LC-M S/M S法测定脑微透析液中乙酰胆碱的浓度
彭娟,范斌3,于友华,王丹巧,焦玥,吴晓霞
(中国中医科学院医学实验中心,北京100700)
摘要 目的:建立能够灵敏、特异、准确、可靠地测定脑微透析液中乙酰胆碱浓度的分析方法,用于药物干预下脑神经递质变化的研究。方法:建立乙酰胆碱液质联用检测方法,条件是ESI(+)离子源,MRM扫描检测离子对为乙酰胆碱m/z146→87,氘代乙酰胆碱-d9(内标)m/z155→87。开展方法学考察,以验证新建分析方法的准确性、精密度等,在此基础上将该方法用于分析大鼠脑微透析手术后的实际样品,以验证新建分析方法的适用性。结果:乙酰胆碱浓度在010292～1146ng ?mL-1范围内线性良好(r=019979),检测限为0100292ng?mL-1;高、中、低浓度的准确度为9611%～11117%;日内精密度(n=6)为118%～718%,日间精密度(n=3)为210%～1912%。结论:应用LC-M S/M S技术建立不使用胆碱酯酶抑制剂测定大鼠脑微透析液中乙酰胆碱的方法迅速、灵敏、可靠。
关键词:乙酰胆碱;内标氘代乙酰胆碱-d
9
;液质联用
中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:0254-1793(2009)09-1470-05
HP LC-M S/M S deter m i n ati on of acetylcholi n e
i n m i crodi a lys ates fro m rats bra i n
PENG Juan,F AN B in3,Y U You-hua,WANG Dan-qiao,J I A O Yue,WU Xiao-xia
(Experi m ental Research Center China Acade my of China Medical Sciences,Beijing100700,China)
Abstract O bjecti ve:T o devel op a sensitive and reliable method f or deter m inati on of acetylcholine in m icr odialy2 sates fr om rats brain1M ethods:The detecti on was perf or med byMRM mode via electr os p ray i onizati on(ESI)s ource operating in the positive i onizati on mode;The p recurs or-t o-p r oduct i on transiti ons of the analyte acetylcholine is m/z146→87with internal standard(acetylcholine-d9)at m/z155→871The op ti m al i onizati on and frag mentati on conditi ons,as well as liquid chr omat ographic ones,t o detect acetylcholine were devel oped and validated.The ne w devel oped analytical method was further app lied in deter m inati on of acetylcholine in m icr odialysates fr om rats brain after intracerebral perfusi on of6-hydr oxydopa m ine(6-OHDA).Results:The method was linear over the concen2 trati on range of010292-1146ng?mL-1(r=019979);The li m it of quantificati on is0100292ng?mL-1;The ac2 curacy was9611%-11117%;The intra-and inter-day p recisi on values were118%-718%(n=6)and210% -1912%(n=3),res pectively.Conclusi on:The fully validated LC-MS/MS method has been successfully ap2 p lied t o deter m inati on of acetylcholine in m icr odialysates fr om rats brain.
Key words:acetylcholine;internal standard(acetylcholine-d9);LC-MS/MS
乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)是一种经典的兴奋性神经递质,通过结合特异受体,在神经细胞之间或神经细胞与效应器细胞之间中起着信息传递作用。乙酰胆碱及其受体存在于从细菌到人类、从神经细胞到其他多种非神经细胞中,提示它是一类与系统发生相关的古老分子,可能不仅仅具有作为生理性递质的传递功能。
多种人类疾病与乙酰胆碱及其受体相关[1],而脑中的乙酰胆碱尤为重要,它是传导联络大脑神经元的一种主要物质,是多重神经系统学习和记忆过程的重要神经递质。人体缺少乙酰胆碱则会加速脑细胞的衰老,使记忆力显著下降,甚至导致老年痴呆[2]。
液质联用技术在现代药物分析研究中发挥着越
3通讯作者 Tel:(010)64014411-3324;E-mail:binf@2631net
来越重要的作用。液相色谱是最常用的分离分析工具,与质谱联用则可以更灵敏、特异、高效、快速地完成从分离到分析的一整套操作。作者将液质联用应用到不使用胆碱酯酶抑制剂检测脑微透析液中乙酰胆碱的浓度,为展开在药物干预下脑神经递质变化的研究打下了坚实的基础。
1 材料
111 药物及试剂氯化乙酰胆碱(acetylcholine chl oride)对照品(纯度>99%),购于Sig m a公司;
内标溴化氘代乙酰胆碱-d
9
对照品(acetylcholine -d9br om ide,氘代率9917%),购于CDN公司。乙腈(农残级)、异丙醇(色谱纯)、甲酸铵(色谱纯)、甲酸(色谱纯)均购于北京迪科马科技有限公司;超纯水为自制。复方氯化钠注射液(含氯化钠0185%、氯化钾0103%、氯化钙01033%),购于双鹤药业。
112 仪器Agilent6410QQQ LC-MS分析系统,由美国Agilent RRLC液相色谱仪及Agilent6410 QQQ三重四级杆质谱检测器组成,工作站为Masshunter。赛多利斯ariumμ61316/611VF超纯水处理器、赛多利斯BT25S分析天平、Anke TG L-16G 离心机,上海安亭科学仪器厂。
113 动物S D大鼠,雄性,体重(200±20)g,由中国药品生物制品检定所实验中心提供,许可证编号SCXK(京)2005-004。
2 样品分析方法的建立与验证
211 液质分析条件液相色谱条件:采用A tlan2 tisμH I L I C Silica(211mm×150mm,3μm)色谱柱,流动相为25mmol?L-1甲酸铵水溶液(pH=3)-乙腈(011%甲酸)(18∶82),流速014mL?m in-1,柱温36℃,进样体积20μL。质谱条件:ESI离子源,正离子检测方式,选择MR M模式进行二级质谱分析;离子源条件:干燥气温度300℃,干燥气流量10 L?m in-1,雾化器压力01413MPa,毛细管电压118 k V;乙酰胆碱m/z146→87,氘代乙酰胆碱-d9内标m/z155→87;最优碎裂电压均为90V,最优碰撞能量(CE)均为12V。
212 内标溶液的配制精密称取溴化氘代乙酰
胆碱-d
9
适量,以水为溶剂配制浓度为01155mg ?mL-1的储备液。以异丙醇-乙腈(40∶60,含011%甲酸)为溶剂配制01155ng?mL-1内标溶液。
213 供试品溶液取样品20μL,加入5倍体积量的01155ng?mL-1内标溶液,混匀,即得。超出线性范围的样品采用稀释的方法,以复方氯化钠注射液为溶剂稀释至线性范围内,再取稀释液20μL,加入5倍体积量的01155ng?mL-1内标溶液,测得浓度,再以稀释比例计算出实际样品浓度。
214 方法专属性考察在本文的试验条件下,复方氯化钠注射液不经处理直接进样进行LC-M S/ M S分析,未检测到乙酰胆碱及内标,说明本方法具有较好的专属性。乙酰胆碱及氘代乙酰胆碱-d9LC-M S/M S分析的质谱图见图1,色谱图见图2
。
图1 乙酰胆碱(A)及氘代乙酰胆碱-d
9
(B)的二级质谱图
Fig1MRM mass s pectra of acetylcholine(A)and acetylcholine-d9 (B)
215 线性关系及检测限精密称定氯化乙酰胆碱对照品,以水为溶剂配制成乙酰胆碱浓度为1146 mg?mL-1的储备溶液,再以水为溶剂,稀释储备液至乙酰胆碱为1416ng?mL-1,标记为“A液”,精密量取不同体积的A液至5mL量瓶中,以复方氯化钠溶液定容,配成相当于乙酰胆碱浓度为010292, 010730,01146,01292,01730,11460ng?mL-1的对照品溶液。取各浓度对照品溶液20μL,加入5倍体积量的01155ng?mL-1内标溶液,混匀,进行LC -MS/MS分析。以乙酰胆碱与氘代乙酰胆碱-d9的峰面积之比(Y)对浓度(X)进行线性回归,回归方程为:
Y=11748X+010490r=019979
线性范围为010292～1146ng?mL-1。检测限为0100292ng?mL-1(S/N≥3)。
图2 不同样品中乙酰胆碱及其氘代乙酰胆碱-d
9
的总离子流图及提取离子色谱图
Fig2Total i on current and extract i on current chr omat ogra m s of acetylcholine and acetylcholine-d9
A.复方氯化钠注射液(compound s odium chl oride injecti on)
B.对照品氯化乙酰胆碱(1.46ng?mL-1)及内标溴化氘代乙酰胆碱-d9[com2 pound s odium chl oride s p iked with acetylcholine chl oride(1146ng?mL-1)and acetylcholine-d9br om ide]
C.大鼠微透析样品,80m in收集的样品(m icr odialysates sa mp le fr om rats brain,collected at80m in)
1.乙酰胆碱(acetylcholine)
2.氘代乙酰胆碱-d9(acetylcholine-d9)
216 准确性同“215”项下方法制备高、中、低浓度分别为11460,01730,010292ng?mL-1的质控(QC)样品各6份,加入5倍体积量的01155ng?mL-1内标溶液,混匀,进行LC-M S/M S分析。由实测浓度与质控样品标示浓度之比评价准确性。结果见表1。
217 精密度在同一天内取“215”项下制备的高、中、低浓度分别为11460,01730,010292ng?mL-1的
表1 乙酰胆碱浓度测定方法的准确性(n=6) Tab1Accuracy va lues for acetylcholi n e
fro m the a ss ay QC st andards
标示浓度
(label concentrati on)
/ng?mL-1
实测浓度
(measured concentrati on)
/ng?mL-1
准确性
(accuracy)/%
RS D/%
1146011402±010*********
0173001704±010*********
010*********±01002711117718
对照品溶液20μL各6份,加入5倍体积量的01155 ng?mL-1内标溶液,混匀,进行LC-MS/MS分析,考察分析方法的日内精密度。取“215”项下制备的高、中、低3种浓度的对照品溶液20μL,各3份,连续3d进行测定,求得每天3份平行样的平均值,以3d的平均值求RS D(n=3),考察分析方法的日间精密度。结果见表2。
表2 乙酰胆碱浓度测定方法的日内精密度及日间精密度Tab2I n tra-day and i n ter-day prec isi on for acetylcholi n e fro m the a ss ay QC st andards
标示浓度(label concentrati on)
/ng?mL-1
日内(intra-day)(n=6)日间(inter-day)(n=3)实测浓度(measured
concentrati on)
/ng?mL-1
RS D/%
实测浓度(measured
concentrati on)
/ng?mL-1
RS D/%
1146011402±0102611811391±01067210
0173001704±0101411901713±01052219
010*********±010027718010326±010201912
218 定量限以S/N≥10为定量限,并考察其质控样品准确性及精密度,检测结果表明准确性及精密度均符合要求,定量限为0103ng?mL-1。
219 稳定性取“215”项下制备的浓度为01292 ng?mL-1的对照品溶液,加入5倍体积量的01155 ng?mL-1内标溶液,混匀,于配制后第0,1,2h以及第2,3,4d进行LC-MS/MS分析。结果表明质控样品的溶液在4d内稳定(RS D为315%)。取大鼠微透析样品20μL,按“213”项所述方法制备供试品溶液,于配制后立即测定,并于第2,3d进行LC-MS/MS分析,结果表明供试品溶液在3d内稳定(RS D为311%)。
3 动物试验
对照组大鼠以1%戊巴比妥,按40mg?kg-1体重剂量腹腔注射麻醉,立体定位仪定位,于大鼠脑纹状体内埋入探针套管(定位坐标A:+0102c m;L: -0130c m;V:-01
35c m),次日,在清醒状态下插入微透析探针。以复方氯化钠注射液215μL?m in-1的速度灌流,平衡80m in后开始收集样品,以该时间点为0时间点,每20m in收集1管透析液。检测于0,20,40,60,80,100,120,140,160,180,200, 220,240,260,280,300,320,340,360,380,400m in 收集的样品。以对照组大鼠微透析样品乙酰胆碱浓度对时间作图,见图3-A。
给药组大鼠以1%戊巴比妥,按40mg?kg-1体重剂量腹腔注射麻醉,立体定位仪定位,于大鼠脑纹状体内埋入探针套管(定位坐标A:+0102c m;L: -0130c m;V:-0135c m)。次日,在清醒状态下插图3 对照组大鼠微透析样品(A)及模型大鼠微透析样品(B)的乙酰胆碱浓度-时间曲线图
Fig3 Concentrati on ti m e p r ofiles of Ach in m icr odialysates fr om rats brain of contr ol gr oup(A),and Ach in m icr odialysates fr om rats brain af2 ter intracerebral perfusi on of6-OHDA(B)
入微透析探针。以复方氯化钠注射液215μL?m in-1的速度灌流,平衡80m in后开始收集样品,以该时间点为0时间点,每20m in收集1管透析液,于收集第5管结束后,5m in内灌流6-羟基多巴(6-OHDA2%,以含2%维生素C的生理盐水配制)10μL,再继续以215μL?m in-1的速度灌流复方氯化钠注射液[3]。按“213”项所述方法进行样品处理后,于-25℃保存,待测。检测于0,20,40, 60,80,100,120,140,160,180,200,220,240,260, 280,300,320,340,360,380,400m in收集的样品,以给药大鼠微透析样品乙酰胆碱浓度对时间作图,见图3-B。
5 讨论
511 质谱条件考察考察使乙酰胆碱母离子m/z 146及氘代乙酰胆碱-d9m/z155信号强度最强的离子源条件。考察不同的毛细管电压(115,118,2,3 kV),结果以118kV最优;考察不同的干燥气流量(8,10,12L?m in-1),结果以10L?m in-1最优;考察不同的雾化器压力(01379,01413MPa),结果以01413MPa最优;考察不同的干燥气温度(280,300, 320℃),结果以300℃最优。考察使乙酰胆碱及氘代乙酰胆碱-d
9
二级质谱母离子/子离子m/z146→87及m/z155→87信号最强的碎裂电压(80,90, 95,100V)及碰撞能量(5,10,12,20V),两者分别均以90V和12V最优。
512 动物实验结果S D大鼠给予6-羟基多巴后,脑内神经递质乙酰胆碱的浓度有一个非常剧烈
的上升下降过程,说明6-羟基多巴可明显影响胆碱能系统。
513 讨论
微透析系统是通过透析原理对细胞间隙小分子物质活体取样及靶器官直接给药的新手段。因其实验损伤小,可以在清醒、自由活动的生物个体上同时进行多个位点的取样分析,并可长时间、动态地观察各部位化学物质的动态变化,具有整体和动态的特点。
乙酰胆碱是一种中枢胆碱能神经系统的重要递质,检测药物干预前后动物脑内乙酰胆碱水平的变化可反映药物对胆碱能系统的影响。乙酰胆碱是一种小分子、大极性化合物,无共轭结构因此无紫外吸收。[4],但是电化学检测器对使用环境要求苛刻较复杂。乙酰胆碱结构中带有正电荷的季铵氮原子,是最佳的适用于质谱ESI正离子模式检测的化合物,且液质联用较电化学检测器使用方便快捷,Hows ME等应用液质联用检测了乙酰胆碱,但是为了增强响应在样品中加入了胆碱酯酶抑制剂[5,6]。Zhang MY等应用液质联用检测生物样品中乙酰胆碱浓度,但未使用胆碱酯酶抑制剂[7]。本研究将液相色谱-质谱联用应用到检测脑微透析液中乙酰胆碱的浓度,且不使用胆碱酯酶抑制剂,从而保证在尽可能接近正常生理、病理及药效改变的状态下反映动物脑内乙酰胆碱变化,为展开在药物干预下脑神经递质变化的研究打下了坚实的基础。参考文献
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(本文于2008年10月16日收到)
专业项目课程课例 项目十二分光光度法测定水中铁离子含量 一、项目名称：分光光度法测定水中铁离子含量 二、项目背景分析 课程目标：本课程是培养分析化学操作技能和操作方法的一门专业实践课，以定量分析的基本理论为基础，以实验强化理论，以期提高化工工作者的分析操作能力。 功能定位：在定量分析中我们常常用到分光光度分析法，它具有操作简便、快速、准确等优点，在工农业生产和科学研究中具有很大的实用价值。是仪器分析的基础实验，也是一种重要的定量分析方法。分光光度法测定水中铁离子含量的测定项目综合训练了学生分光光度计使用、系列标准溶液配制、标准曲线绘制等多个技能。 学生能力：学生通过相关基础学科的学习已经具备了相应的化学知识和定量分析知识，也具备一定的独立操作和思维能力。 项目实施条件：该项目是仪器分析的基础实验，一般中职学校具备相关的实训实习条件，学生有条件完成相应的实习任务。 三、教学目标 1、了解721可见分光光度计的构造 2、了解分光光度法测定原理 3、掌握721可见分光光度计的操作方法 4、掌握分光光度法测定分析原始记录的设计 5、掌握分光光度法测定分析报告的设计 6、掌握分光光度法测定水中铁离子含量的测定方法 7、掌握分光光度法测定水中铁离子含量的分析原始记录和分析报告的填写 四、工作任务 1
2 五、参考方案 参考方案一 1、邻二氮杂菲-Fe 2+ 吸收曲线的绘制 用吸量管吸取铁标准溶液（20μg/mL ）0.00、2.00、4.00mL ，分别放入三个50mL 容量瓶中，加入1mL 10%盐酸羟胺溶液，2mL 0.1%邻二氮杂菲溶液和5mL HAc-NaAc 缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀。放置10min ，用3cm 比色皿，以试剂空白（即在0.0mL 铁标准溶液中加入相同试剂）为参比溶液，在440～560nm 波长范围内，每隔20～40nm 测一次吸光度，在最大吸收波长附近，每隔5～10nm 测一次吸光度。在坐标纸上，以波长λ为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制A 和λ关系的吸收曲线。从吸收曲线上选择测定Fe 的适宜波长，一般选用最大吸收波长λmax 。 2、标准曲线的制作 用吸量管分别移取铁标准溶液（20μg/mL ）0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL ，分别放入6个50mL 容量瓶中，分别依次加入1.00mL 10%盐酸羟胺溶液，稍摇动；加入2.00mL 0.1%邻二氮杂菲溶液及5.00mL HAc-NaAc 缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀。放置10min ，用1cm 比色皿，以试剂空白（即在0.00mL 铁标准溶液中加入相同试剂）为参比溶液，选择λmax 为测定波长，测量各溶液的吸光度。在坐标纸上，以含铁量为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制标准曲线。 3、水样中铁含量的测定 取三个50mL 容量瓶，分别加入5.00mL （或10.00mL 铁含量以在标准曲线范围内为合适）未知试样溶液，按实验步骤2的方法显色后，在λmax 波长处，用1cm 比色皿，以试剂空白为参比溶液，平行
含氯消毒剂常用浓度及配制方法 一、含氯消毒剂常用浓度 1、诊疗用品的消毒 （1）一般病人污染后诊疗用品用250?500mg/L有效氯浸泡。 （2）肝炎和结核菌病人污染后诊疗用品的消毒，用1000?2000mg/L有效氯。2、抹布、拖把的消毒 （1）擦床抹布：使用时用500mg/ L有效氯，用后用250mg/ L有效氯浸泡. （2）拖把：应用后用500mg/L有效氯消毒液浸泡30 min，清洗干净，晒干备用。 3、病区地面的消毒 （1）地面没有明显污染时，湿式清扫，每日用清水擦1?2次。 ⑵地面被病原菌污染时，用200~500mg/L有效氯消毒液擦洗后再清扫。 （3）地面被肝炎病毒污染，用1000mg/ L有效氯消毒液擦洗后再清扫。 4、病房各类用品（桌子、椅子、凳子、床头柜等）表面的消毒 病人出院或终末处理时，用含有效氯250~500m$ L的消毒剂溶液擦抹 消毒液配制方法：（消佳净原液为含有效氯5%以上） 1.250mg / L有效氯 配制：消佳净（原液）5ml +水995ml. 倍）2. 500mg / L有效氯 配制：消佳净（原液）10ml +水990ml. 3. 1000mg /L 有效氯 配制：消佳净（原液）20ml +水980ml. 4. 2000mg /L 有效氯 消毒剂有效成份含量的计算公式如下: 1. V=（ C7 x V ）/C ; 2. X二V—V; （稀释浓度200 （稀释浓度100 倍） 配制：消佳净（原液）40ml + 水960ml. （稀释浓度25倍）
C为使用说明书中标识的消毒剂原液的有效成份含量（浓度） V为所需消毒剂原液的体积。 C为欲配制消毒剂溶液的有效成份含量(浓度)。 W为欲配制消毒剂溶液的体积。 X为所需自来水的体积。 为便于大家尽快掌握消毒剂浓度的换算和使用液的配制，特举例如下： 例1,某含氯消毒剂的有效氯含量为50000mg/L ，需要配制有效氯含量为1000mg/L 的消毒剂溶液10升(10000ml)，应取消毒剂原液多少毫升？加水多少升？ V=( C7 x V )/C ; =(1000mg/L x 10000ml) /50000mg/L =200ml X=10000- 200=9800ml=9.8 升 故应取消毒剂原液200ml，加水9.8升，即可配制有效氯含量为1000 mg/L的消毒剂溶液10升。 例2,某含氯消毒剂的有效氯含量为0.5%，需要配制有效氯含量为1000mg/L 的消毒剂溶液10升(10000ml)，应取消毒剂原液多少毫升？加水多少升？ 有效氯含量为0.5%相当于100ml消毒剂中含有0.5g (500mg有效
分光光度法（附答案） 一、填空题1. 分光光度法测定样品的基本原理是利用朗伯-比尔定律，根据不同浓度样品溶液对光信号具有不同的_____，对待测组分进行定量测定。答案：吸光度(或吸光性，或吸收) 2. 分光光度法测定样品时，比色皿表面不清洁是造成测量误差的常见原因之一，每当测定有色溶液后，一定要充分洗涤。可用_____涮洗，或用_____浸泡。注意浸泡时间不宜过长，以防比色皿脱胶损坏。 答案：相应的溶剂(1+3)HNO 3 3. 分光光度法测定土壤中总砷时，制备土壤样品过程中，需取过2mm筛的土样，用玛瑙研钵将其研细至全部通过_____mm筛后，备用。答案：0.149 4. 光度法测定森林土壤全磷的样品，在碱熔完成后，应加入_____℃的水溶解熔块，并用硫酸和热水多次洗涤坩埚。答案：80 二、判断题 1. 应用分光光度法进行试样测定时，由于不同浓度下的测定误差不同，因此选择最适宜的测定浓度可减少测定误差。一般来说，透光度在20％~65％或吸光值在0.2~0.7之间时，测定误差相对较小。( ) 答案：正确 2. 分光光度法主要应用于测定样品中的常量组分含量。( ) 答案：错误正确答案为：分光光度法主要应用于测定样品中的微量组分。 3. 应用分光光度法进行样品测定时，同一组比色皿之间的差值应小于测定误差。( ) 答案：错误正确答案为：测定同一溶液时，同组比色皿之间吸光度相差应小于0.005，否则需进行校正。4. 应用分光光度法进行样品测定时，摩尔吸光系数随比色皿厚度的变化而变化。( ) 答案：错误正确答案为：摩尔吸光系数与比色皿厚度无关。 5. 分光光度法测定土壤中总砷时，在样品中加入酸，并在电热板上加热，目的是分解有机物和氧化样品中各种形态存在的砷，使之成为可溶态的砷。（）答案：正确 6. 分光光度法测定土壤中总砷时，应直接称取新鲜的土样进行测定。（）答案：错误正确答案为：应称取风干或冷冻干燥的样品测定。 7. 分光光度法测定土壤样品中总砷时，有机物会干扰测定，应加酸并加热分解，以消除其于扰。（） 答案：正确 8. 硼氢化钾-硝酸银分光光度法测定土壤中总砷时，样品消解过程中所加的酸分别是盐酸、硝酸和磷酸。（）答案：错误正确答案为：样品消解所加的酸分别是盐酸、硝酸和高氯酸。 9. 分光光度法测定生活垃圾或土壤中砷时，若所用试剂中含有少量氰化物，可用乙酸铅脱脂棉吸收去除。（）答案：错误正确答案为：乙酸铅脱脂棉吸收去除的是试剂中的硫化物。 10. 光度法测定土壤中全氮时，如需提供烘干基含量，则应测定土壤水分，并进行折算。（答案：正确 11. 光度法测定土壤中包括硝态和亚硝态氮的全氮时，若铁粉中含有大量的碳会干扰测定，所以在选择时应注意。（）答案：错误正确答案为：若铁粉含有大量的氮会干扰测定，所以在选择时应注意。
STY-2渗透压摩尔浓度检测仪操作规程 1. 仪器准备：接通仪器电源；打开仪器后部电源开关，仪器显示开机界面，仪器启动进行预冷，彩屏显示自检界面，约两分钟后停止，仪器预冷完毕，彩屏显示屏进入主界面。 2. 测试： 按键盘数字键1后，仪器显示页面，“按下手柄，开始测试”，测试操作（或者直接按下手柄）。 ●用取样器取出供试品60-80ul，注入测试管中（确保其中无可见气泡）。 ●将测试管推入支撑座至停止位置，使测温探头完全侵入测试管内供试品样中。 按下已放置好的样品的手柄，仪器自动显示当前温度，（注意：务必上推冰针观察窗，用注射器或者镊子松动使保持冰针松动状态，否者会出现冰针无法下探，数据出现超出范围值。）温度降到零下6.5度时（或仪器内部程序达到温度范围时）探针自动插入离心管，同时显示测量数据后显示：冰点值和摩尔浓度值。按打印键打印当前测试单次报告，按存储存储当前数据；按返回返回主界面。 注：①仪器显示温度时未见探针下探，显示自然结晶，需要按返回键返回主测试页面重新测试 ②若测试过程中，中断抬起移动手柄后，仪器自动返回主界面，需再次重新测试 ③若测试过程中，仪器未出现探针刺入供试样品，仪器显示自然结晶，需抬起手柄， 重新测试 ④每次应使用新的测试管，更换移液器枪头 3. 校准： 按数字键3仪器进入校准界面 （校准时必须预先选择纯水0摩尔浓度校准；后选择测试点校准液校准） 按动上下键选择校准点（31个校准点供选择），选择好校准点后，按校准键，仪器进入测试界面，取已知浓度的和已选择校准点匹配的标准液，将选出的标准液充分摇匀，取 50-70ul注入测试管（注意其中无可见气泡），并将测试管推入支撑座值停止位置，使测温探头完全侵入测试管内标准液中，后进行测试样品方式测试样品方式测试校准，仪器自动默认校准液的信号值并自动测算和显示校正后摩尔浓度值。（如后发现选择校准点值和标准品值未匹配但已校准，只需要返回校准页面重新选择校准点按校准键后和匹配的标准液再次测试方法校准即可）每次校准均应使用新的测试管和移液器以及校准用的标准溶液。 4. 参数设置 按数字键4仪器进入预先测试前名称和批号设置 名称设置：查看说明书序列表对照编号数字，按编号数字键后仪器显示已选择的药品名称批号设置：按数字键设置数字批号，最高10位数字批号 如发现药品名称和批号错误设置，按左键取消已设置数据，按数字键重新设置，按下键切换，最后按确认键确认设置，按返回键返回主界面。 仪器测试使用前需预先设置好药品名称和批号，如不预先设置仪器默认上次的打印设置。 5. 测试结束后处理 ●将移动手柄上移，取下测试管。 ●测试结束在关闭仪器前，应使用纯水进行两次以上测试操作，以便对测温探头和探 针进行清洗（如检测粘稠度大的检品，应使用清洗瓶对探针及探针进行清洗），再 使用滤纸将测温探头檫试清理干净，以免污染。 ●在不使用仪器时，应给测温探头套上干净的空的测试管，以保护测温探头。
土壤电导率测定方法 土壤电导率是测定土壤水溶性盐的指标, 而土壤水溶性盐是土壤的一个重要属性, 是判定土壤中盐类离子是否限制作物生长的因素。上壤中水溶性盐的分析, 对了解盐分动态, 对作物生长的影响以及拟订改良措施具有十分重要的意义。土壤水溶性盐的分析一般包括全盐量测定, 阴离子 (Cl - 、 SO 2- 3 、 CO 2- 3 、 HCO - 3 、 NO - 3 和阳离子 (Na + 、 K + 、 Ca 2+ 、 Mg 2+ 的测定, 并常以离子组成作为盐碱土分类和利用改良的依据。下面把测定方法告诉你, 你应该更能理解土壤电导率与土壤性质的关系了。 测定方法为: 1 实验方法、原理 土壤水溶性盐的测定分水溶性盐的提取和浸出液盐分的测定两部分。在进行土壤水溶性盐提取时应特别注意水土比例、振荡时间和提取方式, 它们对盐分溶出量都有一定影响。目前在我国采用 5 :1 浸提法较为普遍。盐分的测定主要采用电导法和烘干法,其中以电导法较简便,快速,烘干法较准确,但操作繁琐费时。本实验采用水土比 5 :1 浸提,电导法测定水溶性盐总量。电导法测定原理是土壤水溶性盐是强电解质, 其水溶液具有导电作用, 在一定浓度范围内, 溶液的含盐量与电导率呈正相关, 因此通过测定待测液电导率的高低即可测出土壤水溶性盐含量。 2 仪器试剂 250ml 三角瓶,漏斗、电导仪、电导电极。 0.01M KCl , 0.02M KCL 标准溶液。 3 操作步骤 土壤水溶性盐的提取, 称取过 1mm 筛风干土 20.00g , 置于 250ml 干燥三角瓶中,加入蒸馏水 100m1( 水土比 5 :1 ,振荡 5 分钟,过滤于干燥三角瓶中,需得到清壳滤
【含量测定】照紫外-可见分光光度法(附录V A)测定。 1.仪器与测定条件：室温：____℃相对湿度：____% 分析天平编号：；水浴锅编号：； 紫外可见分光光度计编号：； 2.对照品溶液的制备： 取西贝母碱对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含_______mg的溶液，即得。 3. 供试品溶液的制备： 取本品粉末(过三号筛)约______g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液3ml，浸润1小时。加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液40ml，置80℃水浴加热回流2小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液洗涤药渣2～3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液至刻度，摇匀,即得。 4.标准曲线的制备： 精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml，置25ml具塞试管中，分别补加三氯甲烷至10.0ml，精密加水5ml、再精密加0.05％溴甲酚绿缓冲液(取溴甲酚绿0.05g，用0.2mol／L氢氧化钠溶液6ml使溶解，加磷酸二氢钾1g，加水使溶解并稀释至100ml，即得)2ml，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30分钟。取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白。 5.测定法： 照紫外-可见分光光度法(附录ⅤA），在nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含西贝母碱的重量，计算，即得。 6.结果与计算 6.1 标准曲线制备：
对照品批号 纯 度 S 对照品来源 干燥条件 对照品称重W 对(mg) 各浓度点稀释倍数f 对 溶液浓度C 对(ug/ml) 吸光度A 对 线性回归方程 A=( )C ＋/-（ ） r ＝（ ） 计算公式： W S C f ?= 对对对 C 对= 6.2 样品测定： 水分Q 取样量W 样（g ） 样品稀释倍数f 样 样品吸光度A 样 样品平均吸光度A 样 浓度C(ug/ml) 含量X （%） 平均含量X （%） 计算公式：() %100Q 110W f C X 6 ?-???= 样样 样 X 1= X 2= 7.本品按干燥品计算，含总生物碱以西贝母碱(C 27H 43NO 3)计，不得少于0.050％。 结果: 规定 检验人： 检验日期： 复核人： 复核日期:
1.目的：制定SMC 30C型渗透压摩尔浓度测定仪的操作规程，确保操作人员的规范操作。 2.范围：本标准适用于SMC 30C型渗透压摩尔浓度测定仪的操作。 3.责任：技术质量部QC负责本规程实施。 4.内容： 仪器组成及装置： 4.1.1组成：触摸显示屏、测试管支撑座、测温探头、测试管、冷却池、探针及护罩、移动手柄等。 4.1.2装置：按仪器说明书进行安装与使用。 操作方法： 4.2.1准备： 4.2.1.1按要求接通电源，打开仪器后面电源开关，仪器显示开机界面，仪器启动进行预冷，触摸显示屏显示自检界面，约二分钟后停止，仪器预冷完毕触摸显示屏进入主界面。 4.2.1.2 首次使用仪器要按动电机后面的启动电机键，使探针回到正确位置。 4.2.2校准： 4.2.2.1使用纯水进行零点校准（新制备的水溶剂） a 使用取样器将60μL纯水注入干净、干燥的测试管内，确保其中无可见气泡。 b将测试推入支撑座直至停止位置，使测定探头完全浸入测试管内纯水中。
c 4.2.2.2校准界面 确认界面。 4.2.2.3零点校准界面 操作移动手柄轻缓下移，测温探头（测试管）稳稳插入冷却池。纯水。纯水的温度被实时地触摸显示屏上以摄氏温度显示出来。 4.2.2.4测试界面被测纯水冷却完成之后，不锈钢探针带冰晶自动插入，纯水开始结晶，仪器测出纯水的冰点，并将其记为“0”值，显示读数为“0”。将移动手柄上移，取下测试管。尔后需要用用纯水进行一次测试，测试结果应符合 0±2mOmol/kg H 2 O的标准，负责重新进行零校准。 4.2.2.5使用标准液进行分段量程两端点的校准 该仪器对分段量程的设计：在0～3000测量范围内，每100为一个校准量程（循环）。 校准前，应根据供试品的渗透压摩尔浓度值选择与量程相符的标准液，并按 使触摸显示屏显示的数据与预选的标准数值相符，否则会产生校准错误。按动确认按钮。将选出的标准液充分摇匀，取60μL注入测试管（注意其中无可见其中无可见气泡），并将测试管内标准液中。确认触摸显示屏显示的数值与选择的标准液数值相符合。 操作移动手柄轻缓下移，使测温探头（测试管）稳稳插入冷却池，溶液开始结晶，仪器测出冰点值，触摸显示屏自动显示测试过程结果。 将移动手柄上移，取下测试管。尔后需用标准液进行一次测试，结果应符合 ≤400mOmol/kg H 2O时±2mOmol/kg H 2 O、﹥400mOmol/kg H 2 O时±%的标准，否则 重新进行标准液校准。每次校准均应使用新的测试管及校准用的标准溶液。
纯化水 Chunhuashui Purified Water H 2O 18.02 本品为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制得的制药用水，不含任何添加剂。 【性状】本品为无色的澄清液体；无臭。 【检査】酸碱度取本品10ml，加甲基红指示液2滴，不得显红色；另取10ml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。 硝酸盐取本品5ml置试管中，于冰浴中冷却，加10%氯化钾溶液0.4ml和0.1%二苯胺硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓滴加硫酸5ml，摇匀，将试管于50°C水浴中放置15分钟，溶液产生的蓝色和标准硝酸盐溶液[取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml ,加水稀释成100ml，再精密量取10ml，加水稀释成100ml，摇匀，即得（每1ml 相当于1μg NO 3)]0.3ml，加无硝酸盐的水4.7ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深(0.000006%)。 亚硝酸盐取本品10ml，置纳氏管中，加对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液（1→100）1ml 和盐酸萘乙二胺溶液（0.1→100）ml，产生的粉红色，和标准亚硝酸盐溶液[取亚硝酸钠0.750g(按干燥品计算），加水溶解，稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取1ml，加水稀释成50ml，摇匀，即得（每1ml相当于1μg NO2)]0.2ml，加无亚硝酸盐的水9.8ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0.000002%)。 氨取本品50ml，加碱性碘化汞钾试液2ml，放置15分钟；如显色，和氯化铵溶液（取氯化铵31.5mg，加无氨水适量使溶解并稀释成1000ml)1.5ml，加无氨水48ml和碱性碘化汞钾试液2ml制成的对照液比较，不得更深(0.00003%)。 电导率应符合规定（通则0681)。 总有机碳不得过0.50mg/L(通则0682)。
紫外分光光度法测定未知物 1.仪器 1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个 1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个 1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支 1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支 2.试剂 2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。 2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。（其必为给出的五种物质之一） 3.实验操作 3.1比色皿配套性检查 石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。 3.2未知物的定性分析 将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。。。。 3.3未知物定量分析 根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。 推荐方法 3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于
渗透压摩尔浓度检测仪渗透压摩尔浓度测试仪 型号：H110511 冰点渗透压摩尔浓度检测仪是用于测定溶液和各种体液渗透压或渗摩尔浓度(Osmolality)的仪器，渗透压摩尔浓度测定法是国家药典2010版中新增的检测方法， 在药品质控中具有重要意义，欢迎药物研究单位、药检机构和制药厂选用。本仪器 完全满足2010版《中国药典》、《美国药典》检测标准的规定。 主要特点: ◆采用LED彩色大屏幕液晶显示屏；具有测试数据自动处理、打印。本仪器可以存储两万次历史使用数据；随时可调用和打印功能； ◆采用冰点下降原理及高精度传感器，测量精度高，重现性好。 ◆采用半导体双制冷系统，预冷时间短，检测速度快，便于连续检测。 ◆振荡原理，检测样品量少，范围宽，可满足不同领域需求。 ◆可同时显示检品的渗透压摩尔浓度值，冰点值。 ◆本仪器具有有31个校正点，可进行两点及多点的线性校正，保证仪器精准度。 ◆冷却系统采用无热传导液设计，免除频繁的维护。 ◆内置《中国药典》数百种注射剂药品名称，方便预设检品资料。 技术参数: 1．测量范围：0~3000 mOsmol / kg H2O 2．样品量：50-100μl（根据离心管大小适量） 3．测试时间：<2min30sec 4．预冷时间：≤3min 5．重复性：RSDs≤1％ (300mOsmol／kg H2O) 6．准确度：±1％ (300mOsmol／kg H2O) 7. 分辨率：1mOsmol／kg 8. 线性：<1％的直线 9. 环境温度：-10～25℃ 10. 环境湿度：5~60％ 11. 电源：AC220V 1.5A 12. 外形尺寸：230*210*360mm
水质分析：电导率法 一、目的： 1.了解电导率的含义及测定方法。 2.掌握分光光度法对水质的测定原理及方法。 二、原理： 电导率是以数字表示溶液传导电流的能力。纯水的电导率很小，当水中含有无机酸、碱、盐或有有机带电胶体时，电导率就增加。电导率常用于简介推测水中带电荷物质的总浓度。水溶液的电导率取决于带电荷物质的性质和浓度、溶液的温度和粘度等。 电导率的标准单位是S/m（即西门子/米），一般实际使用单位为mS/m，常用单位μS/cm（微西门子/厘米）。 单位间的互换为： 1mS/m = cm = 10μS/cm 新蒸馏水电导率为，存放一段时间后，由于空气中的二氧化碳或氨的溶入，电导率可上升至；饮用水电导率在5-150mS/m之间；海水电导率大约为3000mS/m；清洁河水电导率为10mS/m。电导率随温度变化而变化，温度没升高1度，电导率增加约2%，通常规定25度为测定电导率的标准温度。 由于电导率是电阻的倒数，因此，当两个电极（通常为铂电极或铂黑电极）插入溶液中，可以测出两电极间的电阻R。根据欧姆定律，温度一定时，这个电阴值与电极的间距L（cm）成正比，与电极截面积A（cm2）成反比： R = ρ× L/A
由于电极面积A与间距L都是固定不变的，故L/A是一个常数，称电导池常数（以Q表示）。 比例常数ρ叫做电阻率。其倒数1/ρ称为电导率，以K表示。 S = 1/R = 1/(ρ*Q) S表示电导率，反应导电能力的强弱。 所以，K = QS 或 K = Q/R 当已知电导池常数，并测出电阻后，即可求出电导率。 三、仪器、试剂： 仪器：MP522电导率仪，GDH-2008W恒温浴槽，石英蒸馏水装置。 试剂：市售桶装纯净水、瓶装矿泉水、实验室去离子水、自来水、二次蒸馏水、河水(或湖水或江水)、污水(或废水)。 四、步骤： 1.电导率仪器校准：用标准氯化钾盐溶液对电导率仪器进行校准， 2.将所测水样放入带夹套的容器中，通入恒温水，待温度恒定后，对水样进 行电导率测量。 3.比较电导率的大小，对水样进行分析。 五、数据记录和处理： 气压： 101kpa ；室温：23°C；实验温度：25°C。 1、电导池常数的测定： KCl溶液的浓度： l；KCl溶液电导率：。
紫外分光光度法测定蛋白质含量 一、实验目的 1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理； 2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。 二、实验原理 1.测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin―酚试剂法等。本实验采用紫外分光光度法。 2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同蛋白质略有不同）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。 利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。 三、仪器与试剂 TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液3.00mg·mL-1、0.9%NaCl 溶液、试样蛋白质溶液。 10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。 四、实验步骤 1.绘制吸收曲线 用吸量管吸取2mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。 2.绘制标准曲线 用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。 3.样品测定 取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度（1.363），估算浓度为2.0960 mg·mL-1，再将原试液稀释至5倍（即取2mL试液，用0.9%NaCl 溶液稀释至刻度，摇匀），估算浓度为0.4192 mg·mL-1，测吸光度，重复三次五、数据处理与结果分析
一、含氯消毒剂常用浓度 1、诊疗用品的消毒 (1)一般病人污染后诊疗用品用250～500mg/L有效氯浸泡。 (2) 肝炎和结核菌病人污染后诊疗用品的消毒，用1000～2000mg/L有效氯。 2、抹布、拖把的消毒 (1)擦床抹布：使用时用500mg／L有效氯，用后用250mg／L 有效氯浸泡. (2)拖把：应用后用500mg／L有效氯消毒液浸泡30 min，清洗干净，晒干备用。 3、病区地面的消毒 (1)地面没有明显污染时，湿式清扫，每日用清水擦1～２次。 (2)地面被病原菌污染时，用200~500mg／L有效氯消毒液擦洗后再清扫。 (3)地面被肝炎病毒污染，用1000mg／L有效氯消毒液擦洗后再清扫。 4、病房各类用品（桌子、椅子、凳子、床头柜等）表面的消毒 病人出院或终末处理时，用含有效氯250~500mg／L的消毒剂溶液擦抹。 二、消毒液配制方法：(消佳净原液为含有效氯5％以上）
1. 250mg／L有效氯 配制：消佳净（原液）5ml + 水995ml. （稀释浓度200倍） 2. 500mg／L有效氯 配制：消佳净（原液）10ml + 水990ml. （稀释浓度100倍） 3. 1000mg／L有效氯 配制：消佳净（原液）20ml + 水980ml. （稀释浓度50倍） 4. 2000mg／L有效氯 配制：消佳净（原液）40ml + 水960ml. （稀释浓度25倍） 按照原液的浓度来配制。一般的84原液浓度为4-6%，（包装瓶上有说明），即每100ml含有效氯4g-6g，也就是100ml含有效氯4000mg-6000mg，我们一般为了方便计算取中间值，即原液为100ml含有效氯5000mg。 要配制含有效氯500mg/L的消毒液1000ml，取原液10ml（500mg）+水990ml即可。 以此类推，配制含有效氯250mg/L的消毒液1000ml，取原液5ml（250mg）+水995ml 配制含有效氯1000mg/L的消毒液1000ml，取原液20ml（1000mg）+水980ml
分光光度法测定DNA的浓度和纯度 【目的要求】： 了解：分光光度法测定DNA浓度和纯度的原理； 掌握：分光光度法测定DNA浓度和纯度的技术方法； 熟悉：分光光度法测定DNA浓度和纯度的实验操作步骤和注意事项。 【实验原理】： 前面提取得到的DNA的浓度和纯度都是未知的，在后续的DNA酶切、连接及转化等实验中需要一定的浓度和纯度要求，因此要测定DNA的浓度和纯度。 测定DNA的方法通常有：紫外分光光度法；琼脂糖凝胶电泳法（也叫荧光光度法） （1）紫外分光光度法： 组成DNA的碱基均具有一定的吸收紫外线特性，最大吸收值在波长为250～270nm之间，腺嘌呤的最大紫外线吸收值在260.5nm，胞嘧啶：267nm，鸟嘌呤：276nm，胸腺嘧啶：264.5nm，尿嘧啶：259nm。这些碱基与戊糖、磷酸形成核苷酸后其最大吸收峰不会改变，但核酸的最大吸收波长是260nm，吸收低谷在230nm。这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。在波长260nm紫外线下，10OD值的光密度相当于双链DNA浓度为 50μg/ml；单链DNA或RNA为40μg/ml；单链寡聚核苷酸为20μg/ml。可以此来计算核酸样品的浓度。 分光光度法不但能够确定核酸的浓度，还可以通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值（A260/A280）估计核酸的纯度。DNA的比值为1.8，RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8，说明制剂中RNA尚未除尽。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。当然也会出现既含蛋白质又含RNA的DNA溶液比值为1.8的情况，所以有必要结合凝胶电泳等方法鉴定有无RNA，或用测定蛋白质的方法检测是否存在蛋白质。紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液。 （2）琼脂糖凝胶电泳法（荧光光度法）：
一．目的(Objective) 1．初步熟悉可见-紫外分光光度仪的使用方法。 2．熟悉测绘吸收曲线的方法。 3．学会利用可见-紫外分光光度仪进行未知物的浓度分析。 二、基本原理(Principle) 亚甲基蓝溶液在665nm下有最大光度吸收值，利用此性质绘制亚甲基蓝的吸收曲线，并测定未知亚甲基蓝溶液的浓度。 三、仪器与试剂(Equipment and Reagents) 1．仪器：上海棱光技术有限公司Spectrumlab 22 pc 紫外可见分光光度计，1cm 石英吸收池。 2．试剂：亚甲基蓝溶液(25ppm)、亚甲基蓝溶液(未知浓度) 四．实验步骤(Procedure) 1．打开样品室的仓盖（预热20min），调节好测定波长。 2．利用亚甲基蓝标准液(25ppm)配制亚甲基蓝溶液(1ppm)、亚甲基蓝标准液(2ppm) 亚甲基蓝标准液(3ppm)、亚甲基蓝标准液(4ppm)、亚甲基蓝标准液(5ppm)。3．关上样品室仓盖，按100%键至显示器显示100按再打开样品室仓盖0键归零，. 4．将空白比色皿放入样品池一号位，再依次放入装有不同浓度亚甲基蓝溶液的比色皿，盖好样品室仓盖进行测量，先测出亚甲基蓝标准液的吸光度，再测出亚甲基蓝未知液的吸光度。 5．绘制出亚甲基蓝标准液的吸光度——浓度吸收曲线，再利用吸光度——浓度吸收曲线与测得的测出亚甲基蓝未知液的吸光度算出亚甲基蓝未知液的浓度度。
五、实验数据及处理(Data and Calculations) 亚甲基蓝标准液浓度—吸光度表
由图可得该曲线线性拟合的线性函数为：A= 实验测得未知浓度亚甲基蓝溶液的吸光度A x= ，根据上述线性函数可计算的该溶液浓度为C x= ppm 六、误差分析 1、配制得到的亚甲基蓝溶液浓度与实验要求的浓度有一定的偏差，导致了 实验结果的误差； 2、含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。 七、实验总结 1、实验过程中要保持谨慎、实事求是的态度，配制溶液时应严格按照实验操作要求来进行以减小实验误差，尊重实验结果，认真分析误差。 2、测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm 以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。 3、当吸光度和浓度关系不呈良好线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色后测定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并 求出其含量。 4、由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。
依据：1、《中国药典》2015年版四部 2、《中国药典分析检测技术指南》（2017年7月第一版） pH值测定法（通则0631）及渗透压摩尔浓度测定法（通则0632）培训试题及答案2018.6 姓名：成绩： 一、单选题（每题4分，共20分） 1、我公司在测量pH值时选用的电极为：。（根据实际情况填写）（A） A、玻璃电极-饱和甘汞电极 B、玻璃电极-银-氯化银电极 C、氢电极 D、醌-氢醌电极 2、pH值测定法是测定水溶液中活度的一种方法。（B） A、氢氧根离子 B、氢离子 C、金属离子 D、水溶液中可溶性盐的阳离子 3、下列电极中为复合电极的是：。（C） A、氢电极 B、醌-氢醌电极 C、玻璃电极-银-氯化银电极 D、甘汞电极 4、《中国药典》 2015年版规定渗透压摩尔浓度测定法采用：。（A） A、冰点下降法 B、露点测定法 C、含水量测定法 D、冷点测定法 5、中国药典2015年版四部规定采用校正渗透压摩尔浓度测定仪。（B） A、一点法 B、两点法
C 、三点法 D 、四点法 二、多选题（每题4分，共20分） 1、采用冰点下降法的原理设计的渗透压摩尔浓度测定仪通常由： 组成。（ABC ） A 、制冷系统 B 、用于测定电流或电位差的热敏感探头 C 、振荡器（或金属探针） D 、微量进样器 2（ABC ） A 、饱和甘汞电极 B 、1mol/L 甘汞电极 C 、0.1mol/L 甘汞电极 D 、5mol/L 甘汞电极 3、理想的稀溶液具有的依数性质包括： 。 （ABCD ） A 、渗透压 B 、沸点上升 C 、冰点下降 D 、蒸气压下降 4、不为pH 值测试的理想温度的是： 。 （ABD ） A 、20℃ B 、23℃ C 、25℃ D 、27℃ （ABCD ） A 、大容量注射剂 B 、小容量注射剂
实验八（三）醋酸电离常数的测定——电导率法 【目的要求】 1、掌握利用电导率法测定电解质的电离常数的基本原理； 2、学习电导仪的使用方法； 3、进一步熟悉溶液的配置与标定，规范称量、滴定的操作。 【实验原理】 1、电离常数与电离度的关系： 2 1 c K α α = - 。 2、电导G是导体电阻R的倒数 1 G R =，是衡量导体导电能力的物理量，单位是1 (,)S cm m μ- ?。 3、电导率γ表示在相距1cm，面积为1cm2的两个电极之间的溶液的电导，由定义得 L G A γ=，其中 L A 为 电极的电极常数或电导池常数。 4、一定温度下，同一电解质不同浓度的溶液的电导与溶液的电解质总量和溶液的电离度有关，把含有1mol 的电解质溶液放在相距1cm的两个平行电极之间，这时无论怎样稀释溶液，溶液的电导只与电解质的电离度有关，此时的电导称为该电解质的摩尔电导。以λ表示摩尔电导，V表示1mol电解质溶液的体 积（mL），c表示溶液的浓度（mol·L-1），γ表示溶液的电导率，则有 1000 V c λγγ ==。 5、对于弱电解质，在无限稀释的情况下，可看作完全电离，这时溶液的摩尔电导称为极限摩尔电导λ∞。 某时刻弱电解质的电离度满足： λ α λ ∞ =，代入电离常数与电离度的关系式得到 2 () c K λ λλλ ∞∞ = - 。 【实验步骤】 1、250mL 0.1 mol·L-1的NaOH溶液的配制与标定。 ①称量NaOH 1.0g，放入小烧杯中，加水溶解，转入试剂瓶，充分混合摇匀。 ②称量KHC8H4O4（-1 204.2mol L M=?）0.4~0.6 g，分别加入到标号为1～3的锥形瓶中，加40mL水溶解。 加入2滴0.2%的酚酞溶液，用待测定NaOH溶液滴定至微红色且30s不变色。平行滴定3份，要求精密度良好。 2、300mL 0.1 mol·L-1的HAc溶液的配配制与标定。 ①用10mL量筒量取冰乙酸（17.5mol·L-1）1.7～1.8mL，注入小烧杯中，加去离子水稀释后转入试剂瓶， 再加水至300mL，充分混合摇匀。 ②用酸式滴定管分别向标号为1～3的三个锥形瓶中放入待测HAc溶液25.00mL，并加入2滴0.2%的酚酞
含氯消毒剂配制及使用说明 如何配置成500mg/l的含氯消毒液 按照原液的浓度来配制。一般的84原液浓度为4-6%，（包装瓶上有说明），即每100ml含有效氯4g-6g，也就是100ml含有效氯4000mg-6000mg，我们一般为了方便计算取中间值，即原液为100ml含有效氯5000mg。 要配制含有效氯500mg/L的消毒液1000ml，取原液10ml（500mg）+水990ml即可。 以此类推，配制含有效氯250mg/L的消毒液1000ml，取原液5ml（250mg）+水995ml 配制含有效氯1000mg/L的消毒液1000ml，取原液20ml（1000mg）+水980ml 序号有效氯浓度84消毒液单位水单位 1 250mg/L 1 199 2 500 mg/L 1 99 3 1000 mg/L 1 49 4 1500 mg/L 1 33.2 5 2000 mg/L 1 24.75 6 2500 mg/L 1 19.9 7 3000 mg/L 1 16.6 8 5000 mg/L 1 9.9 9 10000 mg/L 1 4.95
含氯消毒剂是指溶于水后能产生次氯酸的消毒剂。最常用的有次氯酸钠消毒液、漂白粉、三氯异氰尿酸泡腾消毒片等。 一、消毒液的配制： 根据不同含氯消毒剂产品的有效氯含量，用自来水将其配制成所需浓度消毒液。 1、市场销售的次氯酸钠消毒液（如施康消毒液、康威达消毒液、84消毒液等）含有效氯5%左右，取1份消毒液加99份水混匀后就配成了有效氯500mg/L的消毒液；加199份水就配成了有效氯250mg/L的消毒液。 2、泡腾消毒片（三氯异氰尿酸）每片含有效氯500mg，取1片放入装有1L水的容器内，5－10分钟后泡腾片会自己溶解，稍搅拌即成有效氯500mg/L的消毒液；放入2L水中就配成了有效氯250mg/L的消毒液。泡腾片的配制、使用相对比较方便。 3、漂白粉是含有效氯25％左右的消毒粉，称2g放入装有1L水的容器内搅拌至全部溶解，待溶液澄清后取其上清液即为有效氯500mg/L的消毒液；如称1g放入1L水中按前法配制，就配成了有效氯250mg/L的消毒液。 二、注意事项： 1、应选择有卫生部卫生许可批件的消毒剂使用。 2、调配或使用时应开门窗，保持空气流通。由于含氯消毒液有一定的刺激性，最好应佩戴口罩和手套进行操作。配制时应有量杯或汤勺计算份量。 3、消毒好的物品应以清水冲洗及抹干，以免对表面有腐蚀。 4、经配制的消毒液应当天用完。 5、消毒液应放在小孩拿不到的地方。如不慎接触眼睛，应立即用清水冲洗15分钟，如仍不适可求医。消毒期间不要随意用手揉擦眼睛，触摸鼻子或嘴，及时洗手。 我补充一点注意事项：用粉剂配制时，最好先准备好适量的水，再按浓度要求放入消毒剂；否则先放入消毒剂，再加入水，会造成类似气溶胶的，经常这样配制对人的眼睛有影响。我们供应室的一个工人以前就出现类似的情况，好在及时发现问题，及时改变方法，没造成大碍。 (洗消配比表 洗消对象原液：水有效氯（mg/l）作用时间使用方法 餐饮食具1：100 500 10分钟去除油污、浸泡、清水冲洗 瓜果蔬菜1：500 100 10分钟浸泡刷洗、清水冲洗
电导率测量仪温度补偿的检定方法及问题。使用电导率仪的用户都知道这一点，溶液的电导率与温度密切相关，因为温度发生变化时，电解质的电离度、溶解度、离子迁移速度、溶液黏度等都会发生变化，电导率也会变化。温度升高，电导率增大。而此刻电导率仪的温度补偿功能就是为了克服温度的影响。 一、什么是电导率测量仪的温度补偿功能： 将溶液在实际温度下的电导率值转换为参考温度（一般为25℃）下的电导率值，使得溶液在不同温度下的电导率具有可比性，现在市场上所使用的电导率仪都有温度补偿功能，以满足各行各业比对或控制指标的需要。本文以使用电导率仪时，检定过程中需要的温补功能说明，简要的分析讨论。 在检定过程中增加这一检定项目也很有必要。实现电导率仪温度补偿的检定有两种方法，一种是温补前的KMR为定值，一种是温补后的KMV为定值，两种方法依据的原理相同，具体的检定步骤根据仪器设计的不同也可分为两种方法。 检定过程中，我们还发现温度设置会影响电导池常数，分析表明电导率仪的温度补偿本质上和电导池常数补偿是相同的，当仪器的温度补偿缺失或存在故障时，可以利用电导池常数的补偿来实现电导率的温度补偿。 二、温度补偿的检定方法及问题 对于电导率大于1×10-4S·cm-1的强电解质，电导率值与温度存在线性关系： KT=K0〔1+α（T-T0）〕 （1）；在检定过程中，只要测得不同温度下的电导率值，通过JJG376-2007中的式 （5）可求出仪器的温度系数α，从而实现对电导率仪温度补偿系数的检定。
将电导率仪常数Kcell设为 1.00cm-1，输入某一信号的电导率值（如50μS·cm-1），调节温度传感器模拟电阻，使温度示值为25℃和15℃（35℃），再分别读取对应电导率仪测量值KMR和KMV。根据式 （1）有： （2） 问题： （3） 1）.国产电导率仪都是手动温度补偿，温度系数无法设置，其默认值为 2.00%/℃。对于这类仪器，当温度设置为25℃时，为不补偿状态，测得的电导率为KMR，而其他温度下测得的电导率值为补偿后的电导率值KMV，可实现温度补偿的检定。 2）对于不同的电导率仪，其温度补偿的检定步骤也不尽相同，安徽赛科环保生产的DDS-307为例： 后期生产（新型）的DDS-307电导率仪，调整温度示值时，电导率发生显著变化，定义为I型（DDS- 308、国外产的电导率仪如con5等也归于此类）。早期生产的DDS-307电导率仪，调整温度示值时，电导率没有任何变化，为了便于区别我们将其定义为II型（大部分数显式DDS-11A/12A也归于此类）。 对于I型仪器，其温度系数的误差可以按JJG376-2007描述方法来测量，先设置好电导池常数，再调整温度示值。 对于II型仪器，温度示值对电导率值没有影响，并不说明温度传感器模拟电阻器发生了故障，因为如果将仪器调到“检查”状态，发现调整温度示值时，电导池常数也发生了变化，当温度示值调整为15℃和35℃时，电导池常数分别变化到