血红蛋白电泳检查（电泳法）
1. 原理
血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。多余的染色液用酸性液体洗去。待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。
2. 标本采集
2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：抗凝血
2.3 标本要求：抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。清洁试管中，充分混匀。
4. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。
5. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
6. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
7. 试剂
7.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂
7.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司
7.3 包装规格：150tests
7.4 试剂盒组成
琼脂糖凝胶10块溶血素1瓶
缓冲液条带10包×2条薄滤纸1×10张
氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml 点样模具滤纸10条×1盒
7.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。有效期两年。
8. 仪器设备
8.1 仪器名称：SEBIA电泳仪
8.2 仪器厂家：法国Sebia公司
8.3 仪器型号：HYDRASYS
9. 操作步骤
9.1 血红蛋白液制作：抗凝血离心，5000rpm，5分钟，去掉血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3次，若红细胞体积小于10ul，需特别小心。取10ul红细胞加入130ul溶血液造成溶血。震荡混匀10秒钟，室温下培育5分钟待测。
9.2 启动电泳仪
9.3 将加样器放在一平板上，有数字的一端向上。各加样孔加入10ul溶血的样品，2分钟内加样完毕。将加样器放入保湿盒内，齿端向上（转运时用塑料齿保护架）。等待5分钟，使样品扩散至齿端。打开电泳仪盖，抬起电极和加样器支架。
9.4 使用HYDRAGEL 15 HEMOGLOBINCE时选择仪器的“HBTOTAL”程序（位于链盘左侧）。
9.5 从包装袋内取出缓冲条，拿出末端的塑料片，将缓冲条两端塑料片固定在电极支架背侧的钉上，塑料片应紧贴支架。
9.6 取出凝胶板。将薄的滤纸轻轻吸去凝胶板表面的多余液体，然后立即丢弃滤纸。在电泳仪温度控制板表面的边线内加200ul蒸馏水或去离子水。凝胶面朝上，放置凝胶板，边缘对齐边线。略略将凝胶弯曲，然后放平，使水均匀分布在凝胶板下面而不含气泡。
9.7 降低支架，使缓冲条不接触到凝胶板。
9.8 从保温盒里取出加样器。取时拿保护框。折断加样器齿端保护框。将加样器放在4号位置。
9.9 关上电泳仪盖子，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始。
9.10 凝胶染色扫描
9.10.1打开盖子
9.10.2取出并丢弃加样器
9.10.3升高两个支架，握住塑料端取出并丢弃缓冲条。
9.10.4打开凝胶托架，平放，将干燥的凝胶片放入两层间，然后关上托架。
9.10.5将凝胶支架放入染色池
9.10.6取出凝胶支架，打开盖子，取出干燥的凝胶片。
9.10.7在光密度仪的570nm处或以黄色滤光片扫描测定。使用HYDRYS，DVSE 或PREFERENCE光密度仪时，使A2片段的标记置于扫描板5mm的标志处。10. 结果判断与参考范围
扫描得到的只是每种血红蛋白条带的相对浓度值。取出胶片后，首先清洁胶片的背面。判断溶血液的浓度是否合适，主要看基质带的浓度，如基质带浓度过淡，说明溶血液的浓度太淡。正常时A2浓度大约为基质带浓度的1-2倍。
半岁-成人:HbA≧94.5﹪,HbF﹤2.0％,HbA2﹤3.5％
1个月：HbA 12-40﹪,HbF 60-93％,HbA2 0.1-1.0％
6个月：HbA 86-98﹪,HbF 0.84-10.7％,HbA2 0.87-2.9％
脐带血：HbA 4-40﹪,HbF 30-96％,HbA2﹤1.0％
11. 质量控制
建议测定每一批样本时都附有一控制品或含有血红蛋白A,F,C和S的血样本。12. 临床意义
12.1 检测β-地中海贫血
12.1.1轻型：HbA2轻度升高，大多在4％-8％
12.1.2中间型：HbA1A2缺如，HbF可达10％
12.1.3重型：HbF：30％-90％，HbA多低于40％或甚至0％
12.2 检测α-地中海贫血
12.2.1标准型α-地中海贫血：新生儿期HbBart′s可达5％-15％，几个月后消失。经煌焦油蓝温育后，少数红细胞内有H包涵体。血红蛋白电泳无异常发现。12.2.2血红蛋白H病：HbH在PH8.6或8.8电泳时，向阳极方向移动，泳速快于HbA;在PH6.5电泳时，仍向阳极方向移动。
12.2.3血红蛋白Bart胎儿水肿综合症：Hb Bart′s占80％-100％，可有少量HbH。HbA、A2及F均缺如。
12.3检测血红蛋白病：引起临床注意的异常血红蛋白有四种：S，C，E和D。
12.3.1血红蛋白S：在碱性缓冲条件下血红蛋白S的条带位于A和A2片段之间12.3.2血红蛋白C：在碱性缓冲条件下血红蛋白C，E和A2的条带重叠在一起。若这一片段﹥15％，应怀疑有血红蛋白C或E的异常。
12.3.3血红蛋白E：与血红蛋白C不同的是，E在酸性凝胶电泳中不与A2分离。
12.3.4血红蛋白D：在碱性缓冲条件下，血红蛋白D和S的条带重叠在一起，但D在酸性凝胶电泳中不与A2分离。
13. 操作性能：灵敏度高、特异性强、操作简便，重复性好。
14. 注意事项：
14.1 试剂贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃）内，不能冷冻。
14.2 不要应用溶血标本
14.3 若检测到异常血红蛋白，而又与常见的异常血红蛋白S,C,D或E不同，可使用其他方法（如球蛋白链电泳）检测，或求助于有关专门实验室。
14.4 HbF小于全部血红蛋白的2％-3％时，扫描检测HbF（或其它一些较少见的血红蛋白）只是半定量的，结果不十分准确。
14.5 对于中度或重度贫血的病例，点样量应增大为15ul或20ul，其结果不受影响。
14.6 电泳过程中不能打开盖子。在染色脱色以及干燥过程中，仪器的一些程序处于锁定状态。
14.7 最后染色后立即扫描测定。若欲保存，可用一保护物覆盖后置于干燥、暗处，避免受热，可保存约3个月
[临床意义]
(1)HbA2增高是轻型β—海洋性贫血最重要的诊断依据；
(2)HbS病、β链异常的不稳定Hb病及某些巨幼细胞性贫血患者HbA2也可增高；
(3)缺铁性贫血时，HbA2常降低，可与轻型β—海洋性贫血鉴别；
(4)正常人Hb电泳后，一般只见两条区带(HbA和HbA2)，若出现新的区带，
则可能为异常Hb，应进一步检查。
血红蛋白电泳检查（电泳法） 1. 原理 血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。多余的染色液用酸性液体洗去。待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。 2. 标本采集 2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。 2.2 标本种类：抗凝血 2.3 标本要求：抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。清洁试管中，充分混匀。 4. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。 5. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。 6. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。 7. 试剂 7.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂 7.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司 7.3 包装规格：150tests 7.4 试剂盒组成 琼脂糖凝胶10块溶血素1瓶 缓冲液条带10包×2条薄滤纸1×10张 氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml 点样模具滤纸10条×1盒
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告 一、实验目的 1.1.学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法； 1.2.了解电泳技术的一般原理； 1.3.掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。 二、实验原理 2.1.血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。 2.2.①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。 三、材料与方法： 3.1.实验材料： 3.1.1.实验试剂：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）； ②巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）； ③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：0.4mol/NaOH
溶液。 3.1.2.实验器材：①V-1100分光光度计（×1）；②恒温水浴箱（×1）；③试管（×6）、试管架（×1）；④1000μL 加样枪（×1）、加样枪架（×1）；⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）；⑥培养皿（×5）；⑦点样器或载玻片（×1）； ⑧平头镊子（×2）；⑨剪刀（×1）；⑩电泳槽（×1）；?直流稳压电泳仪（×1）四、结果与讨论条 4.1.结果分析本次实验得到的图谱只能够清晰的看出清蛋白和γ－球蛋白的区带，其余无法区别。原因可能如下：①醋酸纤维薄膜质量不足。②薄膜过湿，样品扩散迅速，导致样品分离不成区带。③点样太少，区带显色不明显。④电泳时间不足。 ⑤薄膜在缓冲液中浸泡的时间不足。⑤取出电泳后的薄膜过程中曾不慎将薄膜掉到地上。⑥染色时，因为现场混乱，可能导致醋酸纤维薄膜不是一张一张放入染色液的，在染色固定前，薄膜与薄膜之间重叠，造成薄膜上还未固定的血清蛋白彼此粘连。 四、结果与讨论 4.2.课后思考题 1.电泳时，点样端置于电场的正极还是负极？为什么？ 答：点样端置于电场的负极。因为人体血清的蛋白质会因电槽中溶质呈碱性而带负电，要成功分离出各类各类蛋白质，理应将点样端置于电场的负极。
实验汇报 实验名称：血红蛋白电泳 项目名称：两种碱性血红蛋白样品处理方法的电泳结果 实验时间：2018年9月17日 实验室：龙泉驿区妇幼保健院检验科 实验人员：杨松 报告单位：成都温伦科技有限公司 一、实验目的： 1、掌握生理盐水处理血红蛋白样品的方法 2、掌握四氯化碳处理血红蛋白样品的方法 3、掌握电泳仪实验的操作 4、分析两种碱性血红蛋白样品处理方法电泳结果的不同 二、实验原理： 血红蛋白电泳就是利用在电场的作用下, 由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小, 形状等性质的差异, 使带电分子产生不同的迁移速度, 从而对样品进行分离, 鉴定或提纯的技术，在临床检验中, 主要用于分离各类蛋白分子。 三、实验方法： 琼脂糖电泳法 四、实验器械： 样品：10个EDTA抗凝管抽取的病人全血样品 试剂：0.9%生理盐水500ml，四氯化碳500ml，界面液250ml，美国Helena Spife3000血红蛋白电泳检测试剂盒 器材：移液枪，一次性移液枪头若干，EDTA抗凝管10个，玻璃试管10个设备：美国Helena Spife3000 全自动电泳仪 五、实验步骤： 1、取得医院检验科EDTA抗凝管抽取的病人全血样品10个，编号为1，2,3......10。 2、将1-10号十个个样品分别用移液枪取200ul到玻璃试管中，编号为 1-1,2-1,3-1,.....10-1。
3、将1-10号10个样品进行生理盐水前处理，处理方法如下： -用0.9%生理盐水混匀，3500 rpm离心10分钟. -吸走弃去清液。 -以上步骤连续进行三次。 -完全吸走弃去上清液。 -20ul制作后的样本+80ul溶血素，混匀。 -取溶血后的样本17ul加入样品孔。 4、将1-1到10-1号10个样品进行四氯化碳前处理，处理方法如下： -用0.9%生理盐水溶液5000μL与样品混合。 -3000rpm离心5分钟。 -弃去上清液，只留下红细胞。 -加入200ul 蒸馏水溶解红细胞。 -加入300ul 的四氯化碳，混合均匀，3000rpm离心5分钟。 -取上面萃取后的血红蛋白液17ul 加入样品孔。 5、记录下这20个样品的样品孔编号，将样品孔放入样品板，摆放进电泳槽中，放上加样刀锋，添加界面液，放上琼脂板，掀开琼脂板保护膜，吸取多余界面液，放上碳棒，关上电泳槽的盖子，启动设备开始电泳。 6、大约30分钟后，电泳完成，取出碳棒放好，铲掉琼脂板上的盐桥，取出琼脂板，放入染色槽中进行染色脱色干燥。 7、大约30分钟后，染色脱色干燥完成，取出琼脂板，放入扫描仪中进行扫描，用PT软件进行分析数据，记录数据。 六、实验数据： 七、实验结果： 采用前处理方法二（四氯化碳）处理的血红蛋白，相对于前处理方法一（生理盐水）处理的血红蛋白，电泳结果HbA2偏高，HbA1偏低，电泳条带更加聚集。
实验十：血清醋酸纤维薄膜电泳 【实验名称】：血清醋酸纤维薄膜电泳 室温：25° （一）实验目的： 1.学习醋酸纤维薄膜电泳原理。 2.掌握血清醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的技术。 3.熟悉血清蛋白组分定量方法，并确定血清中蛋白与球蛋白的比值。（二）实验原理： 血清绝大多数蛋白质的等电点在pH5.0～7.0。在pH8.6的巴比妥缓冲液中，血清蛋白全部带负电荷，在直流电场中向正电极移动，移动的速度与带电蛋白质颗 粒所带电荷成正比，与蛋白质颗粒的大小成反比。如果样品点在醋酸纤维薄膜的同 一条线上，电泳相同的时间，不同的蛋白质颗粒移动的距离不同，通过染色，薄膜 条上的血清的蛋白质被分离成不同的条带。将此薄膜条透明，可以进行扫描，或将 色带剪下，将颜色洗脱，进行比色，都能获得各色带所含蛋白质占血清总蛋白的百 分比，并可计算血清中清蛋白／球蛋白比值，正常值为1.5～2.5。 （三）实验材料与仪器： 1．实验仪器材料：1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿数只；4、x光片；5、镊子；6、试管六只；7、电泳槽；8、 直流稳压电泳仪；9、7220型分光光度计；10、剪刀 2．实验试剂：1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml蒸馏水中；2、染色液，可反复使用；3、漂洗液：取 乙醇45ml，冰醋酸10ml，混匀；4、浸出液：0.4mol/L NaOH溶液； （四）实验步骤： 1、准备和点样 取一条醋酸纤维薄膜，侵入缓冲液中，完全侵泡后，用镊子轻轻取出，将薄膜 无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液。 用X光片蘸取少量血清，然后轻轻于距离薄膜端1.5cm处接触，样品即成一条 线突于纤维膜上。待血清透入膜内，将薄膜放在电泳槽上。 2、电泳 接通电源，设定电泳电压为100V，通电50min. 3、染色漂洗 电泳完毕后，将薄膜侵泡在染色液中5min～10min.取出，用漂洗液漂至背景 无色。 4、定量 取出六只试管，将漂净的薄膜用滤纸吸干，剪下薄膜上各条蛋白质色带，另取 一条与各区带相近似宽的无蛋白质附着的空白薄膜，分别侵泡于4.0ml 0.4mol/L NaOH 溶液中，然后用7200型分光光度计在650nm处比色，以空白条薄膜洗 出液为空白调零，测定各管的吸光度。 (五) 实验数据记录：
前言 血清蛋白： 血清蛋白是血液中脂肪酸的携带者。当身体需要能量或者需要 建造材料时，脂肪细胞就把脂肪酸释放到血液中 ，脂肪酸被血清蛋 白获取，并被运送到需要的部位。 牛血清白蛋白的相对分子质量为10 的4次方这个级别，它不是一定的，是多聚物，有的地方测的70 000，这就是一个数据了。在做PCR 的时候会用到它。 牛血清蛋白是血液的主要成分，分子量68kD 。等电点4.8。含 氮量16%，含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。 白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二 硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴 离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作 用、PH 缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中， 添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。醋酸纤维薄膜电泳： 、管路敷设技术通过管线不仅可以解决吊顶层配置不规范高中资料试卷问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行 高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。 、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。
血红蛋白电泳及其临床 应用 文件管理序列号：[K8UY-K9IO69-O6M243-OL889-F88688]
血红蛋白电泳及其临床应用 鄢盛恺 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科，北京100730早在60多年前Pauling等（1949）在研究镰状红细胞贫血患者的血红蛋白（hemoglobin，Hb）时就发现其与正常人不同，证实这种异常的Hb在缺氧条件下是产生红细胞镰变和溶血性贫血的原因，并提出了“分子病”这一新概念。引起了人们对Hb结构异常及异常Hb与遗传性贫血之间关系的重视。近年来，由于生化技术和分子生物学技术的不断发展，相继发现和鉴定了许多新型异常的Hb。电泳技术作为分离与鉴定Hb 最简便、准确的方法之一，广泛用于临床遗传性贫血（如地中海贫血）、异常血红蛋白病等疾病的临床诊治。 1 概述 Hb的主要生理功能是将氧气从肺部运送到组织，同时将组织释放的二氧化碳带回到肺部完成氧气和二氧化碳的交换。Hb是由珠蛋白和亚铁血红素连接成的一种结合蛋白质。每一个Hb是由4个多肽链组成，而每一肽链又和一个铁卟啉结合。和血红素连接的珠蛋白是一种组蛋白，每一个珠蛋白分子由4条肽链组成，每一条肽链和一个血红素结合，构成一个Hb单体或称为亚单位。因此，每个Hb分子是由4个Hb单体聚合而成的四聚体。 现在已知人类的红细胞中存在3种正常的Hb，即HbA、HbA2和HbF。从正常Hb中已发现α、β链、γ和δ4种不同肽链。这些Hb由均由一对α链和一对非α链组成。正常成人Hb的非α链称为β链，而胎儿Hb中
的非α链称为γ链。HbA 含量最多，它由两条α链和两条β链组成；HbA2（占3%）由两条α链和两条δ链组成。HbF 正常含量是Hb 的2%，由两条α链和两条γ链组成。 除HbA 、HbA2和HbF 外其他的各种Hb 常被称为异常Hb 。全世界目前已报道的异常Hb 达450余种，而且每年还有新的发现。如美国最常见的两种Hb 变异体是HbS 和HbC ，而Hb Lepore ， HbE ， HbA2 G- philadelphia 等几类很少见。现已证实这些异常Hb 的不同之处不在于亚铁血红素部分，而在于珠蛋白部分化学结构的差异。主要类型有：⑴肽链中氨基酸的顺序略有差异。此类型最为多见，约占90%。如HbS （HbA →HbS 是由于α2β2→α2β2S ），HbC （HbA →HbC 是由于α2β2→α2β2C ）；⑵各肽链的重新组合或某些正常肽链的缺失。如HbH （HbA →HbH 是 由于α2β2→β4） ，Hb Bart’s（HbA →Hb Bart’s 是由于α2γ2→γ4） ；⑶Hb 肽链的融合。如Hb Lepore 是δ链的一半（N 端）与β链的一 端（C 端）融合而成；⑷肽链中氨基酸增多，可在中间嵌入或在C 端延长。等。以前发现的Hb 皆以英文字母命名，由A~Q （B 除外，加上S ）。随着新发现的Hb 越来越多，字母不够用，现规定从Q 以后的字母不能再用以命名，而以发现地或实验室命名。 临床实验室常用的分离和鉴定Hb 的方法有醋酸纤维素薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、柱层析和一些有关的化学试验。地中海贫血是一种常染色体显性遗传病，是我国南方最常见和危害最大的遗传病之一。应用电泳法鉴别患者血液中Hb 的类型及含量对于贫血类型的临床诊断及治疗具有重大意义。全自动电泳分析系统的引进将为临床诊断地中海贫
血红蛋白电泳及其临床应用 鄢盛恺 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科，北京100730 早在60多年前Pauling等（1949）在研究镰状红细胞贫血患者的血红蛋白（hemoglobin，Hb）时就发现其与正常人不同，证实这种异常的Hb在缺氧条件下是产生红细胞镰变和溶血性贫血的原因，并提出了“分子病”这一新概念。引起了人们对Hb结构异常及异常Hb与遗传性贫血之间关系的重视。近年来，由于生化技术和分子生物学技术的不断发展，相继发现和鉴定了许多新型异常的Hb。电泳技术作为分离与鉴定Hb最简便、准确的方法之一，广泛用于临床遗传性贫血（如地中海贫血）、异常血红蛋白病等疾病的临床诊治。 1 概述 Hb的主要生理功能是将氧气从肺部运送到组织，同时将组织释放的二氧化碳带回到肺部完成氧气和二氧化碳的交换。Hb是由珠蛋白和亚铁血红素连接成的一种结合蛋白质。每一个Hb是由4个多肽链组成，而每一肽链又和一个铁卟啉结合。和血红素连接的珠蛋白是一种组蛋白，每一个珠蛋白分子由4条肽链组成，每一条肽链和一个血红素结合，构成一个Hb单体或称为亚单位。因此，每个Hb分子是由4个Hb单体聚合而成的四聚体。 现在已知人类的红细胞中存在3种正常的Hb，即HbA、HbA2和HbF。从正常Hb中已发现α、β链、γ和δ4种不同肽链。这些Hb由均由一对α链和一对非α链组成。正常成人Hb的非α链称为β链，而胎儿Hb中的非α链称为γ链。HbA含量最多，它由两条α链和两条β链组成；HbA2（占3%）由两条α链和两条δ链组成。HbF正常含量是Hb的2%，由两条α链和两条γ链组成。 除HbA、HbA2和HbF外其他的各种Hb常被称为异常Hb。全世界目前已报道的异常Hb达450余种，而且每年还有新的发现。如美国最常见的两种Hb变异体是HbS和HbC，而Hb Lepore，HbE，HbA2 G-philadelphia等几类很少见。现已证实这些异常Hb的不同之处不在于亚铁血红素部分，而在于珠蛋白部分化学结构的差异。主要类型有：⑴肽链中氨基酸的顺序略有差异。此类型最为多见，约占90%。如HbS（HbA→HbS是由于α2β2→α2β2S），HbC（HbA→HbC是由于α2β2→α2β2C）；⑵各肽链的重新组合或某些正常肽链的缺失。如HbH（HbA→HbH是由于α2β2→β4），Hb Bart’s（HbA→Hb Bart’s 是由于α2γ2→γ4）；⑶Hb肽链的融合。如Hb Lepore是δ链的一半（N端）与β链的一端（C端）融合而成；⑷肽链中氨基酸增多，可在中间嵌入或在C端延长。等。以前发现的Hb皆以英文字母命名，由A~Q（B除外，加上S）。随着新发现的Hb越来越多，字母不够用，现规定从Q以后的字母不能再用以命名，而以发现地或实验室命名。 临床实验室常用的分离和鉴定Hb的方法有醋酸纤维素薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、柱层析和一些有关的化学试验。地中海贫血是一种常染色体显性遗传病，是我国南方最常见和危害最大的遗传病之一。应用电泳法鉴别患者血液中Hb的类型及含量对于贫血类型的临床诊断及治疗具有重大意义。全自动电泳分析系统的引进将为临床诊断地中海贫血及异常Hb病提供准确的实验室方法和依据。近年来分子生物学技术已用于因异常Hb引起的遗传性疾病的基因诊断中。 I-1 2 Hb电泳 2.1 原理Hb的分离和鉴定方法很多，其中以电泳法最为常用且最为重要，很多异常Hb都是首先用电泳法发现的。其原理是Hb中的珠蛋白和其他蛋白质一样为两性电解质，在不同的缓冲液中可带正或负电荷，在电场中向阴极或阳极移动。由于不同的蛋白质之间（正
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告 前言 血清蛋白: 血清蛋白是血液中脂肪酸的载体当身体需要能量或建筑材料时，脂肪细胞将脂肪酸释放到血液中，脂肪酸被血清蛋白捕获并运送到所需的位置 牛血清白蛋白的相对分子质量是10的四次方，这是不确定的，但是是一种聚合物，并且在一些地方测量到70，000，这是一个数据。它将用于聚合酶链反应 牛血清蛋白是血液的主要成分，分子量为68kD。等电点4.8氮含量16%，糖含量0.08%只含有己糖和己糖胺，脂肪含量仅为0.2%白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸残基形成17个二硫键，在肽链的第34位有一个游离巯基白蛋白可以与各种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合血液中的白蛋白主要起维持渗透压、缓冲液、载体和营养的作用。在动物细胞的无血清培养中，白蛋白的加入可以起到生理和机械的保护作用和载体作用。 醋酸纤维素薄膜电泳: 醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为载体它是纤维素的乙酸酯，由纤维素的羟基乙酰化而成。它溶解在有机溶液如丙酮中，并可被涂覆成厚度为0.1毫米-0.15毫米的均匀微孔膜太稠，吸水性差，分离效果差；如果它太薄，如果它缺乏应有的机械强度，膜就会变脆。
醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、廉价。它已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖白蛋白、甲胎蛋白、类固醇激素和同工酶等的分离和分析。虽然其分辨率低于聚丙烯酰胺凝胶电泳，但具有简单、快速的优点。功能: 1。(1)醋酸纤维素膜对蛋白质样品的吸附很少，没有“拖尾”现象。染色后，背景可以完全脱色，各种蛋白染色带可以清晰分离，提高了测定的准确性。 (2)快速节省时间醋酸纤维素膜的亲水性比滤纸差，膜中含有的缓冲溶液少，电渗少，电泳时大部分电流由样品传导，分离速度快，电泳时间短。一般来说，电泳时间只有45-60分钟。染色和脱色后，整个电泳过程只需约90分钟。 (3)灵敏度高，样品消耗少。血清蛋白仅需要2μl血清，即使样品体积小至0.1μl，对于仅含5μg蛋白的样品也可获得清晰的分离带。临床医学检查用它来检测病理条件下微量异常蛋白的变化。(4)应用广泛有些蛋白质不容易用纸电泳分离，如胎儿α球蛋白、溶菌酶、胰岛素、组蛋白等。醋酸纤维素膜电泳可以更好地分离。(5)电泳染色后，醋酸纤维素膜可浸泡在冰醋酸、乙醇混合溶液或其他溶液中，形成透明的干板，有利于扫描定量和长期保存。2.与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，醋酸纤维素薄膜电泳操作简单，但分离效果不是很好。例如，在醋酸纤维素薄膜电泳中，只有5-6条带能与白蛋白分离，而在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，只有10条带能与白蛋白分离。 1。实验目的
全自动电泳系统检测血红蛋白结果分析 目的了解本市区血红蛋白病的类型及阳性发生率。方法采用全自动蛋白电泳仪分析系统对12480 份患者标本进行测定分析。其中阳性结果再进行基因检测。结果在12480例患者中发现1460例，阳性发生率11.7%，其中α-地中海贫血表型阳性454例，阳性率3.2%，β地中海贫血表型阳性817例阳性率5.6%，异常血红蛋白病189例，阳性率1.3%。结论血红蛋白电泳技术的普及和应用，能有效地筛查出高危患者，对进一步进行基因诊断和遗传咨询提供帮助。 标签：血红蛋白电泳；地中海贫血；血红蛋白病血红蛋白电泳在异常血红蛋白病的检出和珠蛋白合成障碍性贫血的实验室诊断中有非常重要的作用，依据定量测出HbA1、HbA2，HbF含量，将地中海贫血进行初步分类为α地中海贫血简称α地贫或β地中海贫血简称β地贫，及异常血红蛋白病；而地中海贫血是我国南方地区最常见的遗传病之一，也是全世界最常见的遗传病之一[1]，我国高发区以南方为主，尤其广东，广西，云南，贵州等省份，我市处于广西地域，为了解血红蛋白病的检出情况，对2012年1月~2013年8月12480例血红蛋白电泳结果分析如下。 1资料与方法 1.1一般资料12480份送检标本来源于2010 年8 月～2013 年10月我院门诊与住院患者，年龄2～65岁，其中男性标本5663份，女性标本6817份。 1.2方法 1.2.1标本要求与处理血红蛋白液（Hb）制备：采集枸橼酸钠抗凝血标本2 mL，抗凝剂与血液之比1∶9，标本离心(5 000 转/ min) 5 min，去除血浆，用10 倍生理盐水冼涤红细胞3次，后取红细胞50μl 加溶血素250 μL震荡混匀室温放置5 min后即可。 1.2.2血红蛋白电泳，采用Microtech 696PC(蓝钻) 全自动蛋白电泳仪分析系统，操作过程包括：取待测（Hb）液，点样，电泳。变性、染色、脱色，烘干，自动扫描定量测出结果。 1.2.3正常参考值成人男女HbA2为1.5%～3.5%，并且没有出现异常血红蛋白区带。如HbA23.5%或出现异常血红蛋带(HbF>3.5%)，则判为β地中海贫血表型阳性。如出现HbE、HbG 区带为其它血红蛋白病。 1.3采用统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行统计分析 2结果 根椐上述阳性判定标准：血红蛋白电泳对12480 例送检标本筛查出α、β地
碱性血红蛋白电泳说明书意大利Interlab公司 Via Rina Manti,26-00155 Roma +39-06-227.54.350
用途： 此碱性血红蛋白电泳试剂的包装是用于696PC系统的电泳试剂，此试剂可对人类的正常血红蛋白如H-A,H-A2和H-F通过琼脂糖凝胶的方法进行定性和定量的分离，以及可检测出异常的血红蛋白如S,C,D,E等 概述 血红蛋白合成受遗传基因的控制，并且异常血红蛋白的出现会引起红细胞形态和功能的变性。 血红蛋白是由珠蛋白肽链和含有铁的原卟啉组成。 正常的血红蛋白结构相似，分子量在67000道尔顿左右，由两对珠蛋白肽链和1个亚铁血红素组成。 HbA: 多肽链 2α和2β HbA2: 多肽链 2α和2δ HbF: 多肽链 2α和2γ 正常成人血红蛋白中，HbA占总蛋白浓度的98％，HbA2和HbF相对数量少些。 珠蛋白肽链中某一氨基酸被其他氨基酸所取代会导致Hb变异即可出现血红蛋白病。目前可鉴定出600多种变异的血红蛋白即结构变异的血红蛋白（S 、C、 E、 D、G、 H、 I 、Lepore等）。在异常的血红蛋白中约有60％血红蛋白会有电荷差异，这样可用电泳的方法对这些血红蛋白进行鉴定。HbC和HbS是两种常见的变异的血红蛋白。HbA伴随有S,C,E等变异的血红蛋白出现称为杂合子血红蛋白病如AS或AC等。 只有一种变异的血红蛋白的出现称其为纯合子血红蛋白病如HbS病、HbC病等。这些变异的血红蛋白一般可导致地中海贫血。纯合子型血红蛋白病可引起一系列的临床症状。 碱性血红蛋白电泳主要用于分离正常血红蛋白如HbA、HbA2和异常或变异的血红蛋白（HbS、“快速”血红蛋白和D、C、E）。然而，在碱性Hb电泳中，一些正常的和异常的血红蛋白有相同的迁移率即这些蛋白质在同一位点（如HbA2与HbC，HbS与HbD）琼脂糖酸性血红蛋白电泳可确定HbS或HbC。 原理： 根据蛋白质亚结构的电荷分布，在一定的PH值条件下，蛋白质分子可表现出有极性或非极性。 在琼脂糖凝胶电泳中，蛋白质分子根据分子量和等电点的不同而被分离出来。 电泳结束后，用氨基黑染料染色，可看到电泳结果。 警告: 此包装仅用于体外诊断 操作仪器 Interlab碱性血红蛋白电泳的试剂包装，货号为SRE604K在Microtech696PC仪器下可实现全自动分析。 试剂： 请参照使用者手册和手册中的图表来进行试验前的准备
血红蛋白电泳操作规程 一．项目名称 血红蛋白电泳（HYDRAGEL HEMOGLOBIN） 二．检验方法名称 琼脂糖凝胶区带电泳 三．方法学原理 血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同，这还与pH、电泳缓冲液的离子强度等有关。血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。实验使用洗涤过红细胞的溶血液来进行，在碱性的凝胶片上进行电泳来分离血红蛋白，分离出来的片段通过氨基黑染色剂来显色，烘干后的凝胶片就可以用来解释结果了。 四．方法学溯源 自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。 五．仪器 （一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210) （二）分析和计算参数： 1．处理量：约45个样本/小时 2．所需样本量：10ul 3．检验时间：约半小时 4．重复性：有良好的批内和批间重复性 5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V） 电流0－500mA 功率0－100W 六．试剂及配套品 （一）试剂 1．HYDRAGEL 7 HEMOGLOBIN（E）试剂盒 HYDRAGEL 15 HEMOGLOBIN（E）试剂盒 （1）商标：SEBIA （2）包装规格：70测试/150测试 （3）货号：PN4106/ PN4126 2．脱色液 （1）商标：SEBIA （2）包装规格：Pack for 10×100ml （3）货号：PN4540
Interlab碱性血红蛋白电泳操作规程 （供SRE157K、SRE205K、SRE143K、SRE176K、SRE188K参考） （英国） 用途 Interlab碱性血红蛋白电泳试验系统采取聚酯薄膜?上的醋酸纤维素，用于正常与异常或变异血红蛋白（variant hemoglobin）的定性和半定量测定。本电泳试验在碱性pH条件下进行，并为血红蛋白图谱提供有价值的扫描方法。试剂盒结合自动化仪器Microtech 672PC、Microtech 648ISO、Microtech 648PC、及Genio 一起使用。 概述 血红蛋白（也写成Hb）是在红细胞中发现的一种蛋白质，其主要作用是运输氧气(O2)和二氧化碳(CO2）。血红蛋白从肺获得氧气形成氧合血红蛋白，氧合血红蛋白在组织和器官中释放氧气并结合二氧化碳。结合了二氧化碳的血红蛋白称为碳酸血红蛋白，并将二氧化碳运送到肺。 在正常成人红细胞中存在3种类型的血红蛋白，HbA是主要类型，还有少量HbA2与HbF。 碱性pH醋酸纤维素电泳对分离正常与变异血红蛋白是简单、有效的方法，这种电泳方法也用于不同类型血红蛋白异常(Hemoglobin anomalies)的定性鉴定和定量测定。 已鉴定的人类变异血红蛋白已达400多种，这些异常血红蛋白大约1/4可以通过诸如碱性或酸性缓冲液电泳的分类分析方法予以鉴别，其他类型血红蛋白的研究需要高精细的实验室技术。血红蛋白病(Hemoglobinopathies)和地中海贫血(thalassemia）包含大量导致不同类型血红蛋白正常浓度显著失衡的血红蛋白结构定性改变(modificative)或定量变异(variations)的遗传性疾病。 最常见的2种变异血红蛋白(mutant hemoglobin)为HbS和HbC。Hb Lepore、HbE、HbG-Philadelphia、HbE-Los Angeles及HbO-Arab较少见。 原理 正常和变异血红蛋白呈现不同的电泳迁移率，因此，可通过醋酸纤维素电泳条带加以区分。正常成人血红蛋白图谱仅显示生理血红蛋白类型，包括HbA、HbF及HbA2，其浓度在正常范围内（见参考范围表）。 血红蛋白异常的主要临床重要性在于不同类型血红蛋白定性鉴定和定量测定显著不同。异常带的检出预示血样中存在变异血红蛋白(variant hemoglobin）。 警告：本试剂盒仅用于体外诊断。 样品采集与处理 按实验室规程采集全血样品，并符合优良实验室规范(GLP)指南。全血样品