一、名词解释：
分子生物学：研究核酸等生物大分子的功能、形态结构特征及其重要性和规律性的科学，是人类从分子水平上真正揭开生物世界的奥秘，由被动地适应自然界转向主动地
改造和重组自然界的基础学科。
基因：合成一种功能蛋白或RNA分子所必需的全部核苷酸序列。
基因组：生物有机体的单倍体细胞中的所有DNA。
C值：在真核生物中，每种生物的单倍体基因组的DNA总量总是恒定的，称为C值。
DNA的半保留复制：DNA在复制过程中，两条链解开分别作为模板合成新链，产生互补的
两条链，这样新形成的两个DNA分子与亲代DNA分子的碱基顺序完
全一样。因此，每个子代分子的一条链来自亲代DNA，另一条链则
是新合成的，这种复制方式称为DNA的半保留复制。
复制叉：复制时双链DNA要解开成两股链分别进行，复制起点呈现叉子的形式，称为~
复制子：单独复制的一个DNA单元被称为一个复制子，它是一个可移动的单位。
DNA的半不连续复制：DNA复制过程中，前导链的复制是连续的，后随链的复制不连续的，
它是生物界中的普遍现象，称为~
编码链：与mRNA序列相同的那条DNA链，又叫有意义链。
模板链：另一条根据碱基互补原则指导mRNA合成的DNA链，又叫反义链。
三联子密码：mRNA上每3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这3个核苷酸就称为密码，也叫三联子密码。
同义密码子：编码同一种氨基酸的不同密码子。如UUU和UUC是苯丙氨酸的同义密码子。SD序列：存在于原核生物起始密码子AUG上游7-12个核苷酸处的一种4-7个核苷酸的保守片段，它与16S如RNA3’端反向互补，所以可将mRNA的AUG起始密码子置于
核糖体的适当位置以便起始翻译作用。
冈崎片段：DNA合成过程中，后随链的合成是不连续进行的，先合成许多片段，最后各段再连接成为一条长链，这些小的片段成为冈崎片段。
DNA修复：错配修复、切除修复（包括：碱基切除修复和核苷酸切除修复）、重组修复、DNA 的直接修复、SOS反应。
DNA的转座：是由可移位因子介导的遗传物质重排现象。
基因家族：真核细胞中许多相关的基因常按功能成套组合，被称为基因家族。
外显子和内含子：大多数真核基因都是由蛋白质编码序列和非蛋白质编码序列两部分组成的，编码序列称为外显子，非编码序列称为内含子。
增强子特性：增强效应十分明显；增强效应与其位置和取向无关；大多为重复序列，一般长约50bp；其增强效应有严密的组织和细胞特异性；没有基因专一性；许多增
强子还受外部信号的调控。
顺式作用元件：真核生物启动子和增强子是由若干DNA序列元件组成的，由于它们常与特定的功能基因连锁在一起，因此被称为顺式作用元件。
反式作用因子：能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录效率的蛋白质。有螺旋-转折-螺旋结构；锌指结构；碱性-亮氨酸拉
链；碱性-螺旋-环-螺旋；同源域蛋白；
热激蛋白：许多生物在最适温度范围以上，能受热诱导合成一系列热休克蛋白，又称热激蛋白！
癌基因：可分为两类，一类是病毒癌基因，主要有DNA病毒和RNA病毒；另一类是细胞转化基因，它们能使正常细胞转化为肿瘤细胞。
DNA探针：带有标记的一段已知序列DNA，共有四类，基因组DNA探针、cDNA探针、RNA
探针和寡核苷酸探针。
基因表达：从DNA到蛋白质或功能RNA的过程。
弱化子：指原核生物操纵子中能显著减弱甚至终止转录作用的一段核苷酸序列。
前导肽：色氨酸操纵子RNA的前导序列中含有一个有效的核糖体结合位点，并能形成由前导RNA27-68号碱基所编码的14个氨基酸的多肽，这一多肽被称为前导肽。
二、填空或简答
1、分子生物学的主要研究内容：①DNA重组技术；②基因表达调控研究；③生物大分子的
结构功能研究——结构分子生物学；④基因组、功能基因组与生物信息学研究
2、分子生物学的3条基本原理：
①构成生物体各类有机大分子的单体在不同生物中都是相同的
②生物体内一切有机大分子的构成都遵循共同的原则
③某一特定生物体所拥有的核酸及蛋白质分子决定了它的属性
3、中心法则的内容：
指遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程。在某些病毒中的RNA自我复制（如烟草花叶病毒等）和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程（某些致癌病毒）是对中心法则的补充和发展。
4、染色体作为遗传物质的特征：①分子结构相对稳定；②能自我复制，保持遗传连续性；
③能指导蛋白质合成，控制生命过程；④能产生可遗传的变异。
5、组蛋白的特性：①进化上的极端保守性；②无组织特异性；③肽链上氨基酸分布的不对
称性；④组蛋白的修饰作用（包括甲基化，乙基化，磷酸化及ADP和糖基化等）；⑤富含赖氨酸的组蛋白H5。
6、核小体是由H2A、H2B、H3、H4各两个分子生成的八聚体和由大约200bp的DNA组成。
7、DNA复制的几种主要方式：
（1）复制叉式复制：即在复制原点形成复制叉，其新链的合成所需的引物是新合成的。
这是最常见的复制方式。
（2）滚环式复制：环状DNA采取的一种复制方式。其新链的合成无须合成引物，而是利用一条链切断后产生的3’端，由此不断延伸，合成出新链。
（环状双链DNA的复制可以分为：θ型，滚环型和D-环型几种类型）
13.转座子及其遗传学基因
（1）转座子：是存在于染色体DNA上可自主复制和移位的基本单位。转座子分为两大类：插入序列和复合型转座子。
（2）转座作用的遗传学效应：①转座引起插入突变；②转座产生新的基因；③转座产生
的染色体畸变；④转座引起的生物进化。
14、启动子区的基本结构：
①原核生物：绝大部分原核生物启动子都存在位于-10bp的TATA盒和位于-35bp的
TTGACA盒，这两个区域是RNA聚合酶与启动子的结合位点。
②在真核生物中发现，位于转录起始位点上游-25—-35bp处的TATAAA也称为TATA区，
在-70—-78bp处还有另外一段共同序列CCAAT，称为CAAT区。
15、64个密码子中有61个是编码氨基酸的，另外三个即UAA、UGA和UAG是终止密码子。
每种氨基酸至少有一种密码子，最多的有6种密码子。
16、遗传密码的性质：①密码的连续性；密码的简并性；密码的通用性与特殊性；密码子与
反密码子的相互作用
17、蛋白质前体的加工：①N端fMet或Met的切除；②二硫键的形成；③特定氨基酸的修
饰：包括磷酸化、糖基化、甲基化等；④切除新生肽链中的非功能片段
18、原核生物的翻译起始是：fMet-tRNA fMet；真核生物的翻译起始是：Met-tRNA fMet
19、用于基因治疗的病毒载体应具备的基本条件：①携带外源基因并能装配成病毒颗粒；②
介导外源基因的转移和表达；③对抗体没有致病力
20、基因治疗中的问题：①靶向性基因导入系统；②外源基因表达的可控性；③治疗基因过
少
21、原核生物和真核生物的起始因子：
原核生物起始因子主要有IF1,IF2,IF3等3种，真核起始因子种类多且复杂，目前已鉴定的真核起始因子共有12种。通过这些真核起始因子之间以及不同的真核起始因子与核糖体、mRNA和起始tRNA之间的相互作用，来完成真核生物的翻译起始。
三、问答题
1、分子生物学简史
①1962年，美国科学家Watson和英国科学家Crick因在1953年提出DNA的反向平行双
螺旋模型而与wilkins共享诺贝尔生理医学奖。
②1965年，法国科学家Jacob和Monod提出并证实了操纵子作为调节细菌代谢的分子机
制而与Iwoff分享了诺贝尔生理医学奖
③1968年，美国科学家Nirenberg破译DNA遗传密码与holly等获诺贝尔生理医学奖
④1980年，Sanger设计出一种测定DNA分子内核苷酸序列的方法获诺贝尔化学奖
⑤1997年，美国科学家Prusiner发现朊病毒是阿尔茨海默病等疾病的病原并能直接在宿
主细胞中繁殖传播而获得诺贝尔生理医学奖
⑥1972-1973年，Boyer、Berg等人发展了DNA重组技术；
⑦1983年，获得第一例转基因植物；
⑧1997年，英国爱丁堡罗斯林研究所获得克隆羊；
⑨2001年，完成了第一个人类基因组全序列测定；
2、哪些实验证实DNA是主要的遗传物质
（1）肺炎双球菌的转化试验
①无毒的R型细菌+ 小鼠——小鼠不死亡
②有毒的S 型细菌+ 小鼠——小鼠患败血症死亡
③加热杀死的S型细菌+小鼠——小鼠不死亡
④无毒的R型细菌+加热杀死的S型细菌+小鼠——小鼠死亡
说明：死细菌DNA指导了这一可遗传的转化，从而导致了小鼠的死亡。
（2）噬菌体感染实验
当细菌培养基中分别带有35S或32P标记的氨基酸或核苷酸，子代噬菌体中就相应含有35S标记的蛋白质或32P标记的核酸。分别用这些噬菌体感染没有放射性标记的细菌，经过1~2个噬菌体DNA复制周期后发现，子代噬菌体中几乎不含带35S标记的蛋白质，但含有30%以上的32P标记，这说明在噬菌体传代过程中发挥作用的是DNA 而不是蛋白质。
（3）植物病毒的重建实验
将烟草花叶病毒（TMV）放在一定浓度的苯酚溶液中振荡，将它的蛋白质外壳和RNA核心相分离，裸露的RNA也能感染烟草，并使其患典型症状，而且在病斑中还能分离到完整的TMV粒子。
3、DNA二级结构及其特征
（1）DNA二级结构：是指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构。
（2）特征：
①DNA的二级结构分两大类：一类是右手螺旋，如A-DNA和B-DNA，DNA通常是右手
螺旋形式存在的；另一类是左手螺旋，即Z-DNA。
②磷酸和脱氧核糖单位作为不变的骨架位于外侧（亲水骨架），作为可变成分的碱基位
于内侧（疏水骨架），链间碱基按A－T，G－C配对形成氢键；
③碱基对平面与螺旋轴几乎垂直,相邻碱基平面垂直距离0.34nm,DNA双链所形成的螺
旋直径2nm,螺旋结构每隔10个碱基对重复一次,螺距为3.4nm。DNA双螺旋分子表面形成“大沟”与“小沟”。
④多核苷酸的方向由核苷酸间的磷酸二酯键的走向决定，一条从5’—3’，另一条从
3’-5’。
4、原核生物DNA复制的特点：
所有DNA的复制都是从一个固定起点开始的，复制时，往往先由RNA聚合酶在DNA 模板上合成一段RNA引物，再由DNA聚合酶从RNA引物3’末端开始合成新的DNA链。
对于前导链，这个引发过程比较简单只要有一段RNA引物，DNA聚合酶就能以此为起点一直合成下去。但对于后随链，引发过程就非常复杂，需要多重蛋白质和酶的协同作用还涉及冈崎片段的形成和连接。后随链的引发由引发体来完成。
5、RNA转录的基本过程：
①模板识别：RNA聚合酶与启动子DNA双链相互作用并与之相结合的过程
②转录起始：RNA聚合酶结合在启动子上之后，使启动子附近的DNA双链解旋并解链，
形成转录泡以促使底物核糖核苷酸与模板DNA的碱基配对。
③转录延伸：底物NTP不断加到RNA链3’-OH端
④转录终止：当RNA链延伸到转录终止位点时，RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯键，
RNA-DNA杂合物分离，转录泡瓦解，DNA恢复成双链状态，RNA聚合酶和
RNA链都从模板上释放出来。
6、RNA聚合酶的组成
（1）原核：由2个α亚基、一个β亚基、一个β’基和一个ω亚基组成的核心酶，加上一个σ亚基后则成为聚合酶全酶。
（2）真核：真核生物RNA聚合酶分为三类（聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）。一般由8~16个亚基组成。聚合酶Ⅰ由RPA1、RPA2、RPC9、RPB6以及其他6个亚基组成；聚合酶Ⅱ
由RPB1、RPB2、RPB3、RPB11、RPB6以及其他7个亚基组成；聚合酶Ⅲ由RPC1、
RPC2、RPC5、RPC9、RPB6及其他11个亚基组成。其中，聚合酶Ⅱ的两个大
亚基。RPB1和RPB2，与细菌核心酶的两个大亚基（β和β’）是同源的；其
RPB3和RPB11与α亚基、RPB6与ω亚基是同源的。
7、原核和真核生物mRNA的特征比较
①原核生物mRNA的半衰期短，真核生物mRNA半衰期长
②许多原核生物mRNA可能以多顺反子的形式存在，真核则多为单顺反子
③原核生物mRNA的5’端无帽子结构，3’端没有或只有较短的polyA结构，真核生物
mRNA的5’端存在帽子结构，3’端具有多聚A尾巴
④原核生物以AUG作为起始密码，有时以GUG，UUG作为起始密码，真核几乎永远以
AUG作为起始密码
8、tRNA的结构，种类和功能
（1）结构：除个别例外,tRNA分子均可排
布成三叶草模型的二级结构。它由3个环,
即D环、反密码环和TΨC环；四个臂，即
D臂（与D环联接的臂）、反密码臂（与反
密码环联接）、TΨC臂(与TΨC环联接)和受
体臂〔也叫CCA臂,因所有tRNA的分子末
端均含胞CCA〕，以及位于反密码臂与TΨC
臂之间的多余臂构成。除多余臂和D环外,
其他各个部位的核苷酸数目和碱基对基本
上是恒定的。
（2）tRNA的种类：起始tRNA和延伸tRNA；同工tRNA；校正tRNA
（3）tRNA的功能：主要是携带氨基酸进入核糖体，在mRNA指导下合成蛋白质。tRNA还具有其他一些特异功能，例如，在没有核糖体或其他核酸分子参与下，携带氨基酸转移至专一的受体分子，以合成细胞膜或细胞壁组分；作为反转录酶引物参与DNA合成；
作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。
9、蛋白质合成的起始
（1）原核：原核生物翻译的起始分为三步：①30S小亚基首先与翻译起始因子IF-1，IF-3结合，通过SD序列与mRNA模板结合；②在IF-2和GTP的帮助下，fMet-tRNA fMet
进入小亚基的P位，tRNA上的反密码子与mRNA上的起始密码子配对；③带
有tRNA，mRNA，三个翻译起始因子的小亚基复合物与50S大亚基结合，GTP
水解，释放翻译起始因子。
（2）真核：与原核生物基本相同，差异主要是核糖体较大，有较多的起始因子参与，其mRNA具有m7GpppNp帽子结构，Met-tRNA fMet不甲酰化，mRNA分子5’端的
“帽子”和3’端地多聚A都参与形成翻译起始复合物。
10、核酸凝胶电泳技术的原理及方法
（1）原理：核酸分子中糖-磷酸骨架中的磷酸基团，呈负离子化状态；核算分子在一定的电场强度的电场中，它们会向正电极方向迁移。电泳中使用无反应活性的稳
定的支持介质，电泳迁移率与分子大小，介质粘度等成反比。因此，可在同
一凝胶中、一定电场强度下分离出不同分子量或相同分子量但构型有差异的
核酸分子。
（2）方法：①制备凝胶：琼脂与缓冲液混合；加热融化；冷却至65度制板；插梳；冷却成胶；移梳子。②载样缓冲液混合。③点样。④电泳
（备注：溴乙啶（EB）：对核酸分子染色）
11、PCR反应的定义、原理和过程
（1）定义：即聚合酶链反应，一种在体外扩增DNA片段的重要技术。当存在模板DNA、底物、上下游引物和耐热的DNA聚合酶时，经过多次“变性-复性-延伸反应”
的循环过程，痕量模板DNA可扩增至几百万倍。
（2）原理：PCR通过使用一种耐热的多聚酶，以及两个单链引物，经过高温变性将模板DNA分离成两条链，低温退火使得引物和一条模板单链结合，然后是中温
延伸，反应液的游离核苷酸紧接着引物从5’端到3’端合成一条互补的新
链，而新合成的DNA又可以继续上述循环，因此DNA的数目不断倍增。
（3）过程：变性（DNA解链）、退火（引物与模板DNA相结合）和链的延伸（DNA合成）
12、双脱氧链终止法：
又叫引物合成法该方法，要求使用一种单链DNA模板和一种适当的DNA引物，利用了DNA聚合酶的两种酶催反应特性。DNA聚合酶能够用单链DNA作为模板，合成准确的DNA互补链。该酶能够利用2’,3’-双脱氧核苷三磷酸作底物，将其掺入到寡核苷酸链的3’-末端，导致3’末端无3’-OH，从而终止DNA链的生长。在DNA测序反应中，加入模板DNA，引物，DNA聚合酶，dNTP和一种ddNTP。
13、乳糖操纵子（lac）：
包括三个结构基因，Z、Y和A，以及启动子、控制子和阻遏子等。三个结构基因各决定一种酶，Z编码β-半乳糖苷酶；Y编码β-半乳糖苷透过酶；A编码β-半乳糖苷乙酰基转移酶。当培养基中乳糖浓度升高而葡萄糖浓度降低时，乳糖作为诱导剂与阻遏蛋白结合，促使阻遏蛋白与操纵基因分离。
14、半乳糖操纵子（gal）：
包括3个结构基因，异构酶（galE），半乳糖-磷酸尿嘧啶核苷转移酶（galT），半乳糖激酶（galK）。半乳糖操纵子的调节基因是galR，gal操纵子与lac操纵子所不同的是galR与galE、T、K及操纵区O等的距离都很远，而galR产物对galO的作用与lacI-lacO 的作用相同。gal操纵子还有两个特点，它有两个启动子，其mRNA可从两个不同的起始点开始转录；它有两个O区。
现代分子生物学 复习提纲 第一章绪论 第一节分子生物学的基本含义及主要研究内容 1 分子生物学Molecular Biology的基本含义 ?广义的分子生物学：以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究 对象，从分子水平阐明生命现象和生物学规律。 ?狭义的分子生物学：偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调控 等过程，也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 1.1 分子生物学的三大原则 1) 构成生物大分子的单体是相同的 2) 生物遗传信息表达的中心法则相同 3) 生物大分子单体的排列（核苷酸、氨基酸）的不同 1.3 分子生物学的研究内容 ●DNA重组技术（基因工程） ●基因的表达调控 ●生物大分子的结构和功能研究(结构分子生物学） ●基因组、功能基因组与生物信息学研究 第二节分子生物学发展简史 1 准备和酝酿阶段 ?时间：19世纪后期到20世纪50年代初。 ?确定了生物遗传的物质基础是DNA。 DNA是遗传物质的证明实验一：肺炎双球菌转化实验 DNA是遗传物质的证明实验二：噬菌体感染大肠杆菌实验 RNA也是重要的遗传物质-----烟草花叶病毒的感染和繁殖过程 2 建立和发展阶段 ?1953年Watson和Crick的DNA双螺旋结构模型作为现代分子生物学诞生的里程碑。 ?主要进展包括： ?遗传信息传递中心法则的建立 3 发展阶段 ?基因工程技术作为新的里程碑，标志着人类深入认识生命本质并能动改造生命的新时期开始。 ? 第三节分子生物学与其他学科的关系 思考 ?证明DNA是遗传物质的实验有哪些？ ?分子生物学的主要研究内容。 ?列举5～10位获诺贝尔奖的科学家，简要说明其贡献。
分子生物学试题及答案
分子生物学试题及答案一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。
除了5’ 3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（ IF-2 ）和（IF-3 ）。4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。 5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（ DNA重组技术）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（ hnRNA在转变为mRNA 的过程中经过剪接，）、
分子生物学试题及答案 一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。 3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。 9．弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。 10．魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 11．上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA 及增强子，弱化子等。 12．DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。13．SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。 14．单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 15．考斯质粒：是经过人工构建的一种外源DNA载体，保留噬菌体两端的COS区，与质粒连接构成。16．蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。 17．顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。 4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（DNA重组技术）三部分。7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接，）、 （mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法）、（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）。 10．蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11．半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（ S2）开始，无G时转录从（ S1）开
1、广义分子生物学：在分子水平上研究生命本质的科学，其研究对象是生物大分子的结构和功能。2 2、狭义分子生物学：即核酸（基因）的分子生物学，研究基因的结构和功能、复制、转录、翻译、表达调控、重组、修复等过程，以及其中涉及到与过程相关的蛋白质和 酶的结构与功能 3、基因：遗传信息的基本单位。编码蛋白质或RNA等具有特定功能产物的遗传信息 的基本单位，是染色体或基因组的一段DNA序列(对以RNA作为遗传信息载体的 RNA病毒而言则是RNA序列)。 4、基因：基因是含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，包含产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核苷酸序列。 5、功能基因组学：是依附于对DNA序列的了解，应用基因组学的知识和工具去了解 影响发育和整个生物体的特定序列表达谱。 6、蛋白质组学：是以蛋白质组为研究对象，研究细胞内所有蛋白质及其动态变化规律的科学。 7、生物信息学：对DNA和蛋白质序列资料中各种类型信息进行识别、存储、分析、模拟和转输 8、蛋白质组：指的是由一个基因组表达的全部蛋白质 9、功能蛋白质组学：是指研究在特定时间、特定环境和实验条件下细胞内表达的全部蛋白质。 10、单细胞蛋白：也叫微生物蛋白，它是用许多工农业废料及石油废料人工培养的微 生物菌体。因而，单细胞蛋白不是一种纯蛋白质，而是由蛋白质、脂肪、碳水化合物、核酸及不是蛋白质的含氮化合物、维生素和无机化合物等混合物组成的细胞质团。 11、基因组：指生物体或细胞一套完整单倍体的遗传物质总和。 12、C值：指生物单倍体基因组的全部DNA的含量，单位以pg或Mb表示。 13、C值矛盾：C值和生物结构或组成的复杂性不一致的现象。 14、重叠基因：共有同一段DNA序列的两个或多个基因。 15、基因重叠：同一段核酸序列参与了不同基因编 码的现象。 16、单拷贝序列：单拷贝顺序在单倍体基因组中只出现一次，因而复性速度很慢。单 拷贝顺序中储存了巨大的遗传信息，编码各种不同功能的蛋白质。 17、低度重复序列：低度重复序列是指在基因组中含有2～10个拷贝的序列 18、中度重复序列：中度重复序列大致指在真核基因组中重复数十至数万（<105）次的重复顺序。其复性速度快于单拷贝顺序，但慢于高度重复顺序。 19、高度重复序列：基因组中有数千个到几百万个拷贝的DNA序列。这些重复序列 的长度为6~200碱基对。
四个阶段： 一、以导致遗传病的基因突变位点为靶标，以DNA分子杂交为核心 二、以PCF技术为核心 三、以生物芯片为核心 四、以DN做H序技术为核心 广义：分子标志物包括基因组DNA各种RNA蛋白质和各种代谢物 临床分子生物学检验靶标主要以核酸（DNA和RNA为主 基因组DNA是临床分子生物学检验中最常用的分子靶标 病原生物基因1.菌种鉴定：PCR测寸序和PCR-DNA^针杂交；缩短检测时间 2. 确定病毒感染和病毒载量：明确感染源，判断病情，监测疗效 3. 病毒分析：基因型变异产生不同临床症状 4. 细菌耐药监测和分子流行病学调查：随机扩增多态性DNA指导选择 治疗方案，控制病原菌的感染传播 基因变异 1 .致病基因的分子缺陷 2. 线粒体基因突 3. 肿瘤相关基因 单基因病 1. 致病基因结构发生了改变，影响了编码产物量和质的改变，如血红蛋白 病、血友病、Duchenne 肌营养不良等。 2. 致病基因中核苷酸三联体重复序列发生高度扩展，如脆性X综合征、亨廷顿 病、强直性肌营养不良等。 基因多态性用于： 1.基因定位和疾病相关性分析 2.疾病诊断和遗传咨询 3.多基因病的研究 4. 器官移植配型和个体识别 循环游离核酸检测（包括游离DNA和游离RNA用于：产前诊断、恶性肿瘤早期诊断、病例检测 临床分子生物学检验技术以分子杂交技术、PCR技术和DNA测序技术、芯片技术、双向电泳技术、生物信息学技术为主要技术 分子生物学检验技术可用于微生物感染的确诊、感染性病原体的分型、耐药监测。分子生物学检验技术有利于临床上对遗传性疾病的早期预防、早期诊断、早期治疗。重要国际生物信息中心：1.美国国立生物技术信息中心（NCBI） 2.欧洲生物信息学研究所（EBI） 3.日本国立遗传研究所（DDBJ 一级核酸数据库有GenBank EMBI和DDBJ 蛋白质序列数据库有SWISS-PRO T PIR、UNIPRO等。蛋白质X射线晶体三维结构数据库有PDB等。 蛋白质数据库常用的有SWISS-PRO、T PIR 、PDB 数据库
分子生物学 第一章绪论 分子生物学研究内容有哪些方面？ 1、结构分子生物学； 2、基因表达的调节与控制； 3、DNA重组技术及其应用； 4、结构基因组学、功能基因组学、生物信息学、系统生物学 第二章DNA and Chromosome 1、DNA的变性：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 2、DNA复性：变性DNA在适当条件下，分开的两条单链分子按照碱基互补原则重新恢复天然的双螺旋构象的现象。 3、Tm(熔链温度)：DNA加热变性时，紫外吸收达到最大值的一半时的温度，即DNA分子内50%的双链结构被解开成单链分子时的温度） 4、退火：热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，称为退火 5、假基因：基因组中存在的一段与正常基因非常相似但不能表达的DNA序列。以Ψ来表示。 6、C值矛盾或C值悖论:C值的大小与生物的复杂度和进化的地位并不一致，称为C值矛盾或C值悖论(C-Value Paradox)。 7、转座：可移动因子介导的遗传物质的重排现象。 8、转座子：染色体、质粒或噬菌体上可以转移位置的遗传成分 9、DNA二级结构的特点：1）DNA分子是由两条相互平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成；2）DNA分子中的脱氧核苷酸和磷酸交替连接，排在外侧，构成基本骨架，碱基排列在外侧；3）DNA分子表面有大沟和小沟；4）两条链间存在碱基互补，通过氢键连系，且A=T、G ≡ C（碱基互补原则）；5）螺旋的螺距为3.4nm，直径为2nm，相邻两个碱基对之间的垂直距离为0.34nm，每圈螺旋包含10个碱基对；6）碱基平面与螺旋纵轴接近垂直，糖环平面接近平行 10、真核生物基因组结构：编码蛋白质或RNA的编码序列和非编码序列，包括编码区两侧的调控序列和编码序列间的间隔序列。 特点：1）真核基因组结构庞大哺乳类生物大于2X109bp；2）单顺反子（单顺反子：一个基因单独转录，一个基因一条mRNA，翻译成一条多肽链；）3）基因不连续性断裂基因（interrupted gene）、内含子(intron)、外显子(exon)；4）非编码区较多，多于编码序列(9:1) 5）含有大量重复序列 11、Histon(组蛋白)特点：极端保守性、无组织特异性、氨基酸分布的不对称性、可修饰作用、富含Lys的H5 12、核小体组成：由组蛋白和200bp DNA组成 13、转座的机制：转座时发生的插入作用有一个普遍的特征，那就是受体分子中有一段很短的被称为靶序列的DNA会被复制，使插入的转座子位于两个重复的靶序列之间。 复制型转座：整个转座子被复制，所移动和转位的仅为原转座子的拷贝。 非复制型转座：原始转座子作为一个可移动的实体直接被移位。 第三章DNA Replication and repair 1、半保留复制：DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱
第六章 分子生物学研究法（下）——基因功能研究技术
基因功能的研究思路主要包括: 1. 基因的亚细胞定位和时空表达谱; 2. 基因在转录水平的调控； 3. 细胞生化水平的功能研究：对该基因的表达产物做一个细胞信号转导通路的定位； 4. gain-of-function & loss-of-function: 分别在细胞和个体水平，做该基因的超表达和敲除，从表型分析该基因的功能。 功能研究应从完整的分子-细胞-个体三个层次研究，综合分析。
本章内容 ?基因表达研究技术 ?基因敲除技术 ?蛋白质及RNA相互作用技术?基因芯片及数据分析 ?利用酵母鉴定靶基因功能?其他分子生物学技术
6.1 基因表达研究技术 6.1.1 基因表达系列分析技术6.1.2 RNA的选择性剪接技术6.1.3 原位杂交技术 6.1.4 基因定点突变技术
6.1.1 基因表达系列分析技术 基因表达系列分析技术（serial analysis of gene expression，SAGE）是1995年由Velculescu 等建立的技术，在整体水平上对细胞或者组织中的大量转录本同时进行定量分析，而无论其是否为已知基因。 9概念： 以DNA测定为基础定量分析全基因组表达模式的技术，能直接读出任何一种细胞类型或组织的基因表达信息。
9原理： 根据理论上任何长度超过9～10(49=262144)个碱基的核苷酸片段可代表一种转录产物的特异序列（转录本），因此，选择特定的限制性内切酶分离转录产物中这些代表基因特异性9～10个碱基的核苷酸序列并制成标签，将这些序列标签连接、克隆和测序，根据其占总标签数的比例即可分析其对应编码基因的表达频率。
分子生物学与基因工程 绪论 1、分子生物学与基因工程的含义 从狭义上讲，分子生物学主要是研究生物体主要遗传物质-基因或DNA的结构及其复制、转录、表达和调节控制等过程的科学。 基因工程是一项将生物的某个基因通过载体运送到另一种生物的活体细胞中，并使之无性繁殖和行使正常功能，从而创造生物新品种或新物种的遗传学技术。 2、分子生物学与基因工程的发展简史，特别是里程碑事件，要求掌握其必要的理由 上个世纪50年代，Watson和Crick提出了的DNA双螺旋模型； 60年代，法国科学家Jacob和Monod提出了的乳糖操纵子模型； 70年代，Berg首先发现了DNA连接酶，并构建了世界上第一个重组DNA分子； 80年代，Mullis发明了聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术； 90年代，开展了“人类基因组计划”和模式生物的基因组测序，分子生物学进入“基因组时代” 3、分子生物学与基因工程的专业地位与作用。 核酸概述 1、核酸的化学组成 2、核酸的种类与特点：DNA和RNA的区别 （1）DNA含的糖分子是脱氧核糖，RNA含的是核糖；
（2）DNA含有的碱基是腺嘌呤（A）、胞嘧啶（C）、鸟嘌呤（G）和胸腺嘧啶（T），RNA含有的碱基前3个与DNA完全相同，只有最后一个胸腺嘧啶被尿嘧啶（U）所代替； （3）DNA通常是双链，而RNA主要为单链； （4）DNA的分子链一般较长，而RNA分子链较短。 3、DNA作为遗传物质的直接和间接证据； 间接： （1）一种生物不同组织的细胞，不论年龄大小，功能如何，它的DNA含量是恒定的，而生殖细胞精子的DNA含量则刚好是体细胞的一半。多倍体生物细胞的DNA含量是按其染色体倍数性的增加而递增的，但细胞核里的蛋白质并没有相似的分布规律。 （2）DNA在代谢上较稳定。 （3）DNA是所有生物的染色体所共有的，而某些生物的染色体上则没有蛋白质。（4）DNA通常只存在于细胞核染色体上，但某些能自体复制的细胞器，如线粒体、叶绿体有其自己的DNA。 （5）在各类生物中能引起DNA结构改变的化学物质都可引起基因突变。 直接：肺炎链球菌试验、噬菌体侵染实验 4、DNA的变性与复性：两者的含义与特点及应用 变性：它是指当双螺旋DNA加热至生理温度以上（接近100oC）时，它就失去生理活性。这时DNA双股链间的氢键断裂，最后双股链完全分开并成为无规则线团的过程。简而言之，就是DNA从双链变成单链的过程。
温州医学院医学检验专业《分子生物学检验技术》期末考试 卷样卷一标准答案 （卷面100分，占总成绩70%） 考试日期：2008年6月1日 考试时间：13：30-15：00 考试方式：闭卷 1.基因组 单倍体细胞中的全套染色体为一个基因组 2.蛋白质组 指由一个基因组，或一个细胞、组织表达的所有蛋白质 3.回文结构 一种旋转对称结构，在轴的两侧序列相同而反向。短的回文结构可能是一种特别的信号，如限制性内切酶的识别位点。较长的回文结构容易转化成发夹结构。 4.肽质量指纹图谱 蛋白质被识别特异酶切位点的蛋白酶水解后得到的肽片段的质量图谱。由于每种蛋白的氨基酸序列（一级结构）都不同，当蛋白被水解后，产生的肽片段序列也各不相同，因此其肽质量指纹图也具有特征性 5.生物芯片 指将大量探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。 6.分子生物学 从分子水平研究生物大分子的结构与功能从而阐明生命现象本质的科学。其主要研究领域包括蛋白质、蛋白质-核酸和蛋白质-脂质（即生物膜）。 7.PCR 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。 8.BLAST 是一个用来比对生物序列的一级结构的算法。 9.ddNTP
双脱氧核苷三磷酸，与dNTP 的区别在于脱氧核糖的C3 位置缺少-OH，ddNTP可以在聚合酶的作用下可与多核苷酸链的3’－OH之间形成磷酸二酯键，但不能与下一个核苷酸缩合，使多核苷酸链的延伸终止。 10.基因病 遗传物质（基因）发生改变导致的疾病 1.试述真核生物基因组特点； 答：（1）真核生物基因组DNA与蛋白质结合形成染色体，储存于细胞核内，除配子细胞外，体细胞内的基因的基因组是双份的，即有两份同源的基因组。 （2）真核细胞基因转录产物为单顺反子。一个结构基因经过转录和翻译生成一个mRNA 分子和一条多肽链。 （3）存在重复序列，重复次数可达百万次以上。 （4）基因组中不编码的区域多于编码区域。 （5）大部分基因含有内含子，因此，基因是不连续的。 （6）基因组远远大于原核生物的基因组，3*109 。 （错一点扣1.5分） 2.试述重组子结构特征的筛选的方法； 答：（1）重组子大小鉴别筛选：获得外源DNA后，分子量较原来载体大得多，可利用限制性核酸内切酶法鉴别。 （2）直接酶切鉴定：结合琼脂糖凝胶电泳 （3）PCR筛选法：提取重组子DNA，以外源基因两端的互补序列为引物，进行PCR扩增外源DNA. （4）核酸杂交技术筛选：将DNA的克隆片段转移至硝酸纤维素薄膜上，应用特异的核酸探针进行原位杂交检测。 （每点2分） 3.试述酵母双杂交技术原理； 答、酵母的细胞内检测蛋白间相互作用的遗传系统 真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域:DNA特异结合域（BD）与转录激活域（AD）。这两个结构域各具功能，互不影响。但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域,否则无法完成激活功能。不同来源激活因子的区BD与AD结合后则特异地激活被BD结合的基因表达。（4分） 将两个待测蛋白分别与这两个结构域建成融合蛋白，并共表达于同一个酵母细胞内。如果两个待测蛋白间能发生相互作用，就会通过待测蛋白的桥梁作用使AD与BD形成一个完整的转录激活因子并激活相应的报告基因表达。通过对报告基因表型的测定可以很容易地知道待测蛋白分子间是否发生了相互作用。（4分） 4.试述TaqMan技术原理； 答、（1）Taqman技术主要用于荧光定量PCR法，TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针，它的荧光与目的序列的扩增相关。（2分） （2）探针设计为与目标序列上游引物和下游引物之间的序列配对，带有一个荧光发光分子 和一个荧光淬灭分子。荧光基团连接在探针的5’端，而淬灭剂则在3’末端。（2分）
绪论 思考题：（P9） 1.从广义和狭义上写出分子生物学的定义？ 广义上讲的分子生物学包括对蛋白质和核酸等生物大分子结构与功能的研究，以及从分子水平上阐明生命的现象和生物学规律。 狭义的概念，即将分子生物学的范畴偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA结构与功能、复制、转录、表达和调节控制等过程。其中也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 2、现代分子生物学研究的主要内容有哪几个方面？什么是反向生物学？什么是 后基因组时代？ 研究内容： DNA的复制、转录和翻译；基因表达调控的研究；DNA重组技术和结构分子生物学。 反向生物学：是指利用重组DNA技术和离体定向诱变的方法研究已知结构的基因相应的功能，在体外使基因突变，再导入体内，检测突变的遗传效应，即以表型来探索基因结构。 后基因组时代：研究细胞全部基因的表达图式和全部蛋白质图式，人类基因组研究由结构向功能转移。 3、写出三个分子生物写学展的主要大事件（年代、发明者、简要内容） 1953年Watson和Click发表了?脱氧核糖核苷酸的结构?的著名论文，提出了DNA的双螺旋结构模型。 1972~1973年，重组DNA时代的到来。H.Boyer和P.Berg等发展了重组DNA 技术，并完成了第一个细菌基因的克隆，开创了基因工程新纪元。 1990~2003年美、日、英、法、俄、中六国完成人类基因组计划。解读人类遗传密码。 4、21世纪分子生物学的发展趋势是怎样的？ 随着基因组计划的完成，人类已经掌握了模式生物的所有遗传密码。又迎来了后基因组时代，人类基因组的研究重点由结构向功能转移。相关学说理论相应诞生，如功能基因组学、蛋白质组学和生物信息学。生命科学又进入了一个全新的时代。 第四章 思考题：（P130） 1、基因的概念如何？基因的研究分为几个发展阶段？ 概念：基因是原核、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列，是遗传的基本单位和突变单位以及控制形状的功能单位。 发展阶段：○120世纪50年代以前，主要从细胞的染色体水平上进行研究，属于基因的染色体遗传学阶段。 ○220世纪50年代以后，主要从DNA大分子水平上进行研究，属于分
医学检验本班《分子生物学检验技术》试卷 一. 选择题（在备选答案中选择一个最佳答案,每题2分,共20分）: 1. 在核酸提取时,常需要使用氯化钠,醋酸钠等盐溶液,真正的目的是（） A. 中和核酸的负离子,使其易于沉淀 B. 调节PH值 C. 保持核算的完整性 D. 提高核酸的浓度 E. 无特定目的 2. 在一个DNA分子中,如G所占摩尔比为17.2%,则A所占摩尔比为（） A. 82.8% B. 32.8% C. 17.2% D. 65.6% E. 无法计算 3.下列那项不是扩增反应所必需的?（） A. 引物和模板 B. dNTP C. Mg++ D .DNase E. 缓冲液 4. 下列那项是分子生物学技术形成的理论基础?（） A. 基因结构与功能的关系 B. 基因结构变异与疾病的关系 C. 病原微生物的基因结构特征 D. 基因的表达.调控与疾病的关系 E. 以上皆是 5. 分子生物学检验技术主要包括那些技术?（） A. 核酸分子杂交技术 B. DNA测序技术 C. PCR技术 D. DNA重组技术 E. 以上全是 6. 下列哪项检测需应用分子生物学检验技术?（） A. 肝功能检测 B.乙肝两对半检测 C. 乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测 D. 肿瘤细胞培养 E. 病原微生物培养 7. 在核酸的分离纯化过程中,为保证其一级结构的完整性,应采取（） A. 尽量简化分离步骤,缩短提取时间 B. 适当延长提取时间 C. 在37摄氏度条件下进行 D. 加入Mg++,Ca++等二价金属离子 E. 以上全是 8. 有一核酸样品,测得A260/A280=2.0,请问该样品属于哪类核酸样品?（） A. DNA B. RNA C. 是DNA,但有蛋白质污染 D. 是RNA,但有蛋白质污染 E. DNA和RNA 9. 在RNA提取和纯化过程中,为避免Rnase污染而导致RNA的降解,应采取（）
第0章绪论 一、名词解释 1.分子生物学 2.单克隆抗体 二、填空 1．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。 三、是非题 1、20世纪60年代，Nirenberg建立了大肠杆菌无细胞蛋白合成体系。研究结果发现poly(U)指导了多聚苯丙氨酸的合成，poly(G)指导甘氨酸的合成。（×） 四、简答题 1. 分子生物学的概念是什么？ 2. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？ 3. 分子生物学研究内容有哪些方面？ 4. 分子生物学发展前景如何？ 5. 人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？ 6．简述分子生物学发展史中的三大理论发现和三大技术发明。 7. 简述分子生物学的发展历程。 8. 二十一世纪生物学的新热点及领域是什么？ 9. 21世纪是生命科学的世纪。20世纪后叶分子生物学的突破性成就，使生命科学在自然科学中的位置起了革命性的变化。试阐述分子生物学研究领域的三大基本原则，三大支撑学科和研究的三大主要领域？ 答案： 一、名词解释 1.分子生物学：分子生物学就是研究生物大分子之间相互关系和作用的一门学科，而生物大分子主要是指基因和蛋白质两大类；分子生物学以遗传学、生物化学、细胞生物学等学科为基础，从分子水平上对生物体的多种生命现象进行研究。
2.单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 二、填空 1.结构分子生物学，基因表达与调控，DNA重组技术 三、是非题 四、简答题 1. 分子生物学的概念是什么？ 答案： 有人把它定义得很广：从分子的形式来研究生物现象的学科。但是这个定义使分子生物学难以和生物化学区分开来。另一个定义要严格一些，因此更加有用：从分子水平来研究基因结构和功能。从分子角度来解释基因的结构和活性是本书的主要内容。 2. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？ 分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。狭义：偏重于核酸的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调节控制等过程，其中也涉及与这些过程有关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会，也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。所谓在分子水平上研究生命的本质主要是指对遗传、生殖、生长和发育等生命基本特征的分子机理的阐明，从而为利用和改造生物奠定理论基础和提供新的手段。这里的分子水平指的是那些携带遗传信息的核酸和在遗传信息传递及细胞内、细胞间通讯过程中发挥着重要作用的蛋白质等生物大分子。这些生物大分子均具有较大的分子量，由简单的小分子核苷酸或氨基酸排列组合以蕴藏各种信息，并且具有复杂的空间结构以形成精确的相互作用系统，由此构成生物的多样化和生物个体精确的生长发育和代谢调节控制系统。阐明这些复杂的结构及结构与功能的关系是分子生物学的主要任务。 3. 分子生物学主要包含以下三部分研究内容：A.核酸的分子生物学，核酸的分子生物学研究核酸的结构及其功能。由于核酸的主要作用是携带和传递遗传信息，因此分子遗传学（moleculargenetics）是其主要组成部分。由于50年代以来
临床分子生物学检验试 题精选文档 TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-
临床分子生物学检验试题 一填空题 1.核酸的最大紫外吸收波长在，蛋白质的最大吸收波长在。 2.双链DNA中的碱基对有，。 3.根据分子和结构不同，RNA可以分为，，，。 4.核酸变性过程中,紫外光吸收达到最大值50%时温度称为 ,其主要与核酸的最终 含量有关. 水解后主要产物是 , , 。 6.核酸（DNA和RNA）分子除含有，，，四种元素外，还含有大量的元素。 技术是当今分子生物学使用最多的技术之一，它一般都有，，三个基本反应步骤构成。 8.核酸水解后首先得到核苷酸，核苷酸可以继续水解得到和。 9.通用遗传密码中代表终止密码的三种密码是UAA、和。 方法扩增DNA片段是，在反应中除了用该DNA片段作为模板外，尚需加入、 和。 11.在DNA分子中还有大量的磷（P），P的含量大约为。 二．判断题 1.核酸变性时,碱基对之间的氢键断开,堆积力也受到破坏,共价键断裂.（ ） 2.核酸杂交原理就是根据核酸分子间互补.( ) 3.在中性或碱性溶液中,核酸主要带正电荷.( ) 4.核酸分子质量很大,因此核酸溶液具有很大粘性.( ) 5.分子杂交可以发生在任何只有互补核苷酸顺序两条单股核酸单链之间,如DNA/DNA、DNA/RNA、RNA/RNA 等.（） 6.核酸水解后首先得到核苷酸，核苷酸可以继续水解得到核苷和磷酸（） 7.在高分子溶液中一般球形分子比线形分子的具有较大的粘度。（） 8.核酸的最大吸收波长在280nm，而蛋白质的最大吸收波长在260nm。（） 9.酚—氯仿提取法是我们在提取DNA 时所用的经典方法，现在仍然被许多实验室所采用。（） 10.组成RNA的四种碱基是腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）、胸腺嘧啶（T）。（） 技术是以DNA或RNA为模板进行核酸的体外扩增技术。（） 技术是现在常用的一种扩增技术，它的基本步骤的顺序是退火、变性、延伸。（） 13.免疫印渍技术及Southern Blotting 是一种印渍技术和抗原抗体反应结合的技术（） 14.在临床基因扩增检验诊断实验室工作的实验操作人员必须经过业务培训并取得上岗证书（） 15.无论是DNA还是RNA，在多核苷酸链内既有酸性的磷酸基又有碱性的含氮杂环碱，因此核酸是两性电解质。（ ） 16.在PCR实验中，退火是指在极端的PH和受热条件下，核酸分子中的氢键断裂，DNA双螺旋解开的一个过程。（ ） 17.临床基因扩增诊断实验室的设置必须遵循一定的原则，而这些基本原则制定的主要依据就是使建立的基因扩增诊断实验室结果的准确性能够得到
分子生物学作业 第一次 1、Promoter：（启动子）一段位于结构基因5…端上游、能活化RNA聚合酶的DNA序列，是RNA聚合酶的结合区，其结构直接关系转录的特异性与效率。 2、Cis-acting element：（顺式作用元件）影响自身基因表达活性的非编码DNA序列，组成基因转录的调控区包括：启动子、增强子、沉默子等 一、简述基因转录的基本特征。（作业）P35 二、简述蛋白质生物合成的延长过程。P58 肽链的延伸由于核糖体沿mRNA5 ′端向3′端移动，开始了从N端向C端的多肽合成。 起始复合物，延伸AA-tRNA，延伸因子，GTP,Mg 2+，肽基转移酶 每加一个氨基酸完成一个循环，包括: 进位：后续AA-tRNA与核糖体A位点的结合 起始复合物形成以后，第二个AA-tRNA在EF-Tu作用下，结合到核糖体A位上。 通过延伸因子EF-Ts再生GTP,形成EF-Tu?GTP复合物，参与下一轮循环。 需要消耗GTP，并需EF-Tu、EF-Ts两种延伸因子。 转位：P位tRNA的AA转给A位的tRNA,生成肽键； 移位：tRNA和mRNA相对核糖体的移动； 核糖体向mRNA3’端方向移动一个密码子，二肽酰－tRNA2进入P位，去氨酰-tRNA 被挤入E位，空出A位给下一个氨酰-tRNA。移位需EF-G并消耗GTP。 三、真核细胞mRNA分子的加工过程有哪些？P40 1、5’端加帽 加帽指在mRNA前体刚转录出来或转录尚未完成时，mRNA前体5’端在鸟苷酸转移酶催化下加G,然后在甲基转移酶的作用下进行甲基化。 帽子的类型 0号帽子(cap1) 1号帽子(cap1) 2号帽子(cap2) 2、3’端的产生和多聚腺苷酸花 除组蛋白基因外，真核生物mRNA的3?末端都有poly(A)序列，其长度因mRNA种类不同而变化，一般为40～200个A 。 大部分真核mRNA有poly(A)尾巴，1/3没有。 带有poly(A)的mRNA称为poly(A)+， 不带poly(A)的mRNA称为poly(A)－。 加尾信号： 3?末端转录终止位点上游15～30bp处的一段保守序列AAUAAA。 过程： ①内切酶切开mRNA3?端的特定部位； ②多聚A合成酶催化加poly(A)。 3、RNA的剪接
分子生物学总结完整版 1、结构分子生物学； 2、基因表达的调节与控制； 3、DNA重组技术及其应用； 4、结构基因组学、功能基因组学、生物信息学、系统生物学 第二章DNA and Chromosome 1、DNA的变性：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 2、 DNA复性：变性DNA在适当条件下，分开的两条单链分子按照碱基互补原则重新恢复天然的双螺旋构象的现象。 3、 Tm(熔链温度)： DNA加热变性时，紫外吸收达到最大值的一半时的温度，即DNA分子内50%的双链结构被解开成单链分子时的温度） 4、退火：热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，称为退火 5、假基因：基因组中存在的一段与正常基因非常相似但不能表达的DNA序列。以Ψ来表示。 6、 C值矛盾或C值悖论:C值的大小与生物的复杂度和进化的地位并不一致，称为C值矛盾或C值悖论(C-Value Paradox)。 7、转座：可移动因子介导的遗传物质的重排现象。 8、转座子：染色体、质粒或噬菌体上可以转移位置的遗传成分
9、 DNA二级结构的特点：1）DNA分子是由两条相互平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成；2）DNA分子中的脱氧核苷酸和磷酸交替连接，排在外侧，构成基本骨架，碱基排列在外侧；3）DNA分子表面有大沟和小沟；4）两条链间存在碱基互补，通过氢键连系，且A=T、G ≡ C（碱基互补原则）；5）螺旋的螺距为 3、4nm，直径为2nm，相邻两个碱基对之间的垂直距离为0、34nm，每圈螺旋包含10个碱基对；6）碱基平面与螺旋纵轴接近垂直，糖环平面接近平行 10、真核生物基因组结构：编码蛋白质或RNA的编码序列和非编码序列，包括编码区两侧的调控序列和编码序列间的间隔序列。特点：1）真核基因组结构庞大哺乳类生物大于2X109bp；2）单顺反子（单顺反子：一个基因单独转录，一个基因一条mRNA，翻译成一条多肽链；）3）基因不连续性断裂基因（interrupted gene）、内含子(intron)、外显子(exon)；4）非编码区较多，多于编码序列(9:1) 5）含有大量重复序列1 1、Histon(组蛋白)特点：极端保守性、无组织特异性、氨基酸分布的不对称性、可修饰作用、富含Lys的H5 12、核小体组成： 由组蛋白和200bp DNA组成 13、转座的机制：转座时发生的插入作用有一个普遍的特征，那就是受体分子中有一段很短的被称为靶序列的DNA会被复
《分子生物学》课程教学大纲 课程编号：233201 课程名称：《分子生物学》 总学时数：64 实验学时：0 先修课及后续课：先修课为《生物化学》，《遗传学》；后续课为《基因工程》 一、说明部分 1. 课程性质：生物技术专业课，必修 2. 教学目标及意义 本课程是高等院校生物专业的专业课。旨在使学生掌握分子生物学的基本知识、基本概念，并了解分子生物学的发展趋势及应用前景。 3. 教学内容和要求 本课程安排在学生完成《生物化学》、《遗传学》等有关基础和专业基础课程之后的第六学期。内容上注意与以上课程的衔接，并避免不必要的重复。同时注意与后续课程《基因工程》等课程的衔接。课堂教学应力求使学生掌握基本概念，了解分子生物学的发展历史以及最新研究成果；熟练掌握DNA的结构与功能、DNA的复制、RNA的转录、蛋白质的合成、RNA在蛋白质合成中的功能、遗传密码、基因表达与调控的本质、基因组与比较基因组学；由于该课程内容繁多，发展迅速，故授课教师在吃透教材基础上，应广泛阅读相关参考资料，紧跟本学科发展，随时补充新内容，使学生及时了解本学科的重要进展及发展动态。分子生物学的发展依赖于现代分析和研究技术，因此，配合分子生物学实验课程，讲解一些分子生物学的重要研究方法。 4. 教学重点，难点 重点：DNA的结构与功能；DNA的转座；基因的表达与调控 难点：基因表达的调控 5. 教学方法与手段 在教学方法上采取课堂讲授为主，辅以多媒体课件、提问、综述、实验、作业、教学辅助材料等，以加强学生对理论知识的消化和理解，在教学过程应注意积极启发学生的思维，培养学生发现问题和解决问题的能力。 6. 教材及主要参考书 教材：朱玉贤，李毅.《现代分子生物学》，第三版；北京：高等教育出版社.2007. 主要参考书： （1）杨岐生.《分子生物学基础》，杭州：浙江大学出版社.1998. （2）郜金荣等.《分子生物学》，武汉：武汉大学出版社.1999. （3）阎隆飞，张玉麟.《分子生物学》，北京：中国农业大学出版社.1997. （4）魏群，分子生物学实验指导.北京：高等教育出版社，2003. （5）李振刚.《分子遗传学》，北京：科学出版社，2000. （6）Weaver R. Molecular Biology. 2nd Edition.北京：科学出版社，2001.
第八章临床分子生物学检验 一、选择题 1．下列核酸在波长为260 nm时，光吸收强度大小排列正确的是：( ) A．G>A>T>C B。A>T>G> C．C>G>T>A D．G>C>A>T 2．鉴别RNA靶分子的杂交是：( ) A．Southern Blot B．Northern Blot C．WesternBlot D．斑点杂交 3．在做RNA检测时，对全血抗凝抗凝剂最好选用：( ) A．肝素B．EDTA-K2 C．EDTA-Na2 D．草酸钾 4．一般DNA分子中的碱基数组成规律，下列说法错误的是：( ) A．A二C，G＝T B．A+G＝C+T C不同DNA中碱基组成不相同‘ D．同一个不同组织细胞中DNA碱基组成相同 5．核酸分子储存和传递遗传信息是通过：( ) A．核苷的结构B．磷酸二酯键 C．碱基顺序D·核苷酸的结构 6．分子生物学对医学的发展已经起到越来越大的作用，许多分子生物学的发现对分子生物学的发展都起到里程碑的作用，基因就是由转化功能的DNA所组成，最早的发现者是：( ) A．Friderick Griffith B．A1hed Hershey C．Martha Chase D．Oswald Avery 7．基因扩增检测方法也有检测的灵敏度，一般适时荧光定量PCR的检测下限是：( ) A 103拷贝／ml B．104拷贝／m1 C．102拷贝／ml D．105拷贝／m1 8．RNA和DNA彻底水解后的产物为：( ) A．核糖相同，部分碱基不同 B．核糖不同，碱基相同 C．核糖相同，碱基相同 D．核糖不同，部分碱基不同 9．下列碱基仅存在于RNA中而不存在于DNA中的是：( ) A．鸟嘌呤B．尿嘧啶 C．胸腺嘧啶D．腺嘌呤 二填空题 1．核酸的最大紫外吸收波长在，蛋白质的最大吸收波长在。2．双链DNA中的碱基对有、。 3．根据分子和结构不同，RNA可以分为、、、。4．核酸变性过程中，紫外光吸收达到最大值50％时温度称为。 其主要与核酸的最终含量有关。 5．DNA水解后主要产物是、、。