基因工程制药
姓名：惠霞
学号：2011506024
班级：2011级生技1
班
基因工程制药
一．基因工程制药常用的工具酶：
基因工程的重要特点之—是在体外实行DNA分子的切割和重新连接。例如要取得所需药物之目的基因并要将此特定目的基因与载体DNA连接在—起，在很大程度上要依赖于某些工具酶。
(一) 限制酶(Restriction enzymes)
限制酶即限制性核酸切酶的简称，是一类专一性很强的核酸切酶。与一般的DNA水解酶不同之处在于它们对碱基作用的专一性上及对磷酸二酯键的断裂方式上具有一些特殊的性质。限制酶的种类
Ⅰ型酶：早期提取的酶类，是一类复杂的多功能酶，在基因工程上的应用价值不大。
Ⅱ型酶：相对分子质量较小，为20000～100000，是简单的单功能酶，作用时无需辅助因子或只需Mg2＋。能识别双链DNA上特异的核苷酸序列，底物作用的专一性强，而且其识别序列与切断序列相一致。这类酶对基因工程中的生化操作特别重要。
(二) DNA聚合酶(DNA polymerase)
DNA聚合酶是能够催化DNA复制和修复DNA分子损伤的一类酶，这类酶作用时大多数需要DNA模板并且优先作用于DNA模板，也可作用于RNA模板，但效率较低。
1．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ
2. 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片断Klenow 片断
3. T4噬菌体DNA聚合酶
4. 经修饰的T7噬菌体DNA聚合酶（测序酶）
5. T aqDNA聚合酶及AmpiTaqTMDNA聚合酶
6. 反转录酶
（三）DNA连接酶（DNA ligase）：能将两段DNA拼接起来的酶。
1. T4噬菌体DNA连接酶：催化DNA的5'羟基之间形成磷酸二酯键。
2. 大肠杆菌DNA连接酶：用途较窄，不常用。
（四）基因工程中常用的其他酶
1. 末端脱氧核苷酸转移酶（末端转移酶或TDT酶）
2. T4噬菌体多核苷酸酶
3. 核酸酶（Nuclease）
4. 碱性磷酸酯酶（Alkaline phosphodiesterase）：能催化去除单链或双链DNA和RNA 分子中的5' 磷酸基（脱磷酸作用）。分为细菌碱性磷酸酯酶（BAP），牛小肠碱性磷酸酯酶（CIP）。
二．基因工程制药中常用的克隆载体
载体：能在细胞进行自我复制的DNA分子就是外源DNA片段（基因）的运载体（Vector）,又可称为分子载体或无性繁殖载体。基因工程制药中常用的目的基因克隆载体主要有：质粒、λ噬菌体、M13噬菌体和粘粒。
（一）质粒
1.质粒（Plasmid）是一些存在于微生物细胞染色体外的闭合环状双链的小型DNA分子，是能进行独立复制并保持恒定遗传的辅助性遗传单位。
2 常用的几种质粒载体
（1）pBR322及其衍生载体
pBR322 最早构建成功的较理想载体，分子质量2.6×106u，4.36kb，属松弛型复制，含有两个抗性基因（Tetr和Ampr），已确定32个限制酶切割位点的相对位置。BamH I
等10个切点位于Tetr基因，Pst I 等6个切点位于Ampr基因组，EcoR I位点位于这两个基因之间，有利于检出重组转化子。
PAT153载体：用限制酶Hae Ⅱ进行部分消化pBR322后再重新连接而获得，是不能被带动的较小质粒载体（3.66kb），拷贝数比pBR322增加1.5～3倍。
pBR327载体：用EcoR Ⅱ部分酶切pBR322，去除非必需区段（位点1442~2502）后构建而成。长仅3.27kb；没有泳动功能；质粒拷贝数增加2～4倍。
(2) pUC系列载体
ⅠpUC18、pUC19质粒载体
含有pBR322的Ampr基因、复制原Ori和M13噬菌体M13mp系列载体所用的LacZ基因，在Lac区有独特的限制酶识别位点组成的多聚接头顺序（即多克隆位点），这两个载体不同之处在于多克隆位点以互为相反的方向排列。pUC质粒缺乏与控制拷贝数有关的mop基因，故这些质粒复制的拷贝数要比带有pMB1(或ColE1)复制起点的质粒高的多。pUC18/19载体能表达LacZ基因产物（β－半乳糖苷酶）的氨基端片段，在相应的宿主（Lac-）中可出现α互补。
ⅡpUC118、pUC119质粒载体
ⅢpUC的衍生质粒载体：pSP64、pSP65、pGEM-3Z、pGEM-3Zf(-)、pGEM-4、pGEM-4Z 等。
（二）λ噬菌体
1 常用的λ噬菌体载体
（1）Charon系列载体
为克隆DNA大片段而设计的替换型载体。代表性载体有：Charon4A、pCharon21A(早期)、Charon32～35和Charon40等。
（2）EMBL系列载体
克隆大片段基因组DNA的替换型载体。最常用的是EMBL3、EMBL4和EMBL3A，这些载体多克隆位点上的BamH I位点两侧分别有EcoR I和Sal I位点，EMBL3和EMBL3A含有对称的两个多酶位点聚合接头序列（Sal I-BamH I-EcoR I），以便于Sal I、Xho I（都是↓TGGA）、BamH I、MboＩ、Bgl Ⅱ、Xho I (都是↓GATC)和EcoR I等7种限制酶切点外源DNA片段的克隆。EMBL4的多聚接头区的限制性切酶位点顺序刚好与EMBL3颠倒。（3）λgt系列载体
插入型系列载体，包括λgt10、pλgt11和λgt18～23等系列载体。
λgt载体是专门为在其免疫区（imm434）单一的EcoR I位点上克隆小的cDNA片段（约6kb）而设计的。λgt10为43.3kb，在它的阻遏基因CI中有唯一的EcoR I位点，外源cDNA 片段（<7.6kb）插入此处时，使CI基因失活，形成了重组的CI－噬菌体，噬菌斑为清亮斑，可与非重组的CI－噬菌斑所产生的阴暗噬菌斑相区别。
λgt11载体是一个常用的，可用于免疫学筛选的载体。具有可表达性，为43.7kb，在它的LacZ基因末端（位于终止密码上游53bp处），有唯一的EcoR I 位点，可用于插入外源DNA片段。
λgt18、λgt19是λgt的衍生载体，其LacZ的EcoR I位点插入了一个含Sal I、Sac I、Xba I和EcoR I位点的多克隆位点，但只有EcoR I和Sal I是单一酶切点，cDNA片段可插入LacZ单一的EcoR I或Sal I位点。
（三）M13噬菌体
1 M13噬菌体的基本特性
M13噬菌体的基因组为环状单链DNA分子，由6407个核苷酸组成，有8个基因。M13是雄性专一性的，即只吸附于带有F质粒的雄性大肠杆菌（F＋）的性纤毛上而引起感染的。
受M13感染的细胞不被裂解破坏，在平板上不形成空斑而是形成缓慢生长的慢性感染细胞圈。
2 常用的M13噬菌体载体
M13mp18和M13mp19，这两个载体在LacZ区的多克隆位点中都含有13个不同的酶切位点（只是在多克隆位点的方向上有所不同），可供插入由多种各不相同的限制酶切割而成的DNA片段。
（四）粘粒（Cosmid）
1 粘粒：是一种有λ噬菌体粘性末端的杂种质粒，由λDNAcos区与质粒DNA重组构建而成。它是为克隆和增殖基因组DNA的大区段而设计的，是组建真核生物基因文库及从多种生物中分离基因的有效手段。粘粒大小一般为4~7kb。
最简单的粘粒是一些经过改造的质粒，它们带有一个拷贝的cosDNA序列（将DNA包装的λ噬菌体颗粒中所必需的序列），携有一个复制起点（通常是ColE1复制起点）和一个抗药性标记（通常是Ampr）
（五）哺乳动物细胞载体系统（用于转染哺乳动物细胞的载体，有两类）不带真核复制子的质粒型载体：在原核质粒中插入一个完整的哺乳动物细胞转录单位和一个选择标记基因而组成的简单载体系统。这类载体在转染哺乳动物培养细胞之前要在细菌中进行扩增，而在转染后则整合到细胞基因组中并在基因组调控下低水平地表达相应的蛋白质。如pTK2、、pHyg和pRSVneo等。
带有真核病毒调控序列元件的质粒表达载体。如：SV40载体、牛乳头瘤病毒（BPV）载体和人类疱疹病毒（EBV）载体。
三．连接方法
1、粘性末端DNA片段的连接:
DNA分子的体外连接（重组）是指外源DNA片段和载体DNA分子在体外通过DNA连接酶共价连接。具有粘性末端DNA片段的连接比较容易，也比较常用。选用一种对载体DNA 只具唯一限制点的限制酶，进行位点特异的切割，形成全长的具粘性末端的线性DNA分子。再将外源DNA大片段也用同种限制酶切割，产生同样的粘性末端。最后用T4噬菌体DNA 连接酶能很容易地将载体与外源目的基因连接起来。
2、平头末端DNA片段的连接:
平头末端DNA片段的连接除了直接用T4连接酶连接外，还可以先用末端核苷酸转移酶给平头末端DNA分子加上同聚物尾巴之后，再用DNA连接酶进行连接。现在常用的平头末端DNA片段连接法有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。
同聚物加尾法：同聚物加尾是指在相互连接的两类DNA分子中，其中一类的3'末端加上一段聚脱氧腺苷（polyA），另一类的3'末端加上一段聚脱氧胸苷（polyT），然后二者混合，在T4DNA连接酶作用下连接成环状分子。
衔接物连接法：衔接物是指用化学方法合成的一段由10~12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平头末端的双链寡聚核苷酸片段。将衔接物的5'末段和待克隆的DNA 片段的5'末端用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后通过T4 DNA连接酶使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具有衔接物的DNA分子和克隆载体分子，结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。随后按常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。
3.人工接头连接法：
人工接头是指人工合成的含有限制酶识别顺序的核苷酸片段。将具有平头末端的外源DNA 片段与人工接头分子在T4 DNA连接酶的作用下连接起来。再用限制酶切割产生具有粘性
末端的DNA片段，然后与具有同样粘性末端的载体DNA分子在T4 DNA连接酶作用下连接成重组体。
四．目的基因的获取
目的基因的获取方法有三种：
1、从基因文库中获取需要构建基因文库，构建的方法：
（1）构建基因组文库：直接分离法
（2）构建部分基因文库如cDNA文库：逆转录法
2、PCR扩增是针对目的基因序列未知的情况，可采用PCR扩增。
3、人工合成其实有两种：
（1）逆转录法；
（2）化学方法人工合成；针对目的基因序列已知且较小的情况。
五．转化方法
⑴、微生物：感受态细胞法
①、感受态细胞：指细菌细胞经过Ca2 处理后，细胞壁透性增强，能够吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
②、过程：Ca2 处理细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子。
⑵、植物细胞：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法
①、农杆菌：土壤微生物，易感染双子叶植物和裸子植物；对大多数单子叶植物没有感染力。
②、Ti质粒的T_DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体DNA上。
③、过程：目的基因插入T_DNA，T_DNA进入农杆菌，将农杆菌导入植物细胞。
岗位职责与工作流 程
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备注：兹收到财务部岗位职责说明，本人明白制度的详细内容，并谨此声明，本人保证按制度职责执行。
该岗位员工签字：核签人（部门负责人）： 日期：日期： 备注：兹收到财务部岗位职责说明，本人明白制度的详细内容，
并谨此声明，本人保证按制度职责执行。 该岗位员工签字：核签人（部门负责人）：日期：日期：
营销部销售管理制度及 主要工作流程 文件审批页 文件名：营销管理制度及主要工作流程
营销部销售组组织结构图........................................ 第二部分销售组职责及质量目标 .................................. 一、销售组职责................................................ 二、销售组质量目标............................................ 第三部分销售组各岗位职责 ...................................... 一、销售助理岗位说明.......................................... 二、销售代表岗位说明.......................................... 第四部分销售部管理办法........................................ 一、行为规范.................................................. 二、礼貌用语.................................................. 三、接听电话.................................................. 四、考勤制度.................................................. 五、例会...................................................... 六、销售合同管理制度.......................................... 七、客户归属及佣金分配原则 .................................... 八、销售基金的管理............................................ 九、销售代表奖惩制度.......................................... 十、认购及销控管理条例........................................ 十一、售中、售后服务金分配办法(起草草案) ...................... 第一部分部门组织机构图 营销部销售组组织结构图
基因工程基本过程 基因工程（genetic engineering），也叫基因操作、遗传工程，或重组体DNA 技术。它是一项将生物的某个基因通过基因载体运送到另一种生物的活性细胞中，并使之无性繁殖（称之为"克隆"）和行使正常功能（称之为"表达"），从而创造生物新品种或新物种的遗传学技术。一般说来，基因工程是专指用生物化学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工合成的DNA片段）与载体系统（病毒、细菌质粒或噬菌体）的DNA 结合成一个复制子。这样形成的杂合分子可以在复制子所在的宿主生物或细胞中复制，继而通过转化或转染宿主细胞、生长和筛选转化子，无性繁殖使之成为克隆。然后直接利用转化子，或者将克隆的分子自转化子分离后再导入适当的表达体系，使重组基因在细胞内表达，产生特定的基因产物。 常用的工具酶 限制性内切酶—主要用于DNA分子的特异切割 DNA甲基化酶—用于DNA分子的甲基化 核酸连接酶—用于DNA和RNA的连接 核酸聚合酶—用于DNA和RNA的合成 核酸酶—用于DNA和RNA的非特异性切割 核酸末端修饰酶—用于DNA和RNA的末端修饰 其它酶类--用于生物细胞的破壁、转化、核酸纯化、检测等。 主要过程有为四步： 一．获得目的基因 有多种方法可获得目得基因 1.构建cDNA文库分离目的基因 过程： （1）从真核细胞中提取mRNA，以其为模板，在反转录酶的作用下合成cDNA的第一条链。 （2）以第一条链为模板，以反转录酶或DNA聚合酶Ｉ作用下合成cDNA的第二条链。 （3）在甲基化酶作用下使cDNA甲基化。
（4）接头或衔接子连接。 （5）凝胶过滤分离cDNA。 （6）通过核酸探针法或免疫反应法从cDNA文库中分离特异cDNA克隆。 2.人工化学合成法 适于已知的核苷酸序列且校小的ＤＮＡ片断合成，常用方法有磷酸二酯法、磷酸三酯法、亚磷酸三酯法、固相合成法、自动化合成法等。 过程：先用以上方法合成基因DNA不同部位的两条链的寡核苷短片段，再退火成为两端形成粘性末端的DNA双链片段。然后将这些DNA片段按正确的次序进行退火连接起来形较长的ＤＮＡ片段，再用连接酶连接成完整的基因。 3.利用PCR技术直接扩增目的基因 PCR（Polymerase Chain Reaction）法，又称为聚合酶链反应或PCR扩增技术，已知待扩增目的基因或DNA片段两侧的序列，根据该序列化学合成聚合反应必需的双引物，类似于DNA的天然复制过程，用ＰＣＲ法进行扩增，特异地合成目的cDNA链，用于重组、克隆。 二．载体的选择与制备 1.载体的选择（以质粒为例） ⑴载体必须是复制子。 ⑵具有合适的筛选标记，便于重组子的筛选。 ⑶具备多克隆位点（MCS），便于外源基因插入。 ⑷自身分子量较小，拷贝数高。 ⑸在宿主细胞内稳定性高。 (6)应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别 (7)应具有阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录。 (8)应具有很强的终止子，以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，而不转录其他无关的基因，且所产生的mRNA较为稳定。 (9)所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号。 2.制备有多种分离质粒的方法，如碱裂解法、煮沸裂解法、层析柱过滤法等。 目前一般使用碱变性法制备质粒DNA。这个方法主要包括培养收集细菌菌体，裂解细胞，将质粒DNA与染色体DNA分开及除去蛋白质和RNA。
第2节基因工程及其应用 孝义三中高一生物组张文 一、教材内容分析 基因工程是现代四大生物工程之一。《基因工程及其应用》是人教版高中生物必修2第6章第2节内容。本节内容主要包括三个方面，分两课时讲授。第1课时简要介绍“基因工程的原理”，第2课时介绍“基因工程的应用”及“转基因生物和转基因食品安全性”。本节内容是对前面所学育种内容的补充，是即贴近生活又远离生活的微观内容。由于在选修3中还有基因工程的介绍，因此本节的要求相对简单一些。 二、学情分析 对于基因操作的工具和基本步骤，内容抽象和复杂，学生接触少，会出现掌握不好，甚至理解错误的情况。虽然经过必修1的学习，学生的生物基础知识较扎实，思维的目的性、连续性和逻辑性已初步建立。但基因工程一节对学生来说难点较多，如果处理不好，会变成简单的死记硬背。因此在教学过程中，尽量通过生活化打比喻的方式和模型建构活动及采用多媒体动画形象化教学，并在教师引导下适时加强学生解决问题和运用图解等生物学语言归纳结论等方面的能力。切记不可讲的太多。 三、教学目标 1、简述基因工程的基本概念； 2、简述基因工程的基本工具； 3、简述基因工程的基本操作步骤； 4、通过基因工程的简介，鼓励学生积极探索新知和科学创新，树立一分为二的辩证唯物主义思想； 四、教学重点、难点分析 教学重点：基因工程的基本原理（概念、工具、操作步骤） 教学难点：基因工程的基本原理 五、教学思路 本节课主要解决如下几个问题：1）什么是基因工程？2）基因工程的主要原理是什么？3）基因工程的操作过程如何？4）基因工程有哪些方面的应用？如何看待转基因食品？由于本节内容和前面的育种内容联系比较紧密，因此可以让学生回顾前面几种育种方法的成果，再通过情景展现传统育种方法所不能达到的地方，进而引出基因工程，通过列举生活中的转基因成果让学生知道基因工程就在我们身边。而后通过与学生们所熟知的器官移植做对比，让学生理解基因工程的本质和操作过程。通过对转基因食品的讨论让学生树立辩证唯物主义观念。 六．教学策略及教学媒体 根据激趣原则，通过展示色彩绚丽的转基因生物图片入手，引出基因工程的概念，采取“引导—互动—探究”模式，即采用师生互动探究式教学，借助老师生活化打比喻和多媒体动画并安排学生制作模型活动从而使抽象的课程内容具体化，直观化和形象化。 七、教学设计流程图第1课时“基因工程的原理”
项目负责人项目实施过程需要承担的主要工作内容及责任 项目负责人是施工项目的总负责人和总调度，负责项目从施工准备到竣工验收到审计对账的整个过程，同时应该承担起整个项目的进度、质量、安全、成本等全部责任。从项目角度讲，公司领导只是项目负责人的后勤，为项目负责人提供资源保障。 项目负责人的首要责任是在控制项目成本的前提下，安全无事故的保质、如期完成施工任务。为规范项目运作，特梳理以下流程，项目负责人在项目实施的各阶段，应做好如下工作： 一、施工准备阶段： 1、合同签订后，项目负责人需会同公司郑总等勘察现场，核对图纸及清单，提出疑问，准备并参与图纸会审； 2、熟悉图纸、清单及合同要求，与公司签订项目责任书及安全生产责任书； 3、现场施工环境分析，根据合同工期排定《施工进度计划表》 4、根据进度计划（和羊总、郑总对接后）、排定《劳动用工计划表》以及《主要材料进场计划表》，备注：此阶段需要完成的表单有：《图纸会审纪要》、《项目目标责任书》、《安全生产责任书》、《施工进度计划表》、《劳动用工计划表》、《主要材料进场计划表》等。 二、施工阶段： 1、施工进场准备：?接水接电（临水、临电），办公场所设置； ?工班安排（公司配合），与工班签订协议； 2、组织项目施工，统筹人、材、机等各项资源，建立与维护好监理、业主关系，组织项目施工： ?施工器械进场、材料采购下单； ?安全防护工具的配备；
?开工资料（《开工报告》、《材料进场报验》）等施工资料的跟进； ?按进度计划表组织施工，安排每天的施工任务，统筹协调各个工班，做好工种施工衔接；零星材料的采购； ?施工过程中涉及到项目变更的，在施工时同步跟进《施工联系单》，《签证单》（请预算部门配合），对收到的建设单位的《变更联系单》及其他通知应及时反馈至公司， ?按要求如实填写《施工日志》、《考勤表》，每日通过微信图片上传《施工日志》， ?根据施工进度，关注收款节点，向监理及建设单位提交《工程款申请单》， 3、安全教育、每日工地安全巡检； 4、落实好文明施工工作：材料集中堆放，注重场容场貌的整洁，体现施工现场良好形象； 备注：此阶段需要完成及收集的表单有：《工班协议》、《材料需求单》、《材料、设备进场登记表》、《开工报告》、《材料报验单》、《会议纪要》、《安全教育记录（附签到单）》、《施工日志》、《考勤表》，《分部分项或工序验收记录》《工程款申请单》等。 三、施工扫尾阶段： 1、自检自查（核对图纸及清单，是否完成全部施工任务） 2、资料完善（工程资料、签证资料、竣工图） 3、《竣工报告》，竣工验收。 4、施工成本汇总与分析 备注：此阶段需要完成的表单有：《竣工报告》，《竣工验收单》等； 四、结算及审计对账
护士长职责 一、在总护士长领导和科主任业务指导下，负责本病区的护理管理。根据护理部的工作计划，制订本病区具体计划，并组织实施。 二、负责检查了解本病区的各班次及人员的护理质量，并亲自参加指导危重、大手术及抢救病人的护理技术操作执行情况。 三、随同科主任和主治医师查房，参加科内会诊及大手术或新开展的手术术前、疑难病例、死亡病例讨论。 四、负责对本病区护理人员职业素质、劳动纪律的教育。 五、组织本病区护理查房和护理会诊，积极开展新技术、新业务及护理科研工作。 六、组织护理人员业务学习和技术训练，定期对护士进行考试、考核，不断提高各级护理人员的业务水平。 七、负责本病区护理人员的分工、排班、病房环境、陪护、仪器、设备、药品的管理，做到“五定”，保证病区工作正常运行。 八、负责管理指导实习、进修人员，完成教学计划。 九、严格执行消毒隔离制度，防止院内感染发生。 十、定期召开工休座谈会，了解病人思想、病情、饮食等情况，提出改进措施，研究改进病房管理工作。 十一、及时准确填写护士长手册，接受护理部考核。
责任护士岗位职责 一、接待新病人，进行入院介绍（环境、工作人员、院规），收集资料，在2小时内完成入院评估。按整体护理的护理程序，完成所负责病人各项护理工作。 二、通过交谈，查体，根据病情及治疗方案，做出护理诊断，制定护理计划，8小时内完成首次护理病历记录，根据病情变化随时修改护理计划并实施。 三、及时巡回病房，全面了解病情，按要求及时观察病情变化并记录，及时做好住院评估和疾病知识宣教。 四、严格执行各项护理技术操作常规。发现病情突然变化，及执行医嘱中出现特殊情况，立即报告护士长。 五、依工作需要参加科主任、主治医的查房。负责护理措施的全面落实，了解医嘱及特殊治疗的意图，并观察治疗效果，评价，做好记录。 六、负责出院、转科医嘱落实、出院指导、终末处理。 七、所承提的病室管理及所用护理及具的消毒隔离制度的落实。 八、及时准确完成各种护理记录。 九、指导护理员、清扫员工作，保持所负责病室的整洁、安静、
办公室行政工作流程 办公室主要工作内容： 执行办公设备、公共设施的日常管理和维护； 执行办公用品及日常用品的采购、发放管理； 执行固定资产及低值易耗品的管理； 执行秘书事务、行政日常事务、档案的归档管理； 执行各种费用的控制交纳； 执行后勤管理； 执行上级交办事务等。 具体工作流程 一、执行办公用品及日常用品的采购、发放管理 月末综合办公室要根据其他部门的请购计划及库存情况，并要根据相关规定作适当储备以备不时之需，作好请购计划单经主管审批后，及时保质保量地采购办公用品和日常用品，采购物品应当定价定点，保证质优价廉。要作好物品出入库登记，每月盘存，确保帐物相符。 二、执行固定资产及低值易耗品的管理 对于公司所有的固定资产以及低值易耗品，需要建立台帐清单，监督各部门于每月25日进行盘点，办公室会根据各部门盘点情况进行抽查，核对帐物是否相符，然后根据各部门盘点状况及调动增加状况制作《固定资产、低耗品清单》报表发放各部门；每季度组织财务部对各部门进行全面盘点，核对帐物。
对需要报废的资产按照相关程序申请报废，及时跟进各部门资产调动、出入库单据的核对，做到帐物相符。对于资产管理不当、帐物不符，应进行相应处罚。 综合办公室负责根据维修要求协调或外请技术人员维修、对维修全过程进行控制；各部门对维修质量监督、确认。 所有维修要求做好记录、跟踪维护结果及完成状态；对未按要求完成的维修事项、及时了解情况并报告负责人。 四、执行文件档案的归档管理 根据不同种类档案的特点，做好系统编目、使用/传阅控制、分类存放、排列有序，定期收集各类文件资料，并整理立卷归档。 各部门往来的备忘录、文档、资料等按类别、内容、时间顺序等存档管理。 六、文件资料收发、传真管理 各类文件资料收发、传真均需在登记薄上作好详细登记、记录，及时将各类信息（通知、文件）进行上传下达，特别是各类客户信息应登记后及时传递给相关部门； 七、执行各种费用的支付、控制 按时申请、交纳、控制公司各项费用，例如：车辆养路费、车船税等；并将所要交纳的各项费用进行审核记录，对各项资金审批单归类管理。做到资金审批的及时、准确，以确保各职能部门工作的正常开展。
基因工程制药 姓名：惠霞 学号：2011506024 班级：2011级生技1 班
基因工程制药 一．基因工程制药常用的工具酶： 基因工程的重要特点之—是在体外实行DNA分子的切割和重新连接。例如要取得所需药物之目的基因并要将此特定目的基因与载体DNA连接在—起，在很大程度上要依赖于某些工具酶。 (一) 限制酶(Restriction enzymes) 限制酶即限制性核酸切酶的简称，是一类专一性很强的核酸切酶。与一般的DNA水解酶不同之处在于它们对碱基作用的专一性上及对磷酸二酯键的断裂方式上具有一些特殊的性质。限制酶的种类 Ⅰ型酶：早期提取的酶类，是一类复杂的多功能酶，在基因工程上的应用价值不大。 Ⅱ型酶：相对分子质量较小，为20000～100000，是简单的单功能酶，作用时无需辅助因子或只需Mg2＋。能识别双链DNA上特异的核苷酸序列，底物作用的专一性强，而且其识别序列与切断序列相一致。这类酶对基因工程中的生化操作特别重要。 (二) DNA聚合酶(DNA polymerase) DNA聚合酶是能够催化DNA复制和修复DNA分子损伤的一类酶，这类酶作用时大多数需要DNA模板并且优先作用于DNA模板，也可作用于RNA模板，但效率较低。 1．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 2. 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片断Klenow 片断 3. T4噬菌体DNA聚合酶 4. 经修饰的T7噬菌体DNA聚合酶（测序酶） 5. T aqDNA聚合酶及AmpiTaqTMDNA聚合酶 6. 反转录酶
（三）DNA连接酶（DNA ligase）：能将两段DNA拼接起来的酶。 1. T4噬菌体DNA连接酶：催化DNA的5'羟基之间形成磷酸二酯键。 2. 大肠杆菌DNA连接酶：用途较窄，不常用。 （四）基因工程中常用的其他酶 1. 末端脱氧核苷酸转移酶（末端转移酶或TDT酶） 2. T4噬菌体多核苷酸酶 3. 核酸酶（Nuclease） 4. 碱性磷酸酯酶（Alkaline phosphodiesterase）：能催化去除单链或双链DNA和RNA 分子中的5' 磷酸基（脱磷酸作用）。分为细菌碱性磷酸酯酶（BAP），牛小肠碱性磷酸酯酶（CIP）。 二．基因工程制药中常用的克隆载体 载体：能在细胞进行自我复制的DNA分子就是外源DNA片段（基因）的运载体（Vector）,又可称为分子载体或无性繁殖载体。基因工程制药中常用的目的基因克隆载体主要有：质粒、λ噬菌体、M13噬菌体和粘粒。 （一）质粒 1.质粒（Plasmid）是一些存在于微生物细胞染色体外的闭合环状双链的小型DNA分子，是能进行独立复制并保持恒定遗传的辅助性遗传单位。 2 常用的几种质粒载体 （1）pBR322及其衍生载体 pBR322 最早构建成功的较理想载体，分子质量2.6×106u，4.36kb，属松弛型复制，含有两个抗性基因（Tetr和Ampr），已确定32个限制酶切割位点的相对位置。BamH I
场务岗位职责及工作流程 一、场务工作职责： 1、认真遵守影院的各项管理制度，严格执行场务工作操作流程及标准，服从管理。 2、准时准点播报开场信息，通知观众入场，指引观众到正确的影厅观影。 3、定时按巡查规定巡视影厅，给观众提供良好的观影环境以及观影效果。 4、为贵宾观众提供VIP服务。 5、按要求对影院贵宾进行接待工作。 6、为观众提供力所能及的帮助：如特殊人群帮助、指引卫生间、为中途出入的观众开门及手电照明、提供毛巾被等。 7、引导观众在正确的路线散场。 8、遗失物品的保管和认领工作。 总的来说场务工作是整个服务工作的非常重要的一个环节。观众的进场、散场组织工作、观众在观影过程中的安全保障、舒适程度以及放映质量的监督等都是场务工作的内容。场务员工应确保正确的影片在正确的影厅按照正确的时间放映，同时也要确保观众在入场时、观影时、散场时对影城的设施设备、清洁及所享受到的服务表示满意。 二、工作流程及工作要求 1、早班准备工作 1)9:40着装整齐打卡上班，在值班经理处领取对讲机、钥匙、巡场日志本 等。 2)9:50参加班前会，会后将内容记录于交接本。 3)主检（当班主要检票员）领取当日排片表进行核对并算出散场时间，其 余工作人员领取毛巾被、手电、3D眼镜等开场必备用品并做好相应记录。 4)打扫岗位卫生及整理相关物品，所有准备工作做好后，检查影厅内卫生， 做好相应记录。异常问题需上报。 2、服务过程及要求
提前开启即将开映的影厅灯光，检查厅内清洁卫生等，检查完毕无异常通知检票台播音检票 播音 1、开场前10分钟播音（播音之前确认影厅是否完全准备就绪） “尊敬的观众朋友，早上/下午/晚上好！欢迎光临成都保利万和国际影城， X厅XX：XX（时间）放映的《XX》（影片）现在开始检票，请寄存好您的外带食品并将手机调至静音状态后入场，入场时请出示您的电影票，谢谢您的合作！祝您观影愉快！ 2、遇特殊情况经值班经理同意，可使用广播系统广播寻人启示、失物招领等内 容。 主检台检票 1、您好！欢迎光临！请出示您的电影票！（注意看清楚客人的票所在影厅和时间，日期） 2、双手自然接过票，撕去副券后双手奉还观众。 3、若遇观众出示的影票非检票时间：不好意思，您的票是XX时间的，请先休息一下，到时候我们会播音通知。 4、您的影厅是XX厅，这边请（准确无误的为观众指明相应方向） 5、遇到需要出示证件时，礼貌的说：请出示您的证件。（观众在配合工作后向观众致谢） 6、没有证件的一定要礼貌的请观众补票：对不起，请到票台补票。（如果人员充足时带领到票台补票） 7、若遇手写票或其他涂改过票面的一定要有值班经理签字确认方可检票，无签字确认一律为废票。 8、检票时发现客人携带烧烤以及瓜子等，立即制止。礼貌地向观众示意在休息区食用或寄存在咨询台。（异味食物绝对禁止入厅，其它视情况而处理） 9、对无票儿童确认是否超过1米3的免费线，如超过礼貌地请家长至票台补票后方可入场。（学生票不能带免票儿童，成人一人带一名未到1.3的儿童免票入场，3D影片所有儿童需购票领取眼镜入场） 影厅门口检票：
环境影响评价的工作程序和主要内容 环评工作的开展主要有三个阶段：1、准备阶段；2、正式工作阶段；3、环境影响报告编制阶段。 1．准备阶段环境影响评价第一阶段，主要完成以下工作内容。首先是研究有关文件，包括国家和地方的法律法规、发展规划和环境功能区划、技术导则和相关标准、建设项目依据、可行性研究资料及其他有关技术资料。之后需进行初步的工程分析，明确建设项目的工程组成，根据工艺流程确定排污环节和主要污染物，同时进行建设项目环境影响区的环境现状调查。结合初步工程分析结果和环境现状资料，可以识别建设项目的环境影响因素，筛选主要的环境影响评价因子，明确评价重点。最后确定各单项环境影响评价的范围和评价工作等级。如果是编制环境影响报告书的建设项目，该阶段的主要成果是编制完成环境影响评价大纲，将以上这些工作的内容和成果全部融入其中；如果是编制环境影响报告表的建设项目，无需编制环境影响评价大纲。 2．正式工作阶段环境影响评价第二阶段，主要工作是做进一步的工程分析，进行充分的环境现状调查、监测并开展环境质量现状评价，之后根据污染源强和环境现状资料进行建设项目的环境影响预测，评价建设项目的环境影响，并开展公众意见调查。最重要的，是要根据建设项目的环境影响、法律法规和标准等的要求以及公众的意愿，提出减少环境污染和生态影响的环境管理措施和工程措施。若建设项目需要进行多个厂址的比选，则需要对各个厂址分别进行预测和评价，并从环境保护角度推荐最佳厂址方案；如果对原选厂址得出了否定的结论，则需要对新选厂址重新进行环境影响评价。 3．环境影响报告编制阶段环境影响评价第三阶段是环境影响报告书或报告表的编制阶段，其主要工作是汇总、分析第二阶段工作所得的各种资料、数据，从环境保护的角度确定项目建设的可行性，给出评价结论和提出进一步减缓环境影响的建议，并最终完成环境影响报告书或报告表的编制。
测量监理工程师岗位职责 一、在高级驻地监理工程师的领导下，配合道路监理工程师和结构监理工程师，严格按规范要求的精度监督承包人放线、放样，审查批准承包人测量内外业成果及道路和构造物几何尺寸、标高等； 二、负责检查承包人对水准点及其他控制点的护桩设施保证不受损坏，有变更需在图上说明； 三、承包人进行施工前测量时必须旁站，操作时随时抽查,各项测量记录要认真核对，经签认后，承包人方可绘制施工图;?四、审查承包人的检验申请，经现场检验校核后，如符合规范要求的精度，方能签字认可,否则应将所有不合格部分及时通知有关人员。对承包人施工测量中出现的问题应建议高级驻地监理工程师签发现场通知书； 五、检查路基工程的土石分界线，并督促承包人标绘在横断面图上；?六、协助道路、结构监理工程师审核承包人报送的施工图纸、竣工图纸及工程量的审批工作，配合合同与计量支付监理工程师进行收方丈量,审核计算数据。必要时,要对部分或全部工程进行重新量测；?七、定期督促承包人检查校核使用测量仪器的精度;?八、办理高级驻地监理工程师交办的其它工作。?监理部廉政制度 韩水路项目监理部全体监理人员要认真学习中纪委，交通厅有关
廉政建设的文件,贯彻落实有关公路基础设施建设廉政规定和项目办及驻天定项目纪检组制订的有关廉政建设文件精神，加强廉政建设的监督检查，做到有组织、有安排、有落实、有结果和人员到位，责任到人。 一、廉政建设领导小组,将无条件接受上级主管单位纪委和有关部门及项目纪检组关于廉政建设的监督和审查。 二、廉政建设领导小组有权监督和定期、不定期地检查有关监理人员的廉政建设工作情况，督促落实项目监理部廉政建设目标和责任。 三、领导小组成员必须廉洁自律、秉公办事，不行贿受贿、不徇私舞弊、不弄虚作假,工作态度端正、严肃认真、一丝不苟. 四、领导小组成员对各自负责的工作要进行严格检查,严格按程序办事，督促施工单位严格按照设计及施工规范的要求施工，确保工程质量、安全、环保、费用、进度等五大控制指标的圆满实现.?五、廉政领导小组及全体监理人员，不能接受、索要施工单位的钱物；不能介绍其配偶、子女、亲属在其监理的工程项目和管辖范围内从事材料供应、工程分包、劳务等活动。?六、全体监理人员要秉公办事,不准营私舞弊，不得利用职权和工作之便从事各种个人有偿中介活动和安排个人施工队伍。?七、廉政领导小组及全体监理人员不准宴请、行贿、拉拢、腐蚀上级单位工作人员；不准参加与被监理施工单位有关的各种高档消费和娱乐活动,更不能参加各种非法活动。 八、廉政领导小组及全体监理人员不准隐瞒工程质量、安全事故，如果发生质量和安全事故，要立即上报,接受调查和处理。?九、廉政建设领导小组及全体工作人员要对自己的行为负责，并主动接受群众的监督和上级领导的审查。?十、廉政建设领导小组要把反腐倡廉建设工作放在更突出的位置，要注重预防，坚持综合治理，惩防并举,建立健全教育、制度、监督并重的惩治和预防腐败体系，促进反腐倡廉建设取得新成效。 监理员岗位职责
*******************公司 工作流程编写指南 前言 为规范、科学、务实地撰写公司的流程，特编写《********公司工作流程编写指南》供相关人员参考。本指南主要对工作流程的规范填写做出了指导建议，希望您在填写之前仔细阅读该指引所列出的解释，如仍有疑问，请与人力资源部门或顾问组联系，谢谢！ 深圳清溢和衡管理咨询有限公司顾问组 年月日
目录 一、定义 (3) 二、流程文件的内容 (3) 三、流程设计的原则 (4) 四、流程图内容解释及说明 (5) 五、流程编写格式规范 (8) 六、流程描述注意事项 (11) 七、流程和制度的区别 (11) 八、流程绘制操作步骤 (12)
**********公司工作流程 编写指南 一、定义 1、流程 一个或一系列有规律的活动，这些行动以确定的方式发生或执行，导致特定结果的实现。 2、关键流程 管理过程中涉及项目内容重大，职责划分跨越两个或两个以上部室，管理流程的履行需要部室之间的协调、沟通、配合才能完成的重要性流程。 3、流程管理 指从流程的角度切入，关注流程是否增值，从而形成认识流程、建立流程、运作流程、优化流程的体系，并在此基础上开始一个“再认识流程”的新的循环。同时有着流程描述、流程改进等一系列方法、技术与工具。 二、流程文件的内容 流程要包括对工作事项/活动进行策划的所有内容，既通常定义为：5W1H。 ?5W ——When：实施流程的时机，既启动流程的条件/依据，也称为“输入”； ——Who：规定由“谁”来实施流程； ——What：流程需要完成的工作内容，包括内容的先后顺序和接口要求； ——Where：完成流程规定内容所需的环境和资源； ——Why：流程实施的结果——流程内容目标，也成为“输出”。 ?1H ——How：规定流程中所需完成的各项内容的方法，也成为工作标准。 依据上述对流程内容规范的定义，我们将形成流程的文件内容划分两个部分：流程图部分和工作标准（流程说明文件）部分。
洛阳水利工程局有限公司 施工员工作流程及主要施工内容 一、施工员的定义 水利施工员是基层的技术组织管理人员，是施工现场生产一线的组织者和管理者，在水利施工过程中具有极其重要的地位，是水利施工企业各项组织管理工作在基层的具体实践者，是完成水利工程施工任务的最基层的技术和组织管理人员。 作为一名合格的施工员，从工程刚开始的投标文件编制及中标后的合同签订，到进驻施工现场的施工准备，再到现场过程中的施工生产安排、施工方案及进度计划编制、工程质量管理、工程资料整理、每月计量签证工作等,以及工程完工后的验收及结算一系列贯穿整个工程项目施工阶段的工作内容都要积极的参加进去，要对不同阶段的施工情况了若指掌，针对不同情况，合理安排各项施工任务，有目的性的调配人员、材料、机械，要保证施工现场合理有序的组织实施各项施工任务，按时保质保量的完成合同约定的建设内容。 二、施工员的工作流程 一个工程项目想要按时保质保量的完成合同约定的建设内容，必须有一套成熟的管理办法和正确的工作流程。最为一个施工企业，施工员必然是整个施工过程中的中坚力量，他的工作内容牵扯到工程项目的方方面面，所以说施工员的整个施工流程和工作方法是否合理，对工程的质量、安全、进度起到了至关重要的作用。为了能够更进一步的提高公司施工员的业务能力和工作效率，现根据实际施工中需要
参与的各项工作，编制制订了施工员工作流程。 招投标阶段的文件编制→中标后的合同签订→熟悉图纸、参与图纸会审→编制施工组织设计及各项专项施工方案→参与编制施工进度计划→参与编制人员、材料、机械用量计划→技术交底→施工现场工作安排（人员、机械、材料）→施工质量控制→对各项工作进行检查、分析、纠偏、整改落实→参与施工资料整理→参与工程验收→参与竣工结算的编制→参与工程成本核算。 二、施工员的工作内容 1、招投标阶段 首先在工程的招投标阶段，就需要施工员进行踏勘现场，参加编制投标文件。对于一个由施工员参加报价的标书一旦以后中标，那么施工员作为该项目的管理人员之一，他对该工程的初步有了一个了解，如果报价中存在失误那么可以在工程开工后尽可能进行弥补。 2、合同签订 投标项目中标后，进一步研究施工合同，熟悉签订的各项合同条款，掌握工程承包范围及质量工期目标等，作为以后各项计划制定的目标及计量签证支付的依据。 3、图纸绘审 施工员在接到工程设计图纸后要认真阅读，对工程设计图纸中存在的疑问或存在的问题加以汇总，并在图纸会审时向设计方提出，要求给与明确答复，并出据正规的书面文件。在施工过程中，如发现设
计划经营部岗位职责和工作流程一、岗位职责 二、规律性工作流程
三、事项性工作流程 1、到投标处处长领取相关的招标文件，记录好开标时间。 2、仔细阅读招标文件，将重要信息标记。重要信息包括： （1）项目名称、编号、投标日期、时间、开标地点； （2）投标人资格要求内容(是否符合要求,如注册资金,所需资质、人员、业
绩等)； （3）投标保证金的内容(收款人、地址、帐号、金额、递交方式、递交时间的要求)； （4）投标文件递交的要求要满足(封套要求、标书份数、唱标信封)； （5）评分标准。根据评分标准，确定业绩、人员、奖项等应满足的最低标准要求，据此准备材料； （6）根据部长安排，确定本项目的项目负责人，技术负责人及本次投标活动的授权代表； 3、编制投标文件（按招标文件要求）： 标书内容的制作时间一般只需半天时间。 （1）初稿编制。在编制初稿之前要注意以下几项：a.列出并标注出重点、时间点、开标时间及地点、答疑时间、保证金缴纳时间等。 b.质疑文件（文件的编制、报价、工程量清单等），标书里的内容哪里有不是很明白，有点含糊的，不能明确的，向投标处处长汇报，发给招标代理或是电话询问。 c. 按招标文件要求，到办公室办理借阅手续，提供资料，资质证件、业绩、人员证件等原件。 （2）初稿完善；在开标前3天之前完成初稿，并自审编制完成的投标文件初稿。 （3）定稿(完善)；定稿前最主要的注意的事项。 4、自检投标文件 a.自检出商务报价部分外的投标文件初稿，进一步修改完善。 b.插入报价部分，要注意价格大小写、单价、总价是否一致，进行审核。 c.标书制作完成以后我们一定要互检一遍，特别是开标一览表、保修承诺、质量等级、工期、招标文件对本工程的一些特殊要求等等。 d.打印标书之前，先自检一遍，再经过投标处处长复检内容确认完整正确后，生成目录，目录一般要求生成单独的页码或者没有页码，从正文第一页开始编制页码。打印全文（包括正本、副本、标书包装封面及封条），抽取正本标书浏
施工员的主要工作内容和工作流程 在动态的施工全过程中，结合多变的现场施工条件，施工员的主要任务是将分管的专业工程施工所需的劳动力、材料、机具、采用的施工方法、施工现场环境等生产要素科学地、有序地协调组织起来，在时间上和空间上取得最佳组合，在确保安全、质量、工期、成本目标的前提下，圆满完成施工任务，赢得良好的社会信誉和丰厚的经济效益，其工作内容体现在如下几个方面： 1、施工准备阶段应做好的主要工作： ⑴熟悉施工合同、招标文件、投标文件，了解工程范围、本专业工作量、投标报价的具体情况、施工合同约定的质量、工期要求、工程价款的计取办法、材料设备的供应情况等相关工程经济信息，进行合同风险的识别、策划规避风险的措施。 ⑵熟悉施工图纸和相关技术规范（设计规范、验收规范）、操作规程（分项工程施工工艺标准、建筑安装工程安全操作规程）、技术标准（标准图集、材料设备制作及验收标准）等，参加设计交底，掌握领会设计意图，提出施工图中存在的施工或设计问题，并在图纸会审时提交设计代表修改或补充完善，并形成图纸会审纪要。
⑶编制施工图（标后）预算，确定工程造价，掌握工程具体工作量，为确定劳动力、材料、机具、施工组织设计或编制专项施工方案奠定基础。 ⑷编制施工组织设计或编制专项施工方案，编制安全防护技术措施。 ⑸绘制施工进度网络计划。 ⑹编制施工预算（劳动力计划、材料计划、手段用料计划、施工机具使用计划、安全防护措施用料计划）。 ⑺编写安全技术交底。 ⑻编写技术质量交底或作业指导书。 ⑼根据施工进度网络计划、劳动力需求量计划、材料用量计划、机具使用计划分期分批组织生产要素进场，对进场材料、机具进行检验试验。 ⑽下达施工任务书，对入场工人进行施工图纸和工程内容、工期要求、安全、技术质量、施工方案等进行交底和培训教育考试考核，并对特殊工种操作人员进行验证。 重点做好以下施工交底： a. 施工任务交底：向班组交代清楚工程任务内容、工期要求、关键工序、交叉配合关系等。 b. 安全文明施工交底：针对工程特点进行安全策划、识别危险源，提出有关防护措施和要求，安全操作规程相关要求，明确安全责任。
基因工程的基本内容 基因工程的基本内容一.本周教学内容：基因工程的基本内容二.学习内容：本周学习基因工程的操作过程，指导进行基因工程操作时需要的基本工具：限制酶、连接酶、运载体，了解他们的特点，及其在基因工程中的应用。理解基因工程操作的基本步骤，理解如何提取目的基因，怎样将目的基因导入受体细胞，怎样鉴定试验的成果等等。基因工程的基本内容 一. 本周教学内容： 基因工程的基本内容 二.学习内容： 本周学习基因工程的操作过程，指导进行基因工程操作时需要的基本工具：限制酶、连接酶、运载体，了解他们的特点，及其在基因工程中的应用。理解基因工程操作的基本步骤，理解如何提取目的基因，怎样将目的基因导入受体细胞，怎样鉴定试验的成果等等。了解基因工程对现代社会的贡献及基因工程应用的发展。 三. 学习重点： 1. 基因工程的概念 2. 基因工程的操作工具 3. 运载体的基本条件 4. 基因工程的基本操作步骤
5. 基因工程的应用和发展 四. 学习难点： 1. 基因工程工具：限制酶、运载体 2. 运载体的基本要求 3. 基因工程的操作步骤 4. 如何检测基因操作 5. 基因工程应用的两面性 五. 学习过程： （一）概念：基因工程——又叫基因拼接技术或DNA重组技术。 是指在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 概念要点： 1. 在DNA分子水平上进行设计操作的 2. 在生物体外实现的基因改造 3. 对受体细胞进行无性繁殖 4. 重组基因最终表达获得性状 （二）基因操作的工具 1. 抗虫棉的培育：将抗虫的基因从某种生物（如苏云金芽孢杆菌）中提取出来，“插入”到棉花的细胞中，及棉细胞
岗位职责和工作流 程
副总经理岗位职责 直接上级: 总经理 直接下级: 各部门经理( 财务部除外) 1、在总经理领导下进行工作, 对总经理负责。 2、协助总经理完成经营指标和工作任务。 3、按照分工安排, 负责分管具体业务部门, 对各具体业务部门工作采用量化标准进行考核, 掌握分管部门日常经营管理具体情况。 4、根据总经理提出制订的长远规划和年度计划, 提出合理化建议, 对市场及经营管理方针提出意见, 供总经理参考。 5、制定和完善酒店的各项经营目标、管理章程、经济指标及各项规章制度和职责。 6、协助总经理抓好企业文化和企业文明建设, 督促有关部门开展员工业余文化活动, 增强企业凝聚力。 7、根据总经理的安排, 主持召开每周的业务工作例会, 对业务工作进行协调与检查。 8、负责监管部门的营业费开支和收入, 确保并完成各项有关的预算指标。 9、协助总经理接待重要贵宾, 建立良好的公共关系, 广泛听取和收集宾客的意见, 处理投诉, 不断改进工作。 10、协助总经理协调宾馆各部门之间的关系。 11、协助总经理对各部门主要管理人员进行考核、评估。 12、实行全面的经营管理, 对外代表酒店, 对内任免下属人员。 13、负责来信来访的接待和处理工作, 处理客人致总经理的投诉函。 14、负责审定宾馆各项业务指标和工作计划, 并指导执行。 15、审阅各种有关报表、报告, 及时掌握宾馆的经营情况, 采取有效措施, 积极组织促销, 使出租率和收入达到宾馆计划的要求。16、严格按照服务标准和程序, 对所辖各分部进行控制, 督导其为客人提供优质服务。 17、督导控制所辖部门成本, 防止浪费。 18、深入部门, 听取汇报检查工作情况, 发现问题及时督办。
基因工程的基本过程 基因工程主要包括几个过程： 1、目的基因的制备； 2、选择合适的载体，将目的基因与载体相连接生成重组DNA分子； 3、将重组DNA片段导入受体； 4、选择目的基因； 5、目的基因的表达。 对于整个基因过程来讲，目的基因的获取是关键，它直接涉及到产物，而且还影响到产物的量。很多在基因操作过程中，目的基因是很难获得的，所以通常采取先生成基因文库的方法，然后从基因文库中筛选。如果目的基因的序列以及它的调控等信息很清楚，可以直接通过PCR或cDNA获取，这样就大大减少了选择目的基因的盲目性，可以将整个过程简化为以下步骤： 图10-3-8 基因工程过程
(1)目的基因的分离和制备 目的基因是指准备导入受体细胞内的，以研究或应用为目的所需要的外源基因称目的基因。获得目的基因的方法很多，但也是十分困难的一步。目前获得目的基因有4条途径： 1.从生物基因组群体中分离目的基因 原核生物基因组较小，基因容易定位，用限制性内切酶将基因组切成若干段后，用带有标记的核酸探针，从中选出目的基因。真核生物一般通过基因组文库的方法获得目的基因。 图10-3-1 限制性内切酶
限制性内切酶(restrictive enzyme)是20世纪60年代末在细菌中发现的，能水解DNA分子骨架的磷酸二酯键，使一个完整的DNA分子切成若干段，每一种限制酶，都有自己特定的作用位点，而且切口或切下来的序列，往往是回文结构（palindromes）。例如Eco RI把GAATTC在GA之间切开，形成粘性末端。也有一些限制酶作用的结果产生不含粘性末端的平整末端，如HapI。多在原核生物中存在，能识别4～6个特苷酸特定的碱基序列。限制酶对细菌有保护作用，某些入侵的噬菌体可因DNA链被限制性酶切断而不能在细菌中繁殖，“限制”因此而得名。限制酶不能切开细菌本身的DNA，这是因为细菌DNA的腺嘌呤和胞嘧啶甲基化（-CH3）而受到保护之故。 这样就可以用限制性内切酶把一个基因组DNA分成很多片段，对于原核生物比较小的基因组来说，可以直接用标记地探针来获取在通过特定的方法，对于比较大的基因组，可以先制作基因文库，然后钓取所需要的带有目的基因的片段。 2.人工合成目的基因DNA片段 人工合成目的基因DNA片段有化学合成和酶促合成法两条途径。一般是采用DNA合成仪来合成长度不是很大的DNA片段。 3.PCR反应合成DNA 聚合酶链式反应（PCR)是以DNA变性、复制的某些特性为原理设计的。通过PCR技术获取所需要的特异DNA片段在实际应用用得非常多，但是前提条件是必须对目的基因有一定的了解，需要设计引物。PCR技术的原理如下：