细菌总数监测常见误差分析
细菌菌落总数就是水源地与地面废水样品检测必做得一项指标。菌落总数检测同其她检验一样,也存在检测误差。平板计数法就是细菌总数常用方法之一, 因此,该值准确与否直接关系水质好坏。微生物平板计数得通常方法为每个样品用3个稀释度,每个稀释度常做3个重复。但如何对平板菌落进行正确计数、３个稀释度以哪一个稀释度进行计数及微生物检测允许误差等问题,在饲料标准中并未有所规定,而这些问题与统计值得准确性密切相关。我们就实际检测芽孢杆菌工作中遇到一些菌落计数得问题,与大家进行探讨。
1材料与方法
１.１试验材料
1。1。1样品:随机抽取微生态饲料添加剂合生素样品3份。
1。１.２培养基:营养琼脂。
1.１.3仪器设备:磁力搅拌器,无菌培养皿,培养箱,振荡器。
1.2 试验方法
1。2。1样品得振荡时间对菌数检测得影响
选择1个样品,称取１0 ｇ,放人无菌锥形瓶内,加入90 mＬ无离子水,磁力搅拌分别为l0、2０、３0、４0与6０ rａiｎ、用1 ｍL移液枪从中吸取1 mL样品悬浊液加入到盛有９mＬ去离子水得试管中,用振荡器使样品充分均匀,以此类推,制成10一～1Ｏ一’不同稀释度得样品溶液。平板涂布法检测菌含量:用移液枪从样品稀释液中各吸取20０L,每个样品稀释液3个重复;将平板倒置于3５—37 ｃC培养箱中培养24 h。
1.2。2 检测方法对菌数检测得影响
各个样品称取l0 g,放入无菌锥形瓶内,加入9０ mL无离子水,磁力搅拌分别为40 raiｎ。并稀释成1０～～l0 不同稀释度得样品溶液。倾注平板法检测菌含量:用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取１ mＬ,每个样品稀释液3个重复,待培养基表面干燥后,将平板倒置于３５ 37～(2培养箱中培养24 h、平板涂布法检测菌含量:用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取２０0 L涂布平板,每个样品稀释液３个重复;将平板倒置于
35~37℃培养箱中培养2４ｈ、2结果
2.1样品得振荡时间对菌数检测结果得影响
采用细菌平板计数得方法,不同振荡时间对合生素中芽孢杆菌检出量得结果见表1。从表l中可见:不同振荡时间获得得细菌菌落数量有较大差别。总体而言,在一定时间内,随着振荡时间得延长检出有效菌含量增加,说明细菌从载体上解析需要一定得时间;当振荡时间为4０rain后产品中得菌含量基本稳定。采用适当振荡时间才能更精确得显示产品中有效菌得含量。表1 震荡时间对有效菌含量结果得影响’［"／_。CFU/g 震荡时间对有效菌落含量结果得影响
3分析与讨论
3.1样品处理对结果得影响
取样时对样品取样口与取样工具要消毒,防止样品交叉污染。
３、２样品得均质处理对结果得影响
固体样品要用均质器或玻璃珠等充分均质,也可在稀释液中添加相应溶解液ｆ如吐温80与液体石蜡等1得稀释液,以保证样品得充分均质。测定芽孢杆菌活菌数时,不同振荡时间获得得细菌菌落数量有较大差别,因为细菌从载体上解析并均匀分散到溶液中需要一定得时间,待测样品应在振荡器上充分振荡,使得芽孢杆菌可以充分与均匀地分散到待测溶液中,避免因为菌体未完全释放而引起结果中细菌含量偏低得现象。
3、３试验过程中操作方法得影响
加样l mL时,用1 ｍL得吸管并且每做一个稀释度都要换１支吸管,否则稀释度间菌落计数误差会超过10%,说明存在操作误差、用吸管向平皿里加样,平皿开口要小,吸管要直立且加样结束后,让吸头接触皿底干燥处,保证加样得体积不少、若采取倾注平板法时,平皿加样后要及时倾注琼脂,其间隔一般不超过２0 min f最好在１0 ｍin内)、以琼脂不烫手(约45℃)为宜,否则会杀灭细菌,太热也会使冷凝水过多,影响细菌得生长。加入琼脂要及时摇匀,先向一个方向旋转,然后向另一方向旋转。这样会减少菌落得集聚与连片现象。另外,用力不要过大,使琼脂不溅到ⅡIL壁与肌盖上,保证计数结果得准确。当琼脂凝。当琼脂凝固后,要及时移人培养箱倒置培养、若采用涂布平板法进行检测,放置适当时间后,则立即将平皿翻转后放置培养箱中进行培养,以避免菌落蔓延生长,难以计数。为保证结果准确,除作琼脂得空白对照外,还要对菌落计数得全程做一对照、
3.4 菌落计数误差
菌落计数在完成培养后应立即进行,以防菌落继续生长蔓延从而影响测定结果。培养基中加入TｒC ｆ氯化一苯四氮唑)可使细菌菌落显红色,这样可
与同样品颗粒与凝集物(白色)相区分,以提高菌落计数得准确性。有学者认为:１００ mL培养基中加入2～3 mL得TＴC可使菌落着色且不抑制细菌得生长。菌落计数时要2个人分别用菌落计数器计数菌落总数,取2个人得平均数报告菌落总数、一般来说,每平板含20～200个菌落得稀释度得菌含量与实际结果最接近,超过200个／平皿或小于２O个/平皿得计数结果则可能与实际存在较大差别。因此,应尽量选择20～200个/平皿得稀释度进行芽孢杆菌得计数,保证菌落计数得有效性。报告结果要遵守国标中菌落计数得方法进行。
４小结
菌落数检测得误差可能来自于多个方面。试验研究表明:除了检测环境与培养基之外,误差主要来自于样品与检验得操作过程,包括检验得准备环节。一般认为,微生物样晶不能复检、但当菌落总数在标准得临界或菌落出现明显得异常时,有时重新检测还就是必要得、这里所提到得重新检测就是对同一批次未开封且保存得时间与温度都比较合适得样品。这样,可以通过重新检测校正误差。
菌落总数和大肠菌群测定（固体样品） 药品： 1、平板计数琼脂 2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） 3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 4、氯化钠 设备材料： 烧杯、三角瓶、广口瓶、培养皿、刻度吸管、倒气管、玻璃 棒、试管、硅胶塞、洗耳球、棉花、布或报纸等。 一、准备工作 （指导书是按一个样品所需物品准备的，实验室可按样品量增加） 1、平板计数琼脂培养基准备----用于菌落总数测定 将三角瓶放在电子称上，去皮，按平板计数琼脂使用说明称量，加 200ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸加热煮沸，充分溶解，盖上硅胶塞，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧。 2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤----用于大肠菌群测定 （a）将烧杯放在电子称上，去皮，按使用说明称量，加100ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸，充分溶解。 （b）用10ml（毫升）的吸管分装到9支（18*180规格）试管中，每支试管加10ml的月桂基溶液LST （合计90毫升）。 （c）9支试管分别放入倒气管（开口向下），排气，盖上硅胶塞。
3、0.85%的生理盐水----用于样品稀释 将广口瓶去皮，称取氯化钠1.91g加225ml蒸馏水，摇匀，用报纸 或布包好，再用橡皮筋扎紧；同样配制第二瓶。 4、准备2个空试管，盖上硅胶塞----用于样品稀释。 5、准备8个培养皿，用布包扎好。 6、准备至少3支5ml和1支10ml带有刻度的吸管，用布包扎好（顶部可用棉球塞住，防止吸液时，液体不慎吸入洗耳球）。 7、准备操作的工具：剪刀1把、镊子1个、勺子等打开产品包装所需工具，用布包扎好。 二、使用灭菌锅灭菌 1、检查灭菌锅底部加热管水位是否正常，水位要高过加热丝。 2、将上面准备好的7步骤物品逐一放入锅内，注意：滴定管吸口向下，有棉球的向上。 3、盖上火菌锅盖子时，将排气管插到排气口内，注意从对角线开始拧紧螺丝，将排气阀打开（安全阀始终关闭），通电后，待排气阀放气3分钟后（锅内冷空气已经排完），关闭排气阀。 4、查看灭菌锅的压力表，当温度升到121°，压力升到0.1MP（兆帕）时，灭菌维持15分钟后（温度和压力不能过高或者过低），断电自然冷却到接近“ 0”度后，慢慢打开排气阀，再对角拧开灭菌锅。 三、无菌操作 进无菌室前的准备：放好工具（酒精灯，记号笔，消毒用75%酒精棉球，洗耳球，电子称），打开紫外线杀菌灯，杀菌30分钟后关闭，再等
测量偏差常见原因分析 测量工作必须严谨细心，千万不能心存侥幸，不得有一丝马虎。测量是施工的眼睛，引导施工前进，关系施工的进度、质量，因此测量工作必须精确、快速，以下是我对测量偏差常见原因的分析。 1、全站仪建站时，只记得精平，忘记了对中，从而导致对中粗差， 定向偏差，放样偏差。 2、全站仪测量标高时，棱镜杆高度与全站仪设置棱镜高度不一 致，从而导致测量标高错误。 3、全站仪网格因子因后方交会产生变化，使用后交后未及时修改 网格因子，从而导致下次固定控制点建站测距偏差。 4、全站仪大气压及温度被修改后，没有及时修正，导致测距偏差。 5、全站仪反射物设置不正确，如棱镜、反射片、免棱镜等，每种 反射物常数均不同，因设置错误从而导致测距偏差（需注意不同规格的棱镜常数也会有差别）。 6、全站仪在使用过程中，三脚架螺栓未拧紧或脚架未踩实，产生 不均匀沉降，全站仪发生倾斜，从而导致放样偏差。 7、建站时，测站点坐标、后视点坐标或方位角输入错误，定向错 误，并且未进行坐标反测，从而导致放样错误。 8、放样时，放样点坐标输入错误，从而导致放样错误，该情况应 引起足够重视。建议预先将测量数据用数据线上传全站仪后直接调取桩号，上传前应对坐标数据进行核对，放样时再次核对，该
方法可节省坐标输入的时间，提高工作效率。 9、放样时，放样点角度偏离0度0分0秒较大，从而导致放样偏 差。 10、对讲机传话时，表达或理解错误导致放点偏差，如向前5公分 打桩，结果说成或理解成向后5公分打桩，就将导致10公分的偏位。 11、放样距离超过建站距离，从而导致放样偏差。（要充分理解， 角度发散原理，放样距离越远偏差越大。） 12、除以上操作问题外，挤土效应，机械行走，都会使放好的桩位 发生位移，从而导致桩位偏差。此外，管桩施打过程中，桩身垂直度控制不好，造成桩身倾斜。同样会造成施工好的桩位发生偏差。 全站仪自身有补偿功能，在工地检查过程中，发现很多工地测量员在放点过程中，都未打开补偿器，补偿失去意义。建议各工地测量员在测量过程中打开补偿器，以减少仪器轻微倾斜带来的测量误差。 2012年12月15日 郭越
医院感染监控中常用的检测方法 采样及检查原则：采样后必须尽快对标本进行相应指标的检测，送检时间不得超过6 h；若标本4 ℃保存时，送检时间可延长，但不得超过24 h。 1．医务人员手的微生物学监测 （1）采样时间：在接触患者或从事医疗活动前进行采样。 （2）采样面积及方法：被检人五指并拢，将浸有无菌9g/L氯化钠溶液的棉拭子一支在双手曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积约30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米cm2) 计算。 （3）细菌菌落总数检查：1ml采样液放入灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，放35℃温箱内培养24~48 h计数菌落。 手细菌菌落总数（cfu/ cm2）= 平板上菌落数×采样液稀释倍数30×2 （4）判断标准：见表6-3-1。 2．物体表面的微生物学监测 （1）采样时间：消毒处理后4 h内采样。 （2）采样面积：被采表面<100 cm2，取全部表面；被采表面≥100 cm2，取100 cm2。 （3）采样方法：用5cm×5 cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有灭菌9g/L氯化钠溶液的棉拭子1支，在规格板内横竖
往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样式1～4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子入装10ml采样液的试管内送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。 （4）细菌菌落总数检查：1ml采样液放入灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，放35℃温箱内培养24~48 h计数菌落。 物体表面细菌菌落总数（cfu/ cm2）= 平板上菌落数×采样液稀释倍数 采样面积（cm2） （5）判断标准：见表6-3-1。 3．空气的微生物学监测 （1）采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。（2）采样高度：与地面垂直高度80～150 cm。 （3）布点方法：室内面积≤30 m2，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m处取一点；室内面积>30 m2，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。 （4）采样方法：用90mm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5~30 min后送检培养。 （5）细菌菌落总数检查：将平板置37℃温箱内培养24 h计数菌落。空气细菌菌落总数（cfu/ m3）= 50000NAT 式中：A—平板面积（cm2） T—平板暴露时间（min） N—平均菌落数（cfu/平板）
旋转设备安装轴不对中联轴器中心偏差分析与找正技术培训 内 部 学 习 材 料 编制：邓华伟 委员：郭先军王洪赵安华 张运森万谊熊建平攀钢集团工程技术有限公司西昌分公司
旋转设备安装轴不对中联轴器中心偏差 分析与找正 摘要：旋转设备在安装或维修后始终存在轴对中的问题，对中精度的高低对设备运行周期及运行效率有着直接的影响，找正的目的是保证设备在工作时使主动轴和从动轴两轴中心线在同一直线上.找正的精度关系到设备是否能正常运转,对高速运转的设备尤其重要。 关键词：对中基准找正调整 1、概况 旋转设备在安装或维修后始终存在轴对中的问题，对中精度的高低对设备运行周期及运行效率有着直接的影响。设备对中精度高，会使旋转支承部位振动小、温升低、磨损小、设备故障率低等特点；设备对中精度低，会使旋转支承部位振动加剧、温升高、磨损加快、设备故障率高，甚至会造成转子轴断裂等设备事故。可以说，旋转设备轴对中精度高低直接影响设备是否能够正常运转，对生产重点设备、高运转设备尤其重要。
2、轴不对中联轴器偏移情况分析 2.1、偏移情况 轴不对中联轴器轴线位置偏差指铅垂方向和水平方向的偏移量，其中水平方向偏心分别存在如下四种情况： （1）、两轴线平行且同心（理 想状态）如图1（a）所示； （2）、两轴线平行但不同心如 图1（b）所示； （3）、两轴线同心但不平行如 图1（c）所示； （4）、两轴线不同心但不平行 如图1（d）所示； 2.2、偏移分析 图1所示的四种情况，两轴绝对对中属是理想状态，对在线运转 设备始终保持轴线对中是难以达到理想状态的，各部位的不均匀膨 胀、轴的弯曲、轴承的游隙、设备转子的动不平衡等原因，都可能造 成轴在运转不对中的现象发生，所以在设备制造、安装、检修中都规 定有允许的偏差值，因此，设备静态下轴不对中联轴器轴线位置偏差 的控制显得尤为重要。 3、检测方法与测量 3.1、基准部位的选择 轴不对中联轴器轴线位置偏差找正确定基准部位是非常重要的，
1、计数器测定法： 即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。 本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。 2、电子计数器计数法: 电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。 3、活细胞计数法 常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。 广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。 4、比浊法 比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。 此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。 5、测定细胞重量法 此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。 此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。 6、测定细胞总氮量或总碳量 氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法适于细胞浓度较高的样品。 7、颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU） 这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体为例，简单介绍其操作： （1）.取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。 （2）.在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管 （3）.于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml. 一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。
紫外线照射与开窗通风对病室空气中细菌含量的对比研究 标签：紫外线；细菌含量；开窗通风 中图分类号R187.4 文献标识码 A 文章编号1674-6805(2012)10-0131-01 空气是人类赖以生存的必要条件之一，清新的空气有利于人类的生存和健康，随着时代的发展人们越来越重视医院内感染预防与控制，医院这个特殊的环境，是病原菌与易感人群相对集中场所，如何有效地对医院病室空气进行净化，一直以来是人们关注的问题。目前，病房空气净化普遍使用紫外线照射，而紫外线照射的消毒效果受诸多因素影响，且存在对人体伤害等缺点[1]。因此，寻求一种便捷而有效的医院病室内空气净化方法是十分必要的。随着人们对室内空气净化观念有较大转变，认识到开窗通风可以保证病室内空气的卫生质量。 1 资料与方法 1.1 一般资料 病室选择：选择心内科、骨外科、呼吸内科、胸外科的普通病室，所有入选对象新病房楼病室病室面积为13.6 m2，旧病房楼病室为12 m2。患者出院后均清洁病室。分试验组(开窗通风组)和对照组(紫外线照射组)进行消毒及采样。实验组和对照组在病室选取上差异无统计学意义(P>0.05)。均于上午进行采样比较。 1.2 方法 1.2.1 消毒方法试验组采用开窗通风方法消毒；对照组采用紫外线照射方法消毒。紫外线照射均采用北京海淀空后高温负荷材料制造厂生产的活动紫外线车灯进行照射。 1.2.2 采样方法均于做完病室清洁半小时后消毒前、消毒30 min后、消毒停止后1 h、2 h、3 h 5个时间段采样。 1.2.3 细菌检测方法用直径9 cm营养琼脂平板，分别在房间内、中、外布3点，根据规定其采样高度在100~150 cm，打开皿盖，暴露5 min后立即关盖，置37 ℃温箱培养48 h，参照卫生部《消毒技术规范》计算细菌数[2]。对监测采样制定严格采样时间段及方法。每次采样分时间段两组同时进行。培养皿采用哥伦比亚营养琼脂平板(9 cm，温州康泰)。 1.3 实验室质量控制 对分析使用全部容器、量具清洗干净消毒后使用。每批检测样品在测定之前，必须使用标准品校准曲线。实验的设备和试剂均符合国际质量标准。
细菌总数监测常见误差分析 细菌菌落总数就是水源地与地面废水样品检测必做得一项指标。菌落总数检测同其她检验一样,也存在检测误差。平板计数法就是细菌总数常用方法之一, 因此,该值准确与否直接关系水质好坏。微生物平板计数得通常方法为每个样品用3个稀释度,每个稀释度常做3个重复。但如何对平板菌落进行正确计数、３个稀释度以哪一个稀释度进行计数及微生物检测允许误差等问题,在饲料标准中并未有所规定,而这些问题与统计值得准确性密切相关。我们就实际检测芽孢杆菌工作中遇到一些菌落计数得问题,与大家进行探讨。 1材料与方法 １.１试验材料 1。1。1样品:随机抽取微生态饲料添加剂合生素样品3份。 1。１.２培养基:营养琼脂。 1.１.3仪器设备:磁力搅拌器,无菌培养皿,培养箱,振荡器。 1.2 试验方法 1。2。1样品得振荡时间对菌数检测得影响 选择1个样品,称取１0 ｇ,放人无菌锥形瓶内,加入90 mＬ无离子水,磁力搅拌分别为l0、2０、３0、４0与6０ rａiｎ、用1 ｍL移液枪从中吸取1 mL样品悬浊液加入到盛有９mＬ去离子水得试管中,用振荡器使样品充分均匀,以此类推,制成10一～1Ｏ一’不同稀释度得样品溶液。平板涂布法检测菌含量:用移液枪从样品稀释液中各吸取20０L,每个样品稀释液3个重复;将平板倒置于3５—37 ｃC培养箱中培养24 h。
1.2。2 检测方法对菌数检测得影响 各个样品称取l0 g,放入无菌锥形瓶内,加入9０ mL无离子水,磁力搅拌分别为40 raiｎ。并稀释成1０～～l0 不同稀释度得样品溶液。倾注平板法检测菌含量:用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取１ mＬ,每个样品稀释液3个重复,待培养基表面干燥后,将平板倒置于３５ 37～(2培养箱中培养24 h、平板涂布法检测菌含量:用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取２０0 L涂布平板,每个样品稀释液３个重复;将平板倒置于 35~37℃培养箱中培养2４ｈ、2结果 2.1样品得振荡时间对菌数检测结果得影响 采用细菌平板计数得方法,不同振荡时间对合生素中芽孢杆菌检出量得结果见表1。从表l中可见:不同振荡时间获得得细菌菌落数量有较大差别。总体而言,在一定时间内,随着振荡时间得延长检出有效菌含量增加,说明细菌从载体上解析需要一定得时间;当振荡时间为4０rain后产品中得菌含量基本稳定。采用适当振荡时间才能更精确得显示产品中有效菌得含量。表1 震荡时间对有效菌含量结果得影响’［"／_。CFU/g 震荡时间对有效菌落含量结果得影响 3分析与讨论 3.1样品处理对结果得影响 取样时对样品取样口与取样工具要消毒,防止样品交叉污染。 ３、２样品得均质处理对结果得影响
细菌数量的测定方法 1、计数器测定法： 即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。 本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。 2、电子计数器计数法: 电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。 3、活细胞计数法 常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。 广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。 4、比浊法 比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。 此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。 5、测定细胞重量法 此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重
空气细菌总数的测定 一、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。 空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。 ----测定方法--平皿沉降法 二、测定原理 空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。 三、试剂 营养琼脂 1、成分 A蛋白胨 1g B牛肉膏 0.3g
菌落总数的测定 基础知识： 菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。 菌落总数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每g（mL）检测样品所生长出来的细菌菌落总数。由于厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际其中的所有细菌总数，也不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数、需氧菌数等。 菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生长过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价，菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。中国国家标准是国内常用的检验方法。 菌落总数测定的卫生学意义： 食品本身的新鲜程度 加工、贮存运输过程中是否受到污染 卫生学指标：食品中菌落总数越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差；菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检验，才能对食品做出较全 面的评价。 细菌在平板计数琼脂上的菌落特征蔓延菌在平板计数琼脂上的菌落特征方法来源：
GB 4789.2-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定 1、范围 本标准规定了食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定方法。 本标准适用于食品中菌落总数的测定。 2、术语和定义 菌落总数aerobic plate count 食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 3、设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1 恒温培养箱：36℃±1℃。 3.2 冰箱：2℃~5℃。 3.3 恒温水浴箱：46℃±1℃。 3.4 天平：感量为0.1g。 3.5 无菌袋。 3.6 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。 3.7 无菌培养皿：直径90mm。 3.8 放大镜或/和菌落计数器。 4、培养基和试剂 4.1 平板计数琼脂培养基 按照称取23.5g培养基溶于1000mL蒸馏水的比例进行配置，分装到锥形瓶，121℃高压灭菌15min。 4.2 0.85%无菌生理盐水 称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水。一般用1000mL锥形瓶配置，称取6.8g的氯化钠，加入800mL蒸馏水，121℃高压灭菌15min。
食品中微生物细菌总数的测定 一、实验目的 1学习并掌握细菌的分离和活菌计数的基本方法和原理； 2了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义。 二、实验原理 菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 三、器材 食品检样营养琼脂培养基无菌生理盐水无菌培养皿，无菌移液管酒精灯等。 四、实验步骤 1取样、稀释和培养 1.1以无菌操作取检样25g（或ml），放于225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1:10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000～10000r/min的速度处理1min，制成1:10的均匀稀释液。
1.2用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混合均匀，制成1:100的稀释液。 1.3另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支10ml吸管。 1.4根据标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml 稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。 1.5稀释液移入平皿后，将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约 15ml，并转动平皿，混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml 稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。 1.6待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。 2菌落计数方法 作平皿菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度的各平皿平均菌落数。到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不要超过24h。 3菌落计数报告方法 3.1平皿菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平皿作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个平皿平均数，其中一个平皿有较大片状菌落生长
目录 摘要 .......................................................................................... 错误!未定义书签。 一、绪论 ........................................................................................ 错误!未定义书签。 二、测量误差的基本原理 ............................................................ 错误!未定义书签。 2.1、研究误差的目的 ...................................................................................... 错误!未定义书签。 ２．2、测量误差的表示方法?错误!未定义书签。 ２.３、电子测量仪器误差的表示方法 .......................................................... 错误!未定义书签。 三、测量误差的分类 .................................................................... 错误!未定义书签。 3．1、误差的来源?错误!未定义书签。 3．2、测量误差的分类 ................................................................................... 错误!未定义书签。 3.３、测量结果的评定 .................................................................................... 错误!未定义书签。 四、随机误差的统计特性与估算方法 ........................................ 错误!未定义书签。 ４.2、贝塞尔公式及其应用?错误!未定义书签。 4.3、均匀分布情况下的标准差 ...................................................................... 错误!未定义书签。 ４.４非等精密度测量 .................................................................................... 错误!未定义书签。 五、系统误差的特性及减小方法 ................................................ 错误!未定义书签。 ５．１、系统误差的特征?错误!未定义书签。 ５．2、判断系统误差的方法 ......................................................................... 错误!未定义书签。 5．3、控制系统误差的方法?错误!未定义书签。 5.3.1.从产生误差的根源上采取措施。?错误!未定义书签。 5．3．2.用修正法减小系统误差?错误!未定义书签。 六、疏失误差及其判断准则 ........................................................ 错误!未定义书签。 6.1、测量结果的置信问题 .............................................................................. 错误!未定义书签。 6.2、不确定度与坏值的剔除准则?错误!未定义书签。 七、测量数据的处理 .................................................................... 错误!未定义书签。 7.１、数据的舍入规则?错误!未定义书签。 ７．2、测量结果的处理步骤?错误!未定义书签。 7.3、最小二乘法原理?错误!未定义书签。 八、最佳测量条件的确定与测量方案的设计?错误!未定义书签。 8．1、最佳测量条件的确定 ........................................................................... 错误!未定义书签。 8.2、测量方案设计 .......................................................................................... 错误!未定义书签。 8.2.１、在设计测量方案时,可以从下属几个方面考虑?错误!未定义书签。 8．2．2、测量过程可分为三个阶段 ..................................................... 错误!未定义书签。 致谢?错误!未定义书签。 参考文献?错误!未定义书签。
空气培养是通过空气菌落测定实现的，空气菌落测定可作为一种环境清洁的指标。 1人员着装要求： 检测者需要洗手戴口罩和帽子 2空气培养目的 检测手术部空气在静态下是否达到空气卫生学标准。 3采样时间 每月监测一次，在消毒处理后关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样。 4采样方法 检测者需要洗手带口罩和帽子，根据采样原理采用平板暴露法：在消毒处理后，操作前进行，室内面积≤30m2对角线内、中、外处设3点，内外点布位距墙壁1m处，室内面积＞30m2设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1m处。空气中细菌等微生物可随尘粒一起下降，在室内各采样点处放好营养琼脂平板，采样高度距地面0.8～1.5m，采样时，将平板盖打开搭在平皿边缘上，暴露5min，盖好平皿盖。 5注意事项 （1）布点位置要正确，严格按照房间面积、布点要求及采样方法进行操作。（2）采样后及时送检，48小时出结果。（可请护理服务中心送检，内线电话：542） （3）培养采样者应及时将结果取回，结果取回后如无异常应将检验报告单依次粘贴在A4纸上，并注明培养房间和培养日期做好完整记录，如有超标应及时通知护士长，并查找原因，复检。 6检测结果判断 空气培养标准值小于或等于200cfu/m3
1人员着装要求：检测者需要洗手戴口罩和帽子 2检测内容 （1）手术间的物体表面及可能有可能与患者接触的物体表面： 每月培养一次。包括治疗车、治疗台、无菌灯、输液架、手术间门把手、无菌器械台、麻醉机、吸引器瓶、麻醉床、手术间墙壁等。 （2）手卫生培养： 每月培养检测一次以同一台手术至少五人为一组，包括器械护士、手术医师，若一台手术人员不足五人，可两台手术合并5-6人做手培养。 （3）腔镜器械： 每月培养检测一次，培养项目3-5个，镜头、腔镜管道为每月必做项目，其余手术器械随机抽查 （4）无菌物品： 每月培养检测一次。包括一次性无菌物品及高压灭菌后的无菌物品。一次性无菌物品及高压灭菌后的无菌物品每月随机抽取至少3例，不得检出任何微生物。（5）植入性器械： 每月抽查一次骨科外来植入性器械包括钉子和钢板及专用器械。 2采样方法： （1）物体表面主要采用棉式子涂抹法。采用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子，取出棉拭子，先在酒精灯外焰进行烧灼后，直接在物体表面按一定顺序滚动式涂抹，后将棉拭子入装有含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。（2）手部培养方法，被检测者须五指并拢，取出棉拭纸先在酒精灯外焰进行烧灼后以手掌到手指尖为平面S型滚动式涂抹，涂抹后将棉拭子入装有含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。 3注意事项： （1）培养不得检测出任何微生物。 （2）采样后及时送检，48小时出结果。 （3）结果出来后将检验报告单依次粘贴在A4纸上，并注明培养房间和培养日期做好完整记录。
食品中菌落总数的测定 一、实验目的 （1）学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法 （2）学会菌落总数的报告方式 二、实验材料 1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。 2、培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、 琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.2 3、检样：利乐包装鲜牛奶250ml 三、实验方法与步骤 1、检验程序 菌落总数检验程序： 检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出→菌落数→报告 2、检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。 （2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。 （4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。 四、检样中细菌菌落总数的计算与报告 1、菌落计算方法 （1）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 （2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300 CFU之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，
食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项 1菌落总数及测定 菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别 的生长物,它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度,与培养基混合,在一定培养条件下,每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。 菌落总数就是指食品检样经过处理,在一定条件下(如需氧性质、培养基成分、pH、培养温度和时间等) 1 mL ( g)检样中所含菌落的总数。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度、食品的新鲜度及卫生质量,它反映食品在生产、加工、销售过程中是否符合卫生要求, 以便对被检样品做出适当的卫生学评价。也可以应用这一方法观察食品中细菌的性质以及细菌在食品中繁殖的动态,菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣[ 1 ] 。 2菌落总数测定中的注意事项 2. 1 所用器皿及稀释液 2. 1. 1 检验中所用玻璃器皿,如培养皿,吸管、试管、移液器的吸头等必须是完全灭菌的,并在灭菌前彻底洗涤干净,不得残留有抑菌 物质。 2. 1. 2 用作样品稀释的液体,每批都要有空白对照。如果在琼脂对照平板上出现几个菌落时,要查找原因,如可通过追加对照平板,以判定是空白稀释液,用于倾注平皿的培养基,还是平皿、吸管或空气可能存在的污染。
2. 1. 3 检样的稀释液一般用灭菌盐水,如果对含盐量较高的食品(如酱品等)进行稀释,则宜用蒸 馏水。做醋时用20% ～ 30%碳酸钠调pH 至中性。 2. 2 检样的稀释 2. 2. 1 检样稀释时,应以无菌操作称取(或量取)有代表性的样品25 g (或mL ) , 剪碎放于含有225 mL灭菌稀释液的玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠) ,经充分振摇作成1: 10 的稀释液。如系肉、鱼等固体样品,先用自来水把表面冲洗干净,取可食部分(即鱼肉)剪细 加入稀释液后,置均质器中以8 000 ～ 10 000 r /min 速度处理1 min,使做成均匀的1: 10稀释液。 2. 2. 2 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,将上述1: 10的检样稀释液再做成几个适当的10 倍递增稀释液,每递增稀释一次,必须另换1 支1 mL 灭菌吸管或吸头,这样所得检样的稀释倍数方为准确。 2. 2. 3 从吸管筒内取出灭菌吸管时,不要将吸管尖端触及其他仍留在容器内的吸管的外露部分;而且吸管在进出装有稀释液的玻璃瓶和试管时,也不要触及瓶口及试管口的外侧部分;因为这些部分都可能 接触过手或其他沾污物。当用吸管将检样稀释液加至另一装有9 mL 稀释液的试管内时,应小心沿管壁加入,不要触及管内稀释液,以防吸管尖端外侧部分黏附的检液也混入其中。 2. 2. 4 对吸管体积的要求是取1 mL的样品匀液使用的吸管的最小刻度应该不低于
试验检测误差产生原因及改善措施 1.概述 工程质量的评价是以各种试验检测数据为依据的，而大量实践表明：一切试验测量结果均具有误差。因此作为从事试验检测工作的专业技术人员和管理人员有必要了解误差的种类，分析这些误差产生的原因及影响因素，以便在工作过程中采取针对性的措施最大限度的加以减少和消除误差。同时应具备科学地解析检测数据的能力，确保检测结果能最大限度地反应真值，及时、准确、可靠地测定检测对象，为管理部门提供真实可靠的工程质量状况及其变化规律。 2.试验检测的误差分类及成因 根据误差产生的原因及产生性质，可以把测量误差分为系统误差、随机误差和过失误差三大类。 系统误差原因分析 系统误差是由人机系统产生的误差，是由一定原因引起的在相同条件下多次重复测量同一物理量时产生的。它具有测量结果总是朝一个方向偏离，其绝对值大小和符号保持恒定，或按照一定规律变化的特点。因此系统误差有时称之为恒定误差。系统误差主要由些列原因引起： （1）仪器误差 由于测量工具、设备、仪器结构上的不完善，电路的安装、布置、调整不得当，仪器刻度不准确或刻度的零点发生变动，样品不符合要求等原因引起的误差。 （2）人为误差 指试验检测操作人员感官的最小分辨力和某些固有习惯引起的误差。例如，由于观察者的最小分辨力不同，在测量数值的估读或与界面的接触程度上，不同观测者就有不同的判断误差。有的试验检测人员的固有习惯，如在读取仪表读数时总是把头偏向一边，也可能会引起误差。 （3）外界误差 外界误差也称环境误差，是由于测试环境，如温度、湿度等的影响而造成的误差。 （4）方法误差
由于测试者未按规定的方法进行试验检测，或测量方法的理论依据有缺点，或引用了近似的公式，或试验条件达不到理论公式所规定的要求等造成的误差。 （5）试剂误差 在材料的成分分析及某些性质的测定中，有时要用一些试剂，当试剂中含有被测成分或含有干扰杂质时，也会引起测试误差，这种误差称为试剂误差。 一般来说，系统误差的出现是有规律的，其产生原因往往是可知或可掌握的，只要仔细观察和研究各种系统误差的具体来源，就可设法消除或降低其影响。 随机误差原因分析 随机误差往往是由不能预料、不能控制的原因造成的。例如试验检测人员对仪器最小分度值的估读很难每次严格相同；测量仪器的某些活动部件所指示的测量结果在重复测量时很难每次完全相同，尤其是使用年久或质量较差的仪器设备时更为明显。 无机非金属材料的许多物化性能都与温度有关。在试验检测过程中，温度应控制恒定，但温度恒定有一定的限制，在此限度内总有不规则的变动，导致测量结果发生不规则的变动。此外，测量结果与室温、气压和湿度也有一定的关系。由于上述因素的影响，在完全相同的条件下进行重复测量时，测量值或大或小，或正或负，起伏不定。这种误差的出现完全是偶然的，五规律性的，所以也称为偶然误差。 过失误差原因分析 过失误差也叫错误，是一种与事实不符的显然误差。这种误差往往是由于实验检测人员的粗心、疏忽大意、不正确操作或测量条件的突然变化所引起的。例如：仪器放置不稳，受外力冲击产生毛病；试验检测时读错数据、记错数据；数据处理时单位出错、计算出错等。在试验检测过程中过失误差是不允许的，应消除过失误差。 3.误差控制的改善措施及建议 对于误差的减少和消除，应根据试验检测工作的内容及检测结果要求，预先定出测量结果的允许误差，通过选择合理的测试方法、恰当的仪器设备、规范必要的测量条件等手段来保障试验检测工作的顺利完成。 消除测量误差，应根据误差的来源和性质，采取相应的措施和方法。必须指
细菌耐药性检测方法 1、细菌耐药表型检测：判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据NCCLS标准，通过测量纸片扩散法、肉汤稀释法和E试验的抑菌圈直径、MIC值和IC值获得。也可通过以下方法进行检测： （1）耐药筛选试验：以单一药物的单一浓度检测细菌的耐药性被称为耐药筛选试验，临床上常用于筛选耐甲氧西林葡萄球菌、万古霉素中介的葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌及氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌等。 （2）折点敏感试验：仅用特定的抗菌药物浓度（敏感、中介或耐药折点MIC），而不使用测定MIC时所用的系列对倍稀释抗生素浓度测试细菌对抗菌药物的敏感性，称为折点敏感试验。 （3）双纸片协同试验：双纸片协同试验是主要用于筛选产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）革兰阴性杆菌的纸片琼脂扩散试验。若指示药敏纸片在朝向阿莫西林/克拉维酸方向有抑菌圈扩大现象（协同），说明测试菌产生超广谱β-内酰胺酶 （4）药敏试验的仪器化和自动化：全自动细菌鉴定及药敏分析仪如：Vitek-2、BD-Pheonix、Microscan等运用折点敏感试验的原理可半定量测定抗菌药物的MIC值。 2．β-内酰胺酶检测：主要有碘淀粉测定法（iodometric test）和头孢硝噻吩纸片法（nitrocefin test）。临床常用头孢硝噻吩纸片法，β-内酰胺酶试验可快速检测流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌和肠球菌对青霉素的耐药性。如β-内酰胺酶阳性，表示上述细菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药；表示葡萄球菌和肠球菌对青霉素（包括氨基、羧基和脲基青霉素）耐药。 3．耐药基因检测：临床可检测的耐药基因主要有：葡萄球菌与甲氧西林耐药有关的MecA 基因,大肠埃希菌与β-内酰胺类耐药有关的blaTEM、blaSHV、blaOXA基因，肠球菌与万古霉素耐药有关的vanA、vanB、vanC、vanD基因。检测抗菌药物耐药基因的方法主要有：PCR扩增、PCR-RFLP分析、PCR-SSCP 分析、PCR-线性探针分析、生物芯片技术、自动DNA 测序 4．特殊耐药菌检测 （1）耐甲氧西林葡萄球菌检测：对 1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10㎜，或其MIC≥4цg/ml的金黄色葡萄球菌和对1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤17㎜，或MIC≥0.5цg/ml 的凝固酶阴性葡萄球菌被称为耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。对MRS不论其体外药敏试验结果，所有的β-内酰胺类药物和β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂均显示临床无效；绝大多数的MRS 常为多重耐药，耐药范围包括氨基糖甙类、大环内酯类、四环素类等。 （2）耐青霉素肺炎链球菌检测：当对1цg苯唑西林纸片抑菌圈直径〈20㎜或MIC〉0.06цg/ml均应视为耐青霉素肺炎链球菌（PRSP）。临床治疗显示 PRSP对氨卞西林、氨卞西林/舒巴坦、头胞克肟、头胞唑肟，临床治疗疗效很差，但应检测对头胞曲松、头胞噻肟和美洛培南等的MIC以判断是否对这些抗生素敏感。 （3）耐万古霉素肠球菌检测：肠球菌对30цg万古霉素纸片抑菌圈直径≤14㎜或MIC≥32цg/ml被称为耐万古霉素肠球菌（VRE）。针对多重万古霉素药物目前尚无有效治疗方法，但对青霉素敏感的VRE可用青霉素和庆大霉素联合治疗，若对青霉素耐药而不是高水平耐氨基糖甙类可用壁霉素+庆大霉素。 （4）产超广谱β-内酰胺酶的肠杆菌科细菌检测：超广谱β-内酰胺酶是一种能水解青霉素、