国家生化工程技术研究中心（北京）
地址：北京市海淀区中关村北二条1号中国科学院过程工程研究所西区 电话/传真：010- 82544957 邮编：100190
Protein A 亲和介质（Protein A QZT 4FF ）产品说明书
1. 产品简介
Protein A 能特异性地与抗体的Fc 区结合，所以Protein A 亲和介质可用于抗体（单抗和多抗）的分离纯化，经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。Protein A QZT 4FF 亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，以重组Protein A 为配基，具有很高的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长，使用方便，应用广泛。 2. 产品特性
3. 使用方法
Protein A QZT 4FF 广泛用于各种抗体的分离纯化。层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。
平衡：用5~10CV 的平衡缓冲液（20 mM PB+0.15M NaCl ，pH 7.0，添加适当浓度的NaCl 抑制非特异性吸附）平衡层析柱，至流出液电导和pH 不变（与平衡液一致）。
进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓
National Engineering Research Center for
Biotechnology (Beijing)
Add ：No.1 Bei er tiao, Zhongguancun, Haidian District, Beijing, China
Tel/Fax ： 010- 82544957 Post code ：100190
度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm ）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱：用洗脱缓冲液（20 mM 柠檬酸，pH 3.0-4.0；或0.1M 甘氨酸，pH 3.0；或20 mM 乙酸钠，pH 3.0-4.0；具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关，效果不好时应进行洗脱缓冲液（种类和pH 或添加剂）的优化）洗脱，收集流出液。洗脱后，应立刻用碱性缓冲液（如1M Tris/HCl, pH 9.0）将收集到的抗体溶液中和到抗体稳定的pH ，避免抗体失活，维持抗体的生物活性。
再生、原位清洗：介质使用数次（5-10次，具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行再生、在位清洗。
（1）用0.1M 的乙酸或0.1M 的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5CV ，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用；
（2）也可用0.05M NaOH+1M NaCl 或6M 盐酸胍淋洗柱子3-5CV ，并用3~10 CV 的纯水冲洗，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。
其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。 4. 具体应用
1 载量分析：利用人免疫球蛋白（血浆来源，纯度95%，3mg/ml ）进行载量分析（柱体积2ml ；Buffer A ：20 mM PB+0.15M NaCl ，pH 7.0，Buffer B ：0.1M 甘氨酸，pH 3.0；流速：0.5ml/min ；上样量：40ml ），层析谱图如图1（A ：进口介质；B ：本中心介质）所示，结果表明两种介质的层析谱图（穿透行为、洗脱峰）基本一致，无明显差异。洗脱峰的蛋白浓度分析结果表明，二者的载量相似，均在40-45mg h-IgG/ml 介质之间。
2 纯化效果分析：利用小鼠腹水（Buffer A 稀释4倍）上样进行亲和层析，考察介质的分离纯化效果（柱体积2ml ；Buffer A ：20 mM PB+0.15M NaCl ，pH 7.0，Buffer B ：20mM 柠檬酸，pH 3.0；流速：0.5ml/min ；上样量：4ml ），层析谱图如图2所示，纯度分析结果表明，经过一步亲和层析，即可得到纯度95%以上的IgG 。
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图1 h-IgG 在Protein A 介质上的动态穿透曲线（A ：对照介质；B ：本中心介质）
图2 Protein A 亲和层析谱图（小鼠腹水）
5 特色服务
（1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。
（2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。 （3）按客户要求提供各种介质及相应规格的预装柱。 （4）为客户提供专业的售前和售后服务。
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有限责任公司变更登记提交材料及表格 1.《公司登记（备案）申请书》。 2.关于修改公司章程的决议、决定（变更登记事项涉及公司章程修改的，提交该文件）。 ◆有限责任公司提交由代表三分之二以上表决权的股东签署的股东会决议。◆一人有限责任公司提交股东签署的书面决定。 ◆国有独资公司提交国务院、地方人民政府或者其授权的本级人民政府国有资产监督管理机构的批准文件复印件。 3.修改后的公司章程或者公司章程修正案（公司法定代表人签字）。 4.变更事项相关证明文件。 ◆变更名称的，应当向其登记机关提出申请。申请名称超出登记机关管辖权限的，由登记机关向有该名称核准权的上级登记机关申报。 ◆变更住所的，提交变更后住所的使用证明。《住所（经营场所）申报承诺书》，房屋性质属于住宅的还需提交《住所（经营场所）住改商承诺书》，属军队房地产的提交《军队房地产租赁许可证》。 ◆变更法定代表人的，根据公司章程的规定提交原任法定代表人的免职证明和新任法定代表人的任职证明（股东会决议、股东决定由股东签署，董事会决议由公司董事签字）；公司法定代表人更改姓名的，提交公安部门出具的证明。 ◆减少注册资本的, 提交在报纸上刊登公司减少注册资本公告样报和公司债务清偿或者债务担保情况的说明。应当自公告之日起45日后申请变更登记。 ◆变更经营范围的，公司申请登记的经营范围中有法律、行政法规和国务院决定规定必须在登记前报经批准的项目，提交有关批准文件或者许可证件的复印件。审批机关单独批准分公司经营许可经营项目的，公司可以凭分公司的许可经营项目的批准文件、证件申请增加相应经营范围，但应当在申请增加的经营范围后标注“（限分支机构经营）”字样。 ◆变更股东的，股东向其他股东转让全部股权的，提交股东双方签署的股权转让协议或者股权交割证明。股东向股东以外的人转让股权的，提交其他股东过半数同意的文件；其他股东接到通知三十日未答复的，提交拟转让股东就转让事宜发给其他股东的书面通知；股东双方签署的股权转让协议或者股权交割证明；新股东的主体资格证明或自然人身份证件复印件。
公司登记（备案）提交材料规范 【1】公司设立登记提交材料规范 1．《公司登记（备案）申请书》。 2．公司章程（有限责任公司由全体股东签署，股份有限公司由全体发起人签署，国有独资公司由国务院、地方人民政府或者其授权的本级人民政府国有资产监督管理机构加盖公章）。 3．股东、发起人的主体资格证明或自然人身份证明（国有独资公司无需提交本项材料）。 ◆股东、发起人为企业的，提交营业执照复印件。 ◆股东、发起人为事业法人的，提交事业法人登记证书复印件。 ◆股东、发起人为社团法人的，提交社团法人登记证复印件。 ◆股东、发起人为民办非企业单位的，提交民办非企业单位证书复印件。 ◆股东、发起人为自然人的，提交身份证复印件。 ◆其他股东、发起人的，提交有关法律法规规定的资格证明复印件。 4．法定代表人、董事、监事和经理的任职文件。 根据《公司法》和公司章程的规定，有限责任公司提交股东决定或股东会决议，发起设立的股份有限公司提交由会议主持人及出席会议的董事签署的股东大会会议记录（募集设立的股份有限公司提交创立大会会议记录）。国有独资公司提交国务院、地方人民政府或者其授权的本级人民政府国有资产监督管理机构的书面决定（加盖公章）、董事会决议（由董事签字）或者其他相关文件。对《公司法》和章程规定公司组织机构人员任职须经董事会、监事会、职工代表大会等形式产生的，还需提交董事签字的董事会决议、监事签字的监事会决议、全体职工代表签字的职工代表大会决议等相关材料。 5．住所使用证明。（具体按《东莞市市场主体住所（经营场所）登记管理办法》和《东莞市企业集群注册登记管理办法》执行，详见附件） 6．募集设立的股份有限公司提交依法设立的验资机构出具的验资证明。涉及发起人首次出资是非货币财产的，提交已办理财产权转移手续的证明文件。 7．募集设立的股份有限公司公开发行股票的应提交国务院证券监督管理机构的核准文件。 8．法律、行政法规和国务院决定规定设立公司必须报经批准的或公司申请登记的经营范围中有法律、行政法规和国务院决定规定必须在登记前报经批准的项目，提交有关批准文件或者许可证件的复印件。 9．涉及名称登记的，根据具体情况提交材料。名称依法须经国家市场监督管理总局预先登记的，由企业登记机关向国家市场监督管理总局申报。 ◆通过企业名称自主申报服务系统成功申报企业名称的，提交《企业名称自主申报使用信用承诺书》和《企业名称自主申报告知书》。 ◆名称使用了其他非营利法人简称或者特定称谓的，还需提交与该非营利法人有投资关系或者经该非营利法人授权的证明。 ◆名称使用了另一个企业名称的简称或者特定称谓的，还需提交与该企业有投资关系或者经该企业授权的证明。 ◆名称使用了国家市场监督管理总局曾经给予驰名商标保护的规范汉字作为同行业企业名称的字号的，还需提交该驰名商标持有人的授权书。 ◆名称与他人登记在先的企业名称存在《广东省工商行政管理局推行企业名称自主申报服务实
GST亲和层析介质使用说明书 一、简介 GST亲和层析介质（GST Agarose）是专门设计用于纯化谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合蛋白、其它谷胱甘肽转移酶以及与谷胱甘肽有亲和作用蛋白的分离介质，一步分离就可得到高纯度的GST融合目标蛋白，纯化条件温和，可以保证蛋白的活性。 本产品是自主设计合成的GST琼脂糖凝胶，具有优良的物理和化学稳定性，使用寿命长，操作方便，批次重复性好，易于放大，是研发与生产的理想选择。 二、性能参数 三、适用范围 分离谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合蛋白、其它谷胱甘肽转移酶以及与谷胱甘肽有亲和作用的蛋白。 四、操作说明 1. 缓冲液配制 缓冲液A（平衡缓冲液）：10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4，140mM NaCl，2.7mM KCl，调节pH值至8.0。 缓冲液B（洗脱缓冲液）：10mM Glutathione（还原型），50mM Tris-HCl，调节pH值至8.0。因Glutathione易氧化，需现用现配。 （注：各种溶液配制完毕后，最好进行脱气处理，0.45 μm滤膜过滤备用)。 2. 样品预处理：
按每克湿重菌体/2~5ml平衡缓冲液的比例充分悬浮离心收集的菌体；600w功率，每循环超声3s，冷却3s，循环99×3次,破碎菌体；4℃、15000rpm离心15m，收集上清液，或用0.45μm滤膜过滤。 3. 装柱： 聚苯乙烯层析柱 1) 将层析柱固定在铁架台或层析架上，封闭层析柱下端出口，向柱内充入纯水，排开层析柱内空气，先将垫片完全浸没于水面下方，在保持水平的状态下，小心推向底部，避免垫片下方滞留气泡。 2) 打开层析柱下端出口，排出柱中纯水；在液面低至距垫片1~1.5cm高度时封闭下端出口，用移液枪按需要量吸取介质，或用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，将介质加入到层析柱中；静置30min，让介质自然沉降。 3) 从上端管口将另一垫片缓慢推至介质沉降平面，使介质表面保持水平状态，注意避免垫片与介质接触面滞留气泡（如对实验结果要求不严，也可不放入上垫片，以提高流速）。 4) 在使用一段时间后，如果层析柱流速减慢，可先用小镊子沿边缘将垫片推翻，夹出垫片，倒出介质，清洗或更换新的垫片后，按2）、3）所述 玻璃层析柱 1) 将层析柱洗净后垂直固定到铁架台上；向柱中加入蒸馏水，排开柱子中的空气，在蒸馏水排尽以前，关闭柱子出口，在柱内保留5~8cm高度的蒸馏水。 2) 先将介质混匀，用移液枪按需要量吸取介质，或用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，将介质加入到层析柱中；静置30min，让介质自然沉降。 3) 从上端管口将转换杆出液端缓慢推至介质沉降平面，使介质表面保持水平状态，注意避免转换杆与介质接触面间滞留气泡。 4) 在使用一段时间后，如果流速减慢，可先卸下上转换杆，将介质倒出，再取出下转换接头中滤网，清洗或更换后重新装柱。 4. 过柱： 1) 用10倍介质体积缓冲液A过柱，平衡介质；
企业登记提交材料规范 目录 第一部分内资企业登记提交材料规范 一、公司登记提交材料规范 (一) 设立登记提交材料规范 【1】公司设立登记提交材料规范 【2】分公司设立登记提交材料规范 （二）变更登记提交材料规范 【3】公司变更登记提交材料规范 【4】分公司变更登记提交材料规范 （三）注销登记提交材料规范 【5】公司注销登记提交材料规范 【6】分公司注销登记提交材料规范 （四）撤销变更登记提交材料规范 【7】撤销变更登记提交材料规范 （五）公司合并、分立提交材料规范 【8】因公司合并(分立)申请设立、变更或注销登记提交材料规范 【9】因合并(分立)公司申请其分公司变更登记提交材料规范 【10】因合并(分立)公司申请其持有股权所在公司的变更登记提交材料规范 二、非公司企业登记提交材料规范 (一) 非公司企业开业登记提交材料规范 【11】非公司企业法人开业登记提交材料规范 【12】营业单位、非法人分支机构开业登记提交材料规范 （二）非公司企业变更登记提交材料规范 【13】非公司企业法人变更登记提交材料规范 【14】增设/撤销分支机构变更登记提交材料规范
【15】营业单位、企业非法人分支机构变更登记提交材料规范（三）非公司企业注销登记提交材料规范 【16】非公司企业法人注销登记提交材料规范 【17】营业单位、企业非法人分支机构注销登记提交材料规范 三、非公司企业法人按《公司法》改制登记提交材料规范【18】非公司企业法人按《公司法》改制登记提交材料规范 四、企业备案提交材料规范 【19】公司备案提交材料规范 【20】非公司企业法人备案提交材料规范 五、合伙企业登记提交材料规范 【21】合伙企业设立登记提交材料规范 【22】合伙企业变更(备案)登记提交材料规范 【23】合伙企业注销登记提交材料规范 【24】合伙企业分支机构设立登记提交材料规范 【25】合伙企业分支机构变更登记提交材料规范 【26】合伙企业分支机构注销登记提交材料规范 六、个人独资企业登记提交材料规范 【27】个人独资企业设立登记提交材料规范 【28】个人独资企业变更(备案)登记提交材料规范 【29】个人独资企业注销登记提交材料规范 【30】个人独资企业分支机构设立登记提交材料规范 【31】个人独资企业分支机构变更登记提交材料规范 【32】个人独资企业分支机构注销登记提交材料规范
Mabselect Sure ——唯一耐强碱的蛋白A亲和层析介质 在生物药物的生产过程中，为避免细菌、内毒素或病毒的污染，需要对层析系统、介质等进行在位消毒 (SIP)，以保证产品的质量。另外，变性的蛋白、脂类和DNA等分子会不可逆的沉淀在层析柱的顶部而降低柱效和传质速度，从而影响收率和产品质量。 0.1~1N的氢氧化钠可以有效的除菌除热原以及灭活病毒，而且对于沉淀的 蛋白、脂类和核酸具有很好的溶解作用，可以有效的对层析介质进行在位清洗(CIP) 而延长使用寿命，因此使用氢氧化钠进行消毒和清洗成为生物制药生产中SIP/CIP的经典方法。这一点对于内毒素要求极为严格的抗体生产来说尤为重要。 但天然或重组的蛋白A配基对NaOH非常敏感，强碱性条件下易变性或脱落，因此只能选用高浓度的盐酸胍或尿素进行清洗，但清洗的效果远远不如NaOH，而且清洗成本非常高。 天然或重组的蛋白A 配基具有5 个不同的抗体Fc 结合结构域，每个域均可 以和IgG的Fc段结合，但不同的域结合强度略有差异。将其中的B domain 中对碱敏感的Asp 氨基酸突变为耐碱的氨基酸，得到新的四聚体配基SuRe Ligand，将此新配基偶联到高流速琼脂糖基质上，成为耐碱的新型高流速Mabselect SuRe 蛋白A 层析介质。 Mabselect SuRe 的优点： a. Mabselect Sure 可以耐受0.1~0.5N的氢氧化钠：使用高达0.5N的氢氧化钠进行在位清洗/消毒大大降低了抗体产品被内毒素污染和批间交叉污染的风险，清洗效果更好，有利于延长介质使用寿命，同时也大大降低了CIP/SIP 的成本。Mabselect SuRe 介质可使用0.1N NaOH 15min/circle 进行“纯化-清洗”循环200次以上仍保持稳定的载量，对碱的耐受性远远好于其它的蛋白A 亲和层析 介质。
公司登记提交材料规范 有限责任公司设立登记提交材料规范 1、《公司登记（备案）申请书》。 2、《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》及指定代表或委托代理人的身份证件复印件。 3、全体股东签署的公司章程。 4、股东的主体资格证明或者自然人身份证件复印件。 股东为企业的，提交营业执照复印件。 ◆股东为事业法人的，提交事业法人登记证书复印件。 ◆股东为社团法人的，提交社团法人登记证复印件。 ◆股东为民办非企业单位的，提交民办非企业单位证书复印件。 ◆股东为自然人的，提交身份证件复印件。 ◆其他股东提交有关法律法规规定的资格证明。 5、董事、监事和经理的任职文件（股东会决议由股东签署，董事会决议由公司董事签字）及身份证件复印件。 6、法定代表人任职文件（股东会决议由股东签署，董事会决议由公司董事签字）及身份证件复印件。 7、住所使用证明。 8、《企业名称预先核准通知书》。 9、法律、行政法规和国务院决定规定设立有限责任公司必须报经批准的，提交有关的批准文件或者许可证件复印件。 10、公司申请登记的经营范围中有法律、行政法规和国务院决定规定必须在登记前报经批准的项目，提交有关批准文件或者许可证件的复印件。 注： 1、依照《公司法》、《公司登记管理条例》设立的有限责任公司适用本规范。一人有限责任公司和国有独资公司参照本规范提供有关材料。 公司变更登记提交材料规范 1、《公司登记（备案）申请书》。 2、《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》及指定代表或委托代理人的身份证件复印件。
3、法律、行政法规和国务院决定规定公司变更事项必须报经批准的，提交有关的批准文件或者许可证件复印件。 4、关于修改公司章程的决议、决定（变更登记事项涉及公司章程修改的，提交该文件；其中股东变更登记无须提交该文件，公司章程另有规定的，从其规定）。 ◆有限责任公司提交由代表三分之二以上表决权的股东签署的股东会决议。 ◆股份有限公司提交由会议主持人及出席会议的董事签署的股东大会会议记录。 ◆一人有限责任公司提交股东签署的书面决定。 ◆国有独资公司提交国务院、地方人民政府或者其授权的本级人民政府国有资产监督管理机构的批准文件。 5、修改后的公司章程或者公司章程修正案（公司法定代表人签署）。 6、变更事项相关证明文件。 ◆变更名称的，应当向其登记机关提出申请。申请名称超出登记机关管辖权限的，由登记机关向有该名称核准权的上级登记机关申报。 ◆变更住所的，提交变更后住所的使用证明。 ◆变更法定代表人的，根据公司章程的规定提交原任法定代表人的免职证明和新任法定代表人的任职证明及身份证件复印件；公司法定代表人更改姓名的，只需提交公安部门出具的证明。 ◆减少注册资本的，提交在报纸上刊登公司减少注册资本公告的有关证明和公司债务清偿或者债务担保情况的说明。应当自公告之日起45日后申请变更登记。 ◆变更经营范围的，公司申请登记的经营范围中有法律、行政法规和国务院决定规定必须在登记前报经批准的项目，提交有关批准文件或者许可证件的复印件。审批机关单独批准分公司经营许可经营项目的，公司可以凭分公司的许可经营项目的批准文件、证件申请增加相应经营范围，但应当在申请增加的经营范围后标注“（限分支机构经营）”字样。 ◆变更股东的，股东向其他股东转让全部股权的，提交股东双方签署的股权转让协议或者股权交割证明。
镍离子金属鳌合亲和层析介质（Ni-NTA）说明书 一、简介 金属螯合亲和层析介质，又称固定金属离子亲和色谱，其原理是利用蛋白质表面的一些氨基酸，如组氨酸能与多种过渡金属离子如Cu2+，Zn2+，Ni2+，Co2+，Fe3+发生特殊的相互作用，能够吸附富含这类氨基酸的蛋白质，从而达到分离纯化的目的。因此，偶联这些金属离子的琼脂糖凝胶就能够选择性地分离出这些含有多个组氨酸的蛋白以及对金属离子有吸附作用的多肽、蛋白和核苷酸。半胱氨酸和色氨酸也能与固定金属离子结合，但这种结合力要远小于组氨酸残基与金属离子的结合力。 镍NTA亲和层析介质（Ni-NTA ）具有特异性好、流速快的优点，颗粒粒度均匀，粒径小，并且螯合镍更稳定，能耐受更高的还原剂，物理和化学稳定性好，批次重复性好。本产品已经螯合好镍离子，使用更方便。 二、性能参数： 特点基团密度高，载量大，分辨率高，使用方便 基质6%的交联琼脂糖凝胶 配体 Ni2+ 配体密度20-40μmol /ml 吸附载量15mg蛋白/ml 介质颗粒大小45-165μm 最大流速600cm/h pH范围3-10，在位清洗时pH范围可到2-11 保存温度+4-8℃ 保存液体20%乙醇 三、适用范围 分离带His标签的重组蛋白及能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白。四、应用实例 实验名称：Ni-NTA 分离带His标签的重组蛋白 实验步骤： 1、Ni-NTA 装柱，1.6×20cm，柱床体积为10ml； 2、用缓冲液1平衡2~5个床体积，流速为2ml/min； 3、将20ml细胞破碎液(50mM PBS，pH7.4，0.5M NaCl)0.45μm滤膜过滤，上样，流速为 1ml/min；
亲和层析柱使用说明货号 名称规格说明DS0101 亲和层析柱1ml 含1个空管柱，上下盖和2个筛板（亲水性，孔径50um） DS0103 亲和层析柱3ml DS0106 亲和层析柱6ml DS0110 亲和层析柱10ml DS0130 亲和层析柱30ml DS0150 亲和层析柱50ml 一、产品说明 亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。它是利用生物分子间 存在很多特异性的相互作用（如抗原和抗体、酶 和底物或抑制剂、激素和受体等），通过将具有 亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质 上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另 一个分子进行分离纯化。 提供的亲和层析柱工具可应用于如下方面： ①纯化重组蛋白；②纯化抗原和抗体；③纯化多 肽；④纯化DNA；⑤糖蛋白的纯化；⑥纯化磷酸 化蛋白和肽；⑦DNA 结合蛋白的纯化；⑧去除内毒素，等。 亲和层析柱空柱管的材质为医疗级的聚丙烯，这种工程材料通过大量的应用证明具有清洁无毒，不与生物分子结合和低溶解度的优点。 亲和层析柱空柱所用的筛板是选用纯净的UHWM-PE（超高分子量聚乙烯）为原料，经独特的工艺加工而成，具有亲水性。筛板在装填时安置在填料基质的上下端，以阻挡昂贵的基质渗出。亲水性筛板采用了领先的亲水性UHWM-PE 生产技术，该筛板能保证使用重力法时的流速为1-2ml/分钟或1-2滴/秒。同时，该筛板和其它同类产品相比，不会由于亲水性基团的引入而对蛋白质产生吸附。另外，该亲水性筛板在使用过程中不易形成气泡，气泡会使流速降低，液体通过基质不均匀。
二、产品应用 1，抗体纯化 纯化抗体一般用Protein A作为纯化的配体，也可以用Protein G或Protein L或异源性抗体作为配体。 2，小分子物质提取（以提取黄曲霉毒素M1为例） 试样通过免疫亲和柱时,黄曲霉毒素M1被提取。亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上,当样品通过亲和柱时,抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体一抗原复合体。用水洗柱除去柱内杂质,然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1,收集洗脱液。用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1含量。 3，重组蛋白纯化 近年来，随着生物技术，特别是基因工程技术的迅猛发展，重组蛋白表达和纯化越来越容易。常用的重组蛋白表达策略是把蛋白与亲和标签融合表达，利用亲和标签一步纯化出目标蛋白。此方法无需了解蛋白质的生化特性或生理活性，就可通过带标签的重组融合蛋白选择性地与层析基质上的配体结合，从而得以纯化任何蛋白质。此方法与常规的层析方法不同之处在于，无需针对不同的蛋白质开发特定的配体和方法。采用保护蛋白质结构和功能完整性的温和条件，可一步亲和层析从粗提物中纯化出重组蛋白，纯度可达90％以上。 亲和标签已成为后基因组学时代纯化重组蛋白常用手段。亲和标签系统一般具有以下特征：(a)一步的吸附纯化；(b)对三级结构和生物活性影响小；(c)可方便且专一的去除以产生天然蛋白质；(d)在纯化过程中重组蛋白的分析简便准确；(e)适用于大量的不同蛋白质。但是没有哪个标签是完美的，只能根据实际需要去自己筛选，下表是分的标签以及纯化的方案。
公司登记提交材料： 1、名称预先核准通知书（可凭此通知书，先行刻公章，也可凭营业执照刻公章） 2、《公司登记（备案）申请书》(法定代表人签字处由公司拟任法定代表人签署) 3、《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》（申请人签字处由全体股东签字，委托人身份证复印件正反面并列粘贴） 4、法定代表人信息（法定代表人签字，身份证复印件正反面并列粘贴） 5、董事、监事、经理信息(身份证复印件正反面并列粘贴) 6、财务负责人信息(身份证复印件正反面并列粘贴) 7、联络员信息(身份证复印件正反面并列粘贴) 8、股东（发起人）出资情况 9、公司章程(全体股东签署，一式两份：工商一份、自己一份) 10、任职文件（两页，由全体股东签署） 11、经理聘任证明（由执行董事签署） 12、住所申报表（全体股东签署） 13、股东的主体资格证明或者自然人身份证件复印件 14、住所使用证明（公司地址格式统一为：聊城市东昌府区XX办事处或镇XXXXXXXX） 15、告知承诺书 16、不在拆迁范围的证明（加盖所在地办事处或乡镇政府公章） 说明： 一、要求申请人、股东（即全体投资人）签字、法定代表人签字的地方，必须本人用黑色签字笔签名；所有材料都要求是打印版。 二、公司董事、监事、经理不能担任公司财务负责人 三、公司住所使用证明： 1、所有公司均需要提供不在拆迁范围的证明，加盖所在地办事处或乡政府公章。 1.公司住所为自有房产的，提供房产证（或商品房买卖合同）复印件；未取得房屋产权证的，到乡镇政府、街道办事处、园区管委会或居委会、村委会出具房产证明。（主要证明：在XXXXXX地址的房屋，房屋产权归XXX所有，暂未取得房产
蛋白纯化原则和技术概览 无论是蛋白研究还是应用，通常需要将蛋白利用不同的生物系统表达出来，然后进行分离和纯化。研究实验室通常需要纯化微克或毫克级别的蛋白质，而工业上需要纯化数千克甚至数吨的蛋白质。因此，蛋白纯化非常重要。纯化过程中，主要需要考虑宿主污染、样品的可溶性、蛋白结构的完整性和生物活性。蛋白的纯化可大致分为样品捕获、中度纯化阶段和精细纯化阶段3个阶段。 ?样品捕获：分离、浓缩和稳定化处理； ?中度纯化：去除核酸等其他细胞成分，可使用硫酸铵沉淀法； ?精细纯化：将靶蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来，常用方法包括凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。 蛋白纯化指导原则 1. 明确目标，避免过度纯化或者纯化不够； 表1. 对蛋白样本纯度要求的例子。
2、明确样本特性和主要的杂质，选择合适的纯化方法； 可以通过检测蛋白稳定性窗口（如pH值、离子强度）和蛋白基础数据（如蛋白大小、等电点pl、疏水性、可溶性等）快速确定纯化技术组合。 3、能够快速检测蛋白的回收率、活性和杂质情况； 4、尽量减少步骤，从而避免样本损失过多和活性降低过多； 5、尽早除去蛋白酶等对样品有损害的杂质； 6、尽量少使用添加剂，否则可能需要额外的步骤去除添加剂。 蛋白纯化方法 由于样品和蛋白的性质各异，所含杂质也不尽相同，因此需要采用不同的蛋白纯化策略。目前主要有六种蛋白纯化方法：凝胶过滤层析、离子交换层析、标签纯化、亲和层析、疏水作用层析、电泳等。其他方法也可用于蛋白纯化，比如利用蛋白的热稳定性、蛋白酶解稳定性、溶解度等特性纯化蛋白。 1 凝胶过滤层析 凝胶过滤层析是一种高效的蛋白分离纯化方法，根据分子大小的差异分离蛋白质混合物。在蛋白溶液通过含有填充颗粒的凝胶过滤层析柱时，由于不同蛋白的分子大小不同，扩散进入特定大小孔径颗粒的能力也因此各不相同，大分子蛋白率先被洗脱出来，分子量越小，洗脱越晚，从而达到蛋白分离和纯化的目的。一般来说，越细、越长的凝胶过滤层析柱的纯化效果越好。
Ni柱亲和层析纯化poly-his变性重组蛋白的标准操作规程（编号：066）1、目的及适用范围 利用Ni2+鳌合层析纯化体外表达的带有His标签的包涵体重组蛋白。 2、主要仪器 超声破碎仪、冷冻离心机、Ni柱、垂直混匀仪 3、主要试剂 3.1 裂解Buffer：50mM Tris，5mM EDTA，0.8%NaCl，pH8.5 3.2 变性剂：6M盐酸胍，2mM EDTA， 50mM Tris，10mM DTT，pH8.5 3.3 Buffer B：8M尿素，0.1M NaH2PO4，10mM Tris，pH8.0 3.4 Buffer C：8M尿素，0.1M NaH2PO4，10mM Tris，pH6.3 3.5 Buffer D：8M尿素，0.1M NaH2PO4，10mM Tris，pH5.9 3.6 Buffer E：8M尿素，0.1M NaH2PO4，10mM Tris，pH 4.5 4、相关的预处理 Ni柱的预处理： 4.1用5个柱体积的无菌水冲洗柱子； 4.2用5个柱体积的0.1M NiSO4冲洗柱子，使柱子挂Ni； 4.3用5个柱体积的无菌水冲洗柱子，除去多余的Ni； 4.4用5个柱体积的酸性Buffer冲洗柱子（使柱子变得疏松）； 4.5用5个柱体积的Buffer B平衡柱子。 5、操作步骤 5.1蛋白的纯化 5.1.1大肠杆菌诱导表达目的蛋白； 5.1.2 4500rpm，离心10-15min，收集菌体； 5.1.3用裂解buffer重悬菌体，8000rpm离心10min，弃上清，收集菌体； 5.1.4 将菌体用裂解buffer重悬，超声破碎菌体； 5.1.5 4℃，12000rpm离心15min，弃上清； 5.1.6 将沉淀用PBST洗涤，4℃，12000rpm离心10min，重复1次； 135
【3】有限责任公司设立登记提交材料规范及申请表格 1、《公司登记（备案）申请书》。 2、《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》及指定代表或委托代理人的身份证件复印件。 3、全体股东签署的公司章程。 4、股东的主体资格证明或者自然人身份证件复印件。 股东为企业的，提交营业执照复印件。 ?股东为事业法人的，提交事业法人登记证书复印件。 ?股东为社团法人的，提交社团法人登记证复印件。 ?股东为民办非企业单位的，提交民办非企业单位证书复印件。 ?股东为自然人的，提交身份证件复印件。 ?其他股东提交有关法律法规规定的资格证明。 5 、董事、监事和经理的任职文件（股东会决议由股东签署，董事会决议由公司董事签字）及身份证件复印件。 6法定代表人任职文件（股东会决议由股东签署，董事会决议由公司董事签字）及身份证件复印件。 7 、住所使用证明。使用自有房产的，提交房产证复印件；租（借）用他人 房产的，提交租赁协议（无偿使用证明）及出租（借）人房产证复印件。 因故不能提交房产证复印件，是商品房的可提交购房合同及房屋销售许可 证复印件，是商场、宾馆、酒店、市场类企业法人所属房屋（摊位）的可提交 出租方营业执照复印件，是党政机关、事业单位、社会团体所属房屋的可只提交盖上述单位行政公章的租赁协议复印件。以上也可提交由当地房屋管理部门、当地政府及其派出机构、各类功能开发区管委会、村（居）委会等组织机构出具的权属证明材料。租赁部队房地产的，并按有关规定提交军队、武警部队出具的房地产租赁许可证。 住宅作为住所（经营场所）登记的，应补充提交居（村）委会、业主委员会出具的同意使用的书面意见（市政府发文后另有规定的，按相关规定执行）。 8、《企业名称预先核准通知书》。 9 、法律、行政法规和国务院决定规定设立有限责任公司必须报经批准的，提交有关的批准文件或者许可证件复印件。 10、公司申请登记的经营范围中有法律、行政法规和国务院决定规定必须在登记前报经批准的项目，提交有关批准文件或者许可证件的复印件。 * 11、2015年9月10日起，对全市新办设立登记和变更登记的企业、农民 专业合作社及其分支机构，统一实行“三证合一”“一照一码”登记模式，由工 商部门核发加载“统一社会信用代码”（以下简称“统一代码”）的营业执照， 组织机构代码证和税务登记证不再发放。 注：1、依照《公司法》、《公司登记管理条例》设立的有限责任公司适用本规范。一人有限责任公司和国有独资公司参照本规范提供有关材料。 2、提交的申请书与其它申请材料应当使用A4型纸。 3、提交材料未注明提交复印件的，应当提交原件；提交复印件的，应当注明“与原件一致”并由申请人签署，或者由其指定的代表或共同委托的代理人加盖公章或签字。 4、提交材料涉及签署的，未注明签署人的，自然人由本人
内资企业登记提交材料规范 目录 一、公司登记提交材料规范 (一) 设立登记提交材料规范 【1】有限责任公司设立登记提交材料规范 1.《公司登记（备案）申请书》。 2.《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》及指定代表或委托代理人的身份证件复印件。 3.全体股东签署的公司章程。 4.股东的主体资格证明或者自然人身份证件复印件。 ◆股东为企业的，提交营业执照复印件。 ◆股东为事业法人的，提交事业法人登记证书复印件。 ◆股东为社团法人的，提交社团法人登记证复印件。 ◆股东为民办非企业单位的，提交民办非企业单位证书复印件。 ◆股东为自然人的，提交身份证件复印件。 ◆其他股东提交有关法律法规规定的资格证明。 5.董事、监事和经理的任职文件（股东会决议由股东签署，董事会决议由公司董事签字）及身份证件复印件。 6.法定代表人任职文件（股东会决议由股东签署，董事会决议由公司董事签字）及身份证件复印件。 7.住所使用证明。 8.《企业名称预先核准通知书》。 9.法律、行政法规和国务院决定规定设立有限责任公司必须报经批准的，提交有关的批准文件或者许可证件复印件。 10、公司申请登记的经营范围中有法律、行政法规和国务院决定规定必须在登记前报经批准的项目，提交有关批准文件或者许可证件的复印件。 注： 1.依照《公司法》、《公司登记管理条例》设立的有限责任公司适用本规范。一人有限责任公司和国有独资公司参照本规范提供有关材料。
【2】股份有限公司设立登记提交材料规范 1.《公司登记（备案）申请书》。 2.《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》及指定代表或委托代理人的身份证件复印件。 3.由会议主持人和出席会议的董事签署的股东大会会议纪录（募集设立的提交创立大会的会议记录）。 4.全体发起人签署或者出席股东大会或创立大会的董事签字的公司章程。 5.发起人的主体资格证明或者自然人身份证件复印件。 ◆发起人为企业的，提交营业执照复印件。 ◆发起人为事业法人的，提交事业法人登记证书复印件。 ◆发起人股东为社团法人的，提交社团法人登记证复印件。 ◆发起人为民办非企业单位的，提交民办非企业单位证书复印件。 ◆发起人为自然人的，提交身份证件复印件。 ◆其他发起人提交有关法律法规规定的资格证明。 6.募集设立的股份有限公司提交依法设立的验资机构出具的验资证明。涉及发起人首次出资是非货币财产的，提交已办理财产权转移手续的证明文件。 7.董事、监事和经理的任职文件及身份证件复印件。 ◆依据《公司法》和公司章程的规定，提交由会议主持人和出席会议的董事签署的股东大会会议记录（募集设立的提交创立大会的会议记录）、董事会决议或其他相关材料。其中股东大会会议记录（创立大会会议记录）可以与第3项合并提交；董事会决议由公司董事签字。 8.法定代表人任职文件（公司董事签字的董事会决议）及身份证件复印件。 9.住所使用证明。 10.《企业名称预先核准通知书》。 11.募集设立的股份有限公司公开发行股票的应提交国务院证券监督管理机构的核准文件。 12.法律、行政法规和国务院决定规定设立股份有限公司必须报经批准的，提交有关的批准文件或者许可证件复印件。 13.公司申请登记的经营范围中有法律、行政法规和国务院决定规定必须在登记前报经批准的项目，提交有关批准文件或者许可证件的复印件。 注：
Ni亲和层析柱法纯化带组氨酸标签的重组蛋白 纯化设备： 纯化仪：?KTA purifier(GE Healthcare, Uppsala, Sweden) Ni亲和层析柱：HisTrap TM HP-5 mL (GE Healthcare, , Uppsala, Sweden) 试剂： 所有上柱的试剂均需经0.2 μM孔径过滤器过滤并超声波震荡除气处理方可使用。 Binding Buffer：20 mM Na2HPO4-NaH2PO4, pH 7.4, 500 mM NaCl, 5 mM 咪唑 Elution Buffer：20 mM Na2HPO4-NaH2PO4, pH 7.4, 500 mM NaCl, 500 mM 咪唑 Stripping Buffer: 20 mM Na2HPO4-NaH2PO4, pH 7.4, 500 mM NaCl, 50 mM EDTA 20%乙醇：200 mL无水乙醇，加蒸馏水定容至1L 0.1M NiSO4: 称取2.6284g NiSO4·6H2O，加蒸馏水溶解，定容至100 mL 操作步骤： 1 样品前处理 取诱导后菌液50 mL，4℃、5000 rpmin离心10 min收集菌体，以25 mL Binding Buffer 重悬菌体，冰浴下超声波破碎至澄清，4℃、12000 rpmin离心25 min，取上清，经0.2 μM 孔径过滤器过滤后待用。 2 Ni柱前处理 上样前，使用10倍柱体积的Binding Buffer以5 mL/min的流速平衡镍柱。 3 上样 经离心、过滤处理后的样品以1 mL/min的流速通过衡流泵加载到平衡后的Ni柱上，收集穿透液，可反复上样以提高样品的挂柱效率。 4 平衡上样后的Ni柱 将已结合目的蛋白的Ni柱回接到?KTA pur ifier上，用10倍柱体积的Binding Buffer 以5 mL/min的流速再次平衡镍柱以去除未结合上的蛋白。 5 梯度洗脱 以梯度的Elution Buffer/Binding Buffer混合液洗脱Ni柱(梯度的界定因蛋白而不同，可经预实验确定)，流速为5 mL/min，并监测OD280值，收集蛋白吸收峰对应的洗脱液
【4】公司变更登记提交材料规范 1.《公司登记（备案）申请书》。 2.《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》及指定代表或委托代理人的身份证件复印件。 3.法律、行政法规和国务院决定规定公司变更事项必须报经批准的，提交有关的批准文件或者许可证件复印件。 4.关于修改公司章程的决议、决定（变更登记事项涉及公司章程修改的，提交该文件；公司章程另有规定的，从其规定）。 ◆有限责任公司提交由代表三分之二以上表决权的股东签署的股东会决议。 ◆股份有限公司提交由会议主持人及出席会议的董事签署的股东大会会议记录。 ◆一人有限责任公司提交股东签署的书面决定。 ◆国有独资公司提交国务院、地方人民政府或者其授权的本级人民政府国有资产监督管理机构的批准文件。 5.修改后的公司章程或者公司章程修正案（公司法定代表人签署）。 6.变更事项相关证明文件。 ◆变更名称的，应当向其登记机关提出申请。申请名称超出登记机关管辖权限的，由登记机关向有该名称核准权的上级登记机关申报。 ◆变更住所的，提交变更后住所的使用证明。（使用租赁的房屋需要提交租赁协议及出租方房产证复印件，无法提交房产证复印件的，可以提交房管部门出具的权属证明或者办事处、社区、居委会任一单位出具的房屋权属证明。如是购买的房屋可提交房屋购买合同、开发商出具的房屋预售许可证复印件、竣工验收证明。如是租赁的宾馆的房屋只需提供租赁协议及宾馆合法营业执照复印件。房产证上房屋的用途如为住宅或商住两用的房屋，还须提交《“住改商”信息申报表》，《“住改商”信息申报表》由小区业主委员会、办事处、社区、居委会任一单位盖章即可，不可以是物业公司盖章。《“住改商”信息申报表》由申请人签署。） ◆变更法定代表人的，根据公司章程的规定提交原任法定代表人的免职证明和新任法定代表人的任职证明及身份证件复印件；公司法定代表人更改姓名的，只需提交公安部门出具的证明。 ◆减少注册资本的，提交在报纸上刊登公司减少注册资本公告的有关证明和公司债务清偿或者债务担保情况的说明。应当自公告之日起45日后申请变更登记。
提交材料规范及说明 Document serial number【LGGKGB-LGG98YT-LGGT8CB-LGUT-
公司登记提交材料： 1、名称预先核准通知书（可凭此通知书，先行刻公章，也可凭营业执照刻公章） 2、《公司登记（备案）申请书》(法定代表人签字处由公司拟任法定代表人签署) 3、《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》（申请人签字处由全体股东签字，委托人身份证复印件正反面并列粘贴） 4、法定代表人信息（法定代表人签字，身份证复印件正反面并列粘贴） 5、董事、监事、经理信息(身份证复印件正反面并列粘贴) 6、财务负责人信息(身份证复印件正反面并列粘贴) 7、联络员信息(身份证复印件正反面并列粘贴) 8、股东（发起人）出资情况 9、公司章程(全体股东签署，一式两份：工商一份、自己一份) 10、任职文件（两页，由全体股东签署） 11、经理聘任证明（由执行董事签署） 12、住所申报表（全体股东签署） 13、股东的主体资格证明或者自然人身份证件复印件 14、住所使用证明（公司地址格式统一为：聊城市东昌府区XX办事处或镇XXXXXXXX） 15、告知承诺书
16、不在拆迁范围的证明（加盖所在地办事处或乡镇政府公章） 说明： 一、要求申请人、股东（即全体投资人）签字、法定代表人签字的地方，必须本人用黑色签字笔签名；所有材料都要求是打印版。 二、公司董事、监事、经理不能担任公司财务负责人 三、公司住所使用证明： 1、所有公司均需要提供不在拆迁范围的证明，加盖所在地办事处或乡政府公章。 1.公司住所为自有房产的，提供房产证（或商品房买卖合同）复印件；未取得房屋产权证的，到乡镇政府、街道办事处、园区管委会或居委会、村委会出具房产证明。（主要证明：在XXXXXX地址的房屋，房屋产权归XXX所有，暂未取得房产证，本房屋不在拆迁范围，不属于违章建筑；加盖政府、街道办或居委会、村委会的公章）； 2.公司住所为租赁的，提供租赁合同； 3.公司住所为无偿使用的，提供无偿使用证明。 四、关于生产经营场所： 可以与住所是同一地址；也可以不在同一地址，但必须属于东昌府区管辖。 五、法律、行政法规和国务院决定规定设立有限责任公司必须报经批准的，提交有关的批准文件或者许可证书复印件；
内资企业登记申请提交材料规范修改方案 （建议稿） 按照国务院常务会议的部署和工商总局关于进一步放宽市场主体准入营造良好发展环境的意见，为推进工商登记制度改革，实现工商注册制度便利化，按照方便注册和规范有序的要求，对2009年制定实行的内资企业登记申请提交材料规范（以下称提交材料规范）进行了修改，将修改的情况说明如下： 一、修改原则 （一）坚持依法的原则。继续以企业类型和登记事务分类制定提交材料规范，既坚持改革的要求，又尽量保持登记标准和提交材料标准的一致性，促进形成诚信、公平、有序的市场秩序。 （二）与企业工商登记制度的推进保持一致的原则。根据注册资本登记制度改革方案中已经明确的关于注册资本、经营范围、住所（经营场所）登记注册和名称核准、集团登记、信用信息公示等的改革意见，结合规范登记行为，规范提交登记材料。 （三）方便注册、满足实际工作需要的原则。本次修改的目的是在依法的前提下，降低的登记注册门槛，简化登记注册手续，减少登
记注册材料，使提交材料规范既便于申请人办理登记注册，又方便企业登记注册人员实践操作。 二、修改的主要内容 现行提交材料规范共64项，经减并、增补，建议调整为34项。主要是： （一）根据改革方案对提交材料要求进行必要调整 1、根据注册资本登记制度改革的要求，修改了与公司注册资本有关的登记注册材料规范。新修改的《公司法》将注册资本实缴登记制改为认缴登记制，取消了实收资本和公司注册资本最低限额，取消了对实收资本、出资方式、出资时间的登记注册，本次修订依法取消实收资本、出资方式、出资时间登记注册提交材料规范。公司股东（发起人）对其认缴的出资额、出资方式、出资期限、缴纳情况自主约定，记载于章程之中，不再提交验资报告证明，发生变更提出备案申请的，依章程备案提交材料规范。公司设立登记、公司变更登记涉及注册资本、股权变更登记的，提交材料规范取消了提交验资报告（募集设立的股份有限公司设立除外），对其他相关材料的提交，也做了相应的修改。 2、根据国务院常务会议由地方政府按照方便注册和规范有序的原则放宽市场主体住所（经营场所）条件的精神，取消了对住所（经营场所）登记注册提交材料的统一具体规定。
说明 1.办理企业名称预先核准，或者企业登记（备案）等业务，可以登录国家工商行政管理总局网站（https://www.doczj.com/doc/0f10986211.html,）,或者登录中国企业登记网（https://www.doczj.com/doc/0f10986211.html,），从首页“表格下载”栏目下载相关登记（备案）申请文书，按照登记（备案）申请文书所附填写要求填写。 2.提交的登记申请文书与其它申请材料应当使用A4型纸。 3.提交材料未注明提交复印件的，应当提交原件；提交复印件的，应当注明“与原件一致”并由申请人签署，或者由其指定的代表或共同委托的代理人加盖公章或签字。 4.提交材料涉及签署，未注明签署人的，自然人由本人签字，法人和其他组织由法定代表人或者负责人签字，并加盖公章。 有限责任公司变更提交材料规范 一、名称变更提交材料 1.《公司登记（备案）申请书》。 2.《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》及指定代表或委托代理人的身份证件复印件。 3.法律、行政法规和国务院决定规定公司变更事项必须报经批准的，提交有关的批准文件或者许可证件复印件。 4.股东会决议或决定（一人公司提供决定）。 5.修改后的公司章程或者公司章程修正案（公司法定代表人签署）。 6.变更名称预先核准通知书的，应当向其登记机关提出申请。申请名称超出登记机关管辖权限的，由登记机关向有该名称核准权的上级登记机关申报。 7.公司营业执照副本。 二、住所变更提交材料
1.《公司登记（备案）申请书》。 2.《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》及指定代表或委托代理人的身份证件复印件。 3.法律、行政法规和国务院决定规定公司变更事项必须报经批准的，提交有关的批准文件或者许可证件复印件。 4.股东会决议或决定（一人公司提供决定）。 5.修改后的公司章程或者公司章程修正案（公司法定代表人签署）。 6.变更住所的，提交变更后住所的使用证明（房屋租赁协议及告知单有范本）。 7.公司营业执照副本。 三、法定代表人变更提交材料 1.《公司登记（备案）申请书》。 2.《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》及指定代表或委托代理人的身份证件复印件。 3.法律、行政法规和国务院决定规定公司变更事项必须报经批准的，提交有关的批准文件或者许可证件复印件。 4.股东会决议或决定（一人公司提供决定）。 5.修改后的公司章程或者公司章程修正案（公司法定代表人签署）。 6.变更法定代表人的，根据公司章程的规定提交原任法定代表人的免职证明和新任法定代表人的任职证明及身份证件复印件；公司法定代表人更改姓名的，只需提交公安部门出具的证明。 7.公司营业执照副本。 四、注册资本变更提交材料 1.《公司登记（备案）申请书》。 2.《指定代表或者共同委托代理人授权委托书》及指定代表或委托代理人的身份证件复印件。