血栓调节蛋白在糖尿病大鼠心肌中的表达及意义
张
雷
董志恒
1
（北华大学基础医学院细胞生物教研室，吉林吉林132013）
〔摘要〕目的
探讨STZ 诱导的糖尿病大鼠心肌组织中血栓调节蛋白（TM ）的表达及意义，为糖尿病心肌病（DCM ）的防治提供新的靶向。
方法
从50只SD 大鼠中随机选取32只采用一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ ）制备糖尿病大鼠模型，剩余18只作为正常对照。每日观察大鼠进
食、饮水等一般状况，每周固定时间测量体重、血糖及尿糖。分别在2、8、12w 末分批处死一定数量两组大鼠。分别检测各批大鼠的心脏指数（HW /BW ）、血糖、血脂；采用透射电镜观察心肌组织超微结构的改变；免疫组化方法观察心肌组织中TM 的蛋白表达；通过RT-PCR 检测TM mRNA 的表达水平。结果
与正常对照组相比，2w 末模型组心脏指数无明显差异；8、12w 末心脏指数均显著增加，且12w 高于8w （P ＜0.01）。模型组各时间段
各项生化指标均高于正常对照组（P ＜0.01），各项指标变化由低到高排列顺序为2、8、12w 末。2w 末模型组大鼠未见明显病理变化；8、12w 末模型组大鼠出现心肌细胞肥大、排列紊乱、细胞外间质增多，线粒体肿胀、嵴断裂、溶解等病理变化；12w 末模型组大鼠上述病理变化较8w 末模型组更加明显。免疫组化显示，模型组TM 表达明显高于正常对照组（P ＜0.01）；组间比较阳性表达由低到高顺序依次是2、8、12w 末。与正常对照组相比，模型组大鼠心肌组织中TM mRNA 的表达明显增高（P ＜0.01），其中，12w 末表达最强，其次是8，
2w 末表达最弱。结论TM 在糖尿病大鼠心肌组
织中呈时间依赖性高表达，并与病程呈正相关，显示其可能在DCM 的发生、发展中发挥重要作用，这为该病的防治提供了新的靶向。
〔关键词〕糖尿病；心肌；血栓调节蛋白〔中图分类号〕R285.5
〔文献标识码〕A
〔文章编号〕1005-9202（2012）15-3229-04；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.15.044
基金项目：吉林省科技厅资助（吉科合字〔2007〕第自52号）；北华大学
校管课题资助
1
病理教研室
通讯作者：董志恒（1968-），男，医学博士，教授，硕士生导师，主要从事
糖尿病慢性并发症研究。
第一作者：张
雷（1971-），女，实验师，主要从事糖尿病慢性并发症研究。
糖尿病（DM ）的慢性并发症累及全身各个系统，其中糖尿病性心肌病（DCM ）危害最大。研究显示，长期的高血糖可引起各种组织蛋白非糖氧化，脂质堆积产生的大量中间产物和自由基诱发各级血管内皮损伤
〔1〕
。糖基化终末产物的形成促使多
种细胞因子与生长因子的释放与表达，增加血管内皮细胞通透性及单核细胞趋化性，加重了管壁炎症反应和血管增生，引发了微循环障碍和心肌纤维细胞的增殖
〔2〕
。因此对于血管内皮
细胞损伤及内皮细胞释放的细胞因子的研究将为DCM 的发病机制及防治提供可靠的理论依据，其意义重大。血栓调节蛋白（TM ）是存在于内皮细胞表面的一类糖蛋白，对血管内凝血的调节起重要作用。在各种引起血管内皮损伤的病理情况下，由
损伤的血管内皮细胞释放TM ，因此TM 被认为是血管内皮细胞损伤的一个分子标志物
〔3〕
。国外有研究〔4〕
提出血糖水平的
波动与血管内皮损伤显著相关，同时研究表明2型DM 患者
TM 水平显著升高，TM 的水平与病情呈正相关〔5〕
。国内学者研
究发现
〔6〕
，TM 在DM 出现并发症时显著升高，随病情进展，血
管内皮损伤的加重，TM 大量释放入血，而凝血功能严重障碍加重了DM 并发症。虽然目前TM 在DCM 时的作用尚不清楚。基于以上所述，本实验以TM 为研究指标，通过观察TM 在DM 大鼠心肌组织中的表达，初步探讨其在DCM 发生、发展过程中的可能作用，为进一步阐明DCM 发病机制提供理论依据和防治的新靶标。1材料与方法1.1
实验动物
选用普通级、健康SD 雄性大鼠50只，
6周龄，体重（220?20）g ，由吉林大学动物实验中心提供。大鼠精神状态良好，
反应灵敏，皮毛光泽，饮食正常。大鼠在通风及光线良好、环境卫生、温湿度适宜的饲养环境下适应性喂养1w 后，进入实验。实验期间动物饲料为鼠用常规饲料
。
2型糖尿病大鼠模型研究概况 【摘要】目的：综述近年来2型糖尿病(T2DM)大鼠模型的研究进展及对其优缺点进行评价和未来同类模型的展望。方法：主要对T2DM大鼠模型的建立技术和方法进行综合性评价。结果：T2DM大鼠模型目前可以分为自发性T2DM 和实验性T2DM模型,且仍有较大发展空间。结论：经过综合评价研究，认为各种建模方法均有优缺点，目前较认可的是实验性T2DM大鼠模型，因价格低廉，造模方便而广受欢迎，但仍缺乏一定的造模标准。 【关键词】2型糖尿病；动物模型；研究概况 随着经济社会的发展，人们的饮食结构、生活方式等发生了很大改变，糖尿病发病率显著上升，尤其T2DM占了较高比例，大概占了糖尿病发病率的90%。T2DM是因人体胰岛素分泌相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低继而引发糖、蛋白质、脂肪和水电解质等代谢紊乱所导致的疾病。患者典型表现为三多一少，即多饮、多食、多尿表现，同时还伴有身体消瘦、疲乏、烦躁、口渴等临床症状。 选择一些合适的动物模型进行动物试验成了我们研究糖尿病的良好途径，我们可以从中比较一些糖尿病药物的作用效果以及其药动学的特点，在临床用药上对评价某套治疗方案的可行性及预后等具有十分重要的参考意义。 目前研究的临床T2DM动物模型主要集中在大鼠上，这可能是由于大鼠作为T2DM动物模型相对较稳定且与人T2DM表现相似的优点。因此我们在下面综述近几年来国内外有关临床T2DM大鼠模型研究的情况。 总体上来说，目前临床T2DM研究的大鼠模型主要分为两类，一类是自发性T2DM大鼠模型，另一类则是实验性T2DM大鼠模型，考虑到成本及方便程度，目前以后者居多。 1 实验性T2DM大鼠模型 1.1 单纯高脂高糖引发的T2DM 在试验中，通过较长时间给予大鼠过量的高糖高脂饮食，发现能够诱导出较满意的T2DM大鼠模型，从而能为进一步研究奠定良好的基础。目前认为其机理可能是高糖高脂饲料会导致胰岛B细胞超负荷，进而使胰岛细胞发生损伤、萎缩甚至死亡，胰岛的功能因此下降，继而建立起伴胰岛素抵抗的T2DM模型。鲁瑾[1]等采用61%的高脂饮食，饲养大鼠7周后，大鼠就出现了高胰岛素血症，且形成了明显的胰岛素抵抗，是一个十分可靠的胰岛素抵抗模型。张丽锋[2]等给予W istar大鼠脂肪热比为59%的饲料, 喂养4周，均出现胰岛素抵抗，多项研究试验表明高脂饮食可以诱发产生可靠的糖尿病大鼠模型。 1.2 应用STZ药物诱导产生的大鼠模型由于高糖高脂饲料相对用时较长，且饲料成本相应较高，因此合理使用链脲菌素(STZ)是目前许多研究者所推崇的
Nrf2—ARE信号通路与2型糖尿病心肌病的相关研究随着对糖尿病的研究发展，糖尿病心肌病已被大量临床及动物实验证实， 并逐渐受到广泛重视，它与糖尿病高心力衰竭发病率和死亡率关系密切，大量临床研究显示糖尿病心肌病早期表现为舒张性心力衰竭，舒张性心力衰竭进程中起重要作用的为心肌间质纤维化。Nrf2信号通路是近年来发现的一个新的转录因子，在心血管系统具有稳定的表达。Nrf2信号通路的目的基因在心血管系统疾病发病机制中具有保护作用，然而其具体作用机制尚不清楚。研究证实Nrf2信号通路在抗肿瘤、抗凋亡、抗应激、神经系统等方面发挥着广泛的保护作用。HO-1是Nrf2-ARE 通路重要的抗氧化蛋白酶。本文就HO-1是否通过激活Nrf2-ARE通路途径而达到抗DCM的心脏保护作用作进一步综述。 标签：糖尿病心肌病；CPDT；Nrf2-ARE；HO-1；氧化应激 随着糖尿病（diabetes mellitus，DM）患者逐年增多，目前已成为世界上第三大危害人体健康的疾病，我国DM患病人数位居世界第二，心血管病变是糖尿病患者的主要死亡原因，随着对糖尿病相关疾病研究的不断深入，糖尿病心肌病之一独立于高血压、冠心病之外的糖尿病心血管并发症，逐渐被人们所重视。其是糖尿病病人致病率和死亡率最主要的原因之一[1]。 1 糖尿病心肌病 糖尿病心肌病最早在1972年由Rubler等首先提出，之后大量研究显示，糖尿病心肌病是糖尿病（diabetes mellitus，DM）状态下一组独立的心肌病变[2]。1989年，Bouchard等应用超生心电图发现了糖尿病患者限制性心肌改变，左心室舒张末容积和顺应性明显减低。随后研究证实了糖尿病患者存在左心室肥大、舒张功能合并或者不合并收缩功能不全。并认为这是导致其易发心衰的重要原因[3]。近年糖尿病患者逐年递增，截至目前国际糖尿病联盟（IDF）最新调查显示，全球糖尿病患者约为3.66亿人。我国糖尿病患者约为1亿（2型糖尿病患者约占97%），患病率高达9.7%，糖尿病前期人数约为1.49亿，随着流行病学的统计，发现糖尿病心肌病在糖尿病患者中的发病率在逐年递增，防控形势严峻[4-5]。 2 Nrf2-ARE信号通路 ARE是位于超氧化物岐化酶（SOD）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）等保护性基因5’端的启动序列（5-GAGTCACAGTGAGTCGGCAAAATT-3 ）， 是一特异的DNA-启动子结合序列，可被多种氧化性和亲电性化合物激活，从而激活II相解毒酶和抗氧化酶基因表达，保护细胞组织正常的功能[6]。Nrf2为这一序列激活因子。活化的Nrf2从Keap1解离后进入细胞核，先与核内Maf 蛋白结合，形成异二聚体后在与ARE序列结合，激活ARE调控基因转录。这一路径称为Nrf2-ARE通路[7]。Nrf2蛋白作为一种转录因子，是通过结合自身基因5’端ARE序列，进而对其蛋白转录活性起调节作用[8]。有研究显示，Nrf2-ARE
糖尿病心肌病（DCM）是由糖尿病引起的、与血管疾病同时伴行或单独发生的特殊性心肌病。DCM是心肌对糖尿病的急性反应而导致的慢性病理改变。这些急性反应包括基因表达异常、信号传导改变及细胞凋亡。高血糖是DCM的主要病因，但高血脂、高血压和炎症反应等其他因素，也同样在其发病中起着重要的作用。心肌氧化损伤高血糖可诱导自由基的产生，并促进细胞凋亡因子的释放，导致心肌细胞死亡糖尿病可引起心肌细胞氧化损伤，进而导致细胞死亡。心肌细胞死亡是心脏对糖尿病的一个早期综合性反应，所以心肌细胞的氧化损伤在DCM的发病中起关键性作用。早在2000年就有学者报告，糖尿病患者心肌中有较高数量的心肌细胞死亡现象。糖尿病患者如合并高血压，心肌细胞死亡的现象更为明显。但在当时，这一现象对DCM发生的重要性尚未被人们所认识。笔者利用转基因糖尿病小鼠模型系统地证明了在糖尿病早期，高血糖可诱导心脏产生过多的氧或氮自由基，并降低心肌抗氧化损伤的能力，使心肌中氧化与抗氧化平衡失调，从而导致心肌细胞线粒体功能障碍，使其释放细胞凋亡因子、导致心肌细胞死亡。因心肌细胞无分裂或再生能力，所以当心肌细胞死亡达到一定数量时，心脏组织结构和心肌功能就会发生改变（见图1）。心肌炎症反应 Ang Ⅱ、IL和TNF等炎性因子在促进心肌细胞凋亡及DCM的发展中起重要作用高血糖、高血脂和高血压都是导致心肌细胞死亡的直接病因，而三者引起的心肌炎症反应可加速心肌细胞死亡及DCM进展。已知肾素—血管紧张素系统（RAS）在高血压、心力衰竭和动脉粥样硬化等疾病中起关键作用，目前越来越多的证据表明，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是RAS系统中的关键效应分子，能诱导血管壁和心脏的炎症反应。AngⅡ激活受体 AT1和AT2，进而通过还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶途径产生过多的氧自由基或氮自由基，导致氧化应激、心肌细胞死亡和炎症反应（见图1）。菲奥尔达利索（Fiordaliso）等发现，在糖尿病大鼠模型中，利用血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）赖诺普利或抗氧化剂（NAC）或二者联用治疗糖尿病大鼠7周后，可明显降低其心肌细胞中超氧化物（8-OHdG）及羟基的浓度，减少糖尿病导致的心肌细胞死亡或肥大以及心脏形态学的改变。韦斯特曼（Westermann）等也发现，应用AT1受体拮抗剂厄贝沙坦处理糖尿病小鼠，能阻断心肌炎症反应及细胞死亡，预防糖尿病导致的左室功能障碍及纤维化。所以，抑制AngⅡ的效应可通过减轻心脏炎症、心肌纤维化而减少DCM的发生。除AngⅡ以外，其他炎性因子如多种白介素（IL）、肿瘤坏死因子（TNF）在心脏病理过程中也具有重要作用。因此，以拮抗这类细胞因子为靶标的治疗策略都能降低糖尿病患者发生心肌病的危险。防治DCM的潜在途径他汀可通过抑制心脏炎症反应改善心功能及心衰症状金属硫蛋白可抵抗TNF-α诱导的心脏毒性，对DCM具保护效应他汀：他汀除有降低胆固醇的作用以外，还具有多种生物学效应，如抗炎效应。格尔根（Gurgun）等对氟伐他汀的抗炎及抗心力衰竭效应进行了前瞻性研究。在40例患者中，20例为特发性扩张型心肌病，另外20例为缺血性心肌病，用药（80 mg/d）12周后，氟伐他汀组心肌炎症反应显著降低，TNF-α和 IL-6表达水平明显下降，超声检测的心功能指标也有明显改善。他们由此认为，氟伐他汀可增强心脏功能、改善特发性扩张型心肌病和缺血性心肌病的心衰症状，其机制可能是通过抑制心脏炎症反应来实现的。金属硫蛋白（MT）：MT是一类含有21个半胱氨酸的胞内金属结合蛋白质（61个氨基酸残基），是体内金属微量元素平衡的重要调节因子，同时也是一种强抗氧化剂，可保护细胞或组织免受氧化损伤。MT具有广泛的抗超氧阴离子、羟基及过氧亚硝基等活性。近期研究发现，MT心脏特异性高表达的转基因（MT-TG）小鼠能有效抵抗乙醇、缺血再灌注和糖尿病诱导的心肌病。TNF-α是一种多能细胞因子，在人类多种心脏病（包括糖尿病心脏病）中都已经检测到这种因子。而心肌细胞既是该因子的分泌细胞，也是其作用的靶细胞。在慢性心力衰竭中，TNF-α的重要性表现在它能通过诱导氧化应激和配体/受体介导的细胞死亡信号通路引起心肌细胞死亡。克莱因（Klein）等发现TNF-α通过激活p38丝裂原活化蛋白（MAP）激酶信号通路诱导心肌细胞死亡，但在MT-TG小鼠的心肌细胞中，TNF-α诱导的细胞死亡效应受到抑制。笔者应用LPS
大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020
大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两
高血压糖尿病一周食谱一 星期一早餐：红豆糙米粥100克、全麦面馒头一个、白腰豆50克、亚麻粉50克、香蕉（高血压）、黄瓜一根（糖尿病）午餐：红豆糙米饭100克、生菜2种：①、绿皮三丝②、酸菜心；熟菜2种；①、豆皮炒西芹②、西芹百合，丝瓜汤一碗 星期二早餐：南瓜粥100克、犹太面包一个、五香花腰豆50克、亚麻粉50克、猕猴桃（高血压）、生胡萝卜一根（糖尿病） 午餐：蚕豆红米饭100克、生菜2种：①、什锦凉菜②、芹菜豆芽；熟菜2 种：①、五彩豆腐，②、南瓜什锦，藕枣长生汤。 星期三早餐：八宝粥100克、全麦面饼一个、红小豆50克、亚麻粉50克、香梨（高血压）、西红柿一个（糖尿病） 午餐：碗豆糙米饭100克、生菜2种：①、白玉韭菜②、香菜豆腐；熟菜2 种：①、三色南瓜，②、土豆泥，酸辣汤一碗。 星期四早餐：红薯粥100克、全面面包一个、黄豆50克、亚麻粉50克、葡萄（高血压）、黄瓜一根（糖尿病） 午餐：芝麻香芋饼一个，生菜2种：①、香菜拌黄瓜②、凉拌洋葱；熟菜3个： ①、墨西哥豆，②、木耳炒白菜③、炒饼子，桂圆汤一碗。 星期五早餐：小麦粥100克、全麦面馒头一个、绿豆50克、亚麻粉50克、芒果（高血压）、生胡萝卜一根（糖尿病） 午餐：全麦面面条150克、素四宝（用素四宝拌全麦面面条） 星期六早餐：南瓜粥100克、犹太面包一个、白腰豆50克、亚麻粉50克、西瓜（高血压）、西红柿一个（糖尿病） 午餐：菠萝饭200毫升、八宝汤 星期日早餐：小麦胚芽粥100克、全麦面包一块、黄豆50克、亚麻粉50克、苹果（高血压）、西红柿一个（糖尿病） 午餐：米饭100克、黄豆50克、生菜2种：①、凉拌三丝②、千岛黄瓜；熟菜 2种：①、奶汁南瓜②、豆腐丸子，紫菜汤。 每天的晚餐：可以少吃点饭和水果、蔬菜，或者不吃饭只喝亚麻水。
超声应变及应变率显像对早期2型糖尿病性心肌病的诊断价值 ［摘要］目的探讨超声应变及应变率显像在早期 2 型糖尿病性心肌病诊断中的价值。方法分别观察糖尿病组、糖尿病合并左心室肥厚组和正常对照组3组间组织多普勒速度显像参数、应变和应变率参数，比较各组间心肌舒张早期峰值速度（Em）、舒张晚期峰值速度（Am）、比值（Em/Am）、最大应变绝对值、最大应率变绝对值。结果Em、Am、Em/Am在3个观察组之间差异均有统计学意义（P均＜0 .05）；糖尿病组与对照组（P＜0.05、P＜0.01）、糖尿病合并左心室肥厚组之间（P＜0.05、P＜0.05）的最大应变绝对值、最大应变率绝对值差异亦具有统计学意义。结论超声应变及应变率可用于评价早期2型糖尿病性心肌病心肌收缩功能，定量评价心肌缺血。 ［关键词］超声；应变；应变率；糖尿病性心肌病；心肌收缩功能 传统的超声心动图评价节段性心肌运动异常时受到测试者和临近心肌的运动影响。应变、应变率成像是新近研发的一种定量测评心肌局部功能的新技术且不受临近心肌运动的影响，能敏感的定量分析左室心肌局部收缩功能［1，2］。本文把超声应变率技术应用于早期糖尿病心肌病的诊断，评价其应用价值。 1 资料与方法 1.1 一般资料：我院60例临床确诊为2型糖尿病患者和30例正常对照者，分三组进行观察，对比。（1）正常对照组30例，男16例，女14例，年龄45～70岁，平均（58±9）岁；（2）单纯糖尿病组32例，男17例，女15例，年龄44～68岁，平均（60±9）岁；（3）糖尿病合并左心室肥厚组28例，男16例，女12例，年龄46～70岁，平均（59±10）岁。研究对象选取标准：冠状动脉造影检查无明显冠状动脉狭窄，无瓣膜病变，射血分数>50%；合并高血压的患者血压控制在正常范围内。 1.2 仪器与方法：(1)采用GE Vivid 7彩色超声诊断仪，M3S探头、频率1.7MHz。受检者左侧卧位，连接心电图，角度131g/m 2，女性>100g/m2。(3)在心尖四腔切面上运用组织多普勒速度显像测量心肌舒张早期峰值速度（Em），舒张晚期峰值速度（Am）计算比值（Em/Am）；进入应变率显像模式，三个标准切面上左室基底段的室间隔、前壁、后壁、下壁及侧壁心肌获得的应变和应变率参数。取3个心动周期的平均值。 1.3 统计学方法：应用SPSS 13.0统计软件包进行统计学处理，结果以x －±s表示，两组间的比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 三组的心肌组织多普勒速度显像参数比较：见表1，图1(见封3)。
实验流程 1、末次灌胃后，大鼠禁食不禁水12h，与麻醉前进行称重，行腹腔注射3%戊巴 比妥钠，0.3ml/100g 2、腹主动脉取血，留取全血标本。 3、取肝、脾、肾、胃、心脏及脑。 4、称肝、脾、肾、胃、心脏及脑组织，并分装各个组织，放入-80℃冻存。其中 肝组织剪取1g肝脏，送至肝均浆；肝10%甲醛固定做HE染色，每组5只； 肝4%戊二醛固定做电镜，每组一只； 5、小肠10%甲醛固定做HE染色，每组5只；小肠4%戊二醛固定做粪便电镜，每 组1只；其余肠组织-80℃冻存。 6、肝；制成肝均浆，1g肝脏加入9ml冰生理盐水，制成肝均浆液，离心后，取 上清液，于-80℃冻存。 7、全血标本静置30min后，进行离心，分离血清，血清和血浆均放入-80℃冻存。检测指标： 1、肝脏组织 1.1HE染色观察肝脏组织的病理学改变。 1.2透射电镜观察肝脏超微结构变化 1.3电感耦合等离子体质谱（ICP-MS） 1.4试剂盒测肝均浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化酶 （GSH-Px）、ROS活性氧水平 1.5检测肝脏组织中Western blot、NF-kB、COX-2表达情况，计算其阳性表达 率 2、血清（血浆） 2.1全自动化分析仪测谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、谷氨转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶TG 2.2酶联免疫吸附法检测血浆中肠结合脂肪酸蛋白（FABp2）、D-乳酸（D-LA）及二胺氧化酶（DAO）水平评价大鼠大肠粘膜损伤 2.3试剂盒测血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）、4-HNE（羟基壬烯醛）、 谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）评价大鼠氧化应激水平 2.4酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠血浆中α肿瘤坏死因子（TNF α）、肿瘤坏死因子β（TNF-β）、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)浓度 3、肠道菌群
【关键词】糖尿病心肌病;发病机制;诊断;治疗 近年来，糖尿病发病率迅速上升，调查显示，至2005年全球糖尿病患者高达3亿。最新研究显示，中国糖尿病患者高达9240万，而糖尿病前期患者高达1亿，防控形势十分严峻[1]。1974年Hamby等首次提出糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy，DCM)的概念：由糖尿病引起的心脏微血管病变、肌代谢紊乱和心肌纤维化等所致的心肌广泛结构异常，最终引起左心室肥厚、舒张期和(或)收缩期功能障碍的一种疾病状态。迄今的证据表明，部分糖尿病患者出现的心力衰竭由DCM所致[2]。本文就糖尿病心肌病发病机制及诊疗进展综述如下。 1糖尿病心肌病的发病机制 1心肌能量代谢异常糖尿病心肌能量代谢异常的始动因素是高血糖，糖尿病心肌在糖酵解和糖氧化两个环节存在明显的缺陷，从而导致心肌代谢的底物发生变化。糖尿病时胰岛素抵抗或不足，心肌细胞由于：(1) 葡萄糖转运体(GLUT4)数量减少;(2)糖磷酸化速度减慢;(3) 丙酮酸氧化减少等原因导致心肌组织中葡萄糖有氧氧化和无氧酵解过程发生障碍，进入心肌分解产能的葡萄糖流量减少，心肌细胞糖代谢低下，导致心脏功能障碍[3]。Iribarren等[4]研究证明，心脏舒张功能受损程度与糖化血红蛋白有关，主要机制是晚期糖化终末产物与胶原等大分子物质结合聚集，刺激成纤维细胞生长因子释放，增加心肌细胞炎性反应。 1脂代谢异常高脂血症是糖尿病的显著特征之一，血脂水平已成为DCM早期心功能改变的一个独立预测因素，游离脂肪酸代谢障碍促进DCM 的形成。在糖尿病时，脂肪酸摄取和代谢增强，并且脂肪酸的摄取超过了氧化的速度，因此导致了脂类在心肌内堆积，细胞发生“脂中毒”现象[5]，引起心功能异常和心肌肥厚，纠正脂代谢紊乱可改善心功能。胰岛素可抑制脂肪细胞的分解及脂肪酸的产生。糖尿病患者胰岛素分泌减少和胰岛素抵抗导致对脂肪细胞抑制减弱，使脂滴颗粒在心肌中聚积增多，对脂质氧化供能依赖明显增加，尤其是三酰甘油和游离脂肪酸增加。 1细胞内的钙调节异常及膜电位异常大量研究表明，心肌细胞内钙超载是心肌功能受损的直接原因。心肌细胞内的钙离子是调节心肌收缩的重要离子，糖尿病心肌毒性物质(长链的酰基肉毒碱、自由基和异常的膜脂内容物)的聚集会引起心肌调节蛋白和收缩蛋白调节异常，同时心肌亚细胞水平重构和钙通道异常，导致心肌收缩功能障碍发生[6]。Basu等(2009)发现1型糖尿病模型Akita(In2WT/C96Y)小鼠早期出现持久性舒张功能障碍，与心肌肌浆网Ca2+ SERCA2a的严重减少和心肌脂毒性有关。心肌纤维膜的主要成分是磷脂和胆固醇，糖尿病心肌病时胆固醇与磷脂中的溶血磷脂胆碱都升高，使钙内流增加，心肌细胞内钙超载，导致心脏收缩舒张功能减退。Na+-Ca2+交换的能量来源于Na+-K+泵，反映Na+-K+泵活性的是Na+-K+ATP酶。有研究测定了糖尿病心肌病大鼠心肌纤维膜的Na+依赖的Ca2+的摄取活性，4周后发现Na+-Ca2+交换的受损限制心肌细胞排钙，导致细胞内的钙蓄积[7]。另外糖尿病心肌病由于糖代谢异常，可导致动作电位时程延长，外向钾电流降低，其变化在心外膜较心内膜明显[8]。 1肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的激活心脏亦是一个内分泌器官。糖尿病心肌病时心肌血管紧张素早期处于激活状态，RASS系统激活，心肌局部ATⅡ增高，通过自分泌和旁分泌作用于心肌，使神经末梢释放去甲肾上腺素与血管内皮细胞产生内皮素增多，从而诱导生长刺激原癌基因表达。在这些因素的作用下，血管收缩，血管平滑肌增生，胶原合成，最终导致糖尿病心肌病。糖尿病心肌病RASS系统激活后，血管紧张素II和醛固酮表达增加，结果心肌细胞肥大，凋亡增加和心肌纤维化增加[9]，使心室壁的僵硬度增加，心室顺应性降低，导致心室收缩及舒张功能不全。 1胰岛素抵抗胰岛素抵抗是指机体组织的靶细胞对胰岛素样作用的敏感性和(或)反应性降低的一种病理生理反应，广泛存在于高血压，冠心病，2型糖尿病中。胰岛素抵抗的结
糖尿病中医药指导方案 糖尿病人饮食禁忌 1、不适宜吃精粮；动物内脏、蟹黄、鱼卵、鸡皮、猪皮、猪肠；花生、瓜子、核桃、松子、甘蔗、水果、土豆、芋头、甘薯、藕、淀粉、荸荠等。 2、烹饪方式最好是清炖、水煮，凉拌等，不可太咸，食盐摄入量6克以下为宜。 3、忌辛辣；戒烟限酒。饮食原则： 1、避免肥胖，维持理想且合适的体重。 2、定时定量，每餐饮食按照计划份量进食，不可任意增减。 3、少吃油煎、炸、油酥及猪皮、鸡皮、鸭皮等含油脂高的食物。 4、烹调多采用清蒸、水煮、凉拌、涮、烤、烧、炖、卤等方式。不可太咸，食盐摄入量6克以下为宜。 5、饮食不可太咸，少吃胆固醇含量高的食物，例如腰花、肝、肾等动物内脏类食物。 6、烹调宜用植物性油脂。 7、配合长期性且适当的运动、药物、饮食的控制。 8、经常选用含纤维质高的食物，如未加工的蔬果等。 9、含淀粉质高的食物及中西式点心均应按计划的份量食用，不可随意吃，以免过量吸取。 10、少吃精制糖类的食物，如炼乳、蜜饯。 11、多使用苦瓜或苦瓜茶，苦瓜降糖更安全、无任何副作用，糖尿病预防和控制要比治疗简单的多。药方: 黄芪30克,白术12克,淫羊藿12克,白芍30克,乌梅10克,葛根12克,熟地
20克,麦冬12克,山萸肉10克,泽泻12克,五味子8克,知母12克。加减法: 1. 夜尿频繁,加芡实18克,菟丝子15克; 2. 血气虚弱者,加首乌15克,黄精12克,党参20克; 3. 肺热者,加天花粉10克,沙参12克,川连8克; 4. 兼有高血压病,加杜仲15克,牛膝18克; 5. 视力模糊,加女贞子15克,草决明12克,石斛10克; 6. 有胰岛素依赖者,加丹参20克; 7. 血糖高,加川芎12克,当归12克; 8. 口渴多饮者,加玄参20克,天花粉15克 1. 适宜吃的食物：主要是可延缓血糖、血脂升高的食物。 2..大豆及其制品：这类食品除富含蛋白质、无机盐、维生素之外，在豆油中还有较多的不饱和脂肪酸，既能降低血胆固醇，又能降低血甘油三脂，所含的谷固醇也有降脂作用。 3.粗杂糖：如莜麦面、荞麦面、热麦片、玉米面含多种微量元素， 维生素B和食用纤维。 4.糖尿现人应少吃或不吃水果。 5.糖尿病病人还应限制饮食中胆固醇的含量。 6.严格控制饮食是治疗糖尿病的先决条件，也是最重要的一环。
给高血压病人的健康指导 （一）饮食指导： 1.饮食以低盐、低脂肪为原则，少食含胆固醇高的食物，如动物的内脏、蛋黄等。 2.肥胖者应降低每日热量的摄入以减轻体重，因为肥胖与血压增高有关。 3.多食富含钾的食物，如蔬菜和水果，每日食盐量不超过6g，因为高钠低钾的摄入与高血压发病有关。 4.戒烟，避免过度饮酒。 （二）休息、活动指导： 1.避免长期过度的紧张和劳累，减少紧张、恐慌类视听觉过度刺激，保证充足的睡眠。 2.适当进行慢节奏的体育运动，如散步、太极拳、游泳等。 （三）用药指导： 1.降压药物尽可能口服，逐步而温和地降压，以防血压骤降而产生心、脑、肾的供血不足。 2.降压药种类繁多，但药理作用不同，用药要因人而异，在医生指导下服用。 3.坚持长期用药，终身服药。并了解药物的作用及副作用，如利尿剂可引起恶心、呕吐、肢体无力或麻痹、心律失常；ACEI类可引起干咳、味觉异常、皮疹等。当出现副作用时应及时报告医生，调整用药。 4.注意从坐位起立或从卧位起立时，动作应尽量缓慢，特别是夜间起床小便时更要注意，以免血压突然降低引起晕厥而发生意外。 （四）出院指导： 1.血压管理：定期进行血压的监测，并做到定体位、定部位、定血压计。 2.高血压病往往与肥胖、血脂、血糖异常并存，应定期监测血脂、血糖变化。长期高血压者可引起肾功能减退，应定期进行尿常规及肾功能检查。 3.突发血压升高时，应全身放松，静卧休息，及时就诊。 给糖尿病人的健康指导 患者查出得了糖尿病，一定不要紧张及恐惧，虽是终身疾病，但只要血糖控制的好便能和正常人一样生活，一样长寿。 一、需要坚持的八个方面： 1.合理膳食：饮食控制是最基本的一项治疗措施，也是治疗的基础。多吃菜，少吃粮，一天不要超五两（一般人），粗细搭配，不易升糖。不吃油炸食品和含糖量高的水果。 2.适量运动：这是防止糖尿病的重要方法。运动可提高机体免疫力，强身健体，增加胰岛素的敏感性，减少胰岛素抵抗。 3.戒烟限酒：吸烟有害，它会刺激肾上腺素的分泌，造成血糖和血压的升高，诱发令人生畏的心、脑血管疾病。
糖尿病心血管自主神经病变的研究进展 引言 糖尿病心血管自主神经病变( Cardiovascular autonomic neuropathy, CAN )是糖尿病微血管病变和代谢异常引起的全身神经病变的一部分，是2型糖尿病较常见的慢性并发症，2.5%~50.0%的糖尿病患者伴有CAN[1]。糖尿病心血管自主神经病变一旦发生将增加糖尿病患者心脏意外的风险。有文献报道，若糖尿病并发CAN，5年死亡率高达53%，而自主神经功能正常的糖尿病患者死亡率仅为15%[2]，但本病起病较隐匿，早期不易为患者和医生所重视，明显的临床症状可出现在病程较长的患者，临床表现多样，其引起的无痛性心肌梗死可致严重心律失常心源性猝死而威胁生命，早期诊治可延缓病情进展，晚期CAN呈不可逆改变。 本文就糖尿病心血管自主神经病变的研究进展综述如下。 1. 发病机制 糖尿病心血管自主神经病变的发病机制有多种学说，目前尚未完全阐明，可能是多因素共同作用的结果。 1.1生理学机制： 正常心脏自主神经作用有一定均衡性，对整个心脏所产生的效应并非是交感和副交感神经二者的总和，而是通过各种反射途径相互影响相互制约，以达到动态平衡。它主要表现为心率为适应人体需要而呈持续波动。副交感神经对心率的影响是通过迷走神经释放乙酰胆碱来实现的，而胆碱能受体对这一过程的反映是增加了细胞膜K十浓度，阻滞激活起搏点起搏电流的超极化；交感神经影响心率是靠释放肾上腺素和去甲肾上腺素介导的，β肾上腺素受体激活环磷酸腺苷（cAMP）介导的细胞膜蛋白质磷酸化、L-钙通道电流和起搏电流的增加，最终结果是使本来缓慢的心脏舒张期去极化加速。 在静息条件下迷走神经张力占优势，心动周期变异很大程度上独立依赖迷走神经的调控[3]，迷走神经和交感神经活动不断互相影响。窦房结具有丰富的乙酞胆碱脂酶，能够快速水解乙酰胆碱，所以任何迷走神经冲动对窦房结的影响只是暂时的。如果副交感神经作用超过交感神经，可能是通过以下两个独立
2型糖尿病大鼠模型的建立及其验证论著 燕娟1 郭巍伟1 梁执群1 李志国1 郭永昌2 (山西医科大学1人文社会科学学院;2实验动物中心 山西 太原 030001) 【摘要】 目的 制备一种发病过程类似人类2型糖尿病的动物模型。方法 雄性S D成年大鼠高糖高脂饲料喂养 1个月,诱发出胰岛素抵抗,给予小剂量链脲佐菌素(STZ)25mg/kg,腹腔注射,建立2型糖尿病大鼠模型。结果 试验 组大鼠血糖升高,对胰岛素敏感性下降,从生化指标和形态学方面证实造模成功。结论 本实验2型糖尿病大鼠模型 造模成功,它具有中度高血糖、胰岛素抵抗、成功率高等特点,是人类2型糖尿病及其药物研究的理想动物模型。 【关键词】 糖尿病 动物模型 大鼠 Type2d i a betes ra t m odel and its ver i f i ca ti on.YAN Juan,G UO W ei-w ei,L I ANG Zhi-qun,et al.ShanxiM edical U niversity,College O f Hu2 m anities A nd Social Science,Taiyuan Shanxi030001,China. 【Abstract】 O bjecti ve Preparati on of a disease si m ilar t o human type2diabetes ani m al model.M ethods Male S D adult rats fed high- fat high-sugar a month,induced insulin resistance,given l ow-dose strep t ozot ocin(STZ,25mg/kg,intraperit oneal injecti on),set up in type2 diabetic rat model.Results Test gr oup of rats increased bl ood glucose,insulin sensitivity decreased,fr om the bi oche m ical indices and mor phol ogy confir med the successful model.Conclusi on The experi m ental rat model of type2diabetes model successfully,it has moderately high bl ood sug2 ar,insulin resistance,the success rate is high,are of human type2diabetes and its drug research ideal ani m al model. 【Key words】 D iabetes;Ani m al model;Rat 糖尿病与心脑血管疾病、肿瘤是当前威胁人类健康的三大非传染性疾病,已成为全球性的卫生问题。随着我国人民生活水平的提高、人口老化、生活方式的改变以及诊断技术的进步,糖尿病的发病率呈现迅速上升趋势,2型糖尿病是糖尿病人群的主体,占糖尿病发病率的90%以上。因此,研制2型糖尿病动物模型具有重要的医学研究意义。在国外2型糖尿病的研究中,采用的动物模型多为遗传相关模型,如ob/ob小鼠、db/db小鼠及肥胖型Zucker大鼠等,其特点是遗传因素在发病过程中占主导作用,不完全与临床相符,且十分昂贵,不利于国内研究的开展[1]。本研究结合前人经验,应用高糖高脂饲料结合小剂量链脲佐菌素(STZ)建立了2型糖尿病大鼠模型,较符合人类普通型2型糖尿病发病机制,有利于进行2型糖尿病及其并发症的相关研究[2,3]。1 材料和方法 1.1 动物和材料 清洁级雄性S D大鼠40只,体质量(180±20)g,由山西医科大学实验动物中心提供,每笼4～5只,饲以普通饲料,自由摄食摄水,除实验应激外无其他不良刺激。STZ由美国Sig m a公司生产。胰岛素、胰高血糖素放射免疫分析药盒为解放军总医院科技开发中心放免所产品,购自北京普尔伟业生物科技有限公司。 1.2 2型糖尿病大鼠模型的建立 在大鼠适应期后,随机取10只作为正常对照组,其余30只给予高糖高脂饲料(在标准全价混合饲料的基础上添加蔗糖、炼猪油和蛋黄,热能含量21.6kJ/kg)。高糖高脂饲料组喂养4周后,腹腔注射STZ(临用前溶解在pH=4.0的0.1mmol/L柠檬酸缓冲液内,25mg/kg,1次/d,连续2d),正常对照组普通饲料喂养4周,再注射等量柠檬酸缓冲液,1次/d,连续2d。注射药物两天后间隔1d血糖测试仪测查大鼠空腹血糖(测试前禁食12h)即注射后血糖,以血糖含量16.7mmol/L为2型糖尿病大鼠模型判定标准,随机选取10只糖尿病大鼠为模型组。继续普通饲料喂养4周。 1.3 指标测定 1.3.1 一般状况观察 包括大鼠的精神状态、体质量、饮水量、食量、大小便。 1.3.2 血糖测定 腹腔注射STZ或柠檬酸缓冲液2 d后及实验结束时分别进行空腹状态下剪尾取血,测其血糖值,为注射后血糖。4周后处死大鼠测其血糖为终血糖。 1.3.3 血清胰岛素、胰高血糖素水平测定 实验结束时禁食12h,20%的乌拉坦腹腔麻醉大鼠,腹主动脉取血,分离血清后放射免疫分析法测定。 1.3.4 胰岛素敏感指数(I SI)的计算 参照李光伟等[4,5]的方法,I SI=ln[1/F BG×F I N S],F BG为空腹血糖,F I N S为空腹胰岛素。 1.4 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件对实验数据进行处理,数据以均数±标准差( x±s)的形式表示,用t检验分析。 2 结果 2.1 两组大鼠一般状况 对照组大鼠生长良好,体质量持续增加,无其他症状。模型组大鼠在注射STZ后体质量呈缓慢增长、逐步较前下降、消瘦走势,观察发现有 ? 5 ? 临床和实验医学杂志 2009年4月 第8卷 第4期
7 摘要：目的探讨链脲佐菌素（STZ ）建成可靠、稳定的1型大鼠糖尿病模型情况。方法选取 SDF 级雄性Wistar 大鼠70只，分成3个实验组，各20只和对照组10只，实验组大鼠一次性腹腔注射STZ 30、65、100mg /kg ，对照组10只大鼠腹腔注射枸橼酸缓冲液，用拜安易血糖仪检测血糖，7d 后血糖＞16．65mmol /L 判定为1型糖尿病动物模型。观察大鼠的血糖、体质量、饮水量、胰岛素和C 肽等指标。结果大鼠注射STZ 65mg /kg 7d 后，大部分血糖值达到成模标准，并出现糖尿病表现，持续观察7周，有18只大鼠成模，未见糖尿病转复，糖尿病症状明显。结论腹腔一次性注射STZ 65mg /kg 剂量可成功制备1型糖尿病大鼠模型。 关键词：链尿佐菌素；1型糖尿病模型；大鼠 Establishment and Observation of Type I Diabetic Rat Models ZHANG Ju-biao 1， SU Xiu-lan 2，OUY-ANG Xiao-hui 1 ．（1．Department of Tumor Surger ， Inner Mongolia Autonomous Region People's Hospital ，Hohhot 010010，China ；2．Central Lab of Inner Mongolia Medical University ，Hohhot 010010，China ） Abstract ：Objective To establish type I diabetic rat models by intraperitoneal injection of streptozoto-cin and observe the stability of diabetic changes in rats．Methods 70male Wistar rats were divided into 3experiment groups of 20rats each and 1control group of 10rats．The experiment groups were intraperitoneally injected by 30mg /kg ，65mg /kg ，and 100mg /kg STZ respectively ，while the control group was injected cit-rate buffer．Bayer blood glucose meter was adopted to test the blood glucose ，setting ＞16．65mmol /L after 7d as the type 1diabetic animal model．The fasting blood glucose level ，body weight ，water intake ，insulin and C-peptide of the rats at different time points were observed /measured．Results In the group of injection by 65mg /kg STZ ，after 7days most rats reached the model blood glucose standard and had diabetic manifes-tation ，after continuous observation of 7weeks ，18rats were qualified as the model with obvious symptoms and without conversion．Conclusion With the dose of 65mg /kg of STZ through one intraperitoneal injection ，type 1diabetic rat models can successfully established． Key words ：Streptozotocin ；Type 1diabetic models ；Rat 糖尿病已成为严重威胁人类身体健康和生命的 疾病。它是一种以持续性高血糖为特征的内分泌障碍疾病，可导致全身性代谢紊乱并继发眼、肾、神经和心血管等器官的慢性进行性病变，最终引起功能损伤及衰竭。1型糖尿病及其并发症的病因、发病机制尚未完全阐明，预防和治疗仍不完善，干细胞（stem cells ）是体内存在的一类特殊细胞，有自我更新和不断增生的能力，又具有多向分化的潜能，只要掌握了胰腺干细胞的特异标志、转化调控机制、培养及分离技术，就可以体外操纵干细胞，进行大量扩增和定向诱导分化，最后将得到能分泌胰岛素的胰岛 样细胞［1-2］，用于治疗1型糖尿病。因此，建立较理 想的动物模型研究该病的发病机制和治疗具有重要意义。目前，国内外普遍使用STZ 制备糖尿病大鼠 动物模型。该项实验根据吴清洪报道的方法［3］ ，采用简单的腹腔一次注射的方法制备稳定并且可靠的动物模型。1材料与方法 1．1实验动物的选择和喂养SDF 级成熟Wistar 雄性大鼠70只（体质量220 280g ），购自内蒙古大学实验动物中心，饲养室内氨浓 度＜20g /L ， 相对湿度40% 70%，室温18 25℃，保证良好的通风，避免增加造模后大鼠的感染概率，普通饲料喂养，饮水自由。 1．2主要仪器和试剂拜安易血糖检测仪及试纸（美国Bayer 公司）；STZ （美国Sigma 公司）；胰岛素、C 肽放射免疫分析药盒（均购自内蒙古泽生耗材）。 1．3主要实验试剂的配制STZ 液称取STZ 粉剂0．2g ，溶于pH 4．5，浓度为0．1mmol/L 的枸橼酸三钠-枸橼酸缓冲液20mL 中，制成1%溶 液，经0．22μm 滤器过滤除菌，要求5min 内配制完成，配好后，10min 内用完，STZ 和枸橼酸缓冲溶液低温保存，新鲜配制。 1．4实验分组和大鼠糖尿病模型的制备采取国内外普遍使用的STZ 制备糖尿病大鼠模型，根据徐 华等［4］ 报道， 雄性大鼠易于成模，且成模后血糖稳定性好，故选取成熟雄性大鼠用于实验。将所有大鼠（70只）使用代谢笼单只喂养，适应性喂养1周， 1周内注意观察大鼠的饮食情况、体质量等健康状况， 1周后，选取空腹血糖介于2．92 6．92mmol /L 的大鼠为实验对象。将空腹血糖介于2．92 6．92mmol /L 的大鼠随机分为4组，实验组（60只）分别接受STZ 液一次性腹腔注射，剂量为30、65、100mg /kg ，对照组（10只）注射枸橼酸三钠-枸橼酸缓冲液。实验前 大鼠禁食、水12h 。分别于注射后3、 7、14、28d 采用剪尾法采集血样，用拜安易血糖仪检测空腹血糖，7d 后空腹血糖＞16．65mmol /L ，出现多饮、多食、多尿 · 533·医学综述2013年1月第19卷第2期Medical Recapitulate ， Jan．2013，Vol．19，No．2
糖尿病大鼠尿nephrin 的检测及意义(一) 【摘要】目的：建立糖尿病大鼠模型，探讨糖尿病大鼠尿中nephrin的检测、动态变化及意义。方法：SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制成糖尿病模型，正常对照组注射等量枸橼酸缓冲液，动态检测各组大鼠24h尿微量白蛋白及肾功能，以Western-Blot方法动态检测尿中nephrin。结果：正常大鼠尿中无nephrin排泄，而糖尿病大鼠尿中可检测出nephrin，诱模早期（2周）即可出现，随着病程的延长，nephrin逐渐增多，8周达高峰后，nephrin的排泄又逐渐减少。结论：糖尿病肾病早期nephrin即可从尿中排泄，尿nephrin可作为糖尿病肾病的早期诊断指标之一，还将有助于监测、判断糖尿病肾病的病程进展。 【关键词】糖尿病肾病；大鼠；微量白蛋白;尿nephrin 〔Abstract〕Objective:Diabeticratswereinducedtoexplorethedetectionofurinarynephrinindiabeticrats,itsdyna micchangesandclinicalsignificance.Methods：SDratsweredividedinto2groups.Diabeticratsmodelwereinducedbysingleintraperitonealinjectionof streptozocin(STZ),whilethoseofnormalcontrolgroupwereinjectedwithequaldosageofcitricacidbuffe rsolution.Twentyfourhoursurinarymicroalbuminandrenalfunctionwereambulatorilymonitored,and UrinaryNephrinwasmeasuredwithWestern-Blot.Results：Thetestshowedthatnourinarynephrinwerefoundinnormalcontrolgroup,butitwasdectetedoutindia beticratsgroup,anddiscoveredattheearlystage(2weeksafterSTZinjection).Withtheextensionofcours e,urinarynephringraduallyincreased,andthengraduallydecreasedafterreachingitspeakbyweek8.Co nclusion：Thenephrincouldbeexcretedoutfromurineattheearlystageofdiabeticnephropathy.Urinarynephrinc ouldnotonlyberegardedasaspecificindexfortheearlydiagnosisofdiabeticnephropathy,butalsobeben ificialtoclinicalmonitoringandevaluatingthedegreesoftheDN. 〔Keywords〕diabeticnephropathy;rats;microalbumin;urinarynephrin 糖尿病肾病(diabetesnephropathy，DN)是糖尿病微血管病变之一，是终末期肾衰的重要原因，早期诊断和治疗可延缓其发展。DN起病隐匿，早期诊断困难，目前公认的诊断早期DN的指标是尿微量白蛋白，但也仅使DN诊断提早到依据Mogensen建议的Ⅲ期。部分糖尿病患者当发现微量白蛋白尿时，肾脏的结构损害已很明显〔1〕。因此不能单以尿微量白蛋白的出现来判断早期DN。 蛋白尿的发生与肾小球滤过屏障密切相关，nephrin是新近发现由足细胞表达、特异定位于肾小球足细胞裂孔隔膜的蛋白分子，参与肾小球滤过屏障的形成并维持其正常功能〔2〕。研究表明，实验性糖尿病模型及人类蛋白尿相关的肾小球疾病均有nephrin表达的改变，且nephrin可从尿中排泄〔3〕。而尿中nephrin排泄量增加是否可敏感反映糖尿病早期肾脏损害，目前国内尚未有报道。本文对糖尿病大鼠尿蛋白排泄率(AER)及尿液nephrin进行动态观察，旨在探讨尿nephrin在DN中的变化规律及其对早期DN的诊断意义。 1对象与方法 1.1实验动物及分组 雄性SD大鼠76只，体质量230～280g，购自江苏大学医学院实验动物中心，血糖正常。试验期间，室温控制在18～20℃，湿度48%，12小时交替照明，大鼠自由饮水进食，保持垫料干燥。实验共分对照组（n=36），糖尿病组（n=40）。对照组0周处死6只，再与糖尿病组随机分为2，4，6，8和12周5个亚组，分别于DM诱模后2，4，6，8和12周处死。 1.2糖尿病模型的建立 所有大鼠适应性喂养1周，随机取40只，禁食12h后，空腹状态下，链脲佐菌素（STZ）按55mg/kg一次性腹腔注射制备糖尿病模型，STZ临用前用枸橼酸钠缓冲液(0.1mmol/L,pH4.2)