本科生毕业论文
水体中硝酸盐含量的检测研究
蔡友锋
院系：环境与生命科学系
专业：环境工程
班级： 072 学号： 710302216 指导教师：胡文英
职称（或学位）：讲师
二零一一年五月
原创性声明
本人郑重声明：所呈交的论文（设计），是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文（设计）不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本论文（设计）的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。
学生签名：年月日
指导声明
本人指导的同学的毕业论文（设计）题目大小、难度适当，且符合该同学所学专业的培养目标的要求。本人在指导过程中，通过网上文献搜索及文献比对等方式，对其毕业论文（设计）内容进行了检查，未发现抄袭现象，特此声明。
指导教师签名：年月日
目录
1 试验部分 (2)
1.1主要仪器和试剂 (2)
1.2试验方法 (2)
2结果与讨论 (3)
2.1方法还原率与曲线回归 (3)
2.2盐度对水体中硝酸盐还原率影响 (3)
2.3反应条件对水体中硝酸盐还原率的影响 (4)
2.4锌卷用量对水体中硝酸盐还原率影响 (5)
2.5海水中硝酸盐标准曲线 (5)
3水样中硝酸盐含量的测定 (6)
4结论 (6)
致谢 (7)
参考文献 (7)
附录 (8)
水体中硝酸盐含量的检测研究
蔡友锋
（环境与生命科学系指导教师：胡文英）
摘要：水体中硝酸盐通过锌-镉还原剂还原为亚硝酸盐，利用分光光度法采用磺胺和盐酸萘乙
二胺重氮偶氮（B.R）法对亚硝酸盐测定。试验同时研究多种测定硝酸盐含量的还原剂，通过
一系列试验验证选择最佳还原剂，并确定该还原剂最佳反应条件。
关键词：还原剂；硝酸盐；亚硝酸盐；紫外分光
Abstract:Nitrate in water is reduced nitrite by zinc-cadmium reductant, which by used spectrophotometry, trimethoprim-sulfamethoxazole and hydrochloric acid naphthalene ethylenediamine diazotization azo (B.R) method to determine content of nitrate. At the same time the test researched various determ ine content of nitrate reductant, through a series of tests to choose the best reductant, and determine the best reaction conditions of the reductant.
Key words:reductant; Nitrate; Nitrite; Ultraviolet spectrophotometry
硝酸盐广泛存在于自然界中，其主要来源是固氮菌固氮形成，或在闪电高温下空气中的氧气与氮气直接反应化合成氮氧化物，溶在雨水形成硝酸，再与地面的矿物反应生成硝酸盐[1]。固体硝酸盐加热时能分解放出氧，其中比较活泼的金属的硝酸盐仅仅放出一部分氧而形成亚硝酸盐，其余大部分金属的硝酸盐，则是分解为金属的氧化物、二氧化氮和氧[2,3]。并且硝酸盐在高温时是强氧化剂，水溶液几乎没有氧化作用。
人为带进大自然的硝酸盐主要来自于各种化肥工业的排放和各种化肥的施用，海水中硝酸盐部分来源是由汇入河流中溶解的工业化肥硝酸盐。
硝酸盐对人体的影响在于硝酸盐在胃和肠道中可还原为亚硝酸盐.摄取过量的硝酸盐可导致人体活动迟钝，工作能力减退，头晕，昏迷；一次用量过大甚至可以导致死亡。这种盐能够抑制细胞的呼吸作用，使血液中乳酸，胆固醇，白血球的数量增多，蛋白质的数量减少；在同血红蛋白相互作用下，亚硝酸盐形成化合物——红铁血红蛋白，这种化合物能堵塞氧气输送,使人觉得呼吸困难，最后导致死亡[4,5]。所以，水体中硝酸盐的检测具有十分重要的意义。
本文采用紫外分光光度法测定水体中硝酸盐的含量，水体中硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐采用磺胺和盐酸萘乙二胺重氮偶氮（B.R）法测定。B.R检测法的基本原理是在一定的酸度条件下，亚硝酸盐和磺胺发生反应生成重氮，反应5min以后加入盐酸萘乙二胺与重氮化合物偶联生成红色偶氮化合物，静置显色15min后测定。再应用紫外分光法测定亚硝酸盐含量测定来确定硝酸盐的含量。丰富了用紫外分光光度法对硝酸盐的测定方法，着重讨论各种反应条件对硝酸盐还原率的影响，选择效果最佳的还原
条件作为该反应体系中的最终条件。
1 试验部分
1.1主要仪器和试剂
1.1.1仪器
（1）电子天平（SHIMADZU）
（2）往返式电动振荡器，频率150~250次/min（常州国华电器）
（3）紫外分光光度计（TU-1810）（北京普析通用仪器有限公司）
（4）1.0 ml可调定量加液器（日本岛津公司）
1.1.2试剂
（1）a人工海水（盐度35.0）：称取31.0 gNaCl和10.0 gMgSO4用适量去离子水溶解后，转移至1000 ml并用去离子水定容至标线，转移至聚乙烯瓶中。
b人工海水（盐度40.0）：称取35.4 g NaCl和11.4 gMgSO4用适量去离子水溶解后，转移至1000 ml并用去离子水定容至标线，转移至聚乙烯瓶中。
）溶液（ρ=20.0 g/L）。
（2）氯化镉（CdCl
2
（3）对氨基苯磺酰胺溶液：称取5.0 g磺胺用350 ml（1:6）HCl溶解并定容至500 ml，转移至棕色瓶。
（4）二盐酸-1-萘乙二胺溶液：0.5 g萘乙二胺用少量蒸馏水溶解并定容至500 ml，转移至棕色瓶，低温保存（如果溶液显棕色应重新配制）[6]
（5）锌片：将锌片（纯度99.99%。厚度0.1 mm），裁成3.0 cm×5.0 c m小块，卷成内径约为1.5 cm 的锌卷。
（6）a．硝酸盐标准储备液：称取1.011 g硝酸盐（110 ℃烘1 h）用少量蒸馏水溶解后，转移1000 ml量瓶中，稀释至标线，加1.0 ml三氯甲烷，混匀[7,8]。
b．硝酸盐标准使用溶液：吸取1.00 ml硝酸盐标准储备液，于100 ml量瓶中，稀释至标线，摇匀。
试验用试剂均为分析纯，试验用水为去离子水。
1.2试验方法
量取25.0 m l水样于30 ml广口瓶中，同时量取一份人工海水（盐度35.0），分别向两个瓶中放入1个锌卷，加入0.5 ml氯化镉溶液，迅速放到振荡器上，震荡12 min，震荡后迅速取出瓶中的锌卷。分别加入0.5 ml对氨基苯磺酰胺溶液，混匀静置5 min后再加入0.5 ml二盐酸-1-萘乙二胺溶液，混匀静
置15 min 。待颜色稳定后，在分光光度计上，用2.0 cm 测定池，对照人工海水调零，于543.0 nm 波长处测定其吸光值。
2结果与讨论
2.1方法还原率与曲线回归
用操作步骤1.2分别还原0.0 μg 、0.5 μg 、1.0 μg 、2.0 μg 、3.0 μg 、4. 0 μg 、5.0 μg 硝酸盐，以吸光度和硝酸盐含量进行线性回归，得到相关系数γ=0.9995，水体中硝酸盐标准曲线的斜率为0.198（图1.a ）。在同样条件下省略还原步骤，用亚硝酸盐标准溶液制作标准曲线，得到相关系数γ=0.9993，曲线斜率为0.256（图1.b ）。
1
2
3
4
5
6
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
吸光度/A
硝酸盐含量/μg
图1.a 硝酸盐标准曲线
1
2
3
4
5
0.0
0.20.40.60.8
1.01.21.4吸光度/A
亚硝酸盐含量/μg
图1.b 亚硝酸盐标准曲线
通过（图1.a 和图1.b ）两条标准曲线的斜率比值，得到在本方法中水体中硝酸盐还原为亚硝酸的还原率为77.3%，该方法是可行的。
2.2盐度对水体中硝酸盐还原率影响
试验通过稀释人工海水（盐度35.0）得到不同盐度的人工海水水样品，其他反应条件不变，测定样
品硝酸盐的还原率如下图(图2)。
5
10
15
20
25
30
35
40
20
30
40
50
60
70
80
还原率/%
盐度
图2 盐度对硝酸盐还原率的影响
由图2分析可得，盐度在5-35之间，硝酸盐还原率基本保持不变，相对偏差为2.4%。本文中，当采集江河入海口的样品时，样品盐度就范围0-35之间，取10 ml 样品，加入盐度为40的人工海水10 ml 定容到25 ml ，可以确保反应中溶液盐度在16-30之间，因而保证试验中硝酸盐还原率不变。
2.3反应条件对水体中硝酸盐还原率的影响
试验表明，水体中硝酸盐的还原反应中反应条件对试验结果影响比较大，其中反应时间对试验中还原率的影响，水体中硝酸盐的还原率在反应到12 min 达到最大值，随后出现下降。
6
8
10
12
14
16
64
6668707274
767880还原率/%
反应震荡时间/min
图3 反应时间硝酸盐还原率的影响
由图3可以得到反应震荡时间取12 min 时，水体中硝酸盐还原为亚硝酸盐的的还远率为最佳。所以本法中反应震荡时间选择12 min 。
2.4锌卷用量对水体中硝酸盐还原率影响
试验表明，锌卷的面积和形状影响水体中硝酸盐的还原率。通过本法改变锌片面积，其他反应条件不变，不同锌片面积条件下水体中硝酸盐还原率的变化如下图（图4）。
10
12
14
16
18
20
50
55
60
65
70
75
80
还原率/%
锌片总面积/cm 2
图4 锌片面积对硝酸盐还原率的影响
试验结果中可以看出，采用一个锌卷（3.0 m ×5.0 cm ）条件下水体中硝酸盐的还原率大于70%，所以本文其他试验均采用一个锌卷（3.0 cm ×5.0 cm ）。同时，试验使用锌片表面必须光洁明亮，使用前用95%酒精擦拭干净。
2.5海水中硝酸盐标准曲线
a ．在6个25.0 ml 比色管中，分别移入硝酸盐标准使用液0 ml 、0.50 ml 、1.00 ml 、1.50 ml 、2.50 ml 、4.00
ml ，用盐度为35.0的人工海水稀释至标线。分别倒入洁净干燥的6个30 ml 具塞广口瓶中。
b 、向每个瓶子中放入一个锌卷，加入0.5 ml 氯化镉溶液，迅速放在振荡器上，震荡12 min 。震荡后迅速将瓶中锌卷取出。
c ．加入0.5 ml 对氨基苯磺酰胺溶液，混匀，放置5 min 再加入0.5 ml 二盐酸-1-萘乙二胺溶液，混匀，放置15 min 。颜色可稳定4 h 。
d ．颜色稳定后，在分光光度计上，用2.0 cm 测定池，对照人工海水调零，于543波长处，测定其吸光值A ，记录于标准曲线数据记录表并绘出标准曲线。
0.00
0.050.100.150.200.25
0.00.2
0.4
0.6
0.8
1.0
吸光度/A
浓度(mg/L)
图5 海水中硝酸盐标准曲线
通过图5可以看出，本法测定水体中硝酸盐，当水体中硝酸盐含量在0-0.25 mg/L 时，遵守比尔定理。其方程为y=0.23298x+（-0.00039），相关系数γ=0.9995。
3水样中硝酸盐含量的测定
量取25.0 ml 水样于30 m l 广口瓶中（每个采样点水样取三份），之后实验操作与试验方法一致，然后测定吸光值。同时每个水样做一份标准加入回收实验，测硝酸盐的回收量，算出回收率。实验结果如下：
表1 水样的检测结果
样品 测定值（mg/L ） 平均值（mg/L ）
加标量（mg ） 回收量（mg ）
回收率 RSD(%) 兴化湾 0.183,0.182,0.184 0.183 0.1 0.093 93 2.76 平海 0.167,0.172,0.165 0.168 0.1 0.096 96 4.23 南日岛
0.230,0.236,0.233
0.233
0.1
0.095
95
3.38
通过水样中硝酸盐测定结果，南日岛海水中硝酸盐含量明显偏高，主要是因为南日岛鲍鱼养殖基地，饲养环境造成使得海水中硝酸盐含量上升，但是均符合国家和国际标准，相对偏差小于4.23，回收率为
93%-96%。
4结论
本论文紫外分光光度法测定水体中硝酸盐含量，主要从提高硝酸盐还原率靠率着手，研究实验中还原反应体系的主要影响，考虑海水盐度、锌片面积和震荡时间的最佳条件，从实验得到的数据中找出最佳条件，应用到实验并分析实验数据，得出在最佳条件下，实验所得数据更可靠。本法不仅可以测定海
水中硝酸盐的含量，还可以应用到淡水硝酸盐的测量中，品取10 ml淡水样品，加入盐度为40的人工海水10 ml定容到25 ml，可以确保反应中溶液盐度在16-30之间，因而保证试验中硝酸盐还原率不变，让本法应用范围更加广泛。
致谢
论文完成之际，我要特别感谢胡文英老师，在她的悉心指导下，我顺利的完成这次毕业论文设计和实验，再次真诚地感谢胡文英老师。
参考文献
[1]柯国华，汪苹，杨志．好氧反硝化脱氮气态中间产物的研究分析[J]．环境科学与技术，2006，29(7)：45-54.
[2]张正奇．分析化学(第二版)[M]．北京：科学出版社，2006：237-239.
[3]李纯，岑况，范彬．脱除地下水中硝酸盐氮的研究进展[J]．环境科学与技术，2003，26：91—97.
[4]金园.食品营养与卫生学[M].北京：中国商业出版社，1986.12：136.
[5]长江流域水环境监测中心．SL／219—1998水环境监测规范[IV1]．北京：中国水利水电出版社，1998.
[6]国家环境保护总局．水和废水检测分析方法(第四版)[M]．北京：中国环境科学出版社，2002.
[7] 国家海洋局．海洋监测规范第4部分（海水分析GB17378.4-2007）[M]．北京：中国标准出版社，2008.
[8] 祝陈坚．海水分析化学实验[M]．青岛：中国海洋大学出版社，2006.
附录
海水水质标准GB3097-1997 无机氮单位（mg/L）
第一类第二类第三类无机氮≤0.20 ≤0.30 ≤0.40
N-(1-萘基)-胺光法（GB 13580.7-92) 1、原理 在Ph1.7一下，亚硝酸盐和对氨基苯磺酸反应生成重氮盐，在与N-(1-萘基)-乙二胺偶联生成红色染料，于540nm波长处测量吸光度，根据试样吸光度和亚硝酸盐浓度成正比的关系，即可进行定量 2、仪器 2.1，分光光度计 2.2, 25ml比色管 3、试剂 3.1，亚硝酸盐标准贮备液：1.000ug/ml，标准称取1.4998g亚硝酸钠（干燥器中干燥24小时）溶于水，并定容至1000ml 3.2，亚硝酸盐标准使用液：10ug/ml，标准吸取5.00ml亚硝酸盐的标准贮备液于500ml容量瓶中，用水稀释至刻度，使用时稀释配制。 3.3，盐酸溶液，（1+6），量取50ml浓盐酸加入到300ml水中，摇匀。 3.4，对氨基苯磺酸溶液：10g/L，称取5g对氨基苯磺酸，溶于350ml（1+6）盐酸溶液中，用水稀释至500ml,此溶剂可稳定数月 3.5，盐酸N-(1-萘基)-乙二胺1g/L：称取0.5g盐酸N-(1-萘基)-乙二胺溶于500ml水中，贮存于棕色瓶中，在冰箱里保存，此时
机可稳定数周，如变成深棕色则弃去重新配制。 4、方法 校准曲线的绘制，取25ml比色管6只，分别加入亚硝酸盐标准使用液0,0.50,1.00,2.50,5.00,10.0,ml，用水稀释至标线。各加入1.0ml对氨基苯磺酸溶液，摇匀后放置2~8min,加1.0mlN-(1-萘基)-乙二胺溶液，摇匀，以水作参比，用10nm吸收池在540nm 波长处测量吸光度，绘制校准曲线 样品测定，根据水样中的亚硝酸盐含量，吸取10.0~15.0ml水样于25ml比色管中，加水至25ml，以下按绘制标准曲线的步骤进行操作，测量试样的吸光度，从校准曲线上查出亚硝酸盐的含量 5、分析结果的表述 水样中亚硝酸盐（按NO2-计）浓度以mg/L表示，按下列计算式中：C-----------------水样中亚硝酸盐浓度mg/L M----------------冲校准曲线上查得亚硝酸盐含量，ug V-----------------取样体积
硝酸根离子的检测，我们都经常用到，测量方法也较多，但是，到底什么时候该用什么方法呢？本文做一个简单的对比。 一、紫外分光光度法直接测量，其原理是硝酸根离子在210nm波长处有紫外吸收，并且可以用双波长法扣除有机质的干扰。下图是使用这种方法做的硝酸根标准曲线 [Abs] = K0 + K1 * [C] + K2 * [C]^2 K0 = 0.336202 K1 = 0.855646 K2 = 0.000000 R = 0.996219 Num C(mg/L) Abs 210nm 处 275nm处 1 0.50000 0.70084 0.73 886 0.03802 2 1.00000 1.22997 1 .26350 0.03353 3 1.50000 1.68886 1 .68998 0.00112 4 2.50000 2.43119 2 .46494 0.03375 该方法是在275nm和210nm处分别测量吸光度，Abs为这两个波长处的吸光度值之差。在不存在其他干扰的情况下可以使用这种方法，操作十分简便，效率高。 二、酚二磺酸法
原理：浓硫酸与酚作用生成二磺酸酚，在无水条件下二磺酸酚与硝酸盐作用生成二磺酸硝基酚，二磺酸硝基酚在碱性溶液中发生分子重排生成黄色化合物，最大吸收波长为410nm，利用其色度和硝酸盐含量成正相关的性质，可进行比色测定。 下图为标准曲线 [Abs] = K0 + K1 * [C] + K2 * [C]^2 K0 = 0.030334 K1 = 0.398435 K2 = 0.000000 R = 0.998389 Num C（mg/L） Abs 1 1.00000 0.44034 2 2.00000 0.80931 3 3.00000 1.30700 4 5.00000 1.97417 5 6.00000 2.42458 这种方法适用范围广，受干扰小。但是操作较复杂，尤其是需要制备酚二磺酸，反应为沸水浴六个小时，对实验人员的耐心和细心都是一个考验。 三、还原-显色法 原理：水样中的硝酸盐经过内装颗粒状铜-镉柱时，在一定的条件下，被还原为亚硝酸盐。还原生成的亚硝酸盐（包括水样中原有的亚硝酸盐）与对氨基苯磺酰胺重氮化，再与二盐酸-1-萘乙二胺偶合，形成玫瑰红色偶氮染料，用分光光度法测定。减去不经镉柱还原，用重氮化偶合比色法测得的亚硝酸盐，即可得出硝酸盐氮含量。 本实验室没做过这个实验。从原理上看，该法对实验设备要求较高。另外，该法可以结合流动分析仪使用，适合于批量检测。 以上三个方法中，直接比色法是最简便的检测方法，HG/T4135-2010稳定性肥料标准中使用
硝酸盐测定 1原理 样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，溶液通过镉柱，或加入镉粉，使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子，在弱酸性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N－1萘基乙二胺偶合形成红色染料，测得亚硝酸盐总量，由总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量。 2试剂 2.1氯化铵缓冲溶液(pH9.6～9.7)：同2.1。 2.2硫酸镉溶液(0.14mol/L)：称取37g硫酸镉(CdSO4·8H2O)，用水溶解，定容至1L。 2.3盐酸溶液(0.1mol/L)：吸取8.4mL盐酸，用水稀释至1L。 2.4硝酸钠标准溶液：准确称取500.0mg于110～120℃干燥恒重的硝酸钠，加水溶解，移于500mL容量瓶中，加50mL氯化铵缓冲液，用水稀释至刻度，混匀，在4℃冰箱中避光保存。此溶液每毫升相当于1mg硝酸钠。 2.5硝酸钠标准使用液：临用时吸取硝酸钠标准溶液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，临用时现配。此溶液每毫升相当于10μg硝酸钠。 2.6亚硝酸钠标准使用液同2.8。 2.7镉柱： 2.7.1镉粉还原效率的测定：镉粉使用前，经盐酸浸泡活化处理，再以水洗两次，用水浸没待用。用牛角勺将镉粉加入25mL带
塞刻度试管中，至5mL刻度；用少量水封住。吸取2.0mL硝酸钠标准使用液，加入5mL氯化铵缓冲液。盖上试管塞，振摇2min，静止5min，用漏斗颈部塞有少量脱脂棉的小漏斗过滤，滤液定量收集于50mL容量瓶中，用15mL水少量多次地洗涤镉粉，洗液与滤液合并。加5mL乙酸(60%)后，立即加10mL显色剂，加水稀释至刻度，混匀，暗处置25min。用1cm比色杯，以标准零管调节零点，于550nm波长处测吸光度，根据亚硝酸盐标准曲线计算还原效率。 2.7.2计算 式中：X2——还原效率，%； 20——硝酸盐的质量，μg； m3——20μg硝酸盐还原后测得亚硝酸盐的质量，μg； 1.232——亚硝酸盐换算成硝酸盐的系数。 3分析步骤 3.1样品处理 称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70mL水和12mL氢氧化钠溶液(20g/L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH＝8，定量转移至200mL容量瓶中加10mL硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5mL氢氧化钠，混匀。置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20mL，收集滤液备用。 3.2测定(用镉粉法还原硝酸盐为亚硝酸盐)
水中亚硝酸盐含量测定 来源：大禹网 什么叫水中的亚硝酸盐? 天然水中亚硝酸盐的含量很低。在洁净的地表水中，亚硝酸盐的含量一般不会超过O．1 mg／L。 亚硝酸盐是氮化合物无机化的中间产物，不稳定。分析水中亚硝酸根(NOf)可以推测水体的被污染程度及其氧化还原程度。 同时，亚硝酸根的测定，应在水样采集后立即进行，以免其成分发生改变。亚硝酸盐含量(亚硝酸盐紫外光度法)的测定原理是什么? 在波长219．0nm处，硝酸根离子与亚硝酸根离子的摩尔吸光系数相等。水中某些有机物在该波长处也有吸收，为了消除干扰，可取两份水样，其中一份加入氨基磺酸破坏水样中的亚硝酸根离子，作为空白对照，在219．0nm测定另一份水样的吸光度，从而计算出水样中亚硝酸盐的含量。 亚硝酸盐含量(亚硝酸盐紫外光度法)是怎样进行测定的? (1)标准曲线的绘制 ①准确吸取O．5mL、1 mL、1．5mL、2mL、2．5mL、3mL亚硝酸钠标准溶液，分别注入一组25mL比色管中，用试剂水稀释至刻度，摇匀。 ②以试剂水作空白对照，在219．0nm处，用1 em石英比色皿测定其吸光度，并以吸光度为纵坐标，亚硝酸根含量(mg)为横坐标绘制标准曲线。 (2)水样的测定 ①准确吸取两份各10mL经慢速定量滤纸过滤的水样，分别注入25mL比色管中，一份水样加入1mL 1％氨基磺酸溶液，用试剂水稀释至刻度，摇匀(A样)。 ②另一份水样用试剂水稀释至刻度，摇匀(B样)。 ③以上述A样为空白对比液，在219．0nm处，用1 cm石英比色皿测定B 样的吸光度，从标准曲线上查出相应的亚硝酸根离子含量(mg)。 水样中亚硝酸盐含量戈(mg/L)可用下式求出：
食品中亚硝酸盐的检测方法 方法一：亚硝酸盐快速检测管使用说明： 方法原理：按照国标GB/T 做成的速测管，与标准色卡比较定量。 操作方法： 1. 食盐中亚硝酸盐的快速检测及食盐与亚硝酸盐的快速鉴别：用袋内附带小勺取食盐1平勺，加入到检测管中，加入蒸馏水或纯净水至1ml刻度处，盖上盖，将固体部分摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为食盐中亚硝酸盐的含量mg/ kg，（国标规定食盐（精盐）中亚硝酸盐的限量卫生标准应≤2 mg/kg）。当样品出现血红色且有沉淀产生或很快退色变成黄色时，可判定亚硝酸盐含量相当高，或样品本身就是亚硝酸盐。 2. 液体样品检测：直接取澄清液体样品1ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，找出与检测管中溶液颜色相同的色阶，该色阶上的数值即为样品中亚硝酸盐的含量mg/L（以NaNO2计）。（牛乳及豆浆也可直接检测，结果不得超过L ，有颜色的液体样品可加入一些活性炭脱色过滤后测定）。 3. 固体或半固体样品检测：取粉碎均匀的样品或至10ml比色管中，加蒸馏水或去离子水（纯净水）至刻度，充分震摇后放置，取上清液（或过滤或离心得到的上清液）加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为样品中亚硝酸盐的含量mg/ kg，L（以NaNO2计）。如果测试结果超出色板上的最高值，可定量稀释后测定，并在计算结果时乘上稀释倍数（如从10ml比色管中取出转入另一支10ml比色管中，加水至刻度，从中取加入到检测管中测定，测试结果乘上100（倍稀释）即为样品中亚硝酸盐的含量。 方法二：通过镀铜镉粒将硝酸盐还原为亚硝酸盐，并测其吸光度来计算牛奶中硝酸盐与亚硝酸盐含量的方法，可以检测市售牛乳中硝酸盐和亚硝酸盐。 方法三：检测硝酸盐有试纸条法，检测亚硝酸盐可应用硝酸根与无水对氨基苯磺酸重氮化再与奈胺偶合呈紫红色染料，根据颜色深浅来判定牛奶中亚硝酸盐的含量。但是两种方法准确度低，因而该方法还不够完善。 方法四：光度法 测定亚硝酸盐占据了重要的地位目前，光度法测定亚硝酸盐的方法除经典的格里斯试剂比色法及其改良法外，又有一些报道如催化（褪色）光度法流动注射系统-分光光度法顺序注射系统-分光光度法导数光度法等分光光度法主要有3种：可见分光光度法、紫外分光光度法、红外分光光度法。 方法五：示波极谱法 示波极谱分析法是指在特殊条件下进行电解分析以测定电解过程中所得到的电流- 电压曲线来做定量定性分析的电化学方法示波极谱法是新的极谱技术之一，该方法的优点是灵敏度高适用范围广检出限低和测量误差小等优点示波极谱法的原理是将样品经沉淀蛋白质去除脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，在弱碱性条件下再与8-羟基喹啉偶合成染料，该偶合染料在汞电极上还原产生电流，电流与亚硝酸盐浓度成线性关系，可与标准曲线定量在示波极谱仪上采用三电极体系，即以滴汞电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂电极为辅助电极进行测定测定时要注意显色条件的严格控制8- 羟基喹啉
泡菜中亚硝酸盐的检验 实验组长：陈佶 实验组员：郝吴双石行健丁逸苇吴纪轩吕志轩 实验日期：11月23日 ~ 12月6日 实验准备（资料查阅）： 心得体会： 这是我们第一次进行食品分析与检验实验课程。实验内容是食品中亚硝酸盐含量的测定。在这其中我学会了用盐酸萘乙二胺测量亚硝酸含量的基本操作技术，拓展了视野，无论将来我是否会从事生物方面的工作，这都将是我的一笔宝贵财富。 感谢老师耐心的讲解，使得我们对实验的各项要求目的都有了明确的掌握。但由于水平有限，实验报告中定有纰漏错误，请老师不吝赐教！
一、前言 “亚硝酸盐”这一名词对我们来说并不陌生，这是一类无机化合物的总称。主要指亚硝酸钠，这是一种白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。其外观及滋味都与食盐相似，并在工业、建筑业中广为使用，肉类制品中也允许作为发色剂限量使用。由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高。食入0.3～0.5克的亚硝酸盐即可引起中毒甚至死亡。 我们通过实验测定了泡菜中不同时期的亚硝酸盐的含量，这不仅是一次美妙的实践，更为我们的生活提供了指南，让我真真正正的接触到了这个平时只出现在报道上的奇妙物质。 二、实验原理 泡菜的制作离不开乳酸菌，乳酸菌是厌氧细菌，在无氧的情况下，将葡萄糖分解成乳酸。这其中也生成了一定量的的亚硝酸盐。 在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰色染料。将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。 三、设备及试剂 泡菜坛、蔬菜、三角瓶、量筒、烧杯、pH试纸、玻璃棒、微量可调移液器、试管、亚硝酸盐含量的测定试剂盒。
实验食品中亚硝酸盐含量测定 （格里斯试剂比色法） （—）目的 熟悉食品中亚硝酸盐的卫生标准，掌握食品中亚硝酸盐含量测定的基本方法。 （二）原理 样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，在与N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料后，与标准比较定量。（三）试剂 实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。 1．氯化胺缓冲液lL容量瓶中加入500ml水，准确加人20.0ml盐酸，振荡混匀，准确加入50ml氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。 2．0.42mol／L硫酸锌溶液称取120g硫酸锌（ZnSO4·7H20），用水溶解并稀释至1000ml。 3. 20g／L氢氧化钠溶液称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。 4. 对氨基苯磺酸溶液称取10g对氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。 5. 0.1％N－1－萘基乙二胺溶液称取0.lg N－1－荼基乙二胺，加60％乙酸溶解并稀释至100ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。 6. 显色剂临用前将0.1％N－1－萘基乙二胺溶液和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。 7. 亚硝酸钠标准溶液准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，加100ml氯化胺缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500ug的亚硝酸钠。 8．亚硝酸钠标准使用液临用前，吸取亚硝酸钠标淮溶液1.00ml，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0ug亚硝酸钠。（四）仪器 1．小型粉碎机
硝酸盐 硝酸盐是由硝酸衍生的化合物的总称。硝酸盐是离子化合物，含有硝酸根离子NO3—和另一正离子，如硝酸铵中的NH4+离子。由金属离子和硝酸根离子组成的化合物，重要的有：硝酸钠、硝酸钾、硝酸铵、硝酸钙、硝酸铅、硝酸铈等。如：AgNO3（银离子和硝酸根离子），Zn(NO3)2（锌离子和硝酸根离子）……都是硝酸盐。NaNO3（钠离子和硝酸根离子）只是“硝酸盐”的一种。硝酸盐极易溶于水，所以溶液中硝酸根不与其他阳离子反应。 硝酸盐测定方法的比较： 表1 水中硝酸盐测定方法的比较 酚二磺酸分光光度法 1、试剂 （1）酚二磺酸：称25g苯酚置于500mL锥形瓶中，加150mL浓硫酸使之溶解，再加75mL发烟硫酸（含13%三氧化硫）。充分混合。瓶口插一小漏斗，小心置瓶于沸水中加热2h，得淡棕色稠液，贮于棕色瓶中，密塞保存。
（2）硝酸盐氮标准贮备溶液：称取0.7218g经105—110℃干燥后的硝酸钾（KNO3）溶于水中，移入1000mL容量瓶，稀释至标线，混匀。加2mL三氯甲烷作保存剂，至少可稳定6个月。每毫升该标准储备液含0.1000mg硝酸盐氮。（3）硝酸盐氮标准使用溶液（10mg/L）：吸取50.0mL硝酸盐氮标准贮备液，置蒸发皿内，加0.1mol/L氢氧化钠溶液使调至pH=8，在水浴上蒸发至干。加入少量水，移入500mL容量瓶中，稀释至标线，混匀。贮于棕色瓶中，此溶液至少稳定6个月。（注：本标准溶液应同时制备两份，用以检查硝化完全与否。如发现浓度存在差异时，应重新吸取标准贮备液进行制备。） （4）硫酸银溶液：1.00g/L （5）氢氧化铝悬浮液：将125g硫酸铝[KAl(SO4)2·12H2O]或硫酸铝铵[NH4Al(SO4)2·12H2O]溶于1000mL蒸馏水，加热至60℃，然后边搅拌边加入55mL氨水。放置约1h后，移至大瓶中，反复洗涤沉淀物，直至洗涤液中不含氯离子为止。 2、采样 水样中硝酸盐的测定，应在采样后尽快进行。如不能及时测定，为了抑制微生物活动的影响，应于每升水样中加入0.8mL浓硫酸，并于4℃保存。测定前用氢氧化钠中和。 3、测定步骤 （1）标准曲线的绘制：分别吸取一组硝酸盐氮标准使用液与一组50mL比色管中，用以配制系列标准溶液，将各比色管加入至约40mL，加3mL氨水使呈碱性，稀释至标线，混匀。在波长410nm处，以水为参比，测量吸光度。 将上述测得的吸光度减去空白后，绘制吸光度对硝酸盐氮的标准曲线。 （2）水样的预处理：水样混浊或带色时，可取100mL水样将其加2mL氢氧化铝悬浮液震荡，静置，过滤，弃去20mL初滤液。 水样中含有氯离子，则可用硫酸银沉淀后过滤去除。 水样中含有亚硝酸盐，则可先将亚硝酸盐氧化成硝酸盐，然后从硝酸盐氮的测定结果中减去亚硝酸盐氮的含量。 （3）样品的测定：取50.0mL经过预处理的水样于蒸发皿中，用pH试剂检查水样呈微碱性（pH=8），否则调节之；置水浴上蒸发至干。加1.0mL酚二磺酸，用玻璃棒研磨，使试剂与蒸发皿残渣充分接触，放置片刻，再研磨一次，放置
实验肉制品中亚硝酸盐的测定 （盐酸萘乙二胺法） 一、目的与要求： 1.熟练掌握样品制备、提取的基本操作技能。 2.明确与掌握盐酸萘乙二胺比色法测定亚硝酸盐的基本原理及操作方法。 二、原理： 样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，生成的重氮化合物，再与盐酸萘乙二氨偶合形成紫红色染料，此“染料”颜色的深浅与亚硝酸盐的含量成正比，其最大吸收波长为538nm ,可以测定吸光度并与标准比较定量。反应式如下：见教材P316 1．重氮化反应： 2．偶合反应： 三、样品、试剂与仪器 样品：品名： 厂家： 试剂： 1.蛋白质沉淀剂（公用） （1）饱和硼砂溶液：称取5克硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100毫升热水中，冷却 后备用。 (2) 亚铁氰化钾溶液：称取10.6克亚铁氰化钾[K4Fe9(CN)5.3H2O]，溶于水后，稀释至 100毫升。 乙酸锌溶液：称取11g Zn(CHCOO)2 .2H2O加1.5mL冰乙酸，溶于水定容50mL。 2.显色剂 （1）0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4克对氨基苯磺酸，溶于100毫升20％的盐酸 中，避光保存。100ml/4组 （）0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升重蒸馏水中， 避光保存。 100ml/4组 3.亚硝酸钠标准原液：精密称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠， 加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于200微克亚 硝酸钠。 4.亚硝酸钠标准使用液(5μg NaNO2/ml)：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 5.00毫升， 置于200毫升容量瓶中，加重蒸馏水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5μg亚硝 酸钠。亚硝酸钠标准原液由教师提供。 5.1：4盐酸 配制显色剂1用，每4组100ml。 仪器： 1. 小型绞肉机。 2. 721分光光度计。 3．25ml比色管每组7支 四、操作方法： 1.样品处理： 称取5.0克经绞碎混匀的样品，置于50毫升干洁的小烧杯中，加入12.5毫升饱和硼砂溶液，以玻璃棒搅拌均匀，以70℃左右的重蒸馏水约300毫升分数次将样品全部洗入500毫升容量瓶中。（此容量瓶专用）
实验二 肉质品中亚硝酸盐含量的测定（比色法） 一、 原理和目的 （一）原理： 样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为550 nm ，可测定吸光度并与标准比较定量。反应式如下 （二）目的： 我国是农业大国，化肥的大量使用主要造成了食品中硝酸盐的污染。硝酸盐进入人体，产生直接毒害和慢性毒害，因此硝酸盐的检测具有特别重要的意义。此试验是应用比色发来进行硝酸盐的检测。 二、试剂 （1） 氯化铵缓冲溶液，pH9.6～9.7：1L 容量瓶中加入500ml 水，准确 加入20.0ml 盐酸溶液，摇匀。准确加入50ml 氢氧化铵，用水稀释 至刻度，必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调pH 至所需范围。 （2） 0.42mol/l 硫酸锌溶液：称取120g 硫酸锌（ZnSO4·7H2O ），用水 溶解，稀释至1L 。 （3） 20g/l 氢氧化钠溶液：称取20g 氢氧化钠，用水溶解，稀释至1L 。 （4） 对氨基苯磺酸溶液：称取10g 对氨基苯磺酸，溶于700ml 水和300ml 冰乙酸中，置棕色试剂瓶中混匀，室温贮存。 （5） 1g/L 盐酸萘乙二胺溶液：称取0.1g 盐酸萘乙二胺，加100ml60%乙 酸溶解混匀后，置棕色试剂瓶中，在冰箱贮存，一周内稳定。 （6） 显色剂：临用前将1g/L 盐酸萘乙二胺和对氨基苯磺酸溶液等体积 混合，临用现配，仅供一次使用。 （7） 亚硝酸钠标准贮备液：精密称取250.0mg 于硅胶干燥器干燥24h 的 亚硝酸钠，加水溶解移入500ml 容量瓶中，加100ml 氯化铵缓冲溶 液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光贮存。此溶液每毫升相当 于500μg 的亚硝酸钠。 （8） 亚硝酸钠标准使用液：准确吸取亚硝酸钠标准贮备液，稀释100倍， 临用现配，此溶液每毫升相当于5μg 的亚硝酸钠。 三、仪器：小型铰肉机，分光光度计，组织捣碎机，恒温水浴 四、操作步骤 （1）样品处理：准确称取10.0g 经铰碎混匀的样品，置于组织捣碎机中，加70ml 水和12ml20g/L 氢氧化钠溶液，打碎，混匀，测试样品溶液的pH ，转移至200ml 容量瓶中，加10ml 硫酸锌溶液，混匀，在60℃水浴中加热10min 。取出，冷至室温，稀释至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液20ml ，收集滤液待测。 NO 22H +SO 3H H 2N N N +SO 3H NHCH 2CH 2NH 22.H Cl -2HCl SO 3H N N NHCH 2CH 2NH 2-H 2O +++紫红色染料
中华人民共和国行业标准 硝酸盐氮的测定 （紫外分光光度法） ＳＬ84—1994 Determination of nitrogen (nitrate) （Ultraviolet spectrophtometric method） 水利部1995／05／01批准1995／05／01实施 1 总则 1.1主题内容 本标准规定了用紫外分光光度法测定水中的硝酸盐氮。 1.2 适用范围 本方法适用于清洁地面水和未受明显污染的地下水中硝酸盐氮的测定，其最低检出浓度为0.08ｍｇ／Ｌ，测量上限为4ｍｇ／Ｌ硝酸盐氮。 1.3干扰及消除溶解的有机物、表面活性剂、亚硝酸盐、六价铬、溴化物、碳酸氢盐和碳酸盐等干扰测定，需进行适当的预处理。本法采用絮凝共沉淀和大孔中性吸附树脂进行处理，以去除水样中大部分常见有机物、浊度和Ｆｅ3＋、Ｃｒ6＋对测定的干扰。 2 方法原理 利用硝酸根离子在220ｎｍ波长处的吸收而定量测定硝酸盐氮。溶解的有机物在220ｎｍ处和275ｎｍ处均有吸收，而硝酸根离子在275ｎｍ处没有吸收。因此，在275ｎｍ处作另一次测量，以校正硝酸盐氮值。 3仪器
3.1紫外分光光度计。 3.2离子交换柱（?1.4ｃｍ，装树脂高5～8ｃｍ）。 3.3常用实验设备。 4 试剂 4.1氢氧化铝悬浮液：溶解125ｇ硫酸铝钾［ＫＡｌ（ＳＯ4）2·12Ｈ2Ｏ］或硫酸铝铵［ＮＨ4Ａｌ（ＳＯ4）2·12Ｈ2Ｏ］于1000ｍＬ水中，加热至60℃。然后边搅拌边缓缓加入55ｍＬ浓氨水。放置约1ｈ后，移至一个大瓶中，用倾泻法反复洗涤沉淀物，直到该溶液不含铵离子为止。最后加300ｍＬ纯水成悬浮液。使用前振荡均匀。 4.2硫酸锌溶液：10%（ｍ／Ｖ）。 4.3氢氧化钠溶液：Ｃ（ＮaＯＨ）＝5ｍｏｌ／Ｌ。 4.4大孔型中性树脂：ＣＡＤ／40或ＸＡＤ／2型及类似型号树脂。 4.5甲醇。 4.6盐酸溶液：Ｃ（ＨＣｌ）＝1ｍｏｌ／Ｌ（盐酸系优级纯）。 4.7氨基磺酸（Ｈ2ＮＳＯ3Ｈ）溶液：0.8%（ｍ／Ｖ），避光保存于冰箱中。 4.8硝酸盐氮标准溶液：Ｃ（ＮＯ3－Ｎ）＝100ｍｇ／Ｌ。 将0.7218ｇ经105～110℃干燥2ｈ的硝酸钾（ＫＮＯ3）溶于水中，移入1000ｍＬ容量瓶，用水稀释至标线，混匀。加2ｍＬ氯仿作保存剂，至少可稳定6个月。每毫升此标准溶液含0.100ｍｇ硝酸盐氮。 5 步骤 5.1水样预处理： 5.1.1吸附柱制备：新的树脂先用200ｍＬ去离子水分两次洗涤，用甲醇（4.5）
课题3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 课题背景 你对泡萝卜、酸黄瓜、酸豆角一定不陌生吧？一碟酸甜香脆的泡菜，能令人胃口大开。尽管泡菜的味道不错，为健康着想，还是应该多吃新鲜蔬菜，少吃腌制食品。你知道这是为什么吗？在本课题中，我们将自己动手制作泡菜。在泡菜的腌制过程中，我们还要跟踪检测泡菜腌制过程中产生的亚稍酸盐的含量，并探索腌制方法、时间长短、温度高低等条件对泡菜口味和亚硝酸盐含量的影响，寻求提高泡菜质量的措施。 基础知识 （一）乳酸菌发酵 泡菜的制作离不开乳酸菌。乳酸菌种类很多，在自然界中分布广泛，空气、土壤、植物体表、人或动物的肠道内都有乳酸菌分布。乳酸菌是厌氧细菌，在无氧的情况下，将葡萄糖分解成乳酸。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌（图1-9）。乳酸杆菌常用于生产酸奶。 （二）亚硝酸盐 亚硝酸盐为白色粉末，易溶于水，在食品生产中用作食品添加剂。自然界中，亚硝酸盐分布广泛。据统计，蔬菜中亚硝酸盐的平均含量约为4mg/kg，咸菜中亚硝酸盐的平均含量在7mg/kg以上，而豆粉中的平均含量可达10mg/kg。 膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，但是，当人体摄人的亚硝酸盐总量达到0.3~0.5g时，会引起中毒；当摄入总量达到3g时，会引起死亡。我国卫生标准规定，亚硝酸盐的残留量在肉制品中不得超过30mg/kg ，酱腌菜中不超过20mg/kg，而婴儿奶粉中不得超过2mg/kg。 膳食中的绝大部分亚硝酸盐在人体内以“过客”的形式随尿排出，只有在特定的条件下（适宜的pH、温度和一定的微生物作用），才会转变成致癌物——亚硝胺。大量的动物实验表明，亚硝胺具有致癌作用，同时对动物具有致畸和致突变作用。研究表明，人类的某些癌症可能与亚硝胺有关。
本科生毕业论文 水体中硝酸盐含量的检测研究 蔡友锋 院系：环境与生命科学系 专业：环境工程 班级： 072 学号： 710302216 指导教师：胡文英 职称（或学位）：讲师 二零一一年五月
原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文（设计），是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文（设计）不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本论文（设计）的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学生签名：年月日 指导声明 本人指导的同学的毕业论文（设计）题目大小、难度适当，且符合该同学所学专业的培养目标的要求。本人在指导过程中，通过网上文献搜索及文献比对等方式，对其毕业论文（设计）内容进行了检查，未发现抄袭现象，特此声明。 指导教师签名：年月日
目录 1 试验部分 (2) 1.1主要仪器和试剂 (2) 1.2试验方法 (2) 2结果与讨论 (3) 2.1方法还原率与曲线回归 (3) 2.2盐度对水体中硝酸盐还原率影响 (3) 2.3反应条件对水体中硝酸盐还原率的影响 (4) 2.4锌卷用量对水体中硝酸盐还原率影响 (5) 2.5海水中硝酸盐标准曲线 (5) 3水样中硝酸盐含量的测定 (6) 4结论 (6) 致谢 (7) 参考文献 (7) 附录 (8)
水体中硝酸盐含量的检测研究 蔡友锋 （环境与生命科学系指导教师：胡文英） 摘要：水体中硝酸盐通过锌-镉还原剂还原为亚硝酸盐，利用分光光度法采用磺胺和盐酸萘乙 二胺重氮偶氮（B.R）法对亚硝酸盐测定。试验同时研究多种测定硝酸盐含量的还原剂，通过 一系列试验验证选择最佳还原剂，并确定该还原剂最佳反应条件。 关键词：还原剂；硝酸盐；亚硝酸盐；紫外分光 Abstract:Nitrate in water is reduced nitrite by zinc-cadmium reductant, which by used spectrophotometry, trimethoprim-sulfamethoxazole and hydrochloric acid naphthalene ethylenediamine diazotization azo (B.R) method to determine content of nitrate. At the same time the test researched various determ ine content of nitrate reductant, through a series of tests to choose the best reductant, and determine the best reaction conditions of the reductant. Key words:reductant; Nitrate; Nitrite; Ultraviolet spectrophotometry 硝酸盐广泛存在于自然界中，其主要来源是固氮菌固氮形成，或在闪电高温下空气中的氧气与氮气直接反应化合成氮氧化物，溶在雨水形成硝酸，再与地面的矿物反应生成硝酸盐[1]。固体硝酸盐加热时能分解放出氧，其中比较活泼的金属的硝酸盐仅仅放出一部分氧而形成亚硝酸盐，其余大部分金属的硝酸盐，则是分解为金属的氧化物、二氧化氮和氧[2,3]。并且硝酸盐在高温时是强氧化剂，水溶液几乎没有氧化作用。 人为带进大自然的硝酸盐主要来自于各种化肥工业的排放和各种化肥的施用，海水中硝酸盐部分来源是由汇入河流中溶解的工业化肥硝酸盐。 硝酸盐对人体的影响在于硝酸盐在胃和肠道中可还原为亚硝酸盐.摄取过量的硝酸盐可导致人体活动迟钝，工作能力减退，头晕，昏迷；一次用量过大甚至可以导致死亡。这种盐能够抑制细胞的呼吸作用，使血液中乳酸，胆固醇，白血球的数量增多，蛋白质的数量减少；在同血红蛋白相互作用下，亚硝酸盐形成化合物——红铁血红蛋白，这种化合物能堵塞氧气输送,使人觉得呼吸困难，最后导致死亡[4,5]。所以，水体中硝酸盐的检测具有十分重要的意义。 本文采用紫外分光光度法测定水体中硝酸盐的含量，水体中硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐采用磺胺和盐酸萘乙二胺重氮偶氮（B.R）法测定。B.R检测法的基本原理是在一定的酸度条件下，亚硝酸盐和磺胺发生反应生成重氮，反应5min以后加入盐酸萘乙二胺与重氮化合物偶联生成红色偶氮化合物，静置显色15min后测定。再应用紫外分光法测定亚硝酸盐含量测定来确定硝酸盐的含量。丰富了用紫外分光光度法对硝酸盐的测定方法，着重讨论各种反应条件对硝酸盐还原率的影响，选择效果最佳的还原
课题3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 1．尝试制作泡菜。 2．尝试用比色法测定泡菜中亚硝酸盐含量的变化。 3．讨论与此相关的食品安全问题。 一、泡菜的制作 1．乳酸菌发酵 （1）发酵微生物：泡菜的制作离不开________。 （2）分布：在自然界中分布广泛，______、土壤、植物体表、人或动物的肠道内都有乳酸菌分布。 （3）种类：常见的乳酸菌有__________和________。 （4）代谢类型：乳酸菌的新陈代谢类型为异养________，在无氧条件下，将葡萄糖分解成______。乳酸杆菌常用于生产______。 2．实验流程 3．操作注意事项 （1）泡菜坛的选择标准是火候好、________、无砂眼、________、__________，否则容易引起________。 （2）腌制时要控制腌制的______、______和______的用量。温度过____、食盐用量过低、腌制时间过____，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量______。一般在腌制10 d后，亚硝酸盐含量开始______。 思考：人们常说：“经常吃腌制、熏烤的食品容易患癌症。”这句话对吗？ 二、亚硝酸盐的检测 1．亚硝酸盐 （1）物理性质：亚硝酸盐为白色粉末，易溶于______，在食品生产中用作食品添加剂（一般用作防腐剂）。 （2）分布：在自然界中，亚硝酸盐分布广泛。 （3）对人体的影响：膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，但是，当人体摄入的亚硝酸盐总量达到__________ 时，会引起中毒；当摄入总量达到____时，会引起死亡。膳食中的绝大部分亚硝酸盐在人体内以“过客”的形式随____排出，只有在特定条件下（适宜的pH、温度和一定的微生物作用），才会转变成致癌物质——______。它具有致癌、致畸等作用。 （4）要求标准：我国卫生标准规定，亚硝酸盐的残留量在肉制品中不得超过________，酱腌菜中不超过________，而婴儿奶粉中不得超过________。 2．比色法测定亚硝酸盐含量的原理 在________条件下，亚硝酸盐与__________发生________反应后，与________________结合形成________色染料。将显色反应后的样品与已知浓度的__________进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。 3．测定步骤 配制溶液→____________→____________→______。
蔬菜中硝酸盐含量的测定 摘要 :基于硝酸根在 219 nm处有强烈吸收 , 且干扰少 , 测定提取液的吸光度, 从标准曲线上查得相应浓度。提取液用 pH=9.6-9.7的氨缓冲液,从待测样品中提取硝酸根离子。此法测定的结果表明回收率在 95.1%-100.9%之间 , 相对标准偏差为1.55%-4.14%。操作方法简便 , 适用于蔬菜中的硝酸盐含量的测定。 关键词:蔬菜 ; 硝酸盐 ; 紫外分光光度法 前言:蔬菜 ( 尤其叶菜类是一种容易累积硝酸盐的作物,硝酸盐含量超标已成为影响蔬菜品质的重要因素之一。由于当前我国蔬菜在种植过程中化肥过量施用 , 而且有些蔬菜生产者采用工业废水和生活污水浇地 , 造成许多蔬菜中硝酸盐含量过 高 , 已证明 , 硝酸盐在人体内经微生物作用可被还原为有毒的亚硝酸盐 , 它可与人体血红蛋白作用 , 使之失去载氧功能 , 造成高铁血红蛋白症 , 长期摄入硝酸盐会造成智力迟钝等危害 [ 1]。因此 , 蔬菜中硝酸盐的含量可作为衡量亚硝酸盐对人体潜在危害的一个指标 [ 2]。 蔬菜硝酸盐含量的测定方法很多,如镉柱还原分光光度法、离子色谱法。其中镉柱还原分光光度法为检测蔬菜中硝酸盐含量的国家标准方法 , 但由于干扰因素多, 操作步骤过于繁琐, 很难满足批量常规分析之需要,而其它几种方法则需要精密仪器, 测定条件较为严格,不适宜作常规监测分析 [3]。本实验采用操作简单、准确度高 的紫外分光光度法测定蔬菜中硝酸盐含量。 1 实验仪器与材料 1.1 主要仪器与试剂 1.1.1仪器 紫外分光光度计 ; 容量瓶;乳钵 1 .1.2试剂
①氨缓冲液(pH=9.6~9.7:2ml 浓盐酸加入 50ml 蒸馏水中,混合后再加入 5ml 浓 氨水, 最后用蒸馏水稀释至 100ml 。②粉末状活性炭(除去待测样品中的色素。③蛋白质沉淀剂Ⅰ,蛋白质沉淀剂Ⅱ (除去蛋白质及混浊物。④溶液Ⅰ:15克铁氰化 钾 (K3Fe(CN6 溶于 50ml 蒸馏水中, 定容于 100ml 。⑤溶液Ⅱ:30g 硫酸锌 (ZnSO4 溶于 60ml 蒸馏水中,定容于 100ml 。⑥硝酸盐标准液:称 0.722g 在 110℃条件下烘 干的 KNO3用蒸馏水溶解后定容至 1000ml 。此溶液为 100ug/ml标准贮液,放入冰 箱内保存。 1.1.3样品材料 京白菜 (Brassica campestris L. ssp. chinensis (L. Makino. var. communis Tsen et Lee、小瓜(Cucurbita moschata、胡萝卜 (Daucus carota 、莲花白 (Brassica oleracea L. var.capitata 、土豆 (Solanum tuberosum L 、黄瓜 (Cucumis sativus Linn. (以上各蔬 菜均在昆明蒜村农贸市场购买,产地昆明茨坝,高海拔的冬天摘取。 2 实验方法 2.1 标准曲线的绘制 依次配制 NO 浓度为 0.4ug/ml, 0.8ug/ml, 1.2ug/ml, 1.6ug/ml, 2.0ug/ml, 2.4ug/ml, 2.8ug/ml的溶液,以重蒸馏水做空白,用石英比色皿在 219nm 处测定吸光度(A 。以 标准溶液浓度为横坐标, 吸光度为纵坐标绘制标准曲线。如图 2, 得回归方程为 A = 0 . 00919 +0 . 0596C,相关系数 r = 0 . 9996( n = 5。
+ 本科毕业论文 题目：几种蔬菜中亚硝酸盐含量的动态分析 学院：食品科学与工程学院 姓名：XXX 学号：xxxxxxx 专业：食品质量与安全 班级：食安091班 指导教师：xxx 职称：讲师 二〇一三年四月
目录 摘要 ........................................................................................................................................ I ABSTRACT ........................................................................................................................... II 1 引言 . (1) 1.1概述 (1) 1.2测定方法及研究的意义 (1) 2 实验材料与方法 (2) 2.1实验材料 (2) 2.1.1 原材料 (2) 2.1.2 主要仪器 (2) 2.2实验方法 (3) 2.2.1 亚硝酸盐的测定 (3) 2.2.2 菌落总数的测定 (4) 2.3蔬菜在家庭贮藏与加工条件下的亚硝酸盐含量的测定 (8) 2.3.1 不同贮藏温度对蔬菜中亚硝酸盐含量的影响 (8) 2.4煮熟菠菜在常温条件下，亚硝酸盐含量与菌落总数的关系 (8) 3 实验结果与分析 (8) 3.1标准曲线的绘制 (8) 3.2消除抗坏血酸对实验的影响 (9) 3.3家庭加工及加工后贮藏对亚硝酸盐含量的影响 (9) 3.3.1 不同贮藏温度对蔬菜中亚硝酸盐含量的影响 (9) 3.3.2 不同煮沸时间对蔬菜中亚硝酸盐含量的影响 (9) 3.3.3 煮熟菠菜在常温条件下，亚硝酸盐含量与菌落总数的关系 (10) 4 结论 (11) 参考文献 (14) 致谢 (15)
实习六食品中亚硝酸盐含量的测定 一、目的 熟悉食品中亚硝酸盐含量的卫生标淮，掌握食品中亚硝酸盐含量测定的基本方法。 二、测定方法：亚硝酸盐测定格里斯试剂比色法 1、原理：样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N—1—萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。 2、试剂：实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。 ①氯化铵缓冲液：1L容量瓶中加入500m1水，准确加人20.0ml盐酸，振荡混匀，准确加入50mI氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6~9.7。 ②硫酸锌溶液（0.42mol/L )：称取120g硫酸锌(ZnS04·7H2O)，用水溶解，并稀释至1000m1。 ③氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。 ④对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700m1水和300m1冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。 ⑤N—1—萘基乙二胺溶液(1g/L)：称取0.1g N—1—萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至l00ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。 ⑥显色剂：临用前将N—1—萘基乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。 ⑦亚硝酸钠标淮溶液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500m1容量瓶中，加l00ml氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500μg 的亚硝酸钠。 ⑧亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00m1，置于100m1容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg亚硝酸钠。 3、仪器 ①小型粉碎机。 ②分光光度计。 4、操作方法 ①样品处理：称取约10.00g (粮食取5g) 经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70m1水和12m1氢氧化钠溶液(20g/L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH＝8，定量转移至200m1容量瓶中加10ml硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2~5ml氢氧化钠，混匀。置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20m1，收集滤液备用。 ②测定：亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0m1亚硝酸钠标准使用液(相当于0，2.5，5，10，15，20，25μg亚硝酸钠)，分别置于25m1带塞比色管中。于标准管中分别加入4.5m1氯化铵缓冲液，加2.5m160%乙酸后立即加入5.0ml显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用lcm 比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯)，以零管调节零点，于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线。 低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0m1亚硝酸钠标准使用液(相当于0，2，4，6，8，10μg亚硝酸钠)。 样品测定：吸取10.0m1上述滤液(样品处理滤液)于25ml带塞比色管中，自上述“于标准管中分别加入4.5m1氯化铵缓冲液”起依法操作。同时做试剂空白。