蛋白质
▲蛋白质的化学知识
历史
1.1838, Mulder发现了组成生物体的复杂含氮物。
2.1902, Fischer, Hofmeister同时提出肽键理论。(Nobel，1902)
3.1950, Pauling提出蛋白质的二级结构的基本单位：α-螺旋和β-折叠，肽键6个原子在同一平面。(Nobel，
1954)
4.1953, Sanger确定了牛胰岛素一级结构。(Nobel，1958)
5.1961, Anfinsen证明蛋白质的一级结构决定其三级结构, 利用核糖核酸酶的变性和复性
20种氨基酸–一级氨基酸， Primary amino acid
?缩写
丙氨酸（Ala），缬氨酸（Val），亮氨酸（Leu），异亮氨酸（Ile），脯氨酸（Pro），苯丙氨酸（Phe），色氨酸（Trp），蛋氨酸/甲硫氨酸（Met），甘氨酸（Gly），丝氨酸（Ser），苏氨酸（Thr），半胱氨酸（Cys），酪氨酸（Tyr），天冬酰胺（Asn），谷氨酰胺（Gln），赖氨酸（Lys），精氨酸（Arg），组氨酸（His），天冬氨酸（Asp），谷氨酸（Glu）
口诀：
?分类及特性：
?非极性，通过疏水作用稳定蛋白质的结构, Met, Val, Ala, Gly, Ile, Leu
?芳香族氨基酸，相对非极性，都能参与疏水作用。Trp, Try, Phe
?极性不带电：水中溶解度较大或更加亲水，可以与水形成氢键。Ser, Thr, Cry, Asn, Gln, Pro
?植物受到逆境条件的危害，积累Pro。积累一定量的溶质降低水势。Pro主要以游离状态广泛存在于植物中，水溶性最大的氨基酸，具有较强的水和能力。Pro大量积累，含量甚至高达百倍以上。
?带正电和的三个碱性氨基酸，最为亲水，侧链上有第二个氨基，Arg有带正电的胍基，His有可带电的咪唑基。Lys
?旋光性与手性原子上的构型没有确定的关系。
?氨基酸的理化性质
?一般物理性质：无色晶体，熔点较高，溶解度各不同，在紫外有特征吸收的仅三个芳香族的氨基酸Trp、Tyr、Phe。测定280nm处的紫外吸收值。
?两性电解质：同一氨基酸分子上可以同时解离携带正电荷和负电荷，被称为两性电解质ampholyte。氨基和羧基在不同的PH条件下表现出不同的解离状态。电荷总量为零时（净电荷为零），溶液的PH值为等电点 isoelectric point, pI.
? -氨基参与的反应
?与亚硝酸反应（Van Slyke 定氮）
?与甲醛发生羟甲基化反应，直接测定氨基酸浓度。
?烃基化反应（DNFB）法，二硝基氟苯法，桑格反应，Sanger reaction, 鉴定多肽N端氨基酸的重要方法
?烃基化反应（PITC）法。Edman氨基酸顺序分析法。N端测序，苯异硫氰酸酯。能够不断重复循环，将肽链N端氨基酸逐一进行标记和解离。
?酰基化反应（丹磺酰氯法），N端测序，丹磺酰-氨基酸有很强的荧光性质，DNS-Cl
?酰基化反应（氨基保护反应），用于保护氨基以及肽链合成
?生成西佛碱，多种酶促反应的中间过程
?脱氨基反应：酶催化的反应
?羧基的化学反应
?Strecker降解：弱氧化剂（次氯酸钠）作用下生成NH3和醛；特殊条件下还原成醇、醛；与肼反应，C端氨基酸分析
?成盐成酯，成盐后COOH被保护；酰卤；叠氮化反应，作为多肽合成活性中间体，活化羧基；脱羧
?侧链的化学反应
?羟基：酯化（磷酸化），修饰蛋白质
?巯基：氧化还原，与金属离子的螯合可用于体内解毒
?氨基和羧基共同参与
?茚三酮反应（定性、定量），紫色产物，Pro黄色，比色测定和纸层析显色
?成肽反应
▲理化性质、测定及分离纯化
理化性质：
?蛋白质溶液是一种胶体溶液；
?特定的空间构象，分子量一定–分子筛层析
?大部分pH条件下，蛋白质分子同时存在两种电荷–等电点沉淀，盐溶，盐析，电泳，离子交换层?一般而言，蛋白质上同时存在疏水和亲水区域–有机溶剂沉淀，疏水层析（反相层析）
胶体性质：分子量大，一万到百万。球状蛋白质表面亲水，形成水化膜，从而阻止蛋白质颗粒的相互聚集。
颗粒大小：1-100nm之间，属胶体。稳定亲水胶体的因素：水化膜，表面电荷相同
蛋白质分子扩散速度慢，不易透过半透膜，粘度大，将混有小分子杂质的蛋白质溶液置于半透膜制成的透析袋或管内，浮于流动动水或适宜的缓冲液中，小分子杂质易从袋中透出，保留了比较纯化的蛋白质，即透析（dialysis）。
蛋白质大分子溶液在一定溶剂中超速离心时可发生沉降。沉降速度与离心加速度之比值即为蛋白质的沉降系数S。s = v/w2r；沉降系数以每单位重力的沉降时间表示，蛋白质、核酸、核糖体、病毒等的沉降系数通常为1-200*10-13s，10-13这个因子叫做沉降单位S。
两性电离和等电点：氨基酸分子中除两端游离的氨基和羧基外，Glu、Asp残基中的γ和β羧基，Lys残基中的ε-氨基，Arg的胍基和His的咪唑基。作为带点颗粒，在电场中移动，移动方向取决于蛋白质分子所带电荷性质。蛋白质的电荷即决定于分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量，又受所处溶液的pH影响。当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质游离成正、负离子的趋势相等，即成为碱性离子（净电荷为0），此时溶液的pH值成为蛋白质的等电点。
?pH=pI，净电荷为零，电场中不移动；
?pH大于pI，带负电，向阳极移动；
?pH小于pI，带正电，向阴极移动；
?pI时，蛋白质失去了胶体的稳定条件，没有相同电荷相互排斥的作用，不稳定，溶解度最小，易沉淀。 蛋白质的变性，denaturation
?蛋白质在某些物理或化学因素作用下，其特定的空间结构被破坏，从而导致理化性质改变和生物学活性的丧失。变性只是空间构象的破坏，一般认为蛋白质变性的本质是次级键，二硫键的破坏，并不涉
及一级结构的变化。
?内部侧链疏水基团暴露于表面，溶解度降低；多肽链松弛伸展，粘度增加；结晶性破坏；生物学活性丧失；结构松散，侧链基团暴露，易于发生化学反应；疏水侧链暴露，导致紫外吸收增加。
?物理因素–加热、加压、脱水、搅拌、振荡、紫外线照射、超声波
?化学因素–强酸强碱、尿素、重金属盐、十二烷基磺酸钠（SDS）
?复性，renaturation：变性程度较轻时，去除变性因素，有的蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的构象及功能，变性的可逆变化称为复性。许多蛋白质变性时被破坏严重，不能恢复，称为不可逆变性。
蛋白质的沉淀， Precipitation
?蛋白质分子从溶液中析出的现象–蛋白质沉淀。
?蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即颗粒表面的水化层和电荷。
?盐析：在蛋白质溶液中加入大量中性盐以破坏蛋白质交替的稳定性而使其析出。各种蛋白质所需的盐浓度及pH不同，故可用于对混合蛋白质组分的分离。盐析沉淀的蛋白质，经透析除盐，仍保证蛋白
质活性。调节蛋白质溶液的pH至等电点后，再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更好。
?重金属盐沉淀蛋白质：可以与重金属离子如汞、铅等结合成盐沉淀，沉淀的条件以pH稍大于等电点为宜。此时蛋白质分子有较多的负离子，易成盐。重金属沉淀的蛋白质常是变性的。临床上抢救误服
重金属盐中毒的病人，给病人口服大量蛋白质，然后用催吐剂将结合的重金属盐吐出。
?蛋白质与生物碱试剂以及某些酸结合成不溶性的盐沉淀，沉淀条件为pH小于等电点。正电荷易于与酸根成盐。
?有机溶剂沉淀蛋白质，可与水混合的有机溶剂，能破坏蛋白质颗粒的水化膜，在等电点时使蛋白质沉淀。常温下会引起变性，低温下缓慢进行可用于分离制备各种血浆蛋白质。
?不可逆沉淀：沉淀出来的蛋白质分子，其内部结构发生了较大的改变，失去了原来的生物活性，即使沉淀因素消失也不重新溶解。加入某些水溶性的有机溶剂，破坏水化膜，进入蛋白质内部，短时间及
低温时，沉淀可逆。但作用时间长或温度较高则不可逆。生物碱沉淀不可逆，重金属阳离子不可逆。
?加热凝固：接近于等电点附近的蛋白质溶液加热，首先使蛋白质变性，有规则的肽链结构被打开呈松散状不规则的结构，疏水基团暴露，进而凝聚成凝胶状的蛋白块。
?蛋白质的变性、沉淀、凝固之间有密切的关系。但蛋白质变性后不一定沉淀，变性蛋白质只在等电点附近才沉淀，沉淀的变性蛋白质也不一定凝固。
蛋白质的紫外吸收：波长，280nm。主要是色氨酸和酪氨酸的共轭双键。Phe在紫外光下也有光吸收。
蛋白质的颜色反应
?双缩脲反应，蛋白质在碱性溶液中与硫酸铜作用呈现紫红色。凡分子有两个以上-CO-NH-键的化合物都由此反应。因此所有蛋白质都能与双缩脲试剂发生反应。
?米伦反应：蛋白质溶液中加入米伦试剂，蛋白质首先沉淀，加热变为红色沉淀。此为酪氨酸的酚核特有的反应，因此含有酪氨酸的蛋白质均呈米伦反应。
?茚三酮反应：蓝色，α－氨基酸
?黄蛋白反应：含有苯环的氨基酸，与硝酸共热，呈黄色，再加碱则变为橙黄。一般蛋白质均有。
?含硫蛋白质：含有Cys或Met等，与碱基醋酸铅共热时，分解产生的硫遇铅即产生黑色的硫化铅沉淀。
?色氨酸反应：滴入乙醛酸 + 浓硫酸，如果有吲哚环，则两液层的界面上会出现紫色环，这个反应称为色氨酸反应，也称乙醛酸反应或霍普金（Hopking）反应。用来检验Trp残基。
蛋白质的定量测定法
?凯氏定氮法：消化、蒸馏、吸收、滴定。
?双缩脲法测定蛋白质含量。碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，因此被广泛应用。标准曲线（560nm）。
?Folin-酚法测定蛋白质含量。1。在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质–铜络合物；2。此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂（Folin试剂）还原，产生深蓝色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。灵敏度比
双缩脲法高100倍。改良Lowry法。
?紫外吸收法，通常以1mg蛋白质/ ml溶液的A280为1.0进行估算。蛋白质浓度（mg/ml） =
0.144(A215-A225)
?BCA法测定蛋白质浓度，碱性溶液中，蛋白质将二价铜还原成一价铜，后者与测定试剂中BCA（双辛丹宁）生成一个在562nm处有最大光吸收的紫色复合物。复合物的光吸收强度成正比。抗干扰能力强。
?考马斯亮蓝法：根据蛋白质与CBB结合的原理设计。使染料的最大吸收峰位置由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨
基酸残基相结合。
蛋白质的分离纯化
?破碎细胞及离心–粗提液
?分部分离：利用蛋白质大小或带电性将混合物中的蛋白质分离成不同的组分。利用溶解度不同，涉及pH、温度、盐浓度等。盐析
?透析：半透膜的袋子或管子中，脱盐。
?超速离心：不同蛋白质的密度与形态不同，沉降速度不同。大体上S与蛋白质分子量成正比；S与密度和形状相关，紧密颗粒的摩擦系数小–快；疏松颗粒的摩擦系数大–慢。分离纯化和分子量测定。
?超滤：利用超滤膜在压力下使大分子滞留，小分子滤过。除盐、浓缩、分离纯化。
?电泳：分离蛋白质。通常不用于大规模的蛋白质纯化，并且电泳会不可逆地导致蛋白质结构和功能的改变。
电泳在蛋白质及核算等的分析方法上特别有用。优点是蛋白质电泳后可以显色，估测不同蛋白质在混合物中的数量或纯度；还可以测定蛋白质的一些性质，如等电点及大概分子量。
通常在交联的多聚物凝胶上进行，分子筛，减缓电荷/质量比相近蛋白质的迁移。大小和形状的作用结果。
▲一级结构
小肽，阿斯巴甜，激素，催产素，舒缓激肽，甲状腺激素释放因子，毒素等。
多亚基蛋白质：两条或更多条非共价结合的多肽链。不同的亚基形成小的寡聚体（oligomeric），原体（protomers）.共价连接的不是亚基，如胰岛素，二硫键，被认为是肽链。
估算：蛋白质的分子量/110 = 氨基酸数目；多肽具有特征性的氨基酸组成
非氨基酸的化学基团：单纯蛋白质；复合蛋白质–辅基（prosthetic group），脂蛋白、糖蛋白、金属蛋白，有些不止一种辅基，对蛋白质功能起重要作用。
肽键：氮原子上的孤对电子与羰基具有明显的共轭作用。组成肽键的原子处于同一平面，C-N键具有部分双键性质，以反式结构存在。
一级结构的测定：
?Sanger第一个将蛋白质（胰岛素）所有氨基酸的排列顺序通过实验加以确定。
Sanger试剂（FDNB）标记N末端
?历史上第一个被确定氨基酸序列的酶（1960），核酸酶，ribonuclease, 124AA
Moore & Stein，氨基酸自动分析仪，Edman降解法 + Sanger法，获1972年诺贝尔化学奖
?测定要求：样品纯，分子量，亚基，氨基酸组成，每种氨基酸个数，氨量，酰胺量，多条肽链必须拆分–测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链数目。
?酸水解：6mol/L的盐酸或4mol/L的硫酸在105-110°C条件下进行水解，约20小时。优点：不容易引起水解产物的消旋化。缺点：色氨酸被沸酸完全破坏；酰胺基被水解成了羧基
?碱水解：5mol/L氢氧化钠煮沸，许多氨基酸都受到不同程度的破坏，消旋化，色氨酸在水解中不受破坏。
?酶法水解：不会破坏氨基酸，不会消旋，水解产物为较小的肽段。内切酶：胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶；外切酶：羧肽酶、氨肽酶。
?R1 –水解位点– R2 – R3 – R4
1．胰蛋白酶：R1 = Lys & Arg; R2 = Pro；转移性强，水解速度快
2．胃蛋白酶：R1和/或R2 = Phe、Trp、Tyr、Leu及其它疏水性AA水解速度较快，PH2，R1= Pro抑制
3．糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶：R1 = Phe、Trp、Tyr等疏水性AA，Leu、Met、His稍慢，R2 = Pro抑制，pH8-9。水解速度与相邻AA性质有关：酸性：-/碱性：+
4．嗜热菌蛋白酶：R2 = Phe、Trp、Tyr、Leu、Ile、Met、Val及其他疏水性强的AA水解速度快。
R2 = Pro、Gly不水解，R1或R3 = Pro，抑制水解。
?化学法转移性水解
1．BrCN-Met的C端
2．NH2OH断裂：专一性断裂Asn-Gly，Asn-Leu及Asn-Ala也能部分断裂
?末端氨基酸测定。N末端：Sanger，Edman，DNS-Cl，酶降解法；C末端：肼解法，酶讲解法，硼氢化锂法。
酶解法末端测序，外切蛋白水解酶，将肽链的氨基酸从N端（氨肽酶，aminopeptidase）或C端（羧
肽酶，carboxypeptidase）一个接一个游离出来，在不同时间取样进行分析，根据所游离的氨基酸的
摩尔数的多少来判断氨基酸的排列顺序。
?二硫键的断裂：8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的β-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基。
?多肽链断裂成多个肽段
?一级结构测定步骤：蛋白质的分离纯化–二硫键的拆分和保护–亚基分离–多种方法的部分水解–分离水解后得到的多肽–测序–重叠–二硫键位置的确定。
?Cys受空气氧化形成Cys – Cys, Cys和Cys-Cys发生交换反应，分析时，Cys容易受修饰而不利于定量。
S-S使蛋白酶难于作用，Edman反应中不能形成稳定的PTH-AA，多肽链以S-S拥有两个以上N末端，无法用Edman测序。
?二硫键位置的确定。采用胃蛋白酶水解含二硫键的蛋白质，因酶的转移性低、切点多、生成的肽段包括含有二硫键的肽段较小，且pH2时有利于防止二硫键发生交换。进一步采用对角线电泳，第一向肽
段按大小及电荷不同被分离，然后用过甲酸蒸汽使S-S断裂，被氧化成一对含半胱氨磺酸的肽段。所
带负电荷增加，偏离对角线，取下测序，确定位置。
?其他方法：质谱法，DNA快速测定方法、遗传密码分析、基因的分离技术可以从编码基因的核苷酸序列来分析蛋白质的多肽序列
▲二级结构
蛋白质具唯一的化学结构：每个蛋白质具有一种特定的化学或结构上的功能，每一种蛋白质只有一个唯一的三维结构。蛋白质中原子的空间排列是蛋白质的构象，一个蛋白质的可能构象包括不打破共价键的前提下的任意结构状态。生理条件下会呈现一个或几个主要的构象状态，特定条件下存在的构象通常是热力学上最稳定的构象，具最低的自由能，处于功能及折叠状态构象的蛋白质称为天然蛋白质（native protiens）. 蛋白质的构象由弱的作用力维持：蛋白质结构上的稳定性可以定义为维持天然蛋白质构象的趋势或能力。
非共价键作用的数量多，是维持蛋白质结构的主要作用，通常具有最低自由能的蛋白质构象是最大数量弱相互作用力维持的那种。
对于每个单位质量的氢键的数量，纯水的要比其他液体或溶液更大，所以即使是最强极性的分子，溶解性也有限，因为它们的存在导致了每个单位质量氢键的净减少，因此极性分子周围会形成一个结构化了的水的水化层。
疏水作用：蛋白质内部通常是疏水氨基酸侧链紧密包裹的核心。蛋白质中基团间氢键的形成是协同的，一
蛋白质高级结构的原则：疏水残基主要被包埋在蛋白质内部，极性或带电残基主要存在于蛋白质表面。氢键数量被最大化
层次：一级结构：氨基酸序列；二级结构：α-螺旋，β-折叠；超二级结构：模Module 结构域 domain；三级结构：所有原子空间位置；四级结构：蛋白质多聚体。
肽键的特征：肽键是一个刚性的平面结构
C-N双键特性限制了肽键的旋转。
二级结构是指肽链中主链原子的局部空间排布即构象，不涉及侧链部分的构象、
拉马钱德兰图：阐述蛋白质立体结构中肽键内α碳原子和羰基碳原子间键的旋转度对α碳原子和氮原子间键的旋转度所绘制的图。主要用来指名蛋白质允许和不允许的构象
Linus Carl Pauling, 杂化轨道，量子化学，α-helix，β-sheet。Nobel化学奖，和平奖。盐湖城丑闻
α-螺旋,
?最常见、最丰富的二级结构。φ=-570、?=-480。周期性有规则的构象。大部分右手螺旋或左手螺旋。
3.6个氨基酸残基、沿螺旋轴方向上升0.54nm、每个氨基酸残基绕轴旋转100°，沿轴上升0.15nm。
侧链伸向外侧，相邻螺圈之间形成链内氢键，氢键的取向与中心轴几乎呈平行关系。氢键由肽键上的
N-H的氢与其后面（N端）的第四个氨基酸残基上的C=O的氧之间形成。肽键平面与螺旋长轴平行。
3.613-螺旋（n=3）,3*3+4 = 13
?310-螺旋（n=2），每圈3个氨基酸残基（整数螺旋），含3*2+4个原子,只存在于β-turn
?几乎都是右手螺旋，右手比左手稳定，前提是都是由L-氨基酸残基组成。左手螺旋中第一个C原子过于接近主链上的C=O原子，以致结构不舒适，能量较高，构象不稳定。右手螺旋中，空间位阻小，较为符合立体化学空间要求，肽链折叠中容易形成，构象稳定。
?氨基酸侧链的相互作用能够稳定或破坏这种结构。侧链彼此排斥不能形成链内氢键。R基大小对形成α螺旋也有影响。R基太大不能形成链内氢键，ploy-Pro没有亚氨基，产生结节。
β-构象
?也称β-折叠、β-结构、β-折叠片。第二种最常见的二级结构。两条或多条几乎完全伸展的多肽链侧向聚集在一起，相邻肽链主链上的-NH和C=O之间形成有规则的氢键。所有的肽键都参与链间氢键的交
联，氢键与肽链的长轴接近垂直。平行式和反平行式。
?肽链相当伸展，折叠成锯齿状，平面间110°角。R侧链伸出交替分布在片层平面两侧，上方或下方。
?平行结构中，0.65nm;反平行结构中，0.7nm。纤维状蛋白质中主要为反平行式，球状蛋白质中两种形式几乎同样广泛存在。
β-转角（β-turn）
?肽链出现180°的回折。第一个氨基酸残基的-C=O与第四个氨基酸残基的-NH形成氢键。β-转角（β-turn）也称回折（reverse turn）、β-弯曲（β-bend）或发夹结构，4个AA，Gly及Pro常出现在β-转
角处。相当于半圈3.010螺旋。
β-凸起（β-bugle）
?小片的非重复结构，独立存在。可以认为是折叠中额外插入一个残基。
无规则卷曲（Randon coil）
无规则卷曲泛指那些不能被归入明确的二级结构的多肽片段。存在少数柔性的无序片段，同样是明确而稳定的结构。受侧链相互作用的影响很大，经常构成酶活性部位或其他蛋白质特异的功能部位。如钙离子结合蛋白的中央环。
二级结构：α-螺旋和β-构象是多种蛋白质中最主要的重复二级结构。一些氨基酸残基对于不同类型的二级结构的适合程度不同。Pro和Gly在β-转角处常见，而在α-螺旋中几乎很少出现。
角蛋白，α-Keratin。两股右手α-螺旋向左缠绕，拧成一根原纤维，再排列成9+2的结构–微纤维。数百根微纤维结合成不规则纤维束–大纤维。含有丰富的二硫键，每四个螺旋就有一个交联二硫键，保证了显微结构的稳定和强大刚性。α-角蛋白在湿热条件下可转变为β-构想，冷却干燥又回复原状。
胶原蛋白（Collagen）:胶原纤维形式存在，基本单位是原胶原蛋白分子。多集聚和形成胶原纤维。二级结构：3条多肽链组成的三股螺旋，一种右手超螺旋结构，每一股螺旋是一种特殊的左手螺旋。稳定胶原三螺旋的力包括：范德华力，氢键，共价交联。稳定三螺旋还需要三联体的每第三个位置必须是Gly。氢键在一条链三联体的Gly的酰胺氢与另一条链的相邻三联体的羰基氧间形成。Hypro也参与链间氢键的形成。共价交联主要在Lys和Hylys残基间形成，III型胶原还有链间二硫键。
▲高级结构
超二级结构（supersecondary structure）：介于蛋白质二级结构和三级结构之间，指相邻的二级结构单元组合在一起，彼此相互作用，排列成规则的、在空间结构上能够辨认的二级结构组合体，并充当三级结构的构件。其基本形式有αα、βαβ和βββ等。
→αα
?由两股右手α螺旋平行或反平行彼此缠绕而成的左手超螺旋。每圈3.5个AA，重复距离从5.4缩短到
5.1A。螺旋之间可能作用的侧链是非极性的，它们向着超螺旋内部，避开与水接触，其他的是极性的，
处于分子的表面，与水接触。超螺旋的稳定性主要由非极性侧链间的范德华力相互作用的结果。也有
发现三股和四股螺旋的。
?肌球蛋白，Myosin,马达蛋白，在肌肉收缩和细胞分裂中起重要作用。2条重链，4条轻链。头部区域有相当高的同源性，特别是ATP和肌动蛋白的结合位点非常保守。S1。
→βαβ
?最简单的形式是两段平行的β-链和一段连接链连接而成。连接链可以使α-螺旋链或是无规则卷曲。最常见的是三段平行的β-链和两段α-螺旋链组成– Rossmann-折叠。
?βββ，β-曲折和回形拓扑结构式组合的两种超二级结构。β曲折是另一种，相邻的三条反平行β-链通过紧凑的β-转角连接而成。
→结构域 Domain，也称辖区，二级结构或超二级结构的基础上形成的三级结构的局部折叠区。一条多肽链在这个域范围内来回折叠。相邻的域被一个或两个多肽片段连结。三维空间可以明显区分和相对独立，并且具有一定的生物学功能。
三级结构（Tertiary structure）:蛋白质多肽链在各种二级结构的基础上再进一步盘曲或折叠形成具有一定规律的三维空间结构，成为三级结构。主要研究方法为X-光衍射和核磁共振（确定蛋白质分子在溶液中的动态结构的唯一方法）。侧链构象主要是形成微区。
→氢键，Hydrogen Bond, 羰基氧和酰胺氢之间形成的氢键是稳定蛋白质二级结构的主要作用力，此外，还可在侧链与侧链，侧链与介质水，主链肽基与侧链或主链肽基与水之间形成。
→范德华力，Van Der Waals Force，定向效应、诱导效应、分散效应（多数情况下主要作用的范德华力，它是非极性分子或基团间仅有的一种范德华力即狭义的范德华力）。范德华力包括引力和斥力，吸引力只有当两个非键合原子处于接触距离，或称范德华距离才达到最大。其相互作用数量大且有加和效应和位相效应。
→疏水作用（Hydrophobic Interaction）:介质中的球状蛋白质的折叠总是倾向于把疏水残基埋藏在分子的内部。在稳定蛋白质的三维结构方面占有突出地位。疏水作用是出自比开水的需要而被迫接近。当疏水化合物或基团进入水中时，他周围的水分子将排列成刚性的有序结构即所谓笼形结构。与此相反的过程（疏水作用），排列有序的水分子被破坏，水的混乱度增加即熵增加，因此疏水作用是熵驱动的自发过程。→盐键（Ion Interaction）：又称盐桥或离子键，是正电荷与负电荷之间的一种静电相互作用。升高温度稳定性增加，加入非极性溶剂加强，加入盐类减弱。
→二硫键（Disculfide Bound）:通常情况下二硫键是在多肽链的β-转角附近形成的。二硫键的形成并不规定多肽链折叠，但一旦蛋白质采取了三维结构，则二硫键的形成将对此构象起稳定作用。
四级结构（Quaternary structure）
→指蛋白质分子中亚基的立体排布，亚基间的相互作用与接触部位的布局。亚基（subunit）是指参与构成蛋白质四级结构的、每条具有三级结构的多肽链。维系蛋白质四级结构的是氢键、盐键、范德华力、疏水键等非共价键。
→变构效应：由于蛋白质分子构象改变而导致蛋白质分子功能发生改变的现象成为变构效应。
→折叠（folding）:蛋白质从伸展的多肽链形成特定的立体结构的过程
→蛋白质的一级结构决定其高级结构。Anfinsen，1972Nobel，证明了一级结构决定高级结构。
→天然结构（native structure）:拥有生理活性的立体结构对每种蛋白质而言，是特定和唯一的，通常称之为天然结构。蛋白质的天然立体结构在溶液中有一定的可塑性。有些蛋白质合成以后自己不能独立形成自由能最低的立体结构，而需要一些蛋白质来催化，这类蛋白质成为分子伴侣（molecular chaperone）。
→蛋白质在受热或在高浓度的尿素、盐酸胍等化学试剂存在下会丧失活性，成为变性（denaturation）。本质为高级结构的破坏（一级结构不被破坏），特别是氢键的破坏。复性（renaturation）.
→阮病毒（Prion）,也称传染性蛋白粒子/朊粒/朊病毒。朊蛋白（prion protein, PrP。是人和动物的传染性海绵状脑病（transmissible spongiform encephalopathies, TSEs）。一类不含核酸和脂类的疏水性糖蛋白。
→结构形成总则：
?蛋白质的形状分球状和纤维状；稳定蛋白质结构倾向于拥有最多量的氢键。
?球状蛋白质都有疏水核心，由疏水侧链构成，亲水侧链分布在蛋白质的表面或酶活性中心（油滴法则），蛋白质的内部不得有空隙；纤维状蛋白也符合这一规律。
?多聚化是球状蛋白质的普遍现象，不正常聚合成纤维状可导致疾病；
?穿膜区一定呈α螺旋结构，侧链外露。
?不会打结
?形成球蛋白的作用力按其重要程度依次为：氢键、疏水作用力、盐键、范德华力
▲结构与功能
血红蛋白
?球形四聚体，血红蛋白的四级结构显示了不同亚基间强的相互作用。αβ界面间存在强相互作用，明显的疏水作用，但也存在许多氢键和一些离子对作用。
?结合氧后引起结构改变：R态和T态。无氧结合时，T更稳定，氧与Hb一个亚基的T态结合，引起构象改变为R态。
?别构蛋白：不止有一个配基的结合部位（活性部位），还有别的配基的结合部位（别构部位），均有别构效应；别构效应：蛋白质与配基结合后改变蛋白质构象，进而改变蛋白质活性。
?氧与血红蛋白的结合受2,3-二磷酸干甘油酸（BPG）的调控。表现为一种向异性的变构调控行为。红细胞中的BPG浓度相对较高，BPG能大大降低Hb对氧的亲和力。调控对组织中氧的释放。BPG的结合稳定去氧Hb的T态。
?镰刀状贫血病：基因变异–蛋白质特性。由于β链一个氨基酸突变（Glu - Val）,去氧血红蛋白的S表面换成了一个疏水侧链，进一步引起分子发生线性蒂合，形成长链。多条长链进一步聚集成多股螺旋的不溶性纤维。
免疫体系分子的相互识别
?辅助T细胞：Helper T cell，递呈作用
?MHC：皮肤移植时出现的排斥反应，具有记忆性，特异性和可转移性。不同个体间其抗原特异性互不相同。
MHC1，抗原肽结合区呈沟槽状结构。可容纳8-12个AA，能与一定广度的多肽谱结合。
MHCII，一个α螺旋和β片层，构成沟槽的一个侧壁和半个底面，由于它的末端是开放的，故可容纳较长的多肽。
蛋白质与DNA的相互作用
?DNA-蛋白质相互作用的化学键：氢键：识别功能的蛋白质的螺旋结构常与DNA的大沟相互作用；疏水键：暴露于大沟侧缘的T-CH3基团是疏水性的，可与疏水氨基酸残基侧链相互作用；离子键：蛋白质的带电氨基酸残基的侧链与DNA分子上的带电基团形成离子键。
?非特异性：组蛋白（Histone）。正电荷，核心组蛋白高度保守，H2A、H2B、H3、H4；可变的连接组蛋白H1。核心组蛋白通过C端疏水的氨基酸相互结合，N端带正电的氨基酸向外伸出，与DNA分子结合，使DNA分子缠绕在组蛋白核心周围，形成核小体。200bpDNA、一个组蛋白核心，一个H1。没圈80bp，共
1.75圈，约146bp，两端被H1锁合。
?非组蛋白：染色体上与特异DNA序列结合的蛋白质，又称序列特异性DNA结合蛋白。特性：含有较多的Asp和Glu，酸性蛋白质；整个细胞周期都合成；能识别特异DNA序列；具有多样性和异质性；具有多种功能。
1．HTH，α螺旋–转角–α螺旋模式。蛋白质形成对称的同型二聚体，每个单位由20个氨基酸的小肽组成。两个α螺旋相互连接成β转角。两个较短的α螺旋与其间含Gly残基的铰链组成。羧基端的
α螺旋与DNA大沟识别，另一个与磷酸戊糖链骨架接触。识别反向重复序列TGTG/CACA。
2．Zinc Finger, 每个锌指单位是一个DNA结合结构域，由30个左右氨基酸残基组成。一对Cys和一对His与Zn2+形成配位键，C端形成α螺旋与DNA结合。由4个Cys或两个Cys及两个His组成；
保守序列Cys – N2-4– Cys – N12-14– His – N3– His，与DNA大沟结合并环绕，指部深入ＤＮＡ双
螺旋的深沟，接触５个核苷酸。
3．Leucine Zipper,亮氨酸拉链，约35个氨基酸残基，α螺旋，每两圈（7个氨基酸残基）有一个Leu 残基，排成一列。两个蛋白质分子的α螺旋靠Leu间的疏水作用力形成一条拉链状结构。另一端肽
段富含碱性氨基酸残基，借正电荷与DNA双螺旋链上带负电荷的磷酸集团结合。
?足迹法技术用于测定与特殊蛋白质结合在DNA上的结合位点和相应的核苷酸顺序。
水解酶与人类疾病
?泛素降解：76个AA组成的小分子多肽。泛素化（uhiquitylation）,在ATP参与下被三种酶依次催化，形成蛋白质与一条泛素聚合链相互结合的复合结构，进入蛋白酶体，然后降解为肽段。E1 – E2 – E3，选择什么样的蛋白质进行泛素化主要取决于E2和E3。
?血栓形成：活体心脏、血管内血液的某些成分析出，凝集形成固体质块的过程称血栓形成。内膜损伤后血小板黏集，形成血小板小堆；以后内源性凝血系统、外源性凝血系统激活，形成纤维蛋白，血小板与纤维蛋白等形成血小板血栓。形成不规则梁索状或珊瑚状突起。血栓逐渐增大，阻塞血管，血流停止，血液凝固，形成更大的血栓。
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生物化学知识点整理 注： 1.此材料根据老师的PPT及课堂上强调需掌握的内容整理 而成，个人主观性较强，仅供参考。（如有错误，请以课本为主） 2.颜色注明：红色：多为名解、简答（或较重要的内容） 蓝色：多为选择、填空 第八章脂类代谢 第一节脂类化学 脂类：包括脂肪和类脂，是一类不溶于水而易溶于有机溶剂，并能为 机体利用的有机化合物。 脂肪：三脂肪酸甘油酯或甘油三酯。 类脂：胆固醇、胆固醇酯、磷脂、糖脂。 第二节脂类的消化与吸收
脂类消化的主要场所：小肠上段 脂类吸收的部位：主要在十二指肠下段及空肠上段 第三节三酰甘油（甘油三酯）代谢 一、三酰甘油的分解代谢 1.1）脂肪动员：储存在脂肪细胞中的脂肪，被肪脂酶逐步水解为 脂肪酸及甘油，并释放入血以供其他组织氧化利用的过程。 2）关键酶：三酰甘油脂肪酶 （又称“激素敏感性三酰甘油脂肪酶”，HSL） 3）脂解激素：能促进脂肪动员的激素，如胰高血糖素、去甲肾 上腺素、肾上腺素等。 4）抗脂解激素：抑制脂肪动员，如胰岛素、前列腺素、烟酸、 雌二醇等。 2.甘油的氧化 甘油在甘油激酶的催化下生成3-磷酸甘油，随后脱氢生成磷酸二羟丙酮，再经糖代谢途径氧化分解释放能量或经糖异生途径生成糖。 3.脂肪酸的分解代谢 饱和脂肪酸氧化的方式主要是β氧化。 1）部位：组织：脑组织及红细胞除外。心、肝、肌肉最活跃； 亚细胞：细胞质、线粒体。 2）过程： ①脂酸的活化——脂酰CoA的生成（细胞质）
基因工程 绪论 1、克隆（clone）：作名词：含有目的基因的重组DNA分子或含有重组分子的无性繁殖。作动词：基因的分离和重组的过程。 2、基因工程（gene engineering）：体外将目的基因插入病毒、质粒、或其他载体分子中，构成遗传物质的新组合，并使之掺入到原先没有这些基因的宿主细胞内，且能稳定的遗传。供体、受体和载体是基因工程的三大要素。 3、基因工程诞生的基础 三大理论基础：40年代发现了生物的遗传物质是DNA；50年代弄清楚DNA 的双螺旋结构和半保留复制机理；60年代确定遗传信息的遗传方式。以密码方式每三个核苷酸组成一个密码子代表一个氨基酸。 三大技术基础：限制性内切酶的发现；DNA连接酶的发现；载体的发现 3、基因工程的技术路线：切：DNA片段的获得；接：DNA片段与载体的连接；转：外源DNA片段进出受体细胞；选：选择基因；表达：目的基因的表达；基因工程的工具酶 1、限制性内切酶（restriction enzymes）：主要是从原核生物中分离纯化出来的，是一类能识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核酸内切酶。 2、限制酶的命名：属名（斜体）+种名+株系+序数 3、II型限制性内切酶识别特定序列并在特定位点切割 4、同裂酶：来源不同，其识别位点与切割位点均相同的限制酶。 5、同尾酶：来源不同，识别的靶序列不同，但产生相同的黏性末端的酶形成的新位点不能被原来的酶识别。 6、限制性内切酶的活性：在适当反应条件下，1小时内完全酶解1ug特定的DNA 底物，所需要的限制性内切酶的量为1个酶活力单位。 7、星号活性：改变反应条件，导致限制酶的专一性和酶活力的改变。 8、DNA连接酶的特点：具有双链特异性，不能连接两条单链DNA分子或闭合单链DNA，连接反应是吸能反应，最适反应温度是4至15度，最常用的是T4连接酶。 9、S1核酸酶：特异性降解单链DNA或RNA。
各种组织细胞 体循环小肠肠腔 第六章糖代谢 糖(carbohydrates)即碳水化合物，是指多羟基醛或多羟基酮及其衍生物或多聚物。 根据其水解产物的情况，糖主要可分为以下四大类： 单糖：葡萄糖（G ）、果糖（F ），半乳糖（Gal ），核糖 双糖：麦芽糖（G-G ），蔗糖（G-F ），乳糖（G-Gal ） 多糖：淀粉，糖原（Gn ），纤维素 结合糖: 糖脂 ，糖蛋白 其中一些多糖的生理功能如下： 淀粉：植物中养分的储存形式 糖原：动物体内葡萄糖的储存形式 纤维素：作为植物的骨架 一、糖的生理功能 1. 氧化供能 2. 机体重要的碳源 3. 参与组成机体组织结构，调节细胞信息传递，形成生物活性物质，构成具有生理功能的糖蛋白。 二、糖代谢概况——分解、储存、合成 三、糖的消化吸收 食物中糖的存在形式以淀粉为主。 1.消化 消化部位：主要在小肠，少量在口腔。 消化过程：口腔 胃 肠腔 肠黏膜上皮细胞刷状缘 吸收部位：小肠上段 吸收形式：单糖 吸收机制：依赖Na+依赖型葡萄糖转运体（SGLT ）转运。 2.吸收 吸收途径：
过程 2 H 2 四、糖的无氧分解 第一阶段：糖酵解 第二阶段：乳酸生成 反应部位：胞液 产能方式：底物水平磷酸化 净生成ATP 数量：2×2-2= 2ATP E1 E2 E3 调节：糖无氧酵解代谢途径的调节主要是通过各种变构剂对三个关键酶进行变 构调节。 生理意义： 五、糖的有氧氧化 E1:己糖激酶 E2: 6-磷酸果糖激酶-1 E3: 丙酮酸激酶 NAD + 乳 酸 NADH+H + 关键酶 ① 己糖激酶 ② 6-磷酸果糖激酶-1 ③ 丙酮酸激酶 调节方式 ① 别构调节 ② 共价修饰调节 糖无氧氧化最主要的生理意义在于迅速提供能量，这对肌收缩更为重要。 是某些细胞在氧供应正常情况下的重要供能途径。 ① 无线粒体的细胞，如：红细胞 ② 第一阶段：糖酵解途径 G （Gn ） 丙酮酸胞液
第八章医院内感染的预防和控制 一、名词解释题 1、医院内感染：又称医院获得性感染，是指病人、探视者和医院工作人员在医院内受到感染，可在医院内发病或离院不久即发病的。 2、清洁：指清除物体上一切污秽，如尘埃、油脂、血迹等。 3、消毒：清除和杀灭物体上除细菌芽胞外的各种病源微生物。 4、热力消毒灭菌法：利用热力使微生物的蛋白质凝固变性，细胞膜发生改变，酶失去活性，以达到消毒灭菌的目的。 5、压力蒸汽灭菌法：是临床最常用的一种灭菌法，利用高压下的高温饱和蒸气杀灭所以微生物及其芽胞，灭菌效果可靠。 6、光照消毒法：主要利用紫外线、臭氧机高能射线，使菌体蛋白质发生光解、变性，菌体内的核算、酶遭到破坏而致微生物死亡。 7、化学消毒灭菌法：本法是利用化学药物渗透到菌体内，使其蛋白质能股变性，酶失去活力，引起微生物代谢障碍，或破坏细胞膜的结构，改变其通透性，是细胞破裂、溶解，从而达到消毒、灭菌。 8、浸泡法：将物品浸没入消毒溶液中，在标准的浓度与时间内达到消毒灭菌作用。 9、喷雾法：用喷雾器均匀喷洒消毒剂，使消毒剂呈微粒气雾弥散在空间，在标准的浓度内达到消毒的作用。 10、擦拭法：用消毒剂擦拭物品表面，如桌、椅、地面、墙壁等，在标准的浓度内达到消毒作用。 11、熏蒸法：将消毒剂加热或加入氧化剂，是消毒剂呈气体，在标榜的浓度与时间内达到消毒灭菌作用。 12、无菌物品或无菌区域：指经过灭菌处理后未被污染的物品或区域。 1、交叉感染：指病人与病人、病人与工作人员之间的直接感染，或通过水、空气、医疗器械等的间接感染。 2、自身感染：指寄居在病人体内的正常菌群或条件致病菌，在病人机体免疫功能低下时引起的感染。 3、灭菌：清除或杀灭物体上一切微生物（包括细菌芽胞）的过程。 4、微波消毒灭菌法：微波是一种频率高、波长短的超高频电磁波。在电磁波的高频交流电场中，物品中的极性分子发生高速运动并引起互相摩擦，是温度迅速升高，而达到消毒灭菌的作用。常用于食品及餐具的处理、医疗药品及耐热非金属材料器械的消毒灭菌。 5、潜热：是指当1g100℃的水蒸气变成1g100℃的水时，释放出2255J的热能。 6、电离辐射灭菌法：应用核素60Co发射的丙种射线或电子加速器产生的高能电子束（阴极射线）穿透物品，杀死其中微生物的灭菌法。 7、生物净化法：采用生物洁净技术，通过三级空气过滤器，除掉空气中～5um的尘埃，选用合理的气流方式，达到空气洁净的目的。 8、灭菌技术：是指在医疗、护理操作中，防止一切微生物侵入机体和防止物价物品或无菌区域被污染的操作技术。 9、隔离：是将传染源传播者（传染病人和带菌者）和高度易感人群安置在指定地点和特殊环境中，暂时避免和周围人接触，对前者采取传染源隔离，防止传染病病原体向外传播，对后者采取保护性隔离，保护高度易感人群免受感染。 10、终末消毒处理：是对转科、出院或死亡病人及其所住病室、用物和医疗器械的消毒。 第九章病人的清洁护理
第二章蛋白质的结构和功能 第一节蛋白质分子组成 一、组成元素： N为特征性元素，蛋白质的含氮量平均为16%.-----测生物样品蛋白质含量：样品含氮量×6.25 二、氨基酸 1.是蛋白质的基本组成单位，除脯氨酸外属L-α-氨基酸，除了甘氨酸其他氨基酸的α-碳原子都是手性碳原子。 2.分类：（1）非极性疏水性氨基酸：甘、丙、缬、亮、异亮、苯、脯，甲硫。（2）极性中性氨基酸：色、丝、酪、半胱、苏、天冬酰胺、谷氨酰胺。（3）酸性氨基酸：天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu。（4）（重）碱性氨基酸：赖氨酸Lys、精氨酸Arg、组氨酸His。 三、理化性质 1.两性解离：两性电解质，兼性离子静电荷+1 0 -1 PH〈PI PH=PI PH〉PI 阳离子兼性离子阴离子等电点：PI=1/2（pK1+pK2） 2.紫外吸收性质：多数蛋白质含色氨酸、酪氨酸（芳香族），最大吸收峰都在280nm。 3.茚三酮反应：茚三酮水合物与氨基酸发生氧化缩合反应，成紫蓝色的化合物，此化合物最大吸收峰为570nm波长。此反应可作为氨基酸定量分析方法。 四、蛋白质分类：单纯蛋白、缀合蛋白（脂、糖、核、金属pr） 五、蛋白质分子结构 1.肽：氨基酸通过肽键连接构成的分子肽肽键：两个氨基酸α氨基羧基之间缩合的化学键（—CO—NH—） 2.二肽：两分子氨基酸借一分子的氨基与另一分子的羧基脱去一分子的水缩合成 3.残基：肽链中的氨基酸分子因脱水缩合而残缺，故被称为氨基酸残基。 4.天然存在的活性肽： （1）谷胱甘肽GSH：谷，半胱，甘氨酸组成的三肽 ①具有还原性，保护机体内蛋白质或酶分子免遭氧化，使蛋白质或酶处于活性状态。②在谷胱甘肽过氧化物酶催化下，GSH可还原细胞内产生的过氧化氢成为水，同时，GSH被氧化成氧化性GSSG，在谷胱甘肽还原酶作用下，被还原为GSH③GSH的硫基具有噬核特性，能与外源性的噬电子毒物（如致癌物，药物等）结合，从而阻断，这些化合物与DNA,RNA或蛋白质结合，以保护机体（解毒） （2）多肽类激素及神经肽 ①促甲状腺激素释放激素TRH②神经肽：P物质（10肽）脑啡肽（5肽）强啡肽（17肽）
专题一基因工程 一【高考目标定位】 1、专题重点：DNA重组技术所需的三种基本工具；基因工程的基本操作 程序四个步骤；基因工程在农业和医疗等面的应用；蛋白质工程的原理。 2、专题难点：基因工程载体需要具备的条件；从基因文库中获取目的基 因；利用PCR技术扩增目的基因；基因治疗；蛋白质工程的原理。 二【课时安排】2课时 三【考纲知识梳理】 第1节DNA重组技术的基本工具 教材梳理： 知识点一基因工程的概念：基因工程是指按照人们的愿望，进行格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。 注意：对本概念应从以下几个面理解： 知识点二基因工程的基本工具 1.限制性核酸切酶——“分子手术刀” （1）限制性切酶的来源：主要是从原核生物中分离纯化来的。 （2）限制性切酶的作用：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。（3）限制性切酶的切割式及结果：①在中心轴线两侧将DNA切开，切口是黏性末端。②沿着中心轴线切开DNA，切口是平末端。 2.DNA连接酶——“分子缝合针” （1）来源：大肠杆菌、T4噬菌体 （2）DNA连接酶的种类：E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。 （3）作用及作用部位：E.coliDNA连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸
二酯键，T4DNA连接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。注意：比较有关的DNA酶 （1）DNA水解酶：能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸，彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基 （2）DNA解旋酶：能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链，作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。注意：使DNA解成两条长链的法除用解旋酶以外，在适当的高温（如94℃）、重金属盐的作用下，也可使DNA 解旋。 （3）DNA聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链。（4）DNA连接酶：是通过磷酸二酯键连接双链DNA的缺口。注意比较DNA聚合酶和DNA连接酶的异同点。 3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” （1）分子运载车的种类：①质粒：常存在于原核细胞和酵母菌中，是一种分子质量较小的环状的裸露的DNA分子，独立于拟核之外。②病毒：常用的病毒有噬菌体、动植物病毒等。 （2）运载体作用：①是用它做运载工具，将目的基因转运到宿主细胞中去。②是利用它在受体细胞对目的基因进行大量复制。 （3）作为运载体必须具备的条件：①在宿主细胞中保存下来并大量复制②有多个限制性切酶切点③有一定的标记基因，便于筛选。 思维探究：知识点3、4、5主要是介绍DNA重组技术的三种基本工具及其作用。限制酶──“分子手术刀”，主要是介绍限制酶的作用，切割后产生的结果。在这部分容学习时，应关心的问题之一是：限制酶从哪里寻找？我们可以联想从前学过的容──噬菌体侵染细菌的实验，进而认识细菌等单细胞生物容易受到自然界外源DNA的入侵。那么这类原核生物之所以长期进化而不绝灭，有保护机制？进而联想到可能是有什么酶来切割外源DNA，而使之失效，达到保护自身的目的”。这样就对“限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来”的认识提高了一个层次。 基因进入受体细胞的载体──“分子运 输车”的学习容，不能仅仅着眼于记住这几个 条件，而应该深入思考每一个条件的涵，通过 深思熟虑，才能真正明确为什么要有这些条件 才能充当载体。 教材拓展： 拓展点一限制酶所识别序列的特点 限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱
第一章 蛋白质的元素组成（克氏定氮法的基础） 碳、氢、氧、氮、硫（C、H、O、N、S ） 以及磷、铁、铜、锌、碘、硒 蛋白质平均含氮量（N%）：16% ∴蛋白质含量=含氮克数×6.25（凯氏定氮法） 基本组成单位 氨基酸 熟悉氨基酸的通式与结构特点 ● 1. 20种AA中除Pro外，与羧基相连的α-碳原子上都有一个氨基，因而称α-氨 基酸。 ● 2. 不同的α-AA，其R侧链不同。氨基酸R侧链对蛋白质空间结构和理化性质有 重要影响。 ● 3. 除Gly的R侧链为H原子外，其他AA的α-碳原子都是不对称碳原子，可形成 不同的构型，因而具有旋光性。 ● 氨基酸分类P9 按侧链的结构和理化性质可分为： 非极性、疏水性氨基酸 极性、中性氨基酸 酸性氨基酸 碱性氨基酸 等电点概念 在某一溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，呈电中性，此时该溶液的pH值即为该氨基酸的等电点(isoelectric point，pI )。 紫外吸收性质 含有共轭双键的芳香族氨基酸Trp(色氨酸), Tyr（酪氨酸）的最大吸收峰在280nm波长附近。 氨基酸成肽的连接方式 两分子脱水缩合为二肽，肽键
由10个以氨基酸相连而成的肽称为寡肽。 而更多的氨基酸相连而成的肽叫做多肽；多肽链有两端，其游离a-氨基的一端称氨基末端或N-端，游离a-羧基的一端称为羧基末端或C-端。 肽链中的氨基酸分子因脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基。 蛋白质就是由许多氨基酸残基组成的多肽链。 谷胱甘肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽。 (1) 体重要的还原剂保护蛋白质和酶分子中的巯基免遭氧化，使蛋白质处与活性状态。 (2) 谷胱甘肽的巯基作用可以与致癌剂或药物等结合,从而阻断这些化合物与DNA、RNA 或蛋白质结合，保护机体免遭毒性损害。 蛋白质1~4级结构的定义及维系这些结构稳定的作用键 蛋白质是氨基酸通过肽键相连形成的具有三维结构的生物大分子 蛋白质的一级结构就是蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序。主要化学键是肽键，有的还包含二硫键。 蛋白质二级结构是指多肽链的主链骨架中若干肽单元，各自沿一定的轴盘旋或折叠，并以氢键为主要次级键而形成的有规则或无规则的构象，如α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规卷曲等。蛋白质二级结构一般不涉及氨基酸残基侧链的构象。 二级结构的主要结构单位——肽单元（peptide unit）[肽键与相邻的两个α-C原子所组成的残基，称为肽单元、肽单位、肽平面或酰胺平面(amide plane)。它们均位于同一个平面上，且两个α-C原子呈反式排列。] 二级结构的主要化学键——氢键(hydrogen bond) 蛋白质的三级结构是指多肽链在二级结构的基础上,由于氨基酸残基侧链R基的相互作用进一步盘曲或折迭而形成的特定构象。也就是整条多肽链中所有原子或基团在三维空间的排布位置。蛋白质三级结构的形成和稳定主要靠次级键，包括氢键、盐键、疏水键以及德华力等。此外，某些蛋白质中二硫键也起着重要的作用。 由两个或两个以上亚基之间彼此以非共价键相互作用形成的更为复杂的空间构象，称为蛋白质的四级结构。[亚基(subunit)：由一条或几条多肽链缠绕形成的具有独立三级结构的蛋白质。] 蛋白质二级结构的基本形式？重点掌握α-螺旋、β-折叠的概念 α-螺旋(α-helix) β-折叠(β-pleated sheet) β-转角(β–turn or β-bend) 无规卷曲(random coil) α-helix ①多个肽平面通过Cα的旋转，相互之间紧密盘曲成稳固的右手螺旋。 ②主链螺旋上升，每3.6个氨基酸残基上升一圈，螺距0.54nm。肽平面和螺旋长轴平行。 ③相邻两圈螺旋之间借肽键中羰基氧(C＝O)和亚氨基氢(NH)形成许多链氢键，即每一
基础护理学常考知识点汇总－最新版（1 到50） 2015-06-11 医护之家 1.护理学的形成经历了人类早期护理（以自我护理、家庭护理为主）、中世纪的护理（以宗教护理、医院护理为主,护理工作仅限于生活照料）、文艺复兴与宗教革命时期的护理、护理学的诞生（19世纪中叶，南丁格尔首创了科学的护理专业）。 2.1912年国际护士会将5月12日（南丁格尔的生日）定为国际护士节。中华护士会成立于l909年，l936年改名为中华护士学会，1964年改名为中华护理学会。 3.现代护理学的发展经历了以疾病为中心、以病人为中心和以人的健康为中心三个阶段。 4.1860年，南丁格尔在英国的圣托马斯医院创办了世界上第一所护士学校。1888年，美国护士约翰逊在福州一所医院里开办了我国第一所护士学校。1950年，第一届全国卫生工作会议将护理教育列为中专教育之一。1995年6月25日，全国开始了首次护士执业考试。 5.护理学的性质～是一门生命科学中综合了自然、社会及人文科学的应用性科学。护理学的范畴包括理论范畴和实践范畴，其中实践范畴包括临床护理（基础护理、专科护理）、社区保健、护理教育、护理管理和护理科研等方面。 6.人、健康、环境和护理是护理学最基本的四个概念，其中，核心是人，即护理实践是以人的健康为中心的活动。护理中的人包括个人、家庭、社区和社会四个层面。 7.随着护理学科的发展，护理的服务对象从单纯的病人扩大到健康人群，即护理的服务对象是所有的人。 8.1990年WH0把健康定义为：健康，不仅是没有疾病，而且包括躯体健康、心理健康、社会适应良好和道德健康。没有绝对的健康或疾病状态，健康是动态的过程。 9.1980年美国护士学会将护理定义为“护理是诊断和处理人类现存的和潜在的健康问题的反应”。 10.成长与发展是持续的、有顺序的，并按照有规律的和可预测的方式进行。 11.机体的环境包括内环境和外环境。
生物化学知识点整理 注： 1.此材料根据老师的PPT及课堂上强调需掌握的内容整理 而成，个人主观性较强，仅供参考。（如有错误，请以课本为主） 2.颜色注明：红色：多为名解、简答（或较重要的内容） 蓝色：多为选择、填空 第八章脂类代谢 第一节脂类化学 脂类：包括脂肪和类脂，是一类不溶于水而易溶于有机溶剂，并能为机体利用的有机化合物。 脂肪：三脂肪酸甘油酯或甘油三酯。 类脂：胆固醇、胆固醇酯、磷脂、糖脂。
第二节脂类的消化与吸收 脂类消化的主要场所：小肠上段 脂类吸收的部位：主要在十二指肠下段及空肠上段 第三节三酰甘油（甘油三酯）代谢 一、三酰甘油的分解代谢 1.1）脂肪动员：储存在脂肪细胞中的脂肪，被肪脂酶逐步水解为 脂肪酸及甘油，并释放入血以供其他组织氧化利用的过程。 2）关键酶：三酰甘油脂肪酶 （又称“激素敏感性三酰甘油脂肪酶”，HSL） 3）脂解激素：能促进脂肪动员的激素，如胰高血糖素、去甲肾
上腺素、肾上腺素等。 4）抗脂解激素：抑制脂肪动员，如胰岛素、前列腺素、烟酸、 雌二醇等。 2.甘油的氧化 甘油在甘油激酶的催化下生成3-磷酸甘油，随后脱氢生成磷酸二羟丙酮，再经糖代谢途径氧化分解释放能量或经糖异生途径生成糖。 3.脂肪酸的分解代谢 饱和脂肪酸氧化的方式主要是β氧化。 1）部位：组织：脑组织及红细胞除外。心、肝、肌肉最活跃； 亚细胞：细胞质、线粒体。 2）过程： ①脂酸的活化——脂酰CoA的生成（细胞质） 脂肪酸 脂酰 消耗了2 ②脂酰CoA进入线粒体 酶：a.肉碱酰基转移酶 I（脂肪酸氧化分解的关键酶、限速酶） b.肉碱酰基转移酶Ⅱ c.脂酰肉碱——肉碱转位酶（转运体） ③脂酸的β氧化 a.脱氢：脂酰
一、蛋白质化学 蛋白质的特征性元素（N），主要元素：C、H、O、N、S，根据含氮量换算蛋白质含量：样品蛋白质含量=样品含氮量*6.25 （各种蛋白质的含氮量接近，平均值为16%）， 组成蛋白质的氨基酸的数量（20种），酸性氨基酸/带负电荷的R基氨基酸：天冬氨酸（D）、谷氨酸（E）； 碱性氨基酸/带正电荷的R基氨基酸：赖氨酸（K）、组氨酸（H）、精氨酸（R） 非极性脂肪族R基氨基酸：甘氨酸（G）、丙氨酸（A）、脯氨酸（P）、缬氨酸（V）、亮氨酸（L）、异亮氨酸（I）、甲硫氨酸（M）； 极性不带电荷R基氨基酸：丝氨酸（S）、苏氨酸（T）、半胱氨酸（C）、天冬酰胺（N）、谷氨酰胺（Q）； 芳香族R基氨基酸：苯丙氨酸（F）、络氨酸（Y）、色氨酸（W） 肽的基本特点 一级结构的定义：通常描述为蛋白质多肽链中氨基酸的连接顺序，简称氨基酸序列（由遗传信息决定）。维持稳定的化学键：肽键（主）、二硫键（可能存在）， 二级结构的种类：α螺旋、β折叠、β转角、无规卷曲、超二级结构， 四级结构的特点：肽键数≧2，肽链之间无共价键相连，可独立形成三级结构，是否具有生物活性取决于是否达到其最高级结构 蛋白质的一级结构与功能的关系：1、蛋白质的一级结构决定其构象 2、一级结构相似则其功能也相似3、改变蛋白质的一级结构可以直接影响其功能因基因突变造成蛋白质结构或合成量异常而导致的疾病称分子病，如镰状细胞贫血（溶血性贫血），疯牛病是二级结构改变 等电点（pI）的定义：在某一pH值条件下，蛋白质的净电荷为零，则该pH值为蛋白质的等电点（pI）。 蛋白质在不同pH条件下的带电情况（取决于该蛋白质所带酸碱基团的解离状态）：若溶液pH
基础护理学复习大总结 1、医院环境的总体要求是：安全性、舒适性、整洁性、安静性。 2、医院适宜的温度是：一般病室的温度保持在18～22℃；新生儿、老年科 室及治疗检查时温度保持在22～24℃。室温过高会使神经系统受 到抑制，干扰消化及呼吸功能，不利于体热的散发，使人烦躁，影 响体力恢复；室温过低则因冷的刺激，使人畏缩，缺乏动力，又可 能会造成患者在诊疗护理时受凉。 3、适宜的病室湿度为：50---60%。当湿度过高时，蒸发作用弱，可抑制出 汗，患者感到气闷不适，尿液排出量增加，加重肾脏负担，对患 有心、肾疾病的患者又为不利；湿度过低时，空气干燥，人体蒸 发大量水分，引起口干舌燥，咽痛，烦渴等表现，对呼吸道疾患 或气管切开患者不利。 4、室内通风的作用：可使室内空气流通，与外界空气进行交换，保持室内 空气新鲜，调节室内温湿度,增加患者舒适感，降低室内空气污染， 减少呼吸道疾病的传播。 5、噪音是指：凡与环境不协调的声音，患者感觉不愉快的声音均为噪音。 WHO规定：医院白天的噪音强度在35～45dB内。2、医院常见不安 全因素有哪些？如何预防 6、平车运送病人的注意事项：搬运患者时动作轻稳，协调一致，车速适宜， 确保患者安全、舒适。搬运患者时，尽量让患者身体靠近搬运者， 使重力线通过支撑面，保持平衡，又因缩短重力臂达到省力。推 车时，护士应站于患者头侧，便于观察病情，要注意患者面色、 呼吸及脉搏的变化。下坡时，患者头部应在高处一端，以免引起 不适患者的头部应卧于大轮一端。搬运骨折患者时车上需垫木板， 并固定好骨折部位。有输液及引流管，须保持通畅。推车进门时，
应先将门打开，不可用车撞门，以免引起患者的不适或损坏建筑 物。 7、去枕仰卧位适用范围: 答：（1）昏迷或全身麻醉未清醒的患者；（2）椎管内麻醉或脊 髓穿刺后的患者 半坐卧位适用范围 答:（1）心肺疾患所引起呼吸困难的患者；（2）胸、腹、盆腔手 术后或有炎症的患者（3）某些面部及颈部手术后的患者；（4） 恢复期体质虚弱的患者 .端坐位适用范围 答:心力衰竭、心包积液及支气管、哮喘发作的患者 8、协助患者变换卧位时注意事项有：（1）颅脑术后，一般只能卧于健侧或 平卧；（2）颈椎、颅骨牵引的患者，翻身时不可放松牵引；（3） 各种导管和输液装置应安置妥当，防止翻身时导管连接处脱落或 扭曲受压；（4）石膏固定和伤口较大的患者，翻身后将患处放于 适当的位置，防止受压；（5）操作时使患者尽量靠近护士，以缩 短重力臂，达到省力的目的。 9、压疮：是局部组织长期受压，血液循环障碍，发生持续缺血、缺氧、营 养不良而导致的组织溃烂、坏死。 预防压疮发生的护理措施：应做到勤观察、勤翻身、勤擦洗、勤按摩、勤整理、勤更换。 （1）避免局部组织长期受压：定时翻身,减少组织的压力；保护骨 隆突处和支持身体空隙处。正确使用石膏、绷带及夹板固定。（2） 避免局部潮湿等不良刺激；（3）促进局部血液循环：全范围的关 节运动、按摩受压部位；（4）改善机体营养状况。 10、何谓医院感染：是指患者、探视者和医院职工在医院内受到感染并出现 症状。WHO提出的控制医院感染的关键措施有：清洁、消毒、灭 菌；无菌技术；隔离技术；合理使用抗生素。 11、医院感染的形成必须具备三个条件：感染源、传播途径、易感宿主。
生物化学知识点总结 一、蛋白质 蛋白质的元素组成：C、H、O、N、S 大多数蛋白质含氮量较恒定，平均16%，即1g氮相当于6.25g蛋白质。6.25称作蛋白质系数。 样品中蛋白质含量=样品中含氮量×6.25 蛋白质紫外吸收在280nm，含3种芳香族氨基酸，可被紫外线吸收 等电点（pI）：调节氨基酸溶液的pH值，使氨基酸所带净电荷为零，在电场中，不向任何一极移动，此时溶液的pH叫做氨基酸的等电点。 脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质，其余的氨基酸与茚三酮反映均产生蓝紫色物质。氨基酸与茚三酮反应非常灵敏，几微克氨基酸就能显色。 肽平面：肽键由于C-N键有部分双键的性质，不能旋转，使相关的6个原子处于同一平面，称作肽平面或酰胺平面。 生物活性肽：能够调节生命活动或具有某些生理活动的寡肽和多肽的总称。 1）谷胱甘肽：存在于动植物和微生物细胞中的一种重要三肽，由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）组成，简称GSH。由于GSH含有一个活泼的巯基，可作为重要的还原剂保护体内蛋白质或酶分子中的巯基免遭氧化，使蛋白质或酶处在活性状态。 寡肽：10个以下氨基酸脱水缩合形成的肽 多肽：10个以上氨基酸脱水缩合形成的肽 蛋白质与多肽的区别： 蛋白质：空间构象相对稳定，氨基酸残基数较多 多肽：空间构象不稳定，氨基酸残基数较少 蛋白质的二级结构：多肽链在一级结构的基础上，某局部通过氢键使肽键平面进行盘曲，折叠，转角等形成的空间构象。 α?螺旋的结构特点： 1）以肽键平面为单位，以α?碳原子为转折盘旋形成右手螺旋；肽键平面与中心轴平行。2）每3.6个氨基酸残基绕成一个螺圈，螺距为0.54nm，每个氨基酸上升0.15nm。
第二章环境 第一节环境与健康 一、环境：是影响人类生命和生长的全部机体内部因素和外界条件的总和。 （环境是人类进行生产和生活活动的场所，是人类生存和发展的基础。） 分类：内环境（生理环境、心理环境）、外环境（自然环境、社会环境） 二、环境因素对健康的影响 （一）自然环境因素对健康的影响 1、自然气候的影响： 2、地形地质的影响：如环境中缺碘会导致地方性甲状腺肿；环境中氟过量会导致氟骨症；地方性砷中毒、克山 病等都与当地地质物质成分的含量有关。 3、环境污染的影响：（1）大气污染、（2）水污染、（3）土壤污染、（4）噪声污染、（5）吸烟污染 （6）温度过高或过低、（7）辐射、（8）废料、（9）室内空气污染 大气污染：毒物由呼吸道进入机体是危害最大 水污染：引起急性中毒、致癌至畸致突变、以水为媒介的传染病 5月21日世界无烟日 （二）社会环境因素对健康的影响 影响因素：1、社会经济2、社会阶层3、社会关系4、文化因素5、生活方式6、卫生服务 三、护理与环境的关系 ?南丁格尔在护理工作中就已注意到环境对健康的影响，她曾说过：“症状和痛苦一般认为是不可避免的，并且 发生疾病常常不是疾病本身的症状而是其它的症状——全部或部分需要空气、光线、温暖、安静、清洁、合适的饮食等”。 ?护理的基本任务：减轻痛苦、预防疾病、恢复健康、促进健康。 第二节医院环境 一、医院环境的特点及其分类 医院：是对特定的人群进行治病防病的场所，是专业人员在以治疗为目的的前提下创造的一个适合患者恢复身心健康的环境。 良好的医院环境应具备的特点（※）：1）医学专业化、2）安全舒适性、3）管理统一性 医院环境的分类（※） （1）物理环境 （2）社会环境 ?医疗服务环境：指以医疗技术、人际关系、精神面貌及服务态度等为主的人文社会环境。 属软环境，是深层次的，抽象的，无形的。 ?医院管理环境：属软环境。 二、医院环境的调控 （一）医院物理环境的调控（※） （1）空间：病床之间的距离不得少于1米。 （2）温度：一般室温保持在18～22℃较为适宜。新生儿及老年病人，室温以保持在22～24℃为佳。 （3）湿度 ?相对湿度：在单位体积的空气中，一定温度的条件下，所含水蒸气的量与其达到饱和时含量的百分比。 ?病室湿度以50%～60%为宜。 （4）通风：一般通风30分钟即可达到换置室内空气的目的。 （5）噪声 ?噪声的单位是分贝(dB)世界卫生组织规定噪声的标准，白天病室较理想的强度是35～40分贝。噪声强度在50～60分贝时，即能产生相当的干扰。 ?长时间处于90分贝以上高音量环境中，能导致耳鸣、血压升高、血管收缩、肌肉紧张，以及出现焦躁、易怒、头痛、失眠等症状。 工作人员在说话、行动与工作时应特别注意四轻（※）：说话轻走路轻操作轻关门轻（6）光线：病室采光一般采用自然光源和人工光源
第一章蛋白质的结构与功能 第一节蛋白质的分子组成 一、蛋白质的主要组成元素：C、H、O、N、S 特征元素：N（16%）特异元素：S 凯氏定氮法：每克样品含氮克数×6.25×100＝100g样品中蛋白质含氮量（g%） 组成蛋白质的20种氨基酸 （名解）不对称碳原子或手性碳原子：与四个不同的原子或原子基团共价连接并因而失去对称性的四面体碳 为L-α-氨基酸，其中脯氨酸（Pro）属于L-α-亚氨基酸 不同L-α-氨基酸，其R基侧链不同 除甘氨酸（Gly）外，都为L-α-氨基酸，有立体异构体 组成蛋白质的20种氨基酸分类 非极性氨基酸：甘氨酸（Gly）、丙氨酸（Ala）、缬氨酸（Val）、 亮氨酸（Leu）、异亮氨酸（Ile）、脯氨酸（Pro） 极性中性氨基酸：丝氨酸（Ser）、半胱氨酸（Cys）、蛋氨酸（Met） 天冬酰胺（Asn）、谷氨酰胺（Gln）、苏氨酸（Thr） 芳香族氨基酸：苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）、酪氨酸（Tyr） 酸性氨基酸：天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu） 碱性氨基酸：赖氨酸（Lys）、精氨酸（Arg）、组氨酸（His） 其中：含硫氨基酸包括：半胱氨酸、蛋氨酸 四、氨基酸的理化性质 1、两性解离及等电点 ①氨基酸分子中有游离的氨基和游离的羧基，能与酸或碱类物质结合成盐，故它是一种两性电解质。 ②氨基酸是两性电解质，其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。 ③（名解）等电点（pI点）：在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性，此时溶液的pH称为该氨基酸的等电点。 pH
专题1 基因工程 ※基因工程的概念： 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。 ﹡原理：基因重组 ﹡目的：创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 ﹡意义：能够打破生物种属的界限（即打破生殖隔离，克服远源杂交不亲和的障碍），在分子水平上定向改变生物的遗传特性。 ﹡操作水平：DNA分子水平 【思考】： （1）基因工程的物质基础是：所有生物的DNA均由四种脱氧核苷酸组成。 （2）基因工程的结构基础是：所有生物的DNA均为双螺旋结构。 （3）一种生物的DNA上的基因之所以能在其他生物体内得以进行相同的表达，是因为它们共用一套遗传密码子。 一、基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端（回文结构特点）。 ①在中心轴线两侧将DNA切开，切口是黏性末端。 ②沿着中心轴线切开DNA，切口是平末端。 2.“分子缝合针”——DNA连接酶
（1）分类：根据酶的来源不同，可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类 （2）功能：恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 ★两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键 ②区别：E．coIiDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接； T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。 (3)与DNA聚合酶作用的异同: DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 （4）与DNA分子相关的酶
转］基础护理学的复习大总结啦都转回去慢慢看呀 1、医院环境的总体要求是：安全性、舒适性、整洁性、安静性。 2、医院适宜的温度是：一般病室的温度保持在18?22C；新生儿、老年科室及治疗检杏时温度保持 在22?24C。室温过高会使神经系统受到抑制，干扰消化及呼吸功能，不利于体热的散发，使人烦躁，影响体力恢复；室温过低则因冷的刺激，使人畏缩，缺乏动力，又可能会造成患者在诊疗护理时受凉。 3、适宜的病室湿度为50-60%o当湿度过高时，蒸发作用弱，可抑制出汗，患者感到气闷不适，尿液 排出量增加，加重仔脏负担，对患有心、肾疾病的患者又为不利；湿度过低时，空气干燥，人体蒸发大量水分，引起口干舌燥，咽痛，烦渴等表现，对呼吸道疾患或气管切开患者不利。 4、室内通风的作用可使室内空气流通，与外界空气进行交换，保持室内空气新鲜，调节室内温湿 度，增加患者舒适感，降低室内空气污染，减少呼吸道疾病的传播。 5、噪音是指凡与环境不协调的声音，患者感觉不愉快的声音均为噪音。 WHO规定：医院白天的噪音强度在35?45dB内。2、医院常见不安全因素有哪些？如何预防 6、平车运送病人的注意事项：搬运患者时动作轻稳，协调一致，车速适宜，确保患者安全、舒适。 搬运患者时，尽量让患者身体靠近搬运者，使重力线通过支撑面，保持平衡，又因缩短重力臂达到省力。推车时，护士应站于患者头侧，便于观察病情，要注意患者面色、呼吸及脉搏的变化。下坡时，患者头部应在高处一端，以免引起不适患者的头部应卧于大轮一端。搬运骨折患者时车上需垫木板，并固定好骨折部位。有输液及引流管，须保持通畅。推车进门时，应先将门打开，不可用车撞门，以免引起患者的不适或损坏建筑物。 7、去枕仰卧位适用范围： 答：（1）昏迷或全身麻醉未清醒的患者；（2）椎管内麻醉或有髓穿刺后的患者 半坐卧位适用范围 答：（1）心肺疾患所引起呼吸困难的患者；（2）胸、腹、盆腔手术后或有炎症的患者 （3）某些面部及颈部手术后的患者；（4）恢复期体质虚弱的患者 .端坐位适用范围 答:心力衰竭、心包积液及支气管、哮喘发作的患者 8、协助患者变换卧位时注意事项有：（1）颅脑术后，一般只能卧于健侧或平卧；（2）颈椎、颅骨 牵引的患者，翻身时不可放松牵引；（3）各种导管和输液装置应安置妥当，防II：翻身时导管连接处脱落或扭曲受压；（4）石膏固定和伤口较大的患者，翻身后将患处放于适当的位置，防止受压；（5）操作时使患者尽量靠近护士，以缩短重力臂，达到省力的目的。 9、压疮：是局部组织长期受压，血液循环障碍，发生持续缺血、缺氧、营养不良而导致的组织溃 烂、坏死。 预防压疮发生的护理措施：应做到勤观察、勤翻身、勤擦洗、勤按摩、勤整理、勤更换。 （1）避免局部组织长期受压：定时翻身，减少组织的压力；保护骨隆突处和支持身体空隙处。正确使用石有、绷带及夹板固定。（2）避免局部潮湿等不良刺激；（3）促进局部血液循环：全范围的关节运动、按摩受压部位；（4）改善机体营养状况。 10、何谓医院感染：是指患者、探视者和医院职工在医院内受到感染并出现症状。 WHO提出的控制医院感染的关键措施有：清洁、消毒、灭菌；无菌技术；隔离技术；合理使用抗生素。 11、医院感染的形成必须具备三个条件：感染源、传播途径、易感宿主。 12、清洁：清洁是指用物理方法清除物体表面的污垢、尘埃和有机物，目的是去除和减少微生物，
生物化学重点知识归纳 酶的知识点总结 一、酶的催化作用 1、酶分为：单纯蛋白质的酶和结合蛋白质的酶，清蛋白属于单纯蛋白质的酶 2、体内结合蛋白质的酶占多数，结合蛋白质酶由酶蛋白和辅助因子组成，辅助因子分为辅酶、辅基;辅酶和酶蛋白以非共价键结合，辅基与酶蛋白结合牢固，一种酶蛋白只能与一种辅助因子结合，所以酶蛋白决定酶反应特异性。结合蛋白质酶;酶蛋白：决定酶反应特异性;辅酶：结合不牢固辅助因子辅基：结合牢固，由多种金属离子;结合后不能分离 3、酶的活性中心：酶分子中直接与底物结合，并催化底物发生化学反应的局部空间结构 4、酶的有效催化是降低反应的活化能实现的。 二、辅酶的种类口诀：1脚踢，2皇飞，辅酶1,NAD, 辅酶2,多个p; 三、酶促反应动力学：1 Km为反应速度一半时的[S](底物浓度)，亦称米氏常数，Km增大，Vmax不变。
2、酶促反应的条件：PH值：一般为最适为7.4，但胃蛋白酶的最适PH为1.5，胰蛋白酶的为7.8;温度：37—40℃; 四、抑制剂对酶促反应的抑制作用 1、竞争性抑制：Km增大，Vmax不变;非抑制竞争性抑制：Km不变，Vmax减低 2、酶原激活：无活性的酶原变成有活性酶的过程。 (1)盐酸可激活的酶原：胃蛋白酶原 (2)肠激酶可激活的消化酶或酶原：胰蛋白酶原 (3)胰蛋白酶可激活的消化酶或酶原：糜蛋白酶原 (4)其余的酶原都是胰蛋白酶结合的 3、同工酶：催化功能相同，但结构、理化性质和免疫学性质各不相同的酶。 LDH分5种。LDH有一手(5种)，心肌损伤老4(LDH1)有问题，其他都是HM型。 脂类代谢的知识点总结 1、必需脂肪酸：亚麻酸、亚油酸、花生四烯酸(麻油花生油) 2、脂肪的能量是最多的，脂肪是禁食、饥饿是体内能量的主要来源
基因工程 一、基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在 二、基因工程的基本工具 1、限制性核酸内切酶-----“分子手术刀” 2、DNA连接酶-----“分子缝合针” 3、基因进入受体细胞的载体-----“分子运输车” 1．“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）存在：主要存在于原核生物中。 （2）特性：特异性，一种限制酶只能 识别一种特定的核苷酸序列，并且能在 特定的切点上切割DNA分子。 （3）切割部位：磷酸二酯键 （4）作用：能够识别双链DNA分子的 某种特定核苷酸序列，并且使每一条链 中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸 二酯键断开。
（5）识别序列的特点： （6）切割后末端的种类：DNA 分子经限制酶切割产生的DNA 片段末端通常有两种形式——黏性末端和平末端。当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA 的两条链分别切开时，产生的是黏性末端，而当限制酶在它识别序列的中轴线处切开时，产生的则是平末端。
2．“分子缝合针”——DNA连接酶 （1）作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。 （2）类型 相同点：都连接磷酸二酯键 3．“分子运输车”——载体 (1)载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一个至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 (2)最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 (3)其他载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒。 (4)载体的作用: ①作为运载工具，将目的基因送入受体细胞。 ②在受体细胞内对目的基因进行大量复制。 【解题技巧】 (1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。 (2)限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。 (3)在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。 (4)获取一个目的基因需限制酶剪切两次，共产生4个黏性末端或平末端。 (5)不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端一般不相同。 (6)限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测。 (7)基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同。基因工程中的载体是DNA分子，能将目的