第一章总论
1.1 概述
1.1.1 项目名称及单位负责人
项目名称：开封制药(集团)有限公司多项生物技术集成实施香菇（菌）多糖产业化项目
主办单位：开封制药(集团)有限公司
法人代表：朱文臣
技术协作单位：河南工业大学
1.1.2 编制依据
（1）开封制药(集团)有限公司提供的香菇（菌）多糖生产技术及有关参数。
（2）项目建设单位提供的有关项目的水文、地质、气象、图纸及工艺等有关设计基础数据。
（3）《药品生产质量管理规范（2010年修订）》关于香菇（菌）多糖及国家有关安全、卫生、劳动保护和环境规范等规定。
（4）国家药监局关于《香菇菌多糖GMP认证检查标准》。
（5）开封制药(集团)有限公司委托河南省医药有限公司编制多项生物技术集成实施香菇（菌）多糖产业化项目可行性研究报告的委托书。
1.1.3 项目编制原则
（1）本着规范、先进、适用、经济的原则，尽量采用国内先进技术和设备。
（2）可研报告从客观实际出发，在充分调查研究市场的基础上，对产品的市场需求，工艺技术方案，厂区布局、技术经济及投资估算等方面作了同客观评价。
（3）按照GMP规范香菇菌多糖升级要求及GMP认证标准进行工程建设，并符合国家食品药品监督管理局颁布的GMP认证规范的要求和规定的标准。
（4）本着三同时为原则，在设计生产及辅助设施的同时，按照国家有关标准考虑环境保护和职业安全卫生设施。
（5）编制可研报告遵循国家防火、安全、卫生、劳动保护、环保等有关规定和规范。
1.2项目单位基本概况
开封制药（集团）有限公司成立于2003年9月26日，公司类型为有限责任公司，占地面积406亩,属国家综合性大型二类制药企业。企业注册资本金人民币20097万元，现有员工1800名，其中中专以上人数1580人，管理人员420人，工程技术人员和各类专业技术人员合计896人。目前企业拥有282个国药准字文号，经营范围包括片剂、硬胶囊剂、香菇菌多糖、软膏剂、滴眼剂、颗粒剂、口服剂、原料药、药用辅料的生产销售，药用中间体及下脚料加工销售等。
医药制造业是高科技、高回报的产业，一直是发达国家竞争的焦点。随着经济全球化的到来，国际市场竞争日趋激烈，也为我国医药工业发展带来了机遇，在这种大背景下，国内医药企业要生存要发展，
必须适应这种新的客观条件，跟得上这种外界大环境的变化规模与变化速度。开封制药（集团）有限公司成立以来，以人为本，以先进的文化理念打造企业优势竞争力，通过数年来的建设和完善，已形成良好的发展机制：2004年11月，企业通过国家“GMP”认证, 2006年12月，被评为省级“高新技术企业”；2007年8月公司被省政府认定为农业产业化省级重点龙头企业，2009年11月被农发行河南省分行评定为AA级信用等级企业, 被河南省银行业协会评为“河南省银行业信用优良客户”，被河南省工商行政管理局、河南省合同管理协会评为“守合同重信用企业”；各类药品经国家、省、市药检部门市场抽检连年100%合格，其中产品已获国家银质奖2个，部优产品3个，省优产品8个；原料药强力霉素获欧洲“COS”认证，目前庆大霉素原料药正在申报美国的“FDA”认证。
经过多年的发展，积累并完善了一整套有关研发、生产、销售的经验，先后承担国家级高技术产业化示范、河南省双百及工业结构调整等产业升级项目，形成了强大的品牌影响力和研发能力，形成了“多品种、大产能、全终端”的独特优势。2009年，开封制药（集团）有限公司在全国制药企业中化学类制药排名16位，综合类制药排名24位。2009年年由于国家实施基本医疗保险目录制度，至2010年该企业已入选国家基本医疗保险目录175个，其中甲类122个、乙类53个，占基本药物目录307个品种的55%以上；其中甘草片、香菇菌多糖等皆为河南省独家品种。根据《医药卫生体制改革近期重点实施方案（2009-2011年）》（国发〔2009〕12号）的规定：三年内，城镇职工医保、城镇居民医保和新农合将覆盖城乡全体居民，参保率均提高到90%以上。而只有进入基本药物目录的药品，才能享有国家制定的这项制度，所以医药生产企业进入国家基本药物目录的药品越多，企业的
生产经营越能产生重大变革，产量、产值、销售才能更快实现持续不断和稳健的增长。
生产经营过程中，企业还根据国内外医药市场的发展趋势，确定了以科技进步和技术创新为主题，以产品结构调整为主线，开发高科技、高附加值产品的战略思想，强力推进技术改造，实现了品牌扩张和企业再造。如合理分布着抗生素、合成、制剂等车间，自身拥有2万KVA的变电站、1600立方米/min空气压缩装置、56T能力的蒸汽锅炉及16眼40T至60T自提深水井。同时公司投入资金对生产车间及生产线进行技术改造，购进了国内一流的大型设备，并聘请郑州大学、河南工业大学、河南大学医学院等高校知名专家、教授作为兼职研究人员，重点发展组合化学技术、现代生物技术，开展多课题研究。目前，企业已有多个全国独家或知名产品：如复方甘草片是国家指定的河南省唯一生产商，强力霉素原料药出口欧美、东南亚等国家和地区。
开封制药（集团）有限公司通过对企业整体改造，企业从原料供应、产品生产、成品库存、到销售网络，呈现出了健康、稳健的发展势头，已经形成一个巨大的产业链。加之经多年市场检验和市场推广，以及大批产品名录入选国家医保目录。预计市场规模每年将以25%-30%的速度递增。由此，开封制药(集团)有限公司架构战略管理平台，企业管理实现了从科学走向科学加艺术的管理，促使企业迅速提升为一个集约型、现代化的企业集团。
1.3 项目单位财务状况
该公司财务管理规范，会计岗位设置、人员配备合理，制定了一套完善的财务制度，资金收支按规定流程办理，逐级审批，资金筹措年初制定计划并严格执行，产品销售基本上实现款现货，各种往来账
项定期核对，应收账款及时回收，几年来财务没有呆、坏账现象，资金管理得到不断加强
公司基本户开设在农发行开封市分行营业部，2009年5月信用等级被中国农业发展银行河南省分行评定为AA。
2008年，实现销售收入60322.09万元，实现利润8805.85万元，税金3237.92万元，资产总额102314.20万元，其中固定资产19012.62万元，负债总额43263.95万元,资产负债率42.29%；
2009年，实现销售收入68954.82万元，实现利润10089.78万元，税金2677.39万元，资产总额108153.05万元，其中固定资产19199.37万元，负债总额40461.96万元,资产负债率37.41%。
2010年，实现销售收入84805.9万元，实现利润7110.6万元，税金2732.1万元，资产总额217881.8万元，其中固定资产26518.5万元，负债总额58788.7万元,资产负债率26.98%。
1.4 本项目课题负责人基本情况
王卫国：男，1962年生，河南省汝州市人。生物制药教授，硕士生导师，河南省学术技术带头人。中国生物化学与分子生物学学会会员，中国微生物学会会员，河南省微生物学会理事，河南省政府采购招投标专家。《中国生物工程杂志》、《食品科学》、《Biotechnology Progress》等刊物审稿专家。1987年毕业于河南师范大学生物系，同年考入中科院病毒所攻读硕士，于90年7月毕业并获硕士学位。毕业后即到南阳理工学院工作，曾任南阳理工学院生化系生化及微生物教研室主任、南阳理工学院实验中心副主任、生化实验中心主任，南阳理工学院生化系教授，南阳
绿环生化技术研究中心副主任。现任河南开封制药集团有限公司技术总工，河南工业大学教授。从事科研教育教学工作十几年来，除圆满完成各项教学任务外，在教学改革、教材建设、实验室建设、提高教育教学质量方面做出了突出成绩；在科学研究与开发等方面也取得了突出成果，先后主讲过《微生物学》、《生物制药工艺学》、《抗生素生产工艺学》、《生物制药技术》、《药物毒理学》、《药剂学》、《工业发酵分析》、《发酵生物技术英语》、《Microbiology》和《环境工程概论》等10余门课程。以第一/二发明人完成6项已获得2项国家发明专利，其中与本项目直接相关专利4项。主持完成与本申请项目相关技术成果4项：完成的省部级成果“香菇(菌)多糖提取纯化新技术”（2000年9月通过河南省科技厅主持的成果鉴定）2001年9月获南阳市优秀科技成果一等奖，2002年6月在由河南省政府等单位主办的2002中国·郑州先进实用技术交易会上获金奖。完成的“莲花菌多糖分离纯化新技术”也于2007年5月通过河南省科技厅和教育厅主持的成果鉴定。“液态法黄酒生产新工艺”98年7月通过河南省科委鉴定并获南阳市科技进步二等奖。“稳定性二氧化氯溶液生产新方法与新工艺”2007年通过河南省科技厅鉴定。以第一/二作者撰写的直接相关研究或技术论文“香菇(菌)多糖分离最隹工艺及最隹原料研究(已被CA收录)”、“香菇(菌)多糖分离纯化技术研究”、“几种测定香菇(菌)多糖中蛋白质含量方法的比较研究”、“香菇(菌)多糖的提取及纯化技术初探”、“A Novel Approach to Deproteinization in Isolation and Purification of
Lentinan”、“A Novel Approach to Degrading Plant Cellulose*----Continual Adding of Materials and Cycling Utilization of Acids and Cellulase (CACU)”、“莲花菌菌株Sd 的液态发酵特性研究”等10余篇分别发表在《中草药》、《Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering》(国家一级) (已被EI收录)、《食品科学》(国家一级)、《中国生物防治》(国家一级)、《中国蔬菜》、《中国食用菌》、《中国酿造》、《生物技术》等国家一级及国内核心刊物上。其中，有2篇于2003年7月获得河南省自然科学优秀学术论文2等奖。主编、副主编出版与该项目直接相关的论著3部：（1）《微生物工程概论》，2000年9月由中国兵器工业出版社出版，主编。（2）《中药与肿瘤免疫研究》，96年8月由中国医药科技出版社出版，副主编。（3）《微生物学》，2001年3月由吉林人民出版社出版，副主编。在发酵工程、生物制药、酿造酒、食品添加剂等领域均取得突出成果。曾于96年4月获南阳理工学院吴天喜奖教金一等奖；97年4月获中入奎奖教金一等奖；98年10月和2000年11月获南阳市科技进步一等奖。2001年9月获南阳市政府优秀学术成果一等奖。2002年9月获南阳市优秀教师。2004年7月荣获2004全球华人生物科学家大会奖。2004年9月荣获河南省学术技术带头人。
第二章项目的基本情况
2.1 项目建设背景
随着我国建设环境友好型社会，大力发展循环经济的需要，加快资源节约型、环境友好型、可持续发展及节能减排等高技术开发成为产业发展的重点。采用生物技术创新引领现代生物产业的快速发展，生物制造、生物医药、生物能源、生物环保等一批新兴产业正在快速形成。面对日益严重的“白色污染”、石油资源的短缺和人类生活水平的提高，亟需开发绿色安全、环境友好、资源综合利用、高附加值的新型微生物发酵产品新技术新工艺，加快微生物制造产业发展，推动传统发酵产业化升级，提高微生物制造产品的国际竞争力。
香菇(菌)多糖是从食用真菌香菇或菌丝发酵液中提取出来的一种能治疗癌症，抗恶性肿瘤，抗病毒，抗感染，提高人体免疫力等具有多种生理药理功能的生物活性物质。香菇多糖是当今世界上公认疗效最为显著的抗癌新药之一，因其独特的疗效，倍受WHO和许多国家，特别是欧美发达国家的医疗权威机构所推崇和青睐。
香菇多糖及其系列产品----香菇多糖下脚料的研发具有非常广阔的前景。如前所述，由于香菇多糖广泛的药理作用，使它在医疗上的应用范围会越来越大，不仅可用于多种癌症的预防与治
疗，而且还有可能用于肝炎、青光眼、肥胖症等疾病的预防与治疗。香菇多糖下脚料----香菇蛋白粉是一种用途相当广泛的食品添加剂，它的研发应用将会为改变我国乃至国外（特别是发展中国家，其饮食中普遍缺乏蛋白质，钙，硒等营养素）人们的饮食结构起到促进作用，将会带动一系列新型或功能食品的开发生产。
通过本项目的建设，全面增强企业的自主创新能力，促进产业技术进步和升级，提高原料转化率和资源综合利用率，提高产品市场核心竞争力和企业经济效益，将起到重要的示范带动作用。
公司原香菇菌多糖生产车间虽然几经升级改造（包括GMP认证的改造），但是随着医药生产形势快速发展，国家对香菇菌多糖的生产要求越来越高，特别是今年一月新发布的药品生产质量管理规范（2010 年修订），该车间的厂房、设备、空气净化系统等已不能完全满足药品生产质量管理规范（2010 年修订）对香菇菌多糖的要求。因此，该公司对香菇菌多糖车间进行GMP质量升级和产业化技术改造已势在必行。
2.2项目建设内容
2.2.1 项目的产能规模
总体建设目标：建立1个符合国家GMP要求的规模化产业化示范生产基地。年产120吨香菇多糖（纯度≥25%）（以1700元/kg 计）或年产香菇(菌)多糖2,040,000mg（纯度≥85%）；以100元/mg 计，年产值达20400万元。
2.2 .2建设的主要内容
项目新增建筑面积3000m2，主要建设生产车间，配套建设、公用和环保设施等。项目建设期二年，采取公开招标的组织方式。项目达产后，形成年产120吨香菇（菌）多糖的生产规模。
本项目的主要建设内容有2项：香菇(菌)多糖液态发酵产业化平台的创建和示范；多级溶媒循环动态热回流法创建香菇(菌)多糖提取浓缩产业化平台和示范应用。
2.3项目技术工艺
2.3.1成果来源及知识产权情况
香菇(菌)多糖液态发酵工艺技术由开封制药（集团）有限公司自主研发成功，率先在我国实现了小规模产业化开发生产。采用中试规模连续开发生产香菇多糖片达五年之久，生产的香菇菌多糖原料药被河南省科技厅评为高新技术产品。内含多糖制备、除杂蛋白及脱色等多项专利技术（1. 一种多糖类药物复合脱色剂及其脱色方法，申请号：200810231538.8（已授权）；2.一种检测真菌多糖的方法，申请号：200810231539.2（于近期授权）；
3. 一种制备真菌多糖的方法，申请号：200810231540.5（于近期授权）；
4.一种多糖类药物除杂蛋白剂及其除杂方法，申请号：200810231541.X（已授权））的香菇(菌)多糖高效制备新工艺和
香菇蛋白粉及香菇保健酒生产技术来自河南工业大学，该项目是一个典型的产学研紧密结合的成果。
2.3.2已完成的研究开发工作及中试情况和鉴定年限
目前中试生产规模可以达到月处理香菇（菌）5吨/月, 年处理香菇（菌）50吨,年产香菇多糖粗品2500kg, 香菇多糖精品100000mg。开封制药（集团）有限公司已采用中试规模连续开发生产香菇多糖片达五年之久，生产的香菇菌多糖原料药被河南省科技厅评为高新技术产品。项目产品已经取得国家新药证书和注册批件（国药准字H41025014），具备产业化条件。
完成相关技术成果4项。已申报并被国家知识产权局受理核心技术发明专利4项。已在国家核心刊物上公开发表直接相关研究或技术论文10余篇。所以，具有良好的产业化开发生产基础。
2.3.3技术或工艺特点以及与现有技术和工艺比较所具有的优势
实践证明，该项目采用的新工艺技术具有以下特点：①改进了传统的单一产品的生产方法，综合性强，副产物利用率高，生产效率高；②采用的多糖制备、除杂蛋白及脱色等多项专利技术，使生产工艺路线缩短1/3；③产品提取率由过去每吨香菇提香菇多糖1.75克提高到2克以上，提高12-25%；④产品单一组分纯度由
85.5％提高到98.1－100％。⑤成本下降25%-30%。⑥经济效益较高，开发出的副产品香菇酒和香菇蛋白粉，能使经济效益提高10-30％。
该项目的创新性除了拥有的4项相关技术成果和4项核心技术发明专利外还表现在：
1）集香菇多糖的液态发酵技术、子实体和菌丝体的提取分离纯化技术于一体构成一种新的香菇（菌）多糖生产工艺，能成功地实现子实体和菌丝体香菇多糖的产业化生产。
2）能实现香菇（菌）多糖及其系列产品的综合化、零排放化的产业化生产。
2.3.4 该重大关键技术的突破对行业技术进步的重要意义和作用
本项目采用自主研发的香菇（菌）多糖的液态发酵和提取分离纯化新工艺，不仅能成功的实现子实体香菇多糖的产业化生产，亦可圆满实现香菇（菌）多糖的液态发酵法生产。该新工艺是集香菇多糖的液态发酵技术、子实体和菌丝体的提取分离纯化技术于一体，集多糖的高效制备、杂蛋白的去除、多糖的脱色和分析检测4项专利技术于一身，以实现香菇（菌）多糖及其系列产品的产业化。
其中自主研发的杂蛋白的去除和多糖的脱色2项国家发明专
利技术的成功应用，再把自主研发的另外2项专利技术——多级溶媒循环动态热回流提取浓缩技术和单相色谱-MALS技术集成起来，不仅能使香菇多糖生产水平上一个新台阶，它将对凡需用到这些专利技术进行相关产品开发生产的整个制药行业的技术升级起到巨大的推动作用。
该项目不仅属于生物技术药物的新产品产业化升级项目，它还直接涉及到食品精深加工业、保健品和新型饮料产业，另外，它也与农业产业结构调整、拉长农业产业链条密不可分。它还将有助于相关的化工原料、化学试剂、制药装备等产业的快速发展。同时也能够在一定程度上推动包装、运输等行业的发展。特别是在目前全球金融、经济危机的情况下，对于扩大内需，帮助部分中小型企业脱离困境，推动生物医药以及相关产业的发展将会起到积极的作用.
2.4总投资及资金来源
2.4.1 投资估算
（1）、本项目固定资产投资为8800万元，其中设备费6000万元，占68 %；安装工程费1350万元，占15%；建筑工程费660 万元，占 8%；其它费用790万元，占9%。
（2）、本项目另需铺底流动资金 1800万元
（3）、本项目总投资10600万元
2.4.2资金来源及筹措
资金筹措方案为：银行贷款4800万元，单位自筹5800万元。贷款偿还期为5年。
表2-1 投资总估算表
表2-2 香菇菌多糖车间综合估算表
2.4.3采用定额、价格及指标
（1）《河南省建筑工程概算定额》
（2）《河南省建筑工程建设其它费用定额及说明》（暂行规定）
（3）《化工设计概算指标》
（4）《中国制药机械新产品大全》（5）化工工艺设计手册
（6）产品样本及厂方报价
（7）省内同类厂家的建设资料2.4.4 主要设备及选型
2.5建设条件落实情况
2.5.1 动力供应
（1）水：本项目日用新水量600MG。循环水由玻璃钢冷却塔冷却，采用敞开式循环冷却水系统供给。根据开封制药（集团）有限公司提供的水文资料及条件，该项目生产和生活用水由公司自备井供给，水质符合生活饮用水标准，水压可保证在0.2-0.3MPa，可满足本项目用水需要。
（2）电：本项目全年用电量 112万度，用电设备总装机容量为1400kW。该厂变电站可满足该项目用电要求。
（3）蒸汽：该项目最大时用汽量12吨，日用汽量167吨，蒸汽来自厂内原有锅炉房，并能满足本项目要求。
（4）冷冻
冷冻：根据生产需要，本项目车间生产和空调所需的冷冻量为1600KW，有车间冷冻站供给。
2.5.2地理位置及水文地质状况
开封市地处豫东平原，黄河以南，距河南省省会郑州70km，东临商丘，南与许昌接壤。陇海铁路和连（云港）—霍（尔果斯）高速公路横穿该市，交通十分便利。
该市属于黄河冲积平原下游，地形西北高、东南低，平均坡降为1/5000，平均地面高度为海拔72 m，地面大部分为砂性土，地势平坦，环境宜人，工程地质属黄土状，轻亚粘土，地下水深1.6m。
地震裂度为六级，抗震按六级设防。
2.5.3气象条件
该区属温带大陆性季风气候，四季分明，气温降雨随季节变化显著，夏秋炎热多雨，冬春干冷多风，其气象条件为：
（1）气温
年平均气温14.0℃
极端最高气温42.9℃
极端最低气温-16.0℃
冬季采暖天数99天。
（2）空气湿度
历年平均相对湿度59%
（3）降雨量
平均年总降水量634.2mm
日最大降雨量176.5mm
（4）降雪量
最大降雪深度300mm
（5）大气压
年平均气压1008.0毫巴
（6）风
风向多东北偏北风；
年平均风速3.3m/s；
最大风速26.8 m/s。
（7）土壤冻结深度
冻结深度260 mm
2.5.4厂址方案
根据建设单位和当地政府部门的意见，将该项目建在开封制药（集团）有限公司院内，建设符合GMP质量升级要求的生产线，原公司内公用工程及辅助配套设施齐全，交通便利，地质良好，环境优美，是理想的技术改造用地。
2. 5. 5消防
为保障安全生产、贯彻以防为主、消防给结合的方针、另外采取必要的安全防火措施，以防止和减少火灾危害，保护国家财产和生命安全。根据《建筑物设计防火规范》的要求，另外消防管网必须连成环状，并有二根进水管与外部水源连通，当一根进水管发生故障时，另一根进水管保证100%进水量。另外消防管网必须保证不低于0.3mpa 的供水压力。
香菇多糖提取工艺的研究进展 香菇多糖提取工艺的研究进展 香菇Lentinusedodes 为担子菌纲伞形科真菌，是世界上第二大食用菌。香菇多糖是香菇中最重要的一种生物活性物质，具有抑制肿瘤、调节免疫、抗病毒和抗氧化等多方面的药理活性，且毒副作用小。香菇多糖的提取常用水提醇沉法、酸碱提取法，但存在提取工艺复杂、溶剂使用量大、时间长等缺点，而且容易造成多糖降解，生物活性降低。本文主要对近年来香菇多糖提取工艺优化研究方面的进展进行阐述。 1.超声波提取 超声波提取法是利用超声波特殊的物理性质，加速介质质点运动、空化作用、振动匀化等以增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而使药效物质加速融人溶剂提高有效成分的得率。 王恒等用超声波辅助法从香菇中提取香菇多糖，通过实验优化确定出香菇多糖最佳提取工艺为超声功率200W ，料液比 35：1，超声时间40min ，香菇多糖提取率为6.72 ％。王俊颖等采用超声法浸提香菇多糖通过正交试验设计确定的最佳工艺为料水比1 : 25，超声温度60° C超声时间30min , 超声功率300W ，多糖得率为8.72 ％。李宏睿等采用正交试验设计，对香菇多糖的提取条件进行优化，并与单纯的热水浸提进行比较。结果表明，在料水比 l：25 ，超声时间35min ，超声功率105W ，热水浸提温度 90 ％，浸提时间20min 的条件下，提取效果最好，多糖提取率为13.75 ％，比单纯热水浸提法提高6.22％。 2.微波提取 微波辅助提取技术主要是通过调节微波加热的参数，有效地加热物料中的目标成分，对目标成分进行选择性提取。刘小丽等研究微波辅助法提取香菇多糖采用单因素试验对固液比、微波辐射功率、辐射时
竭诚为您提供优质文档/双击可除超声波法提取香菇多糖实验报告 篇一：超声波提取香菇多糖汇报 项目名称： 超声波提取香菇多糖 【工作汇报】 超声波提取香菇多糖 操作者姓名：王岚 班级技术102 专业生物技术 前言 1、实训的背景、目的和意义： 实训背景： 香菇(Lentinulaedodes)是侧耳科的 担子菌,味道鲜美,药食两用,具有较好的保健作用。香菇多糖是香菇中的重要营 养成分和有效药用组分,具有抗病毒、抗 肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能,香菇还
原糖对于人体糖分的补充也起着重要作用 测定蛋白质的方法可分为两大类：一类是利用蛋白质的物理化学性质来推算，如密度、折射率、紫外吸收、荧光性等；另一类是利用化学方法来计算，如定氮、双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂反应等 主要测定方法有：双缩脲法、染料结合法、酚试剂法、紫外分光光度法、水扬酸比色法、折光法、旋光法、近红外光谱法. 目前蛋白质测定最常用的方法是凯氏定氮法，是通过测总氮量来确定蛋白质含量的方法。 实训目的及意义： 1、 2、 2、实训要解决的问题： 掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的原理。熟练掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的操作技术。 1、微量凯氏定氮法与常量法的同点？ 2、根据08年国标，样品消化完全一小时之后，需要冷却后加20ml水，为什么会有晶体析出，成分是什么，为什么会析出？ 3、香菇多糖的主要成分是什么？如何脱蛋白？ 3、实训操作关键技能
1．在蒸馏过程中，切勿关闭电炉，否则会引起硼酸液的倒吸。 2．环境中氨气的含量要低。 3．定氮仪各连接处绝对不能漏气。 4．所用橡皮塞、管用前均需处理。其方法是：浸在10％氢氧化钠溶液中煮沸约10min，再经水洗和水煮10min，最后冲洗数次。 材料及方法 1、实训材料及配制、预处理技术 干香菇，蒸馏水； 电热恒温鼓风干燥箱 组织粉碎机 圆底烧瓶，铁架台，温度计 超声波发生器（带加热功能） 真空泵，漏斗，滤纸，滤布，烧杯，量筒，玻璃棒等 微量凯氏定氮蒸馏装置一套、三角烧瓶、酸式滴定管、容量瓶溶液的配制 1．浓硫酸：分析纯，95.5% 2．80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。 3．6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配）
香菇多糖提取工艺的研究 1引言 多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，广泛存在于动物、植物和微生物细胞壁中,是生物体内除核酸和蛋白质以外的又一类重要的生物分子,尤其是一类重要的信息分子[1]。到目前为止，已有近300种的多糖化合物从天然产物中分离出来，其中植物提取水溶性多糖最为重要。从植物中提取多糖主要根据不同溶解度来选择溶剂进行。香菇多糖的提取一般有热水提取法、酸提取法、碱提取法、酶提取法和微波助提法等方法[2]，本文进行了浸提香菇多糖的工艺条件研究，以期获得香菇多糖的最佳提取条件，为其产业化生产提供有效的方法和技术参数。本实验采用各种溶剂和酶的处理,提取香菇多糖,保持多糖的生物活性，效果是明显的。 1.1香菇多糖的组成与药理价值 香菇多糖(LentinanLNT) 是一种β—1,3—葡聚糖，系从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖。多糖以甘露糖为主，含少量的葡萄糖、微量的岩藻糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等；肽链由天冬氨酸、组氨酸、丝氨酸、赖氨酸、谷氨酸等18种氨基酸组成。LNT的化学结构是一种以β—D—[1~3]葡萄糖残基为主链，侧链为(1—6)葡萄糖残基的葡聚糖，平均分子量约为50万道尔顿[3]。 香菇多糖1969年在日本首先发现，自此，国内外学者对LNT作了许多深人的研究。近年来，LNT广泛药理作用研究取得了很大进展。主要的药理价值有：免疫调节作用；抗肿瘤作用[4]；抗病毒作用；对寄生虫、霉菌、细菌等感染均有治疗作用；有抗衰老、抗辐射作用，还具有预防实验性高脂血症和高血糖作用。在临床上LNT还用于治疗小儿反复呼吸道感染，糖尿病，寻常型银屑病，硬皮病，面部扁平，尖锐湿疹等。此外，硫酸化香菇多糖具有显著抗HIV作用，香菇多糖在治疗胃
治疗湿疣的常用药品大全 国家食品药品监督管理局数据查询https://www.doczj.com/doc/222536372.html,/WS01/CL0001/ 1、注射液用重组人干扰素α2b 2、重组人干扰素α2b乳膏或凝胶 3、注射用胸腺肽或胸腺五肽 4、鬼臼毒素酊 5、斑蝥素乳膏 6、咪喹莫特乳膏 7、转移因子胶囊或口服液 8、酞丁安搽剂 9、溶菌酶肠溶片 10、香菇菌多糖片 11、甘露聚糖肽片 12、白细胞介素，简称白介素 13、更昔洛韦注射液 14、盐酸伐昔洛韦片 15、阿昔洛韦片 16、膦甲酸钠氯化钠注射液 17、氟尿嘧啶注射液 18、疣迪搽剂 以上药品排名不分先后 一、注射液用重组人干扰素α2b （国药准字号药品） 【功效主治】 1.用于治疗某些病毒性疾病，如急慢性病毒性肝炎、带状疱疹、尖锐湿疣。 2.用于治疗某些肿瘤，如毛 细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤、非何杰金氏淋巴瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞癌、喉乳头状瘤、卡 波氏肉瘤、卵巢癌、基底细胞癌、表面膀胱癌等。 二、重组人干扰素α2b乳膏或凝胶（国药准字号药品） 【功效主治】主要用于治疗由人乳头瘤病毒引起的尖锐湿疣，也可用于治疗由单纯性疱疹病毒引起的口唇疱疹及生殖 器疱疹。 【用法用量】涂患处，每日4次。尖锐湿疣用药6-8周，或遵医嘱。口唇疱疹及生殖器疱疹连续用药1周，或遵医嘱。 三、注射用胸腺肽（国药准字号药品） 【功效主治】用于治疗各种原发性或继发性T细胞缺陷病，某些自身免疫性疾病，各种细胞免疫功能低下的疾病及肿瘤 的辅助治疗。包括：1．各型重症肝炎、慢性活动性肝炎、慢性迁延性肝炎及肝硬化等；2．带状疱疹、生殖器疱疹、尖 锐湿疣等；3．支气管炎、支气管哮喘、肺结核预防上呼吸道感染等；4．各种恶性肿瘤前期及化疗，放疗合用并用；5 ．红斑狼疮、风湿性及类风湿性疾病、强直性脊柱炎、格林巴利综合症等；6．再生障碍性贫血、白血病、血小板减少 症等；7．病毒性角膜炎、病毒性结膜炎、过敏性鼻炎等；8．老年性早衰、妇女更年期综合
香菇多糖的提取纯化方法 吕红常秀莲* （烟台大学生命科学院，烟台264005） 摘要：香菇多糖是香菇中分离出的一种重要的具有生理活性的物质，具有抗病毒、抗肿瘤、增强人体免疫力等多种功能，在保健食品和药品开发方面具有广阔的应用前景。概括介绍当前常用的热水浸提法、酶解法、微波提取法和深层发酵培养法等6种香菇多糖的提取方法。并简单比较香菇多糖提取的这几种方法并介绍了超滤-渗滤法和活性炭联合陶瓷膜超滤法这两种香菇多糖的纯化方法。 关键词：香菇多糖; 提取; 纯化; 抗癌;抗病毒 Extraction and purification of Lentinan Lvhong changxiulian* (Yantai university life academy of sciences, Yantai 26005) Abstract: Lentinan was isolated from mushrooms with an important physiological activity of substances with anti-virus, anti-cancer, enhance immunity and other functions. It has broad application prospect s in health food and drug’s development. Give overview of the current formulation used in hot water, enzymatic method, microwave extraction and deep fermentation method 6 kinds of mushroom polysaccharides method, And Introduced the Ultrafiltration-filtration method and the Activated carbon ceramic membrane joint ultrafiltration method of Lentinan purification. Keywords: Mushroom polysaccharide ; Separation ; cancer ; antiviral 1引言 香菇多糖(Lentinan) 是一种β-1,3-葡聚糖, 是从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖，能治疗癌症, 抗恶性肿瘤, 抗病毒, 抗感染, 提高人体免疫力等多种生理功能。目前国内对香菇多糖的分离有了很大发展，主要采用的方法有传统热水提取法、酸提取法、碱提取法、这些方法都有其优点，也有其难以克服的不足之处。与传统方法相比微波辅助提取法具有设备简单，快速，高效，安全等特点。 2香菇多糖的提取方法 2.1 热水浸提法 这是最早采用的一种传统方法：香菇多糖溶于水，热水浸提时，香菇组织细胞膨胀破裂，多糖成分浸出。 热水浸提香菇多糖，浸提时的料液比、温度、时间、pH、醇析时的乙醇添加倍数及提取次数是影响多糖得率的主要因素。 对料液比而言，若加水太少，提取不彻底；加水太多，容易降低提取液的固形物含量，不利于以后的分离，且加重了工业生产中的后续工艺，一般为1：20左右。对温度来说，随着提取温度的升高，粗多糖得率逐渐升高，在80%一95%时达到高峰，再提高温度时，粗多糖得率升高趋势趋于平缓，考虑到高温会破坏多糖的结构，影响其生物活性，同时高温提取对工业化生产的设备要求更严格。所以，提取温度一般以80 ℃一95 ℃为宜。 随着提取时间的延长，粗多糖得率逐渐增加，0.5 h一3 h之间趋势明显，继续延长提取时间，多糖得率加趋势逐渐趋于平缓，一般浸提时间为8 h一12 h。热水浸提时的pH为自然pH值，大约在6-8之间。而对醇析时提取液的乙醇浓度来说，随着其逐渐升高，多糖得率亦
食品研究与开发 ２００７．Ｖｏｌ．２８．ＮＯ．０５ 作者简介：林楠（１９８１－），女（汉），在读硕士研究生，主要从事功能性食品的研究与开发。 ＊通讯作者：钟耀广，教授，主要从事功能性食品及食品安全方面的研究。 香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａｅｄｏｄｅｓ）是全球第二大人工种植最为普遍的食用菌［１］，由于香菇多糖具有抗肿瘤、抗病毒、提高免疫和刺激干扰素形成等功能，已成为当前研究的热点。香菇多糖作为一种辅助药物，其毒副作用小，疗效高，具有重要的研究和开发价值。本文试图对香菇多糖的提取、分离方法及其结构、生物活性等方面的研究进展进行概括和综述，为其进一步开发利用提供参考。 １香菇多糖的制备 １．１香菇的预处理 一般用于多糖提取的香菇子实体通常是干品，将 无霉变和虫蛀的优质香菇子实体置于６０℃左右的条件下干燥，以利于粉碎［２］，粉碎后过２０～８０目筛。由于香菇的脂肪含量约为干重的２％～４％［３］，因此一般不考虑脂肪对香菇提取的影响，但也有研究采用石油醚、乙醇等除去原料中的脂肪成分［４￣５］。 １．２香菇多糖的提取 多糖的提取可以采用热水、稀酸、稀碱作为浸提剂。在提取过程中，不仅要考虑到粗多糖的得率，还要保证不破坏多糖的结构。由于酸对多糖的糖苷键有破坏作用，故一般采用热水和稀碱作为浸提剂。热水浸提的温度一般为９０℃～１００℃，浸提时间１ｈ～３ｈ，浸提次数为２次～３次，合并浸提液，离心，收集上清液，减压浓缩到适当体积，加入一定量的乙醇静置过夜，离心，收集沉淀物，干燥得粗多糖。碱浸提通常采用ＮａＯＨ作为浸提液，浓度为０．１ｍｏｌ／Ｌ～１ｍｏｌ／Ｌ。 为了提高香菇多糖的提取率，减少能源消耗，缩短提取时间，研究者们尝试了一些其它的提取方法。张海容等［６］以香菇多糖为研究对象，对微波法及热水浸提法进行了比较，发现微波法的提取率高于传统热水法，且提取时间可以缩短１００倍。念保义等［７］利用超声波辅助热水法从香菇中浸提香菇多糖，不仅可以缩短提取时间，减小料液比，而且提高了提取率，降低了生产成本。董彩霞［８］利用纤维素酶作用于香菇细胞的细胞壁，使之破裂，多糖易从细胞内释放出来，以提高多糖的提取 率。也有研究先采用中性蛋白酶处理香菇粗粉，蛋白酶将与多糖结合的蛋白质酶解，使多糖释放出来，此法与传统工艺相比，提取率提高了４０％以上，多糖中杂蛋白 林楠１，钟耀广２，３，＊，王淑琴３，刘长江３ （１． 大连轻工业学院生物与食品工程学院，辽宁大连１１６０３４；２．上海水产大学食品学院，上海２０００９０；３．沈阳农业大学食品学院，辽宁沈阳１１０１６１） 香菇多糖的研究进展 摘 要：香菇多糖是真菌多糖中的一类，是目前最有开发前途的功能食品和药品资源之一。综述了香菇多糖的提取、 分离纯化、结构分析、生物活性等方面的研究概况。关键词：香菇多糖；提取；分离纯化；结构；活性 ＲＥＶＩＥＷＯＮＡＤＶＡＮＣＥＭＥＮＴＯＦＰＯＬＹＳＡＣＣＨＡＲＩＤＥＦＲＯＭＬＥＮＴＩＮＵＬＡＥＤＯＤＥＳ ＬＩＮＮａｎ１，ＺＨＯＮＧＹａｏ－ｇｕａｎｇ２，３，＊，ＷＡＮＧＳｈｕ－ｑｉｎ３，ＬＩＵＣｈａｎｇ－ｊｉａｎｇ３ （１．Ｃｏｌ ｌｅｇｅｏｆＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＦｏｏｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＤａｌｉａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒｙ，Ｄａｌｉａｎ１１６０３４，Ｌｉａｏｎｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＦｉｓｈｅｒｉｅｓＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００９０，Ｃｈｉｎａ；３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈｅｎｙａｎｇＡｇｒｉｃｕｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０１６１，Ｌｉａｏｎｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｐｏｌ ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍＬｅｎｔｉｎｕｌａｅｄｏｄｅｓｉｓｏｎｅｏｆｆｕｎｇｕｓｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．Ｉｔｉｓｒｅｇａｒｄｅｄａｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｐｒｏｍｉｓｉｎｇｒｅｓｏｕｒｃｅｓｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｏｏｄａｎｄｄｒｕｇｓ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｉｔｉｓｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｔｕｄｉｅｓｏｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎａｌｙｓｉｓ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍＬｅｎｔｉｎｕｌａｅｄｏｄｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｌｅｎｔｉｎｕｌａｅｄｏｄｅｓｐｏｌ ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ；ａｃｔｉｖｉｔｙ综述 １７４
香菇多糖提取 提取法： 用物理提取的方法生产精细化学品，即通过将某一种物质按一定的要求从混合物中提取出来从而获得产品的方法。 张杨杨 精化1122 1、认识香菇多糖 (1)香菇多糖结构式 分子式：〔C42H72O36〕n 分子量：〔1152.9995〕n
(2)香菇多糖性质 香菇多糖（l e n t i n a n;L N T）是从香菇中分离纯化的一种葡聚糖，是以增强T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂。 密度：1.88g/c m3；沸点：1472℃a t760m m H g。 溶于碱溶液或甲酸，微溶于热水或二甲亚砜，不溶于冷水、醇、乙醚、氯仿、吡啶或六甲基磷酰胺。对硫酸和盐酸稳定。 (3)香菇多糖的功能 香菇多糖具有激活细胞免疫、调节多种体液免疫因子、诱导α-干扰素生成，调节机体免疫应答反应，诱导白细胞对肿瘤浸润，导致肿瘤部位血管扩张、出血、坏死，阻止病毒与宿主细胞的结合，提高S O D〔超氧化物歧化酶〕活性，抑制M D A〔丙二醛〕生成，抗脂质氧化，降低胆固醇，调节糖代谢、改善糖耐量、扩张胃肠道产生饱腹感而减轻食欲，降低血糖等功能。 【丙二醛】 英文名：M a l o n d i a l d e h y d e;m a l o n i c d i a l d e h y d e;P r o p a n e d i a l 简称：M D A 分子式O H C-C H2-C H O 分子量72.0634 无色针状晶体，熔点72～74℃，一般含两个结晶水，60℃下真空干燥可得无水物，易潮解，纯的丙二醛在中性条件下稳定，但在酸性条件下不稳定。 由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而得，可在高真空下升华精制，主要用于医药中间体、感光色素的原料。与蛋白质不相容，有潜在的致癌性。
超声波法提取香菇多糖 研究背景： 香菇多糖的性质：香菇多糖以β~1，3葡聚糖为主，含有少量的木糖和甘露糖，具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能 用途：抗肿瘤药。为化、放疗辅助药。主要用于胃癌、肺癌、乳腺癌。 生产技术状况：因为香菇多糖的用途广泛，提取比较方便，越来越多的人投身于这方面的研究，是的提取技术方面的大幅度提升。状况良好。 操作过程： 方案设计：香菇多糖的提取 香菇预先烘干→称取干香菇15克→粉碎→圆底烧瓶→200ml热水70℃→超声波发生器（水预热在60℃左右）→提取45min（中间停顿2次，每次5min）→过滤→滤渣→等滤液体积热水70℃→提取30min（中间超声波停2次，每次5min）→过滤→合并滤液→抽滤→滤液→量体积标识贮藏备用 香菇多糖的测定：1.首先去掉香菇多糖溶液中的的蛋白质：采用氯化钙法：将溶液PH 调节至8---9，加热到85℃，加入氯化钙使浓度达5% (w/v)，搅拌，冷却至室温，过滤，得脱蛋白多糖液。 2.制作标准曲线：准确吸取1mg/ ml 葡萄糖标准溶液1.0 、2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0ml 置于50ml 容量瓶定容，准确吸取该系列溶液各2ml ，然后加入6%苯酚1.0ml 及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。 3. 样品的测定：取去完蛋白的样液2ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度。将吸光度控制在0.2-0.8 人员分工：我们分成两组来完成实验，因为有两组待测夜要进行测定。然后标准溶液是由第一大组完成。由于操作比较简单，我们就一起完成。1人对溶液进行去蛋白，2人制作待测液，1人对待测液进行测定，并记录数据。 实验现象：配置待测液时，加入浓硫酸后溶液变成橙黄色。从而可来额定吸光度。（附照片）总结分析
正式名：香菇多糖汉语拼音：Xianggu 标准号：WS-291（X-256）-97 拉丁文或英文：Lentinan 主要活性成分：香菇[Lentinus edodes（Berk）sing]子实体提取、精制的多糖。按干燥品计算，含香菇多糖应不得少于%。 性状：类白色或浅黄色粉末；无味，有引湿性。在水、甲醇、乙醇或丙酮中几乎不溶；在L氢氧化钠中溶解。 比旋度取本品，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，精密称取适量，加L氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定（中国药典），范围在+2～+15之间。 鉴别：（1）取含量测定项下的溶液2ml，加蒽酮溶液（取蒽酮35mg置100ml量瓶中加硫酸溶解，并用硫酸稀释至刻度，即得，临用配制）5ml，振摇混匀，置水浴中加热，应显蓝绿色。 （2）取本品约10mg，滴加水少许研磨，再加水制成每1ml中含的溶液，置匀浆器中制成匀浆液，取10ml，加高碘酸钠溶液[取高碘酸钠（NaIO4）4.28g，加L硫酸溶液。溶解并稀释至1000ml]1ml，摇匀，立即取反应液4ml，以水为空白对照，照分光光度法（中国药典1995年版二部附录ⅣA），在295nm的波长处测定吸收度（A1），剩余的反应液置避光容器中。于3O℃连续搅拌6小时后，取出，测定吸收度（A2）。两次吸收度之差（A1-A2）应为～。 （3）红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致，在89Ocm-1上附近有弱吸收峰。 检查：酸碱度取本品，加水制成%的匀浆液，依法测定（中国药典1995年版二部附录Ⅵ H），pH值应为～。 特性粘数取本品，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，精密称取适量，加L 氢氧化钠溶液数滴，使充分溶胀，研磨均匀，在25～30℃放置6～8小时，使完全溶解，制成每1ml中含的溶液，摇匀，依法测定（中国药典1995年版二部附录ⅥG第三法），特
香菇多糖的提取纯化及其理化性质的研究3 张 欣 吕作舟 (华中农业大学 武汉 430070) 摘要 本研究以香菇菌盖、菌柄、菌丝体为试材,采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖。并且,从香菇菌盖中提取纯化得到两种新多糖:香菇多糖A(水浸物)和香菇多糖B(碱浸物)。 关键词 香菇 菌盖 多糖 提取 纯化 理化性质 香菇(Lentinula edodes)不仅是一种美味佳肴,也是一种著名的药用菌。我国历代的医药学家对香菇的药性及功能均有著述,如《日用本草》认为香菇“益气、不饥、治风、破血”〔1〕。现代研究结果表明,香菇中含有能降低血浆胆固醇的香菇嘌呤〔2〕,含有诱生干扰素的双链核糖核酸〔3〕,且含有抗肿瘤活性物质———香菇多糖及香菇糖肽〔4,5〕。 1970年G oro Chihara首先从香菇子实体中浸提出6种香菇多糖,并证明其中一种具有明显的抗肿瘤作用,定名为Lentinan〔5〕。自此,世界各地掀起了一股从大型真菌中寻找抗肿瘤药物的热潮。有关香菇多糖的研究尤其活跃,包括提取工艺及分离纯化研究,香菇多糖理化性质及药用价值研究〔6,7,8〕。但对多糖理化性质、结构、药效、药理等方面仍无定论,仍须继续深入研究。 本研究以香菇的菌盖、菌柄、菌丝体为试材,分别采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖,检测分析了粗多糖、多糖、蛋白质与原材料之间量的关系,并且,从香菇菌盖中提纯了两种新多糖,对其理化性质和结构进行了初步研究,为进一步对香菇多糖的结构分析、药效、药理实验提供参考。 本研究主要结果如下: 11以香菇菌盖、菌柄、菌丝体为试材,采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖。粗多糖、多糖得率都以菌盖的水浸物为最高,而以菌丝体的碱浸物为最低。蛋白质得率以菌柄水浸物为最高,以菌丝体的碱浸物为最低。 21氨基酸自动分析仪的分析结果表明:香菇菌盖水浸物、碱浸物中氨基酸含量丰富,其中包括人体必需氨基酸。水浸物主要含天门冬氨酸、谷氨酸;碱浸物主要含天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸。 31采用水浸法、碱浸法从香菇菌盖中提取粗多糖,然后经乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白、CT AB (十六烷基三甲基溴化铵)络合沉淀、氨化钠溶液溶解、透析,得到两种多糖:香菇多糖A(水浸物)和香菇多糖B(碱浸物)〔9〕。这种纯化方法具有简便、经济的特点。 41多糖的纸层析结果表明:多糖A、多糖B均仅为一个斑点,R f值分别为0152,0120。多糖的PAGE电泳结果表明:多糖A,B均为紫红色的单一谱带,R f值分别为0151,0162;它们均从负极向正极移动,表明它们是酸性多糖。紫外光谱分析结果表明:多糖A、多糖B均未发现核酸(260nm)和蛋白质(280nm)特征吸收峰〔10〕。组分含量分析表明:多糖A、多糖B均无含氮物质存在,但含少量灰分和水分。以上对多糖的鉴定结果表明:多糖A、多糖B均一性高,多糖A的纯度为7911%,多糖B的纯度为8312%,符合化学定性定量标准;它们是酸性多糖。 51多糖A,B均为灰白色粉未。多糖B不溶于稀酸。多糖A,B均溶于水、稀碱,尤易溶于热水,不溶于乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯等有机溶剂,其水溶液透明粘稠状,可被5%CT AB络合沉淀。旋光计测得多糖A的旋光率为〔α〕D25℃+ 4311°(水),多糖B的旋光率为〔α〕D25℃+2513°(水)。采用改良型膜渗透压法测得香菇多糖A的数均分量为8131×104,香菇多糖B为9140×104。 61红外光谱分析结果表明,多糖A、多糖B具类似结构,但不属同一种物质。两种多糖在890cm-1均具吸收峰,在840cm-1均无吸收峰,表明它们为β-糖苷〔11〕;多糖A,B都含有-C OO-基团。因此,香菇多糖A、香菇多糖B均是β-酸性异多糖。 71纸层析结果表明:多糖A,B均由葡萄糖(G lc)、半乳糖(G al)、阿拉伯糖(Ara)、木糖(X yl)、鼠李糖(Rha)构成。用正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)为展开剂,以葡萄糖的R f值为1100,则它们的R f值之比为,G lc∶G al∶Ara∶X yl∶Rha= 1100∶1117∶1152∶1176∶2117。气相色谱检测多糖的单糖组成及摩尔比,多糖A为Ara∶Rha∶X yl∶G al∶G lc= 4136∶2103∶1100∶5164∶13180;多糖B为Ara∶Rha∶X yl∶G al∶G lc=9137∶1100∶1164∶7119∶23136。 3 湖北省重点科技计划项目。收稿日期 1999—07—20 43中国食用菌 E DI BLE FUNGI OF CHI NA V ol118,N o16
食用菌育种技术的研究进展 作者：桂明英等来源：中国食用菌，2006（5） 随着人们对食用菌营养价值和药用价值认识的提高以及食用菌生产所带来的经济效益的增加。食用菌育种工作也成为食用菌科技工作者关注的热点之一。现对食用菌育种工作的研究进展进行综述，以期为食用菌的育种工作提供参考。 一、野生食用茵驯化育种 野生食用菌驯化栽培．是食用菌育种的重要内容．栽培的食用菌品种绝大部分是由野生食用菌驯化而来的。例如：阿魏蘑的驯化工作．是中国科学院新疆生物土壤沙漠研究所于1983年开始的．当时曹玉清、牟川静、陈忠纯等在研究驯化分布于新疆托里地区的野生阿魏侧耳fP／eurotu~retainel时，对其形态特征、分类地位、氨基酸含量、生活条件(包括营养、pH值、温度、湿度、光照和通风)、菌丝培养特征、驯化栽培等进行了研究。观察到分离的野生菌株K001、K002与K005在培养特征上的差异。1986年他们又在新疆木垒采集到Kill标本．在进一步研究中发现．K005、Klll在子实体外部形态与菌丝培养特征上与阿魏侧耳显著不同。经研究定名为阿魏侧耳托里变种[Pieurotus ervngii(DC．ex． Fr)0ueI．var．tuolie nsis Mou．n var]。他们1983年对 K001、K002、K005菌株驯化栽培中．发现在有无寄主植物阿魏根屑添加在培养基中的情况下．用棉籽壳、云杉木屑、麸皮等原料组成的培养基上都相继长出了子实体．阿魏侧耳及托里变种自此得到推广．首先在新疆开始人工栽培。已成为近年来大面积进行商业性栽培的一种食用菌新品种。其菇体肥大、颜色洁白、菌肉细腻、质地脆嫩、久炖不绵、清爽滑润、味美可口、营养丰富．投入市场后深受人们的青睐。目前我国引进和驯化栽培成功的食用菌已达80多个种。 二、孢子分离育种 单孢分离就是将采集到的孢子群单个分开培养，让其单独萌发成菌丝而获得纯培养的方法。曹裕汉通过对草菇有性分离选育种研究．表明草菇孢子分离菌株在菌丝形态、生长速率、产厚垣孢子能力、出菇、产量等性状上存在较大的差异。可以在菌丝浓密、气生菌丝多、能产生大量厚垣孢子的菌株中选择到较高产量的菌株应用于生产．解决草菇生产上出现的菌种老化、退化问题：潘保华采用稀释镜检法对金针菇的6个品种．共计l 898个担孢子分离培养．结果检测出144个单孢结实菌株。这些菌株与其它非单孢结实菌株交配．筛选出6个强优组合。这种通过组织分离．而后经出菇或出耳试验，从中筛选出产量高、抗逆性强、遗传性状优良的菌株再进行扩大繁殖的育种方法是目前采用最多的一种方法。 三、食用茵杂交育种 食用菌杂交育种的基本原理是通过单倍体交配实现基因重组。杂交育种通过选择适当的亲本进行交配．从杂交后代中选育出具有双亲优良性状的菌株，具有一定的定向性．这种育种方法适用于异宗结合的食用菌。贺建超等以双孢蘑菇176和2796为亲本菌株。通过单孢子杂交育种，经过初筛、复筛和生产性试验．获得一株新的稳定的双孢蘑菇杂交高产菌株。该杂交菌株具有发菌快、出菇早、产量高、颜色白、朵形较大、菌肉肥厚、抗逆性较强等优点。许益财等选择生态、种性等差异较大的长白山野生香菇和栽培品种A3-3为亲本．采用平板稀释法进行单孢分离．单孢萌发及单核菌丝镜检、配对。从中选择优良组合“抚香一号”。该菌株符合育种目标，是一个产量高、菇形圆正、肉厚、内实、抗逆性强、耐高温、遗传性状稳定的优良品种．可在北方作为更新换代的优良新品种：刘宇、陈文良等用杏鲍菇l号菌株和9号菌株通过单孢杂交育种方法选育出杏鲍菇13号杂交菌株．杏鲍菇13号杂交菌株的子实体产量最高．生物学效率达到109．20％。 四、食用茵诱变育种： 诱变育种是人为利用某些理化因子诱导食用菌遗传因子发生突变．再从多种突变体中选出正突变菌株的方法。诱变育种是获得优良食用菌菌株的常用手段。目前来看对食用菌育种较为有效的理化因子包括60 co、紫外线、离子束、激光、X射线、超声波、快中子、亚硝酸、亚硝酸胍、氮芥、硫酸二乙酯等．研究人员根据各自的实验条件及不同菌种的特点选择不同的诱变方法．在食用菌新菌种的选育工作中已取得了不少成果。
香菇是我国传统的药食两用食品，含有多种有效药用成分。尤其是香菇多糖,是一种宿主免疫增强剂,具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能。医学研究证明,它是通过刺激机体的免疫系统使机体的免疫功能得到恢复和提高,由机体本身的抵抗力去杀死肿瘤细胞。它的作用是间接的，毒副作用小,在临床上具有很好的应用前景[1-2]。香菇多糖在日本已生产并外销。但因工艺复杂,收率低,成本高,普通肿瘤病人无法接受。为此,我们对香菇多糖的提取工艺进行研究,初步探讨出较为理想的浸提工艺,希望为其工业化生产提供一定的理论参考。 1材料与方法 1.1材料与试剂 香菇：购自西安市农贸市场；D318型阴离子交换树脂,LX-200型阴离子交换树脂，D201×7型阴离子交换树脂，LX-67型阴离子交换树脂：均购自西安蓝深公司;葡萄糖,苯酚,浓硫酸,无水乙醇,考马斯亮蓝G-205等均为分析纯。 1.2主要仪器设备 752型紫外可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司；WP700TL23-K5微波炉：格兰仕电器有限公司；电热恒温水浴锅：北京长源实验设备厂；80-2B台式低速离心机：湖南星科科学仪器有限公司；Delta320pH 计：梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司。 1.3提取工艺[3-4] 干香菇→粉碎→加水浸泡20min→微波辐射→热水浸提30min→离心取上清液→浓缩→加乙醇沉淀多糖→离心分离多糖→多糖粗品制成溶液→上树脂柱去除杂蛋白→流出液真空干燥得香菇多糖产物试验中均以1g干香菇粉为提取对象。 1.4检测方法 香菇多糖含量测定：采用苯酚硫酸法[5]。测得标准 微波辅助法提取香菇多糖的工艺 刘小丽，黄晋杰 （长安大学环境科学与工程学院，陕西西安710054） 摘要：研究微波辅助法提取香菇多糖并用离子交换树脂去除杂质蛋白的工艺方法。采用单因素试验对固液比、微波辐射功率、辐射时间、乙醇用量以及杂蛋白的去除条件分别进行了考察。试验结果表明最佳提取工艺条件为:固液比1g∶20mL,微波辐射功率为280W，辐射时间5min，乙醇与多糖提取液体积比为4∶1，香菇多糖提取率可达到9.46%； 采用LX-67阴离子交换树脂在料液pH9时可有效去除蛋白质杂质，多糖纯度可达到85%。 关键词：香菇多糖；微波；离子交换树脂 Study on Microwave-assisted Extraction of Lentinan from Mushroom LIU Xiao-li，HUANG Jin-jie （College of Environmental Science and Engineering，Chang＇an University，Xi'an710054,Sh a anxi，China）Abstract:The methods of extracting lentinan from mushroom with micowave assisting were studied.The ratio of solid to water（g/mL）,microwave power,microwave extraction time,the usage of ethanol,and the remove of protein were studied respectively by the single factor test.The results showed that the optimum conditions of extraction were as follows:the ratio of material to liquid of1g∶20mL,microwave radiation power of280W,the radiation time for5min,the volume ratio of ethanol to liquor of4∶1,under this conditions the extraction rate of polysaccharide can get9.46%.The LX-67negative ion exchange resins were used to remove protein from the rude lentinan with the liquor at pH9,and the purity of lentinan can get85%. Key words:lentinan；microwave；ion exchange resins 作者简介：刘小丽（1975—），女（汉），讲师，在读博士，研究方向：食 品和药物中有用成分提取与分离。
注射用香菇多糖类药物的研究 摘要：当今社会，治疗恶性肿瘤的辅助治疗类的药物不计其数，而天地欣（注射用香菇多糖）作为新型生物反应调节剂，因其是国内唯一可供静脉注射，并且各种各期肿瘤患者都可以使用（即适用性广），疗效显著，未发生任何明显毒副反应[1]等优点，成为肿瘤患者的优先选择。本文将从香菇多糖的药理，药效，工艺合成及优化等方面，对香菇多糖类药品进行研究，并且对其市场前景和发展方向做出了相应的预测和建议。 关键词：香菇多糖药理药效提取优化市场发展 Abstract:Nowadays, Lentimanfor Injection is becoming more and more popular with its adventages.It Is the only medicine which can be used for intravenous injection and patients with various stages of tumor can be used . Because of this, it has become the preferred choice of tumor patients. This paper will let you know more about the Lentinan. key words:LNT Pharmacy theory Extraction Optimization 1.简单介绍 天地欣是由南京绿叶思科公司生产的一种生物反应调节剂，其主要成分是从香菇的子实体中分离出来的一种葡聚糖 ,又称香菇糖、能难治、瘤能停、LC2 33。香菇糖是上世纪 60年代首先由日本学者千原吴郎从香菇子实体中经热水提取,分离纯化的一种具有抗肿瘤活性的葡聚糖 , 70年代应用于临床[2]。香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫和刺激干扰素形成等药理学活性的特点，经全国近五百家大、中型医院九年临床应用，疗效显著，未发生任何明显毒副反应，因此被广泛使用。 2.香菇多糖的药理及药效。 香菇(Lentinusedodes)属担子菌纲侧耳科(Pleurotaeeae)真菌,是世界著名食用兼药用菌之一。它含有多种有效的药用成分,尤其是含有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能的香菇多糖(Lentinan简称LNT)而引起人们广泛的重视。香菇多糖是从香菇的子实体中分离得到的具β -1,6支链和β-1,3支链的β-1,3葡聚糖,相对分子质量在40～80万之间。LNT是一种良好的免疫增强剂,在中国已被广泛应用于治疗多种肿瘤。其结构式为： 大量临床前体内外实验证明,香菇多糖无直接细胞毒作用, 其主要作用是调节宿主免疫机制,激活各种免疫细胞成熟，分化和增殖，使免疫状态由低下恢复到接近于正常能力，使肿瘤细胞受抑制,进而发挥其抗肿瘤活性[4]。但在体内可通过刺激与分化机制激活巨噬细胞、T细胞和NK细胞的诱导和增强作用[3]，提高淋巴细胞转化率，促进抗体形成，从而提高免疫机制[5],与抗癌药物协同增强抗癌效果,产生抗癌作用。 具体细化，香菇多糖的机理从机制的本体来讲，分间接抑制和间接免疫调节两大药效。 2.1直接抑制 香菇多糖能够改变肿瘤细胞膜的某些成分,从而改变细胞膜的生化特性,影响细胞的新
中国食品报/2012年/10月/5日/第008版 食用菌 食用菌深加工的现状及产业前景 江南大学食品科学与技术国家重点实验室鄢嫣陈洁 食用菌是可供食用的一类大型真菌，主要包括蘑菇、香菇、平菇、木耳等。它是一种高蛋白、低脂肪的优质产品，具有多种医疗保健功效，目前在国内外的消费市场正逐年增大。我国是人工栽培和利用食用菌最早的国家，其中黑木耳和香菇的栽培分别于1400年前和800年前起源于我国，银耳和草菇的人工栽培也同样来源于我国。如今，我国的食用菌产业取得了长足的发展，已成为世界食用菌生产和出口的第一大国。 食用菌的价值 ●营养价值食用菌本身含有丰富的蛋白质、较低的脂肪、人体必需却又不能自身合成的8种氨基酸、其含量占鲜重的3%-4%，占干重的30%-40%，在这个层面上可以与鲜牛奶、精瘦肉、鱼肉中的蛋白质和氨基酸的含量相媲美，并且，它又是优于动物蛋白的植物蛋白；食用菌中的碳水化合物的含量为干重的3.8%，脂肪为2.0%，纤维素的含量为10%-20%，还含有30余种生物酶、维生素、多醣体、无机盐、微量元素以及三萜化合物等。所有这些，对人体的细胞构成、新陈代谢和维持正常的生命活动都起着非常重要的作用。 ●保健价值食用菌具有的特殊营养成分决定了其保健功能。目前，已经发现食用菌中含有真菌多糖，糖蛋白、多糖肽、三萜类、甾类、生物碱、挥发油、腺苷、核苷类、十八稀酸衍生物及多种微量元素等多种活性成分。多项研究表明，存在于香菇、金针菇、灵芝、猴头、蘑菇等大型食用菌中的某些活性多糖是较为理想的天然免疫增强剂，具有增强人体的细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫功能的显著功效，可提高身体抵抗病毒和细菌的入侵。存在于香菇中的皂苷、多酚和黄酮类微量元素活性成分对降血脂效果明显。此外，食用菌中含有丰富的微量元素硒、锗等，均与人类寿命的延长、心脑血管疾病的预防以及肿瘤的抑制都有密切的联系。 食用菌类食品的研究现状 食用菌加工可选用的材料十分广泛，从子实体、菌柄、菇脚、碎屑到加工废液都可以作为加工的原料。目前，国内外市场上已推出品种繁多的食用菌系列保健食品，其加工主要分为两类。 ●菌丝体食用菌的菌丝体同样存在丰富的营养价值。在日本，菌丝体培养已经以工厂化的形式提取营养和风味物质。他们用培养出的香菇菌丝体来提取香菇鲜味成分，其中含有14种氨基酸物质，基本可作为调味品或食品添加剂使用。同时，日本人还利用蘑菇的菌丝体支撑各种保健饮料，该饮料经分析其中含有40多种酶、多糖多肽、18种氨基酸、B族维生素等多种营养物质，是一种备受青睐的健康饮品。国内现在也有少数厂家培养菌丝体制作饮料，但都未形成规模。 ●子实体加工我国的食用菌子实体大部分用于鲜食或干制，还有一部分制成罐头，但品种相对单一。利用食用菌的独特风味，可将食用菌制成各类休闲食品，如即食银耳、香菇果脯等。食用菌还可以用来作为饮料的原料，现在市面上主要出现的食用菌原料饮料主要可分为两大类:食用菌果肉饮料和食用菌复合饮料。食用菌果肉饮料主要采用子实体果肉或者其深层发酵液为原料制成。而复合饮料是指采用食用菌和其他的植物或者动物成分复合制成，例如金针菇大豆复合饮料、食用菌大豆酸奶、芦笋银耳蜜汁、银耳果汁饮料等。利用食用菌的子实体还可以制成酒类，此方面以灵芝酒为典型代表。除此之外，采用菌体自溶或者外加酶溶解的方式得到的菌体提取液也作为保健品面市。 食用菌产业的发展现状和前景 ●栽培
香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 摘要:香菇是一种营养丰富的食、药用真菌香菇多糖因其具有如降血脂、抗血栓、抗血 小板聚集及抗肿瘤等生理活性而受到广泛的关注本论文通过香菇深层发酵来生产具有 生物活性的多糖为目的，研究了香菇多糖的发酵生产、提取、分离纯化及结构的初步分 析研究了营养性因子对香菇深层发酵的影响，结果表明葡萄糖、玉米粉、豆饼粉有利于 香菇菌体生长和胞外多糖的形成进一步的正交优化实验，确定了香菇深层发酵培养基为 葡萄糖20gL，豆饼粉60目20gL，KH2PO42gL，无机盐MgSO4·7H2O0.5gL优化发 酵工艺条件为初始pH5.5自然、接种量10％、种龄6d，温度28℃、250mL摇瓶装液 量80mL的条件下，香菇深层发酵结果最佳，在此基础上进行摇瓶发酵曲线测定，确定 了香菇适宜发酵周期为144h，胞外粗多糖含量最高可达542mg100mL，菌体生物量达 8.41mg100mL香菇发酵液胞外多糖最佳提取工艺为75％VV的乙醇浓度沉淀，温度为4℃，溶液pH值7.0时胞外粗多糖得率为670mg100mL发酵清液香菇发酵液胞内多糖 最佳提取工艺为组织捣碎法破壁处理、提取温度90℃、料水比14、提取时间4h、提 取次数2次，胞内多糖的最高产率为14.73mg50g湿菌丝体香菇胞外粗多糖经活性炭 脱色，酶法和三氯乙酸正丁醇法脱蛋白，经DEAE-纤维素柱进行组别分离和 Superdex200进行分级分离，经透析脱盐冷冻干燥得到香菇多糖纯品含量最多的胞外 多糖级分LEN1经红外光谱照射，证明其有多糖的特征吸收峰，是α-型吡喃环多糖经 紫外光谱扫描证明其不含蛋白质经HPLC测定，其分子量为6.5×105，是处于这一分 子量范围的单一成分，把提取出的香菇多糖应用于果蔬复合饮料中，无沉淀产生，证明 香菇多糖可用于饮料生产 标题:香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 专业:食品科学 学位:硕士 单位:山东轻工业学院@ 关键词:香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 论文时间:2007 分类:TS201.5 S646.12 导师:王成忠 语种:中文文摘 香菇多糖提取的原理是什么？ 多糖溶于热水,不溶于60%以上乙醇,也不溶于氯仿正丁醇.所以用热水提取,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质;因为热水也可以将蛋白类物质提取出来,所以用氯仿正丁醇萃取除去提取液中的蛋白. 香菇子实体粉碎,低温烘干,准确称量,乙醚回流脱脂,乙醚提取物回收处理,香菇子实体粉末加入20倍量水,温度50 ℃,反应时间为80 min提取香菇多糖粗品,活性炭脱色[ 5 ],离心除去沉淀,上清液中加入95%乙醇,使乙醇终体积分数为75% ,离心取沉淀即得香菇多糖粗品。 香菇多糖粗品水溶解后过DEAE2 52层析柱(cm × 60 cm,柱高52 cm) ,DEAE2 52层析柱先用pH518的磷酸盐缓冲液平衡,样品溶于此缓冲液后上柱。