APJ拮抗剂Apelinl3 ( F13A)对肝纤维化大鼠肝脏 Beclin 1. LC3和p62表达的影响 刘明;曾斌;肖婷筑王珊;姚梦娜 【期刊名称】《医学信息》 【年(卷)，期】2015(000)025 【摘要】目的观察血管紧张素受体ATI相关的受体蛋白(APJ)拮抗剂Apelinl3(F13A)对肝纤维化大鼠肝脏中自噬相关基因Beclin 1、LC3和p62表达的影响。方法30只雄性SD大鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组和Apelinl3(F13A)(100pg/kg)处理组。采用四氯化碳(CCI4)诱导大鼠肝纤维化模型。Apelinl3(F13A)通过腹腔注射给药。取肝左叶同一部位,苏木精-伊红(HE) 染色观察肝脏的病理形态学变化。Western blot检测肝脏中自噬相关基因Beclin 1、LC3和p62的表达。结果对照组大鼠肝脏的肝小叶结构完整，肝索排列整齐,结构完整,肝细胞排列整齐，没有发现明显的胶原纤维增生，纤维化程度分级为0级；肝纤维化模型组大鼠肝小叶结构破坏严重,肝细胞排列紊乱,汇管区发现明显的坏死细胞和炎性细胞，可见大量胶原纤维增生,形成纤维纵隔，纤维化程度分级为多为3-4级；与模型组比较,Apelinl3(F13A)组大鼠肝脏组织肝细胞变性和坏死明显减少，纤维化程度明显减轻,纤维化程度分级多为1-2级。与对照组t出交，肝纤维化大鼠Beclin 1和LC3的表达显著增加，而p62的表达显著降低(均＜0.05)。与肝纤维化模型组大鼠比较，Apelinl3(F13A)降低了Beclin 1和LC3的表达,而增加了p62的表达(均＜ 0.05)。结论APJ拮抗剂Apelinl3(F13A)抑制了CCI4诱导的大鼠肝纤维化，其机制可能与Apelinl3(F13A)抑制细胞自噬有关。
大鼠早期酒精性肝损伤诱导模型的建立及观察[摘要目的探讨大鼠早期酒精性肝损伤模型的建立方法，为研究早期酒精性 肝损伤的发病分子机制提供理想动物模型。方法24只雄性SD大鼠随机分为模型组（16只）和对照组（8只）。对照组饮用自来水；模型组饮用7%～56%梯度递增的白酒12周。取材前24 h和12 h，分别以56%白酒急性灌胃后处死大鼠。每天记录大鼠食用饲料量及饮用量；每周称量大鼠体重。采用全自动生化分析仪测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）含量。观察大鼠肝脏病理学和形态学改变。结果12周后，模型组大鼠体重增长率为（61.67±1.98）% ，明显低于对照组的（160.09±3.12）% （P＜0.05），肝脏指数模型组（3.74±0.54）高于对照组（2.85±1.26）（P 32%～65%；F3：>65%～75%；F4>75%。 1.3.6.2酒精性肝炎依据炎症程度分为4级（G0～G4）：G0无炎症；G1腺泡3带呈现少数气球样肝细胞，腺泡内散在个别点灶状坏死和中央静脈周围炎；G2腺泡3带明显气球样肝细胞，腺泡内点灶状坏死增多，出现Mallory小体，门管区轻至中度炎症；G3腺泡3带广泛的气球样肝细胞，腺泡内点灶状坏死明显，出现Mallory小体和凋亡小体，门管区中度炎症伴和（或）门管区周围炎症；G4融合性坏死和（或）桥接坏死。 1.3.6.3酒精性肝纤维化依据纤维化的范围和形态分为4期（S0～S4）：S0无纤维化；S1腺泡3带局灶性或广泛的窦周/细胞周纤维化和中央静脉周围纤维化；S2纤维化扩展到门管区，中央静脉周围硬化性玻璃样坏死，局灶性或广泛的门管区星芒状纤维化；S3腺泡内广泛纤维化，局灶性或广泛的桥接纤维化；S4肝硬化。 1.4统计学方法 采用SPSS 14.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；等级资料比较采用秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1一般情况 各组大鼠均无死亡。对照组大鼠活泼，毛发光泽，食量正常。模型组食欲减退，毛色发黄，光泽度差，部分大鼠精神状态较差。模型组饮用液体量和食量均比对照组少。 2.2两组大鼠体重增长率及肝脏指数的比较 模型组与对照组体重均有上升，与对照组比较，模型组体重增长较慢，后期
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/1e13687513.html, Rab27A和Rab27B在4种不同人肝癌细胞株中的表达 作者：刘鼎刘建生 来源：《中国当代医药》2015年第16期 [摘要] 目的检测Rab27A与Rab27B在3种人肝癌细胞系及1种永生化肝细胞系中的表达情况，初步研究Rab27A与Rab27B表达对肝癌细胞生物学特性的影响。方法采用RT-PCR及Western blot技术，检测Rab27A与Rab27B mRNA在3种人肝癌癌细胞HepG2、Huh-7、Li-7及1种永生化肝细胞系HL-7702中的表达。结果 Rab27A与Rab27B在肝癌细胞系及原发性肝癌组织中存在差异性表达。Rab27A mRNA在3种人肝癌细胞系中表达明显强于1种人永生化肝细胞系；Rab27B mRNA在3种人肝癌及1种人永生化肝细胞系中均明显表达但无显著差异。结论 Rab27A与Rab27B与原发性肝癌密切相关，可以为临床采取合理诊断措施提供有效的参考依据。 [关键词] Rab27A；Rab27B；肝细胞癌；RT-PCR；Western blot [中图分类号] R735 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）06（a）-0004-04 Expression of Rab27A and Rab27B in the four different hepatocellular carcinoma LIU Ding LIU Jian-sheng▲ The First Clinical Medical College of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China [Abstract] Objective To investigate the expression of Rab27A and Rab27B in 3 human HCC lines and the immortalized hepatic cell line and its effect on biology characteristics of the cells. Methods The mRNA expression of Rab27A and Rab27B was detected by RT-PCR，and Western-blot in 3 human HCC lines of HepG2，Huh-7，Li-7 and the immortalized hepatic cell line of HL-7702. Results Rab27A and Rab27B were differentially expressed in cell lines and primary HCC tumors.The expression of Rab27A in 3 human HCC line was significantly better than that expressed in the immortalized hepatic cell line；the mRNA of Rab27B in 3 human HCC lines and the immortalized hepatic cell line were significantly expression but there was no significantly difference. Conclusion Rab27A and Rab27B expression are closely correlated HCC，it can provide the clinical reasonable diagnostic measures as valuable effective reference basis. [Key words] Rab27A；Rab27B；Hepatocellular carcinoma；RT-PCR；Western blot 肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，具有极高的侵袭性和转移性，出现典型症状时，往往已经为晚期。目前与HCC进展相关的因子包括癌
收稿日期:2011-05-18 基金项目:国家自然科学基金(30760230) 作者简介:邵佳亮(1980-),男,硕士,住院医师,主要从事肝纤维化的研究。 通信作者:胡国信,副教授,E -mail:hug uo x in8228@sina.co m 。 四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究 邵佳亮,万赞燕,胡国信 (南昌大学第一附属医院感染科,南昌330006) 摘要:目的 构建肝纤维化大鼠模型,并对经典四氯化碳(CCl 4)复制模型方法进行适当改进。方法 取Sprague -Daw ley(SD)大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为A 组10只、B 组14只和C 组16只。B 组给予大鼠腹腔注射40%CCl 4花生油溶液2mL kg -1,2次 周-1,同时给予普通全价饲料喂养(改良方法);A 组为正常对照组,给予等量花生油腹腔注射,2次 周-1,同时给予普通全价饲料喂养;C 组给予大鼠腹腔注射40%CCl 4花生油溶液5mL kg -1,2次 周-1,同时给予添加10%猪油及2%胆固醇的饲料喂养(经典方法)。实验第8周末处死各组剩余大鼠:采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(A L T 、AST 、A L B 、T P 、A/G)水平;H E 及M asson 染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果 实验第8周B 、C 组均可见明显肝功能损害表现。B 组可见部分标本肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝细胞少量脂肪变性,死亡率28.6%。C 组均已形成明显肝硬化,弥漫性肝细胞脂肪变性,死亡率43.7%。结论 低剂量CCl 4诱导并给予普通饲料喂养可成功建立大鼠肝纤维化模型,并明显降低大鼠死亡率,提高了模型质量及实验效率。 关键词:四氯化碳;肝纤维化模型;改良;动物,实验;大鼠 中图分类号:R-332 文献标志码:A 文章编号:1000-2294(2011)07-0040-03 Improved Rat Model of Liver Fibrosis induced by CCl 4 SHAO Jia -liang,WAN Zan -yan,HU Guo -xin (Dep ar tment of I nf ectious Diseases ,the First A f f iliated H osp ital of N anchang Univ ersity , N anchang 330006,China) ABSTRACT:Objective To establish a rat m odel of liver fibrosis,and to improv e the classical CCl 4induction method.Methods Forty SD r ats (20female and 20male)w ere r ando mly divided into three gro ups.Gro up B (n =14)w as given intraperitoneal injection of 2mL kg -1of 40%CCl 4solution (a mix ture of CCl 4and peanut oil)tw ice a w eek and the feeding of no rmal complete diet.Gro up A (n =10)w as given intraperitoneal injection of 2mL kg -1of peanut oil tw ice a w eek and the feeding of nor mal com plete diet.Gro up C (n =16)w as given intr aper ito neal injec -tion of 5mL kg -1of 40%CCl 4solution tw ice a w eek and the feeding of diet containing 10%lar d and 2%cholesterol.Rats w ere killed at the end of 8w eeks,and the levels o f ser um ALT ,AST ,Alb,T P and A/G w ere determined by ELISA.The patho logical changes in liver tissue w ere ob -served by H E and M asso n staining.Results Liv er function w as damag ed apparently by CCl 4in -jectio n.Some specimens in g roup B pro duced false flo cculus and achieved the ear ly stage of liver fibro sis,w ith fatty deg ener ation in a few liver cells.A ll specimens in gr oup C had cirrhosis w ith diffuse hepatic steato sis.The m ortality w as 28.6%and 43.7%in gro up B and g roup C,respec -tively.Conclusion Liv er fibrosis can be induced by injection o f low do ses of CCl 4and feeding of norm al co mplete diet in rats.In addition,the improved m ethod can reduce the mortality and im -40南昌大学学报(医学版)2011年第51卷第7期 Jou rnal of Nanch ang University(M edical Science)2011,Vol.51No.7
第32卷第1期 2012年2月健康研究Health Research Vol．32No．1Feb．2012收稿日期：2011－10－16 作者简介：邱丽香（1982－），女，浙江龙泉人，本科，护师。DOI ：10．3969/j．issn．1674-6449．2012．01．002基础医学 Notch3在大鼠肝癌中的表达及其意义 邱丽香1，翟淑亭2，秦建芬 1（1．浙江大学医学院附属邵逸夫医院护理部，浙江杭州310016；2．杭州市下沙医院普外科，浙江杭州310006） 摘要：目的研究Notch3在大鼠肝癌发生发展中的动态变化。方法 二乙基亚硝胺诱导大鼠肝细胞癌的发 生，于4周、8周、12周、16周时取肝脏标本，免疫组化和Western blot 法检测标本中Notch3的表达。结果随着肝组织损伤加剧，Notch3表达逐渐升高。与正常组相比，肝损伤组、肝硬化组和肝癌组的 Notch3蛋白明显表达增加（P ＜0．05）。结论Notch3参与了大鼠肝癌发生的全过程，并且随着肝损伤的不断加剧，其表达也逐渐上升。Notch3信号的激活可能是肝癌发生的一项重要机制。关键词：Notch3蛋白；肝癌 中图分类号：R735．7文献标识码：A 文章编号：1674－6449（2012）01－0004－03 Expression of Notch 3in Rat Liver Cancer and Its Effect QIU Li-xiang 1，ZHAI Shu-ting 2，QIN Jian-fen 1 （1．Department of Nursing ，The Sir Run Run Shaw Hospital ，School of Medicine ，Zhejiang University ，Hangzhou ，Zhejiang 310016，China ；2．Department of General Surgery ，Hangzhou Xiasha Hospital ，Hangzhou ，Zhejiang 310006，China ）Abstract ：Objective Objective To investigate the dynamic changes of Notch 3in the development and progression of hepatic carcinoma in rats．Methods Hepatocarcinoma was induced by diethylinitrosamine．Liver specimens were taken at week 4，8，12and 16for detection of Notch3expression using immunohistochemical and Western blot methods．Results Notch3expression increased gradually with the worsening of hepatic injury．There were statistically significant increases of Notch3protein expression in hepatic injury group ，hepatic cirrhosis group and hepatocarcinoma group as compared to the normal control group （P ＜0．05）．Conclusions Notch3participates in the whole process of hepatocarcima development and progression in rats．Increased expression of Notch3is associated with the worse of hepatic injury．The activation of Notch3may be an important mechanism for the development of hepatocarcinoma． Key words ：Notch3protein ；hepatocarcinoma
四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化 机理研究 【摘要】目的观察四氯化碳腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型时相关细胞因子 的变化，初步探讨四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理。方法以四氯化碳腹腔注射的方法[四氯化碳 mL (用花生油1∶6稀释)/次，每周3次，共14周]制作大鼠肝纤维化模型，设立正常、溶剂对照组，检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原含量;ELISA法检测转化生因子ββ1)、肿瘤坏死因子α);化学法检测血清氧化亚 氮(NO)。肝行HE和Masson胶原染色，光镜下观察病改变，并按SSS计分系统进行评分。免疫组化染色观察肝组织血小板源生长因子的变化，专业像分析进行图像分析。结果与正常对照组、溶剂对照组比较，模型组血清ALT、AST、HA、LN、、NO、β1 、α明显升高
()，大鼠肝组织肝纤维化评分明显升高()，肝组织表达明显增多()。结论促进相关细胞因子的表达可能是四氯化碳腹 腔注射致大鼠肝纤维化的机理之一。 【关键词】四氯化碳;肝纤维化;细胞因子 Abstract:Objective To investigate the variation of correlated cytokine when the rat models of hepatic fibrosis were induced by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride,and to the relevant molecular mechanism. Methods Rat models of hepatic fibrosis were made by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride at mL(diluted 1∶6 with peanut oil),three times a week,a total of 14 weeks. The normal and dissolvent groups were prepared as controls. Serum β1 and α were detected by ELISA method. Serum levels of NO were detected by
人类组织正常及永生化细胞 英文名中文名称 293E E转化人胚肾293细胞（B类） 293ET ET转化人胚肾293细胞（B类） 293KB KB转化人胚肾293细胞（B类） 293T人胚肾T细胞 A7d野生型人 C-KIT受体细胞株（B类）AMS3(SCF3)人干细胞因子单克隆抗体细胞株(B类) APP-PS1人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293)(B类) FC33ASP2人胚胎肾细胞转化细胞 FIP293FIP293(来源于HEK293)(B类) HEK-293人胚肾细胞 CCC-HPF-1人胚肺二倍体细胞 CCC-ESF-1人胚胎皮肤成纤维细胞HFF(ATCC? SCRC-1041?)人前皮肤成纤维细胞 HFSF人胚胎眼巩膜成纤维细胞 HFTF人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞 HK-2人肾小球上皮细胞 HKC人胚肾上皮细胞 HSF人皮肤成纤维细胞 MRC-5人胚肺成纤维细胞 WISH人羊膜细胞 CCC-HEL-1人胚胎肝正常细胞 CCC-HEK-1人胚胎肾正常细胞 CCC-HHM-2人胚胎心肌组织来源细胞 CCC-HPE-2人胚胎胰腺组织来源细胞 CCC-HB-2人胚胎膀胱组织来源细胞 CCC-HIE-2人胚胎肠粘膜细胞 CCC-HBE-2人胚胎气管细胞 动物组织正常及永生化细胞 3T3swiss swiss鼠胚胎成纤维细胞 3T3L1小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪) 3T6swiss小鼠胚胎成纤维细胞 7WCY1.0人APP-PS1双基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WD10人APP基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WML6.0人APP-PSI（M146L)双基因转染细胞株（CHO)(B类） 7WPS1APP-PS1双基因转染细胞株（CHO）（B类） BaF3小鼠原B细胞（B类） BHK-21金黄地鼠肾 BS-C-1非注洲绿猴肾 C2C12小鼠成肌细胞 C3H10T1/22A6小鼠成纤维细胞 CH0dhfr二氢叶酸缺陷型中国仓鼠卵巢细胞 CHO-K1中国仓鼠卵巢细胞
万方数据
万方数据
医学实验肝癌动物模型的研究进展 作者：陈谦， 孙慧， 李强 作者单位：陈谦(天津医科大学附属肿瘤医院肝胆科,300060)， 孙慧,李强(300060,天津市环湖医院肿瘤科) 刊名： 中华实验外科杂志 英文刊名：CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY 年，卷(期)：2006,23(3) 被引用次数：11次 参考文献(13条) 1.张伟俈动物模型与实验外科[期刊论文]-中华实验外科杂志 2003(4) 2.叶燕丽;周昕熙;王莲桂裸小鼠的繁殖及在肿瘤学中的应用[期刊论文]-实验动物科学与管理 2005(1) 3.Roy J;Couillard S;Gutman M A novel pure SERM achieves complete regression of the majority of human breast[外文期刊] 2003 4.Celinski SA;Fisher WE;Amaya F Somatostatin receptor gene transfer inhibits established pancreatic cancer xenografts[外文期刊] 2003(1) 5.Frydman B;Blokhin AV;Brummel S Cyclopropane-containing polyamine analogues are efficient growth inhibitors of a human prostate tumor xenograft in nude mice[外文期刊] 2003(21) 6.She Y;Lee F;Chen J The epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor ZD1839selectively potentiates radiation response of human tumors in node mice,with amarked improvement in therapeutic index[外文期刊] 2003 7.Katz MH;Takimoto S;Spivack D A novel red fluorescent protein orthotopic pancreatic cancer model for thepreclinical evaluation of chemotherapeutics[外文期刊] 2003(1) 8.Yao X;Hu JF;Daniels M A novel orthotopic tumor model to study growth factors and oncogenes in hepatocarcinogenesis[外文期刊] 2003 9.Shoji T;Konno H;Tanaka Sakaguchi T Orthotopic implantation of a colon cancer xenograft induces high expression of cyclooxygenase-2[外文期刊] 2003(2) 10.Lennder P A new liposomal contrast medium for CT of the liver.An imaging study in a rabbit tumour model[外文期刊] 1996 11.李雁;汤钊猷我国肝癌模型研究的历史和现状[期刊论文]-中华实验外科杂志 2001(5) 12.Niemann H;Kuse W Application of transgenesis in livestock for agriculture and biomedicine[外文期刊] 2003(3/4) 13.Wang BJZ Specific genetic modifications of domestic animals by gene targeting and animal cloning [外文期刊] 2003 本文读者也读过(6条) 1.彭方兴.严律南肝癌动物模型的研究进展[期刊论文]-中华实验外科杂志2000,17(5) 2.李翠云.段小娴肝癌动物模型研究进展[期刊论文]-医学研究杂志2006,35(10) 3.陈华.赵德明.CHEN Hua.ZHAO De-ming肝癌动物模型[期刊论文]-实验动物科学与管理2005,22(4) 4.胡卫.陈涛鼠移植性肝癌模型研究进展[期刊论文]-河南肿瘤学杂志2003,16(6) 5.徐静.李旭肝癌动物模型的建立[期刊论文]-实用肝脏病杂志2005,8(2)
网络出版时间：2014-02-17 09:02 网络出版地址：https://www.doczj.com/doc/1e13687513.html,/kcms/detail/64.1008.R.20140217.0902.004.html 人肝癌细胞株中FOXM1 及NF-κB的表达及意义 王琦1，柴磊2，蒋少青3，马丽4 ，金栋5 ，殷利军5，张桂香5，谢岩青5 （1.宁夏医科大学总医院肝胆外科，银川 750004；2.宁夏回族自治区第三人民外科，银川750004；3.宁夏医科大学总医院药剂科，银川 750004；4.宁夏医科大学总医院心脑血管疾病医院药剂科，银川 750004；5.宁夏医科大学总医院心脑血管疾病医院血管外/普外科，银川750004）1 [摘要] 目的探讨不同肝癌细胞株中转录因子FOXM1（Forkhead Box M1）及核转录因子NF-κB（nuclear factor kappa B）的表达强度及意义。方法采用Western blot、RT-PCR法，检测不同肝癌细胞株（QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721）中FOXM1及NF-κ B 在蛋白及mRNA 水平的表达情况。结果在3株肝癌细胞中FOXM1及NF-κB的表达无论是mRNA水平还是蛋白水平均存在显著差异，细胞株（QGY-7703、BEL-7402）中FOXM1及NF-κB的表达同时都明显高表达于细胞株SMMC-7721。结论肝癌细胞株中FOXM1蛋白及mRNA表达与NF-κB表达趋势一致，提示FOXM的表达可能与NF-κB的活化有关。 [关键词] FOXM1；NF-κB；肝细胞肝癌 [中图分类号]R735.7 [文献标识码]A Expression and significance of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B in human liver carcinoma cells WANG Qi1，CHAI Lei2，JIANG Shao-qing 3，MA Li4，JIN Dong5，YIN Li-jun5 ,ZHANG Gui-xiang5，XIE Yan-qing5，（1. Dept.of Hepatobiliarysurgery，the Affiliated Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；2. Dept.of Surgical， the Third People′s Hospital of Ningxia. Yinchuan 750004；3. Dept.of Pharmacy，the Affiliated Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；4. Dept.of Pharmacy，the Cardio-Cerebral Vascular Disease Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；5. Dept.of Vascular/General Surgery， the Cardio-Cerebral Vascular Disease Hospital of Ningxia Med. Univ.Yinchuan 750004） ABSTRACT Objective（1）To investigate the expression and significance of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B in human liver carcinoma cells. Methods The expression of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B protein and micro-RNA in hepatocellular carcinoma cell lines(QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721)were detected with the application of Western blot analysis and RT-PCR analysis，respectively. Results The expression 基金项目：宁夏自然科学基金（项目编号：NZ1236） 作者简介：王琦(1983-),硕士，主任医师，肝癌复发相关分子机制的研究。 通作者：谢岩青，Email：xie-yanqing@https://www.doczj.com/doc/1e13687513.html,
中文摘要 目的本文通过对SD大鼠腹腔注射四氯化碳以诱导大鼠肝纤维化动物模型。 方法取15只SD大鼠，180—220g，分为A组10只，B组5只，A组为模型组：40%CCL4橄榄油混合液按0.12ml/100g腹腔注射，一周两次，共八周。B组为对照组：纯橄榄油按0.12ml/100g腹腔注射，一周两次，共八周，八周后，禁食12小时处死全部大鼠，解剖取肝组织。病理学检测：HE染色，MASSON染色,PAS染色。基因学检测：1.3.4型胶原蛋白 结果八周试验期间B组大鼠全部存活，肝组织标本结构清晰，无异常情况；A组大鼠出现明显的病态，肝组织标本均已达到肝纤维化S3以上，多数标本可见小叶被纤维结构分割包围，假小叶形成，干细胞可见脂肪变性； 结论该方法肝损伤明显，死亡率低，周期短，能够成功作为慢性肝损伤，肝纤维化的模型。 关键词肝纤维化，四氯化碳，动物模型 Abstract Objective: Established animal model of hepatic fibrosis in rats induced by carbon tetrachloride. Methods: Take 15 SD rats,180-220g, divided into 10 group A, group B 5 只, A group of model group: 40% CCL4 0.12ml/100g by abdominal injection of a mixture of olive oil, twice a week, a total of eight weeks. Group B was the control group: pure olive oil press 0.12ml/100g abdominal injection twice a week, a total of eight weeks, eight weeks later, all rats were fasted for 12 hours were sacrificed, dissected liver tissue. Pathology: HE staining, MASSON staining, PAS staining. Genetics testing: 1.3.4 collagen Results: During the eight-week test group B rats survived, liver tissue specimens clear structure, no exceptions; significant morbidity A rat liver tissue fibrosis S3 have reached above, the majority of samples are split fiber structure visible lobular surrounded pseudo lobule formation, stem cell degeneration visible fat. Conclusion: This method obviously liver injury mortality, the period is short, to be successful as chronic liver damage, liver fibrosis model. Key words: Fibrosis, carbon tetrachloride, animal model 前言
BEL7402/hepG2/HCCLM等肝癌细胞培养过程 器材： 液氮冷冻灌、恒温培养箱、电冰箱、高压灭菌锅、离心机、 倒置显微镜、超净工作台、一次性吸管若干个、带塞培养瓶（不定个）、试管架、酒精灯、G6型号细菌过滤漏斗、无菌冻存管、液 氮瓶。 试剂： RPMI l640培养液，胎牛血清（生长因子）, 胰蛋白酶液，70%乙醇（消毒）,冻存培养液（培养液7ml，胎牛血清2ml，DMSO 1ml)，PBS缓冲液等。 器皿的消毒及准备： 清洗灭菌（浓硫酸、蒸馏水）： （1）浸泡（酸浸）:新使用或重复使用的玻璃器皿须经浓硫酸 溶液浸泡过夜，水洗。以去除新购进玻璃器皿所带有灰尘、铅、砷 等物质，并消除其弱碱性。操作过程需戴防护用具。 （2）刷洗:浸泡后用软毛刷和优质的洗洁精进行刷洗。刷洗后 经行烘干。 （3）冲洗、烘干备用:浸酸后的玻璃器皿先用自来水充分冲洗，吸管需冲洗10min，器皿需每瓶灌满自来水、倒掉反复10次以上，不留任何酸浸液残迹，然后用蒸馏水漂洗2～3次，将清洗好的玻璃器 皿放入烘干箱中，烘干后的玻璃器皿要求干净透明，无油烟，不能 残留任何有害物质及化学药品等。 （5）包装灭菌:器材经清洗烤干或晾干后，先应严格包装，然后再行消毒灭菌处理，以防止消毒灭菌后再次遭受污染。 实验前准备工作: 操作者的皮肤、培养瓶的盖和外壁常用酒精消毒。用紫外线消 毒实验室空气、工作台面和一些不能使用其他方法消毒的培养器皿。进无菌室前或做完实验后，均应开灯照射30min进行消毒。紫外线 照射60min可以消灭空气中大部分细菌。 细胞复苏： 冻存细胞保存管保存在液氮中（-196℃），取出保存管后必须 快速冷冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，致使细胞死亡。在冻存细胞的保存管中含有对细胞有毒害的成分DMSO,故在解冻应 马上将其去除。在冷冻活化前应在无菌台上将细胞培养液配好，然 后将保存管从液氮中取出，放于37℃的温水中快速使细胞解冻。解 冻后悬液快速移入培养液中混匀，离心去掉上清液，再加入细胞培 养液。
*国家自然科学基金资助项目（编号：8106016），广西科学基金资助项目（编号：2010GXNSFD013048） △通信作者。E －mail ：gwongluo@yahoo．com 肿瘤相关抗原GCF2高水平表达的肝癌 细胞株的筛选 * 蒋日婷，晁耐霞，马平，李金平，罗国容△ 广西医科大学组织胚胎学教研室（南宁530021） 【摘要】目的 筛选出肿瘤相关抗原GCF2高表达的人肝癌细胞株，为进一步探讨GCF2对肝癌发生发展的 可能作用奠定基础。方法 选择4种人肝癌细胞株（BEL －7404、 HepG2、SMMC －7721和QGY －7703）及1种成人正常肝细胞株（HL －7702），培养后分别制作细胞爬片及提取蛋白后，采用免疫细胞染色技术和Western blot 的方法筛选出GCF2表达量高的细胞株。结果 免疫细胞染色显示， GCF2在5种细胞中的胞核及胞质中均有表达。GCF2蛋白在肝癌细胞BEL －7404、HepG2、SMMC －7721和QGY －7703的表达要强于正常肝细胞HL －7702，其中以BEL －7404的表达量最高。通过Western blot 检测，BEL －7404的GCF2相对表达量为0.875?0.134，较其他细胞株高，差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论 BEL －7404细胞中GCF2蛋白水平的相对表达量最高，可以作为下 一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用的实验材料。 【关键词】肿瘤相关抗原；GCF2；肝癌；蛋白表达 GCF2（GC binding factor 2）是一个转录抑制因子，能 够抑制多个下游基因，比如EGFR 、TNF －α、PDGF －A 链和Igf2等的转录，参与细胞增殖、周期和凋亡等进 程 ［1－6］ 。本课题组前期用SEREX 技术筛选人肝癌组织构建的cDNA 文库，发现2个克隆与GCF2的片段同 源，提示GCF2可能是肝癌相关抗原［7］ 。目前，尚未见文献报道GCF2基因在肝癌中的作用的研究，因此，2010年11月至2011年3月，本实验将采用免疫细胞化学技术检测4种人肝癌细胞和1种成人正常肝细胞中GCF2的表达情况，并且通过Western blot 筛选出GCF2高水平表达的人肝癌细胞株，为进一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用奠定基础。1材料与方法 1．1 材料人肝癌细胞株BEL －7404、 HepG2、SMMC －7721、QGY －7703和成人肝细胞株HL －7702，均购于上海细胞生物学研究所。实验仪器均由广西医科大学基础实验中心提供：CO 2恒温培养箱（Thermo ）、倒置显微镜（OLYMPUS ）、台式高速冷冻离心机（SIGMA ）、紫外分光光度计（UV2000I Tanon ）、电泳仪（北京六一仪器厂）、半干式转膜仪（BIO －RAD ）。细胞培养基高糖DMEM 及RPMI 1640均购于HyClnoe 公司。磷酸缓冲液（PBS ）、 DAB 显色试剂购于福州迈新生物技术开发有限公司。蛋白提取试剂盒购于南京凯基生物技术有限公司。GCF2抗体购自美国Santa 公司。辣根过氧化物酶（HRP ）标记的山羊抗鼠IgG 购自上海长岛生物试 剂有限公司。GAPDH 抗体、ECL 发光试剂购于碧云天生物技术研究所。 1．2 细胞培养 将4种肝癌细胞分别培养在含10% 胎牛血清的高糖DMEM 培养液中，将成人正常肝细胞 株HL －7702培养在含10%胎牛血清的RPMI 1640培 养液中，并置于37?、 5%CO 2及饱和湿度的恒温培养箱中培养， 隔天更换培养液。1．3细胞爬片的制作及免疫组织化学检测 将生长 状态良好的人肝癌细胞株BEL －7404、 HepG2、SMMC －7721、QGY －7703和成人正常肝细胞株HL －7702接 种于置有圆形盖玻片的12孔培养板内，接种密度为1?104个细胞/孔，用含10%胎牛血清的高糖DMEM 及RPMI 1640培养液在37?、5%CO 2条件下培养。待细胞长到60% 70%融合时，用0.01mol /L PBS 洗涤1次，加入4%多聚甲醛室温固定15min 。将盖玻片取出，粘贴在载玻片上，按照常规免疫组织化学方法，加 入1?100稀释的GCF2抗体， 4?湿盒内温育过夜。PBS 洗片后滴加辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG ，室温 下孵育30min ， PBS 洗片后进行DAB 显色2 3min 。常规50% 100%梯度酒精脱水，二甲苯透明，香柏油 封片，显微镜下观察并拍照记录结果。以PBS 替代一抗作为阴性对照。采用Image －Pro Plus version 6.0软件分析阳性着色光密度。1．4 总蛋白的提取及Western blot 的检测常规细胞培养，当细胞贴壁生长达90%时，按蛋白提取试剂盒 操作方法提取细胞总蛋白， 分装后置于－80?保存。取4个细胞株的蛋白20μg 与1/4体积的5?SDS 上样缓冲液混合，100?沸水浴5min ，冷却后点样进行 SDS －PAGE 电泳分离。电泳完毕，按照半干转移仪公司提供的说明进行印迹操作，将电泳分离蛋白转移到PVDF 膜上。转移膜用含50g /L 脱脂牛奶的PBST （0.01mol /L PBS +0.5%Tween －20）室温封闭5h 。GCF2抗体1?200稀释液4?孵育过夜；按1?5000稀 · 1551·广东医学2012年6月第33卷第11期Guangdong Medical Journal June．2012，Vol．33，No．11