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光合细菌

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光合细菌

光合细菌(Photosynthetic bacteria,简称PSB)是具有原始光能合成体系的原核生物的总称,它广泛存在于自然界的水田、湖泊、江河、海洋、活性污泥及土壤内,是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。

第一节光合细菌的生物学和营养价值

一、光合细菌的生物学

光合细菌包括产氧光合细菌(蓝细菌)和不产氧光合细菌两大部分,在实际中应用的大部分是不产氧型光合细菌。不产氧光合细菌包括紫细菌、绿细菌和日光杆菌属、红色杆菌属等总共 27个属 66个种。不产氧光合细菌是代谢类型复杂、生理功能最为广泛的微生物类群。各种光合细菌获取能量和利用有机质的能力不同,它们的代谢途径随环境变化可以发生改变。光合细菌从营养类型看包括光能自养型、光能异养型及兼性营养类型;从呼吸类型看包括好氧、厌氧和兼性厌氧型。

光合细菌是革兰氏阴性菌,在10~45℃范围内均可生长繁殖,最佳温度在30~40℃。绝大多数光合细菌的最佳pH值范围在7~8.5之间。钠、钾、钙、钴、镁和铁等是光合细菌生理代谢中的必需元素。

二、光合细菌的营养价值

光合细菌的菌体无毒,营养丰富,蛋白质含量高达65%,而且氨基酸组成齐全,含有机体需要的8种必需氨基酸,各种氨基酸的比例也比较合理。PSB还含有丰富的B族维生素,尤其是B12、叶酸、生物素的含量相当高是啤酒酵母和小球藻的20到60多倍。PSB 菌体内含有较高浓度的类胡萝素,而且种类繁多,迄今已从光合细菌中分离出80种以上的类胡萝卜素。除此之外,细胞内还含有碳素储存物质糖原和聚β一羟基丁酸、辅酶Q、抗病毒物质和生长促进因子,具有很高的营养价值。

光合细菌在虾、贝类的幼体培育中应用非常广泛,其一方面能净化水质,改善幼体的环境条件,另一方面作为饵料被幼体摄食(贝类幼体相对虾幼体的蚤状阶段都能直接摄食光合细菌),对促进幼体生长、变态和提高成活率有明显效果。

第二节光合细菌的培养方法

一、培养方式

光合细菌的大量培养通常采用全封闭式厌气光照培养和开放式微气光照培养两种方式。

(一)全封闭式厌气光照培养

全封闭式厌气光照培养是采用无色透明的玻璃容器或塑料薄膜袋,消毒后装入消毒好的培养液,接入20%~50%的菌种母液,使整个容器均被液体充满,加盖(或扎紧接口),

造成厌气的培养环境,置于有阳光的地方或用人工光源进行培养,定时搅动,在适宜的温度下,一般经过5~10天的培养,即可达到指数生长期高峰,此时可采收或进一步扩大培养。

(二)开放式微气光照培养

开放式微气光照培养一般采用容量为l00~200升的塑料桶为培养容器。在桶底部装一气石,培养时微充气、使桶内的光合细菌呈上下缓慢翻动。在桶的正上方距捅面30厘米左有装一有罩的白炽灯泡,使被面照度达2000 lx左右。培养前先把容器消毒,加入消毒好的培养液,接入20%~50%的菌种母液,照明,微充气培养。在适宜的温度下,一般经7~10天的培养,即可达到指数生长期高峰,此时,进行采收或近一步扩大培养。

两种培养方式相比,以厌气培养方式较为理想,微气培养方式虽然设备比较简单,易于大量培养,但杂菌污染程度大,培养达到的菌细胞密度低。

二、菌种分离、保藏

培养光合细菌首先要有菌种。目前,应用于水产养殖业的光合细菌,主要是红螺菌科即紫色非硫细菌中的一些种类。它们共同的特征是具鞭毛,能运动,不产生气泡,细胞内不积累硫磺。光合细菌分离成功的关键在于选择适宜的富集、分离培养基,和提供适于光合细菌生长需要的厌气环境及适宜的温度、光照条件。

(一)采样

红螺菌科细菌可用有机物作为光合作用的供氢体兼碳源,广泛分布在被有机物污染的地方,如河底、湖底、海底、水田、沟渠和污水塘的泥土以及豆制品厂、淀粉厂和食品工业

等废水排水沟处呈橙黄色或粉红色的泥土中。浅水处直接用杯舀取少量泥土作样品,深水处借用采水器和采泥器采样。

(二)富集培养

富集培养均采用液体培养基。将采回的样品(土壤或水)装入玻璃圆筒或大型试管或具塞的磨口玻璃瓶中,倒入配制好的培养液,充分搅拌。为造成厌气环境,在玻璃圆筒或大型

试管中加入液体石蜡以隔断空气。然后在温度为25~35℃,光照为5000~10000 lx的条件下进行富集培养,经过2~8周的培养,在玻璃瓶壁上出现光合细菌菌落,或整个培养液长成红色。如果培养的光合细菌是海水种,因其生长缓慢则需要更长的富集时间。

如果富集培养初步获得成功,就用吸管插入菌液中或光合细菌大量繁殖的泥层中,将菌液吸入具塞的磨口玻璃瓶中,加入培养液继续进行光照;厌气培养。反复多次后,光合细菌

压倒其他细菌而占绝对优势,培养液吴深红色.这时富集培养成功。为了避免培养液中藻类和绿杆菌科细菌的生长繁殖,可用滤光片,使波长为800nm或更长波长的光透过,可以更有效地达到富集紫色非硫细菌的目的。

此外,培养紫色非硫细菌时,用含氯化物的培养基比用合硫酸盐的培养基效果好。

(三)分离方法

富集培养成功后可进行分离培养。淡水生长的紫色非硫细菌生长速度较快,在1周左右移植比较合适,而海水生长的紫色非硫细菌生长速度较慢,培养3周以上才能移植。先配制固体培养基,灭菌后浇成平板。将富集培养成功的菌液适当稀释,在平板划线,然后在厌气、光照条件下培养。培养温度为25~35℃,光照为2000~3000 lx,培养2~7天左右,就能长出光合细菌菌落。仔细挑取单菌落,继续用上述方法分离培养。反复多次,便能得到紫色非硫细菌的纯培养物。

三、培养方法

光合细菌的培养,按次序分为容器、工具的消毒,培养基的制备,接种和培养管理四个步骤。

(一)容器、工具的消毒

参考微藻培养方法部分,此处从略。

(二)培养基的制备

1.培养用水

如果培养的光合细菌是淡水种,菌种培养可用蒸馏水,生产培养可用消毒的自来水(或井水)配制。如果培养的光合细菌是海水种,则用天然海水配制培养基,注意在海水中加入磷元素时,不能用磷酸氢二钾,应用磷酸二氢钾,不然会产生大量沉淀。

2.灭菌和消毒

菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸气灭菌锅灭菌。小型生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅或大型三角烧瓶煮沸消毒。大型生产性培养则把经沉淀砂滤后的水用漂白粉(或漂白液)消毒后使用(具体方法参考微藻培养方法部分)。

3.培养基配制

根据所培养种类的营养需要选择合适的培养基配方。按培养基配方把所需物质称量,逐一溶解,混合,配成培养基。也可先配成母液,使用时按比例加入一定的量即可。

(三)接种

培养基配好后,应立即进行接种。光合细菌生产性培养的按种量比较高,一般为20%~50%,即菌种母液量和新配培养液虽之比为1∶4~1∶1,不应低于20%,尤其是微气培养,接种量更应高些,否则光合细菌在培养液中很难占绝对优势,影响培养的最终产量和质量。

(四)培养管理

光合细菌的培养过程中,管理工作包括日常管理操作和测试,生长情况的观察、检查以及出现问题的分析处理等三个方面。

1.日常管理和测试

(1)搅拌和充气:光合细菌培养过程中必须充气或搅拌,作用是帮助沉淀的光合细菌上浮获得光照,保持菌细胞的良好生长。

小型厌气培养常用人工摇动培养容器的方法使菌细胞上浮,每天至少摇动三次,定时进行。大型厌气培养则用机械搅拌器或使用小水泵使水缓慢循环运转,保持菌体悬浮。微气培养是通过充气帮助菌体上浮,因为培养液中溶解氧含量增加,光合细菌繁殖受到抑制,产量下降,所以必须严格控制充气量。一般采用定时断续充气,充气量控制在1~1.5升/(升•h)之间,溶解氧量保持在1×10-6以下。

(2)调节光照度:培养光合细菌需要连续进行照明。在日常管理工作中,应根据需要经常调整光照度。白天可利用太阳光培养,晚上则需要人工光源照明,或完全利用人工光源培养。人工光源一般使用碘钨灯或白炽灯泡。不同的培养方式所要求的光照强度有所不同。一般培养光照强度应控制在2000~5000 lx之间。如果光合细菌生长繁殖快,细胞密度高,则光照强度应提高到5000~10000 lx。光照强度可通过调整培养容器与光源的距离或使用可控电源箱调节。

(3)调节温度:光合细菌对温度的适应范围很广,一船在23~39℃的范围内均能正常生长繁殖,可不必调整温度。在常温下培养也可通过调整,将温度控制在光合细菌生长繁殖最适宜的范围内,使光合细菌更好地生长。

(4)酸碱度的测定和调整:在培养光合细菌的过程中,必须注意酸碱度的变化。由于光合细菌的大量繁殖,菌液的pH值上升,这意味着光合细菌正处于指数生长期。但当pH值超过最适范围甚至生长的适应范围时,光合细菌的生长达到顶点,随后生长下降。如果能及时调整菌液的酸碱度,使pH值保持在最适范围,则光合细菌能继续生长繁殖。为了延长光合细菌的指数生长期,提高培养基的利用率和单位水体的产量,测定和调整PH值是非常重要的。一船采用加酸的办法来降低菌液的酸碱度,醋酸、乳酸和盐酸

部可使用,最常用的是醋酸。

在日常的管理工作中,必须每天或隔天测定菌液的pH值,当pH值上升超出最适范围,即加酸调整。如果在培养过程中不测定、调整酸碱度,当光合细菌的生长达到一定密度后pH值也上升到9以上,细菌生长受阻,此时应采收或再扩大培养。在培养过程中不调整PH值,获得的最终产量低。

2.生长情况的观察和检查

光合细菌生长情况的好坏是培养成败的标准。在培养过程中,可以通过观察菌液的颜色及其变化来了解光合细菌生长繁殖的大体情况,菌液的颜色是否正常,接种后颜色是否由浅变深,均反映光合细菌是否正常生长繁殖以及繁殖速度的快慢。必要时可通过显微镜检查,了解情况。

3.问题的分析和处理

通过日常管理、检测、检查,了解光合细菌的生长情况,就可以结合当时环境条件的变化进行分析,找出影响光合细菌生长繁殖的原因,采取相应的措施。影响光合细菌生长的原因很多,内因是菌种是否优良,外因是光照、温度、营养、敌害和厌气程度等。温度、光照和pH值都能影响着光合细菌的生长,而且温度、光照和pH值之间是互相制约的,温度与光照的强弱是对立统一的,所以光合细菌生长的最适条件应是互应的,即温度高,光照应弱;温度低,光照应强。如果是温度高,光照强,pH值就会迅速升高,培养基产生沉淀,抑制光台细菌的生长;如果温度低,光照弱,光合细菌得不到最佳能源,生长速度也慢。经试验得出光合细菌生长的最适条件是:①温度15~20℃时,光照30000~50000 lx,培养基pH值为7.0;②温度25~30℃时,光照为3000~5000 lx,培养基的pH值为7.0。

光合细菌在水产养殖中的应用技术

一、光合细菌在水产养殖中的应用:PSB是生物制品,无毒无副作用,无耐药性,无污染,并且能降解鱼药的污染,是优良的水产环境改良剂和饲料添加剂。用于水产养殖方面在我国才是近两年的事,由于最早使用PSB的用户因此取得了很好的效果和较大的经济效益,所以目前它倍受水产养殖场的推崇,那么PSB在水产养殖中究竟能起什么作用呢?

1、净化水质由于高密度水产养殖的水体中含有大量的鱼类粪便和残饵,以及鱼药的残留物,它们腐败后产生的氨态氮、硫化氢和一些有害物质,直接污染水体和底泥。轻度污染可造成鱼类生活不适,饵料系数增高,生长缓慢,积累到一定程度后,可使水体底部缺氧的情况下,PSB能有效地将氨态氮、硫化氢等有害物质吸收,组成菌体本身,同时,形成优势群落后,鱼类中毒甚至死亡。水体的富营养化亦可滋生大量的病原微生物,使鱼类感染发病。施用PSB后,在还能抑制其它病原菌的生长,从而达到净化水质,使鱼类健康生长的目的。

2、维护水体微生态平衡

水产养殖场的水体中存在着各种各样的微生物,有些是有益的,有些是有害的;也有些是处于中间状态的叫“条件致病微生物”,即正常情况下,这类微生物不致病,遇水质污染,鱼类免疫功能下降时,它们便大量繁殖危害鱼类。

通常人们采用消毒杀菌剂来控制,但随着施用次数的增加,病原微生物的耐药性也相应地增强,为了达到预防和治疗的效果,每次施用的剂量不得不逐渐加大,这不仅增加了用药成本,而且还污染了水体,造成水产品质量下降,甚至不能食用。宜春专利中心提供光合细菌发生剂。

如何控制病原微生物的生长繁殖,又不使其不产生抗药性,不污染水体呢?答案是现成的,用光合细菌预防鱼病,完全可克服消毒杀菌剂的缺点,它不仅可降解或清除水体中包括鱼药在内的有害化学物质,占绝对优势的光合细菌还可与病原微生物争夺营养、空间,使其无法进行大量生长繁殖,同时还不存在耐药性,从而不易形成致病的环境条件,鱼类也就不易发病。鱼类的病害防治原则是:防重于治。只有在日常的渔业生产中,维持水体中微生态系统平衡,使有益微生物始终点绝对优势,尽量不给病原微生物有大量生长繁殖的机会,才是健康养殖的出路之一,如果平时不有效地预防,到了出现症状再去治疗,包括鱼药成本在内的重大生产损失将是不可避免的。

3、培养蜉蝣动物作饵料。PSB的菌体细胞营养很丰富,这正好是蜉蝣动物的优质饵料,实践证明,水体中的PSB越多,蜉蝣动物生长也就越旺盛,以蜉蝣动物为食的鱼类增产效果也就越明显。

4、作为饲料添加剂PSB的菌体细胞营养丰富,并含有大量的生理活性物质,可直接拌入饲料中投喂,除增加营养,降低饲料系数外,还可起到刺激动物免疫系统,增强消化和抗病能力,促进生长的作用。

5、间接增氧作用 PSB生长繁殖时,不需要氧气,也不释放氧气,它是通过吸收水体中的耗氧因子,而产生了间接地增加氧气的作用。而这种作用也是非常明显的。

光合细菌培育生产技术

光合细菌,是地球上最古老的具有原始光能合成体系的原核生物,是在厌氧条件下进行光合作用且不产生氧气

的一类细菌的总称,这是与绿色植物、藻类及其他光合作用生物的不同之处。光合细菌广泛分布于沼泽、池塘、湖泊、河流、水沟、海洋及土壤中,忍耐高温、高盐及低温、低盐的能力特别强,甚至在90℃高温的温泉中,在含30%盐分的盐湖里,在深达2000米的深海里,在南极冰封的海岸上,都能找到光合细菌的踪迹。

光合细菌的应用性研究和生产性研究已有三四十年的历史。日本研究得较早,20世纪60年代,日本科学家观测了高浓度的粪便污水自然放置时菌数的变化,首先揭示了自然界的有机污水是通过微生物的生态学演替而被净化的。经过进一步的研究,又发现了光合细菌的菌体对家禽、家畜及鱼、虾、蟹、贝的幼体具有明显的促进生长和提高成活率的作用,从而为光合细菌菌体的综合利用开拓了新的领域。以后星野八洲雄(1976年)、小林正泰(1981年)、小川静夫(1985年)等人对光合细菌进行了多方面的研究。我国对光合细菌的研究起步较晚,最初仅限于菌种的分离和用于高浓度污水处理,后来许多专业人员又进行了其他方面的应用研究,取得了大量的成果。1987年上海水产大学张道南等人将其应用到虾类育苗上,结果试验组较对照组成活率提高了19.3%,变态率提高了18.5%。现在,光合细菌作为一种具有特殊营养、促生长、抗病因子和高效率净化养殖污水及对环境和水产动物无毒无害的特殊细菌而受到了人们的普遍重视与喜爱。因此,它在水产养殖、畜禽养殖及水处理有关的领域中被广泛应用。

光合细菌主要用于海水养殖、淡水养殖、以及家禽,蛋禽饲养,农作物抗病增产等。其中主要以水产养殖的效果尤为突出,是一种无公害,生态绿色产品,近年来得到了国家科委和农业部的重视。国家计委,经贸委最近发布了《当前国家重点鼓励发展的产业,产品和技术目录》中,在畜牧水产中就包括了“水产养殖中的生态养殖”这一项。

一、水产养殖中原来传统的消毒杀菌方法利少弊多。如用生石灰消毒,生石灰含氯、产酸、产硫、影响有机质分解。用漂白粉,水温越高效果越差,PH越高效果越差。用高锰酸钾,如在碱性及微酸性环境下使用,二氧化锰褐色沉淀易沉积,对鱼虾鳃部有影响,易发生呼吸道感染。总之,使用化学药物杀菌消毒,对鱼虾生长和发育均有影响,对防病抗病效果并不佳,同时有害细菌也会产生抗药性,使化学药物的杀菌效果越来越不理想,也越来越难治理。

二、光合细菌在水产中的作用:光合细菌是有益细菌,具有促进动物消化吸收,刺激生长发育,提高免疫功能,抑制各种病菌浸入的特效。光合细菌对改善水质有奇效,将光合细菌撒入污染严重的池塘中,一般在3小时后,水质开始转清,第二天去看,与周围没撒光合细菌的池塘相比,水质有天壤之别,一看便知。若鱼病很严重,每天均有死鱼浮面的话,则用了光合细菌后,第二天去看,浮面的死鱼显著减少,直到消失,与周围形成鲜明对比。用了光合细菌,还可有效地帮助鱼虾安全越冬,冬季不但不减产,反而有增产。用了光合细菌的水产品,颜色鲜艳,个体整齐,鱼肉鲜嫩!用光合细菌稀释10倍后,对鱼虾进行药浴,可使鱼虾成活率达到90%以上,发粘细菌病、烂鳃病、打印病、成活率达 60~100%,水霉病、赤鳍病、擦伤病成活率达近100%,比其它化学药物相比,更加安全可靠,无任何药浴副作用。用了光合细菌一般亩产提高15-23%,饵料系数下降18-23%,成活率提高20-60%,个体增重15%,投入产出比达1:10以上。每亩增效益达800元以上。

三、在肉禽蛋禽中的应用:在禽类的饮水中加入光合细菌2%。对蛋禽而言,可降低死亡率12-32%,提高增重率20%左右,提高了抗病力,免疫力。提高产蛋率4-15%,降低碎壳蛋的数量5-15%,提高蛋品哈氏单位3%,达到82.22以上,提高蛋黄色度8%,用罗氏比色扇法测定蛋黄色度可达8.33。对肉鸡,可提高增重12.3%,提高饲料报酬25%,成活率提高5%,经济效益对比提高50%。同时,可显著降低肉蛋产品中的兽药残留,改善品质,避免出口的绿色检疫关贸壁垒。

四、在农作物生产中的应用:施用光合细菌的农作物土壤中,比施用无机氮肥,更明显地促进土壤细菌、放线菌的增殖,其次促进真菌、固氮菌及光合菌的增殖,从而增加了土壤肥力,更有效地分解和利用土壤有机质,加强土壤中有机质和氮素转化,提高供氮磷能力。

光合细菌对农作物有提高作物抗病毒能力,每亩喷施光合细菌1.5公斤(间隔20天),可增产10%以上。

目前,光合细菌的生产技术的技术转让价非常高,转让费从8000元到10万元不等,如天津市农业科学院的技术转让费就为10万元。那么,光合细菌的生产技术很难吗?不难!我们向大家传授的生产技术就像生产培育EM一样简单,其产品质量完全可以与工厂生产的光合细菌不分上下!这项技术是我们花费巨大的财力和精力经长时间才完成。今天,我们将毫无保留地免费传授给你。

一、光合细菌的配方营养元素的全面和合理的搭配,是光合细菌生长条件的关键所在,配方为:①1、七水硫酸镁0.5克,磷酸氢二钾0.5克,蛋白胨5克,甘油5克,硫酸铁微量,水1000毫升;②硫酸镁0.5克,磷酸氢二钾1克,硫酸亚铁0.5克,硫酸铵6克,蛋白胨4克,1公斤水。(以上原材料在市以上化学原料店有售,小型试验可以到化学试剂店购买)

二、光合细菌生长所需环境条件:有了营养全面的配方,还必须有一个良好的培养环境条件,才能生产出优质产品出来。PSB所需的环境条件有以下几个: 1:培养介质,含杂菌较少的清洁淡水。最好用地下水,硬度低的水更好,选取水源时,最好先做几种水源的对比试验,使用哪里的水源在培养试验中最先变成红色(生长良好),就选用哪里的水作为生产用水。 2:酸碱度,PH值在8~8.5为最好,光合细菌的适应PH范围在6~10之间。 3:温度,以28~~36℃为最适生长温度,其适应的生长温度范围为15~41℃。 4:光照强度,以3000~4000勒克斯(LX)为最佳,即每25公斤菌液需要用相当于60-100瓦的白炽灯作光源,而太阳光照为最好且不要成本。

三、光合细菌生产的操作程序及要点

1:选择容器:少量生产可用透明度较高的白色或透明塑料桶、玻璃容器。大量生产可用水泥池、水泥船,也可临时开挖土池,垫上双层塑料膜防漏防浑浊,培养液的深度为40公分最佳。

2:选择水源地下水为最佳水源,清洁的地表水,海水等也可使用,含氯量高的自来水要充分曝气或添加适量硫代硫酸钠中和后亦可利用,蒸馏水及纯净水固然最好,但成本肯定不行。

3:操作方法①第一种生产方法:用白色或透明塑料桶装入清洁淡水, 将上述原料溶解入水中。选择颜色鲜紫红色,浓度在30亿/毫升的光合细菌成品为菌种,取2.5公斤加入到上述培养液中,即菌种:培养液比例=1:10。也即10%的接种量,这是大规模培养必须的接种量,接种量低于10%,则培养的时间长,杂菌多,品质欠佳,故接种量应宜多不宜少。(小规模以饮料瓶为容器的生产中,接种量为1%也能达到较好的培养效果,三天可培养成熟,但即使是小规模生产,接种量最好大一点为好,如可用2~5%)将接种后的培养液,进行光照培养,如果用白炽灯作为光源,应选用60瓦的灯,(小规模生产中以40瓦的即可),将灯泡悬于液面上约10~20公分处,每桶一只灯。如果用太阳作为光源,则只要将桶放于太阳下即可。每天搅拌(摇动)1~2次,使之受光均匀。

在光照的同时,应保持培养液的最佳温度,才能缩短培养时间,取得高产。光合细菌生长和繁殖的最佳温度为28~36度,夏季我国大部分地区自然温度都可达到这个最适温度,不必采取任何措施增温,倒是要注意降温。而在冬、春、秋三季,自然温度较低,达不到最适温度,必须采取一定的增温措施,例如在阳光下搭建透明塑料膜温棚就是一个好办法,它即采光又增温,同时又节约能源成本。冬季温度过低,则应加温到最适温度。夏季气温过高,若用太阳作为光照能源,则应采取部分遮阳(用黑色的遮阳塑料网),通风的降温措施,以防光合细菌快速老化死亡。

光照和温度都适宜后,就进入了培养阶段,每天的颜色、气味、PH、透光度和漂浮物都有不同程度的变化,通过这些变化可以判别光合细菌的生长情况,如下:第一天,前3~5个小时,菌种开始适应培养液,吸水和营养物,细胞膨胀,将要分裂繁殖,液体无大多变化,24小时时,培养液的红色度加深,有臭味产生(光合细菌为臭味的气味,为正常气味),透光度降低,PH值有所升高,如果是敞口培养,液面会出现白色杂菌膜,而在密封培养下,液面的杂菌很少,这些现象表明光合细菌生长繁殖情况良好。第二天48小时时,培养液红色度更深,气味更浓,透光度降得更低,(此时更要摇晃使其受光均匀),菌膜略多,PH值较24小时时有所升高,3~5天后,升到最高9左右就不会再升高了。第三天,72小时后,光合细菌的浓度已经很高了,可作为成品菌,产品浓度可达30亿/毫升以上,颜色深红,有臭味但无刺激性,PH值在9左右,透光率很低,仍有极少量菌膜。若继续培养几天,光合细菌浓度还会升高,大约在10~15天时达到最高浓度,若再培养下去,就会老化。以上若在培养过程中,达不到最适的光照和温度,则培养到成熟的时间会相对地延长。

②第二种生产方法:用白色或透明塑料桶装入25公斤水。取配好的原料250克,溶解入上述水中。取颜色鲜紫红,浓度为30亿/毫升的光合细菌成品菌作菌种,接种量30%。

本法同上法的不同在于,接种量增加了几倍。

③第三种生产方法(常用方法):即小规模生产方法,由于一瓶的量小,瓶子透明度好,又密封,所以培养环境好,需要的接种量也少,比较简单。(用1.25升的饮料瓶生产)。

1:设备为,光照箱,用一个大的纸箱,放一个40瓦的白炽灯悬挂在箱子的空中(注意防火),纸箱内壁四周,围绕着灯泡,堆放着已装好了接了种的培养液的饮料瓶,这样,既达到了保温到30-40度的效果,又达到了光照的效果。较大的箱子要用60-100瓦的白炽灯,一般一个箱子,可放这种饮料瓶15个以上,即一次可生产约20公斤/箱。灯泡与瓶子的距离不超过20厘米。

夏天,可撤去纸箱,以防温度过高,春秋天,也要在纸箱四周钻孔以散热。春秋天也可放于太阳下晒,只需注意温度不要过高即可。

2:接种:接种量为2-5%,注意水源必须干净卫生,最好用地下水,自来水不可用,第一次做试验时,要多选择几种水源同时做,以确定哪种水源最好,最先转成红色的水源最好,可确定为今后的生产用水。

3:菌种:一般来说,您生产出的光合细菌产品,就可当做下一批产品的种子用,无限循环下去,所以以后不

需要购种。

4:培养:在箱子内,打开白炽灯,照几天即可,一般温度可达到在40度,所以要密切注意温度不要过高,第一次培养可能需要5天以上,菌种适应了当地的水源后,一般只需要2天即可。

5:扩大规模,只需用大量的饮料瓶即可。收获:光合细菌的生长曲线呈"S"形,即增殖最快的是指数生长期,而且质量最好。指数生长期之后,虽然数量还在缓慢增长,但质量已明显下降,因此收获时最好选择在指数生长期之末。

四、光合细菌固态产品的生产:将高浓度光合细菌用蛭石粉或沸石粉吸附后,阴干或风干粉碎即得粉状固体光合细菌产品。可包装出厂,便于运输和售卖。也更象一个产品了。一般售价可达到2元/公斤以上,光合细菌︰沸石粉=1︰3~4。也可用其它载体来做干燥吸附剂,如草炭、硅藻土等。

我场的学员:山东省鱼台县王鲁镇大李庄村李卓光(邮编272352),培育使用光合细菌多年,取得了较好的经济效益,他的培育和使用光合细菌经验是:

一、培养方法:培养容器可用玻璃缸、透明塑料桶、塑料袋等透明容器,把食用水(或自然水)的PH值用氢氧化钠(烧碱)调到7.5~8.5。按1.4∶100(即1公斤水用14克培养基)溶于水中,再接种相当于水量五分之一的菌种,用60~100瓦白炽灯连续照射(如果气候适宜,也可利用日光直接照明)每天搅动二次,使其受光均匀,保持30~34℃,一般一周内可培育成熟。

成熟的光合细菌30天内使用效果最好,如果放置时间过长,菌体老化,菌液浓度降低,使用效果变差。低温阴凉处保存的时间相对延长(不需阴暗)。

二、使用方法:光合细菌是益菌,对各种水产养殖动物都有益,尤其育苗阶段效果明显,量多一些无任何负作用。水温20℃以上使用效果较好。

育苗用量:一般施用100-200PPM,随换随补充。

成鱼用量:每亩5~8公斤,将菌液稀释后泼于水中,15天施一次,水质严重恶化时7天一次。

饲料添加:按3%~5%添加于饲料中,现拌现喂。注意:不得同时使用杀菌药物。

光合细菌使用方法

一.使用方法: 1.水体喷洒。适合改良水质,防治鱼病和培养优良藻类时使用。选择晴天上午或下午,将扩繁好的光合细菌菌液用池水稀释后,全池均匀泼洒,一般用量:苗种池:150ml/L每5―10天用一次。成鱼池:第一次5ml/L以后2ml/L,或第一次5―8公斤/亩,以后3―5公斤/亩,每10―20天用一次。施光合细菌的次数最好根据水质情况具体研究,水质好可每隔15天施一次,水质较差、较肥,应每隔7―10天施一次。由于光合细菌形态微细,比重小,若采用直接泼洒养殖水体的方法,其活菌不易沉降到池塘底部,无法起到良好的改善底环境效果。因此建议全池泼洒时,尽量将其与沸石粉合剂合用这样既能将活菌迅速沉降到底部,同时沸石也可起到吸附氨的效果,或拌土洒入鱼池。 2.饲料添加。内服拌饵作为饲料添加剂使用时,将扩繁好的光合细菌菌液喷洒干饲料中拌匀,如用投饵机投喂的可拌菌后散开吹晒一段时间再喂,当天拌当天喂完。 二、注意事项: 1.不可与消毒杀菌剂混合使用,使用前后一周内不得使用消毒剂,否则杀死光合细菌影响使用效果。 2.使用前,将菌液光照10小时以上,使用效果好,晴天水温20℃以上时使用;阴雨天勿用。 3.水体呈碱性时施用效果好。用生石灰或烧碱调节PH值至中性或偏碱程度。 4.应灵活掌握用量和使用的连续性,因光合细菌在水体中只有形成优势群落后,才能发挥作用。 5.光合细菌菌液不能用金属器皿贮存。 6.培育鱼苗时,在苗种入池前7天全池泼洒,以利于浮游生物生长;光合细菌菌液与粪肥配合使用,效果明显,增产增效特别显著。 7.若要同时施用不同的净水制剂,应该注意制剂之间的共容性。例如:硝化细菌和光合细菌并不适合同时放养在同一水池中,因为它们净化水质的过程互有抑制作用,可能会降低其净化效果。

常用细菌培养基配方

常用抗生素 氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml) 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml) 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林(methicillin)(100mg/ml) 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml) 溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml) 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素(streptomycin)(50mg/ml) 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml) 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素(tetracyyline)(10mg/ml) 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml

光合细菌培养基配方

光合细菌培养基配方 光合细菌是兼性厌氧的,不同的光合细菌用的培养基不一样我现在就在做关于光合细菌的问题,这几中细菌都是常见的细菌,培养基在许多微生物上后面都有,光合细菌的富集培养基是: NH4Cl0.1g NaHCO3 0.1g KH2PO4 0.02g CH3COONa 0.1-0.5g MgSO4.7HO2 0.02g NaCl0.05-0.2g 三生长因子1ml 微量元素溶液1ml 蒸馏水97ml PH7.0 生长培养基加氮源(谷氨酸钠)和碳源(乙酸.丙酸.丁酸盐等)及可.其他菌的分离只要选择不同的培养基就可以选择分离啊 光合细菌富集纯化详见网易网盘 光合细菌培养基配方 氯化氨1克,磷酸氢二钾0.5克,氯化镁0.2克,氯化钠2克,酵母膏0.1克,水900毫升。 各成份溶解后15磅灭菌20分钟,然后无菌的加入过滤的碳酸氢钠5.0克/50毫升水;50毫升过滤的乙醇。用过滤的0.1N 磷酸调PH=7.0即可。 响应面设计法优化光合细菌培养基配方。培养基成分中醋酸钠和蛋白胨对于光合细菌的生长影响最为显著,最优培

养基配方为:醋酸钠1.145g/L、蛋白胨0.055g/L、碳酸氢钠0.6g/L、硫代硫酸钠0.4g/L、氯化钠0.3g/L、硫酸镁0.1g/L、磷酸二氢钾0.05g/L。在此条件下,光合细菌生长最为良好,经过5d培养以后,培养液OD600可以达到0.5以上 光合细菌(含生产工艺) 优良的光合细菌菌种的外观质量是啥样? 一般优良的光合细菌菌种和产品的外观质量有以下几点: 1、外观上看比较均匀,基本无上下分层。相反,市场上有许多光合细菌是上下分层的,包括我中心初期的产品也是这样,上层比较清淡,下层则比较深厚,上层颜色浅,下层颜色深,最底层可能还会有一层黑黑的沉淀。 而优秀的光合细菌菌种和产品,上下都是比较均匀的,没有较明显的分层,颜色比较均匀,外观看起来也悦目。(当然,除了培养基溶解时,会与硬水中的重金属离子反应产生的絮装沉淀除外) 这种上下无分层,颜色均匀,不是靠加悬浮剂,或增稠剂而造成的,而是自然培养出来的,不加任何修饰而成的。少数地方,由于水质的原因,可能会产生稍稍的差别。 2、没有粘壁现象。很多市场上的产品都有粘壁现象,即在容器的壁上形成一层红紫色的颜色层,就象是油漆一

光合细菌培养参数的研究审批稿

光合细菌培养参数的研 究 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】

光合细菌PS3培养参数的研究 摘要:为有效提高光合细菌邢3在工厂化生产中的生物量,对其主要培养参数进行了系统的研究。所涉及的培养参数包括:光源、光照度、溶解氧、培养基pH、盐度、接种浓度等。结果表明:PS3在厌氧条件下生长较好,而其最适接种浓度、光照度、光源、pH及盐度分别为10%、4以刃h(钨丝灯)、一、5。 关键词:光合细菌;培养参数 ThestudyoncultivatingParametersofPhotosyntheticbacteria PS3 光合细菌(photosyntheticbacteria)广泛分布提供质优价廉的产品,本实验对光合细菌PS3培养 于淡水、海水、极地或温泉(包括高热水体)以的主要参数进行了较系统的观察和研究,现将实验 及高盐、高有机质含量等不同的生态环境中,是一情况总结如下。 类行不产氧光合作用、具有复杂代谢功能的微生 花”上石草.:二二或二议一二二几二”公二二万二1材料与方法物,它能利用多种基质,可营异养、自养或兼性营一’,‘,’‘’‘’一 养;存在着好氧、厌氧和兼性厌氧类型[l]。光合菌株 细菌在维持自然界的生态平衡、废污水的处理等方试验菌株PS3由中国水产科学研究院南海水产 面有着重要作用,同时光合细菌作为单细胞生物可研究所饲料与健康养殖开发中心富集、分离。 以从中获得较丰富的单细胞蛋白,其广泛应用于农实验方法 牧渔业尤其在水产养殖中的应用更为广泛〔,一3〕。为本实验所采用的培养条件是不同光源和光照 生产更好的优质菌液,促进工厂化生产,为养殖业度、溶解氧、培养基pH值、盐度、接种浓度。试 收稿日期: 资助项目: 作者简介: 通讯作者: 2以」6切刀3;修回日期:2〕拓刀8一17 广东省重大科技兴渔项目(B200201A01);国家“十五”科技攻关计划专题(2004BA526BO202) 洪敏娜(1980一),女,技术员,从事水产微生态制剂的研究与开发。E一mail:hmnIgso@163.。。m 杨莺莺南方水产第2卷 -今-荧光灯(1500lx)fiuorescent 一.一钨丝灯(600lx)tungsten -查-钨丝灯(1500lx)tUngsten -片-钨丝灯Q700lx)tungsten -喂卜-钨丝灯(4000lx)tungsten 叫.-自然光(50000~70000lx)naturallighting

光合细菌

光合细菌 绿硫细菌、红硫细菌(过去叫做紫硫细菌)和红螺细菌(过去叫做紫色非硫细菌)等,都是能够进行光合作用的细菌。这些细菌都是球状、杆状或弧状的小型细菌,并且大多数都不能够运动。这些细菌的菌体内含有类似于绿色植物体内叶绿素那样的光合色素,这种光合色素叫做细菌叶绿素。有的光合细菌还含有大量的类胡萝卜素,认而使菌体呈现出红色。 光合细菌和绿色值物都能够进行光合作用,但是,绿色植物的光合作用是以水作为二氧化碳的还原剂,同时释放出氧的,细菌光合作用则以硫化氢或有机物(如乙醇、琥珀酸等)为供氢体,即还原二氧化碳的还原剂,把二氧化碳还原为葡萄糖,同时析出硫磺或产生其它有机物(如乙醛等),下面写出的是绿硫细菌的光合作用反应式: 因此,细菌光合作用和绿色植物的光合作用,可以用下面的通式来概括(通式中的A对于绿色植物来说是氧,对于光合细菌来说则是硫或其他无机硫化物。 从光合细菌的代谢类型我们可看出,同化作用存在着不同的形式,下面就生物的同化类型进行一下分类。 根据生物的同化作用所需能源和碳源的不同,可把生物的代谢类型分为四大类型: (l)光能自养型:以光为能源,以二氧化碳为主要碳源的生物,通常具有光合色素 合成有机物。例如高等植物、藻类及某些具有光合色素的细菌均属于这一原CO 2 的方式可用以下通式表示: 类型。这类生物同化CO 2 (2)光能异养型:以光为能源,以有机物为主要碳源的生物,有些细菌具有光合色素能进行光合作用,但它们以有机物作为供氢体,同化有机物形成自身物质。如非硫紫菌以乙醇为碳源,使乙醇氧化为乙醛,二氧化碳还原成葡萄糖。

(3)化能自养型:以化学能为能源,以CO 2 为主要碳源。这类生物能氧化 某些无机物(如NH 3、H 2 S等)取得的化学能去还原CO 2 合成有机物。如硝化细菌、 硫细菌等。 (4)化能异养型:以有机物氧化所产生的化学能为能源,碳源也主要来自有机物。动物,动物、真菌和绝大多数细菌都属于这一类型。

光合细菌的分离、培养和鉴定

光合细菌的分离、培养和鉴定 摘要:从南湾水库大坝下层水域取水样获得一株光合细菌。采用多种培养基分离方法分离出纯培养物。进行了菌落形态学观察和亚显微观察。于不同条件下培养后分别测定光密度和生长曲线。实验证实分离到的菌种为沼泽红假单胞菌。 关键词:生长曲线;沼泽红假单胞菌;光合细菌 The separation and culture and identified of photosynthetic bacteria Abstract:A strain sample of photosynthetic bacteria was got from the lower water in South Bay Reservoir. using a variety of separation methods to get pure cultures. It was cultured with various medium to culture the pure strains. Transmission election micrographs and microscope were observed of the strain. The optical density (OD) and the growth curve were measured under different conditions. The results suggested that the strain was Rhodopseudomonas palustris. Keywords:Colony and cell; Growth curve; Rhodopseudomonas palustris; Photosynthetic bacteria 引言 光合细菌由于碳、氮代谢途径和光合作用机制的独特性和其生理类群的多样性, 而被大量关注。多年来, 光合细菌一直被作为研究光合作用以及生物固氮作用机理的重要材料。经过研究发现光合细菌在环保、农业、医药等方面均有较高的应用价值。下面就光合细菌目前的开发应用研究近况作一概述。 光合细菌细胞营养价值极高。首先,光合细菌细胞干物质中蛋白质含量高达60%以上, 比目前生产的单细胞蛋白酵母中蛋白质的含量还高。而且其蛋白质氨基酸组成齐全, 是一种优质蛋白源。其次,光合细菌细胞含有多种维生素, 特别是B族维生素, VB12、叶酸、泛酸、生物素的含量远远高于酵母菌。另外, 光合细菌细胞还含有大量的类胡萝卜素、辅酶Q等活性物质。因此, 光合细菌具有很高的营养价值。在水产养殖中, 光合细菌可被用于饵料或饲料添加剂。光合细菌促进鱼虾的生长, 无论是成活率或是产量的提高均可达10%-40%以上。同时,光合细菌还具有防治鱼虾疾病,净化养殖场所水质等方面的功能。使用光合细菌喂养的家禽, 成活率可提高5%-7%, 料肉比降低33%左右,肉鸡增重15%-17%, 产蛋率提高12.7%。而且所产

光合细菌的培养操作教程

光合细菌的培养操作教程 1、配制光合细菌菌液: (1)配制比例: 光合细菌培养基、清水、菌种的配制比例为:0.5:80:20。 示例1:0.5公斤(500克)培养基+ 80升水+ 20升菌种(接种),配成100升的光合细菌菌液。 示例2(少量培养):0.05公斤(50克)培养基+ 8升水+ 2升菌种(接种),配成10升的光合细菌菌液。 (2)配制方法: 下面以配制100升光合细菌菌液为例来说明配制方法: ①溶化培养基:取培养基0.5公斤(500克),用少量水溶化(可以用50℃左右的热水,溶化培养基的速度会快些),搅拌均匀,然后倒入一个容量在100升以上的容器中; ②配制培养液:往容器中加水到80升,80升培养液配制完成; ③接种:再加入20升菌种,并搅匀,100升菌液配制完成;

④装瓶(袋):将配制好的菌液装入干净的透明容器(瓶、壶、塑料袋等),容器中留5%的空气在里面,密封待用。 菌液配制说明及注意事项: a. 以上各成分的数量是以配制100升菌液为例来说明配制方法的,如配制其他数量的光合细菌菌液,各成分数量按比例增减即可; b. 培养用水源的选择: 一般含杂菌较低的清洁淡水、海水或加粗食盐的淡水都可以,如井水、河水、自来水、蒸馏水和纯净水等,甚至干净的池塘水也行。 从经济、实用的角度考虑,地下水(如井水)含杂菌低,是最理想的培养水源; 清洁的地表水也可使用,如河水、池塘水等; 含氯量较高的自来水应敞口放置两天或调PH值至偏碱后使用; 蒸馏水及纯净水固然很好,但成本太高,可用于提纯菌种; c. 培养用容器的选择: 必须为透明容器并清洗干净,透明的容器可让光合细菌最大限度的吸收到充分的光线,少量培养如饮料瓶、食用油壶等,规模培养如透明塑料桶、透明塑料袋等。 d. 菌种的接种量: 一般接种量为20-50%,即培养液与菌种的比例为4:1(4升培养液加1升菌种)到1:1(1升培养液加1升菌种),接种量最低不能低于20%。 接种量越高,光合细菌菌种越容易形成优势菌群而抑制其他杂菌生长,培养速度快,且培养成熟的浓度更高。但产出效率也越低,光合细菌易老化。 接种量越低,培养产出效率越高,但如果低于20%的接种量,光合细菌不容易形成优势菌群,培养初期易染杂菌,培养的成功率低。 我们推荐的接种量为20%,如果用太阳光培养,推荐的接种量为25-40%。

光合细菌及其在农业中的应用

光合细菌及其在农业中的应用 光合细菌(Photosynthetic Bacteria,略作PSB)是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。除蓝细菌外,都能在厌氧光照条件下,进行不产氧的光合作用。 根据“伯杰氏细菌鉴定手册”(第9版),不产氧型的光合细菌可分成以下6类,27属:●着色菌科(Chromatiaceae)(又称红色硫细菌、紫硫细菌),含9个属; ●外硫红螺菌科(Ectothiorhodospiraceae),含1属; ●红色非硫细菌(Purple nonsulfur bacteria),即原红螺菌科(Rhodospirillaceae),含6属; ●绿硫细菌(Green sulfur bacteria)即原绿菌科(Chlorobiaceae),含5个属; ●多细胞绿丝菌(Multicellular filamentous green bacteria),即原绿丝菌科 (Chloroflexaceae),含4属; ●盐杆菌(Heliobacterium),含2个属。 由于光合细菌在物质转化循环中的重要作用,以及菌体含有的丰富营养,使这类古老的微生物成为近二、三十年来人们开发利用的一大热点。大量的研究成果表明,光合细菌在农业、水产、污染治理与资源化等方面,有着巨大的实用价值,应用前景十分广阔。以下就光合细菌的主要性状、在农业等领域的应用、方法、作用原理等,作一简要介绍。 一、光合细菌的主要特征 1.光合细菌的形态学特征 ⑴PSB培养物的颜色 PSB因含有光合色素(细菌叶绿素、类胡萝卜素)而呈现一定颜色。除少数例外,一般说来,红螺菌科和着色菌科的菌呈红、粉红、橙黄、紫色或茶褐色;绿菌科和绿色丝状菌科的菌呈绿色。 红螺菌科和着色菌科的的培养物之所以呈现有黄色到紫色的各种鲜艳的颜色,这是由类胡萝卜素高浓度蓄积并掩盖了细菌叶绿素的色调而形成的。少数类胡萝卜素含量少的菌,或缺乏类胡萝卜素的变异株,便会显示细菌叶绿素的蓝绿色。 每个菌种各有自己的颜色,但由于培养条件的不同,其颜色会发生变化。例如,球形红菌(Rhodobacter sphaeroides)和荚膜红菌(Rhodobacter capsulatus)的厌氧液体培养物呈茶褐色,半好氧培养物呈红色。这是由于氧的存在使细胞内类胡萝卜素组成发生变化的缘故。 ⑵PSB细胞形状与大小 PSB菌体形态极其多样,有球状、卵状、杆状、弧状、螺旋状、环状、半环状、丝状,以及链状、锯齿状、格子状、网篮状等等。不仅不同的菌种有多种多样的形态,就是同一种类也往往由于培养条件和生长阶段等不同而使细胞形态发生变化。尽管如此,许多菌种在细胞形态上仍然是各具特征的。如球形红菌(Rhodobacter sphaeroides)的细胞为球状;红微菌属(Rhodomicrobium)细菌的细胞丝相连;绿突菌属(Prosthecochloris)的细胞为具突起之球菌等等。 细胞的大小因种类不同而变化很大。如Rhodocyclus gelatinosus在0.4~0.5*1~2微米,Chromatium okenii的细胞则大得多,大体在4.5~6.0*3~10微米。一般说来,红螺菌科细胞的大小为0.6~0.7*1~10微米;着色菌科细胞大小为1~3*2~15微米;绿菌科细胞大小为 0.7~1*1~2微米。 ⑶光合作用器官 PSB的细胞内存在着载色体(chromatopheres)或绿菌泡囊(chlorobium vesicles),光合色素是它们的基本组成部分。它们是光合细菌吸收光能并转变成化能,即进行光合磷酸化作用的所在部位。 载色体由细胞膜陷入细胞质内而形成,与细胞膜成连续的状态。在红螺菌科和着色菌科

光合细菌不同属类的分离培养

光合细菌的分离培养 光合细菌(Photosynthetic Bacteria,略作PSB)是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。除蓝细菌外,都能在厌氧光照条件下进行不产氧的光合作用。研究与应用的实践表明,光合细菌在高浓度有机废水处理与资源化、水产养殖的水质调控与促进健康生长、在农业生产中作为高效活性菌肥等方面,发挥着十分有益的和令人瞩目的作用。关于光合细菌的类群、形态与生理特征、在生态系统中的地位和作用等内容,请参考有关文献与专著。这里仅就光合细菌的分离、培养方法作一介绍。 1光合细菌的富集培养的一般方法 ①分离源 光合细菌四个科-红螺菌科(Rhodospirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、绿菌科(Chlorobiaceae)、绿色丝状菌科(Chloroflexaceae)的各种菌,广泛分布于地球生物圈的各处。作为光合细菌的分离源,一般可从富营养化的湖泊、池沼、海滩、以及水田、硫黄泉、灌水土壤、和污水厂活性污泥、畜牧场水沟等厌氧或缺氧环境采样。在较深的水体,可使用采水器采取厌氧层的水。在较浅的地方,可直接用吸管吸取带底泥的水。采样的同时记录水温、pH、有无H2S气味等项内容。将采集到的水样或泥样放在厌氧、低温条件下,带回实验室进行分离。 ②光合细菌富集培养基 用于光合细菌富集培养用的培养基有许多配方,这里仅介绍日本星野氏推荐的基本培养基I和基本培养基II。前者适合于红螺菌科的光合细菌,后者适用于着色菌科和绿菌科的菌。 基本培养基I: KH2PO4 0.5g K2HPO4 0.6g (NH4)2SO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.2g NaCl 0.2g CaCl2·2H2O 0.05g酵母浸出汁 0.1g微量元素溶液(见后)1mL 生长因子溶液(见后)1mL蒸馏水1000ml以上配制成的培养基pH值约6.7 根据需要,可在上述培养基中添加一些成分,如富集的是缺少同化型硫酸还原系的菌种,则可在基本培养基I中加入0.01%硫代硫酸钠;如是海洋

光合细菌培养参数的研究

光合细菌PS3培养参数的研究 摘要:为有效提高光合细菌邢3在工厂化生产中的生物量,对其主要培养参数进行了系统的研究。所涉及的培养参数包括:光源、光照度、溶解氧、培养基pH、盐度、接种浓度等。结果表明:PS3在厌氧条件下生长较好,而其最适接种浓度、光照度、光源、pH及盐度分别为10%、4以刃h(钨丝灯)、6.5一7.0、5。 关键词:光合细菌;培养参数 ThestudyoncultivatingParametersofPhotosyntheticbacteria PS3 光合细菌(photosyntheticbacteria)广泛分布提供质优价廉的产品,本实验对光合细菌PS3培养 于淡水、海水、极地或温泉(包括高热水体)以的主要参数进行了较系统的观察和研究,现将实验 及高盐、高有机质含量等不同的生态环境中,是一情况总结如下。 类行不产氧光合作用、具有复杂代谢功能的微生 花”上石草.:二二或二议一二二几二”公二二万二1材料与方法物,它能利用多种基质,可营异养、自养或兼性营一’,‘,’‘’‘’一 养;存在着好氧、厌氧和兼性厌氧类型[l]。光合1.1菌株 细菌在维持自然界的生态平衡、废污水的处理等方试验菌株PS3由中国水产科学研究院南海水产 面有着重要作用,同时光合细菌作为单细胞生物可研究所饲料与健康养殖开发中心富集、分离。 以从中获得较丰富的单细胞蛋白,其广泛应用于农1.2实验方法 牧渔业尤其在水产养殖中的应用更为广泛〔,一3〕。为本实验所采用的培养条件是不同光源和光照 生产更好的优质菌液,促进工厂化生产,为养殖业度、溶解氧、培养基pH值、盐度、接种浓度。试 收稿日期: 资助项目: 作者简介: 通讯作者: 2以」6切刀3;修回日期:2〕拓刀8一17 广东省重大科技兴渔项目(B200201A01);国家“十五”科技攻关计划专题(2004BA526BO202) 洪敏娜(1980一),女,技术员,从事水产微生态制剂的研究与开发。E一mail:hmnIgso@163.。。m 杨莺莺,E~mail:”y402@https://www.doczj.com/doc/0c6527495.html,南方水产第2卷 -今-荧光灯(1500lx)fiuorescent 一.一钨丝灯(600lx)tungsten -查-钨丝灯(1500lx)tUngsten -片-钨丝灯Q700lx)tungsten -喂卜-钨丝灯(4000lx)tungsten 叫.-自然光(50000~70000lx)naturallighting

光合细菌的培养及应用技术

光合细菌的培养及应用技术 1 引言 光合细菌(photosynthetic bacteria,简称PSB)是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源,进行不放氧光合作用的细菌,广泛分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中,依据《伯杰细菌鉴定手册》(第九版)可分为6 个类群,27 个属。不产氧光合作用的红螺菌目分为紫细菌(purple bacteria)、绿细菌(Greenbacteria)和日光杆菌属(Heliobacteria)、红色杆菌属(Erybrobacter)。其中紫细菌中包含有红螺菌科(Rhodolspirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、外硫红螺菌科(Eceothiorhodospiraceae),包含16属49种。其中在生产上有意义的红螺菌科包括红螺菌属、红假单胞菌属和红微菌属[1]。PSB 均为革兰氏阴性细菌,一般为球型、卵形、杆形、弧形、螺旋形、环形、半环形丝形,也可随培养条件和生长阶段而改变,大部分单个存在。PSB的一般菌体组成及营养成分见表1[2].表1 光合细菌菌体的组成与小球藻等比较Tab. 1 Components comparison betweenphotosynthetic bacteria and ChlorellaP S B 含有较高的优良蛋白质,粗蛋白含量为 65.45%,含有17 种氨基酸而且消化率较高;粗脂肪约7%;可溶性糖类约20%;粗纤维约3%[1];维生素B12 含量是酵母的200 倍、小球藻的4 倍[2],生物素含量也比较丰富;菌体的脂类成份含有大量的叶绿素、类胡萝卜素和辅酶Q(泛醌),迄今已从PSB中分离出80 种以上的类胡萝卜素。叶绿素和类胡萝卜素对养殖生物的健康生长,增强对疾病的抵抗力有很大的益处。辅酶Q4 是与生命活动有重大关系的生理活性物质,PSB 中的含量特高,是酵母的13 倍。以上特点决定了PSB 可做为畜禽、鱼虾的饲料。但PSB 中缺乏ω3 系列20 碳以上的高度不饱和脂肪酸,单独作为仔鱼的初期饵料时,需与其它富含高度不饱和脂肪酸的饵料同时使用。 2 光合细菌的培养 水产养殖市场对PSB 活体菌种的需求缺口很大,为了满足水产养殖对PSB 活体菌种的需求,PSB的生产方法有很多,但是到目前为止,还没有进行产业化生产PSB的报道。冯云等[3]用50L的塑料桶来厌氧培养PSB,使培养密度达到2.1 × 109 个/ml;杨绍斌[4]在塑料大棚内建大小2000~5000L 的水池使其厌氧发酵富集扩大培养,培养液中含PSB 活菌数可达5 × 106 个/毫升;鄂春宇[5]用塑料薄膜袋培养PSB,培养密度达到2.5~3×105个/ml,12个月生产50 多吨,但是在PSB的密度检测时,很容易染菌。由中科院开发的PSB 大规模生产工艺,产品含菌量达到5 × 1010个/毫升,保质期3 个月以上,并可根据客户要求,设计和建设不同规模的生产线[6]。 2.1 菌种 菌种可从采集的池塘底泥或海水中重复富集、分离纯化获得.若用保存下来的菌种,在培养前必须提纯复壮,才能有效地进行扩大培养。光合细菌的生产需要采用优良菌种,要求菌种活性高,菌液中菌体分布均匀、无下沉现象,目前养殖中使用的PSB多为红螺菌科和一部分着色菌科的复合菌株[7]。 2.2 培养基及培养条件 PSB 培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外,还需要一定量的镁、钙、钠和有关的微量元素,将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。本实验室采用酵母膏、蛋白胨培养基,基本配方为:CaCL2 0.3g,MgSO4·7H2O0.5g,酵母膏3g,蛋白胨3g,蒸馏水1000ml,pH: 6.8. 如需制固体培养基再加2%琼脂。培养温度:25℃~30℃最佳,光照强度:2000LX~5000LX,PH:7.5~8.5 最佳。

光合细菌在水产养殖中的功用

光合细菌在水产养殖中 的功用 集团公司文件内部编码:(TTT-UUTT-MMYB-URTTY-ITTLTY-

一、光合细菌在水产养殖中的功用 光合细菌(PhotoSyntheticBacteria.简称psb)是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称。光合细菌属红螺菌目,分属于红螺菌科、着色菌科、绿杆菌科、绿色丝状菌科,共4科23属80余种。应用较多的,光合细菌具有多种异养功能:固氮、脱氮:固碳、硫化物氧化等,与水体中的氮磷、硫循环密切相关,在水体的自净过程中扮演着重要角色。从不同的角度描述,PSB在水产养殖中具有以下六大功能。 1、水质净化剂 随着养殖水体的日趋严重的污染和富营养化些,氨氮、硫化氢等有害物质已严重影响到养殖动物的生长,如料转化率低,其它的病原菌生长受阻,从而起到了水质净化的作用。大连水产学院的养虾试验结果表明,使用PSB提高单23.1%。 2、饲料添加剂 将PSB的菌液/223%--5%的量添加鱼饲料中,可降起来低料系数,增强机体力病能力,促进试验表明,添加菌液优于添加干燥的菌体。 3、鱼虾苗种培育的保护 psb应用子鱼虾蟹贝的育苗中,可促进幼体生长、变态,提高成活率。因为PSB可通过争化水质,来改善幼体的发育环境,再者可直接被幼体作为适口饵料而增加营养源。 4营养丰富的饵料 psb菌群可直接被鱼虾滤食,更是浮动物的好饵料,而浮游动物则是虾、蟹、鱼类苗种及鳙鱼等成鱼的直接食料。 5、防治鱼病 (1)PSB通过对有害物质的异养作用达到净化水质,减少疾病的发生。 (2)通过降解鱼药及污水的污染,改善鱼类的生长环境,增强鱼体体质。 (3)光合细菌占优势时,可抑制其它病原茵的滋生,据试验,经常使用PSbs可治愈控制烂鳃、烂尾、水霉、赤鳍等疾病。 6、消除耗氧因子底质中的有害物质在分解转化中,要消耗氧,而psb吸收了耗氧物质接增氧的作用。 二、光合细菌的生长需求 光合细菌的生长需要有适宜的外部环境和合理的营养条件,才能正常地、高速地繁殖,产出优质的菌液。 (1)适宜的外部环境,(1)基质:洁净的淡水、海水或加粗食盐的淡水(本文洁净水指无菌水)。 (2)温度:15~C--45~C,最适28~C--36~C。 (3)光照:太阳光或4000勒克斯(LX)的光源(相当于60瓦的白炽灯)。 (4)PH值:8--8.5为佳(可适6--10)。 2、合理的营养条件: 光全细菌营养元素及合理的配比,是光合细菌营养需求的重要的条件。 psb能通过细胞壁有选择地吸收碳、氢、氮,磷,钾,钠,镁,硫及某些微量元素。光合量细菌的获能形式可概括为: (1)光合作用获能:只要供氢体和碳源合适,所有的PSB都能在光照厌气条件下,通过光合磷酸化过程获得能量。

光合细菌培养基

红螺菌培养基: 1、富集培养基: 经典的紫色非硫细菌(红螺菌)的富集培养基的配方为:NH4Cl:0.1g;NaHCO3:0.1g;K2HPO4:0.02g;CH3COONa:0.1~0.5g;MgSO4·7H2O:0.02g;NaCl:0.05~0.2g;生长因子1ml,蒸馏水97ml,微量元素溶液 1ml,pH为7.0。 其中,①5%NaHCO 3 水溶液,过滤除菌取2m1加入无菌培养基中。②生长因子:维生素B10.001mg、乙尼克丁酸0.1mg、对氨基苯甲酸0.1mg、生物素0.001mg,以上药品溶于蒸馏水中,定容至10ml,然后过滤除菌。③ 微量元素溶液:FeCl 3·6H 2 O :5mg;CuS0 4 ·5H 2 O:0.05mg;H 3 BO 4 lmg; MnCl 2·4H 2 O:0.05mg;ZnSO 4 ·7H 2 O:1mg;Co(NO 3 ) 2 ·6H 2 O: 0.5mg。以上药 品分别溶于蒸馏水中,并定容至1000m1。 除①、②、③外,各成分溶解后100 Pa灭菌20min。然后分别加入①、 ②、③,如加入0.1%~0.3%的蛋白胨则能促进该菌生长。 2、分离培养基: 传统的红螺科分离培养基的配方为:NH 4Cl:0.1g; MgCl 2 :0.02g;酵 母膏:0.01g; K 2HPO 4 :0.05g; NaCl: 0.2g;琼脂2g,蒸馏水90ml。 100Pa灭菌20min。 灭菌后,无菌操作加入经过滤除菌的0.5g/5mlNaHCO 3 ,再无菌加入过 滤除菌的0.1g或0.1mlNa 2S·9H 2 O(降低培养基的氧化还原值),最后再加 入5ml经过滤除菌的乙醇、戊醇或4%丙氨酸。用过滤灭菌的0.1mol/H 3PO 3 调pH至7.0。 摘自百度知道。 筛选富集培养基为: NH4Cl 1g/L, NaHCO3 1g/L, CH3COONa 3g/L, KH2PO4 0.3g/L, MgSO4 0.1g/L, 酵母膏0.5g/L, 微量元素母液1g, 自然pH值。扩大培养培养基以海水代替微量元素母液。1000~4000lx光照, (30±2)℃恒温培养。 参考文献:固定化海洋光合细菌处理生活污水的研究* 黄宝兴,李兰生,赵亮,张微,唐迎迎海洋湖沼通报 基础培养基:NH4Cl:1g; Na2HPO4: 0.5g; MgSO4: 0.2g; NaCl: 2g; NaHCO3: 5g; 酵母膏:2g ; 乙醇2ml,用0.1N H3PO4调至pH7.0。 划线培养基:采用固体琼脂培养基,即在基础培养基的基础上添加1.0%的琼脂。 以上培养基初始pH值均用H3PO4调至7.0,经121℃灭菌30分钟,NaHCO3过滤除 菌后加入。培养条件:光照培养箱温度控制在30℃、光照强度控制在3000uE.m-2s-1培养。光合细菌是一种兼性嫌气细菌,需要深层培养或在真空干燥器内达到嫌气或半嫌气状态,一般将混合菌放入培养液中先富集再分离。具体方法:将混合菌装入10ml试管中,加入培养

光合细菌介绍

光合细菌 光合细菌(简称PSB)是地球上出现最早、自然界中普遍存在、具有原始光能合成体系的原核生物,是在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称,是一类没有形成芽孢能力的革兰氏阴性菌,是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。光合细菌广泛分布于自然界的土壤、水田、沼泽、湖泊、江海等处,主要分布于水生环境中光线能透射到的缺氧区。 生长环境 在水产养殖中,能够降解水体中的亚硝酸盐、硫化物等有毒物质,实现充当饵料、净化水质、预防疾病、作为饲料添加剂等功能。光合细菌适应性强,能忍耐高浓度的有机废水,对酚、氰等毒物有一定有忍受和分解能力,具有较强的分解转化能力。它的诸多特性,使其在无公害水产养殖中具有巨大的应用价值。 作用原理 光合细菌在有光照缺氧的环境中能进行光合作用,利用光能进行光合作用,利用光能同化二氧化碳,与绿色植物不同的是,它们的光合作用是不产氧的。光合细菌细胞内只有一个光系统,即PSI,光合作用的原始供氢体不是水,而是H2S (或一些有机物),这样它进行光合作用的结果是产生了H2,分解有机物,同时还能固定空气的分子氮生氨。光合细菌在自身的同化代谢过程中,又完成了产氢、固氮、分解有机物三个自然界物质循环中极为重要的化学过程。这些独特的生理特性使它们在生态系统中的地位显得极为重要。 在水产养殖中运用的光合细菌主要是光能异养型红螺菌科(Rhodospirillaceae)中的一些品种,例如沼泽红假单胞菌(Rhodop seudanonas palustris); 在自然界淡、海水中通常每毫升含有近百个PSB菌,光合细菌的菌体以有机酸、氨基酸、氨和醣类等有机物和硫化氢作为供氧体,通过光合磷酸化获得能量,在水中光照条件下可直接利用降解有机质和硫化氢并使自身得以增殖,同进净化了水体。 除此之外,细胞内还含有碳素储存物质糖原和聚β一羟基丁酸、辅酶Q、抗病毒物质和生长促进因子,具有很高的饲料价值,在养殖业上有广阔的应用前景。 PSB在厌氧光照条件下,能利用低级脂肪酸、多种二羧酸、醇类、糖类、芳香族化合物等低分子有机物作为光合作用的电子受体,进行光能异养生长。在黑暗条件下能利用有机物作为呼吸基质进行好氧或异养生长。光合细菌不仅能在厌氧光照下利用光能同化CO2,而且还能在某些条件下进行固氮作用和在固氮酶作用下产氢。另外,有些菌种在黑暗厌氧条件下经丙酮酸代谢系统作用也可产氢。光合细菌还能利用许多有机物质如有机酸。醇、糖类转化某些有毒物质如 H2S 和某些芳香族化合物等。 PSB通过生物转化,可合成无毒、无副作用且富含各类营养物质的菌体蛋白,不仅改善了生态环境,还为养殖业提供了高质量的饲料原料。 PSB菌体中对动物生长有促进作用的维生素B12、生物素、泛酸、类胡萝卜素、叶绿素以及与造血、血红蛋白形成有关的叶酸的含量远高于一般微生物,尤其含有人工不能合成的生物素D一异构体。这些物质在动物机体内都具有显著生理活性在水产养殖中,养殖池按水中溶解氧含量的大小由表层向底部可分为好氧区和厌氧区。表层生物繁殖旺盛,水质一般较好;底层则积

光合细菌的培养及应用方法

光合细菌的培养及应用方法 光合细菌(简称PSB )是地球上最早出现具有原始光能合成体系的原核生物, 是一大类在厌氧条 件下进行不放氧光合作用的细菌的总称,广泛存在于地球生物圈的各处。光合细菌在水产养殖上的 应用主要有以下五个方面:作为养殖水质净化剂;作为饲料添加剂;用于鱼 、虾、贝幼体的培育; 作为动物性生物饵料的饵料;防治鱼病。 、培养工具的消毒方法 1.加热消毒法:利用高温杀死微生物的方法。 ( 1)直接灼烧: 此法可直接把微生物烧死, 灭菌彻底, 但只适用于小型金属或玻璃工具的消毒。 (2)煮沸消毒:一般煮沸 5?10分钟,适用于小型容器、工具的消毒。 ( 3)烘干箱消毒:亦称为恒温干燥箱消毒法。 2 .化学药品消毒法:适用在批量培养中,大型容器、工具、玻璃钢水槽和水泥池中。 (1) 酒精:浓度为 70%的酒精常用于中、小型容器的消毒。用纱布蘸酒精在容器、工具的表 面涂抹, 10分钟后,用消毒水冲洗两次即可。 (2) 高锰酸钾:按 300ppm 配成高锰酸钾溶液,把洗刷洁净的容器、工具放在溶液中浸泡 5分 钟,取出,再用消毒水冲洗 2次?3次即可。 二、光合细菌的培养条件 1 、 营养条件 光合细菌细胞体构成元素主要有:碳、氢、氧、氮、磷、钾、钠、镁、钙、硫和一些微量元素 等,它们也是所有生物细胞构成的主要物质。 一般情况下, 比重:水占 80%-90%、无机盐 1%-1.5 %、 蛋白质 7%-10%、脂肪 1%-2%、糖类和其它有机物 1%-1.5 %。其中干细胞含碳 45%-55%、氢 5% -10%、氧 20%-30%、氮 5%-13%、磷 3%-5%、其它矿物元素 3%-5%。光合细菌的细胞膜具有 半透性,能选择性地让营养成分按一定需要进细胞内,在酶的作用下合成自己的细胞组分并促进分 裂新的个体。 基本符合光合细菌生长繁殖所需的营养要求,无毒无副作用,使用安全,固状结晶体便于包装和运 输,而且有 2 年的 营养元素的全面合理的搭配 , 是培养高产光合细菌的关键。根据这一要求 , 郑州 @@@生@物 材料公 司选用多种光合细菌生长必需的原料,科学配方,经特殊加工而成的 " 光合细菌发生剂(培养基) II

微生物种类

荧光假单孢菌(Pseudomonas fluorescens) 棒杆菌(Corynebacterium 棒杆菌(Corynebacterium lilium) 红酵母(Rhodotorula sp. 恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida) 红球菌Rhodococcus ?爱德华氏菌(Edwardsiella) ?柠檬酸细菌(Citrobacter) 沙门氏(Salmonella) 盐杆菌科(Halobacteriaceae) 未定地位的有: ?醋杆菌(★Acetobacter) 布鲁氏菌(Brucella) 产碱菌(★Alcaligenes) ?分离时,加石蕊牛乳培养基,由变色情况判断是否产碱。这是个有工业应用价值的菌,L-苯丙氨酸转氨酶,PHB产生菌等。如利用真养产碱菌生产PHB——生物塑料,埋在地壤中6周完全降解,而普通塑料需200-300年。目前PHB产量占菌体重的70-80%。 真养产碱菌(Alcaligens eutrophus)生产PHA Alcaligenes latus(广泛产碱菌)生产功能性高聚物 蓝细菌(Cyanobacteria): 不产氧的光合细菌—— 紫细菌与绿细菌 红螺菌科(Rhodospirillaceae)紫色非硫细菌 着色菌科(Chromatiaceae)紫色硫细菌 专性光合,专性厌氧,以H2S作为还原CO2的电子供体,氧化成硫沉积在胞内。常常它们把硫氧化为硫酸盐 绿硫菌科(Chlorbiaceae) 红螺菌科包括: ▲红螺菌属(Rhodospirillum) ▲红假单胞属(Rhodopseudomonas) 红微菌属(Rhodomicrobium) 黄红螺菌(Rhodospirillum fulvum), 深红螺菌(Rhodospirillum rubrum), 红红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris 光合细菌的培养方法—富集培养法 ●分离源:采用营养丰富的湖、沼泽、水田等厌气层的水。 ●培养基1:适用于红螺菌科。KH2PO4 0.5g, K2HPO4 0.6g, (NH4)2SO4 1.0g, MgSO4·7H2O 0.2g, NaCl 0.2g, CaCl2·2H2O 0.05g , 酵母浸膏0.1g, 微量元素溶液1ml, 生长因子1ml,蒸馏水1000ml;如有必要,可加入0.01%硫代硫酸钠或3%NaCl;为抑制硫酸还原菌生长,可把上述(NH4)2SO4 , MgSO4·7H2O 换成NH4Cl和MgCl2·6H2O。 日本目前在各地废水处理中使用的光合细菌主要是Rp.sphaeroids ,这个菌株能很好利用低级脂肪酸、糖、氨基酸等各种有机物生长,特别是在醋酸、丙酸比为2:1~5:1培养基质

光合细菌的培养及其在水产养殖中的应用(精)

光合细菌的培养及其在水产养殖中的应用 光合细菌简称, 是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源, 进行不放氧光合作用的细菌, 广泛分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中近年来, 光合细菌应用于水产养殖业并取得显著效果。我所自年开始光合细菌的培养与应用研究, 在对虾和中华鳌养殖、对虾和泥蜡人工育苗中试用, 均取得较好的效果。 本文根据我们的研究实践, 综合国内外有关文献, 概述光合细菌的培养技术及其在水产养殖中的应用状况。 1. 光合细菌的培养 1.1 菌种菌种可从采集的池塘底泥中重复富集、分离纯化获得如用保存下来的菌种, 在培养前必须提纯复壮, 才能有效地进行扩大培养。目前养殖中使用的光合细菌多为红螺菌科和一部分着色菌科的复合菌株, 因为复合型菌株能利用多种碳源, 易于培养, 能更为广泛有效降解水中低分子有机物。 1.2 培养基光合细菌培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外, 还需要一定的镁、钙、钠及有关微量元素, 将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。基本配方为氯化铵0.2%、碳酸氢钠0.1%、醋酸钠0.3%、磷酸二氢钾0.03%、硫酸镁0.01%、酵母膏0.05%、蛋白胨0.05%、微量元素母液0.1%。如制固体培养基再加20%琼脂。 1.3 培养生态条件 1.3.1 pH值:光合细菌生长的酸碱度范围为微酸性到中性, pH值在6.5一7.5, 在培养过程中, 需要定时测定培养液的pH值变化。 1.3.2 光照室内用25一60W白炽灯作光源, 注意培养物不能离灯泡太近。光强度一般为1000-2000Lux。 1.3.3 温度光合细菌适温为10一35℃ , 最适25一28℃。据我们观察, 光合细菌能耐较高温度, 在40一42℃时仍生长正常。 1.4 培养方法光合细菌的生产性培养一般采用三级培养法。 一级培养采用试管或小型盐水瓶, 其生长培养基需先经高压灭菌(温度121℃、压力15磅、时间20分钟), 然后在无菌条件下, 按规程进行接种, 接种量10%一20%, 接种后于适宜温度与光照条件下进行培养。 二级培养采用5000-20000毫升玻璃瓶, 生长培养基需煮沸消毒, 待冷却到25℃左右接种, 接种量10%一20%。 三级培养采用20一25公斤塑料桶或玻璃钢桶, 培养液用次氯酸钠消毒12一24小时, 再用硫代硫酸钠还原后接种培养。接种量一般为20%--30%。 1.5 培养场所一般在室内控温光照条件下培养, 一级试管种置于培养箱内。当自然温度适宜时, 可采用塑料薄膜大棚培养。

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