山东大学实验报告
年
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姓名 科目
系年级 题目 霉菌的形态观察
学号 同组者：
组别
霉菌的形态观察
一. 实验目的 1．掌握配制马铃薯培养基（PDA）的一般方法。 2．学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。 3．了解并掌握四类霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青霉）的基本形态。 二.实验原理 1.霉菌 霉菌是可产生复杂分枝的菌丝体，其菌丝分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝 生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是 繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3～10μ m ） ，常是 细菌菌体宽度的几倍至几十倍， 因此， 用低倍显微镜即可观察。 本实验采用毛霉、 青霉，曲霉，根霉四种常见的霉菌作为菌种进行观察。 2.小室培养法 观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法 和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法） 。 用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上， 沿琼脂边缘接种后盖上盖玻片 培养， 霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定 时间后， 将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然 生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。 三．实验器材 1.菌种 曲霉（Aspergillus sp.） ，青霉（Penicillium sp.） ，毛霉（ Mucor sp. ） 和根霉（Rhizopus sp.）培养 48h 的马铃薯琼脂（PDA）斜面培养物。 2.培养基及试剂 马铃薯琼脂（PDA） ，20%甘油（无菌） ，乙醇。 3.仪器及其它用品 无菌操作台，解剖刀，镊子，无菌吸管，U 型玻璃棒，普通光学显微镜，擦镜 纸，绸布，酒精灯，载玻片，接种针，培养皿等。 四．操作步骤 1. 培养基的配制 按附录所示配方称取 PDA 各组分，先将马铃薯去皮，切成小块称取 20g 煮沸