我国人免疫球蛋白类制品生产工艺中采用的特定病毒去除和灭活方
法有哪些？
2007年01月25日发布
为了提高血液制品安全性，从1995年开始，我国就强制要求在所有血液制品的生产工艺中增加特殊的病毒去除和灭活工艺。如巴氏消毒法（制品在60℃加热10小时）、有机溶剂/去污剂（S/D）灭活病毒法、低pH孵放法（在pH3.8～4.4，23～25℃，放孵至少21天）、干热法（冻干制品在80℃加热72小时，10 0℃加热30分钟）、纳米膜过滤法（根据病毒大小，用适宜孔径的纳米膜除去病毒）等。人免疫球蛋白类制品生产工艺中采用一步或两步特定病毒去除和灭活方法有：低pH孵放法、纳米膜过滤法、S/D法、巴氏消毒法。
免疫球蛋白对轮状病毒性肠炎患儿炎性反应的影响及疗效分析 目的：观察免疫球蛋白辅助治疗小儿轮状病毒性肠炎的临床效果。方法：选择笔者所在医院儿科轮状病毒性肠炎住院治疗患儿68例，随机分为对照组（给予抗病毒等常规治疗+安慰剂）和观察组（抗病毒等常规治疗+注射用免疫球蛋白静脉滴注），各34例。观察两组患儿治疗前后肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平及分泌型免疫球蛋白A（SIgA）含量，并比較两组临床疗效。结果：观察组总有效率为79.42%，高于对照组的52.94%，差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗后，两组患儿TNF-α、IL-6水平均低于于治疗前，且观察组两项指标水平显著低于对照组；两组患儿SIgA分泌量较治疗前均明显升高，且观察组SIgA水平显著高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：免疫球蛋白辅助治疗小儿轮状病毒性肠炎效果显著，可缓解患儿肠道炎性反应，延缓病情发展，值得临床推广。 [Abstract] Objective：To investigate the therapeutic effect of Immunoglobulin on pediatric rotavirus enteritis.Method：The 68 children with rotavirus enteritis were selected as the research object，and were randomly divided into control group （conventional antiviral treatment and placebo）and observation group（conventional antiviral treatment and Immunoglobulin），34 cases in each group.The serum levels of TNF-α，IL-6 changes，SIgA of two groups before and after treatment were observed，and the clinical curative effect were compared.Result：The total efficiency of observation group was 79.42%，which was higher than 52.94% of control group，the difference was statistically significant（P＜0.05）.After treatment，the TNF- and IL-6 levels in the two groups were lower than those before treatment，and the two indicators in the observation group were significantly lower than those in control group（P＜0.05）.The SIgA level in the two groups increased significantly compared with those before treatment，and the SIgA level in observation group was significantly higher than that in the control group，the differences were statistically significant（P ＜0.05）.Conclusion：Immunoglobulin can significantly improve the cure rate of pediatric rotavirus enteritis and delay the inflammatory reaction of the intestinal tract，shorten the course of disease.It is worthy of clinical promotion. [Key words] Immunoglobulin；Rota virus；Enteritis；Inflammatory response 轮状病毒（rota virus，RV）是导致婴幼儿发生急性肠炎的主要因素，会出现腹泻、呕吐及发热等临床症状[1]。小儿轮状病毒性肠炎发病快，病情进展迅速，对其生命健康造成严重威胁[2]。文献[3]研究表明，2006-2016年有（60～80）万的儿童死于腹泻，其中有40%～60%由RV所致。目前轮状病毒性肠炎以对症治疗为主，无特效药。免疫球蛋白是小儿轮状病毒性肠炎的辅助治疗药，可以缓解患儿的临床症状，缩短病程，但相关文献研究较少，有待更多研究加以验证。本研究旨在观察免疫球蛋白辅助治疗小儿轮状病毒性肠炎的临床效果，探讨对患儿肠道炎症反应的影响。1 资料与方法
2020年度WHO清洁验证指南（中文版） 附录3 清洁验证 世界卫生组织药物制剂规范专家委员会第十四次报告。日内瓦，世界卫生组织；2006：附件4（世卫组织技术报告系列第937号） 1.原则 2.范围 3.概述 4.清洁验证方案和报告 5.人员 6.设备 7.清洁剂 8.微生物 9.取样 10.分析方法 11.确定可接受标准 （1）原则 1.1药品质量管理规范（GMP）的目标包括防止可能的污染、药物原料和产品的交叉污染。 1.2药品可能被各物质污染，如与微生物有关的污染物，产品（包括原料药和赋形剂残留）、清洁剂、空气传播的物料，如微尘和颗粒物。润滑剂和辅料材料，如消毒剂、残留降解产物：例如，在清洗的过程中使用强酸和强碱会导致产品残渣分解。洗涤剂、酸和碱的分解产物，可作为清洗工艺的一部分。 1.3适当的清洗程序对防止污染和交叉污染具有重要作用。清洗方法的验证需提供文件证明，经批准的清洗程序将提供与预期用途相适应的清洁设备。 1.4清洁验证的目的是证明设备对产品、洗涤剂和微生物残留物的清洗均能达到可接受水平，以防止可能的微生物污染和交叉污染。 1.5清洁验证对于非关键性的清洗并不一定是必须的，例如批次相同的产品（或散装过程中相同中间体的不同批次）、地板、墙壁、容器外部以及一些中间步骤
之间的清洗。 1.6清洁验证在多产品生产设备清洁中是很重要的，并应在设备、消毒程序和服装洗涤等方面进行验证。 2.范围 2.1指南里描述了清洁验证的一般方面，不包括可能需要的特殊清洁验证或灭活，例如，在生物制造业中去除病毒或支原体污染物。 2.2一般情况下，清洁验证适用于关键清洁，例如，在生产一种产品与另一种产品，与产品、药品和原料药接触的表面的清洗。 3.概述 3.1要有详细的书面标准操作规程（SOP），说明设备和仪器的清洗过程。清洗程序应该经过验证。 3.2制造商应制定清洗策略和一定的清洗验证程序，包括：与产品的接触表面；产品转换后的清洗（当一种药物配方被另一种完全不同的配方替换时）；在批次之间的活动（当同一配方是在一段时间内，在不同的日期生产）；用于清洁验证的产品组。（这种情况经常发生在产品中含有具有类似性质（如溶解度）或具有不同强度的相同物质的地方。一种可接受的策略是首先制造含量较低的剂型（不一定是最低剂量），然后是含量较高的形式。）有时产品的“组”在活性物质或赋形剂方面略有不同。需定期评估和再清洁验证之间生产的批次数。 3.3至少连续三次应用清洁程序，并证明是成功的，以证明该方法是有效的。 4.清洁验证方案和清洁验证报告 4.1清洁验证应在清洁方案中进行描述，该方案应得到正式批准，例由质量控制或质量保证部门批准。 4.2在制定清洁验证方案时，应考虑一下事项： 系统拆卸 预清洗 清洁剂、浓度、溶液体积、水的质量 时间和温度 流速、压力和冲洗 设备复杂性及设备设计
风疹诊断标准及处理原则 ^~`前言 风疹是由风疹病毒引起的急性呼吸道传染病，呈世界性分布，在我国归属于法定丙类传染病，一年四季均可发生，以冬春季发病为多，易感年龄以1～5岁为多，故流行多见于学龄前儿童。自风疹疫苗问世以来，发病率明显下降。风疹临床症状轻微，但孕妇妊娠早期初次感染风疹病毒后，病毒可通过血胎屏障进入胎儿，常可造成先天性胎儿畸形、死胎、早产，因此，风疹的早期确诊及预防极为重要。 本标准由中华人民共和国卫生部提出。 本标准由浙江医科大学传染病研究所、中国预防医学科学院病毒学研究所负责起草。 本标准主要起草人：刘克洲、张礼璧。 本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。 1 范围 本标准规定了风疹的诊断标准及处理原则。 本标准适用于各级各类医疗、保健机构、卫生防疫机构和人员对风疹病人的诊断、报告和处理。 2 诊断原则 典型病例可根据临床表现结合流行病学作出临床诊断，不典型病例需根据血清风疹抗体的检测或风疹病毒的分离阳性予以确诊。 3 诊断标准 3．1 风疹 3．1．1 流行病学史 与确诊的风疹患者在14～21天内有接触史。 3．1．2 临床症状 3．1．2．1 发热。 3．1．2．2 全身皮肤在起病1～2天内出现红色斑丘疹。 3．1．2．3 耳后、枕后、颈部淋巴结肿大或结膜炎或伴有关节痛（或关节炎）。 3．1．3 实验室诊断 3．1．3．1 咽拭子标本分离到风疹病毒（见附录A），或检测到风疹病毒核酸。3．1．3．2 1个月内未接种过风疹减毒活疫苗而在血清中查到风疹IgM抗体（见附录B）。3．1．3．3 恢复期病人血清风疹IgG抗体滴度较急性期有4倍或4倍以上升高，或急性期抗体阴性而恢复期抗体阳转（见附录B）。 3．1．4 病例分类 3．1．4．1 疑似病例：具备3．1．2．2条，同时伴3．1．2．1或3．1．2．3条。3．1．4．2 临床诊断病例：疑似病例加3．1．1条。 3．1．4．3 确诊病例：疑似病例加3．1．3．1或3．1．3．2或3．1．3．3条。 3．2 先天性风疹综合征 3．2．1 临床表现 3．2．1．1 新生儿白内障／先天性青光眼，先天性心脏病，听力缺损，色素性视网膜病，唇裂腭裂，头小畸形，X线骨质异常。 3．2．1．2 紫癜、脾肿大、黄疸、精神性迟缓、脑膜脑炎。 3．2．2 经实验室确诊患儿母亲在妊娠早期有风疹病毒感染史 3．2．3 实验室诊断 3．2．3．1 婴儿血清风疹IgM抗体阳性。
××××××医院 Policy No.：Effective Date：January 01,2006 Revision No.：00 文件编号：实施日期：2006年01月01日修订号：00 Generated department：Total Pages：Three 编制部门：检验科总页数：3 人类免疫缺陷病毒抗体诊断指导书（胶体金法） Prepared by : 编制 --------------------------------------------- Name: 姓名： Position: 职务: Date: December 16,2005 日期：2006年01月01日 Audited by: 审核 --------------------------------------------- Name: 姓名： Position: 职务： Date: December 16,2005 日期：2006年01月01日 Approved by 批准 --------------------------------------------- Name: 姓名： Position: 职务： Date: December 16,2005 日期：2006年01月01日 TOTAL COPIES: TWO 共 2 份 COPY TO: 分发至：检验科、质控科。
文件编号：页码：2/2 文件标题：人类免疫缺陷病毒抗体诊断指导书实施日期：2006.01.01 1.0 目的 规范人类免疫缺陷病毒抗体检测（胶体金法）的操作标准，确保检测结果的准确性。 2.0 范围 适用于本医院实验室对待检标本中人类免疫缺陷病毒抗体（胶体金法）的检测。 3.0 参考 3.1《人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（胶体金法）使用说明书》 4.0 程序 4.1采集静脉全血或血浆样本。必须在无菌条件下操作，并避免样品溶血。如果标本在收集后7天内检测， 样品须放在2－8℃保存，如果大于7天须冷冻保存。 4.2将待测标本从储存条件下取出并编号，如有低温保存则应平衡至室温。 4.3将胶体金试剂从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 4.4用微量加样器取50μL样本血清，加到试剂的加样处。 4.5加样后，阳性标本可在1～30分钟内检出，超过30分钟将对实验结果的观察造成影响，建议30分钟最终观察并记录实验结果。 5.0 结果判断： 5.1阳性：试剂在检测区和对照区位置各出现一条紫红色带，如果检测区的紫红色条带隐约可见，建议对 该样本重复测试，并使用其他方法确认。 5.2阴性：试剂只在对照区位置出现一条紫红色条带。 5.3失效：对照区未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏或者是样本中的抗体含 量过高。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并将待测样本稀释后用新的试剂重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。 5.4注意：测试区内的紫红色条带可呈现颜色深浅的现象。但是，在规定的观察时间内，不论该色带颜色 深浅，即使只有非常弱的色带也应判定为阳性结果。 6.0注意事项 6.1实验环境应保持一定湿度、避风。避免在过高温度下进行实验。 6.2试剂从包装中取出后，应尽快进行实验，避免放置于空气中过长时间，导致受潮。 6.3试剂可在室温下保存，谨访受潮。低温下保存的试剂应平衡至室温方可使用。 7.0 附件 7.1实验结果记录单
单纯疱疹病毒抗体igg阳性是怎么回事 我的老婆怀孕了，我要当爸爸了，我真的好开心。前几天我跟我的老婆去医院做检查，化验单上面有一项是单纯疱疹病毒抗体igg阳性，刚开始的时候我不知道这是什么意思，不过在问过医生以后就知道了，所以我想给其他的一些准爸爸普及一下，做好一些准备。 抗体IgG阳性的临床意义：表明孕妇既往有过这种病毒感染。或接种过疫苗。抗体IgM阴性的临床意义：没有活动性感染， 但不排除潜在感染。 一般认为孕妇的活动性感染与胎儿宫内感染有关，约40%的活动性感染容易引起胎儿的宫内感染，所以，孕期检查主要检查孕妇血中的IgM抗体。我国妇女中巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、风疹病毒、人乳头瘤的感染率很高，既往感染率高达90%。据调查，孕妇中各种病原体的活动性感染约在3%~8%，但也有一些IgM 抗体不高的孕妇可能有潜在感染，也可能造成胎儿的宫内感染。
经过以上的分析，您可能清楚了，在化验单上，不是一看到有加号（+），就认为会造成胎儿的宫内感染。IgG抗体阳性，仅仅说明既往感染过这种病毒，或许对这种病毒有了免疫力了。IgG抗体阴性，说明孕妇也许没有感染过这种病原体，对其缺乏免疫力，应该接种疫苗，待产生免疫抗体后再怀孕。接种过一些病毒疫苗的妇女，会出现IgG抗体阳性。如接种过风疹疫苗的妇女会出现风疹病毒IgG抗体阳性。接种过乙肝疫苗的妇女会出现乙肝抗体阳性。所以，要分清哪个是保护性抗体，哪个是非保护性抗体。 你的是保护性抗体，好的，你是安全的。 如果这这项检查的结果是不正常的，就要相应的做一个决定，毕竟这关系到大人和宝宝。国家一直倡导，少生、优生，所以就我个人一些建议，还是放弃这个孩子，以后还是属于自己的，大人也要做一些相应的治疗，为下次怀孕做准备。
湖南省职业病防治院 作业指导书 标题：人类免疫缺陷病毒抗体（酶联免疫法） 修改记录
湖南省职业病防治院作业指导书文件编号： 标题：人类免疫缺陷病毒抗体（酶联免疫法）版号：第 1 版页码1/2 1、目的 用于临床人类免疫缺陷病毒感染的辅助诊断。 2、范围 适用于献血员筛查与临床病例。 3、职责 检测人员按照本规程进行检测操作。 4、原理 采用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒“1”型和“2”型（HIV-1/HIV-2）抗原包被的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体。 5、样本要求 仅限于检测人体血清或血浆。 常规方法采集。 血清：采血后，室温放置1-2小时，待血液凝固，再于3000转/分钟离心15分钟。 血浆：采血后，样品与抗凝剂反复轻摇混匀，再3000转/分钟离心15分钟。 如果样品没有在8小时内测定，应将其保存于2℃-8℃。如果样品不能在7天内测定，应将血清或血浆与血细胞分离， -20℃保存，避免反复冻融。 6．分析系统 分析仪器：Thermo Mk3型酶标仪，检测波长450nm，参考波长630nm。 37℃恒温箱。 振荡器用于样品、试剂的混匀。 微量加样枪。 试剂准备： 试剂盒于冰箱保存，使用前应取出置37℃。 取试剂盒内洗涤液用蒸馏水作25倍稀释，置洗瓶中备用。 质控试剂：-20℃保存，溶解后随试剂一起冷藏，每天随样品一起检测并保存质控结果，每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。 7、分析步骤 样品编号：从6号开始编号。
设阴性对照3孔，Anti-HIV-1阳性对照1孔，Anti-HIV-2阳性对照1孔，分别加入阴、阳对照各50微升。 每个标本待测孔加入标本血清50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育60分钟。 手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30~60秒，甩干，重复6次后拍干。 每孔加酶标工作液50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育30分钟。 手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30~60秒，甩干，重复6次后拍干。 每孔加显色剂A液，显色剂B液各50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育10分钟。 每孔加入终止液50微升，混匀。 选取相应的程序号，用酶标仪双波长比色。 8、计算 Cutoff值=阴性对照平均A值+。 9、参照区间 阴性对照A值应≤ Anti-HIV-1阳性对照A值应≥ Anti-HIV-2阳性对照A值应≥ 10.临床意义 样品A值≥临界值为HIV抗体阳性 样品A值＜临界值为HIV抗体阴性 11.注意事项 从冷藏环境中取出试剂盒应置37℃平衡30分钟后方可使用，余者应按前述方法保存和使用。在平衡试剂的同时，待测样品需置室温平衡30分钟后再行测试。 使用前试剂应摇匀。 须确保样品加样量准确，如果加样量不准确，可能会导致错误的结果，建议使用微量移液器加所有组份；用滴瓶滴加时，应先弃去1~2滴，垂直匀速地滴加。避免在加样过程中，将液体接触到或溅到微孔边缘上。 封片不能重复使用。 结果判断须在反应终止后10分钟内完成。 不同批号的试剂不可混用。 本试剂盒应视为有传染物质，请按传染病实验室检查规程处理。 12.支持性文件 全国临床检验操作规程（第3版）
轮状病毒IgM抗体酶联免疫诊断试剂盒说明书 【试剂盒名称】 通用名：轮状病毒IgM抗体酶联免疫诊断试剂盒说明书 【原理及用途】 本试剂盒采用间接ELRSA方法检测轮状病毒IgM抗体，具有灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简便等优点。适用于血清类标本，对轮状病毒IgM抗体的诊断及流行病学调查具有重大意义，适合一般实验室开展。 【试剂盒组成】 病人标本无需特殊制备处理，采用正确医用技术收集全血标本，离心分离后，提取血清用于检测。待测血清存放于4℃冰箱，采血后24h内测定。若需长时间保存，则应冻于-20℃一下，避免反复冻融。使用前恢复到室温。 【操作步骤】 1)加样：将标本稀释液100ul（或两滴）加到包被板孔内（预留阴、阳性及空 白对照2-5孔），将待测血清用 PBS或生理盐水按1:20稀释后取10ul加入反应孔内。阴性对照1-3孔阳性对照1孔，各加100ul对照血清。空白对照1孔空置。 2)孵育：将反应板震荡使样品混匀后置37℃温箱或水浴反应30分钟。 3)洗涤：用蒸馏水将浓缩洗涤液30ml（50ml）稀释至60ml（1000ml）。机洗： 5次，每孔注入洗涤液300ul或注满，停留30秒后吸尽拍干。 4)加酶结合物：每孔加入100ul（或2滴）酶结合物，空白不加。 5)孵育：置37℃温箱反应30分钟。 6)洗版5次：洗板操作同步骤3。 7)显色：每孔加底物A、B液各50ul（或一滴），充分混匀，37℃避光显色10 分钟。 8)终止：每孔加入终止液50ul（或一滴）混匀终止反应。 【结果判断】 1.酶标仪设定波长450nm，先用空白孔调零，然后测定各孔OD值：如果选 用双波长测定，不必设值空白对照孔。 2.当阴性对照平均OD值小于0.08，阴性对照（PC）OD值，说明试剂盒有 效且实验操作正确，否则应当重复实验。 3.临界值（COT-OFFVALUE）等于0.10加阴性对照平均（NC）OD值。(当阴
血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则 目前已知经血液制品传染的病毒主要有HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、HTLV和细小病毒B19。尚未发现经血液制品传染CJD。但有少数研究报告发现有实验性传染现象，因此要密切关注CJD，特别是vCJD的发展动向。 为了提高血液制品安全性，生产工艺要具有一定的去除/灭活部分病毒能力，生产过程中应有特定的去除/灭活病毒方法。本技术指导原则是对血液制品（指以人血浆为原料制备的制品）生产过程以及特定的去除/灭活病毒方法验证的指导原则，包括指示病毒和病毒去除/灭活方法的选择、验证方案的设计、结果判定以及附录所列技术验证申报的程序。 一、去除/灭活病毒方法的选择 由于不同类血液制品潜在的污染病毒的可能性不同，为此选择病毒去除/灭活方法的侧重点也应有所不同： （一）凝血因子类制品 生产过程中应有特定的能去除/灭活脂包膜和非脂包膜病毒的方法，可采用一种或多种方法联合去除/灭活病毒。 （二）免疫球蛋白类制品 对于免疫球蛋白类制品（包括静脉注射用人免疫球蛋白、人免疫球蛋白和特异性人免疫球蛋白）生产过程中应有特定的灭活脂包膜病毒方法。但从进一步提高这类制品安全性考虑，提倡生产过程中加入特定的针对非脂包膜病毒的去除/灭活方法。 （三）白蛋白 采用低温乙醇生产工艺和特定的去除/灭活病毒方法，如巴斯德消毒法等。 二、常用的去除/灭活病毒方法评价 （一）巴斯德消毒法（巴氏消毒法） 1．人血白蛋白制品 几十年临床应用结果表明，白蛋白的巴氏消毒法对HIV和肝炎病毒是安全的。其病毒灭活条件已很完善，可不要求进行病毒灭活验证。但是必须对巴氏消毒法所用设施进行验证，使巴氏消毒各参数符合要求（包括制品内温度分布的均一性和灭活时间）。 2．其它血液制品（液体制剂） 由于制品的组成、稳定剂（如：氨基酸、糖、枸橼酸盐等）及其浓度的不同，均会对灭活病毒效果有一定的影响。因此在采用巴氏消毒灭活病毒方法时必须进行病毒灭活效果验证。 （二）干热法（冻干制品） 80℃加热72小时，可以灭活HBV、HCV、HIV和A V等病毒。但应考虑制品的水分含量、制品组成（如：蛋白质、糖、盐和氨基酸）对病毒灭活效果的影响。应确定允许的制品瓶间各参数的差异。病毒灭活用的干热箱至少每半年验证一次。验证时干燥箱内应设多个测温点（包括制品内、箱内最高和最低温度点）。 （三）有机溶剂/去污剂（S/D）处理法 有机溶剂，如：磷酸三丁脂（TNBP）和非离子化的去污剂，如：ritonX-100或吐温-80结合可以灭活脂包膜病毒，但对非脂包膜病毒无效。常用的灭活条件是0.3% TNBP和1%吐温-80，在24℃处理至少6小时；0.3%TNBP和1%riton X-100，在24℃处理至少4小时。S/D处理前应先用1μm滤器除去蛋白溶液中可能存在的颗粒（颗粒可能藏匿病毒从而影响病毒灭活效果）。加入S/D后应确保是均一的混合物。在灭活病毒全过程中应将温度控制在规定的范围内。如果在加入S/D后过滤，则须检测过滤后S/D的浓度是否发生变化，如有变化应进行适当调整。吐温-80应采用植物源性，并应采用称量法量取。 （四）膜过滤法 膜过滤技术只有在滤膜的孔径比病毒有效直径小时才能有效除去病毒。该方法不能单独使用，应
`赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM 目录 1.用途 2.诊断意义 3.赛润 ELISA classic- 检测原理 4.试剂盒组成 5.检测所需物质，试剂盒未提供 6.储存和稳定性 7.赛润 ELISA classic的检验步骤 7.1注意事项 7.2样品准备和储存 7.3试剂盒反应试剂的准备工作 7.4检测程序概要 7.5检测过程 8.检测结果评估 8.1 4PL单点定量法 8.2检验有效性标准 8.3计算赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM（定量） 8.4检测结果分析 9. 性能特性 9.1重复性 9.2 敏感性和特异性 10. 风疹病毒IgG抗体的亲和力评估 11. 警告 11.1警告和安全措施 11.2废料处理 12.参考文献 V9.03/07-1
赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM 酶联免疫测定法体外诊断人体抗体（IgG/IgM） - 只限用于体外诊断- IgG试剂盒（定量）编号 ESR129G IgM试剂盒（定量）编号ESR129M 检测评估标准: Dade Behring BEP ? III / BEP ? 2000, DSX, 手动操作 1.用途 赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM用于定性和/或定量检测人体内血清、脑脊液或血浆中抗风疹病毒的抗体。检测抗风疹病毒IgG和IgM对于风疹病毒的血清学研究具有特殊的价值，如判断机体免疫状态及初次感染。 2.诊断依据 风疹病毒是一种人类病原体，属于RNA病毒的披膜病毒科，可通过飞沫和直接接触等方式传播，潜伏期一般为10-21天。 大约50%的感染病例初期伴有弥散性斑疹，随后这些微小的斑疹可能融合。出生后感染通常并无大碍，有25-30%的患者尽管出现心肌炎，神经炎，耳炎，支气管炎，脑炎等并发症，也属于亚临床感染。风疹病毒感染的临床诊断都应有血清学证据的支持，因为皮疹和关节炎这些临床症状也可以由其它病毒引起。（见1.，2.） 妊娠期风疹感染可能导致胎儿受到严重损伤及多系统疾病。因此，妊娠期风疹的诊断就尤显重要。 当其他的检验系统（如血细胞凝集抑制实验）的结果为弱阳性或可疑，不能由此判断免疫状态的时候，免疫球蛋白G-酶联免疫吸附试验（IgG-Elisa）在确认检验结果和判断免疫状态方面就非常重要了。
***注射液 病毒灭活工艺验证研究 1 “***注射液”生物原材料-**（动物）的病毒污染验证文献综述 2 用于生产“***注射液”的生物原材料-**（动物）的病毒感染的检测 3 模拟生产工艺条件下对指示病毒的灭活实验
1 “***注射液”生物原材料-**（动物）的病毒污染验证文献综述 根据现有的研究结果，***（动物）的病毒包括***、***、***、……*种，其中***、***……病毒可感染人类。以下按***（动物）源性病毒的来源、种类及分布；人体的危害（是否人畜共患）；理化特性；检测方法的次序对各病分述如下： 1、***症 …… 2、…… 附表1 ***（动物）源性病毒的特征 病毒名称病毒的分类核酸类型囊膜病毒颗粒大小（nm）***病毒***科***属RNA or DNA 有or 无***~*** …… 附表2 ***（动物）源性病毒的理化性质 病毒名称温度耐受性pH耐受性化学物质敏感性 ***病毒可耐***℃可耐pH*** 能抵抗***，对***敏感 …… 附表3 ***（动物）源性病毒的检测方法 病毒名称血清抗体 检测方法 病毒抗原检测 组织样品方法 ***病毒**** 皮肤、肝、口腔分泌物、 粪便等 *** …… 参考文献 1、***** 2、
2 用于生产“***注射液”的生物原材料-**（动物）的病毒感染的检测 1、原理及目的 所有用于制药生产的生物性原材料等都有受到病毒污染的可能性，为验证“***注射液”的生物原材料-**（动物）种***、***病毒的感染情况，特进行下述实验。验证以保证生物原材料的安全性。 2、检测方法的选择 综前所述，目前已发现的**动物病毒性感染共有*种，其中***、***可感染人。我们对其中较为重要***、***病毒作为评价***动物病毒感染的指标，进行现场的采样检测，涉及的项目主要是：***抗体检测和病毒抗原检测…… 3、生物样品的种类及采样方法 3.1 血清抗体检测样品 在动物饲养场随即抽取生长健康、无疾患，体重在***—***的动物**只，从***采血***ml（无菌操作，置于*ml试管封口4℃保存备用）。 3.2 组织样品的病毒抗原检测：样品采集地点同上，动物采血处死后无菌取***样本分别置灭菌后的样品瓶中密封，4℃保存备用。 4、实验室样品处理及检测方法 4.1 样品处理 4.1.1 血清的分离按……方法，***转/分离心**分钟，分离血清，备用。 4.1.2 组织样品的处理……。 4.2 样品检测 4.2.1 血清抗体检测采用***试验。详见附件1 4.2.2 组织样品检测采用***试验。详见附件2 5、实验结果 见表**动物血清及组织样品中***病毒抗体及抗原检测结果 样品血清**组织**组织**组织 检测内容抗体抗原抗原抗原 结果———— 6、结论 在所采集的**动物样品中未能检出***、***病毒的血凝活性，结合***动物的饲养和生长情况，本品所选用的***动物符合生物原材料无病毒污染的要求。 附件：***试验操作术式 1、材料*** 2、操作方法*** 3、结果判定*** 4、病毒单位的计算***
文章编号:1001-7658(2004)10-0293-04 =论著> 含氯消毒剂对脊髓灰质炎病毒灭活试验方法的研究 王炜红 陈微娜 葛 洪 侯延文 林 玲 宋长江 (黑龙江省疾病预防控制中心,哈尔滨 150036) 提要 为研究含氯消毒剂对脊髓灰质炎病毒灭活试验方法,依照2002年版5消毒技术规范6规定的试验程序进行了实验室观察。结果,含有效氯800mg/L 的次氯酸钠、10mg/L 的优氯净和50mg/L 二氧化氯对Vero 细胞生存率无影响;用0.01mol/L PBS 配制的5g/L 硫代硫酸钠中和剂对Vero 细胞生存率无影响。用含5g/L 硫代硫酸钠中和剂对含有效氯400mg/L 的次氯酸钠设计的6组中和剂鉴定试验,结果符合设计要求。用该方法检测证明,以含有效氯400mg/L 次氯酸钠消毒剂,作用30min,对脊髓灰质炎病毒平均灭活对数值\4.0。试验发现,0.03mol/L 的PBS 、卵磷脂以及吐温80对Vero 细胞生存率均有影响。关键词 脊髓灰质炎病毒;中和剂;有效氯;灭活试验中图分类号:R187.2 文献标识码:A STUDY ON TEST METHOD FOR INAC TIVATION OF POLIOVIRUS BY C HLOR INE -C ONTAIN -ING DISINFECTANTS WANG Wei -hong,C HE N Wei -na,GE Hong ,HOU Yan -wen,LIN Ling ,SO NG Chang -jiang (Heilongjian g Provincial Center for Disease Prevention and Con trol,Harbin 150036,China) Abstract In order to study the test method for inactivation of poliovirus by chlorine-containing disinfectants,laboratory obser -vation was carried out according to the test procedures specified in 5Disinfection T echnical Guidelines 6,2002ed.The results showed that sodiu m hypochlochlorite containing available chlorine 800mg/L,10mg/L You-L -Ji ng ,50mg/L chlorine diox ide and 5g/L sodi um thiosulfate neutralizer reconsti tuted with 0.01mol/L PBS had no influence on survival rate of Vero cells.The results of neu tralizer identification test,in which 6groups were designed using 5g/L sodium thiosulfate as the neutralizer for 400mg/L sodiu m hypochlori te disinfectant,fulfilled the requirement of https://www.doczj.com/doc/1b14449137.html,ing this method,it was proved that sodium hypochlori te containi ng available chlorine 400mg/L with a 30min con tact time could inactivate polivirus wi th an average inacti va -tion logarithm \4.0.It was found by test that 0.03mg/L PBS,lecithin and tween 80had influence on survival rate of Vero cells.Key words p oliovirus ;neutralizer ;available chlorine;inactivation test 1作者简介2 王炜红(1958-),女,黑龙江哈尔滨市人,大学,副主任 医师,从事病毒防治、消毒学及医院感染控制工作。 2002年版5消毒技术规范6采用脊髓灰质炎病毒1型疫苗株作为病毒灭活试验代表,并规定了相应的试验方法。脊髓灰质炎病毒属无包膜小RNA 病毒,对外界理化因子抗力比较强,培养制备方法比较简单,在很多细胞内均可生长,用其作为评价消毒理化因子灭活指标国内外都有应用11,22。但在体外灭活试验中,很多试剂对细胞生长有不同程度的毒性,如消毒试验中的消毒剂、中和剂及稀释液等,给试验带来一定的困难。为了科学评价消毒剂对该病毒的灭活效果,依据5消毒技术规范6规定的试验程序,以含氯消毒剂为对象,在实验室研究了脊髓灰质 炎病毒的灭活试验方法。现将结果报告如下。1 方法 1.1病毒滴定方法 用Vero 细胞培养制备的脊髓灰质炎病毒1型疫苗株(军事医学科学院微生物流行病研究所提供)悬液,再用细胞维持液进行10倍系列稀释,每个稀释度接种(96孔培养板)4孔,置于37e 二氧化碳培养箱内培养。逐日观察结果,连续观察5d,记录细胞病变情况,计算半数细胞感染剂量(TCID 50)。1.2中和剂鉴定试验132 1.2.1预备试验 分别测定消毒剂、中和剂、中和产物对细胞生长的影响。1取次氯酸钠、优氯净和二氧化氯系列稀释液,分别接种于已经形成单层细胞 # 293#中国消毒学杂志2004年第21卷第4期
风疹疫苗 风疹是由风疹病毒引起急性呼吸道传染病，儿童最常见，但成人也会感染风疹病毒。风疹病毒的危害性在于可通过胎盘引起胎儿感染，发生先天性风疹综合症，使胎儿畸形，造成社会问题以及家庭的不幸。 目前，接种风疹疫苗使预防控制风疹流行的唯一有效措施，那什么是风疹疫苗呢？ 风疹疫苗是一种活的、减毒的疫苗，对抗风疹病毒感染有足够的免疫力。风疹疫苗接种分为普遍免疫和选择性免疫两种： 1、普遍免疫以控制风疹病毒在人群中传播为目的，可对满8月龄以上人群实施免疫接种； 2、选择性免疫以控制新生儿先天性风疹综合征为目的，可对青春期少女及育龄期妇女实施免疫。 风疹减毒活疫苗免疫效果十分理想，接种后易感儿童的血凝抑制抗体阳性率可100%，大多数接种者在使用疫苗后10~28天产生抗体，并可获得持久性的免疫作用，一般可维持10～30年。幼儿期接种后在成年之前再进行一次加强免疫，可获长久免疫力，女性的育龄期均可受到保护，以后一般不需再接种。 但是，风疹疫苗也是有禁忌的，比如：由于风疹疫苗为活疫苗，孕妇禁用；育龄期妇女在接种疫苗后3个月内应避免怀孕；对于免疫缺陷病人及正进行免疫抑制治疗、放射治疗及抗代谢药物治疗期间的病人不能应用；有严重疾病和发热、过敏体质者，神经系统疾患和精神病患者均不可接种。... 风疹疫苗有必要打吗 儿童因为身体的抵抗力低下，所以是很多疾病的高发人群。随着医学技术的发展，接种疫苗成为了很多疾病的有效预防措施。不过，在很多人看来，只要是与医药有关的，就存在危险性。很多人都怀疑风疹疫苗有必要打吗？ 风疹是儿童的常发病，如果不能做好预防的话，危害性是非常大的。当下，采用的预防方式当中，疫苗的成功率是比较高的。但是，因为疫苗的危害性以及对孩子的关爱，很多父母会对疫苗望而却步。
人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂（胶体金法）技术参数 1. 试剂盒：50人份/盒； 2. 灵敏度：100%； 3. 特异性：99.0%以上； 4. 测定时间：≤30分钟； 5. 检测标本：全血/血清/血浆； 6. 产品有效期：不少于16个月； 7. 认证及注册：通过世界卫生组织WHO和联合国艾滋病规划署、美国FDA、中国国家食品药品监督管理局等认证及注册； 8. 质量评估：连续三年参加中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参比实验室组织的全国艾滋病病毒（HIV）抗体诊断试剂临床质量评估，连续三年灵敏度不低于100%、特异性不低于99.0%； 9. 其他：按用户计划分批供货和结算，计划收到后7个工作日内交货。 梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（胶体金法）技术参数 1. 试剂盒：50人份/盒； 2. 灵敏度：99.5%以上； 3. 特异性：99.0%以上； 4. 测定时间：≤20分钟； 5. 检测标本：全血/血清/血浆； 6. 产品有效期：不少于18个月； 7. 认证及注册：通过美国FDA、中国国家食品药品监督管理局等认证及注册； 8. 其他：按用户计划分批供货和结算，计划收到后7个工作日内交货。 促凝采血管技术参数 1、容积：5ml； 2、材质：塑料管； 3、管内添加促凝剂，促凝剂均匀喷涂于采血管内壁上，使血液可快速凝固，析出高纯净度的血清； 4、胶塞类型：安全帽胶塞（塑料盖帽），管内真空、无菌； 5、采血管标贴：刻度、双码、条形码一体化标贴； 6、其他：按用户计划分批供货和结算，计划收到后7个工作日内交货。 抗凝采血管技术参数 1、容积：5ml； 2、材质：塑料管； 3、抗凝剂：EDTAK2； 4、胶塞类型：安全帽胶塞（塑料盖帽），管内真空，无菌； 5、采血管标贴：刻度、双码、条形码一体化标贴； 6、其他：按用户计划分批供货和结算，计划收到后7个工作日内交货。
艾滋病病毒灭活试验 （1）目的 测定消毒剂对艾滋病病毒（human immunodeficiency virus，HIV）灭活所需的剂量，以验证对该病毒污染物消毒实用剂量。 （2）实验原理 用细胞感染法测定消毒剂作用前后（或实验组与对照组）样本中HIV 的量。以细胞病变作为判断指标，确定各组病毒的感染滴度，计算消毒剂对 HIV 的灭活对数值。 （3）安全防护 试验中要求采取严密防护措施。我国规定所有接触 HIV 的试验均需在生物安全三级（biological safety level 3，BSL 3）实验室内进行，并制定有相应的安全防护措施。在 HIV 灭活试验时，必须严格按照有关安全规定进行。 （4）试验分组 1）试验组。根据所测消毒剂对其他微生物的杀灭或灭活剂量估计，设立适宜的浓度与作用时间组（不少于1个浓度，3个作用时间），对作用时间的设计应不短于30s。所设组应能测出使 HIV 全部灭活所需的最低有效剂量（药物浓度与作用时间）。 2）阳性对照组。用去离子水代替消毒剂，按试验组规定步骤加入 HIV 悬液进行试验和培养，观察 HIV 生长是否良好。 3）阴性对照组。用不含 HIV 的完全培养基作为阴性对照，观察所用培养基有无污染，细胞是否生长良好。
4）消毒剂对细胞毒性组。取 100μl 待测消毒剂，加入含有100μl 用完全培养基制备的MT4 细胞悬液（含细胞400 000 个/ml）的 96 孔培养板内。置二氧化碳温箱（37℃）中培养 7 d，观察细胞生长情况，确定消毒剂对细胞无毒性的最高稀释度。 （5）HIV 悬液定量灭活试验操作程序 1）从液氮中取出冻存的 MT4 细胞，在37℃ 温水中迅速融化，并用细胞维持液洗涤两次后，转种于加有 10ml 完全培养基培养瓶中。逐日观察细胞生长情况，在细胞对数生长期时收获细胞用于消毒试验。2）从液氮中取出冻存HIV-1毒种，接种于含10ml细胞悬液（含细胞700 000个/ml～800 000个/ml）培养瓶中。逐日观察病变，待3/4细胞出现病变时，收获病毒。收获时，将培养液取出，尽快离心，并将含病毒的上清液按每管 0.5ml 分装于无菌离心管（1.5ml）中，冷冻保存于-80℃备用。如不能立即离心，可暂将培养瓶冷冻保存于 -20℃，并争取尽快离心分装。 3）取待测消毒剂，用无菌去离子水作 1:2、1:4、1:8 ...系列稀释。视消毒剂的类型和实验目的，确定最高稀释度。为防止污染培养液，必要时在试验前需将消毒剂过滤除菌。 4）取 50μl 待检消毒剂，与 50μl 病毒原液混合。在规定温度作用一定时间（根据试验要求确定作用时间和温度），立即加入0.9ml 用完全培养基制备的 MT4 细胞悬液（400 000 个/ml），在37℃，放置 40min，以确保残留病毒全部吸附在细胞上。阳性（病毒）对照
附件2 弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂 技术审查指导原则 本指导原则旨在指导注册申请人对弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白（Immunoglobulin G,IgG）抗体亲合力检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒抗体及IgG抗体亲合力检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、范围 弓形虫( Toxoplasma, TOXO ) 、风疹病毒( Rubella virus , RV) 、巨细胞病毒(Cytomegalovirus , CMV) 及单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV) 四种病原体，以缩写形式ToRCH命名。上述四种病原体已引起围
产医学家和优生优育学家的关注，如何应用应基于大量的研究及相关学科的诊疗指南。 依免疫球蛋白重链抗原特异性不同，免疫球蛋白可分为G型免疫球蛋白（IgG）、M型免疫球蛋白（IgM）、A型免疫球蛋白（IgA）、E型免疫球蛋白（IgE）和D型免疫球蛋白（IgD）五种类型。ToRCH抗体检测试剂，主要检测的免疫球蛋白为ToRCH特异性IgG和IgM。在病原体感染的初次体液免疫应答中(原发性感染)，特异性IgM抗体首先出现，但存在时间较短，通常为数周到数月。病原体特异性IgM抗体阳性常提示早期感染，可用于感染急性期的辅助判断。特异性IgG抗体，在免疫接种后、原发性感染及再次感染时都可检出，且较长时间存在。 在感染过程中特异性抗体对抗原亲合力随感染时间的延长而不断升高，检测IgG抗体亲合力，能够较准确地判断感染时间，可作为ToRCH 抗体检测的一种补充，高IgG抗体亲合力可辅助排除近期原发性感染。 不同类型的ToRCH特异性抗体检测结果，在ToRCH病原体感染的辅助诊断及免疫状态的评估中，起着重要的指导作用，因此ToRCH特异性抗体检测的准确性至关重要。相关的生产企业必须充分意识到该类产品的潜在风险，根据本指导原则的要求对该类试剂的安全性和有效性进行科学合理的验证。 ToRCH抗体检测试剂是指一类利用免疫学方法，如酶免疫技术和化学发光免疫分析技术等，对人体血清或血浆样本中的ToRCH特异性抗体进行体外定性和/或半定量和/或定量检测的试剂。结合临床表现和其他实验室指标，可用于ToRCH感染辅助诊断及免疫状态的评估。IgG抗体亲合力检测试剂是一类对ToRCH特异性IgG抗体阳性的人血清和/或血浆样本中ToRCH特异性IgG亲合力进行体外定性检测的试剂，用于辅助判断感染时间，排除近期原发性感染。本类试剂尚不用作产前筛查。本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。