?性病?
早期梅毒患者外周血淋巴细胞Ｔｈｌ／Ｔｈ２
分化状态的检测
赵建斌４，龚匡隆，张津萍，钟铭英，尚淑贤，郑波，王千秋
［摘要］目的探讨早期梅毒患者外周血淋巴细胞Ｔｈｌ／Ｔｈ２极化状态的变化。方法利用荧光单克隆抗体标记，结合流式细胞术，检测梅毒患者外周血中Ｔｈｌ／Ｔｈ２细胞的比例。结果与正常对照组相比，一期梅毒患者外周血中，Ｔｈ０和Ｔｈｌ细胞比例明显升高（Ｐ＜０．０１）；二期梅毒患者Ｔｈ０、Ｔｈ２细胞比例明显升高（Ｐ＜０．０１），而Ｔｈｌ／Ｔｈ２比值则明显降低（Ｐ＜０．０１）；潜伏梅毒患者各项指标与对照组相比差异无统计学意义；血清固定组患者ＴｈＯ和Ｔｈ２细胞比例显著升高（Ｐ＜０．０５），而Ｔｈ！／Ｔｈ２比值则明显降低（Ｐ＜０．０５）；ＲＰＲ滴度与Ｔｈｌ／Ｔｈ２各项指标之间无明显相关性。结论早期梅毒患者在由一期向二期进展的过程中，外周血淋巴细胞存在着由Ｔｈｌ向Ｔｈ２极化状态的转变。
［关键词］梅毒；ＴｈＩ细胞；Ｔｈ２细胞；流式细胞术
［中图分类号】Ｒ７５９．１＋２［文献标识码】Ａ［文章编号］１００１—７０８９（２００６）０９—０５４９一０２
ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＴｈｌ／Ｔｈ２ＰｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎｉｎＰｅｒｉｐｈｅｒａｌＢｌｏｏｄｏｆＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＥａｄｙＳｙｐｈｉｌｉｓ
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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｙｐｈｉｌｉｓ；Ｔｈｌｃｅｌｌｓ；Ｔｈ２ｃｅｌｌｓ；Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ
梅毒是由梅毒螺旋体（仰）感染引起的严重影响健康的性传播疾病。其免疫学变化非常复杂，至今尚未完全了解。Ｔｈｌ／Ｔｈ２极化是免疫应答调节中的关键环节，研究显示许多感染性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病以及移植排斥反应等的发生都与Ｔｈｌ／Ｔｈ２极化异常有关。本研究将探讨早期梅毒患者外周血中淋巴细胞Ｔｈｌ／Ｔｈ２极化状态的演变。
１资料和方法
１．１病例资料参照中华人民共和国国家标准梅毒诊断标准（１９９５年）确诊早期梅毒患者７２例，为本科２００５年（３—８）月门诊患者。其中一期梅毒２３例，男１３例，女１０例，年龄２０—５５（平均３４．０９±１０．９５）岁；二期梅毒２６例，男１２例，女１４例，年龄２０～６ｌ（平均３７．００±１１．６４）岁；潜伏梅毒８例，男３例，女
［作者单位］中国医学科学院、中国协和医科大学皮肤病研究所，江苏南京２１００４２；ｔ现在江苏省徐州市第一人民医院皮肤科，江苏徐州２２１００２
［作者简介］赵建斌（１９７３一），男，江苏省徐州市人，主治医师，医学博士生，主要从事梅毒免疫学研究。
［通讯作者］王千秋，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｑｉａｎｑｉｕ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｎ５例，年龄２２—５５（３５．７５±１０．９０）岁；血清固定１５例，男７例，女８例，年龄２４～４２（平均２９．２７±５．０２）岁。其中除血清固定组患者外，均未经抗梅治疗。血清固定患者判定标准为：确诊梅毒后经规则治疗２年后ＲＰＲ不阴转者（排除再感染、神经梅毒和ＨＩＶ感染）。正常对照组２４例为健康献血者，男１３例，女１１例，年龄１８—４１（平均２７．９６±７．１０）岁。
１．２方法
１．２．１试剂与仪器荧光素标记的鼠抗人单克隆抗体：抗ＣＤ３一ＡＰＣ（ＭｏｕｓｅＩｇＧ２ａ）、抗ＣＤ８?ＰＥ—ＣＹ５．５（ＭｏｕｓｅＩｇＧ２ａ）、抗ＩＮＦ－１－ＦＩＴＣ（ＭｏｕｓｅＩｇＧｌ）、抗ＩＬ４．ＰＥ（ＩｇＧｌ）及相应荧光素标记的同种型对照抗体，均购自美国ＣａｌｔａｇＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ公司。细胞破膜剂采用ＦＩＸ＆ＰＥＲＭ试剂盒（美国ＣａｌｔａｇＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ公司）。ＲＰＭＩ１６４０、ＰＭＡ、Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、ＢｒｅｆｅｌｄｉｎＡ（ＢＦＡ）均购自Ｓｉｇｍａ公司。流式细胞仪（美国ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ公司，ＦＡＣＳ－Ｃａｌｉｂｕｒ型）。
１．２．２标本制备取１００止肝素抗凝血和１００ＩｘＬＲＰＭＩ１６４０混匀，加入５汕１斗∥ｍｌＰＭＡ工作液，４ｐ，Ｌ５０¨，ｇ／ｍＬＩｏｎｏｍｙｃｉｎ工作液和４斗Ｌ０．５ｍｇ／ｍＬＢＦＡ工作液，３７℃，５％ＣＯ：培养箱培养４ｈ。加入抗ＣＤ，一ＡＰＣ和抗ＣＤ８一ＰＥ－ＣＹ５．５，
孵育后分成２管，编号为Ａ１和Ａ２。按试剂盒说明书进行破膜和溶血操作后，各管中加入相应的抗体：Ａ１：ＭｏｕｓｅＩｇＧｌ．ＦＩＴＣ和ＲａｔＩｇＧｌ一ＰＥ（同型对照管）；Ａ２：抗ＩＦＮ一＿ｙ—ＦＩＴＣ和抗ＩＬ－４．ＰＥ（检测管）。孵育、清洗、ＰＢＳ重悬检测。
１．２．３检测方法先通过前向、侧向散射光选取淋巴细胞群体，再以ＣＤ３，ＣＤ８设门选ＣＤ３＋ＣＤ。一Ｔ淋巴细胞（由于ＰＭＡ刺激会导致淋巴细胞表面ＣＤ４分子内吞，通常采用ＣＤ，＋ＣＤ。一反设ＣＤ３＋ＣＤ。＋Ｔｈ细胞），检测，１１ｌ细胞中ＩＮＦ－１和ＩＬ－４的表达情况（单表达ＩＮＦ一１的细胞定义为Ｔｈｌ细胞，单表达ＩＬ－４的定义为Ｔｈ２细胞，同时表达ＩＮＦ一１和ＩＬ４的定义为Ｔｈ０细胞）。１．３统计学处理由于本实验所检测的数据不符合正态分布，因而使用非参数检验。采用ＳＰＳＳ１１．０统计软件对所得数据进行Ｍａｎｎ．ＷｈｉｔｎｅｙＵ检验。
２结果
２．１梅毒患者外周血Ｔｈｌ／Ｔｈ２极化状态的检测结果见表１。结果显示，与正常对照组相比，一期梅毒患者外周血中Ｔｈ０和Ｔｈｌ细胞比例均明显升高（Ｐ＜０．０１）；二期梅毒患者ＴｈＯ，Ｔｈ２细胞比例明显升高（Ｐ＜０．０１），而Ｔｈｌ／Ｔｈ２比值则明显降低（Ｐ＜０．０１）；潜伏梅毒患者各项指标与对照组相比差异无显著性意义；血清固定组患者Ｔｈ０和Ｔｈ２细胞比例显著升高（Ｐ＜０．０５），而Ｔｈｌ／Ｔｈ２比值则明显降低（Ｐ＜０．０５）。二期梅毒较一期梅毒患者Ｔｈ２细胞比例显著升高（Ｕ＝１９３．００，Ｐ＝０．０３４），Ｔｈｌ／Ｔｈ２比值显著降低（Ｕ＝１５０．００，Ｐ＝０．００３）；潜伏梅毒较一期梅毒Ｔｈｌ细胞比例有降低趋势（Ｕ＝４９．００，Ｐ＝０．０５２），较二期梅毒Ｔｈ２细胞比例显著降低（Ｕ＝３３．００，Ｐ＝０．００４），较血清固定组Ｔｈ２细胞比例显著降低（Ｕ＝２１．００，Ｐ＝０．０１２）；二期梅毒与廊清固定组相比，各项指标差异无显著性意义。
２．２ＲＰＲ滴度与Ｔｈ细胞比例的相关分析梅毒患者的血清ＲＰＲ滴度与Ｔｈ０，Ｔｈｌ，Ｔｈ２以及Ｔｈｌ／Ｔｈ２比值之间的关系，应用Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关方法进行分析，结果显示各组间均无相关关系。
表１梅毒患者与正常对照者外周血Ｔｈｌ／Ｔｈ２极化状态检测结果注：Ｕ值为各组与正常对照组比较所得，｝Ｐ＜Ｏ．０５，｝｝Ｐ＜０．０１。
３讨论
早在１９８６年Ｍｏｓｍａｎｎ等…依据小鼠分泌的细胞因子谱不同，首次将ｒ１１ｌ细胞分为Ｔｈｌ和Ｔｈ２两个功能不同的独立亚群。目前，一般认为Ｔｈｌ细胞介导的细胞免疫在宿主对ｒＩＰ的免疫防御中发挥关键作用旧ｔ３Ｊ。Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ等¨１曾通过动物实验研究提出假说，认为梅毒在由一期向二期发展的过程中，免疫系统发生从Ｔｈｌ模式向Ｔｈ２模式的转向。Ｐｏｄｗｉｎｓｋａ等旧。的研究也显示，在梅毒损害恢复的过程中，淋巴细胞分泌ＩＬ－２、ＩＦＮ、ＴＮＦ和ＭＩＦ的能力是逐渐增加的；而在梅毒由早期向晚期的发展过程中，Ｔｈｌ型因子逐渐减少，Ｔｈ２型因子逐渐增加。然而以往对梅毒患者Ｔｈｌ／Ｔｈ２极化的研究多采用ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ及通过特定细胞系培养来确定细胞因子活性等方法，而这些方法无法分辨所检测的细胞因子是否均来自，１１ｌ细胞（体内多种细胞都可产生相关细胞因子），所以并不能真正地反映出Ｔｈｌ／Ｔｈ２细胞的分化状态。
本实验运用荧光标记的抗细胞表面抗原和抗细胞内细胞因子的单克隆抗体、结合短时间固定、破膜打孔处理，通过流式细胞仪同时检测特定细胞内不同细胞因子的表达，从而在细胞水平上了解单个活细胞产生细胞因子的情况，能更准确地反映辅助性Ｔ淋巴细胞Ｔｈｌ／Ｔｈ２分化状态口１。根据实验结果，一期梅毒患者Ｔｈ０和Ｔｈｌ细胞比例较正常对照组明显升高，提示ＴＰ感染刺激机体淋巴细胞活化形成Ｔｈ０细胞，并进而向Ｔｈｌ方向极化，可以增强细胞免疫，促进对ＴＰ的清除。二期梅毒患者与一期相比，Ｔｈ２细胞比例显著升高、Ｔｈｌ／Ｔｈ２比例显著降低，提示随着Ｔｈｌ／Ｔｈ２平衡向Ｔｈ２方向的转向，机体细胞免疫防御能力降低，一期梅毒发展进入二期梅毒。潜伏梅毒的检测结果显示，其Ｔｈｌ水平低于一期梅毒，Ｔｈ２水平低于二期梅毒，提示其淋巴细胞的Ｔｈｌ／Ｔｈ２分化状态介于一期和二期之间。基于以上结果笔者提出以下假说：机体感染ＴＰ后，随着一期症状的出现，淋巴细胞活化增殖。其间由于Ｔｈｌ／Ｔｈ２极化状态的不同，机体可发生不同的转归，即痊愈、进入潜伏期或发展到二期。随着机体免疫状态的变化潜伏期和二期梅毒也可以互相转化。而导致机体产生不同分化状态的原因将成为下一步研究的重点，针对该环节的调控将对梅毒的防治产生深远影响。
由于血清固定组各项指标虽较对照组明显异常，但与二期梅毒组相比差异均无显著意义，提示血清固定组患者虽然存在明显的免疫抑制现象，但尚无足够证据说明血清固定现象的产生与Ｔｈｌ／Ｔｈ２分化直接相关。笔者同时还发现，作为临床重要监测指标的ＲＰＲ滴度，与Ｔｈｌ／Ｔｈ２分化的各项指标间无明显相关性。这也从一个侧面提示，体液免疫所产生的（与ＲＰＲ反应相关的）非特异性抗体，在对ＴＰ的防御反应中作用可能非常有限，因而与机体对ＴＰ的免疫防御状态（即Ｔｈｌ／Ｔｈ２极化状态）无明显相关性。
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［收稿日期］２００６－０１－０６［修回日期］２００６－０４－０５
生殖器念珠菌感染１７２例临床分析
刘方，何焱玲，兰东，姜志辉，张迪，刘章萍＋
［摘要］目的了解男、女性生殖器念珠茵感染的发病情况、高发人群、危险因素及主要致病茵型。方法对患者的分泌物进行镜检和培养，将两项均阳性者统计入组。记录患者的年龄、症状、体征等，并用显色培养基对致病菌进行分型。结果１７２例患者中，男性占８６．６３％，女性占１３．３７％；男性患者均有包皮过长；男、女性的主要致病菌为白念珠菌（６８．０２％），克柔念珠茵（２９．０７％）和热带念珠菌（２．９１％）。结论生殖器念珠茵感染患者主要是处于性活跃期的青年男性和女性，包皮过长是男性的危险因素，白念珠菌是主要致病茵。
［关键词］生殖器感染；念珠茵
［中图分类号］Ｒ７５６．５［文献标识码］Ｂ［文章编号］１００１—７０８９（２００６）０９—０５５１—０１
ＣｌｉｎｉｃａｌＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＧｅｎｉｔａｌＣａｎｄｉｄｉａｓｉｓｏｆ１７２Ｃａｓｅｓ
ＬＩＵＦａｎｇ，ＨＥＹａｎ－ｌｉｎｇ，ＬＡＮＤｏｎｇ，ｅｔａｌ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＣｈａｏｙａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣａｐｉｔａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，１００２０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｂｏｕｔｇｅｎｉｔａｌｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ，ｔｈｅｖｕｌｎｅｒａｂｌｅｐｅｏｐｌｅ，ｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｓａｎｄｔｈｅｍａｉｎｔｙｐｅｓｏｆｃａｎｄｉｄａｓｐｅｃｉｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｏｎｌｙｔｈｏｓｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｈｏｓｅｓｅｃｒｅｔｉｏｎｃｏｕｌｄｂｅｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｎｄｃｕｈｉ－ｖａｔｉｏｎｗｅｒｅｅｎｔｅｒｅｄ．Ａｇｅｓ，ｓｙｍｐｔｏｍｓａｎｄｓｉｇｎｓｗｅｒｅｒｅｃｏｒｄｅｄ．Ｐａｔｈｏｇｅｎｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｗｉｔｈｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｍｅｄｉｕｍ．ＲｅｓｕｌｔｓＭａｌｅｐａｔｉｅｎｔｓｏｃｃｕｐｉｅｄ８６．６３％，ｗｈｅｒｅａｓｆｅｍａｌｅｏｃｃｕｐｉｅｄ１３．３７％ｉｎｔｈｅａｌｌ１７２ｃａｓｅｓ．Ａｌｌｍａｌｅｐａｔｉｅｎｔｓｈａｄ
ｒｅｄｕｎｄａｎｔｐｒｅｐｕｃｅ．Ｃａｎ—ｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓｗａｓｔｈｅｍａｊｏｒｓｐｅｃｉｅｓ（６８．０２％），ｔｈｅｎｗｅｒｅＣａｎｄｉｄａｋｒｕｓｅｉ（２９．０７％）ａｎｄＣａｎｄｉｄａｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ（２．９１％）ｉｎｔｈｅｔｏｔａｌ
ｐａｔｉｅｎｔｓ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＭｏｓｔｐａｔｉｅｎｔｓｗｅｌ＇ｅｙｏｕｎｇｐｅｏｐｌｅｗｈｏｗｅｒｅｓｅｘａｃｔｉｖｅ．Ｒｅｄｕｎｄａｎｔ
ｐｒｅｐｕｃｅ
ｗａｓｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｓｆｏｒｍａｌｅｐａｔｉｅｎｔｓ．
ＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓＷａｓｔｈｅｍａｉｎｐａｔｈｏｇｅｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｇｅｎｉｔａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎ；Ｃａｎｄｉｄａ
生殖器念珠菌感染是临床常见病和多发病，严重影响患者的生活质量和性健康…。为了解生殖器念珠菌感染患者的发病情况以及念珠菌的主要致病菌型，笔者对２００３年１１月２５日～２００５年１月５日就诊于本科、有症状，且镜检与培养均（＋）的１７２例患者的临床资料进行了回顾性分析，结果报告如下。
ｌ资料和方法
１．１临床资料共入选１７２例，其中男１４９例，占８６．６３％，年龄１９—４７岁，平均３３．２３岁；女２３例，占１３．３７％，１０—４０岁，平均２４．８４岁。除１例１０岁未成年女性患者外，余均为成
［作者单位］首都医科大学附属北京朝阳医院皮肤科，北京
１０００２０；＊进修医师，山东省淄博市市级机关医院，山东淄博２５５００１
［作者简介】刘方（１９７１一），女，山东省泰安市人，主治医师，医学博士，主要从事皮肤真菌病及遗传性皮肤病的临床研究工作。年人，且有性生活。患者均有明显的临床症状，且镜检与培养均（＋）。
１．２方法询问患者有无糖尿病史，女性患者有无妊娠、长期口服避孕药及抗生素史。观察男性患者有无包皮过长，表面是否有红斑、丘疹、白色分泌物；女性患者阴唇、阴道Ｅｌ、会阴部、肛周有无红肿、皲裂，阴道口及阴道内有无分泌物，分泌物的性质等。
男性以？肖毒钝刀片刮取龟头表面分泌物，女性以无菌棉拭纸取阴道后穹隆分泌物，１例未成年女性标本取自阴道口及会阴红斑浸渍部。每例均采集标本２份，１份做镜检，高倍镜下查到假菌丝者为（＋）；另１份标本接种于沙堡弱培养基（天津金章科技发展公司生产），置３７℃孵箱培养４８～７２ｈ，有乳酪样菌落长出者为培养（＋），挑取单菌落转种于科玛嘉显色培养基（法国梅里埃公司生产，天津金章科技发展公司分装）进行菌种鉴定：绿色为白念珠菌（ＣＡ），灰蓝色为热带念珠菌（ＣＴ），粉红