野生毛葡萄籽原花青素抗氧化活性的研究
郑燕升,莫倩 (广西工学院轻化系,广西柳州545006)
摘要 [目的]为进一步开发利用野生毛葡萄籽原花青素提供依据。[方法]选择清除超氧阴离子自由基(O 2-?)和羟基自由基(?O H )2个方面,对野生毛葡萄籽原花青素的抗氧化活性进行测定。[结果]野生毛葡萄籽原花青素对O 2-
?和?O H 均具有较强的清除能力,对O 2-?、?O H 野生毛葡萄籽原花青素的I C 50分别为0.37、0.33m g/m l 。[结论]野生毛葡萄籽原花青素具有较强的抗氧化活性。关键词 野生毛葡萄;原花青素;抗氧化活性
中图分类号 S58 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008)18-07512-02
A n t iox ida tio n E ffe c t o f P roa n th o c y an d in s fromS e e d s o f W ild V itis quinquangu laris ZHENG Ya n -sh e n g e t a l (D epa r t m en t o f
B io lo g ica l an d
C h e m ica l E n g in ee rin g ,G u an gx i U n ive rs ity o f T ech n o log y ,L iu zh ou,G u an gx i 545006)A b s tra c t [O b jective]T h e re se archa i m edto p ro v ide scien tific basis fo r deve lop in g p roan th ocy and in s fromw ild V itis quinquangu laris .[M e th od]T h e rad-ica l scaven g in g e ffe ct o f pro an th ocyan d i n s fromw ild V itis quinquangu laris w a s stu d ied a t d iffe ren t sys tem s(O -?and ?OH )[R e su lt]P ro an th ocyan d i n s from w ild V itis qu i nquangu laris h ad s tron g scav en g in g e ffect on free radica ls gen e ra ted by d ife ren t sys tem s .F o r O 2-?an d ?OH,th e I C 50o f p ro an th o cyan d in s fromw ild V itis quinquangu laris w a s 0.37an d 0.33m g/m l .[C on clu s ion]P roan th ocy and in s fromw ild V itis qu inquangularis h ad stron g an tiox idan t a ctiv ity.K e y w o rd s W ild V itis quinquangu laris ;P roan th ocyan d i n s ;A n tiox idan t activ ity
基金项目 广西教育厅资助项目(200708LX198);广西工学院基金项目
(院科自0704104)。
作者简介 郑燕升(1964-),男,广西贵港人,硕士,副教授,从事天然
有机化学方面的研究。
收稿日期 2008-04-16
在自然界中,多酚类物质广泛存在,并作为天然的抗氧化剂而广泛应用。对于葡萄籽原花青素抗氧化性的研究报道很多
[1-4]
,既包括动物体内抗氧化试验,又包括体外细胞
培养及用化学方法测定。研究表明,葡萄籽原花青素是迄今为止所发现的最有效的自由基清除剂之一,特别是低聚花青素可以清除体内的自由基和活性氧,能预防因人体血液中低密度脂蛋白氧化而引起的动脉硬化
[5]
。许多研究表明,原花
青素抗氧化、清除自由基的能力远远强于V E 和V c ,能防治80多种因自由基引起的疾病,包括心脏病、关节炎等,还具有改善人体微循环的功能[6-7]。笔者研究了自制的野生毛葡萄籽原花青素产品在2种体系中清除自由基的活性,为进一步开发利用野生毛葡萄原花青素提供一定的科学依据。1 材料与方法
1.1 主要仪器与试剂 A L 104电子分析天平(梅特勒—托利多仪器有限公司);W F ZU V -2000紫外/可见分光光度计(尤尼柯仪器有限公司);PH S-25型精密酸度计(上海伟业仪器厂);ZFD —5250全自动新型鼓风干燥箱(上海智城分析仪器制造有限公司);2003型恒温磁力加热搅拌器(上海闵行虹浦仪器厂)。三羟甲基氨基甲烷(T ris)、邻二氮菲、邻苯三酚、F e-SO 4、H 2O 2、乙醇、丙酮等为国产分析纯试剂。
1.2 试验材料 供试材料为野生毛葡萄籽原花青素,自制[8](>95.0%)。1.3 试验方法
1.3.1 野生毛葡萄原花青素清除超氧阴离子自由基(O 2-?)的活性。采用邻苯三酚自氧化法[9]。在试管中加入4.5m l T ris-H C l 缓冲液(pH 值8.2)和0.1m l 不同浓度的样品溶液,置于25℃恒温水浴中20m in ,用微量注射器注入0.4m l 经25℃预热的邻苯三酚,混合均匀后置于25℃恒温水浴中反应4m in ,立即加入2滴8m o l/L H C l 中止反应。用去离子水调零,420nm 处测定吸光度,同时以0.1m l 去离子水代替样品做空白试验,则原花青素对O 2-?自由基的清除率按如下
公式计算。
清除率(%)=
A 空白-A 样品
A 空白
×100
(1)
1.3.2 野生毛葡萄原花青素清除羟基自由基(?OH )的活性。采用邻二氮菲-F e 2+氧化法[10]。在试管中依次加入5m m o l/L 邻二氮菲溶液0.6m l 、磷酸盐缓冲液(pH 值7.4)0.4m l 和5m m o l/L F e 2+-E DT A 溶液0.6m l ;其中,加入体积分数为0.1%H 2O 20.8m l 作为损伤管,加入体积分数为0.1%H 2O 20.8m l 和1m l 不同浓度的样品溶液作为样品管,不加H 2O 2和样品的作为空白管;将各管用无水乙醇定容到4m l ,37℃下反应1h ,535nm 处测定吸光度。野生毛葡萄原花青素对羟基自由基(?OH )的清除率按如下公式计算。
清除率(%)=A 样品-A 损伤
A 空白-A 损伤
×100
(2)
2 结果与分析
野生毛葡萄原花青素在邻苯三酚自氧化体系和F e 2+/H 2O 2氧化体系中清除超氧阴离子自由基(O 2-?)和羟基自由基(?OH )的试验结果分别见图1、
2。
图1 野生毛葡萄原花青素对O 2-
?的清除效果
F ig.1 S c a v e n g in g e ffe c t o f p ro a n th o c y a n d in s from w i ld V itis qu in -quangu laris o n O 2-?
由图1可知,邻苯三酚自氧化体系中,随着原花青素浓度的升高,清除率也随之升高。将上述数据进行回归,得到回归方程:
y =11.636x 3-151.66x 2+227.4x -13.46(R 2=0.9644)
(3)
根据回归方程可求得在该试验条件下野生毛葡萄籽原
安徽农业科学,J ou rn a l o f A n hu i A g r i .S c i .2008,36(18):7512-7513 责任编辑 刘月娟 责任校对 况玲玲
花青素的I C 50为0.37m g /m l 。当原花青素质量浓度达1.0m g/m l 时,对超氧阴离子自由基(O 2-?)的清除率达76.1%。 由图2可知,在F e 2+/H 2O 2氧化体系中,随着原花青素浓度的升高,清除率也随之升高。将上述数据进行回归,得到回归方程:
y =43.901x 3-186.68x 2+235.83x -10.247(R 2=0.9755)(4)
根据回归方程可求得在该试验条件下野生毛葡萄籽原花青素的I C 50为0.33m g/m l 。当原花青素质量浓度达到1.0m g/m l 时,对羟基自由基(?OH )的清除率达到83.8
%。
图2 野生毛葡萄原花青素对?OH 的清除效果
F ig.2 S c a v e n g in g e ffe c t o f p ro a n th o c y a n d in s from w i ld V itis qu in -quangu laris o n ?OH
3 结论
在邻苯三酚自氧化体系和F e 2+/H 2O 2氧化体系中,野生
毛葡萄原花青素对超氧阴离子自由基(O 2-?)和羟基自由基(?OH )具有较强的清除作用,而且存在量效关系,质量浓度越高,抗氧化活性越强。当原花青素质量浓度达到1.0m g/m l 时,对超氧阴离子自由基(O 2-?)、羟基自由基(?OH )清除率分别达到76.1%和83.8%,说明野生毛葡萄籽原花青素为抗自由基的有效活性成分。但由于自制的野生毛葡萄原花青素没有经过精细分离,低聚体含量尚未测定,低聚体提纯不够,存在聚合度较高的成分,对超氧阴离子自由基(O 2-?)、羟基自由基(?OH )清除率的优势还没得到充分体现。参考文献
[1]郑光耀.葡萄籽原花青素提取物的生理活性、药理作用及其应用[J].
林产化工通讯,2000,34(1):28-33.
[2]孟洁,杭瑚.诃子对食用油脂抗氧化作用的研究[J].食品科技,2000
(2):36-38.
[3]赵万洲,陆茵,阎新琦,等.葡萄籽原花青素抗促癌作用实验研究[J].
中草药,2000,31(12):917-920.
[4]王洪新.葡萄籽中抗氧化剂的精制及抗氧化性的测定[J ].中国油脂,
1995(6):9-14.[5]B A O SH ANSU N G,P ED R O B E L C H IO RJ M ,R IC AR D O D AS IL V A,e t a l.I so -la t io n a n d pu r i fica tion o f d i m e r ic an d tr i m e r ic p ro an th o cy an id in s from g r ape
se ed s[J].Jo u rn a l o f C h rom a to g ra ph y,1999,841(1):115-121.[6]F U L E K I T,R ICA R D O D AS IL V A,J M .C a te ch inan d p ro cy an id incom p o s itiono f
se ed s fromga pe cu ltiva rs g row nin O n ta r io[J ].J ou rn a l o f A g r icu ltu ra l an d F oo d C h em istr y(U SA ),1997,45(4):1156-1160.[7]BA G CH I D,B AG C H I M ,S T O H SSJ ,e t a l .F re e rad ica ls an d g r ape se e d p ro an -th o cy an id ine x tra ct i m p o r tan ce inh um anh e a lthan d d ise a se p re ve n t ion [J].T o x i-co lo g y ,2000,148(2/3):187-197.
[8]郑燕升,莫倩,雷莉.野生毛葡萄籽中原花青素提取工艺研究[J].安徽
农业科学,2008,36(2):408-409.
[9]刘慧燕,赵谋明.江蓠低分子量多糖的提取以及抗氧化活性研究[J].
食品工业科技,2005,25(3):67-69.
[10]金鸣,蔡亚欣.邻二氮菲-F e 2+氧化法检测F e 2+
/H 2O 2产生的羟自由
基[J ].生物化学与生物物理进展,1996,23(6):553-555.
(上接第7511页)
表7 续随子油的成分
T a b le 7Com p o n e n t o f Eupho r b ia lathy ris L.s e e d o il
序号N o.化合物C om pou n d 保留时间∥m i n R e ten t iont i m e
种子甲酯S e ed m e th y l e s te r 油甲酯O il m e th y l e ste r
相对含量∥%R e la tiv e con ten t
种子甲酯S e ed m e th y l es te r 油甲酯O i l m e th y l e s te r
1豆蔻酸甲酯11.97
12.48
0.408
0.399
2十五烷酸甲酯12.6312.99 1.1420.8053棕榈油酸甲酯13.9813.870.1130.6124棕榈酸甲酯14.2114.08 5.059 4.5915棕榈二烯酸甲酯14.6214.95 1.0240.3826十七烷酸甲酯14.7615.180.2110.4037硬脂酸甲酯15.0815.490.1210.4138油酸甲酯15.4215.8586.12085.4509亚油酸甲酯15.5416.22 1.671 2.21910γ-亚麻酸甲酯16.9417.87 1.075 1.28711花生酸18.9219.330.413 1.00312
花生烯酸
19.02
20.09
2.551
2.172
参考文献
[1]国家中医药管理局.中华本草.第4册[M ].上海:上海科学技术出版
社,1999:3582.
[2]张卫明,史劲松,顾龚平.生物质能的利用和能源植物的开发[J].南京
师范大学学报:自然科学版,2007,30(3):68-74.
[3]娄在祥,王洪新.苹果籽油提取工艺研究[J].粮油食品科技,2006,14
(6):36-38.
[4]祝红,祝玲,叶曼红.番木瓜种子油提取方法及成分的研究[J].中药
材,2007,30(3):857-860.
[5]魏红,钟红舰,汪红.索氏抽提法测定粗脂肪含量的改进[J].中国油脂,2004,29(6):52-54.
[6]吕荷,张涛.中药挥发油测定方法研究[J].中成药,2003,25(1):78-80.[7]中华人民共和国药典委会员.中华人民共和国药典一部[S ].北京:化学工业出版社,2005.
[8]罗登林,丘泰球,卢群.超声波技术在油脂工业中的研究进展[J].粮油加工与食品机械,2005(3):48-50.
[9]
宁永成.有机化合物结构鉴定与有机波谱学[M ].北京:科学出版社,2000:266.
3
15736卷18期 郑燕升等 野生毛葡萄籽原花青素抗氧化活性的研究