微生物的实验室培养
一、选择题
1．菌种鉴定的重要依据是( B )
A．细菌的大小、形状和颜色B．菌落的大小、形状、颜色
C．有无鞭毛D．培养基的不同
[解析] 不同种类的细菌所形成的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定特征，所以，每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。单个的细菌用肉眼是看不见的，故细菌的个体特征不能作菌种鉴定的依据。
2．用平板划线法或稀释涂布平板法都可以纯化大肠杆菌，二者的共同点有几项( B )
①可以用相同的培养基②都要使用接种环进行接种③都需要在火焰旁边进行接种④都可以用来计数活菌
A．一项B．二项
C．三项D．四项
[解析] 平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基，①正确；平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作，②错误；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基，③正确；平板划线法一般用于分离而不能用于计数，④错误。故选B。
3．下列关于平菇培养的操作程序，正确的是( D )
A．配制牛肉膏蛋白胨培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养
B．配制牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养
C．配制棉籽壳培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养
D．配制棉子壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养
[解析] 平菇的代谢类型属于异养型，需要提供现成的有机物才能生长。在题目给出的选项中，B选项是实验中培养细菌等的方法，D选项则是人们常用的培养平菇的方法，为了避免杂菌污染，应在接种前先进行灭菌处理。
4．如图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1,2,3,4,5。下列操作方法正确的是( D )
A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌
B．划线操作必须在火焰上进行
C．最可能得到所需菌落的区域是1
D．在1,2,3,4,5区域中划线前后都要对接种环灭菌
[解析] 操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌；划线操作必须在火焰旁进行，而不是火焰上；最可能得到所需菌落的区域是5。
5．制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，关于倒平板的具体描述正确的是( C )
①待培养基冷却至40℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板
②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞
③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰
④用左手的拇指和食指完全打开皿盖
⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖
⑥等待平板冷却5～10s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上
A．①③④⑤B．④⑤⑥
C．③⑤D．①②④⑥
[解析] 琼脂是一种多糖，在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不能及时操作，琼脂会凝固。无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基。
6．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是( D )
A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、水、无机盐
B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D．进行系列稀释操作时，用移液管吸取相应的菌液注入试管后，还要用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀
[解析] 培养基不一定都含有碳源、氮源等物质，如培养自养型微生物的培养基中不需要加入碳源，分离自生固氮菌的培养基中不需要加入氮源，A错误；倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B错误；接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后再挑取菌落，以防将菌种烫死，C错误；进行系列稀释操作时，用移液管吸取相应的菌液注入试管后，还要用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀，D正确。
7．下列关于四种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的描述，其中正确的一组是( D )
A．硝化细菌、乳酸菌B．乳酸菌、酵母菌
C．酵母菌、衣藻D．硝化细菌、衣藻
[解析] 本题考查的知识有：①各种微生物的代谢类型，②微生物所需的能源、碳源和氮源的不同。解答此题时应明确：硝化细菌、乳酸菌属于细菌，酵母菌属于真菌，衣藻属于真核生物。微生物所需的能源、碳源、氮源因其代谢类型的不同而不同。
8．如图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是( C )
A．对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌处理
B．步骤①倒平板操作时倒好后应立即将其倒过来放置，防止水蒸气落在培养基上造成污染
C．步骤③应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落
D．步骤④划线结束后在皿盖上做好标注
[解析] 对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒处理，A错误；步骤①倒平板操作后应等待平板冷却至凝固(大约需5至10分钟)后，再将其倒过来放置，防止水蒸气落在培养基上造成污染，B错误；步骤③应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，最终培养后出现单个菌落，C正确；步骤④划线结束后应在皿底上做好标注，D错误。故选C。
9．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶采用的灭菌、消毒方法依次是( A )
①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法
A．⑤③②①④⑥B．①②③④⑤⑥
C．⑥②③④①⑤D．③④②①⑥⑤
10．外科手术器械和罐头食品的消毒，都要以能够杀死什么为标准( D )
A．球菌B．杆菌
C．螺旋菌D．芽孢
[解析] 外科手术器械和罐头食品的消毒都要求无菌，要杀灭一切生物，包括芽孢和孢子。
11．高温灭菌的原理是( C )
A．每种微生物生长的最适温度是一定的
B．微生物对高温环境不适应
C．高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动
D．高温降低了环境中氧的浓度
[解析] 相对于动植物来说，微生物的耐高温能力是很强的。灭菌即杀死各种微生物及其他生命形态(如芽孢)，所以要采用更高温以破坏微生物体内蛋白质、核酸的分子活性，以使其永远丧失生活能力。
12．(2019·康杰中学高二期中)分离纯化大肠杆菌最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。下列有关这两种方法的叙述正确的是( D )
A．两种方法都可以用来计数活菌
B．单菌落均是由一个细菌繁殖而来的
C．都需要使用接种环进行接种
D．两种方法的目的都是得到单菌落
[解析] 平板划线法只能用来分离大肠杆菌，不能用来计数，A项错误；单菌落可能是由一个或几个聚在一起的细菌繁殖而来的，B项错误；稀释涂布平板法需要使用涂布器，C 项错误；两种方法的目的都是得到单菌落，前者用于分离，后者可用于分离、计数，D项正确。
二、非选择题
13．入冬以来，宝鸡地区雾霾天气增多，空气中除二氧化硫，氮氧化物及可吸入颗粒物增多外，还含有较多的微生物，某兴趣小组收集了校园内体育场、教室、宿舍、小树林四处的微生物，对此进行探究，实验步骤如下：
①配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白陈、NaCl、琼脂、水)；
②制作无菌平板；
③将制作好的平板，按下表进行处理
下列问题：
(1)上述实验的目的是__探究校园内不同场所微生物的分布__。
(2)该培养基中，牛肉膏、蛋白胨为微生物提供的主要营养有__碳源、氮源__和维生素，从物理性质来看，该培养基属于__固体__培养基。
(3)若要完成步骤②，需对培养皿进行灭菌处理，常用的方法是__高压蒸汽灭菌__。倒平板时培养基的温度不能太低，原因是温度太低，会导致__培养基凝固无法铺展__，待平板冷凝后，要将平板__均匀倒置__，以防止培养皿盖上凝结的水珠掉入培养基中造成污染。
(4)该实验中的__E__组是对照组，若该组培养基表面有菌落生长说明__培养基灭菌不合格(受到杂菌污染)__。
[解析] (1)通过表格可知该实验的目的是探究校园内不同场所微生物的分布。(2)该培养基中，牛肉膏、蛋白胨为微生物提供的主要营养有碳源、氮源和维生素，培养基中有琼脂，从物理性质来看，该培养基属于固体培养基。(3)若要完成步骤②制作无菌平板，需对培养皿进行灭菌处理，常用的方法是高压蒸汽灭菌。倒平板时培养基的温度不能太低，因为培养基中有琼脂，温度低培养基凝固无法铺展，待平板冷凝后，要将平板倒置，以防止培养皿盖上凝结的水珠掉入培养基中造成污染。(4)该实验中的E组是对照组，若该组培养基表面有菌落生长说明培养基灭菌不合格(受到杂菌污染)。
14．某航空公司宣布，启用以生物柴油(俗称“地沟油”)为燃料的客机执行飞行任务，以减少碳排放。科学家发现，在微生物M(单细胞)产生的脂肪酶作用下，从地沟油中提取的植物油与甲醇反应能够合成生物柴油。
(1)用培养基培养微生物时，培养基中应有__碳源__、__氮源__、__水__和__无机盐__等营养，同时还必须满足微生物生长对__特殊营养物质__、__pH__、__氧气__的要求。在筛选产脂肪酶的微生物M时，应用__选择__培养基，可以在培养基中添加__植物油__作为唯一碳源。
(2)培养基灭菌采用的最适方法是__高压蒸汽灭菌__法。
(3)图示是采用纯化微生物M培养的两种接种方法接种后培养的效果图，过程一的接种方法是__平板划线法__，过程二的接种方法是__稀释涂布平板法__，接种后应注意培养皿要__倒置__放置。
[解析] (1)微生物的培养基的基本成分包括水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子等。同时还必须满足微生物生长对特殊营养物质、pH、氧气的要求。已知脂肪酶能够催化脂肪水解为脂肪酸和甘油，筛选产脂肪酶的微生物时，宜用植物油作为培养基中的唯一碳源，从功能上讲，这种培养基属于选择培养基。(2)培养基一般有高压蒸汽灭菌法灭菌。(3)接种微生物常用的方法是稀释涂布平板法和平板划线法，获得图过程一的接种方法是平板划线法，过程二的接种方法是稀涂布平板法。
15．请回答与大肠杆菌纯化培养有关的问题：
(1)制备培养基。
配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须调节__pH__，培养基在接种前要进行__高压
蒸汽__灭菌。
(2)纯化大肠杆菌。
①通过连续划线操作，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面，在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这种方法称为__平板划线法__。
②用该方法统计样本菌落数时__需要__(填“需要”或“不需要”)设置对照组。为什么？__需要判断培养基是否被污染__。
(3)讨论分析。
①纯化大肠杆菌时，__不可__(填“可”或“不可”)用加入抗生素的方法防止杂菌感染。
②用该方法分离大肠杆菌时，从第二次划线操作起，每次总是要从上一次划线的末端开始划线，其原因是__线条末端的细菌数量少，最终可得到由单个细菌繁殖而形成的菌落__。
③大肠杆菌与酵母菌的最本质区别是__大肠杆菌无成形的细胞核(酵母菌有成形的细胞核)__。
[解析] (1)配制培养基时各种成分在熔化后分装前必须进行pH的调节，接种前要进行高压蒸汽灭菌。(2)①题干所述接种方法为平板划线法。②平板划线法接种培养微生物时，需要进行不接种的空白培养实验以判断培养基是否被污染，所以用该方法统计样本菌落数时需要设置对照组。(3)①大肠杆菌属于细菌，对抗生素敏感，培养大肠杆菌时不能用加入抗生素的方法防止杂菌感染。②平板划线法分离大肠杆菌时，从第二次划线操作起，每次总是要从上一次划线的末端开始划线，并划线数次，其原因是线条的末端的细菌数量少，最终可以得到由单个细菌繁殖而形成的菌落。③调查结果属于原核生物，酵母菌属于真核生物，它们最本质的区别是大肠杆菌无成形的细胞核。