乳制品中黄曲霉毒素M1
样品信息：
分子式：C17H12O7
CAS ：6795-23-9
化学结构：
用途：为1类致癌物,是一种毒性极强的剧毒物质.他的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡。
色谱条件：
仪器：福立高效液相色谱仪(FL2200)；色谱柱：Ultimate XB-C18，250×4.6mm，5um，柱温：30℃；
定量方法：外标法工作站：FL9500工作站
流动相：25%乙腈水；
流速：1.0ml/min；检测器：安捷伦荧光检测器发散波长：435nm 激发波长：365nm 进样量20ul：
样品前处理：
依据GB 5413.37—2010乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定进行实验。
典型谱图和分析结果：
浓度为0.04ppm 的黄曲霉毒素M1标样图
标准曲线图
某乳制品中黄曲霉毒素M1的测定试样图典型配置：
名称规格数量液相色谱仪等度，手动或自动进样器1套
色谱柱反相C18，4.6×250mm，5μm1根
溶剂过滤器全玻璃质，配0.45μm有机和水系过滤膜1套
超声波清洗器功率，100W以上1套
一次性针筒5ml1盒
针式过滤头0.45μm有机和水系过滤各1包乙腈4L，色谱级1瓶
二次蒸馏水可用哇哈哈纯净水替代大量洗耳球1只
容量瓶10ml10个
黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法2/50 ppb 一、样品的准备/萃取 1. 获取具有代表性的样品，使用Romer 系列II型研磨机研磨，使至少95%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。 2. 称取4g 研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。加入20mL 70/30（v/v）甲醇/水萃取溶液并密封广口瓶。注意：样品与萃取溶液比例应为1：5（w:v），振荡或均质3分钟。 3. 静置样品，用滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液。 4. 用提供的分析缓冲液对滤液进行1：2稀释。例如，将50μL待检滤液加入50μL分析缓冲液中，混匀准备进行随后检测。 二、检测步骤 1．将适量的标记颜色的稀释孔条放入微孔板架上，稀释条孔的数目需使每个标准品（0, 2, 5, 20 & 50ppb）或样品能够对应一个稀释孔。 2．将等量的有抗体包被的微孔条放入微孔板架上，未使用的有抗体包被的微孔条需放回装有干燥剂的原铝箔袋内并密封保存。 3．按照240 μL/孔或2 mL/条的体积计算所需的酶联偶合物用量。从绿色瓶盖的瓶中量取所需用量的酶联偶合物至一个酶联偶合物试剂槽中（如多道移液器所用的试剂槽）。使用8道移液枪移取100μL酶联偶合物至每个稀释孔中。 4．使用单道移液枪，移取50μL标准品和样品至已装有100μL酶联偶合物的稀释孔中。用移液枪反复吸送3次以充分混合孔中液体。每当移取一个标准品或样品时，单道移液枪必需更换上新吸头。注意确保最后将吸头中的液体排空。 5．使用换有全新吸头的8道移液枪，快速移取每个稀释孔中的液体各100μL至相应的有抗体包被的微孔中。室温下放置15分钟。注意不要摇动微孔板去混匀孔中液体，以免引起孔与孔之间的污染。 6．将孔中的液体甩入水槽中，用去离子水或蒸馏水冲洗每个孔，然后将微孔中的水
浅谈乳制品的检测方法 摘要：乳制品业成为国民经济中的重要产业之一，乳制品业的发展开始受到世界各国的高度重视。发展中国家尤其是亚洲国家最近几年也把乳制品业的发展作为提高国民民族素质和营养素质、促进经济发展的重要手段来抓。乳制品的安全问题备受重视，所以要对乳制品做好检测。本文归纳总结一些乳制品的检测方法，为以后乳制品检测提供理论基础。 前言 乳制品业发展越来越迅，并且成为国民经济中的重要产业之一。乳品行业的竞争的越来越激烈，国内外各大乳业集团陆续推出了高品味、高质量、高品质的产品，来迎合现在消费者的喜爱。但是，要想生产出符合消费者要求的奶产品并不是一帆风顺的。需要企业对奶制品的很多方面做出改进。使奶制品的生产以质取胜，才能够更好的占领市场，要想很好的占领市场就注重两个方面。一方面注重生产的产品质量，另一方面检验水平也具有重要的作用。审时度势，调动员工的积极性、创造性才能更好的开展各项工作，同时要注重奶制品的质量，提高素质，严格控制奶制品的质量指标，以先进的技术来降低成本，让企业的发展的道路一片光明。下面介绍一些乳制品大检测方法： 一、对乳制品的新鲜度的快速检验 取乳样10毫升放于试管中，将试管置于沸水浴中加热5分钟，之后再进行观察，观察的过程中发现产生了絮状物，就表示被检测的乳已经不是新鲜的了，这时的酸度就大于26T。 二、提高掺伪掺杂的检验办法的速度 用酒精试验来检测，酒精试验即在试管内用等量的中性酒精和牛乳混合（一般用1～2毫升等量混合），当酸度低于18T的时候，振摇的时候不会出现絮片的牛乳，这就可以证明乳是新鲜的，当酸度高于18T的时候，试管中就会出现絮片，实验的结果就表明这样的乳是次鲜或者变质乳，说明在制作过程中已经搀入陈乳。 三、运用多种方法对乳中的掺杂物进行检验 1.牛乳中掺米汤试液变蓝色 取被检牛乳5毫升放入干净的试管之中，煮到微沸，在此过程中要加入数滴碘液（用蒸馏水溶解碘化钾4克，碘2克，移人100毫升容量瓶中，加蒸馏水至刻度制成），这利用了米汤中含有淀粉，并且淀粉在遇碘会变蓝的特性。试管中的液体变成蓝色的话，就说明检测的乳制品中含有米汤。
2015年药典黄曲霉毒素测定法 本法系用高效液相色谱法测定药材及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相，流速0.8mL/min；采用柱后衍生法检测: 光化学衍生法：光化学衍生器（254nm. PriboFast-KRC光化学柱后衍生 器.Pribolab-MDU光化学柱后衍生器）；以荧光检测器检测，激发波长λex =360nm(或365nm)，发射波长λem =450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1.0μg/m L、0.3μg/m L、1.0μg/m L、0.3μg/m L、）0.5mL，置10mL于量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。(Pribolab STD#1082-2 AFT混合标准品：AFT B 1 和AFT G 1：1.0μg/mL，AFT B 2 和AFT G 2 ：0.3μg/mL ） 供试品溶液的制备： 1. 取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入精密加入70%甲醇溶液75mL，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11,000r/min, ? 真菌毒素等物质的高效粉碎、萃取，保证检测结果的准确性和精确度。 粉碎样品在不锈钢杯中通过电机旋转驱动刀同时进行劈裂、碾碎、掺合等过程。使物料搅拌粉碎,转速高达22000以上,全金属机身和不锈钢杯子,抗有机溶剂的腐蚀,可以实现在2-3分钟高效实现真菌毒素的均质、萃取等关键环节。 优点： ●高速震荡3分钟即可完成整个真菌毒素及 其他物质的萃取过程； ●转速两档可调，低速12000r/min， 高速22000r/min； ●全金属机身，不锈钢材质，抗有机溶剂腐蚀； ●可广泛应用于食品检验、科学研究、医学治疗、化工制药等行业； ●本机构造方面均合于无菌操作的要求； ●通过CE认证。 应用:
黄曲霉毒素M1最近算是成大明星了，准备写个黄曲霉毒素M1分析方法总结，和大家一起探讨（持续更新）！ 1、结构及理化性质 不管三七二十一，还是先上个图： 先开个头，吃个饭回来写…… 为什么说黄曲霉毒素M1，都出现在与动物相关的产品中？ 黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1在动物组织内的代谢产物，并能够进入乳汁（牛奶？），因此大家看到的检测黄曲霉毒素M1都是检的“动物组织：如肝肾、乳腺”以及乳及其制品等”。 再来一个黄曲霉毒素B1代谢途径图，黄曲霉毒素B1在体内羟化形成黄曲霉毒素M1（左上，相机不好，照的效果不太好，大家见谅，有空补一个好点的图）。新图如下：
2、黄曲霉毒素M1的相关限量标准 食品中的限量标准以GB 2761—2011为准：规定如下：
注：上述限量的检测方法：婴幼儿配方食品按GB 5009.24 规定的方法测定，乳及乳制品按GB 5413.37（GB 541337-2010 食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定）规定的方法测定。 3、分析方法 黄曲霉毒素M1的分析方法主要包括：薄层色谱法；酶联免疫吸附法，免疫亲和柱净化荧光光度法，液相色谱法，液质联用法等。 3.1 薄层色谱法： GB 5009.24-2010 食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定（用于替代“GB/T 5009.24-2003 食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定”）为薄层色谱法： 适用范围：牛乳及其制品、奶油及新鲜猪组织（肝、肾、血及瘦肉）等食品中黄曲霉毒素M1 与B1 的测定。 原理：样品经提取、浓缩、薄层分离后，黄曲霉毒素M1 与B1 在紫外光（波长365nm）下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。 3.2 酶联免疫吸附法ELISA 适用范围：ELISA适用于乳，乳粉和乳酪中黄曲霉毒素M1含量的测定。 原理：黄曲霉毒素M1偶联物包被在酶标板的小孔中，将含有黄曲霉毒素M1的样品或标准液和抗M1的抗体加入到小孔中，此事固相包被的黄曲霉毒素M1和样品、标准品中游离的黄曲霉毒素M1竞争性地与抗体进行反应。反应完全之后，用稀释过的清洗液洗小孔，将未反应的物质冲掉。再在小孔中加入过氧化物酶，温育后再次清洗，加入底物溶液，温育后产生蓝色，加入停止液，终止颜色反应，颜色变为黄色，用酶标仪在450nm处测定颜色的强度，黄曲霉毒素M1的浓度与颜色强度成反比关系。 3.3 免疫亲和柱净化高效液相色谱法 适用范围：乳，乳粉，低脂乳，脱脂乳，低脂乳粉，脱脂乳；乳粉中的黄曲霉毒素M1的最低检测限大约是0.1μg/kg，乳中的最低检测限大约是0.01μg/kg。 原理：亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，含有黄曲霉毒素M1的样品通过免疫亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1（抗原）结合，形成抗原抗体复合体。用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。HPLC-FLD测定。 3.4 C18，硅胶柱净化高效液相色谱法
1.目的：建立黄曲霉毒素测定法(一部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。 2.依据： 2.1. 《中华人民共和国药典》2010年版一部。 3.范围：适用于所有用黄曲霉毒素测定法(一部)测定的供试品。 4.责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。 5.正文： 5.1. 本法系用高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉 毒素（以黄曲霉毒素B 1、黄曲霉毒素B 2 、黄曲霉毒素G 1 和黄曲霉毒素G 2 总量计）， 除另有规定外，按下列方法测定。 5.1.1. 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40：18：42）为流动相，流速每分钟0.8ml；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；以荧光检测器检 测，激发波长γ ex =360nm（或365nm），发射波长γ em =450nm。两个相邻色谱峰的 分离度应大于1.5。 5.1.2. 混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素 B 1、黄曲霉毒素B 2 、黄曲霉毒素G 1、 黄曲霉毒素G 2 标示浓度分别为1.0μg/ml、 0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。 5.1.3. 供试品溶液的制备：取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲和柱（AflaT-est@P），流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
黄曲霉毒素及其检测方法整体解决方案 一、黄曲霉毒素介绍 黄曲霉毒素(aflatoxin，简称为AF)是到目前为止所发现的毒性最大的真菌毒素。它可通过多种途径污染食品和饲料，直接或间接进入人类食物链，威胁人类健康和生命安全，对人体及动物内脏器官尤其是肝脏损害严重，该毒素是黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株的代谢产物，普遍存在于霉变的粮食及粮食制品中。黄曲霉毒素比较耐热，加热至230℃才能被完全破坏，因此一般烹饪加工也不易消除。 二、黄曲霉毒素对人体的危害 1、引起急、慢性中毒： 黄曲霉毒素是剧毒物质，其毒性相当于氰化钾的10倍，砒霜的68倍。黄曲霉毒素属肝脏毒，除抑制DNA、RNA的合成外，也抑制肝脏蛋白质的合成，黄曲霉毒索引起人类的急性中毒事件，国内外均有许多报导，最典型的是印度的霉变玉米事件，该事件直接导致了数十人丧生，数百人患上不同类型的肝脏疾病。 2、致癌性： 黄曲霉毒素有极强的致癌性，长期摄入黄曲霉毒素会诱发肝癌。它诱发肝癌的能力比二甲基亚硝胺大75倍，是目前公认的致癌性最强的物质之一。另据世界卫生组织报导，黄曲霉毒素含量在30~50ug/kg时为低毒，50~100ug/kg时为中毒，100~1000ug/kg时为高毒，1000ug/kg以上为极毒。鉴于黄曲霉毒素对人类的巨大危害性，我国对其在食品中的含量作了严格规定，其中，乳制品中黄曲霉毒素最高允许量为5ug/kg（即5ppb）。 三、黄曲霉毒素的种类 黄曲霉毒素主要有4种：即B1、B2、G1、G2，其中B1被认为是主要的有毒物质，有2种这些毒素的代谢产物M1和M2。其中黄曲霉毒素B1主要存在于农产品，动物 饲料，中药等产品中；黄曲霉毒素M 1是动物摄入黄曲霉毒素B 1 后在体内经羟基 化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳、 肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。黄曲霉毒素M 1 的毒性和致癌 性与黄曲霉毒素B 1 的基本相似。由于牛乳及其制品是人类、特别是婴儿的主要食
乳制品工业食品安全检测能力建设实施方案根据《轻工业调整和振兴规划》关于加强食品安全检测能力建设的要求，特制定乳制品工业食品安全检测能力建设实施方案。通过方案实施，提升乳制品的食品安全水平，化解和降低食品安全风险，保障广大消费者的权益，维护社会安定和谐。 一、乳制品质量安全检测能力现状及存在的主要问题 乳制品工业是食品制造业中发展最快的行业。2008年，全国共有规模以上企业815家，职工总人数22万，工业总产值1490.7亿元，利税总额103.9亿元，乳制品产量1810.6万吨，其中液体乳产量1525.2万吨，乳粉产量120万吨。 改革开放以来，我国乳制品工业在行业规模、乳制品产量、技术装备、质量安全等方面都有了根本的转变。但由于乳制品工业发展时间短，发展速度过快，基础薄弱，特别是由于奶源管理、质量控制、检测手段落后等方面的原因，质量安全问题时有发生，给消费者的生命和财产安全带来损害。2008年9月发生的三聚氰胺重大食品安全事件，暴露了乳制品生产企业质量检验系统的漏洞和检测技术、检验手段落后、不完善的弱点。全国乳制品行业基本上没有配备能够检验三聚氰胺、重金属、微量元素、维生素等的高精端检验手段和能力，缺乏产品质量快速检验设备、生产在线检验设备，不能适应确保原料进厂、生产过程、产品出厂批批检的要求。三聚氰胺事件后，许多企业，特别是大型骨干企业迅速购置检验仪器设备，强化检验手段和能力，乳制品质量有了很大提高。但整体检测设备不齐全、不配套、稳定性差、精度不够、自动化程度低，不能适应实际生产需要，仍然存在产品质量安全风险，影响着我国乳制品行业竞争力的进一步提升。 为了贯彻执行《轻工业调整和振兴规划》、《食品安全法》和《乳品质量安全监督管理条例》，乳制品行业急需对产品质量检验系统进行加强和改造，按照产品质量安全检验项目的要求，配套高技术水平的快速检验仪器和设备，全面提升乳制品加工企业质量检验水平，以适应对原料乳、辅料、半成品、成品等的理化、微生物、微量元素、矿物质、农药残留、兽药残留、污染物质等项目的快速检验，保证进厂原料乳、出厂产品的质量与安全。 二、实施内容和目标 （一）实施内容 该项目的实施，要达到原料进厂、成品出厂批批检验，生产过程在线质量控制快速检验。具体检测内容： 1、原料检验项目：脂肪、蛋白质、碳水化合物、总干物质等营养素；兽药残留、农药残留、重金属等环境污染物；三聚氰胺、皮革水解物、解抗剂、防腐剂、植物蛋白等掺假物质；体细胞、细菌、病原性微生物等检验内容。 2、产品检验项目：脂肪、蛋白质、碳水化合物等主要营养素；维生素、矿物质、微量元素、营养强化剂等微量成分；兽药残留、农药残留、重金属等环境污染物；三聚氰胺、皮革水解蛋白、解抗剂、防腐剂等掺假物质；细菌、病原性微生物等检验内容。 3、半成品在线快速检验项目：脂肪、蛋白质、碳水化合物、粘稠度、酸度等主要营养素；维生素、矿物质、微量元素、营养强化剂等微量成分；细菌、病原性微生物等检验内容。 （二）主要配备设备 按照对原料、半成品、成品的检测和控制内容，对加工厂原材料检验中心、中心化验室、生产车间配备检验仪器与设备，详细设备配置情况如下： 1、原料检验须配备的设备：体细胞仪、冰点仪、亚硝酸盐快速检测仪、抗生素快速检验仪、全组分分析仪、耗材及耗品费用、三聚氰胺检验仪、解抗剂检验仪、智能电子化感官分析系统、微生物快速检测仪、蛋白快速测定仪、脂肪快速测定仪、包装材料检测装置等。 2、车间生产过程及成品质量控制须配备的仪器设备：感官评鉴室、QC—αGEMINI系
黄曲霉毒素标准操作规程 1、目的 为了规范亲和柱净化样本中黄曲霉毒素的操作流程，特制订本操作规程。 2、范围 本标准适用于粮食、饲料、中药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测。 3、检出限和定量限 项目 岛津安捷伦 样本检出限 （μg/kg） 样本定量限 （μg/kg） 样本检出限 （μg/kg） 样本定量限 （μg/kg） AFG10.12 0.4 0.9 3.0 AFG20.08 0.2 0.3 0.86 AFB10.08 0.2 0.6 1.97 AFB20.04 0.12 0.2 0.63 4、职责 部门名称部门职责 质量管理部1、负责本制度的实施。 2、负责本制度的监督执行。 5、程序 5.1 原理 测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素B1经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉毒素B1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素B1，然后注入到分析仪器中用于检测。 5.2 溶液配制 5.2.1 70%甲醇-水溶液：取700mL甲醇，加入300ml去离子水混匀即可。 5.2.2 80%乙腈-水溶液：取800m乙腈，加入200ml去离子混匀即可。 5.2.3 1% 吐温-水溶液：取1ml 吐温-20，加入去离子水并定容至100ml。 5.2.4 黄曲霉毒素混合标准工作液：用色谱级甲醇将储备工作液分别稀释到50 ng/ml、 20 ng/ml、10 ng/ml、5 ng/ml、1 ng/ml、0.5 ng/ml。
5.3 样品前处理 5.3 1 适用于玉米、小麦等粮食作物，花生及其制品，坚果、玉米油、花生油、饲料等 样品 ----25g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过2mm 分样筛），加入5g 氯化钠与125mL 70% 甲醇-水溶液混匀； ----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液； ----取10mL 滤液加入20mL 蒸馏水稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液； ----取15mL 上样液过免疫亲和柱净化。 稀释倍数：1 5.3.2 适用于辣椒、花椒、黄豆酱等调料，面粉、麦芯粉、芝麻油及其它植物油、谷草 等样品 ----25g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过2mm 分样筛）加入125mL 80%乙腈-水溶液混匀； ----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液； ----取10mL 滤液加入40mL 蒸馏水稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液； ----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。 稀释倍数：1 5.3.3 适用于中药（2015 版药典规定的19 味中药等） ----15g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过2mm 分样筛）加入75mL 80%乙腈-水溶液混匀； ----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液； ----取10mL 滤液加入40mL 1% 吐温-水溶液，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液； ----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。
浅谈乳品行业的安全控制 北京祥龙环宇生物技术有限公司技术部 乳品是一种特殊的食品，在人民生活健康保障方面起着重要作用。乳品不仅为人类提供充足的蛋白质、脂肪、糖类、各种维生素和微量元素，同时又是婴幼儿和老年人重要的功能性食品。科学研究表明，奶中除含有免疫球蛋白、多种生长因子等生理活性物质以外，其中作为营养物质的酪蛋白经过胃和肠道中的多种蛋白酶消化以后，还可以释放出多种具有重要生理功能的短肽，这些短肽对人体的抗菌、抗病毒、促进免疫、促进睡眠和促进矿物质吸收等具有重要作用。目前我国乳品行业正处于一个高速发展的时期，乳制品的品种和产量日益增加，同时，消费量也快速增长。但随之而来的产品安全问题也越来越突出，因此保障乳品的安全性就显得极其重要。本文从成分分析、微生物污染、抗生素及毒素残留、掺假等方面简要介绍乳品的检测技术。 一、乳品成分分析 乳品在病原微生物和毒素等指标上符合安全卫生标准时其未必就是安全的，因为其蛋白质含量不足时仍然对人的健康构成威胁，阜阳的假奶粉事件就是一个典型的例子。根据食品安全国家标准，生鲜乳的蛋白质含量要求大于2.8%，脂肪含量要在3.1%以上。这些物质含量的检测通常采用凯氏定氮法或是分光光度法测定。目前市场上也有多种品牌的蛋白分析仪和牛奶成分分析仪可快速检测蛋白质和脂肪含量。A2200蛋白分析仪（意大利Astori公司生产）采用的是BLACK STARCH方法（基于官方FIL-IDF规则），通过比色法快速精确测定乳或乳清中的蛋白质、乳清蛋白和酪蛋白含量。全自动牛奶成分分析仪（Speedy Lab）基于特殊的超声波技术，无需样品的制备，具有高效性及可靠性，能快速检测牛奶及奶制品中的蛋白质、脂肪和糖含量。 二、病原微生物检测 乳品的营养丰富，是大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、霉菌、酵母等微生物孵化的温床。这些微生物不仅会影响到乳品的质量，也是致病菌，引起食物中毒，直接危害到饮用人的健康。通常采用菌落记数法检测病原微生物。菌落记数法需要培养后染色观察或直接观察，操作复杂，耗时长。随着分子生物学的发展，PCR检测试剂盒也广泛应用于乳品的安全检测中。PCR检测试剂盒利用病原菌特有DNA或RNA序列合成的特定引物，经过PCR扩增样品后检测扩增产物以确定是否含病原微生物，具有操作简单、可靠性好、重复性强等特点。美国BioXL公司针对各种病原菌生产的荧光定量PCR试剂盒，还可实时监控PCR的过程，减少出现假阳性的概率，对病原菌的浓度量化，灵敏度更高。 三、抗生素及毒素残留检测 抗生素在抑制、杀灭病原微生物、减轻动物痛苦、拯救动物生命中起着不可替代的作用，但是抗生素残留于乳品中会转移至人体内，导致体内细菌对抗生素的耐药性增加，造成人体微生物环境平衡的紊乱和失调，严重时还会造成中毒反应甚至致畸致残。检测抗生素的传统方法是微生物法，灵敏度较低、耗时较长，一次只能检测一种抗生素。反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定抗生素，简便快速，能同时监测多种抗生素，但需要昂贵的仪器设备、大量复杂的前处理及较长的分析周期。北京祥龙环宇生物技术有限公司代理的抗生素残留Elisa试剂盒和胶体金检测卡能够快速检测抗生素，灵敏度高，操作简单，分析成本低。 另外，北京祥龙环宇生物技术有限公司在应快速有效检测方法的市场需求下，自行研发生产了BioCMT便携式牛奶质量安全快速检测仪及相应的快速检测盒。该仪器系多功能整合，便携式、集成化设计，结合渗滤化学显色、生物显色两大核心技术，可根据检测项目提供相应的检测卡，检测范围广，是一个具备多功能的微型流动检测实验工具。可用于生鲜乳收购的奶站，乳品企业，奶牛牧场等现场环境进行快速检测。 BioCMT便携式牛奶质量安全快速检测仪具备操作简单，准确率高；检测指标多，成本低；环境适应性强；智能化管理操作系统等特点。无需借助其他仪器设备及试剂，不受实验环境的约
一、目的 规范实验室检验方法。 二、内容 （一）试验准备 1、标定荧光计。 （1）、将仪器后的电源开关打开。 （2）、按SELECTTEST键，直至显示出AflaTest，按ENTER。 （3）、荧光计显示：START CALBRATION…OPEN THE LID INSERT RED VIAL 打开仪器盖，将红色的真菌毒素标定管放入。一定要确认标定管是 否已放到了仪器的底部。 （4）、仪器显示：HIGHCAL 22PPB 如果这个值正好是所选分析方法规定的设定值，请按ENTER键。否则，从键盘上所规定的设定值，确认准确无误后，按ENTER键。 （5）、仪器显示：READING HIGH CAL…SA VING HIGH INENSTTY OPEN THE LID INSERT GREEN VIAL 打开仪器盖取出红色的标定管，插入绿色的真菌毒素标定管。一定 要确认标定管是否已充分插入仪器的底部。 （6）、仪器显示：LOW CAL 1.0PPB
如果这个值正好是所选分析方法规定的设定值,请按ENTER键.否则,从 键盘上所规定的设定值,确认准确无误后,按ENTER键。 （7）、仪器显示：READING LIW CAL…SA VING HIGH INTENSITJY 接着显示：OPEN THE LID INSERT GREEN VIAL 打开仪器盖取出绿色的标定管。 （8）、仪器显示：VICAM V1.3 READY 按SELECT TEST键,仪器显示: AFLATEST, 按ENTER键。 （9）、仪器显示：START RUN TEST OPEN THE LID （10）、插入黄色的真菌毒素标定管，其读数应该在分析方法的测定范围内。 （11）、荧光屏计标定工作完毕，可经进行样品分析了。荧光计每 周需要标定一次。如果需要重新标定，请按STOP键，再按OPIONS 键，直至仪器显示：CALIBRATE TEST 然后按ENTER键，仪器显示：AFLATEST 如果不是这样，按SELECT TEST键，直至仪器显示：AFLATEST， 按 ENTER键。然后，按照上面所述操作步骤进行。如果进行样品分析，按SELECT TEST键，直至仪器显示：AFLATEST键。 2、配制AflaTest显色液（一天配制一次）。
乳品安全国家标准 乳品安全国家标准是中国卫生部在1986年颁布的乳品标准基础上修订的国家标准体系，包括乳品产品标准15项、生产规范2项、检验方法标准49项，于2010年3月26日公布，2010年6月1日起开始实施。 目录 简介 修订 特点 实施 相关说明 主要内容 简介 中国乳品安全国家标准于2010年由中国卫生部批准公布，其中共包括66项具体标准，涉及生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳等所有乳类和乳制品。这是2008年“三聚氰胺事件”发生后，有关部门对1986年颁布的乳品标准进行的一次重大修订，因此也被称为乳品新国标。 修订 2008年国务院公布实施的《乳品质量安全监督管理条例》和国务院办公厅《奶业整顿和振兴规划纲要》，要求进一步完善乳品安全国家标准，用1年左右时间整合现行乳品标准。 从2008年12月开始，卫生部会同农业部、国家标准委、工业和信息化部、工商总局、质检总局、食品药品监管局等部门和中国疾病预防控制中心、轻工业联合会、中国乳制品工业协会、中国奶业协会等单位组建了乳品安全标准工作协调小组和专家组。在协调小组统一领导下，专家组开展了乳品安全标准制修订工作。在标准制定过程中，按照公开透明原则，广泛听取各方意见，鼓励各领域专家参加工作组、起草组以及专家组的会议讨论。 2009年10月底，卫生部在网站上公开征求意见并按程序向世界贸易组织成员通报。 2010年1月至2月，第一届食品安全国家标准审评委员会审查通过66项乳品安全国家标准。 2010年3月26日，卫生部颁布乳品安全国家标准。 特点
乳品安全国家标准包括乳品产品标准15项、生产规范2项、检验方法标准49项。乳品安全国家标准基本解决现行乳品标准的矛盾、重复、交叉和指标设置不科学等问题，提高了乳品安全国家标准的科学性，形成了统一的乳品安全国家标准体系。 与以往乳品标准比较，乳品安全国家标准有以下特点： 1、体现<食品安全法>立法宗旨，突出安全性要求。 食品安全国家标准属于技术性法规，新的乳品安全国家标准严格遵循《食品安全法》要求，突出与人体健康密切相关的限量规定。 2、以食品安全风险评估为基础，兼顾行业现实和发展需要。 乳品安全国家标准以食品安全风险监测和评估数据为依据，确保标准的科学性，同时注重听取行业主管部门和协会意见，充分考虑中国乳品行业实际情况，确保标准的实用性。 3、整合现行乳品标准，扩大标准的覆盖范围。 乳品安全国家标准整合了以往乳品标准中的强制性规定，在减少标准数量的同时，提高了食品安全国家标准的通用性和覆盖面，避免标准间的重复和交叉。 4、与现行法规和产业政策相衔接，确保政策的连续性和稳定性。 实施 为做好新旧标准衔接，合理设置标准实施过渡期，卫生部根据标准修改情况、对生产工艺的影响和实施难度，分类确定了标准的具体实施时间，分别为： 《生乳》（GB19301—2010）和《生乳相对密度的测定》（—2010）等检验方法标准自2010年6月1日起实施； 《巴氏杀菌乳》（GB19645—2010）等乳品产品标准和《乳制品良好生产规范》（GB12693—2010）等生产规范标准自2010年12月1日期实施； 《婴儿配方食品》（GB10765—2010）等婴幼儿食品安全标准自2011年4月1日起实施。 相关说明 关于农兽药残留指标 农兽药残留主要来自饲料和养殖环节，国际食品法典委员会和相关国家仅在生乳中设置农兽药残留规定，不在乳制品中设置上述要求。中国参照国际组织和多数国家做法，仅在《生乳》（GB19301-2010）中设置农兽药残留规定，具体按照现有农药残留标准和国家有关规定、公告执行。乳品产品标准规定所用生乳原料应符合《生乳》（GB19301-2010）。农业部正在完善食品中农兽药残留标准。
食品中黄曲霉毒素的测定 —免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法 1 范围 本标准规定了免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光 光度法测定食品中黄曲霉毒素的条件和详细分析步骤。 本标准适用于玉米、花生及其制品（花生酱、花生仁、花生米）、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中黄曲霉毒素的测定。 样品中黄曲霉毒素的检出限：免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法为1mg/kg；免疫亲和层析净化—荧光光度法测定酱油样品中黄曲霉毒素检出限为2.5mg/kg。 2 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 2.1 方法提要 试样经过甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化，此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用水或吐温/PBS将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，洗脱液通过带荧光检测器的高效液相色谱仪柱后碘溶液衍生测定黄曲霉毒素的含量。 2.2 试剂和溶液 除非另有规定，仅使用分析纯试剂、重蒸馏水。 2.2.1甲醇（CH3OH）：色谱纯 2.2.2甲醇-水（7+3）：取70mL甲醇加30mL水 2.2.3 甲醇-水（8+2）：取80mL甲醇加20mL水 2.2.4甲醇-水（45+55）：取45mL甲醇加55mL水 2.2.5 苯：色谱纯 2.2.6乙腈：色谱纯 2.2.7苯-乙腈（98+2）：取2mL乙腈加98mL苯
2.2.8氯化钠（NaCl） 2.2.9磷酸氢二钠（Na2HPO4） 2.2.10磷酸二氢钾（KH2PO4） GB/T 18979-2003 2.2.11氯化钾（KCl） 2.2.12 PBS缓冲溶液：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL。 2.2.13 吐温-20/PBS溶液（0.1%）：取1mL吐温-20，加入PBS缓冲溶液并定容至1000mL。 2.2.14 pH7.0磷酸盐缓冲溶液：取25.0mL 0.2mol/L的磷酸二氢钾溶液与29.1mL 0.1mol/L 的氢氧化钠溶液混匀后，稀释到100 mL。 2.2.15 黄曲霉毒素标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2）：纯度≥99%。 2.2.16 黄曲霉毒素标准贮备溶液：用苯-乙腈（98+2）溶液分别配制0.100mg/mL的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准贮备液，保存于4oC备用。 2.2.17 黄曲霉毒素混合标准工作液：准确移取适量的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准贮备液，用苯-乙腈（98+2）溶液稀释成混合标准工作液。 2.2.18 柱后衍生溶液（0.05%碘溶液）：称取0.1g碘，溶解于20mL甲醇后，加纯水定容至200mL，以0.45μm的尼龙滤膜过滤，4℃避光保存。 2.3 仪器和设备 实验室常规仪器、设备、材料及下列各项。 2.3.1 高速均质器：18,000 r/min ~22,000 r/min。 2.3.2 黄曲霉毒素免疫亲和柱。 2.3.3 玻璃纤维滤纸：直径11cm，孔径1.5μm。 2.3.4 玻璃注射器：10 mL，20mL。 2.3.5 玻璃试管：直径12 mm ，长75mm，无荧光特性。 2.3.6 高效液相色谱仪：具有360nm激发波长和大于420nm发射波长的荧光检测器。 2.3.7 空气压力泵。
乳制品质量安全控制技术 刘静 随着近年来我国乳业的快速发展和人民生活水平的不断提高, 乳与乳制品的安全日益受到重视。人们不仅要求喝到奶, 而且要喝好奶, 喝放心奶, 食用安全乳品。乳业作为我国农业现代化发展、改善人们膳食结构和提高国民身体素质的重要产业, 对乳及其制品质量安全的有效控制, 一方面有利于保证广大消费者的健康与安全, 减少食物中毒的发生及由此带来的经济损失, 另一方面有利于乳业本身及农业的健康发展。 乳制品的质量安全涉及原料乳生产、乳品加工、贮藏、运输、销售到餐桌等整个过程的不同链条, 每个链条任何一个环节的不规范操作都易使乳受到各种生物性( 微生物、昆虫等) 、化学性( 农药、兽药等) 或物理性的污染, 最终影响乳制品的质量安全。由于原辅料处理中存在问题2011年蒙牛的液态奶黄曲霉毒素质量安全事件；由于奶源环节出现的问题；出现的三鹿婴幼儿“毒”奶粉事件；由于存在工艺不合理、原料和产品质量检验不力及管理不善等问题, 其引发的安全事故不断发生。如2004 年安徽省阜阳奶粉事件, 2008 年3 月珠海维维大亨乳业有限公司生产的高钙牛奶饮品金黄色葡萄球菌污染而引起食物中毒事件, 以及意大利的莫扎里拉奶酪二噁英含量超标事件, 还有长期困扰我国乳业发展的牛奶掺假现象, 都为我国乳品安全敲响了警钟。国产乳品质量安全问题已经打击了消费者对乳品安全的信任度, 影响了乳品的销售, 对处于成长期的中国乳业带来很大的负面影响。下面先对影响乳制品行业质量安全因素进行简单分析，然后再提出相应的控制措施和技术手段。 影响乳制品质量安全的因素主要包括环境污染、兽药和饲料添加剂残留、有害微生物以及人为因素等。这些不安全因素贯穿于整个乳业之中, 涉及从原料乳、加工过程、贮藏、运输、销售到消费者购买后至食用前的各个环节。 一、制约乳业安全的因素主要存在于以下几个方面： （一）、原料乳生产的不安全因素 在养殖环节中的奶牛乳房炎, 在原料乳收购环节, 奶站的挤奶操作不规范, 牛奶检测环节技术手段落后, 对挤奶、贮奶、运奶设备的冲洗不彻底及冷藏设施落后等均会造成牛奶质量的降低。例如：饲料中有害物质及农药的残留, 其他辅
中药材中黄曲霉毒素检测方案 黄曲霉毒素介绍 黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于药材、谷物、坚果、棉籽以及动物饲料相关的产品中。其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，其中以B1毒性最大。当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。 背景 各级食品药品监管部门不断加大中药生产流通监管力度，努力保持中药质量总体稳定。 国家食品药品监督管理局关于规范中药生产经营秩序严厉查处违法违规行为的通知(国食药监安[2012]187号中，要求加强对重金属及有害元素、农药残留、黄曲霉毒素等安全性指标的检测和控制，切实保证中药材质量和安全，另要求企业具备与生产品种相适应的检验设备和能力，严把质量检验关。《国家药品安全“十二五”规划》，规划中明确提出“开展药品快速检验技术研究，搭建检验技术共享平台”、“加快推进药品快速检验技术在基层的应用，配置快速检验设备”、“加强县级机构快速检验能力建设”的要求。 中药中黄曲霉毒素的检测方法 2010版《药典》附录IX V 黄曲霉毒素测定采用高效液相色谱法，另外增补药典描述该法检测建立增加柱后光化学衍生法。 原理 样品经甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和柱层析净化，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上，此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性，用水将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和柱洗脱，再经光化学衍生器柱后衍生，以提高检测准确性。 主要试剂及耗材 气控操作架：含气泵 黄曲霉毒素免疫亲和柱1ml或3ml 光化学衍生器
微生物在乳品安全检测中的应用 摘要：近年来，消费者对乳品检测的标准在不断地提高，如何加强乳品检测已经成为众多乳品企业发展的关键问题，从目前的发展现状来看，利用微生物进行乳品检测的应用正在逐渐增多，其主要在维生素含量、抗生素的残留、致病菌的检测中发挥了重要的效果，本文对其应用进行具体的分析。 关键词：微生物乳品安全检测应用发展 目前，微生物在乳品检查中的应用主要分为两类，首先是以微生物为基础的检测方法，将其应用到乳品安全的检测中去，如用微生物方法检测B族维生素、抗生素等；另一类方法则是大家较为常见的，就是对乳品安全指标中非常重要的微生物指标和微生物相关指标进行检测，如检测细菌总数、致病菌、肠毒素等。 1、维生素含量的检测 乳制品中的维生素含量是消费者决定购买产品的一项重要影响因素，因此，对其检测对乳制品行业的发展非常重要，其检测原理是根据细菌的生长必须一种维生素，利用这一原理，以细菌繁殖程度或代谢产物定量该维生素含量，是乳品中维生素检测的经典方法，即微生物法。从实践中我们可以发现，微生物的生长、繁殖与维生素的含量呈现一定的比例，利用这一原理进行检测，方法简单，方便，准确可靠，而且其适用性广，因此已被许多检测方法的国际标准机构作为部分维生素分析的标准方法或第一方法。在国际的乳品安全检测中被普遍的和应用。 由于其具有普遍性，众多生产企业纷纷生产其新型产品，造成市场中产品样式很多，但是质量参差不齐，随着生产工艺的不断发展，世界上很多大型企业在这一原理的基础上，研发出新的产品，解决了很多传统检测中遇到的问题。 从上文的分析中我们不难发现，该方法是利用微生物对于营养物质具有一定的敏感度，这是任何现代的仪器都无法取代的，这也决定了微生物检测法相对于高科技的检测法，精确度更高。目前，其已被认证为AOAC的标准方法，全球已有20家以上的实验室对其进行了方法验证，其准确性被广泛公认。 2、抗生素残留的检测 随着人们健康意识的提高，人们对食品的健康问题更加关注，与此同时，是很多商家为了利益出卖良心，生产出不安全的乳制品，导致市场信誉降低，顾客的流失。国外先进国家曾明文规定，禁止在牛奶中添加超标的抗生素，随着国际间交流的频繁，我国的乳制品市场不断完善，相关法律也在不断地完善，对禁止乳制品中含有抗生素的条例也陆续出台。
乳制品检测 乳制品工业是食品制造业中发展最快的行业，改革开放以来，我国乳制品工业在行业规模、乳制品产量、技术装备、质量安全等方面都有了根本的转变，但由于乳制品工业发展时间短，发展速度过快，基础薄弱，特别是由于奶源管理、质量控制、检测手段落后等方面的原因，质量安全问题时有发生，给消费者的生命和财产安全带来损害，所以，乳制品检测水品的提高，是现今社会应该注重的问题，科标检测可提供乳制品各项检验服务。 【检测范围】 乳制品：液体乳（巴氏杀菌乳、灭菌乳、调制乳、发酵乳）； 乳粉：全脂乳粉、脱脂乳粉、部分脱脂乳粉、调制乳粉、牛初乳粉； 其他乳制品：炼乳、奶油、干酪等 婴幼儿配方乳粉：婴儿配方乳粉、较大婴儿配方乳粉、幼儿配方乳粉等。【检测项目】 检测项目项目内容 理化指标 脂肪、蛋白质、碳水化合物、总干物质等营养素维生素、矿物质、微量元素、营养强化剂等微量成分 有害物质兽药残留、农药残留、重金属等环境污染物 添加剂 三聚氰胺、皮革水解蛋白、解抗剂、防腐剂等掺假物质 微生物指标细菌、病原性微生物等 【检测标准】 国家标准 标准代号标准名称备注 GB/T 4789.18-2003食品卫生微生物学检验乳与乳制品检验 GB/T 4789.27-2003食品卫生微生物学检验鲜乳中抗生素残留量检验 GB/T 4789.35-2003食品卫生微生物学检验乳酸菌饮料中乳酸菌检验 GB/T 5009.186-2003乳酸菌饮料中脲酶的定性测定 GB/T 5009.46-2003乳与乳制品卫生标准的分析
方法 GB/T 5409-1985牛乳检验方法GB/T 5409-1985AMD.1 增补 GB/T 5413.1-1997婴幼儿配方食品和乳粉蛋白质的测定 GB/T 5413.2-1997婴幼儿配方食品和乳粉乳清蛋白的测定 GB/T 5413.3-1997婴幼儿配方食品和乳粉脂肪的测定 GB/T 5413.4-1997婴幼儿配方食品和乳粉亚油酸的测定 GB/T 5413.5-1997婴幼儿配方食品和乳粉乳糖、蔗糖和总糖的测定 GB/T 5413.6-1997婴幼儿配方食品不溶性膳食纤维的测定 GB/T 5413.7-1997婴幼儿配方食品和乳粉灰分的测定 GB/T 5413.8-1997婴幼儿配方食品和乳粉水分的测定 GB/T 5413.9-1997婴幼儿配方食品和乳粉维生素A、D、E的测定 GB/T 5413.10-1997婴幼儿配方食品和乳粉维生素K1的测定 GB/T 5413.11-1997婴幼儿配方食品和乳粉维生素B1的测定 GB/T 5413.12-1997婴幼儿配方食品和乳粉维生素B2的测定 GB/T 5413.13-1997婴幼儿配方食品和乳粉维生素B6的测定 GB/T 5413.14-1997婴幼儿配方食品和乳粉维生素B12的测定 GB/T 5413.15-1997婴幼儿配方食品和乳粉烟酸和烟酰胺的测定 GB/T 5413.16-1997婴幼儿配方食品和乳粉叶酸（叶酸盐活性）的测定 GB/T 5413.17-1997婴幼儿配方食品和乳粉泛酸的测定 GB/T 5413.18-1997婴幼儿配方食品和乳粉维生素C的测定 GB/T 5413.19-1997婴幼儿配方食品和乳粉游离