增刊张华等：萝卜叶片总ＲＮＡ提取方法比较３７７
为了检验以上三种方法所制备的ＲＮＡ的完整
性，我们将有关的ＲＮＡ样品用１％非变性琼脂糖电泳
进行检测，结果（图１）显示Ｔｒｉｚｏｌ法提取的．趋．ＲＮＡ中
２８Ｓ条带都清晰，１８Ｓ条带有稍微拖尾，５．８Ｓ条带清
晰完整，同时还有一条叶绿体转录产物条带也清晰完
整（图１一ａ），说明提取的总ＲＮＡ较好。改进异硫氰酸
带２８Ｓ和１８Ｓ，并且２８Ｓ的亮度约是１８Ｓ条带亮度的２
倍（图１．ｂ），说明在提取过程中没有发生ＲＮＡ降解，图１三种ＤＮＡ提取方法提取的多卜叶片的
完整性好。ＳＤＳ一酸酚法提取的ＲＮＡ条带很清晰，不总ＤＮＡ电泳图谱
但２８Ｓ和１８Ｓ条带清晰完整，而且还有其他叶绿体转用浓度为２×１０７ｅｆｕ／ｒｎｌ的十字花科黑腐病菌
录产物的条带也很清晰（图１一ｃ），说明提取的总ＲＮＡＬ＾“聃啪“甜∞砷耐ｒｉｓｐｖ．似ｍｐ甜ｔｒｉ“ｍ‘Ｊ
苎苎烹，翼复发生旺璺，竺芋竺兰一酸曼薏鼍鼍筻Ｒ望全改进霎蓑篡嚣慧墨嚣摅髫爹怒凑：
中基因组总ＤＮＡ污染较为严重，而且从条带上看改聂。ｉ￡磊ｉ蕃嘉；１磊磊变性磊磊磊鼋篆釜藉蓉测
进ＳＤＳ一酸酚法提取的总ＲＮＡ电泳条带比其他两个
Ｍ：１００ｂｐＬａｄｄ。，ＰＩｕ。，。：Ｔ，ｉ。ｏｌ法提取的总ＲＮＡ，方法提取的总ＲＮＡ电泳速度要慢（图１一ｃ），这可能是ｂ：改进异硫氰酸胍法提取的总ＲＮＡ㈣改进ｓＤｓ一酸酚法因为含有较多的基因组总ＤＮＡ的缘故，干扰到其提取的总ＲＮＡ
ＲＮＡ的迁移速度。从三种方法提取的总ＲＮＡ样品的
电泳图中可以得出，异硫氰酸胍法提取的总ＲＮＡ质
量高，完整性好，可用于下一步的小ＲＮＡ的分离。
２．２不同方法提取的总ＲＮＡ样品纯度和得率分析
测定ＲＮＡ样品的Ａ：∞／Ａ：。。和Ａ：。。／Ａ：。。的比值是判断ＲＮＡ的纯度常用方法。纯的ＲＮＡ样品的Ａ。。。／Ａ：。。的比值是（２．０４－０．１），不管是ＲＮＡ还是ＤＮＡ，Ａ。。。／Ａ：。。的比值应大于２．０但小于２．４。通常Ａ。。。／Ａ：。。的比值低，表明分离的ＲＮＡ有蛋白质污染或ＲＮＡ发生降解。Ａ。。。／Ａ：。。的比值不在这个范围的说明样品有污染，必须采取一些纠正措施。Ａ。。。／Ａ：。。的比值低则可能有胍盐（来自细胞裂解缓冲液）或卢一巯基乙醇污染。如果Ａ：。。／Ａ：。。的比值大于２．４，应用乙酸钠和乙醇重新沉淀ＲＮＡ，然后用７０％乙醇洗沉淀２～３次，如果是植物ＲＮＡ，低于Ａ：。。／Ａ。。。的比值可能表明有多聚糖的污染［１１１。
为了检测以上三种方法所制备的总ＲＮＡ的纯度，我们测定了它们的Ａ。。。／以。。。和Ａ。。。／Ａ：ａ。的比值，结果（表１）表明，Ｔｒｉｚｏｌ法提取的总ＲＮＡＡｚ∞／Ａ。。。为１．８７，Ａ：。。／Ａ：。。的值为１．１５，两者的比值均小于２．０，说明用Ｔｒｉｚｏｌ法提取的总ＲＮＡ样品中有大量蛋白质污染。改进的异硫氰酸胍法和改进的ＳＤＳ一酸酚法提取的总ＲＮＡ，Ａ姗／Ａ：。。的比值在２．Ｏ～２．１之问，Ａ２５０／ＡⅢ的比值在２．Ｏ～２．２之间，说明这两中方法提取的总ＲＮＡ质量和纯度都较好，样品中的蛋白质和其他杂质较少。
表ｌ不同提取方法所得的ＲＮＡ的纯度和得率
Ｔａｂ．１ＹｉｅｌｄａｎｄｐｕｒｉｔｙｏｆＲＮＡｓｉｓｏｌａｔｅｄｕｓｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓ
３讨论
由于不同的生物材料的内含物组成及ＲＮＡ含量的不同，使得用不同的ＲＮＡ提取方法提取同一生物材料所得的ＲＮＡ的质和量会出现很大差别‘州‘。。为了寻找一种高得率、高质量的萝卜叶片总ＲＮＡ提取方法，本工作通过分析ＲＮＡ的电泳图谱、得率和纯度，比较了用Ｔｒｉｚｏｌ法、改进的异硫氰酸胍法和改进的ＳＤＳ一酸酚法提取的萝卜叶片总ＲＮＡ的质量，发现用改进的异硫氰酸胍法提取所得的总ＲＮＡ得率高、纯
萝卜叶片总RNA提取方法比较
作者：张华， 韦香， 陈相妤， 唐纪良， 唐东阶
作者单位：广西大学生命科学与技术学院,广西,南宁,530004
刊名：
广西大学学报（自然科学版）
英文刊名：JOURNAL OF GUANGXI UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE EDITION）
年，卷(期)：2009,34(z1)
被引用次数：1次
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本文链接：https://www.doczj.com/doc/1917291839.html,/Periodical_gxdxxb2009z1112.aspx