小鼠免疫
免疫是单抗制备过程中的重要环节之一。即用目的抗原免疫小鼠，抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B 淋巴细胞。
一、血清效价的影响因素
小鼠免疫效价的高低直接影响单抗的制备。单抗免疫程序不同，包括免疫用的动物，抗原的性质、抗原量、免疫途径、免疫间隔时间、是否应用佐剂均会影响免疫效果。
二、免疫材料
1．免疫用的动物
抗原与免疫动物种属差异越远越好，小鼠、大鼠、亚美尼亚仓鼠和兔中分离的淋巴细胞的杂交瘤技术已经很成熟。小鼠是极好的免疫接种对象，原因是：1）小鼠易操作；2）多个纯系株易得到且价格合理；3）有很多试剂可用以检测鼠源免疫球蛋白；4）小鼠对外来蛋白质能产生良好的免疫应答；5）小鼠淋巴细胞能够和多种鼠源骨髓瘤细胞系发生有效融合。
2．免疫原（抗原）
颗粒性抗原：颗粒性抗原免疫原性强，如肿瘤细胞、淋巴细胞、?细菌等可作为抗原，不加佐剂直接进行免疫，就可获得较好的免疫效果。
可溶性抗原：因其免疫原性较弱，一般要加佐剂，如系半抗原，?应先制备成人工免疫原，再加佐剂。
免疫原的形式会影响宿主体液免疫产生的抗体谱，因此选择免疫原制备抗体时应该考虑到所制备抗体的最终用途，并应该根据其用途决定何种方法筛选抗体
更合适。一般认为，影响免疫血清中lg亚类谱的因素主要包括免疫原、接种途径、佐剂和动物遗传背景等。且主要由初次基础免疫所决定，加强免疫的作用主要是提高特异性抗体的滴度。
3．佐剂
目的：1）增强抗原对机体的免疫原性；2）增强抗体的产生能力；3）为制备出高效价的免疫血清；4）增强可溶性抗原的免疫原性；5）在某种情况下，改变Ag免疫应答类型；6）延长抗原在免疫动物的时间；7）改变抗原的分布；8）增强共刺激信号和激活免疫系统而刺激淋巴细胞增殖。
种类：氢氧化铝佐剂、明矾佐剂（常用于肌肉、皮下注射）、弗氏佐剂。
弗氏佐剂是最主要的免疫佐剂，热处理杀死的分歧杆菌可以引起炎症反应，募集淋巴细胞到抗原沉积部位，但若重复刺激可导致肉芽肿的形成，故不能重复使用。
三、免疫策略
1．免疫途径
途径的选择取决于抗原的生物学特性和理化特性。有静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮内注射、脾内注射、皮下注射、淋巴结注射等。
脾内免疫会产生IgM 类抗体，分泌该类抗体的杂交瘤细胞株相对IgG 类较不稳定，且IgM 类抗体的一些性质测定会有困难，一般不建议使用。脾内免疫操作困难，实验动物极易死亡，所以也不常用此种方法。
一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。
2．免疫方案
典型的免疫策略依赖于抗原的反复刺激，以增强特异性免疫应答并使其成熟。
第一次，弱抗体反应，主要是低亲和力的lgM抗体为主
第二次，产生增强的体液免疫，加强免疫产生的抗体中lgG数量明显增多。能刺激免疫应答的成熟，进一步扩增抗原反应性B细胞的数量，增加血
清抗体的效价。
6-10天，测效价。血清效价定义：在任何筛选试验中均能和抗原出现明显的、可检测到的反应的血清最大稀释度的倒数。至少＞1:1000。
通常，低血清效价的动物，得到克隆的概率低，并且通常是分泌lgM抗体，在这种情况下，可以改变抗原的形式，或者所以佐剂种类。若使用CFA/IFA佐剂不能产生有效免疫应答的抗原，在换用明矾作为佐剂后可能大大提高免疫原性。
血清有效价＞1:1000后，应休息3-6周，为了让增强的二次应答衰减，以便在最后一次接触抗原后导致新的B细胞的活化和扩增。
融合前的冲击免疫，抗原用生理盐水或者PBS稀释，不含佐剂。最有效途径是静脉注射，可以将抗原直接输送到脾脏，脾脏中新活化的B母细胞收获后可用于做融合。如果不适合静脉注射（颗粒状或者缓冲液有毒），可腹腔注射。静脉注射冲击3天，腹腔4天后融合。
四、免疫失败的原因及措施
（1）免疫动物的种属及品系是否合适，可考虑改变动物的种属或品系，或扩大免疫动物的数量；
（2）抗原质量是否良好，可改用其它厂家的产品或改用同一厂家的其它批号，也可考虑改变抗原分子的部分结构，或改进提取方法；
（3）制备的免疫原是否符合要求，可从偶联剂，载体、抗原或载体的比例、反应时间等多方面去考虑，并加以改进；
（4）所用的佐剂是否合适，乳化是否完全，可改用其它佐剂，或加强乳化；
（5）免疫的方法、剂量，加强免疫间隔时间和次数，免疫的途径是否合适；
（6）动物的饲养是否得当，如营养（饲料、饮水）、环境卫生（通风、采光、温度）是否符合要求，动物的健康情况是否良好等。
免疫细胞的观察与小鼠脾脏淋巴细胞的提取 一、实验目的 1、明确各免疫器官分布与形态结构，能熟练找到各免疫器官，弄清中枢免疫器官与外周免疫器官的区别与联系。 2、掌握密度梯度离心法分离小鼠脾脏淋巴细胞的方法，熟悉脾脏淋巴细胞的形态与功能。 二、实验原理 脾脏是外周免疫器官之一，是人体最大的淋巴器官。它生在腹腔左上方，质地比较脆，容易外伤。一般来讲，脾脏有三大功能： 首先它是人体的“血库”，当人体休息、安静时，它贮存血液，当处于运动、失血、缺氧等应激状态时，它又将血液排送到血循环中，以增加血容量； 其次，脾脏犹如一台“过滤器”，当血液中出现病菌、抗原、异物、原虫时，脾脏中的巨噬细胞、淋巴细胞就会将其吃掉； 此外，脾脏还可以制造免疫球蛋白、补体等免疫物质，发挥免疫作用。脾是血循环中重要的滤过器，能清除血液中的异物、病菌以及衰老死亡的细胞，特别是红细胞和血小板。因此，脾功能亢进时可能会引起红细胞及血小板的减少。脾脏还有产生淋巴细胞的功能。 我们利用小鼠来观察脾脏的淋巴细胞。 小鼠淋巴细胞的比重为1.088，利用比重为1.088的淋巴细胞分离液，将脾细胞悬液置于分离液上层，通过梯度离心的方法，在分离液与脾细胞悬液交界液面处分离得到脾脏淋巴细胞。 三、实验器材 KM种小鼠，PBS缓冲液，淋巴细胞分离液，200目不锈钢网，解剖器械 四、实验步骤 1、杀死老鼠，取出小鼠的脾脏，在pbs缓冲液中冲洗干净。 2、将小鼠脾脏至于200目铜网中，铜网绑定在烧杯上面，剪碎、碾磨，边碾磨边加PBS 冲洗，制得脾细胞悬液。 3、将制得的脾细胞悬液转移到10ml的离心管中，1000r/min 5min离心洗涤，倒掉上清，加入5mlPBS再离心洗涤一次。 4、加入5mlPBS将洗涤的脾脏细胞吹散、悬浮，缓慢加入淋巴细胞分离液上层，细胞悬液与分离液体体积比为1:1。 5、2000r/min离心30min。 6、小心吸取中间层细胞，1000r/min 5min离心洗涤两次。 7、将制得的淋巴细胞滴于玻片，镜检。
《人体的免疫功能》 1 2 一、说教材： 3 《人体的免疫功能》是七年级下册第六章《免疫与健康》的第一节。本节内容包括与生4 俱来的免疫力，后天获得的免疫力和计划免疫三部分内容。这些知识在应用价值方面与人类5 的生活密切相关，在知识方面则涉及到了人的皮肤、呼吸系统、消化系统和循环系统等内容。6 特异性免疫和免疫的概念是本节内容的重点和难点，掌握了这部分知识对于学生增强身体健7 康有一定的帮助，了解计划免疫的内容，可以使学生认识到党和国家对下一代身体健康的关8 心和对提高人口素质的重视，从而增强爱国主义情感。根据新课标的要求，针对教材特点，特制定本课的教学目标和教学重点。 9 10 1、教学目标： 11 （1）知识目标：描述人体三道防线的组成和功能；理解特异性免和非特异性免疫的12 区别；了解抗体和抗原的概念；列举计划免疫的实例，认同计划免疫的意义。 13 （2）能力目标：通过分析文字和图片资料、小组合作解决实际问题等来提高学生分析说14 明问题的能力、运用知识能力及交流合作的能力。通过对三道防线的组成、功能的归纳列表，培养学生整理、归纳知识的能力。 15 16 （3）情感目标：首先要让学生通过本节的学习关注自身健康，养成良好的卫生习惯。同17 时结合打预防针的亲身经历，是学生深刻的认识到党和国家关心下一代的健康成长，为提高人口素质进行计划免疫的重要性和必要性，向学生进行爱国主义教育。 18 19 2、教学重点 20 （1）.人体保卫自身的三道防线。 （2）.非特异性免疫与特异性免疫的概念及其区别。 21 22 3、教学难点
23 人体第三道防线的内容是本节课的难点。一是因为学生对免疫的基础知识比较生疏；二24 是因为这部分内容概念抽象，学生难以理解。对此，教师先从学生熟悉的生活经验入手，通25 过分析资料，再利用动画实例分析腮腺炎病毒进入人体后，人体的变化及结果来说明第三道26 防线的功能，从而突破这节课的难点。 27 4教学关键： 28 创设好教学情境，引导学生分析材料，组织好学生自学交流，合作探究，同时注重知识29 与生活的联系，学以致用。 30 5、创新点 本课教学以现代教育理论和新课程理念为指导，采用“自主学习、观察分析、总结归纳、 31 32 合作交流，学用结合”的教学方式，引导学生自主创新学习。 33 二、说教法 34 为完成本课的教学目标，突出重点，突破难点，本课我采用以学生的自主学习为主，并35 运用多媒体进行直观教学和启发式教学。通过一些直观手段和启发性的问题，并且注意与生36 活实例相结合，引导学生对知识进行分析、归纳，从而从感性认识上升到理性。 三、说学法： 37 38 自主学习与小组合作、观察图片和分析资料相结合，掌握人体三道防线的组成、功能、39 作用特点，归纳比较两种免疫的区别，同时在学习过程中注意讲练结合，通过学生动眼、动口、动手、动脑，充分发挥学生的主动性，扎实高效地完成本课学习内容。 40 41 四、课前准备: 42 多媒体教学课件 五、说教学过程及设计意图 43 44 【设计理念】以人为本，以学生为主体，注重创设教学情境，在观察图片和分析材
人体免疫系统的免疫机理 院系：生命科学与工程学院 专业：08级生物科学 姓名：黄秀兰 学号：2 指导老师：吴小莉 【摘要】免疫系统是机体防卫病原体入侵最有效的武器，它能发现并清除异物、外来病原微生物等引起内环境波动的因素。免疫系统发挥生物学作用的三条途径分别是经典激活途径，旁路（替代）激活途径和凝集素（MBL）激活途径。人体的三道免疫防线（皮肤和黏膜，体液中的杀菌物质和吞噬细胞，免疫器官和免疫细胞）中由第三道防线所引起的免疫可分为体液免疫和细胞免疫。他们两者之间既存在着区别同时又相互协调发挥着作用，以协调机体保持一种相对稳定和谐的状态。
【关键词】免疫系统免疫免疫效应补体激活途径 在季节变迁之际，在南雁北飞之际，有人会被风一吹就凉了，有人却铁骨铜皮毫不介意天气冷暖。有些人感冒一两天就好，有些人却要折腾好久。众所周知，人体内的免疫系统有生理免疫、自身稳定和免疫监视的功能，到底是什么东西在悄悄导致作用效果的不一样呢，或者，在我们的身体里，那个叫做免疫系统的问题在如何工作呢？以下我们一起来做以下探究。 人体内有一个免疫系统，它是人体抵御病原菌侵犯最重要的保卫系统。这个系统由免疫器官（骨髓、胸腺、脾脏、淋巴结、扁桃体、小肠集合淋巴结、阑尾、胸腺等）、免疫细胞（淋巴细胞、单核吞噬细胞、中性粒细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸粒细胞、肥大细胞、血小板（因为血小板里有IGG）等），以及免疫分子（补体、免疫球蛋白、干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子等细胞因子等）组成。免疫系统分为固有免疫和适应免疫，其中适应免疫又分为体液免疫和细胞免疫。 那么什么又叫免疫？所谓“免疫”，是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。 人体共有三道免疫防线：第一道防线是由皮肤和黏膜构成的，他们不仅能够阻挡病原体侵入人体，而且它们的分泌物（如乳酸、脂肪
小鼠免疫组织及免疫细胞的观察 【实验原理】 免疫器官、组织及细胞是机体免疫系统的重要组成部分。中枢免疫器官包括胸腺和骨髓，是T淋巴细胞及其他各类免疫细胞发生、发育和分化的场所，外周免疫器官包括脾胀、淋巴结和粘膜相关淋巴组织是免疫应答的场所。各类免疫细胞直接参与免疫系统对抗原类物质的免疫应答，完善的免疫器官组织结构和正常的免疫细胞种类和数量是机体免疫功能发挥正常的基本条件。 【试剂和器材】 小鼠、棉签、解剖台、平皿、大头针、手术剪子、手术镊子、载玻片、瑞士染液、细胞筛 【操作方法】 1.取一只小鼠，采用颈部脱臼法处死，将小鼠放到解剖台上，沿腹中线剪开皮肤且不破坏腹膜和胸膜，剪开腹膜，打开腹腔和胸腔，观察胸腺所在的位置和形状。 2.分离脾细胞：取出脾胀，去除其周围的脂肪组织，用剪子剪碎脾脏，放入细胞筛中，用载玻片清研脾胀，滴加生理盐水，使脾细胞分散成细胞悬液。 3.脾细胞染色观察：取少量细胞悬液置于载玻片上，与室温晾干，加瑞士染色液甲染色1min，甩掉染液，用瑞士染色液乙染色5min，用自来水冲洗，让染液漂走，置于光学显微镜下观察染色脾细胞。 【结果观察】 小鼠脾细胞瑞士染色镜下观察 【注意事项】 1.正确抓取小鼠，防止被鼠咬伤。 2.脾脏分离完整，清研轻柔。 3.染色时间不宜过长或过短。. 【讨论】 脾脏具有多种重要的生理功能, 参与并调节血液、免疫、内分泌系统的运转, 绝非可有可无;脾脏功能在疾病的不同阶段扮演不同的角色,有时甚至完全相反, 即具有双向性、时向性的特点。 1.脾切除术后暴发性感染全脾切除术后 OPSI 的发生率约为 1 %～
2.4 %。虽然 OPSI的发生率不是很高,但脾脏切除后,在由肺炎球菌导致的感染中毒性休克中, 50 %患者的病情迅速进展, 并最终导致死亡。脾脏为全身最大的淋巴器官, 血循环相当丰富, 且脾脏具有延缓微循环的作用, 有利于清除和吞噬多种抗原, 减轻机体感染的发生。同时脾脏拥有大量重要的免疫细胞及免疫因子, 如 T 细胞、B 细胞、K 细胞、单核巨噬细胞、自然杀伤细胞、杀伤细胞、淋巴因子活化杀伤细胞(LAK 细胞)、树突状细胞。免疫因子包括 tufstin 因子、备解素即P因子、纤维结合蛋白免疫核糖核酸环磷酸鸟苷内源性细胞毒因子、调理素和补体等。而脾切除后,脾脏所产生的免疫因子及免疫细胞消失,血浆中免疫球蛋白IgM、IgG下降,巨噬细胞活性下降,补体旁路活性下降及自身抗体活性增强, 使免疫系统失衡,导致机体易感性增加,甚发生OPSI 。 2.关于tufstin是主要由脾脏产生的促吞噬激素, N ajjar 于 1970 年首先发现。是IgG分子Fc段的一种四肽(T hrLy s -P ro -A rg), 通过激活中性粒细胞发挥吞噬功能。需要在白细胞激肽酶及内羧基肽酶的共同作用下释放。脾切除、镰状红细胞贫血、特发性血小板减少性紫癜、A IDS 及一些腹部疾病可使其水平下降, 脾移植后可使 tufstin 的水平升高。虽然已发现其在免疫系统中的重要作用, 但具体机制仍不十分明了。理论上讲上述情况 tufstin 活性减低的原因包括低γ球蛋白血症、脾脏内中性粒细胞释放减少、白细胞激肽酶活性改变及 tufstin 分子异常。 3.脾脏的抗肿瘤功能机体发生肿瘤的主要原因为免疫系统监控失调, 而脾脏作为人体免疫系统的重要组成部分, 无疑与肿瘤的发生密切相关。临床观察发现, 脾脏不仅自身很少发生原发恶性肿瘤且少有转移瘤出现, 这也表明脾脏具有抗肿瘤的作用。目前大家较公认的观点为脾脏在肿瘤免疫中具有双向性、时向性的特点。表现为在肿瘤早期脾脏具有抗肿瘤作用, 而在晚期则表现为免疫抑制, 促进肿瘤生长。其抗肿瘤作用主要表现在:①可增强巨噬细胞的吞噬功能。②可增强巨噬细胞溶解瘤细胞及其过氧化酶作用。③通过增强 NK 细胞活性发挥抗肿瘤作用。④Chu 认为, tufstin 的抗肿瘤机制不仅通过增加巨噬细胞的肿瘤趋向性、吞噬能力和分泌能力, 更重要的是增加巨噬细胞产生氧自由基—超氧阴离子的能力, 对杀伤肿瘤细胞具有重要意义。关于脾脏边缘带淋巴瘤的研究表明, 肿瘤的发生也与脾脏免疫功能的下降有关。
小鼠脾脏单个核细胞分离及细胞计数 实验时间：____________ 实验地点：_____________ 实验人：__________________ 1实验原理 小鼠脾脏位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，属于外周免疫器官。 外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定区域，所以富含各 类免疫细胞。 免疫细胞的分离：采用红细胞裂解法，是根据细胞对渗透压变化的敏感度。 红细胞由于细胞结构较为简单，仅有细胞膜结构，对于膨胀的耐受能力较差，因此绝大部分就会涨破，受到破坏。是一种比较温和的去除红细胞最简便易行的方法。 2实验材料： 1）健康小鼠 2）手术器械（剪刀、镊子）、解剖板 3）70汇醇 4）PBS缓冲液、红细胞裂解液（ACK 5）0.2%台盼蓝 6）细胞计数板、计数器 7）离心机 8）显微镜 3实验方法： 3.1取小鼠脾脏 将小鼠颈椎脱位处死，用酒精消毒。 用剪刀剪开背部皮肤，再找到脾脏，用镊子夹出脾脏并剪除周围组织。 3.2制备单个核细胞悬液
将取出的脾脏置于盛有3mlPBS缓冲液的平皿中，然后再置于尼龙指套中，用 针芯轻轻碾压使得单个核细胞悬浮于平皿中。 吸取平皿中细胞悬液置于刻度离心管（15ml）中，以1500rpm离心10min, 弃去上清液，加入ASK至2-3ml，轻轻吹打混匀并放置2min,以破坏红细胞。然后加入PBS缓冲液至10ml，以1500rpm离心10min。 弃去上清液，用PBS缓冲液定容至2ml，吹打混匀即为小鼠脾脏单个核细胞悬液。3.3 计算细胞浓度 稀释十倍，随机选取一个大方格计数 细胞计数为324个，计算细胞浓度为324X 104X 10=3.24 X 107/ml 3.4 计算细胞活力 在总计为324个细胞中计数，死亡细胞有16 个，计算细胞活力为： 324- 16/324 X 100%=95.1% 在理论范围之内 4 实验结果 4.1 研磨脾脏得到细胞悬液 本实验中将小鼠的脾脏放入尼龙指套内，置于少量PBS液中缓慢研磨，获得细胞悬液。实验中，我们发现尼龙指套不能滤去所有结缔组织，操作中会有结为絮状团块的结缔组织。这些结缔组织在离心后会和细胞绞缠在一起，去除十分麻烦，而且会损失细胞。应该在离心之前尽早用吸管吹打后小心弃去（这样损失的细胞比较少，造成较小的误差）。 研磨脾脏时的力度、时间、温度都会影响细胞的活性。所以应置于冰上快速、轻柔地研磨，置于液体中避免干磨。我们在实验室室温下碾磨，造成细胞破碎较多，影响最终实验结果。 4.2 白细胞计数
第一节人体的免疫功能 1．第一道防线和第二道防线 第一道防线：皮肤、黏膜 作用：阻挡或杀死病原体，清除异物 第二道防线：体液中的杀菌物质和吞噬细胞 作用：溶解、吞噬病原体（溶解多指唾液和泪液中的溶菌酶，吞噬多指血液中的吞噬细胞） 2．非特异性免疫 第一道防线和第二道防线都是与生俱来的，对多种病原体都有防御功能，因此叫做非特异性免疫。 3.特异性免疫 （1）定义：人体通过淋巴细胞产生抗体的免疫功能是后天获得的，只针对某一种特定的病原体或异物起作用，因此叫做特异性免疫。 （2）抗体：病原体侵入人体以后，能够刺激淋巴细胞产生一种抵抗该病原体的特殊蛋白质。 （3）抗原：引起人体产生抗体的物质叫抗原。抗原包括病原体、异物。 （4）第三道防线的组成以及功能 组成：免疫细胞和免疫器官 功能：产生抗体，消灭抗原（某种抗体只与刺激它产生的那种抗原结合，促进吞噬细胞吞噬病原体，或使病原体失去致病性。） （5）抗原被清除后，抗体存留在体内，且人体在一定的时间内仍保持产生相应抗体的能力。 （6）淋巴结、脾脏等淋巴器官中的吞噬细胞属于第二道防线，而淋巴结、脾脏等淋巴器官本身则属于第三道防线 特别提醒：①抗体是人体自身产生的，具有保护自身的蛋白质，抗体产生后在体内存留时间不同，如天花病毒抗体会永久的存留，但感冒病毒抗体只能存留短暂的时间。②一种抗体只能抵抗一种抗原，而且一种抗体只能受相应的抗原刺激后形成。 免疫是人体的一种防御功能，人体依靠这种功能识别‘‘自己’’和‘‘非己’’成分，能破坏和排斥进入人体内的抗原物质，清除自身产生的损伤细胞和肿瘤细胞，维持人体内部环境的平衡和稳定。 6．免疫的功能常见病症 防御功能过强则易导致过敏，过低则容易发生反复感染 自我稳定功能异常时出现自身免疫疾病，如类风湿性关节炎 免疫监视功能缺乏或过低，容易导致肿瘤的形成 7.特异性免疫分为自然免疫和人工免疫 8．预防接种就是把预防某种传染病的疫苗接种到人体，刺激人体的免疫系统，使其在不发病的情况下产生抗体，获得免疫功能。 9．预防传染病最有效的方法是预防接种。 10.疫苗是一种减活的、死亡的或不完整的病原体。 11.卡介苗是预防结核病；百白破三联混合制剂是预防百日咳、白喉和破伤风；乙脑是指流行性乙型脑炎；流脑是指流行性脑脊髓膜炎。
常用小鼠品系 1.BALB/c品系 （1）遗传背景及亚系：1913年Bagg获得的白化株（albino stock）小鼠。1923年以后由Mac Dowell进行了近亲繁殖，在1932年繁殖到26代，最后Snell将其育成。 亚系：BALB/c、BALB/ced、BALB/cJ、BALB/cAnN等。 （2）毛色基因标记：AA、bb、cc。 （3）主要遗传学特征： a.免疫学特征：易患慢性肺炎。初生时摘除胸腺的动物58%可发生侏儒症。在6月龄时，多数个体非常明显地出现高血球蛋白血症。免疫球蛋白绝对量的多少又因饲养条件的不同而有差异。在BALB/c鼠腹腔注射矿物油，可产生多发骨髓瘤，其发生率可高达60%。其发生率可因亚系的不同或饲养条件的不同而有差异。 b.生理学特性：血压较高，可自发高血压症，大部分雄鼠在20月龄时发生脾的淀粉样边。对X线照射敏感性高，LD50为500R，与其它品系比较，缺乏毛的光泽，甚至有脱毛现象。 c.癌发生率：乳癌发生率低，为3%；肾上腺癌、肺癌时有发生。雌鼠的几种癌发生率为：肺癌2%，网状肉瘤8%，血管瘤6%，淋巴肉芽肿4.5%。 d.老化及寿命：老年鼠心脏有某些病变，两性小鼠均有动脉硬化，SPF级雌性小鼠寿命为561日，雄鼠为509日。 （4）饲养方面注意事项：雌鼠繁殖利用周期较长，约1年，是比较容易繁殖的品系。四周龄以后不同窝的雌鼠有相互咬架的现象，故不同窝的鼠不宜同笼饲养。繁殖室26℃-27℃为宜，由于易患肺炎，所以不要与其他品系动物同室饲养。在其他品系的常在菌，对于本品系则可引起发病。 （5）特性和用途:对慢性肺炎敏感,特别对放射线敏感。乳腺肿瘤发病率低,当用乳腺肿瘤病毒(MTV)诱发时发病率增高。对促性腺激素有超排卵反应。两性小鼠均有动脉硬化症。对弓形体易感。补体活性高,对矿物油诱发浆细胞瘤敏感。偶见甲状腺肿瘤。干扰素产量低,对百日咳组织胺易感因子敏感。对以下列病原体敏感:鼠伤寒沙门氏菌 C5、麻疹病毒(中等)、利氏曼原虫、斑点热、立克次氏体和曼氏血吸虫。常用于单克隆抗体研究和生产。 2．C57BL/6品系 （1）遗传背景及亚系：1921年Little用Abbg Lathrop的小鼠株雌鼠57号与雄鼠52号交配，而得C57BL/6。亚系：C57BL/6、C57BL/6J、C57BL/6N等。 （2）毛色基因标记：aa、BB、CC（黑色）。 （3）主要遗传学特征：
《免疫调节》说课稿 一、教材分析 （一）教材中的地位和作用 《免疫调节》选自高中生物必修3第二章第四节。包括“免疫系统的组成”、“免疫系统的防卫功能”、“免疫系统的监控和清除功能”、“免疫学的应用”四部分内容。分2课时学习：第1课时，免疫系统及免疫的类型；第2课时，免疫失调引起的疾病及免疫学的应用。 随着课改的进行，新课标将免疫调节列为必修三的教学内容，其“具体内容标准”中包括“概述人体免疫系统在维持稳态中的作用”，可见，新课标将免疫视为人体生命活动调节的一种方式。将免疫系统列为调节系统之一，突出免疫系统对于机体稳态维持的作用，意在从更深层次上揭示生命活动的整体性，对于引导学生认识生命系统结构和功能的整体性具有重要的意义。同时也揭示了机体内各个系统之间联系的复杂性和多样性，说明了生命现象内在联系之间的普遍性。 另外，免疫学知识涉及到我们生活的方方面面，与学生的实际生活联系较多，将其放在必修模块对于全体高中学生“形成积极健康的生活方式”是不可或缺的。 可见本节在高考中的地位很重要。 （二）教学目标 1.知识目标： （1）概述免疫系统的组成。
（2）概述免疫系统在维持稳态中的作用。 （3）通过探讨分析体液免疫和细胞免疫的机制。 （4）关注艾滋病的流行和预防。 2.能力目标： （1）通过资料搜集、讨论的形式了解艾滋病及其防治。 （2）以图解、问题、和讨论的方式学习免疫系统的防卫功能。 （3）培养从报刊杂志、互联网中直接获取资料或数据的能力。 3.情感态度与价值观目标： （1）让学生了解艾滋病发展的严峻形势，以及每一个人的责任和义务。 （2）了解艾滋病的病因和预防，认识到艾滋病患者是HIV的受害者，需要得到我们的关爱。 （3）倡导关爱健康、珍爱生命的生活理念。 （4）关注器官移植所面临的问题，进一步探讨科学、技术与社会的关系。 （三）教学重难点 1．教学重点：免疫系统的防卫功能。 2．教学难点：体液免疫和细胞免疫的过程。 二、学情分析和学法指导 （一）学情分析：免疫调节内容在义务教育教材中就已经涉及，艾滋病、过敏反应以及免疫学的应用的相关知识，学生已经通过报刊杂志、广播电视等传播媒体有所了解。学生通过初中有关免疫知识和
顾名思义，肿瘤细胞免疫治疗就是调动人体强大的免疫系统来对抗癌症的治疗方法。那么，人体免疫系统有何强大之处?其对抗肿瘤的原理是什么呢?本期专题将对此做一个简单的解读。 人体免疫系统的基石是细胞，而人体本身就是由各种细胞组成的名副其实的细胞王国，在这个王国里，免疫系统是最忠实的守护神。它有着庞大的防御工事和数量众多的军队，这套防御系统成功地抵御了外敌的入侵，镇压了内部的叛变分子，如果没有他们的出色工作，细胞王国将不能正常运转，感染、癌症将会使这个王国覆灭。 细胞王国的防御工事中最重要的部分是皮肤，完整的皮肤保护了王国绝大多数的边境不受外敌侵犯，而在与外界相通的各个通商口岸，我们也是层层设防。我们口腔中的唾液，含有一种溶菌酶，可以高效地分解细菌;我们的胃酸几乎可以”酸死”食物中的绝大多数微生物，当然也会有漏网之鱼和对强酸有抵抗力的致病菌，如胃中的幽门螺旋杆菌可以在胃酸中闲庭信步(这家伙据科学家说是引起胃炎的祸首);我们的鼻毛虽然不雅，却交织成一张大网，兜住了大部分的灰尘和大点的细菌;呼吸道中覆盖的恶心的黏液可以粘住绝大多数的入侵者，然后通过擤鼻涕和吐痰将它们扫地出门(当然，还通过打喷嚏将敌人吹走)。 对付普通敌人，免疫细胞大军只需派出队伍里的基层士兵 以上说的是细胞王国的强大边境防线，虽然阵地工事建得是固若金汤，拒外来之敌于千里之外，但俗话说得好，”明枪易躲，暗箭难防”，对于出现在人体内部的敌人，如细菌、病毒，这道防线可以说是形同虚设。别忘了免疫系统还有着一支庞大而高效的军队(免疫细胞)，这支军队不仅数量超卓，而且种类繁多，士兵各司其职，战争来临时紧密联系、相互配合，拳头握在一起，把敌人打得落花流水。 免疫细胞大军大部分时间呆在血液中(它们就是我们常说的白细胞)，它们和负责传送氧气的红细胞、负责止血的血小板都来源于骨髓造血干细胞。如果细胞王国安定团结，这些造血干细胞就大多会成长为红细胞，负责传送氧气，只保持一小部分的白细胞维持战斗力;如果细胞王国面临外敌入侵，那骨髓就马上开足马力大量生成造血干细胞，而且这些”儿童”大部分会成长为战士，白细胞数量在短期内大增，全国进入备战状态。 对付普通敌人(如异物、细菌)，免疫细胞大军只需派出队伍里的基层士兵即可搞定，比如中性粒细胞一般与细菌死磕，多数与细菌同归于尽，我们伤口化脓感染的脓液，其实主要就由中性粒细胞的尸体组成。巨噬细胞可将来犯之敌一口吞掉，并将敌人的情报上报上级，这样下次再看到同样的敌人就可以直接消灭。再难对付点的敌人可以由B细胞产生的抗体来消灭，这些抗体像精确制导的”导弹”一样一对一的消灭敌人，极为高效。 对付狡诈多变、凶残暴戾的癌细胞则需要出动精英部队
第六章免疫与健康 第一节人体的免疫功能 学情分析： 本节内容介绍了人体的三道防线和免疫的相关知识，主要为儿童进行的计划免疫就是以这些知识作为基础的。本部分教学内容生僻艰深，学生不容易理解，涉及到了人的皮肤、呼吸系统、消化系统和循环系统等。针对这一情况，可从学生司空见惯的皮肤发炎和生病的实际经验入手，以激发学生的兴趣，进而寻求解决问题的方法。 教学目标： 1、概述人体免疫的概念、功能和作用。 2、举例说明人体的特异性免疫和非特异性免疫。 3、描述计划免疫，列举计划免疫的实例，认同计划免疫的意义。 教学重点： 1、特异性免疫和非特异性免疫的区别。 2、特异性免疫的免疫的概念。 3、计划免疫的意义。 教学难点： 1、特异性免疫的免疫的概念。 2、免疫的功能。 课时安排：一课时 教学程序： 一、引言： 日常生活中，同样是吃了鱼虾等食物，有的人会出现过敏现象，这是为什么？当有些病人需要器官移植时，为什么要找到与之相“匹配”的器官？在流感流行期间，为什么有的的人容易被传染，而有的人不易被感染？为什么患过腮腺炎的人一般不会再患第二次？这与人体的免疫功能有着密切的关系。 幻灯片： 第六章免疫与健康第一节人体的免疫功能
二、新授： 在我们生活的环境中有许多病原体，人之所以能健康的生活，是因为人体有保护自身的三道防线。 幻灯片： 人体的三道防线： 第一道：皮肤和黏膜 第二道：体液中的杀菌物质和吞噬细胞 第三道：免疫细胞和免疫器官 （一）、生来就有的免疫力： 幻灯片：P102图3.6-1人体的先天性免疫： （1）皮肤的表皮细胞排列紧密：保护和杀菌作用 （2）呼吸道黏膜上有许多纤毛：阻挡和清除异物 学生观察图片，分析讨论： 1、皮肤和呼吸道黏膜上的纤毛，在防御病原体入侵时分别起到了什么作用？ 2、什么样的皮肤会让病原体容易侵入？ 3、皮肤的完整性对人体有什么重要意义? 幻灯片：动画 (3) 血液、唾液和泪液中的溶菌酶：破坏病菌的细胞壁，使病菌溶解 （4）血液中的吞噬细胞：吞噬和消化各种病原体 由此总结得出：上述两道藩防线是针对多种病原体的防御功能，使人人生来就有的，因此叫做非特异性免疫，也叫做先天性免疫。病原体一旦侵入人体，人体首先调动非特异性免疫进行防御。 （二）后天获得的免疫力： 提问学生是有否患过腮腺炎，这种病是由什么引起的，得过的同学又没有患第二次等问题，说明患过流行性腮腺炎的人一般不会患第二次，他们能够抵抗腮腺炎病毒的侵袭。这是为什么呢？ 分析与讨论： 幻灯片：课本第118页图3.6-2 特异性免疫部分过程示意图 回答下列问题： (1)腮腺炎病毒与抗原之间是什么关系？
《免疫与计划免疫》说课稿 各位老师好： 今天我说课的课题是《免疫与计划免疫》。下面我对本课题进行分析： 一、说教材 《免疫与计划免疫》是人教版必修教材八年级第八单元第一章第二个课题本节内容讲的是免疫的基础知识。学习免疫知识，对于增强自身抵抗力，预防疾病等具有重要意义。掌握了这部分知识对于学生增进身体健康有一定的帮助。 1、本节主要内容的特点和地位 本节课是在认识了传染病的基础上，来进行探究的，这样能使学生更好地了解免疫和传染病之间的关系，进一步了解增进身体健康，预防疾病的重要性。这节课的学习又为下一章《用药和急救》的学习打下基础。因此，这节课在本单元中起到了承上启下的作用。 2、教学的重难点 本节课的内容由三道防线、免疫的功能、计划免疫三大部分组成，其中第三道防线的内容是整个教材的重点和难点。一是因为学生对免疫的基础知识比较生疏；二是因为这节内容基本概念多，有的概念学生较难理解。 教学重点：重点的依据是只有掌握了人体的三道防线及其免疫功能，才能理解和掌握计划免疫。 教学难点：难点的依据是三道防线的免疫功能较抽象，学生没有这方面的基础知识。 对此，教师应结合学生已学过的知识，利用教材中的实例：天花病毒进入人体后，人体的变化及结果来说明抗原、抗体及特异性免疫等这几个基本概念来突破这节课的难点。二、说教学目标 根据本教材的结构和内容分析，结合着八年级学生他们的认知结构及其心理特征，我制定了以下的教学目标： 1、知识目标： （1）说出人体三道防线的组成和功能； （2）说出非特异性免疫、特异性免疫的概念和抗原、抗体的概念； （3）描述免疫的功能； （4）说明计划免疫的意义。 2、能力目标： （1）通过分析文字和图片资料来提高学生分析说明问题的能力及交流合作的能力。 （2）溶入对学生进行科学史观的教育，使其感受到人们对某一个问题的认识永远不会停留在一个认知水平上，这需要对科学不懈的努力与追求，从而培养学生对 科学不断追求与探索的能力。 3、情感目标 结合学生打预防针的亲身经历，使学生深刻的认识到党和国家关心下一代健康成长，为提高人口素质进行计划免疫的重要性和必要性，特别是我国在医药卫生事业上的巨大成就，向学生进行爱国主义教育。 三、说学情 在第一节的学习中，学生已经对传染病的知识进行了系统的学习，学生初步了解了免疫的有关实例。受社会环境影响（禽流感），学生对自身生理过程及原理的关注程度加大，对自身健康比较感兴趣。在学习方面，初二的学生的求知欲望强烈，对灵活、风趣的教学方法更加感兴趣。照本宣科的教学方法只能事倍功半。 四、说教法
小鼠免疫 免疫是单抗制备过程中的重要环节之一。即用目的抗原免疫小鼠，抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B 淋巴细胞。 一、血清效价的影响因素 小鼠免疫效价的高低直接影响单抗的制备。单抗免疫程序不同，包括免疫用的动物，抗原的性质、抗原量、免疫途径、免疫间隔时间、是否应用佐剂均会影响免疫效果。 二、免疫材料 1．免疫用的动物 抗原与免疫动物种属差异越远越好，小鼠、大鼠、亚美尼亚仓鼠和兔中分离的淋巴细胞的杂交瘤技术已经很成熟。小鼠是极好的免疫接种对象，原因是：1）小鼠易操作；2）多个纯系株易得到且价格合理；3）有很多试剂可用以检测鼠源免疫球蛋白；4）小鼠对外来蛋白质能产生良好的免疫应答；5）小鼠淋巴细胞能够和多种鼠源骨髓瘤细胞系发生有效融合。 2．免疫原（抗原） 颗粒性抗原：颗粒性抗原免疫原性强，如肿瘤细胞、淋巴细胞、?细菌等可作为抗原，不加佐剂直接进行免疫，就可获得较好的免疫效果。 可溶性抗原：因其免疫原性较弱，一般要加佐剂，如系半抗原，?应先制备成人工免疫原，再加佐剂。 免疫原的形式会影响宿主体液免疫产生的抗体谱，因此选择免疫原制备抗体时应该考虑到所制备抗体的最终用途，并应该根据其用途决定何种方法筛选抗体
更合适。一般认为，影响免疫血清中lg亚类谱的因素主要包括免疫原、接种途径、佐剂和动物遗传背景等。且主要由初次基础免疫所决定，加强免疫的作用主要是提高特异性抗体的滴度。 3．佐剂 目的：1）增强抗原对机体的免疫原性；2）增强抗体的产生能力；3）为制备出高效价的免疫血清；4）增强可溶性抗原的免疫原性；5）在某种情况下，改变Ag免疫应答类型；6）延长抗原在免疫动物的时间；7）改变抗原的分布；8）增强共刺激信号和激活免疫系统而刺激淋巴细胞增殖。 种类：氢氧化铝佐剂、明矾佐剂（常用于肌肉、皮下注射）、弗氏佐剂。 弗氏佐剂是最主要的免疫佐剂，热处理杀死的分歧杆菌可以引起炎症反应，募集淋巴细胞到抗原沉积部位，但若重复刺激可导致肉芽肿的形成，故不能重复使用。 三、免疫策略 1．免疫途径 途径的选择取决于抗原的生物学特性和理化特性。有静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮内注射、脾内注射、皮下注射、淋巴结注射等。 脾内免疫会产生IgM 类抗体，分泌该类抗体的杂交瘤细胞株相对IgG 类较不稳定，且IgM 类抗体的一些性质测定会有困难，一般不建议使用。脾内免疫操作困难，实验动物极易死亡，所以也不常用此种方法。 一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。 2．免疫方案 典型的免疫策略依赖于抗原的反复刺激，以增强特异性免疫应答并使其成熟。
黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响 发表时间：2013-12-10T10:07:32.950Z 来源：《医药前沿》2013年11月第31期供稿作者：朱永俸1 石高星1 吴剑平1 李珊珊1 袁婧1 黄立师1 刘 [导读] 长期以来，人类生活在一个充满危险的环境，得以存续的同时，也获得了非凡的免疫力。朱永俸1 石高星1 吴剑平1 李珊珊1 袁婧1 黄立师1 刘佳2(通讯作者) （1长沙医学院2010级生物技术专业湖南长沙 410219） （2长沙医学院生物学教研室湖南长沙 410219） 【摘要】目的探讨黄芪多糖对小鼠的免疫功能的影响。方法连续28天黄芪多糖以4.0，1.0，0.25g／kg浓度给予小鼠灌胃,检测小鼠的胸腺，脾脏指数及小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力。结果低浓度组的胸腺指数高于空白组（P=0.017），中浓度组的脾脏指数高于空白组（P=0.002），其他各组差别无统计学意义。各组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率、吞噬指数无显著差别（F=2.088，P=0.140）。结论黄芪多糖可能通过提高胸腺和脾脏的功能从而增强免疫力，但对参与非特异免疫的巨噬细胞影响不明显。【关键词】胸腺脾脏指数吞噬能力 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）31-0254-02 长期以来，人类生活在一个充满危险的环境，得以存续的同时，也获得了非凡的免疫力。免疫力低下的机体易于感染、易于生病；如引发过敏反应、自身免疫病等，因此优化免疫力已经成为了医学研究的热点之一。中药黄芪的使用迄今已有2000多年的历史，有利尿、抗疲劳、抗衰老、抗应激、降压等多方面作用，关于黄芪是否能够增强机体免疫能力尚需研究。黄芪的主要活性成分是黄芪多糖，因此，本实验通过给小鼠连续灌胃黄芪多糖，研究黄芪多糖对小鼠免疫力是否具有提升作用。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 主要试剂和仪器 黄芪多糖(纯度70%，批号：20130310)；电子恒温不锈钢水浴锅（上海市南阳仪器有限公司）；光学显微镜（MOTIC公司）；1%鸡红细胞悬液；6%淀粉肉汤(含0.3%台盼蓝)）；吉姆萨染液；其他试剂为分析纯。 1.1.2 动物 40只SPF级昆明小鼠，雄性，体重(22±2)g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，批号43004700000750，长沙医学院湖南省重点建设学科标准动物室饲养。 1.2 方法 1.2.1 动物处置 实验以4.0，1.0，0.25g／kg浓度设3个剂量组，另设1个对照组，每组10只小鼠，采用灌胃法，对照组给予等量蒸馏水，每天一次，连灌28天，第27、28天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤1ml。第29天，称重后腹腔注射20%鸡红细胞悬液0.5-1ml,轻柔小鼠腹部。30min后,再向腹部内注射0.5ml小鼠生理盐水,轻柔小鼠腹部。3min后，将小鼠以颈部脱位法处死。小鼠剪开腹腔，用不装针头的注射器吸取腹腔液涂片，吉姆萨染色后，检测巨噬细胞吞噬能力。分离脾脏和胸腺，洗净吸干水分，称重。 1.2.2 胸腺和脾脏指数的测定 摘取小鼠的胸腺和脾脏，用滤纸吸干残血后，称重（mg），按公式计算胸腺指数和脾脏指数，即：胸腺指数=胸腺重量/（小鼠体重×10） 脾脏指数=脾脏重量/（小鼠体重×10）（每10 g小鼠体重含有的胸腺或脾mg重量，mg/10 g）1.2.3 巨噬细胞吞噬能力的测定 剪开腹部皮肤，将注射器伸入小鼠腹腔中，吸取腹腔液，把腹腔液滴加在洁净的载玻片上，然后将载玻片置于电子恒温不锈钢水浴锅中，在37℃恒温孵育30分钟。将载玻片取出，用水轻轻的冲洗，去除上清和未粘附在玻片上的细胞在室温下晾干。再用甲醛固定3分钟，晾干后用吉姆萨染色，冲洗多余的染液晾干。在油镜下观察计数100个巨噬细胞，计算出吞噬百分率（吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞所占比率）和吞噬指数（每100个巨噬细胞中吞噬了红细胞个数)。 1.2.4 统计学方法 采用SPSS 19软件进行数据分析处理，数据以`x±s表示。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较方法采用LSD法，P<0.05有统计学意义。 2 结果 2.1黄芪多糖对胸腺指数，脾脏指数的影响 经过28天不同浓度的黄芪多糖灌胃，各组的胸腺指数存在区别（F=3.588，P=0.036），其中低浓度组的胸腺指数高于空白组（P=0.017），其他各组差别无统计学意义。各组的脾脏指数存在区别（F=4.914，P=0.012），其中中浓度组的胸腺指数高于空白组（P=0.002）。 表1 黄芪多糖对小鼠胸腺指数与脾脏指数的影响（x-±s，n=10）
小鼠巨噬细胞功能的检测 伍国强 （兰州大学草业学院兰州730020） 摘要：本实验用CFA免疫小鼠后，检测小鼠腹腔巨噬细胞的数目以及用中性红检测巨噬细胞的吞噬能力。结果表明，免疫小鼠的腹腔巨噬细胞的数目和吞噬能力均有所提高。 关键词：巨噬细胞；功能；检测 1 前言 巨噬细胞是一种多功能免疫细胞,在机体的特异性和非特异性免疫反应中发挥重要功能。主要作用有：（1）吞噬杀伤作用：直接吞噬、调理吞噬作用。（2）抗原提呈作用：即外来的抗原性异物通过巨噬细胞的捕获、加工和处理后，与胞内合成的MHC-1/II类分子形成抗原肽－MHC分子复合物，并被呈递到细胞膜表面，被TCR 识别的作用。具有此作用的细胞叫抗原呈递细胞（antigen presenting cell,APC)。此外，巨噬细胞表面还表达多种共刺激分子，如B7、ICAM-1、LFA-1,3等分别与T细胞上的CD28、LFA -1(CD11)、LFA-2(CD2)等相互作用，为T细胞的活化提供第二信号。（3）抗肿瘤作用：Mφ被某些细胞因子如IFN-γ激活后能有效杀伤肿瘤等靶细胞，其吞噬杀菌能力也显著提高。（4）分泌生物活性介质，产生免疫应答和其它免疫效应：如 IL-1,12、IFN、TNF、PGE等;以及某些补体成份和凝血因子、组织修复因子等。为了检测巨噬细胞的吞噬功能，我们用CFA免疫的小白鼠作为实验材料检测其腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用。 2 材料与方法 2．1 材料 2．1．1 药品：生理盐水、0.6%环磷酰胺、Hank’s溶液、1640培养基、细胞裂解液、中性红等。 2．1．2 仪器：血球计数板、细胞培养箱、分光光度计等。 2．1．3 动物：小白鼠2只，由兰大医学院动物实验中心提供。 2.2、方法 2．2．1 小鼠腹腔巨噬细胞制备取小白鼠2只，分为对照组和实验组，对照组注射0.1ml生理盐水，试验组注射0.1mlcFA。48小时后，小鼠眼眶放血，断颈处死。腹腔注射3ml预冷的生理盐水。吸取腹腔渗出液5ml离心管（冰浴）。1600rpm离心10 分钟，弃上清，4℃生理盐水定容至5ml。血球计数板镜下巨噬细胞计数。用生理盐水调mΦ浓度为1×106，取4ml 1600rpm 离心10分钟，弃上清加4ml 1640定悬。将mΦ加入24孔板，每组4孔，每孔1ml。37℃，5%CO2细胞培养箱贴壁培养纯化2小时。2．2．2 巨噬细胞吞噬中性红试验将贴壁纯化好的mΦ弃1640培养液，对照孔加0.5ml生理盐水，其余每孔加0.5ml0.075%中性红,继续培养1小时。倾去上清液,用温PBS 洗细胞3 次,每孔加入细胞溶解液(为体积分数50 %的乙酸和体积分数50 %的无水乙醇) 2ml ,室温下放置30分钟,待细胞溶解后,即用分光光度计测定OD值。以OD 值表示巨噬细胞功能的强弱。 3 结果与讨论表：mΦ的浓度及吸光值 mΦ细胞个数mΦ浓度 （个/ml) 0D值 对照组256 6.4×105 0.252 试验组2176 5.44×106 0.283 3．1 免疫小鼠腹腔巨噬细胞浓度从上表可以看出，用cFA免疫的小鼠腹腔巨噬
免疫调节说课稿 各位评委、老师，大家好： 今天我说课的内容是人教版新课标、高中生物必修3《稳态与环境》第二章第4节《免疫调节》。主要包括五大部分，分别是说教材、说教法学法、说教学过程、板书设计和教学设计反思。 一、说教材：这一部分又包括教材的地位及作用、教学目标和教学重难点。 1、说教材的地位及作用 本节课是在第一章《人体的内环境与稳态》的基础上对免疫系统功能的认识。在学习免疫调节之前，学生们已经学习了神经调节、体液调节，这几种方式作为维持稳态的基础，对人体内环境的稳态具有重要的作用。这为过渡到本课题的学习起了铺垫的作用。本节课分三个部分内容，分别是：三大防线的组成、特异性免疫的类型、体液免疫和细胞免疫的过程。本课题在整个教材中起着承上启下的作用。 2、教学目标 根据本教材的结构和内容分析，结合高二年级学生的认知结构及其心理特征，我制定了以下教学目标： ⑴、知识目标：概述免疫系统的功能及其在维持稳态中的作用。 ⑵、能力目标：能够概括免疫系统的防卫功能，能分析体液免疫和细胞免疫的过程；学会构建过程图；培养学生的自主探究能力。 ⑶、情感目标：培养学生对自身的了解和社会问题的关注，确立积极的生活态度和健康的生活方式 3、教学重、难点 本着新课程标准，在吃透教材基础上，我确定了以下教学重点和难点。 ⑴教学重点：免疫系统的防卫功能（重点的依据是免疫系统的结构与功能相适应，帮助学生理解和掌握免疫系统的防卫功能。） ⑵教学难点：体液免疫和细胞免疫的过程（难点的依据是体液免疫和细胞免疫的过程较抽象，学生没有这方面的基础知识。） 为了讲清教材的重难点，使学生能够达到本课题设定的教学目标，我再从教法、学法上谈谈。 二、说教法学法 1、说教法 我们都知道生物学是一门建立在实验上的重要学科，主要是培养人的动脑、动手能力。因此，在教学过程中，不仅要使学生“知其然”，还要使学生“知其所以然”。我们在以师生既为主体又为客体的原则下，展现获取理论知识、解决实际问题的思维过程。 考虑到高二年级学生的现状，我主要采取讲授法、读书指导法、演示法。 a、讲授法：根据建构主义的学习理论，利用讲授法分析概念，联系学生已有知识，促进学生对新概念的理解，培养学生将课堂教学和自己的经验相联系的能力。 b、读书指导法：体液免疫和细胞免疫的过程既有联系又有区别，学生在老师的指导下分析这些过程，充分调动学生积极性，激发学生兴趣，做到举一反三的效果，促进学生横向思维的发展。 c、演示法：因为体液免疫和细胞免疫的过程比较抽象，学生没有这方面的基础
1材料与方法 1. 1. 2 主要试剂环磷酰胺、RPMI 1640 培养 液( 含L-谷氨酰胺，)、Hanks 液( HyClone)、MTT 试剂、 PBS 缓冲溶液( pH 值7. 2 ～ 7. 4，HyClone)、丝裂霉素C、SA 缓冲液，绵羊红细胞，补体( 豚鼠血清)、都氏试剂、LDH 基质液、 P815 细胞( 购于协和医科大学基础医学细胞中心)、YAC-1 细 胞、FITC-Anti-CD3、PE-Anti-CD4、PerCP-Anti-CD8 荧光抗体)。 1. 2 动物与分组 Balb /C 小鼠90 只，雌性，6 ～ 8 周龄，体重18 ～ 22g。颗粒饲料，室温(22 ± 2)℃，湿度60% ～ 80% 。 动物在实验室条件下检疫1 周后，实验分为3 项处理进 行，(1) 处理一:测定动物体重、脾脏重量及系数;(2) 处理二: 测定NK 细胞活性，细胞毒性T 细胞活性;(3) 处理三:测定血 清半数溶血值。每项处理随机分为空白对照组、CTX-1 组和 CTX-2 组。 1. 3 实验方法和测定指标 1. 3. 1 剂量选择试验前经急性经口毒性试验确定CTX 的LD50为240mg / kg，以1 /4 LD50做为本试验中CTX-1 组的 CTX 剂量，即60 mg / kg 环磷酰胺，用蒸馏水配制，每日经口给予。CTX-2 组每日经口给予蒸馏水，试验结束前一天经腹腔 注射给予动物200 mg / kg 环磷酰胺［2，3］( 用蒸馏水配制)。另设空白对照组，蒸馏水代替受试物，每日经口给予。动物灌胃 容积为0. 3ml /10g，每周称量体重调整灌胃量，连续灌胃4 周 后测定各项免疫指标。 1. 3. 2 血液中T、B 淋巴细胞分类计数［4］动物处死前眼 眶内眦静脉取血，EDTA-K2抗凝，每只设定3 支流式试管进行 测定，每管加入50μl 抗凝血。分别在3 管中加入CD3 /CD19 ，CD3 /CD4 /CD8.不同荧光素标记的单克隆小鼠抗体。每管加 入2ml FACS 红细胞裂解液，室温下避光保存20min。1200r / min 离心5min，弃去上清液。每管再加入2ml PBS，1200r /min 离心5min，弃去上清液。加入0. 5ml PBS 混匀后上流式细胞仪进行检测。 1. 3. 3 细胞毒性T 淋巴细胞活性试验［5，6］ 1. 3. 3. 1 脾细胞悬液的制备( 效应细胞) 无菌取脾，用4 层 纱布将脾磨碎，制成单细胞悬液。用Hank＇s 液洗2 次，每次离 心10min(1000r /min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0. 5ml 灭 菌水20s，裂解红细胞后再加入5ml Hank’s 液，混匀后1000r / min，10min 离心，用1ml 含10% 小牛血清的RPMI1640 完全培 养液重悬，调整细胞浓度为2 × 107 个/ml;加0. 5ml 此细胞悬 液于24 孔培养板，留一孔不加脾细胞作为对照孔。 1. 3. 3. 2 制备刺激细胞1000r /min，10min 离心处于对数生 长期的P815 细胞，用5ml DMEM 培养液悬浮P815 细胞于 15ml 离心管中，计数细胞。加入丝裂霉素C，相当于50μg / (2 ～ 5) × 107 个细胞。用锡纸包裹离心管以避光，在37℃水浴 30min。用Hank’s 液洗P815 细胞3 次，之后Hank’s 液悬浮