第二章生物样品与样品制备
1.体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物
2．体内药物分析的特点：样品量少，不易重新获得；样品复杂，干扰杂质多；供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施；实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作；工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。需相关学科参与。
3．体内药物分析样品的种类：最常用且易获得的分析样品有：血样、尿样、唾液和粪便。
特殊情况下：乳汁、泪液、脊髓液、胆汁、羊水、各种组织
4．血清：血清是由血液中纤维蛋白原等的影响引起血液凝结而析出的澄清黄色液体，约为全血的30％～50％
5．尿液：尿液的主要成分：水、含氮化合物、盐类；体内药物清除主要通过尿液排出，药物以其原型或代谢物及其缀合物等形式排出；尿药测定主要用于药物剂量回收、尿清除率、生物利用度、药物代谢率的研究，并可推断患者是否按医嘱用药。
6．生物样品分析的前处理：是指测定生物样品中的药物及其代谢物时，对样品进行分离、纯化、浓集，必要时对待测组分进行衍生化，为测定创造良好的条件。
7．为何进行前处理？
1）药物进入体内除原药外还有多种形式存在
2）生物样品的介质组成比较复杂，尤其蛋白质严重影响分离效果，必须进行前处理
3）除去介质中含有的大量内源性物质等杂质，提取出低浓度的被测药物，同时浓集药物或代谢物的浓度，使其在所用分析技术的检测范围内。
8．生物样品处理方法选择的一般原则：待测药物的理化性质；待测药物测定的目的与浓度范围。9．去除蛋白质的方法：加与水相混溶的有机溶剂；加入中性盐；加入强酸；加入含锌盐及铜盐的沉淀剂；酶解法。
10．生物样品的分析由两步组成：样品的前处理（分离、纯化与浓集）和对提取物的仪器分析；提取法是应用最多的分离、纯化方法；提取的目的：从大量共存物中分离出所需要的微量组分药物及其代谢物，并通过溶剂的蒸发使样品得到浓集，以供测定；提取法分为液-液提取法和液-固提取法。11．提取溶剂的选择：对被测组分的溶解度大，沸点低，易于浓集、挥散，与水不相混溶，无毒、化学稳定、不易乳化；最常用的溶剂是乙醚和氯仿。
12．被测组分的浓集：样品在提取过程中被测组分得到纯化但因微量的组分分布在较大体积的提取溶剂中，由于进样量的限制，被测组分量可能达不到检测灵敏度，故需将被测组分浓集后再测定；两种浓集方法：末次提取时加入提取液尽量少；挥去提取溶剂法。
13．分离前将药物进行衍生化的目的：使药物变成具有能分离的性质；提高检测的灵敏度；增强药物的稳定性；提高对光学异构体分离的能力；GC 中的化学衍生化和HPLC中的化学衍生化。
第三章体内药物分析方法的设计与验证
1．生物样品经处理后，需选择适当的分析方法进行测定，目前供生物样品药物及其代谢物监测的分析方法主要有以下五类：光谱分析法；色谱法；毛细管电泳法；免疫分析法；同位素法
2．体内药物分析方法的选择原则：一般要根据药物的结构、物理性质、体内药物浓度大小、干扰成分的多少、样品的预处理方法、实验条件和目的等因素进行综合考虑，方可选择出可供生物样品中药物及其代谢物含量测定的分析方法。
3．体内药物分析方法设计的主要依据：
（1）明确分析方法的目的要求；
（2）调研文献了解待测药物的特性；
（3）仪器设备与实验室条件。
4．体内药物分析方法设立与建立的一般步骤：依据测定目的要求结合药物结构、理化性质及体内存在状态、参考同类药物的文献资料，先拟定初步的分析方法进行一系列的体外和体内试验工作以选择最合适的实验条件，进一步验证所拟定的分析方法是否适应实际样品的检测，主要步骤包括：以纯品进行测定；以处理过的空白样品进行测定；回收率的测定；以水代替空白样品添加标准品测定；以空白样品添加标准品测定；体内实际样品测定。
5．体内药物分析方法的评价：
准确度：回收率－－绝对回收率和方法回收率
精密度：日内或批内精密度、日间或批间精密度
灵敏度：检测限、定量限、最低检测浓度
专属性：代谢产物、内源性物质、配伍药物的干扰
稳定性：短期室温条件下稳定性考察
长期低温条件下稳定性考察
冷冻－解冻稳定性考察
另外对体内药物分析方法的考察还要从分析方法的可靠性、操作的难易、每个样品测定耗费时间、仪器设备要求及成本费用多少进行综合评价
第四章所有适用于体内药物分析的方法简介
第一节、紫外－可见分光光度法：
1．UV-VIS的基本原理：
物质对不同颜色的光能吸收是有选择性的，特定的物质主要吸收一定波长的光，物质吸收了高能量的光以后，就发生能级跃迁产生吸收光谱。当物质吸收的光的波长在200～400nm具有共轭结构的有机复杂的外层电子（价电子）发生能级跃迁并伴随着分子振动和转动能级跃迁，形成紫外吸收光
谱。400~760nm具有较大共轭结构的价电子或有色无机物的价电子发生能级跃迁，并伴随分子振动能级的跃迁形成可见光谱
2．UV-VIS定量分析的依据：Beer-Lamber即朗伯比耳定律：A=ECL,其中E为吸收系数，在定量分析中尽可能选E值越大的波长处测定以提高测定的灵敏度越好即E值越大所能测量的某物质的溶液浓度越小，测定灵敏度越高。
3．吸收度的加和性：如果溶液中存在两种以上吸光物质时，只要共存物质不互相影响也不改变各自本身的吸收系数，则溶液的吸收度是各组分吸收度的加和，各组分的吸收度由各自的浓度与吸收系数所决定。物质对光的吸收度加和性是测定混合组分的依据。
4．影响测定准确度的因素：
1、偏离Beer定律而引起的误差
主要由于仪器和溶液（理化性质）的实际条件与Beer-Lambert定律的条件不一致而引起；
仪器：光源不稳、入射光的谱带宽度不够窄、比色皿的厚度和均匀度不合要求
溶液的理化性质：被测物为胶体溶液或浑浊液；被测物的理化性质不稳或溶液浓度改变而使溶质发生解离、缔合导致被测物的组成改变或显色条件控制不好；被测物溶液浓度过大（大于0.01mol/L）导致工作曲线弯曲。
2、透光率测定误差：浓度测量值的相对误差?C/C=0.434?T/TlgT，当吸收度值在0.2－0.7时浓度
测量值的相对误差值较小，为最佳测量范围。
在体内药物分析中由于药物浓度较低，吸收度的测量值较小，会在0.02-0.001之间，测量值的相对误差值达2.8%-10.3%
3、操作不当引起的误差
5．常用样本处理方法：
液液萃取
萃取后衍生化
固相萃取
第二节气相色谱：
1．基本原理：以气体（载气）为流动相，由于被测样品中各组分在固定相与载气间的分配系数不同而被分离。各组分将按分配系数大小顺序，依次被载气带出色谱柱，分配系数小的组分先流出；分配系数大的后流出。流出色谱柱的各组分被载气带入检测器。检测器将物质的质量变化转变为电压或电流变化，由记录器记录电压或电流随时间的变化，即色谱的峰高或峰面积。由于色谱的峰高或峰面积与被测物质的含量成正比，可用峰高或峰面积进行定量分析；物质的色谱峰出峰时间与物质本性有关，色谱峰的出峰时间即保留时间进行定性分析。
2．主要仪器装置：载气瓶→压力调节器→净化器→稳压阀→柱前压力表→转子流量计→进样器→色谱柱→色谱柱恒温箱→检测器→尾气出口→记录器
载气由高压气瓶供给，经压力调节器降压，经净化器脱水及净化，由稳压阀调至适宜的流量进入色谱，待流量、温度及基线先定后，即可进样。液态样品用微量注射器吸取，由进样器注入，样品被载气带入色谱柱。气态样品可用六通阀或注射器进样。
3．固定液的必备条件：一般为高沸点的液体，室温时为固态和液态
（1）在操作温度下呈液体状态及蒸气压低，蒸气压低，固定液流失慢、柱寿命长、检测器本底低（2）对样品中各组分有足够的溶解能力，分配系数较大
（3）选择性能高，对两个沸点或性质相近的组分的分配系数比不相等
（4）与样品中的各组分不产生化学反应。
4．固定液选择的原则：
相似性原则：按被分离组分的极性或官能团与固定液相似的原则来选择，相似相溶的缘故
被分离药物为非极性的→非极性的固定液
被分离药物为极性的→极性的固定液
被分离药物为酯或醇→酯、聚酯或醇、聚乙二醇类固定液
难分离药物样品→按一定比例组成的混合液涂在载体
5．常用检测器种类：30多种，主要有：FID 、AFID、 NPD、 ECD、 MSD
第三节高效液相色普法
1．基本原理：混合物中各组分在固定相与流动相中的移动速度不同二相互分离。分析HPLC的分离分析质量，主要参数如保留值（tR）、相平衡参数(K)、分离度(R)、理论塔板数(n)。
2．保留值：
保留值：用来描述样品组分在色谱中保留程度的参数，是色谱的定性指标。可用保留时
间、保留体积、调整保留时间和调整保留体积来表示。
保留时间（tR ）：从进样开始到某组分的色谱峰顶点时时间间隔
保留体积(VR):从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大点时所需通过色谱柱的流动
体积
死时间t0：不保留组分（该组分不溶于固定相或不被固定相吸附）的保留时间，相对应
的流动相的体积为死体积V0
调整保留时间tR‘＝ tR－ t0和调整保留体积VR ‘＝ VR－V0
3，相平衡参数：在色谱洗脱过程中样品分子在流动相和固定相之间分配处于动力学平衡状态，这一平
衡可用平衡分配系数和容量因子表示。
4．分离度R：定量分析时要求定量峰与其他峰或内标峰有较好的分离度R,一般R >1.5，除另有规定。5．理论塔板数n
（1）色谱柱的理论塔板数n=5.54(t
R /w
h/2
)2或n=16(t
R
/w)，是柱效指标
（2）在选定条件下用供试品溶液或内标物溶液（规定项规定），测得理论板数n,如果n<规定的最小理论板数，应改变柱长、载体性能、色谱柱充填优劣，使n达到要求
（3） w
h/2
越小柱效越高。增加n来提高分离度，即使色谱峰变窄将两相邻峰分开
6．梯度洗脱：所谓梯度洗脱，具有两种或两种以上不同极性的溶剂在分离过程中按一定程序连续的改变，以改变流动相的配比和极性。
7．反相键合相色谱：在反相色谱中流动相得极性大于固定相得极性.洗脱次序为极性大得组分先洗脱,极性小得组分后洗脱
固定相—非极性键合相即键合相表面基团为非极性烃基,最常用得为十八烷基键合相(ODS键合相),但注意键合相的稳定性(pH2~7.5)及键合相的重现性
流动相:与一般液相色谱用流动相的要求一样。化学稳定性好,不与固定相发生化学反应; 必须与检测器相适应;对样品有适宜的溶解度; 粘度小,因为粘度小的溶剂可增加柱压并影响柱效。最广泛应用的流动相甲醇-水、乙睛-水、四氫呋喃-水
8．正相键合相色谱：正相键合相色谱中流动相的极性小于固定相的极性。洗脱次序为极性弱的先出峰,极性强的后出峰.正相键合相的分离机理有吸附合分配之分争,吸附过程是主要的相互作用。
正相键合相色谱中的固定相为极性键合固定相,主要是氨基、氰基键合相。
流动相:正相色谱流动相的选择原则和液-固色谱、薄层色谱的洗脱剂的选择大体相同,用非极性和弱极性的溶剂(如烃类溶剂)加入适量的极性溶剂(氯仿、醇、乙睛等,调节控制洗脱液的洗脱强度)。
9．离子对色谱：将离子对的液-液提取用于色谱中所形成的方法,即把与离子型化合物带相反电荷的反离子加到流动相系统,使与被测的组分形成电中性的离子产物而达到分离.这种方法称为离子对色谱,可分为正相离子对色谱和反相离子对色谱。反相离子对色谱在体内药物分析中应用广泛。
第四节高效毛细管电泳法
1．原理：以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品种各组分之间淌度和分配系数的不同而实现分离的一类液相分离技术
2．装置：一个高压电源、一根毛细管、一个检测器及两个供毛细管两端插入而又可和电源相连的缓冲液贮瓶。
3．主要分析参数：
（1）淌度与迁移时间
（2）电泳：荷电物质（离子）在电场中因受到吸引或排斥而引起的差速运动的现象
（3）理论塔板数与分离度
4．主要分离模式：
（1）毛细管区带电泳
（2）胶束电动毛细管色谱
（3）毛细管凝胶电泳
（4）毛细管等电聚焦
（5）毛细管等速电泳
（6）毛细管电色谱
5．高效毛细管电泳的柱技术
（1）动态修饰毛细管壁
（2）毛细管内壁表面涂层
（3）凝胶柱荷无胶筛分
（4）毛细管填充柱
第五章荧光分光光度法。
2．荧光法定量分析基本原理：，荧光是药物及代谢物等物质在吸收光能之后发射而出的，溶液的荧光强度和该溶液吸收光能的程度以及溶液中荧光物质的荧光量子效率有关。荧光强度与浓度呈线性关系，实际测定的是荧光强度--F=kC。
3．一般测定方法的建立：
标准曲线法：知量的标准物质和供试品进行相同处理后，配成一系列浓度不同的标准溶
液，在测定条件相同的情况下，分别测定其荧光强度。以标准溶液的浓度为横坐标，以相应的荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线。在相同条件下测定样品溶液的荧光强度，在标准曲线上求出样品溶液的浓度。
标准曲线制作方法：最大浓度的标准溶液做基础，强空白溶液的荧光强度读数调至0％
将该标准溶液的荧光强度的读数调至100％，然后测定标准系列中其他各个标准溶液的荧光强度
对照法：如果荧光的标准曲线通过零点，就可选择线性范围，用对照法进行测定。
第六章免疫分析
1．免疫分析基本原理：免疫反应的本质是特异性抗体与抗原的结合反应,抗原只有遇到相应的特异抗体才能发挥抗原抗体反应,形成抗原-抗体复合物.
抗原抗体的结合通常无法直接用肉眼看到结果,需要通过向反应系统中加入标记物来显示反应结果,在标记物不影响免疫反应“决定簇”的前提下,被标记的抗原或抗体仍能发生抗原抗体反应.由于抗原与
抗体(在生物药物分析中抗原相当于被测药物)结合时具有专一性和可饱和性,则可以利用被测药物(未标记抗原)与标记药物(标记抗原)之间竞争性地与抗体结合,建立药物浓度与响应值(RIA中为发射强度,FIA中为荧光强度)之间地函数关系,对生物样品地药物进行定量分析。
2．竞争抑制作用：若未标记抗原量增多则标记抗原-抗体复合物地形成就会因受到抑制而减少;体系中地特异抗体量是一定的,有一定饱和量的结合点,当未标记抗原占有的结合点(量)多时,标记抗原的结合点就会相应减少,且减少的程度与未标记抗原的量(浓度)有关.这种特异的竞争性抑制的数量关系就是免疫分析地定量基础。
第八章体内手性药物色谱分析
1．手性药物的专业术语与表示方法：
（1）手性药物的分子结构中含有n个手性中心,将产生2n个立体异构体,其中右2n-1个对映体,余者为非对映体.
（2）对于手性药物常用的表达方式:左旋体和右旋体(对映体之间光学活性的差异);D和L系统(以标准参照物的化学相关性来确定的);S和R系统(根据与手性中心连接的各取代基优先顺序决定的结构)
2．手性药物中对映体药效学差异
（1）对映体的药理作用相同
（2）对映体的药理作用不同
（3）一种具有治疗作用,另一种产生副作用
（4）两种对映体具有相同的治疗作用,其中一种产生副作用
（5）两种对映体作用互补
（6）一种具有药理活性,另一种无活性或活性很弱
3．手性药物中对映体药动学差异
（1）吸收:药物在体内吸收一般分为主动吸收和被动吸收,头孢氨苄在体内是主动吸收,口服后仅有R(+)体被吸收
（2）分布手性药物在体内立体选择性地与血浆蛋白/组织结合程度,将对药物动力学分布容积/总清除率等参数产生影响.
（3）代谢:手性药物在体内代谢过程具有立体选择性
（4）消除:手性药物在肾小球过滤过程中无立体选择性,但主动分泌过程中有立体选择性
4．手性药物拆分的意义
对于手性药物的安全和有效剂量方案的确定是很重要,采用药物分析方法测定生物体液中的手性药物,以评价其药理活性.药物动力学.毒理学等,会得出完全不同甚至错误的结论.以立体选择性方法
对单个对映体进行测定,研究其血药浓度与临床疗效间的关系,分别评价单个对映体的药理.毒理.
药物动力学和不良反应等.临床上服用消旋体药物后进行药物检测时,分别检测各对映体的血药浓度,如果只测定两个对映体的总浓度,不但失去临床指导意义,而且还可能对临床合理用药造成误导.
可见手性药物的立体选择性测定是必不可少的.
第九章色谱-质谱联用技术
色谱-质谱联用技术可以进行这样的工作,主要有以下几种:色谱-红外光谱\色谱-核磁共振谱\色谱-质谱联用.其中色谱-质谱联用在药学研究中发挥着重要作用
2．色谱-质谱联用仪
（1）色谱仪接口质谱仪电子系统记录系统计算机系统
（2）色谱仪与质谱仪的联机由接口连接,接口是色谱-质谱的关键部件
（3）接口的作用:除去流动相分子,浓集和气化样品,接口性能很大程度上决定着色谱-质谱联用仪的性能优劣.
体内药物分析习题
1、体内药物分析主要与哪几门学科关系密切？
2、RIA、FID、ECD、NPD、GC－MS、UV、GC、HPCE、NP-HPLC、RP-HPLC分别函指什么？
3、荧光分光光度法的猝灭作用及其影响因素
4、比较反相键合相色谱与正相键合相色谱
5、紫外－可见分光光度法的基本原理
6、体内药物分析的对象、任务及特点
7、如何处理生物样品中蛋白质？
8、体内药物分析方法设立与建立的一般步骤
9、内标物应具备的条件及选择原则
10、气相色谱仪的两个主要组成部分
11、体内药物分析最常用且易获得的分析样品是什么？
12、生物样品处理方法选择的一般原则
13、手性药物中对映体药效学差异主要表现哪六个方面？
14、气相色谱法中检测器有哪几种？
15、何谓抗原决定簇？
16、生物样品中待测组分浓集的必要性及浓集的两种方法
17、体内药物分析方法设立的主要依据
18、药物分子结构与荧光的关系
19、免疫分析法的基本原理
20、HPCE法的主要分离模式
答案
1、为人们提供药物在体内的更多信息即了解药物在体内的数量和质量的变化，获得药物代谢动力学的各种参数、药物在体内的生物转化、代谢的方式和途径等信息；为新药的研制、生产和临床应用等方面的研究作出科学估计和评价；为相关学科提供信息和手段如：药物动力学、生物药剂学、临床药物治疗学、临床药理学。
2、放射免疫分析、火焰离子化检测器、氮磷检测器、气相－质谱联用、紫外分光光度法、气相色谱法、高效毛细管电泳法、反相高效液相色谱法
3、由于荧光性分子相互碰撞以及与其它物质的作用，有时会显著地减弱荧光发射强度，这种现象叫荧光地猝灭作用。影响的因素：浓度猝灭、磁性离子猝灭、温度猝灭、溶剂的影响重原子效应
4、在反相色谱中流动相得极性大于固定相得极性.洗脱次序为极性大得组分先洗脱,极性小得组分后洗脱。
正相键合相色谱中流动相的极性小于固定相的极性。洗脱次序为极性弱的先出峰,极性强的后出峰.正相键合相的分离机理有吸附合分配之分争,吸附过程是主要的相互作用，正相键合相色谱中的固定相为极性键合固定相,主要是氨基、氰基键合相
5、物质对不同颜色的光能吸收是有选择性的，特定的物质主要吸收一定波长的光，物质吸收了高能量的光以后，就发生能级跃迁产生吸收光谱，该法的定量依据：Beer-Lamber即朗伯比耳定律：A=ECL。
6、体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物
任务：培养学生具有强烈的药品全面质量控制的观念，使学生通过各种现代分析技术手段，了解药物在体内的数量和质量的变化进行分析，获得药物动力学的各种参数，以及药物在体内的转变、代谢的方式、途径等信息运用分析手段.
特点：样品量少，不易重新获得
样品复杂，干扰杂质多
供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施。
实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作。
工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。需相关学科参与
7、去除蛋白质的方法
8、分析方法地设立与建立的一般步骤
以纯品进行测定
以处理过的空白样品进行
测定体内实际样品测定
测定回收率
以水代替空白样品添加标准品测定
以空白样品添加标准品测定
9、内标物是与被测物结构相近但不同的纯物质
内标物与被测药物只相差一个化学元素
内标物与被测药物为同系物
内标物与被测药物结构相似
内标物与被测药物结构不相似；但要求其理化性质必须与被测药物及其代谢物相似
选择内标物的基本原则：内标物应是试样中不存在的纯物质加入的量应该接近于被测组分不能不为色谱峰位于被测组分色谱峰附近，或几个被测组分色谱峰中间，并与这些组分完全分离
10、色谱柱与检测器是构成气相色谱仪的两个主要部分：
色谱柱由柱管和固定相组成，在气相色谱中起分离作用
检测器是将流出色谱柱的载气中被分离组分的浓度变化，转化为电信号变化的装置。
11、最常用的生物样品是较易得到的血样、唾液、尿液（特殊情况选用乳汁、泪液、脊髓液、胆汁、羊水、各种组织）
—其中的总浓度）
(唾液中药物浓度与血浆中药物浓度有一定的比值时才有意义)
12、一般根据药物的结构、物理性质、体内药物浓度大小、干扰成分的多少、样品的预处理方法、实验条件和目的等因素进行综合考虑，选择出可供生物样品中药物及其代谢物含量测定的分析方法。13、对映体的药理作用相同
14、作用：将流出色谱柱的载气中被分离组分的浓度变化，转化为电信号变化的装置。色谱柱与检测器是构成气相色谱仪的两个主要部分
种类：30多种，主要有：FID 、AFID、 NPD、 ECD、 MSD
15．
1）抗原决定簇是指抗原分子上的某些特征结构和官能团，它们决定了抗原刺激机体时所产生抗体的特异性
2）抗体与药物的特异性结合时针对分子上的抗原决定簇，并非整个药物分子
3）药物分子中有足够多的抗原决定簇，才能在相近结构的化合物中被抗体识别，产生特异性结合。4）绝大多数药物是小分子半抗原，其上的决定簇较少；有些合成药具有相同的母核或取代基为决定簇时得到的抗体专一性比较低。
16、浓集的必要性样品在提取过程中被测组分得到纯化但因微量的组分分布在较大体积的提取溶剂中，由于进样量的限制，被测组分量可能达不到检测灵敏度，故需将被测组分浓集后再测定
两种浓集方法：末次提取时加入提取液尽量少；挥去提取溶剂法
17、方法设计的主要依据：
1)明确分析方法的目的要求
2)、调研文献了解待测药物的特性
3)、仪器设备与实验室条件
18、药物及其代谢物在光照射下吸收紫外或可见光的能量，使外层电子由基态跃迁到较高能级的激发态。当处于激发态的电子又回到基态时，可将这部分能量以光子形式发射出而产生荧光。产生的荧光其能量比吸收光的能量小一些，所以荧光的波长比照射光的波长要较长一些。
药物必须具有一定的结构才能产生荧光，一般要求药物的分子中含有双键共轭体系刚性平面结构，在200～800nm波长范围内具有强吸收。但取代基的性质不同或取代基的位置发生变化时，其荧光强度也随之发生变化，一般规律如：
1）药物分子直接与斥电子基团
（－OH,-NH2,-OCH3）联接有利于荧光的发生，
与吸电子基团(-NO2,-Br,-I,-CN,-COOH)联接则使荧光减弱
2)药物分子结构中共轭体系增加双键，特别是多环芳香结构，可使荧光增加
3)药物具有可电离的具体联接在共轭系统上，则pH值的选择将影响测定的灵敏度和选择性，酚类电离成阴离子使荧光增强；芳胺成为芳香铵阳离子可抑制荧光发生。
4）药物分子结构中芳环杂原子（N、S、O属于斥电子基团）具有荧光性能，含有氨基-NH2的芳环在酸性介质中，由于N的质子化而使荧光强度增加。
19、抗原抗体的结合通常无法直接用肉眼看到结果，需要通过向反应系统中加入标记物来显示反应结果；
在标记物不影响免疫反应“决定簇”的前提下，被标记的抗原或抗体仍能发生抗原抗体反应
由于抗原与抗体(在生物药物分析中抗原相当于被测药物)结合时具有专一性和可饱和性，则可以利用被测药物(未标记抗原)与标记药物(标记抗原)之间竞争性地与抗体结合，
建立药物浓度与响应值(RIA中为发射强度，FIA中为荧光强度)之间地函数关系，对生物样品地药物进行定量分析。
20、主要分离模式有：
毛细管区带电泳
胶束电动毛细管色谱
毛细管凝胶电泳
毛细管等电聚焦
毛细管等速电泳
毛细管电色谱
《体内药物分析》第04章在线测试 《体内药物分析》第04章在线测试剩余时间：53:57 答题须知：1、本卷满分20分。 2、答完题后，请一定要单击下面的“交卷”按钮交卷，否则无法记录本试卷的成绩。 3、在交卷之前，不要刷新本网页，否则你的答题结果将会被清空。 第一题、单项选择题（每题1分，5道题共5分） 1、比色法虽具有快速简便、对仪器要求不高等特点。但灵敏度不高， A、只能测定出10ug/ml浓度以上的样品 B、只能测定出1ug/ml浓度以上的样品 C、只能测定出5ug/ml浓度以上的样品 D、只能测定出ml浓度以上的样品 2、荧光分光光度法的灵敏度可达 A、1g/ml B、1pg/ml C、1ng/ml D、1mg/ml 3、虽具有荧光的物质数量不多但体内许多重要的生化物质、药物及其代谢物或致癌物都有荧光现象。由于荧光衍生物试剂的使用，扩大了( )在体内药物分析和药物动力学的应用。 A、荧光分光光度法 B、紫外分光光度法 C、红外分光光度法 D、可见分光光度法 4、在规定条件下同一个均匀样品，经过多次取样测定所得结果彼此接近的程度 A、精密度 B、专属性 C、检测限 D、准确度 5、多种组分共存时，分析方法能准确测定出被测物的能力 A、精密度 B、准确度 C、检测限 D、专属性 第二题、多项选择题（每题2分，5道题共10分） 1、光谱分析法约占应用血药浓度测定方法总数的1/3，主要有 A、比色法 B、紫外分光光度法
C、荧光分光光度法 D、远红外分光光度法 E、免疫分析法 2、由于受到体液中内源性杂质的干扰和影响。故紫外分光光度法在体内药物分析中也受到（）的限制。 A、灵敏度 B、准确度 C、专一性 D、精密度 E、回收率 3、紫外分光光度法常采用( )，可以提高方法的灵敏度和选择性。 A、三波长分光光度法 B、差示分光光度法 C、导数分光光度法、 D、双波长 E、红外分光光度法 4、常用相关系数r表示两种分析方法 A、相关系数r表示r＝0表示两法完全不相干 B、一般要求两法的相关系数r≥，两法基本相干， C、相关系数r＝1两法完全吻合 D、相关系数r越接近1说明两种方法越相关 E、没有可比性 5、体内药物分析方法设立与建立的一般步骤 A、以纯品进行测定 B、以处理过的空白样品进行测定
体内药物分析文献 生物制药二班姓名： 学号：11610209
《体内药物分析》的重要性 王英明 【关键词】体内药物分析；重要性 【摘要】本文从必备的相关学科的基础知识讲授开设《体内药物分析》的重要性，讨论了本专业《体内药物分析》的教学内容以及在学习过程中的体会与总结。 【关键词】体内药物分析；重要性 体内药物分析是由药物分析派生出来的一门研究生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的质与量的变化规律的新兴学科［1，2］。随着生命科学的发展，生物医药学及临床药学的兴起，特别是药物动力学的深入研究，使“给药方案个体化”、“治疗药物监测”的工作越来越重要，体内药物分析学科亦应运而生，经过二十余年的发展，现已成为药学前沿最活跃的领域之一。这学期我院也开设了《体内药物分析》选修课，现就此谈一点看法与体会［3］。 1 为什么要进行体内药物分析? 1.1 可以选择最佳的给药剂量与给药方案，做到合理用药以往临床上对同种疾病患者，给予同样剂量的药物，可是治疗效果却差别很大。例如对癫痫发作患者施以同样剂量苯妥英钠治疗，过去认为每日300mg可以控制症状，而实际却不然。有人观察了200例，结果能控制发作者占28.5%,测得血药浓度为10～20mg/L;无治疗效果者占60%,测得血药浓度20mg/L。这就说明不能简单地依据表观剂量来推算机体的效应。要保证药物安全、有效，必须对患者体液、尤其是血液中药物含量进行测定。根据药物动力学和药效学的研究表明:机体对药物的反应与作用部位药物浓度有关。所以根据个体病人的体液药物浓度监测后，制订给药方案是合理的。对治疗指数小的药物，如地高辛、奎尼丁、利多卡因等，治疗血药浓度范围狭小，与中毒浓度又相当接近，对肝肾功能不全病人的用药更有必要。因此，近年来国外已开展“给药方案个体化”、“治疗药物监测”工作。 1.2 有利于阐明药物作用机制某种药物或其制剂在体内行为即吸收、分布、代谢及排泄等过程，过去医师与药师主要靠自己的临床经验估计，而现代药学研究，通过测定药物的各种动力学参数，如血药浓度-时间曲线下面积(area under the curve)、生物半衰期(biologic half-life),清除率(clearance)、生物利用度(bioavailability)等来阐明药物作用机制;新药设计也要了解该药物在体内转运过程、作用原理和药物动力学的有关参数。故研究药物动力学的最基本手段之一，就是进行体内药物分析。 1.3 药物管理问题目前，药品普遍存在严重滥用现象，而且会造成社会不良影响(如吸毒、运动员滥用药物等)。此外药物中毒也时有发生，这些也需要进行体内药物分析，尔后进行治疗。许多国家药典已将生物利用度作为评价药物质量的重要内容和依据。而生物利用度的研究也离不开体内药物分析所提供的数据和信息。 2 体内药物分析的作用及特点
第二章生物样品与样品制备 1.体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物 2．体内药物分析的特点：样品量少，不易重新获得；样品复杂，干扰杂质多；供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施；实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作；工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。需相关学科参与。 3．体内药物分析样品的种类：最常用且易获得的分析样品有：血样、尿样、唾液和粪便。 特殊情况下：乳汁、泪液、脊髓液、胆汁、羊水、各种组织 4．血清：血清是由血液中纤维蛋白原等的影响引起血液凝结而析出的澄清黄色液体，约为全血的30％～50％ 5．尿液：尿液的主要成分：水、含氮化合物、盐类；体内药物清除主要通过尿液排出，药物以其原型或代谢物及其缀合物等形式排出；尿药测定主要用于药物剂量回收、尿清除率、生物利用度、药物代谢率的研究，并可推断患者是否按医嘱用药。 6．生物样品分析的前处理：是指测定生物样品中的药物及其代谢物时，对样品进行分离、纯化、浓集，必要时对待测组分进行衍生化，为测定创造良好的条件。 7．为何进行前处理？ 1）药物进入体内除原药外还有多种形式存在 2）生物样品的介质组成比较复杂，尤其蛋白质严重影响分离效果，必须进行前处理 3）除去介质中含有的大量内源性物质等杂质，提取出低浓度的被测药物，同时浓集药物或代谢物的浓度，使其在所用分析技术的检测范围内。 8．生物样品处理方法选择的一般原则：待测药物的理化性质；待测药物测定的目的与浓度范围。9．去除蛋白质的方法：加与水相混溶的有机溶剂；加入中性盐；加入强酸；加入含锌盐及铜盐的沉淀剂；酶解法。 10．生物样品的分析由两步组成：样品的前处理（分离、纯化与浓集）和对提取物的仪器分析；提取法是应用最多的分离、纯化方法；提取的目的：从大量共存物中分离出所需要的微量组分药物及其代谢物，并通过溶剂的蒸发使样品得到浓集，以供测定；提取法分为液-液提取法和液-固提取法。11．提取溶剂的选择：对被测组分的溶解度大，沸点低，易于浓集、挥散，与水不相混溶，无毒、化学稳定、不易乳化；最常用的溶剂是乙醚和氯仿。 12．被测组分的浓集：样品在提取过程中被测组分得到纯化但因微量的组分分布在较大体积的提取溶剂中，由于进样量的限制，被测组分量可能达不到检测灵敏度，故需将被测组分浓集后再测定；两种浓集方法：末次提取时加入提取液尽量少；挥去提取溶剂法。 13．分离前将药物进行衍生化的目的：使药物变成具有能分离的性质；提高检测的灵敏度；增强药物的稳定性；提高对光学异构体分离的能力；GC 中的化学衍生化和HPLC中的化学衍生化。
体内药物分析方法进展 摘要】体内药物分析是药物分析的重要分支，能获得药物在体内的各种信息。 随着近年的科技进步，体内药物分析发展迅速，更快速、更高灵敏度、更高选择性、更高自动化的分析方法已成为今后体内药物分析发展的新方向。通过查阅文献，本文综述了体内药物分析方法的进展。 【关键词】体内药物分析色谱法毛细管电泳法免疫分析联用 体内药物分析是药物分析的重要分支，是一门研究生物机体中药物及其代谢 物和内源性物质的质与量变化规律的分析方法学[1]。体内药物分析借助于现代化 的仪器与技术来分析药物在体内数量与质量的变化，以获得药物在体内的各种信息，有助于从生产、研究、临床使用等方面对药物作出估计与评价，从而改进和 发展[2]。目前，应用于体内药物分析的方法有很多，归纳起来主要有以下几类： 1 色谱法 色谱(Chromatography )技术具备分离和分析的双重功能，且有很高的选择性 和灵敏度，可同时分析结构相似的药物和代谢物等，一直是研究体内药物及其代 谢物最强有力的手段。色谱法可分为薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高效液 相色谱法(HPLC)等。其中以高效液相色谱法最为常用，特别是反相高效液相色谱法，现已成为体内药物分析方法中最重要的方法，并常作为体内药物分析中评价 其它方法的参比方法。 1.1 柱切换技术 柱切换技术(column switching, CS)是指用阀来改变流动相走向和流动相系统， 从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱进入到分析柱的在线固相分离技术。CS 技术具有以下优点：(1)分辨率和选择性高；(2)使待测组分富集，灵敏度高；(3)在一个色谱网络系统中实现多个分离目标；(4)可在线衍生化，灵敏度高和重现性好； (5)在线纯化样品，使预处理过程自动化。CS技术近年来发展迅速，已广泛应用于体内药物分析。 1.2 手性色谱技术 为了评价药物对映体的生物学活性，检查其光学纯度，近年来药物对映体测 定技术尤其是拆分和定量方法有了迅速发展。测定药物对映体的方法有直接法和 间接法，在体内药物分析中，待测药物浓度很低，一般采用直接法（即在色谱中 运用手性固定相或手性流动相添加剂）进行测定。目前，在药物分析领域中应用 较为广泛的手性固定相主要有环糊精手性固定相、蛋白质手性固定相及Pirkle型 手性固定相。常用的手性流动相添加剂有手性蛋白、环糊精手性试剂、手性冠醚等。 1.3 超临界流体色谱 超临界流体色谱法是以超临界流体为流动相的新型色谱技术。超临界流体是 指物质在高于其临界温度和临界压力时的一种物质形态，此物态的物质兼有气体 的低粘度、液体的高密度以及介于气液之间的扩散系数等特征。CO2是一个较理 想的流动相，在SFC中应用最为广泛。 1.3.1 色谱-质谱联用技术 色谱与质谱的联用是应用于药物分析中最为活跃的技术，能够使样品的分离、定性、定量一次完成。目前，色谱-质谱联用技术主要包括气相色谱-质谱(GC-MS) 联用和液相色谱-质谱(LC-MS)联用。文红梅等[3]用LC/ESI/TOF/MS测定了环维黄杨星D在Beagle犬血浆中的浓度，对环维黄杨星D在犬体内的药动学进行了研究。
SPE：固相萃取 (Solid Phase Extraction，SPE) 就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。 1、简述体内药物分析的对象及特点 体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物 特点：（1）样品量少，不易重新获得 （2）样品复杂，干扰杂质多 （3）供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施。 （4）实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作。 （5）工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。需相关学科参与. 2、简述血浆中游离型药物浓度测定的方法？ 平衡透析法、超滤法(UF)、超速离心法和凝胶过滤法 3、常见的生物样品有哪些？简述常用的去除蛋白质的方法？ 常见的生物样品有：血液，尿液，唾液，组织，毛发。 去除蛋白质的方法：（1）加入与水相混溶的有机溶剂加入水溶性的有机溶剂；可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，使与蛋白质结合的药物释放出来。常用的水溶性有机溶剂有：乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃等。（2）加入中性盐加入中性盐，使溶液的离子强度发生变化。中性盐能将与蛋白质水合的水置换出来，从而使蛋白质脱水而沉淀。常用的中性盐有：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐等。（3）加入强酸当pH低于蛋白质的等电点时，蛋白质以阳离子形式存在。此时加入强酸，可与蛋白质阳离子形成不溶住盐而沉淀。常用的强酸有：10％三氯醋酸、6％高氯酸、硫酸-钨酸混合液及5％偏磷酸等。（4）加入含锌盐及铜盐的沉淀剂当pH高于蛋白质的等电点时，金属阳离子与蛋白质分子中带阴电荷的羧基形成不溶性盐而沉淀。常用的沉淀剂有CuSO4-NaWO4、ZnSO4-NaOH等（5）酶解法在测定一些酸不稳定及蛋白结合牢的药物时，常需用酶解法。最常用的酶是蛋白水解酶中的枯草菌溶素。 4，生物样品预处理的目的是什么？应考虑哪些问题？ 目的：（1）使药物从缀合物及结合物中释放。（2）纯化与富集样品（3）满足测定方法对分析样品的要求。（4）保护仪器性能，改善分析条件 主要应考虑下列问题：（1）生物样品的种类（2）被测定药物的结构、理化及药理性质、存在形式、浓度范围（3）药物测定的目的（4）样品预处理与分析技术的关系 5，用液液萃取发提取生物样品中的药物时，应考虑那些影响因素？ 要考虑所选有机溶剂的特性、有机溶剂相和水相的体积及水相的pH值等。 对所选用的有机溶剂，要求对被测组分的溶解度大：沸点低，易于浓集、挥散；与水不相混溶以及无毒、化学稳定、不易乳化等。最常用的溶剂是乙醚和氯仿等。提取时所用的有机溶剂要适量。一般有机相与水相（体液样品）容积比为1：1或2：1。根据被测药物的性质及方法需要，可从实验中考察其用量与测定响应之间的关系，来确定有机溶剂的最佳用量。PH 的影响在溶剂提取中十分重要。水相的pH随药物的理化性质的不同而异，但生物样品一般多在碱性下提取。这是因为多数药物是亲脂性的碱性物质，而生物样品中的内源性物质多是酸性的，一般不含脂溶性碱性物质，所以在碱性下用有机溶剂提取时内源性杂质不会被提取出来。 6，固相萃取法的洗脱方式有哪两种？以亲脂性固相萃取柱为例，简述操作过程。 一种是药物比干扰物质与固定相之间的亲和力更强，因而在用冲洗溶剂洗去干扰物时药物被保留，然后用一种对药物亲和力更强的溶剂洗脱药物。另一种干扰物质较药物与固定相之间
1.简述采用紫外分光光度法鉴别药物时常用的方法，以及薄层色谱法检查药物中特殊杂质的方法。 答: 1)测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长 2)规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度 3）规定吸收波长和吸收系数法 4）规定吸收波长和吸收度比值法 5）经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性 1）杂质对照品法 2）供试品溶液自身稀释对照法 3）杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法 4）对照药物法 2.试述古蔡法测砷原理。操作中为何要加碘化钾试液和酸性氯化亚锡试液？醋酸铅棉花起什么作用？ 答:1)原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢与药物中微量的砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准溶液所生成的砷斑比较，判断供试品中重金属是否符合限量规定。 2)五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢，但生成的砷化氢的速度较三价砷慢，故反应中加入碘化钾及氯化亚锡将五价砷还原为三价砷，碘化钾被氢化生成的碘又可被氯化亚锡还原为碘离子，后者与反应中产生的锌离子能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应进行，还可抑制锑化氢的生成，因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑。 3)锌粒及供试品种可能含少量硫化物，在酸性液中能产生硫化氢气体，与溴化汞作用生成硫化汞的色斑，干扰试验结果，故用醋酸铅棉花吸收硫化氢 3.简述薄层色谱法检查药物中的杂质，可采用高低浓度对比法检查，何为高低浓度对比法？答: 先配制一定浓度的供试品溶液，然后将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液，将供试品溶液和对照溶液分别点样于同一薄层板上，展开、斑点定位。供试品溶液所显示杂质斑点与自身稀释对照品溶液或系列浓度自身稀释对照溶液的相应主斑点比较，不得更深。 4.药物分析在药品的质量控制中担任着主要的任务是什么？ 答: 保证人们用药安全、合理、有效，完成药品质量监督工作。 5.常见的药品标准主要有哪些，各有何特点？ 答: 国家药品标准(药典)；临床研究用药质量标准；暂行或试行药品标准；企业标准。 6.药品检验工作的基本程序是什么？ 答: 取样、检验(鉴别、检查、含量测定)、记录和报告。 7.简述RPHPLC法测定有机含氮类药物时色谱峰拖尾的原因，以及克服的措施。 一、造成色谱峰( 不对称)拖尾的原因 1.色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷; 2.柱头有污染;
学科介绍 基本概念 体内药物浓度，尤其是血浆（或血清）药物浓度直接与药效相关，并受多种因素影响。例如，不同给药途径（如口服、吸人、静脉注射、肌肉注射、透皮等）可直接影响药物的吸收、分布、代谢和排泄，从而影响体内药物的浓度以及经时行为，并最终影响疗效。患者的生理因素（性别、年龄等），病理状态（疾病的类型和程度），基因类型，吸收、代谢及分泌排泄功能，都影响药物在体内的经时行为。许多药物需经肝脏代谢或经肾脏排泄，所以对于肝或肾病患者，由于他们的肝脏生物转化及代谢功能降低、或肾脏的分泌排泄功能降低，往往会造成药物在体内蓄积，进而发生药物毒性反应。 随着现代医学的不断进步，人们对医疗质量也提出了更高的要求。治疗药物监测（Therapeutic Drug Monitoring，TDM）就是以灵敏可靠的方法，检测病人在给药后的血液或其他体液中的药物浓度，并应用药物代谢动力学理论，指导最适个体化用药方案的制定和调整，以避免用药剂量过大及可能产生的毒性反应，保证药物治疗的有效性和安全性。 学科特点 体内药物分析的特点是样品成分复杂，被测组分含量低。 学科关联 体内药物分析学科发展的最大推动力来自于生物医学及新药药物动力学研究领域巨大的要求和分析技术上的飞跃性进步。与药代动力学、临床药理学和生物药剂学等学科互相关联、密不可分。 分析方法 光谱分析法 包括比色法(colorimetry)、紫外分光光度法（UV ）和荧光分析法（Fluor ）。光谱法虽然仪器简单、测定快速，但选择性和灵敏度都较低，本法不具备分离功能，受结构相近的其他药物、代谢产物和内源性杂质的干扰，因此用光谱法分析体液样品时，除少数样品外，一般都需经过组分分离、纯化等预处理过程。光谱法的灵敏度低，不适用于测定药物浓度低的生物样品。 色谱分析法
体内药物分析的方法和重要性
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浙江大学远程教育学院 本科生毕业论文（设计）开题报告题目体内药物分析的方法和重要性 专业药学 学习中心衢州 姓名袁奕艺学号710013222002指导教师周新高 2012 年03月24日
一、文献综述 体内药物分析是指通过分析手段了解药物在体内的数量和质量的变化，获得药物动力学的各种参数，以及药物在体内转变、代谢的方式、途径等信息。从而为药物的生产、医疗临床、实验研究等方面对所研究的药物做出估计与评价，对药物改进和发展做出贡献。随着体内药物分析的深入，必将对药物和人的内在关系作出更准确的表达和描述。 体内药物分析的首要任务是为临床药学和临床实际工作提供分析数据，这就决定了其独特的分析方法。1样品必须净化。供分析的样品来自不同生物体，组成复杂，干扰物质多。如体液和组织中的内源性物质的成分可以与药物结合，且干扰测定。因此测定前需进行不同程度分离、纯化，方可进行测定。2样品浓缩。一般而言，能供分析的样品量较少，其中所含药物及其衍生物的量更少，实际进行的是微量分析，另外，样品不易重新获得，所以经进化后的样品还应进行必要浓缩。3方法简便、快速和准确。样品若是临床药物浓度监测的分析，由于工作量大，故分析方法越简单越好；若为有关科研提供数据，则要准确性高；若与中毒解救有关，则要求越迅速越佳。4还需有一定为检测服务的仪器设备。总之体内药物分析的首要是适合体内样品中药物的灵敏性高、选择性好、准确可靠地分析方法。 生物样品经过适当的前处理后，选择合适的方法进行定性定量分析。常用的体内药物分析方法包括：色谱法、各种联用技术、免疫分析法、光谱分析法、放射性核素标记法和微生物法等，其中色谱法和色—质联用技术是体内药物分析的最常用方法。1色谱法包括高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、薄层色谱法等，是分析混合组分最有效的方法，尤其是当色谱与质谱、色谱与核磁共振波谱联用时，更显示出其强大的分离分析、定性定量的功能。与其他方法相比，色谱法具有准确、精密、灵敏、专属、适用范围广等优点，常用作评价其他体内药物分析方法的参比方法。2免疫分析的基本原理是抗原—抗体结合反应，利用标记抗原与未标记抗原（被测物）与一定量抗体的竞争抑制作用的数量关系，来测定体内药物的含量。该法包括放射免疫分析、酶免疫分析、荧光免疫分析、化学发光免疫分析，时间分辨荧光免疫分析等，具有灵敏度高、专属性较强、操作简便、快速等优点。3光谱分析法是体内药物分析中应用较早的一种方法，主要包括比色法，紫外分光光度法和荧光分光光度法。比色法灵敏度不高，但具有快速、简便、对仪器要求不高等特点。只要采用具有选择性的显色剂和反应条件，可不经分离提取等步骤，直接用于血药浓度监测和人群代谢分型研究。4放射性核素标记法是利用放射性核素标记药物与其他分析方法相结合而建立起来的一种分析方法。根据生物样品中被测物的放射性强度测定体内药物浓度。该法具有灵敏度高、方法简便、定位定量准确等特点。微生物测定法主要用于抗生素类药物的测定，在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性，具有灵敏度高、供试品用量少等特点。体内药物分析方法的建立是体内药物分析的首要任务，如何建立一个分析方法，建立的方法是否能应用于实际生物样品的测定这是从事体内药物分析研究工作必须要解决的问题，应根据药物的结构、理化性质、体内药物浓度大小、干扰成分的多少、样品的预处理方法、分析目的等因素，结合各种分析方法的特点和实验现有条件进行综合考虑。 药品质量的优劣、使用是否合理以及使用后是否安全有效，最终是以临床征象和实际疗效决定。体内药物分析的开展对于药品质量管理、药物的临床应用和
体内药物分析试题及答案 一、A1 1、下列哪一步是体内药物分析中最难、最繁琐，但最重要的一个环节 A、样品的采集 B、样品的贮存 C、样品的制备 D、样品的分析 E、蛋白质的去除 2、体内药物分析最常用的检测方法不包括 A、HPLC法 B、酶免疫分析法 C、毛细管电泳法 D、放射免疫分析法 E、紫外分光光度法 3、体内药物分析特点描述不相符的 A、体内药物分析影响因素少 B、样品复杂，干扰物质多 C、样品量少，药物浓度低 D、工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易 E、样品在测定前需要对样品进行前处理 4、可用“相对标准差”表示的是 A、精密度 B、定量下限 C、专属性 D、准确度 E、线性 5、在生物样品测定方法的基本要求中，质控样品的批内和批间相对标准差一般应小于 A、10% B、15% C、30% D、80% E、90% 6、下列关于生物样品最低定量限说法正确的是 A、要求至少要满足测定2个半衰期时样品中的药物浓度 B、是仪器能够测定样品的最低浓度点 C、要求满足测定C max的1／10～1／20时的药物浓度 D、应有至少2个样品测试结果证明 E、其准确度应在真是浓度的85%～115%范围内
7、在考察生物样品的测定方法时，建立标准曲线至少用几个浓度 A、3个 B、4个 C、5个 D、6个 E、10个 8、用于建立标准曲线，每一浓度每批至少测定 A、2个样品 B、3个样品 C、4个样品 D、5个样品 E、6个样品 二、B 1、A.＜15% B.85%～115% C.80%～120% D.＜20% E.100% <1> 、生物样品测定方法要求，质控样品测定结果在定量下限附近相对标准差应 A B C D E <2> 、生物样品测定方法要求，质控样品测定结果的相对标准差一般应 A B C D E 答案部分 一、A1 1、 【正确答案】 C 【答案解析】由于生物样品非常复杂，测定生物样品中的药物及其代谢物时，样品的前处理十分重要，包括分离、纯化、浓集，必要时还要进行化学衍生化。 【该题针对“生物样品前处理方法”知识点进行考核】 【答疑编号101081555,点击提问】 2、 【正确答案】 E 【答案解析】体内药物分析常用的检测方法有：(1)色谱法：HPLC法、GC法及其联用技术；(2)毛细管电泳法及其联用技术；(3)免疫分析法(IA)：该法是以特性抗原一抗体反应为基础的分析方法，常用放射免疫分析法(RIA)、酶免疫分析法(EIA)、荧光免疫分析法(FIA)。 【该题针对“生物样品测定方法的基本要求”知识点进行考核】 【答疑编号101081554,点击提问】 3、 【正确答案】 A 【答案解析】体内药物分析的特点：①样品复杂，干扰物质多，样品中除含有被测的药物和代谢物外，还含有内源性物质(如蛋白质、脂质、无机盐、色素等)和外源性物质(如共存药物)，这些物质可干扰药物的测定，所以在测定前需要对样品进行前处理；②样品量少，药物浓度低，提取分离之后，常需要对样品进行浓缩，同时要求所采用的分析方法具有较高的灵敏度和专属性；③工作量大，测定数据的处理和阐明
《体内药物分析》第05章在线测试 第一题、单项选择题（每题1分，5道题共5分） 1、紫外吸收-可见光谱的光区: C A、200 B、400nm C、200nm D、300nm 2、气相色谱法中各组分将按分配系数大小顺序，依次被载气带出色谱柱（ A） A、分配系数小的组分先流出；分配系数大的后流出 B、分配系数小的组分后流出；分配系数大的先流出 C、极性小的组分先流出；极性大的后流出 D、极性小的组分后流出；极性大的先流出 3、所谓梯度洗脱是指（ D） A、流动相与固定液的比例可以改变流动相的极性及配比 B、被测组分以不同浓度梯度进样 C、配制被测组分溶液的溶剂的梯度浓度 D、具有两种或两种以上不同极性的溶剂在分离过程中按越大程序连续的改变以改变流动相的配比及极性 4、保留时间用（A ）表示 A、tR B、VR C、n D、R 5、HPCE的分析时间一般不会超过（ A） A、30min B、30s C、60min D、90min 第二题、多项选择题（每题2分，5道题共10分） 1、气相色谱法中固定液必备的条件(ABCD ) A、对样品中各组分有足够的溶解能力 B、在操作温度下呈液态及蒸气压低 C、选择性好 D、与样品中各组分不发生任何化学反应 2、40反相键合相色谱的流动相和一般液相色谱用流动相的要求一样：（ ABCDE） A、化学稳定性好 B、不与固定相发生化学反应 C、对样品有适宜的溶解度
D、与检测器相适应 E、粘度小 3、毛细管是高效毛细管电泳仪的核心部件，目前常用下列（ABCD ）方法来控制、减少电渗流及消除吸附。 A、动态修饰毛细管壁 B、毛细管内壁 C、采用凝胶柱和无胶筛分 D、采用毛细管填充柱 4、下列说法正确的是（ABCD ） A、电动进样不如流体力学进样的重现性好 B、电动进样比流体力学进样操作简单 C、当毛细管在有黏性介质或凝胶时，无法采用流体力学进样，只能采用电动进样。 D、流体力学进样与电动进样都不是用体积来表示定量参数 E、在毛细管中当样品超载时，对分离度有利，会使峰变窄甚至使峰形绝对好看。 5、HPCE仪主要包括（ ABCD） A、一个高压电源 B、一根毛细管 C、一个检测器 D、缓冲液贮瓶 第三题、判断题（每题1分，5道题共5分） 1、紫外－可见分光光度法可以达到pg/ml水平 错误 2、气相色谱法要求被测药物及其代谢物必须具有一定的挥发性和热稳定性 正确 3、气相色谱法的基本原理为被测样品中各组分在固定相与载气间的分配系数不同而被分离 正确 4、高效毛细管电泳的英文简称为HPEC 错误 5、色谱－质谱联用技术不仅能将药物与代谢物进行分离，还能对代谢产物进行结构分析。
原料药分析方法开发流程 分析方法在药物的研发过程中起到的就是“灯塔”的作用,就是原料药及制剂开发、质量控制的标尺及眼睛,因此分析方法在药物开发过程中起到了领航员的作用。下面简单的介绍一下原料药分析方法的开发流程。 原料药的分析方法开发一般分为两大部分:1、起始物料的分析方法开发;2、中间体及API的分析方法开发。按照正常的逻辑顺序,应该就是起始物料的分析方法开发先行,但就是一般在实际操作过程中,往往就是中间体及API的分析方法先行开发。主要就是因为,在打通工艺路线时期或者就是文献调研的阶段,主要就是针对中间体及API的分析方法的工作。只有在工艺优化的中期或者中后期,对起始物料厂家基本选定时才会有针对性的启动起始物料的分析方法开发工作。虽然如此,考虑到逻辑顺序,还就是按照起始物料、中间体、API这样的顺序进行逐一介绍。 3、分析方法的开发
二、中间体 中间体分为过程控制及质量控制,过程控制主要监控反应进行的程度,质量控制就是制定中间体的中控标准。 1、过程控制方法 1)过程控制方法的开发 根究反应液的具体情况以及涉及物料自身的性质,中间体的过程控制方法可以选择TLC 或者HPLC的手段进行控制。一般在反应过程中主要关心的就是原料的剩余及产物的生成情况,所以确保在原料及产物峰周围没有干扰。如果有需要特殊关注的杂质,也需确保杂质的分离度、峰纯度等。
2)过程控制方法的验证 如果过程控制的方法只就是定性的检测,在方法验证时一般只需进行:专属性、检测限、耐用性等方面的验证工作。如果涉及定量检测的方法,则需要进行全面的分析方法验证工作。 2、质量控制方法 1)质量控制方法的开发 对中间体的质量控制,一方面根据工艺优化的结果制定质量控制的限度,另一方面需要根据API质量的要求对中间体所涉及杂质的限度进行定量的控制。当然,质量控制方面不只就是杂质限度的控制,如果接下来的反应就是无水反应,上一步的中间体依然需要对水分的限度进行严格的控制。 中间体的制备过程中,也会涉及GTI、手性杂质及重金属等杂质的研究。一般情况,此类杂质最好放在中间体的质量标准中进行,如果控制有难度或者在之后的反应过程中仍然会又引入及生成,放在之后的步骤控制或者API控制均可。 2)质量控制方法的验证 一般情况下,中间体的质量控制均会涉及杂质的定量检测,因此中间体质控方法的验证均需要按照定量检测的方法进行全面的分析方法验证工作。 三、API 同起始物料分析方法开发基本一致,在API分析方法的开发前期,首先需要进行有关化合物或者相似化合物分析方法的调研工作,其次进行杂质的分析工作。针对不同类型的杂质选择有针对性的文献报道的方法为方法开发的基础,结合工艺本身,对分析方法进行逐步的优化。有关物质的制定,可以根据靠近终反应步骤的杂质谱以及最后一步反应的杂质体系进行制定。 溶剂残留的制定需要结合起始物料所涉及的溶剂,如果有与起始物料有差异的溶剂,那么差异溶剂需要在起始物料中进行控制;若能包含起始物料所涉及溶剂,可以将所用溶剂在终产品中进行控制,起始物料中只需进行干燥失重的检测。同时,还需要关注一些潜在的溶剂,例如:反应中涉及苯的衍生物,也需要关注苯的残留控制等。 3、分析方法的开发 根据不同的杂质种类,API的分析方法涉及到普通杂质、手性杂质、残留溶剂、基因毒性杂质、重金属等。 普通杂质:一般采用HPLC法,在进行分析方法开发之前,首先要进行充分的文献调研工作,查询各国药典标准、文献、专利中就是否收载了相同或同类化合物,以此为基础进行分析
体内药物分析 体内药物分析是通过分析的手段了解药物在体内（包括实验动物等机体）数量与质量的变化，获得各种药物代谢动力学的各种参数和转变、代谢的方式、途径等信息。从而有助于药物生产、实验、研究、临床等各个方面对所研究的药物作出估计与评价，以及对药物的改进和发展作出贡献。 体内药物分析任务和对象的特点： 1、被测定的药物和代谢物的浓度或活性极低； 2、样品中存在各种直接或间接影响测定结果的物质，大多需要分离和净化； 3、样品量少，尤其是连续测定时，很难再度获得完全相同的样品； 4、工作量较大，随着工作的深入开展，会成倍地甚或按指数级数增加； 5、往往要求很快地提供结果，尤其在毒物检测工作中； 6、实验室应有多种检测手段，可进行多项分析工作； 7、测定数据的处理和阐明有时不太容易。 样品的种类、采集和储存 一、样品的种类和选取原则：（一）血样：血浆(plasma)和血清(serum)是体内药物分析最常采用的样本，其中选用最多的是血浆。因血浆中的药浓可反映药物在体内（靶器管）的状况。而且血浆中药物浓度的数据报道较多，可供借鉴。血浆是全血(whole blood)在加肝素、枸橼酸、草酸盐等抗凝剂的全血经离心后分取，量约为全血的一半。血清则是在血液中纤维蛋白元等影响下，引起析出血块，离心取得。血块凝结时往往易造成药物吸附损失。全血也应加入抗凝剂混匀，以防凝血。对大多数药物来说血浆浓度与红细胞中的浓度成正比，所以测定全血也不能提供更多的数据，而全血的净化较血浆与血清麻烦，尤其是溶血后，血色素等可能会给测定带来影响。但是一些可与红血球结合或药物在血浆和血球的分配比率因不同病人而异的情况下，则宜采用全血。血样采取量会受到一定的限制，血样取样时间间隔问题也常随测定目的不同而异。目前大都是测定原型药物总量。当药物与血清蛋白结合率稳定时，血药总浓度可以有效表示游离药物的浓度。但对低蛋白症或尿毒症患者，药物结合率降低，则在通常安全有效的血药总浓度中，游离型药物浓度可显著增加。 （二）尿样(urine)：尿样测定主要用于药物剂量回收研究、药物肾清除率和生物利用度等研究，以及测定代谢物类型等。体内药物清除主要是通过尿液排出，药物可以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物形式排出。尿液药物浓度较高，收集量可以很大，但尿液浓度通常变化较大，所以宜测定一定时间内尿中药物的总量（如8、12、24小时内的累计量），需记录排出尿液体积及尿药浓度。尿药浓度改变不直接反映血药浓度，受试者肾功能将影响药物的排泄。尿中药物大多呈缀合状态，测定前要将缀合的药物游离。此外，采集尿液不可能在较短时间内多次取样，排尿时间较难掌握（尤其是婴儿），同时也具有不易采集完全的缺点。（三）唾液(saliva)：唾液中的药物浓度通常与血浆浓度相关。样品易得，取样无损害，尤易为儿童接收。有些可从药物唾液浓度推定血浆中游离药物浓度。但有些蛋白结合率较高的药物在唾液中的浓度比血浆浓度低得多，需高灵敏度的方法才能检测。唾液pH值6.9±0.5，每日分泌量1～1.5L，含有的主要电解质有Na+、K+、Cl-、HCO3-等，主要有机成分是粘液质和淀粉酶。采样一般是在漱口后15分钟，收集口内自然流出或经舌在口内搅动后流出的混合唾液（吸管内吸附的少量唾液用稀释液洗出），用2000～3000rpm离心15分钟，小心吸取上清液，进一步分离、净化。也可采用物理（嚼石蜡片、小块聚四氟乙烯或玻璃大理石）或化学（酒石酸、维生素C）的方法刺激，在短时间内可得到大量唾液，但药浓也可能会受到影响。
概述第一部分 体内药物分析是对体内样本（包括生物体液、器官或组织）中的药体内药物分析是药代动力学研究代谢物或内源性物质的定量分析。物、）的重要手段。TDM和治疗药物监测（ 药物在临床前研究阶段，首先在试验动物体内进行药代动力学和毒要对药物作用于人体的安全性与有效代动力学研究；在临床研究阶段，性作出评价。这些研究中，建立有效的体内药物分析方法是首要任务。TDM随着现代医学的不断进步，精准医疗和个体化治疗成为新的理念。指导个体化用药就是采用灵敏可靠的方法，检测患者体内的药物浓度，方案的制定，保证用药的有效性与安全性。另外，监测和研究体内内源对于某些疾病的诊断及治疗具有重要意义；对于麻性物质的浓度变化，也必须依醉药品和精神药品滥用的检测和运动员体内违禁药物的监测，据体内药物分析手段和技术才能完成。 药物产生药理作用的强度与其在体内作用部位（受体组织）的浓度直接相关，而药物在体内主要依靠血液输送至作用部位，因此血药浓度即血液是体内药物分析的主要可作为药物在作用部位浓度的表观指标，样品。另外，尿液、唾液、头发和脏器组织等也可作为体内样品。药物它们在体内的变化规律在体内的某些代谢产物常具有一定的生 理活性，机体内源性生物活性物质对母体药物的药理学与毒理学评价极为重要；其变化规律的异常改变也与某些疾病的往往参与机体重要的生理过程，word
编辑版． 所以，体内特定药物代谢物和机体内源性生物活性发病机制密切相关。物质也是体内药物分析的目标。 在测定体内药物及其特定代谢物或内源性生物活性物质时，除少数通常在测定之前要对体内样品情况将体液作简单处理后可直接测定外，从而为体内样品中药物的测定提供进行分离净化与浓集等样品前处理，良好的环境与条件。 体内样品大都具有以下性质特点：①采样量少，采样量一般为数毫②待测物浓度低，不易重新获得。升至数十微升，且在特定条件下采集， -12-6-9干扰物质多，血样中含g/ml。③g/ml级，甚至低至10通常在 10~10++等大量内源性物质通常对测有蛋白质、脂肪、尿素等有机物 和NaK、定构成干扰；且体内的内源性物质可与药物结合，也能干 扰测定。 ①体内样品需经分离与浓集，或经因此，体内药物分析的特点是：适当的处理后才能进行分析；②对分析方法的灵敏度及专属性要求较高； ③分析工作量大，测定数据的处理和结果的阐明繁琐费时。 低多较的浓度大产特药本样中所含物或其定代谢物物生-6-10目前，，）（10~10且难以通过增加体内样品量提高方法灵敏度。g/ml免疫分析法和生物学体内药物分析常用的检测方法主要有色谱分析法、方法。质谱-主要包括气相色谱法、高效液相色谱法、色谱色谱分析法1. 联用法等，可用于大多数小分子药物的体内检测。目前色谱分析法，尤word 编辑版．
【摘要】本文从必备的相关学科的基础知识讲授开设《体内药物分析》的重要性，讨论了本专业《体内药物分析》的教学内容以及在学习过程中的体会与总结。【关键词】体内药物分析；重要性体内药物分析是由药物分析派生出来的一门研究生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的质与量的变化规律的新兴学科［1，2］。随着生命科学的发展，生物医药学及临床药学的兴起，特别是药物动力学的深入研究，使“给药方案个体化”、“治疗药物监测”的工作越来越重要，体内药物分析学科亦应运而生，经过二十余年的发展，现已成为药学前沿最活跃的领域之一。这学期我院也开设了《体内药物分析》选修课，现就此谈一点看法与体会［3］。 1 为什么要进行体内药物分析? 1.1 可以选择最佳的给药剂量与给药方案，做到合理用药以往临床上对同种疾病患者，给予同样剂量的药物，可是治疗效果却差别很大。例如对癫痫发作患者施以同样剂量苯妥英钠治疗，过去认为每日300mg可以控制症状，而实际却不然。有人观察了200例，结果能控制发作者占28.5%,测得血药浓度为10～20mg/L;无治疗效果者占60%,测得血药浓度<l0mg/L,;而有11.5%患者出现中毒症状，血药浓度>20mg/L。这就说明不能简单地依据表观剂量来推算机体的效应。要保证药物安全、有效，必须对患者体液、尤其是血液中药物含量进行测定。根据药物动力学和药效学的研究表明:机体对药物的反应与作用部位药物浓度有关。所以根据个体病人的体液药物浓度监测后，制订给药方案是合理的。对治疗指数小的药物，如地高辛、奎尼丁、利多卡因等，治疗血药浓度范围狭小，与中毒浓度又相当接近，对肝肾功能不全病人的用药更有必要。因此，近年来国外已开展“给药方案个体化”、“治疗药物监测”工作。 1.2 有利于阐明药物作用机制某种药物或其制剂在体内行为即吸收、分布、代谢及排泄等过程，过去医师与药师主要靠自己的临床经验估计，而现代药学研究，通过测定药物的各种动力学参数，如血药浓度-时间曲线下面积(area under the curve)、生物半衰期(biologic half-life),清除率(clearance)、生物利用度(bioavailability)等来阐明药物作用机制;新药设计也要了解该药物在体内转运过程、作用原理和药物动力学的有关参数。故研究药物动力学的最基本手段之一，就是进行体内药物分析。 1.3 药物管理问题目前，药品普遍存在严重滥用现象，而且会造成社会不良影响(如吸毒、运动员滥用药物等)。此外药物中毒也时有发生，这些也需要进行体内药物分析，尔后进行治疗。许多国家药典已将生物利用度作为评价药物质量的重要内容和依据。而生物利用度的研究也离不开体内药物分析所提供的数据和信息。 2 体内药物分析的作用及特点 2.1 体内药物分析的作用体内药物分析的作用是： (1)为临床药学研究提供数据和分析方法; (2)应用于临床药物浓度的监测; (3)药物代谢动力学中应用; (4)受药物影响的体内内源性物质测定; (5)为药品管理和新药设计提供数据和信息。[!--empirenews.page--] 2.2 体内药物分析的特点体内药物分析首要任务是为临床药学和临床实际工作提供分析数据，这就决定了其独特的分析方法。 (1)样品必须净化。供分析的样品来自不同生物体，组成复杂，干扰物质多。如体液和组织中的内源性物质的成分可与药物结合，且干扰测定。因此测定前通常需进行不同程度分离、纯化，方可进行测定。 (2)样品浓缩。一般而言，能供分析的样品量较少，其中所含药物或其衍生物的量更少，实际进行的是微量分析，最低检出量达10-1～10-3μg,甚至更低。另外样品不易重新获得，所以经净化后的样品还应进行必要浓缩。 (3)方法要简便、快速和准确。样品若系临床药物浓度监测的分析，由于工作量大，故分析方法越简单越好;若为有关科研提供数据，则要准确性高;若与中毒解救有关，则要求越迅速越佳。 (4)还需有一定为检测服务的仪器设备。总之，体内药物分析首要的是建立适合体内样品中药物的灵敏性高、选择性好、准确可靠的分析方法。目前常用色谱法、分光光度法、免疫测定法等［4］。 3 重视相关学科的基础知识的学习体内药物分析学科发展的最大推动力无疑来自生物医学领域及新药药代动力学研究领域的巨大要求和分析技术上的飞跃性进步。临床治疗中药物监测和制剂生物利用度测定是体内药物分析最初的用武之地。而目前随着药物体内过程的研究工作和药物代谢物分离测定工作逐渐成为新药开发中最重要的基础工作时，体
药物分析复习题（红色是答案或提示） 第一章 一、最佳选择题 1. ICH有关药品质量的技术要求文件的标识代码是 A. E B. M C. P D. Q E. S 2. 药品标准中鉴别试验的意义在于 A. 检查已知药物的纯度 B. 验证已知药物与名称的一致性 C. 确定已知药物的含量 D. 考察已知药物的稳定性 E. 确证未知药物的结构 3. 盐酸溶液（9→1000）系指 A. 盐酸1.0 ml加水使成1000 ml的溶液 B. 盐酸1.0 ml加甲醇使成1000 ml的溶液 C. 盐酸1.0 g加水使成1000 ml的溶液 D. 盐酸1.0 g加水1000 ml制成的溶液 E. 盐酸1.0 ml加水1000 ml制成的溶液 4. 中国药典凡例规定：称取“2.0 g”，系指称取重量可为 A. 1.5-2.5 g B. 1.6-2.4 g C. 1.45-2.45 g D. 1.95-2.05 g E. 1.96-2.04 g 5. 中国药典规定：恒重，除另有规定外，系指供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在 A. 0.01 mg B. 0.03 mg C. 0.1 mg D. 0.3 mg E.0.5 mg 6. 原料药稳定性试验的影响因素试验，疏松原料药在开口容器中摊成薄层的厚度应 A.＞20 cm B.≤20 cm C.≤10 cm D. ≤5 cm E. ≤10 mm 7. 下列内容中，收载于中国药典附录的是 A. 术语与符号 B. 计量单位 C. 标准品与对照品 D. 准确度与精密度要求 E. 通用检测方法 8. 下列关于欧洲药典（EP）的说法中，不正确的是 A. EP在欧盟范围内具有法律效力 B. EP不收载制剂标准 C. EP的制剂通则中各制剂项下包含：定义、生产、和检查 D. EP制剂通则项下的规定为指导性原则 E. EP由WHO起草和出版 二、配伍题 [1-2] A. SFDA B. ChP C. GCP D. GLP E. GMP 下列管理规范的英文缩写是 D 1.药品非临床研究质量管理规范 E 2. 药品生产质量管理规范 [3-5] A. 溶质1 g (ml)能在溶剂不到1 ml中溶解 B. 溶质1 g (ml)能在溶剂1-不到10 ml中溶解 C. 溶质1 g (ml)能在溶剂10-不到30 ml中溶解 D. 溶质1 g (ml)能在溶剂30-不到100 ml中溶解 E. 溶质1 g (ml)能在溶剂100-不到1000 ml中溶解