年产300吨松针提取原花青素生产线建设项目可行性研究报告
建设单位：商洛市XXX科贸有限责任公司
建设地点：商洛市商州区杨峪河镇
编制日期：二○一三年八月
目录
第一章项目概况 (4)
1.1概述 (4)
1.2编制依据和范围 (5)
1.3项目基本情况 (7)
1.4项目建设的背景 (8)
1.5项目建设的意义及必要性 (12)
1.6项目经济技术指标 (15)
第二章市场分析 (17)
2.1项目市场分析 (17)
2.2相关领域国内外技术现状 (18)
2.3市场风险分析及措施 (19)
2.4营销策略............................................................................................................... 错误！未定义书签。第三章产品方案与建设规模 . (22)
3.1产品方案 (22)
3.2建设内容 (22)
第四章建设条件和场址选择 (24)
4.1建设条件 (24)
4.2场址选择 (29)
第五章工程技术方案 (31)
5.1工艺技术方案 (31)
5.2设备选型............................................................................................................... 错误！未定义书签。
5.3土建工程............................................................................................................... 错误！未定义书签。第六章总图运输与公用辅助工程 .......................................................................... 错误！未定义书签。
6.1厂区概述............................................................................................................... 错误！未定义书签。
6.2总图布置............................................................................................................... 错误！未定义书签。
6.3公用工程............................................................................................................... 错误！未定义书签。第七章环境影响评价 ............................................................................................. 错误！未定义书签。
7.1设计依据............................................................................................................... 错误！未定义书签。
7.2环境影响分析....................................................................................................... 错误！未定义书签。
7.3环境保护措施....................................................................................................... 错误！未定义书签。
7.4综合评价与结论................................................................................................... 错误！未定义书签。第八章节能、节水 ................................................................................................. 错误！未定义书签。
8.1概述....................................................................................................................... 错误！未定义书签。
8.2设计原则及依据................................................................................................... 错误！未定义书签。
8.3能耗分析............................................................................................................... 错误！未定义书签。
8.4节能、节水措施................................................................................................... 错误！未定义书签。第九章劳动安全卫生与消防 .................................................................................. 错误！未定义书签。
9.1劳动安全卫生....................................................................................................... 错误！未定义书签。
9.2消防....................................................................................................................... 错误！未定义书签。第十章项目管理与实施进度 .................................................................................. 错误！未定义书签。
10.1项目组织管理..................................................................................................... 错误！未定义书签。
10.2人力资源配置..................................................................................................... 错误！未定义书签。
10.3施工进度............................................................................................................. 错误！未定义书签。第十一章工程招标方案.......................................................................................... 错误！未定义书签。
11.1总则..................................................................................................................... 错误！未定义书签。
11.2招标方案............................................................................................................. 错误！未定义书签。第十二章项目投资估算与资金筹措....................................................................... 错误！未定义书签。
12.1投资估算依据..................................................................................................... 错误！未定义书签。
12.2建设投资估算..................................................................................................... 错误！未定义书签。
12.3流动资金估算..................................................................................................... 错误！未定义书签。
12.4资金筹措方案..................................................................................................... 错误！未定义书签。第十三章财务评价 ................................................................................................. 错误！未定义书签。
13.1成本分析............................................................................................................. 错误！未定义书签。
13.2销售（运营）收入............................................................................................. 错误！未定义书签。
13.3税金..................................................................................................................... 错误！未定义书签。
13.4项目财务评价..................................................................................................... 错误！未定义书签。
13.5不确定性分析..................................................................................................... 错误！未定义书签。
13.6财务评价结论..................................................................................................... 错误！未定义书签。
13.7社会效益分析...................................................................................................... 错误！未定义书签。第十四章结论与建议 ............................................................................................. 错误！未定义书签。
14.1结论..................................................................................................................... 错误！未定义书签。
14.2建议..................................................................................................................... 错误！未定义书签。
附图：
1、项目总平面布置示意图
第一章项目概况
1.1概述
1、项目名称：年产300吨松针提取原花青素生产线建设项目
2、承办单位：商洛市XXX科贸有限责任公司
3、项目负责人：张涛
4、建设性质：新建
5、项目单位基本情况
（1）项目单位简介
商洛市XXX科贸有限责任公司，是一家集研制、制造、销售为一体的专业性公司。公司始创于2007年，注册资金60万元，现有员工23人，其中本科及其以上学历者有12人，大专学历7人，中级职称的10人，平均年龄为33岁，下岗再就业人员13人，占总人数的56.5%，女员工14人，占总人数的60.8%。公司机构由总经理、科研部、市场部、生产部、财务部、综合部组成，科研部7人（总经理兼科研部部长），占总人数的30.4%，市场部15 人，占总人数的65.2%，生产部4人，财务部3人，综合部3人公司长期聘请有研发经验的教授、博导和高工为公司的技术顾问，制订了人才培养计划和定期技术讲座计划。公司设有专门的技术研发部，实行目标和责任管理。公司每年用于科研开发的经费占公司总收入的12%以上，使公司的科研开发有足够的经费保障。商洛市XXX科贸有限责任公司志存高远，以“发展高科技、服务大众”为宗旨。以做老百姓用得起的产品为目标，锐意进取，开拓创新，诚实守信，合作者满意。深受业界同仁好评。
（2）法人简介
张涛，男，汉，XXX年生，籍贯陕西省商洛市人，大学本科经济管理专业，陕西发明协会会员，热爱发明创造事业，现有XX项专利，其中发明专利XX项，实用新型XX项，外观专利XX项，专利产品转化XX 项。主持和参与了多项资源利用课题的研究，能准确把握行业的科技动向，不断推出自主创新产品；他积极实施产业报国，踏踏实实地为本区发展和振兴作贡献；他求实创新，始终把产业化和社会责任放在首位；他坚持科技做先导、人才做基础、管理做保证的工作思路，勇于创新，不断发展新技术，开发新产品，努力提高产品的范围、性能和质量，为新产品的开发做出了应有的贡献。商洛市XXX科贸有限责任公司在张涛同志的带领下，始终将科技创新放在重要位置，准确把握了行业科技动向及市场动脉，不断推出新产品，成功地规避了市场风险，使企业进入良性的发展轨道；同时企业在张涛的带领下，形成了一支具有开拓创新能力的优秀团队。
1.2编制依据和范围
1.2.1编制依据
（1）《商州统计年鉴》2012年；
（2）国家及有关行业颁布的现行有效的规范、标准、规程和规定等；
（3）国家发改委、建设部2006年发布的《建设项目经济评价方法与参数》（第三版）；
（4）《工程设计节能技术暂行规定》（GBJ6-85）；
（5）《投资项目可行性研究指南》（试用版）；
（6）《陕西省国民经济和社会发展“十二五”规划》；
（7）《建筑设计防火规范》（GB50016-2010）；
（8）《建设项目环境保护管理条例》国务院令第253号；
（9）《工业项目建设用地控制指标（试行）》（国土资发[2008]24号）；
（10）《中华人民共和国国民经济和社会发展第十二个五年规划纲要》；
（11）《《国务院关于扶持和促进中医药事业发展的若干意见》（国发〔2009〕22号）；
（12）《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》；
（13）项目单位提供的工艺技术及公用设施等设计基础数据和资料。
1.2.2编制范围
针对项目的特点、任务与要求，对其建设的背景、建设的意义和市场需求状况进行了认真的调查、研究与分析。在项目建设条件分析的基础上，对项目的建设内容、建设规模、建设资金等方面进行了全面的安排。通过定性分析和定量计算，深入分析论证了本项目建设的必要性、经济的合理性与实施的可行性。其主要内容如下：
（1）市场分析与项目建设规模
（2）建设条件与选址
（3）投资估算与资金筹措
（4）经济效益分析
（5）项目的结论及建议
1.3项目基本情况
1.3.1主要建设内容与规模
为满足人民身体健康对延寿抗衰老产品日益增长的需求，有效利用商洛地区松针资源丰富的优势，推动松针精深加工继承与创新,实现区域经济快速发展，提高公司市场竞争力，商洛市XXX科贸有限责任公司计划在商洛市商州区杨峪河镇实施“年产300吨松针提取原花青素生产线建设项目”，具体建设内容如下：
项目规划总用地面积13333.3平方米（合20亩）。设计总建筑面积9600平方米，其中生产车间4000平方米，仓库用房3800平方米，综合办公用房800平方米，职工生活及其他辅助用房1000平方米；购置国内外先进生产设备及检验设备、锅炉等35台（套）；配套建设道路与绿化、给排水、变配电、消防、围墙与大门、环保设施等公用辅助工程。
项目建成后，将形成年产松针提取物（原花青素）300吨的生产能力。
1.3.2项目选址
商洛市商州区杨峪河镇。
1.3.3项目投资
项目总投资2209.3万元，其中：固定资产投资1945.3万元，铺底流动资金264.0万元。项目建设资金由业主单位自筹解决。
1.3.4项目实施进度
本项目从可行性研究报告的编制开始到建成投产时间为16个月，
从2013年8月至2014年12月。项目具体实施计划如下：
（1）2013年8月～2013年9月完成可行性研究报告的编制及前期备案工作；
（2）2013年10月～2013年11月进行工程初步设计及施工图预算；
（3）2013年12月～2014年7月土建施工；
（4）2014年8月～2014年11月设备购置及安装调试；
（5）2014年12月工程竣工验收，并投入使用。
1.4项目建设的背景
1、政策背景
本项目建设符合《产业结构调整指导目录（2013年修定本）》第一类鼓励类十三、医药第4条、……中药材的深加工、纯化、质量控制新技术开发和应用，中药有效成份的提取、纯化、质量控制新技术开发和应用，中药现代剂型的工艺技术、生产过程控制技术和装备的开发与应用，……。
2、项目提出背景
商州区地处秦岭山脉，森林覆盖面积达2400多万亩，特别松林面积达90%以上资源非常丰富。商洛松针富含硒、钼微量矿元素、抗菌素、叶绿素、多酚、原花青素等多种纯天然植物抗衰老物质。
随着中药现代化、国际化步伐的日益加快，特别是省委、省政府作出建设陕南现代中药产业基地的重大决策之后，商洛市加大了中药现代化战略的实施力度。市政府成立了由市长任组长、分管副市长为副组
长，财政、发改、林业、农业、科技等部门为成员单位的产业领导小组和中药现代化办公室，专门负责中药产业发展的组织、领导和协调运作。落实了各级各部门支持中药产业发展的具体责任，同时把“现代中药”作为全市重点发展的支柱产业。本项目利用松针所含纯天然植物抗衰老物质，制成高品质的延寿抗衰老产品，提升了松针药用价值，提升了松针科技含量，提高了松针资源高度利用，有效利用松针资源，将松针变废为宝。
3、发展背景
（1）松针的利用现状
松针是松树类植物的主要副产物之一,是一种再生速度快、一年四季均可采收、分布广泛、天然蓄积量大、可持续利用的天然再生资源。我国有丰富的松针资源, 而且品种多、分布既广又相对比较集中。我国现有松林面积约为61006700 万公顷, 仅松针叶的蕴藏量就在1 亿吨以上。
松针的利用在我国古代就已经开始进行了研究。民间用松针作草药或作蒸糕点的垫料( 有保鲜味美的作用)。现在人们已对松针的化学成分、毒理、病理、药理、生理等基础研究和松针的药用、食用、饲用、生产化工原料等的应用研究都做了大量的工作, 并取得丰硕的成果。
在药用方面，目前国内已试制出了松针流感晶, 松针口服糖浆、护肤美容膏、护肤冻疮膏、松针跌打油等, 这些主要是利用松针中生物活性物质的功效。
在食用方面，松针中含有丰富的营养素, 如马尾松针中含蛋白质7%～16%、脂肪 2.2%～13.1%、多缩戊糖 5.2%～7.0%、钙0.45%～
2.41%、磷0.03%～0.07%、叶绿素7942220 mg/ kg、胡萝卜素72344 mg/ kg、并含有18 种以上的氨基酸、40 余种矿物元素、多种维生素( 其中维生素E较高, 可达500 mg/ kg 左右)；还含有纤维素、黄酮、激素、萜类化合物等。这些物质都较适合于人体生长发育的需求, 而松针的毒性甚微, 人体食用安全可靠, 因而松针是人类食用源的良好材料之一, 采用适当的加工工艺, 能有效地保护和强化松针的营养素, 消除不良物质或因素的影响, 制备出质优的天然营养保健食用品, 目前主要开发的产品有: 保健运动饮料、食品添加剂、松针酒、松针果酒、松针糖果、茶等。
在饲用方面，松针对畜禽鱼等动物的生长发育有良好的功效,松针饲料或饲料添加剂对畜禽的生长发育有明显的促进作用, 能提高饲料的利用率, 增强畜禽鱼抗病能力, 能提高肉类动物的胴体重量, 提高毛皮动物的毛皮质量以及禽类的产蛋率、受精率、孵化率。
在其他方面，可制备松针纤维素板、松针可降解快餐盒、松针超强吸水剂、松针人造丝、松针燃料油、松针叶精油、松香、香脂膏、药用松针浸膏、松针栲胶、糠醛、胶粘剂、脱镁叶绿素、叶绿酸钠、复合氨基酸、松针蜡、松针抗氧化剂、除臭剂、松针杀菌防腐保鲜剂和室内空气清新净化剂等产品。
（2）原花青素简介
原花青素( proanthocyanidin)是植物王国中广泛存在的一大类多酚物质的总称, 是由不同数量的儿茶素或表儿茶素缩合而成。最简单的原花青素是儿茶素或表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体、三聚体、四聚体等直至十聚体。按聚合度的大小, 通常将二~四聚体称为低
桑葚中花青素的提取与检测 桑椹所含花青素色价高、抗氧化能力强，是一种理想的营养强化剂和着色剂[1]。桑椹最大加工品为桑椹汁。为了去除生长过程和收获环节原料沾带的杂质及微生物，桑椹汁加工前需对原料进行有效清洗。花青素易极溶于水，更易溶于乙醇等亲水有机溶剂，因此，桑椹清洗水呈浓重的紫黑色，表明桑椹果实中的一部分花青素已溶于清洗水。在以往的研究中发现，盐酸、柠檬酸等溶液对花青素具有一定的保护作用[2]。由于桑椹汁加工中原料需经历灭酶、浓缩、杀菌等诸多强热处理以及冗长的加工过程，产品中的花青素损失、劣化严重。如能在热处理以前的清洗过程提取分离出部分花青素，既避免了有效成分的破坏，又可获得高品质的副产品，使桑椹资源合理、充分地利用。为此，依据桑椹汁加工流程，设想在不影响主产品产量和品质的前提下，通过选择对桑椹花青素溶出效率高的浸提介质和对原料整体性破坏较小清洗方法，在桑椹汁加工前分离出部分高品质花青素。 1 实验材料、流程及检测方法 1.1 实验材料 桑椹为北京大兴区产，品种为黑珍珠。采集完熟果实并剔除烂果及杂质，低温贮藏。 1.2 实验试剂和主要仪器 无水乙醇、盐酸、氢氧化钠、柠檬酸、柠檬酸钠购于北京化学试剂公司；AB-8 大孔树脂购于南开大学化工厂；ZFQ85A 旋转蒸发器，上海医械专机厂；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；JA1003N 电子天平，上海精密科学仪器有限公司；GZX-9023MBE 数显鼓风干燥箱，上海博讯实业有限公司医疗设备厂；PHS-25 型酸度计，上海精密科学仪器有限公司紫外—可见分光光度计，北京普析仪器有限公司。高效液相色谱，安捷伦科技有限公司 1.3 实验流程 依据主要产品为桑椹浓缩汁的加工流程，在清洗水中提取桑椹花青素的试验工艺流程确定为：桑椹果实——强化清洗——洗水精滤——上柱吸附——解吸——浓缩脱溶——干燥——花青素粗提物为了保持桑椹鲜果的完整性，避免因破损造成的糖和酸的溶出损失，增加花青素浸提量，提高浸提液中花青素含量，降低果胶等胶体物质进入，清洗过程将采用对原料损伤较轻的模拟移动床逆流淋浸原理，以阶段浸泡、逆流阶段浸泡、逆流淋洗为浸提单元组合浸提流程。 并尝试使用蒸馏水及对花青素具有良好溶出和保护效果，且对主产品生产无明显不利影响的柠檬酸和乙醇溶液为浸提介质。在吸附分离工序将比较、优选分离花青素常用的AB-8、D101、NKA、X-5 中的优者为吸附介质[3]。 1.4 实验方法 清洗介质：5%柠檬酸溶液、5%乙醇溶液、蒸馏水。 清洗方法：以1:1 料水比循环喷淋5min、浸泡2min、逆流淋浸（3 级以上，2min/级）。 精滤介质：0.45μm 微滤膜。 吸附介质：大孔树脂AB-8、D101、NKA、X-5。 吸附解吸参数：上样流量2BV/h，0.1%HCL 的80%乙醇洗脱[4]。 色价的测定[5]：用分光光度计测定10g/L 色素溶液在最大吸收波长处的吸光值后，依据郎伯—比尔定律计算色价。桑椹色素的色价E1cm1%（λmax）为：E1cm1%（λmax）=色
年产300吨松针提取原花青素生产线建设项目可行性研究报告 建设单位：商洛市XXX科贸有限责任公司 建设地点：商洛市商州区杨峪河镇 编制日期：二○一三年八月
目录 第一章项目概况 (4) 1.1概述 (4) 1.2编制依据和范围 (5) 1.3项目基本情况 (7) 1.4项目建设的背景 (8) 1.5项目建设的意义及必要性 (12) 1.6项目经济技术指标 (15) 第二章市场分析 (17) 2.1项目市场分析 (17) 2.2相关领域国内外技术现状 (18) 2.3市场风险分析及措施 (19) 2.4营销策略............................................................................................................... 错误！未定义书签。第三章产品方案与建设规模 . (22) 3.1产品方案 (22) 3.2建设内容 (22) 第四章建设条件和场址选择 (24) 4.1建设条件 (24) 4.2场址选择 (29) 第五章工程技术方案 (31) 5.1工艺技术方案 (31) 5.2设备选型............................................................................................................... 错误！未定义书签。 5.3土建工程............................................................................................................... 错误！未定义书签。第六章总图运输与公用辅助工程 .......................................................................... 错误！未定义书签。 6.1厂区概述............................................................................................................... 错误！未定义书签。 6.2总图布置............................................................................................................... 错误！未定义书签。 6.3公用工程............................................................................................................... 错误！未定义书签。第七章环境影响评价 ............................................................................................. 错误！未定义书签。 7.1设计依据............................................................................................................... 错误！未定义书签。 7.2环境影响分析....................................................................................................... 错误！未定义书签。 7.3环境保护措施....................................................................................................... 错误！未定义书签。 7.4综合评价与结论................................................................................................... 错误！未定义书签。第八章节能、节水 ................................................................................................. 错误！未定义书签。 8.1概述....................................................................................................................... 错误！未定义书签。 8.2设计原则及依据................................................................................................... 错误！未定义书签。 8.3能耗分析............................................................................................................... 错误！未定义书签。 8.4节能、节水措施................................................................................................... 错误！未定义书签。第九章劳动安全卫生与消防 .................................................................................. 错误！未定义书签。 9.1劳动安全卫生....................................................................................................... 错误！未定义书签。 9.2消防....................................................................................................................... 错误！未定义书签。第十章项目管理与实施进度 .................................................................................. 错误！未定义书签。
葡萄籽中分离提取原花青素的研究 花青素是一类多酚类化合物，其具有高效的清除自由基的功能，是一种新型、高效、低毒的天然抗氧化剂。本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。研究结果表明：本项目产品投资费用少，操作费用低，产品附加值高；原料为废物利用，变废为宝符合国家相关产业政策；几乎没有“三废”排放，使用的溶剂全部回收利用，废渣可以作为造纸或者饲料综合利用。 标签：花青素；葡萄籽；提取；正交实验 1 概述 原花青素是广泛存在于植物中的一类天然多酚类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。属于缩合鞣质或黄烷醇类。最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红。它于1879年在意大利上市。 由于原花青素的多种功效，由葡萄籽提取的原花青素已被我国卫生部批准为保健原料。目前对原花青素的提取研究及保健作用研究已非常成熟。已经将其应用到工业化产业，开发出多种原花青素的保健产品和化妆产品。原花青素的产品已被广大消费者普遍接受。 2 葡萄籽中花青素的提取 本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。并通过设计正交实验，得出原花青素提取最佳工艺条件。 2.1 实验方法 2.1.1 葡萄籽中原花青素的提取 本实验采用甘肃紫轩酒业葡萄酒厂生产葡萄酒产生的葡萄籽下脚料作为本实验的原材料。在生产葡萄酒压榨葡萄汁的糟粕和葡萄酒生产前和发酵后压榨的榨粕，所得的这些榨渣中，以换成干品计，约有50%的葡萄皮，45%的葡萄籽和少量的梗等，将该榨渣经粗选分离出葡萄籽，作为提取的原料。 所得的葡萄籽用粉碎机粉碎后，过20目筛，于磨口三角瓶中，经石油醚脱脂脱水份，得脱脂葡萄籽粉，用一浸提液在50℃的恒温水浴中回流浸提，离心后取上清液，反复提取若干次，最后洗涤残渣，将上清液和洗涤液合并，加入固体无水硫酸钠脱水，倾出上层溶液，在真空度为0.095MPa，温度为40℃的条件下真空浓缩，浓缩液冷却至室温，得到原花青素粗提液，干燥，制得粗提物。测
桑椹酒渣中花青素提取 1材料与方法 1.1材料 桑椹果酒酒渣。 1.2试剂药品 试验所用95%乙醇、浓盐酸、30%过氧化氢、Na2SO3等试剂均为分析纯。 1.3主要仪器 电子分析天平、分光光度计、旋转蒸发仪、酸度计、高速冷冻离心机、电热恒温水浴锅等。 1.4方法（稀HCl+95%乙醇提取） 样品称量，用提取剂提取，过滤（减压过滤/板框过滤），所得的提取液按一定比例稀释（pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀）释后在分光光度计上测出OD值，以OD值代表桑椹红色素的含量。 1.4.1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较 分别以75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）作为提取剂，以物料与提取剂之比1：10提取桑椹色素，提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。 1.4.2不同物料与提取剂之比对花青素提取的影响（此时用提取效果最好的提取剂）。 1.4.3温度对提取效果的影响 以最佳结果作为桑椹提取剂，分别于60、50、40、30、20℃下提取1h。 1.4.4提取时间对提取效果的影响 每隔20分钟取样测得OD值。 1.4.5正交实验 1.4.6得率试验 称取一定量样品，经提取后。提取液经旋转蒸发仪蒸发，真空干燥，求得率。 方法一稀HCl+95%乙醇提取 1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较 固定浸提温度、提取时间、液料比，分别85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）、0.15%稀HCl +95%乙醇（1：1）为提取剂进行浸提试验，色 素提取液分别采用pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀释一定倍数(吸光值在0.2~0.8之间)，将稀释液静置15min，分别测定两种样品稀释液ODλmax和700nm处的吸光值A。按公式计算桑椹花色苷含量，分析提取溶剂对花色苷提取量的影响。 注：ODλmax的确定分别以85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）、0.15%稀HCl +95%乙醇（1：1）作为提取剂，以物料与提取剂之比1：10提取桑椹色素，提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。 2不同物料与提取剂之比对花青素提取的影响（此时用提取效果最好的提取剂）。 分别称取2.0g酒渣，按液料比5、10、15、20、25、30加入相应体积的浸提溶剂，在40℃下避光提取2h后，抽滤、离心(3000rpm，10min)。取1mL清液，用pH 1.0和pH 4.5的缓冲溶液稀释(吸光值在0.2～0.8之间)，分别测定两种样品稀释液在ODλmax和700nm处的吸光值A，按公式计算花色苷含量，并对液料比作图，分析液料比对色素提取量的影响。
本技术涉及植物有效成分的提取，具体地说，本技术提供了一种从越橘中提取原花青素的生产方法，将越橘原料粉碎后经负压空化法提取，超滤有机膜过滤，树脂纯化步骤，得到原花青素制品。本技术所述方法提高了原花青素的收率，减少对环境的污染，并有利于工厂生产的进行和生产成本的降低。 权利要求书 1.一种从越橘中提取原花青素的方法，其特征在于，包含如下 步骤： （1）粉碎：将越橘洗净、干燥、粉碎、过筛，得到越橘粉末； （2）提取：将越橘粉末及提取溶剂加入负压空化设备，料液比 为1:4～1:6，进行负压空化提取，过滤得到提取液； 其中，提取溶剂为乙醇-水混合物，乙醇与水的体积比为6:4～8:2， 压力为-0.08MPa～-0.06MPa，提取次数2～3次，提取时间30～60min， 提取温度为25～40℃； （3）膜分离：将步骤2）得到的提取液经超滤有机膜截留，得到 透过液； （4）树脂纯化：将步骤3）得到的透过液上预处理好的大孔吸附
树脂柱，先用去离子水洗脱至无糖，再用5～10倍柱体积、质量浓度为20～50%的乙醇水溶液洗脱，得到洗脱液；浓缩洗脱液并干燥，得到原花青素。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）取越橘 洗净、60℃真空干燥，用机械粉碎法进行粉碎，过80目筛。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中越橘 粉末与提取溶剂的料液比为1:5，提取溶剂中乙醇与水的体积比为3:2，压力为-0.08MPa，提取2次，提取时间30min，提取温度为40℃。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中先经 截留分子量为500～1000的超滤有机膜截留，收集截留液，弃透过液，收集到的截留液再经截留分子量为50000～100000的超滤有机膜截留，得到透过液。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中大孔 吸附树脂是AB-8、XAD-7、XAD-10或D101。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中洗脱 液经浓缩后，冷冻干燥或喷雾干燥，得到原花青素制品。 说明书
紫甘蓝中花青素的提取研究 【摘要】蓝花青素具有很强的抗氧化作用，具有清除体内自由基、过敏、保护 胃粘膜等多种功能，引起了国内外学者广泛关注。目前抗变异、抗肿瘤、抗，对花青素的研究主要集中于花青素的提取、分离纯化、热稳定性、抗氧化性及其生理功能等方面。本文主要研究了紫甘蓝花青素的提取工艺;用大孔树脂初步纯化紫甘蓝花青素;对紫甘蓝花青素纯度鉴定。采用“溶剂提取、萃取、树脂纯化、薄层色谱”相结合的方案对紫甘蓝花青素进行了分离纯化。 【关键词】紫甘蓝花青素提取分离纯化 1.1引言 花青素作为可使用色素之一，具有多种生物学作用，将广泛用于食品加工、医药保健品、化妆品行业。虽然国内外己开展了一些研究，主要集中在花青素粗品的提取方法的研究方面，而对紫甘蓝花青素的组成及分子结构鉴定、生物学活性、药理作用的研究还很少，还需要大量数据为其进一步开发和利用提供理论依据。 2.1材料与方法 2.1.1实验材料 新鲜紫甘蓝 2.1.2实验方法 溶剂提取、萃取、树脂纯化、薄层色谱 2.2主要仪器、试剂 分析天平、外分光光度计、环水式多用真空泵、心机、旋转蒸发仪、恒温水浴锅、无水乙醇、甲醇、孔树脂、浓盐酸。 2.3实验方法 2.3.1紫甘蓝色素的提取 取新鲜80G的紫甘蓝叶片于大杯中加入一定的浸提剂，吸取一定体积的浸提液于 1 Oml比色管中，用浸提剂稀释至刻度，用浸提剂做空白，测定其对520nm光的吸光度。采用溶剂提取法。称取紫甘蓝80g，用500ml的60%乙醇和1%盐酸混合液进行捣碎浸提8层纱布过滤，4℃条件下静置3h，离心测OD 值。 2.3.2紫甘蓝色素的初步纯化 大孔树脂预处理的方法:将待处理的大孔树脂装入柱中，用95%乙醇浸泡24h一用95%乙醇2}4BV冲洗一用去离子水洗至无醇味一5%氢氧化钠溶液2}4BV冲洗树脂柱一水洗至中性一10%乙酸2}4BV冲洗通过树脂柱一水洗至中性，备用。滤液用5倍的纯水稀释，大孔吸附树脂法分离，往吸附柱中先用15%乙醇除杂，再用60%乙醇洗脱收集洗脱液；用四分之一的盐酸在90℃条件
*花青素的提取: 花青素的提取是目前花青素研究发展的热点问题，也是花青素生产、投入使用的关键性环节。近年来，在传统提取方法的基础之上，一些凭借新技术或经过改良后的提取方法也开始崭露头角。 1有机溶剂萃取法 这是目前国内外最广泛使用的提取方法。多数选择甲醇、乙酮、丙酮等混合溶剂对材料进行溶解过滤，通过调节溶液酸碱度萃取滤液中的花青素。国内吴信子等用盐酸一甲醇溶液提取，然后用纸层析法(中号)和柱层析法(聚乙酰胺)进行花色苷的分离。目前，有机溶剂萃取法已成功地应用于诸如葡萄籽、石榴皮、蓝莓等绝大多数含花青素物质的提取分离。有机溶剂萃取法的关键是选择有效溶剂，要求既要对被提取的有效成分有较大溶解度，又要避免大量杂质的溶解。该方法原理简单，对设备要求较低，不足之处是大多数有机溶剂毒副作用大且产物提取率低。 2水溶液提取法 有机溶剂萃取的花青素多有毒性残留且生产过程环境污染大，有鉴于此，水溶液提取应运而生。该方法一般将植物材料在常压或高压下用热水浸泡，然后用非极性大孔树脂吸附；或直接使用脱氧热水提取，再采用超滤或反渗透，浓缩得到粗提物。它是Duncan和Gilmour(1998)发明的提取花青素的方法，此方法设备要求简单，但产品纯度低。 3超临界流体萃取法 超临界流体萃取是利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响进行提取。这种方法产品提取率高，但设备成本过高。孙传经采用超临界CO：萃取法从银杏叶、黑加仑籽及葡萄籽中提取花青素工艺进行了研究。该工艺中CO 和改性剂可循环使用，对环境无污染。 4微波提取法 该法于1986年被Ganzlert E9]等人首先用于分离各种类型化合物。国内李风英探讨了微波技术对葡萄籽中原花青素提取量和分子结构的影响。为微波在葡萄籽中有效成分浸提方面的研究奠定了基础。微波提取法是利用在微波场中，吸收微波能力的差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使得被萃取物质从基体或体系中分离，进入到具有较小介电常数、微波吸收能力相对较差的萃取溶剂中。该技术选择性好，萃取率高，速度快，操作简单，废液排放量少。 5超声波提取法 超声波在20世纪50年代后逐渐应用于化学化工生产过程之中，且主要集中在植物中药用成分、多糖以及其它功能性成分的提取等研究领域。超声波提取运用前景好、操作简单、快速高效、生产过程清洁无公害。2008年时，Corrales【12]等人开展的不同提取方法对葡萄中花青素的提取率影响的对比实验结果表明：相同条件下与热浸70~(2提取相比，超声波辅助提取花青素等酚类的效率可以提高50％以上。 6微生物发酵提取法 此方法将生物发酵技术应用于花青素的提取之中，是生物科学与化工生产之间的超强渗透与有效结合。微生物发酵法利用微生物或酶让含有花青素的细胞胞壁降解分离，使细胞胞体内花青素充分溶入到提取液中，从而增加提取的产率与速率。王振宇I1 采用微生物和纤维素酶降解大花葵细胞壁提取花青素就是可靠的研究实例。该方法的优点是操作稳定性及可靠性高，环境友好。
原花青素的分离纯化 一、实验目的 对上一步提取的原花青素进行分离纯化，熟悉实验相关仪器设备及过程 二、仪器、材料及试剂 原花青素提取液、原花青素标准品、大孔树脂、75%乙醇、60%乙醇（作解吸剂）、50%乙醇（作洗脱剂）、盐酸（磷酸或乙酸）、分析天平、带筛板的玻璃柱（可无筛板，但是要脱脂棉或者用酸式滴定管改装（尝试性），同样需要脱脂棉）、紫外分光光度计（286nm）（可用可见光分光光度计（536nm）代替）、真空干燥箱（用真空泵+密封的抽滤瓶（尝试）代替）、PH计、铁架台、漏斗（小号）、小试管若干（不少于5支）、试管架、烧杯若干（不少于3个）、玻璃棒、滴管、锥形瓶 三、实验步骤 大孔树脂的预处理： 新购树脂含有未聚合单体、致孔剂、分散剂等残留的杂质成分，使用前必须加以处理。 将新购大孔树脂用乙醇浸泡24h，充分溶胀，取一定量湿法装柱，先用适当浓度的乙醇清洗至洗出液加等量蒸馏水无白色浑浊为止，再用蒸馏水洗至无醇味且水液澄清，备用。通过乙醇(或甲醇)与水交替反复洗脱，可除去树脂中的残留物，一般洗脱溶剂用量为树脂体积的2～3倍，交替洗脱2～3次，最终以水洗脱后即可使用。
大孔树脂动态饱和吸附曲线图的绘制： 1、将试验中需要用到的50%乙醇、60%乙醇的PH用盐酸调至5，在波长为286nm（如果采用可见光分光光度计则为536nm）测定原花青素提取液的吸光值（以75%的乙醇溶液为对照） 2、取一定量的大孔树脂于烧杯中缓慢倒入50%的乙醇溶液（同时搅拌），搅拌至可流动的糊状，取一支干净的带筛板的玻璃柱，将糊状大孔树脂加入玻璃柱，用手指轻轻敲打玻璃柱，使大孔树脂均匀铺在玻璃柱底部（用烧杯接住此时流出的液体），用50%的乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出液，直至与水混合不呈白色浑浊为止（乙醇：水一1：5）。然后以大量蒸馏水洗去乙醇（必须洗净乙醇，否则将影响吸附效果），待用。将样品液直接或拌入树脂中加到已处理好的大孔吸附树脂柱柱顶，拌样时样液和树脂的比例为1：（2～3）。（乙醇湿法装柱） 3、沿玻璃柱壁缓慢加入洗脱剂（50%的乙醇溶液，PH为5），使其覆盖在大孔树脂上方，厚度约为0.5cm，用滴管吸取原花青素提取液沿玻璃柱壁加入玻璃柱，再沿玻璃柱壁缓慢加入流动相（洗脱剂），使原花青素提取液流入大孔树脂床，并用试管在下方接收流出液 4、每5ml（大约）接收一份流出液，测定吸光值，重复此流程直至流出液的吸光值相近，根据所测数据绘制大孔树脂动态饱和吸附曲线图 饱和大孔树脂的解吸： 5、向玻璃柱缓慢加入60%的乙醇溶液（PH为５）进行解吸，用
花青素的提取方法 花青素，是一种热敏性活性物质。属于水溶性多酚黄酮类化合物，其特殊的结构和化学成分赋予了花青素多种生物活性，这些活性物质对温度较为敏感，当所在环境温度超过一定界限后，就会失活，也就是我们俗话说的死掉。（比如我们都知道，乳酸菌、益生菌等都属于热敏性活性物质，不能加热，否则失去活性就会失去其主要作用。）花青素失活就会失去其特有的功效作用。 21世纪高新科技，冻干技术 冻干，全称真空冷冻干燥，是将湿物料或溶液在较低的温度（－10℃～－50℃）下冻结成固态，然后在真空下使其中的水分不经液态直接升华成气态，最终使物料脱水的干燥技术。 冻干的基本原理是基于水的三态变化。水有固态、液态和气态，三种相态既可以相互转换又可以共存。当水在三相点时，水、冰、水蒸气三者可共存且相互平衡。在高真空状态下，利用升华原理，使预先冻结的物料中的水分，不经过冰的融化，直接以冰态升华为水蒸汽被除去，从而达到冷冻干燥的目的。 破壁技术，充分释放有效成分 我们知道浆果中含花青素最多的部分是皮和籽，先不说这两部分很难下咽，一般人吃不下去，就算我们强忍吞下，也难以消化吸收，相信很多人知道果皮和果籽经常可以在大便中看到，就是因为人类的肠胃很难消化吸收它们的缘故。
植物细胞动物细胞不同，植物细胞外还有一层厚厚的细胞壁，其主要成分就是纤维素，硬硬的壳把细胞紧紧的包裹在里面。人类的消化液无法破坏植物细胞，要吸收植物的所有营养成分，必须将其外壁破坏。 细胞破壁技术就是通过打破植物细胞壁，营养成分在未遭到破坏的情况下可以完全释放出来，使营养更好地被吸收和保持活性成分的技术，释放植物生化素，最大限度地融合其中的膳食纤维、维生素及其他营养元素。这是当今最先进的食品加工技术。 破壁技术可使有效物质得到充分释放，食品的营养成分和功效作用将提高至少10倍，利于人体吸收。 超微技术，最大化吸收有效成分 冻干花青素采用超微粉碎技术，将九种浆果冻干后破壁粉碎为约2000-3000目（目数越大，分子越小，越容易吸收）的超微粉剂，大约为5μm（微米）的直径。（注：一般人体的毛孔直径为20μ）如此微小分子的花青素粉剂，可以直接被人体肠道所吸收而快速作用于人体，做到最大化吸收有效成分，最大化发挥花青素功能作用。 生活中我们吃的食物，尤其是蔬菜时，都是经过加热（蒸煮煎炒炖）为熟食，食物中的花青素早已失去活性，成为无效物质了，这就是为什么我们日常也经常食用富含花青素的水果蔬菜，却没感受到花青素的强大功效的原因。而冻干花青素采用国际先进的冻干技术，可保持花青素活性，发挥其应有的功效。
原花青素是葡萄籽中的主要成分之一，是一种强效抗氧化剂，不过对于原花青素的认识，不少人会将其与花青素混淆，事实上，花青素与原花青素并不是同一种 物质，二者存在多方面的差异。 原花青素也叫前花青素，英文名是Oligomeric Proantho Cyanidins 简称OPC，是一种在热酸处理下能产生花色素的多酚化合物，是目前国际上公认的清除人体 内自由基有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多 有机溶剂。原花青素属于植物多酚类物质，分子由儿茶素，表儿茶素(没食子酸) 分子相互缩合而成，根据缩合数量及连接的位置而构成不同类型的聚合物，如二聚体、三聚体、四聚体十聚体等，其中二到四聚体称为低聚体原花青素(Oligomeric Proanthocyanidins ，缩写为OPC) ，五以上聚体称为高聚体。在各聚合体原花青素中功能活性最强的部分是低聚体原花青素(OPC) 。部分二聚体、三聚体、四聚体的结构式。通常把聚合度小于 6 的组分称为低聚原花青素,如儿茶素、表儿茶素、原花青素B1 和B2 等,而把聚合度大于 6 的组分称为多聚体。一般认为,药用植物提取物中存在的低聚原花青素是有效成分,它们具有抗氧化、捕捉自由基等多种生物活性。
花青素(Anthocyanidin) ，又称花色素，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性 天然色素，属黄酮类化合物。也是植物花瓣中的主要呈色物质，水果、蔬菜、花 卉等颜色大部分与之有关。在植物细胞液泡不同的pH 值条件下，使花瓣呈现五彩缤纷的颜色。在酸性条件下呈红色，其颜色的深浅与花青素的含量呈正相关性， 可用分光光度计快速测定，在碱性条件下呈蓝色。花青素的基本结构单元是 2 一苯基苯并吡喃型阳离子，即花色基元。现已知的花青素有20 多种，主要存在于植物中的有：天竺葵色素(Pelargonidin) 、矢车菊色素或芙蓉花色素(Cyanidin) 、翠雀素或飞燕草色(Delphindin) 、芍药色素(Peonidin) 、牵牛花色素(Petunidin) 及锦葵色素(Malvidin) 。自然条件下游离状态的花青素极少见，主要以糖苷形式 存在，花青素常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖等通过糖苷键 形成花色苷。已知天然存在的花色苷有250 多种。 花青素与原花青素的区别，首先从化学结构来看，花青素与原花青素是两种完全 不同的物质，原花青素属多酚类物质，花青素属类黄酮类物质。原花青素也叫前花青素，在酸性介质中加热均可产生花青素，故将这类多酚类物质命名为原花青素。
让花青素提取纯化更合理、更高效、更可靠花青素(anthocyan)，又称花色素，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，其颜色随pH 值的变化而变化，pH =7时呈红色，pH在7 ～8之间时呈紫色，pH > 11 时呈蓝色。花青素因其在清除自由基抗氧化、延缓衰老、保护视力、抗过敏、预防心血管疾病等方面的保健功能而被大众所熟悉与关注，被越来越多的应用于保健食品、化妆品等行业。 花青素提取是植物提取行业中一个非常重要的品种领域，提取纯化方法也较多，但受保健食品与化妆品行业对原料溶剂残留的严格限制要求，目前行业使用较为普遍的是水提+大孔吸附树脂吸附的工艺，即将植物原料在常压或高压下用水浸提，经必要的过滤预处理后，提取清液采用非极性大孔吸附树脂吸附富集，再用乙醇解析。 花青素提取植物原料来源主要包括浆果类（越橘、蓝莓、黑加仑、黑枸杞、桑葚、黑果花楸等）、蔬菜类（紫薯、紫甘蓝、黑萝卜等）、杂粮类（黑米、黑豆）、花卉类（玫瑰茄）。不同植物原料来源的花青素类物质因其分子结构、提取料液组分等的不同，为了达到更好的分离纯化效果，需要选择不同类型的吸附树脂进行富集纯化，蓝晓科技在多年的花青素树脂分离纯化研究与工业实践过程中，开发出了适用不同原料进行花青素提取的树脂产品与应用工艺，可满足不同原料提取的花青素纯化。例如：浆果、花卉类植物来源花青素，可使用蓝晓Seplite? XDA-6大孔吸附树脂，该树脂具有吸附量大，花青素选择性高，吸附、洗脱效率高等特点；蔬菜类植物来源花青素，可使用蓝晓Seplite? LX-68M、Seplite? LX-32大孔吸附树脂，该类树脂吸附容量大，成品含量与溶解度大幅提高，便于后端应用开发。
--巴科医药 植物提取物原花青素提取工艺 原花青素可以显著提高机体抗衰老能力，改善心血管功能，预防高血压，增强人体抗突变反应能力，甚至对动脉硬化、胃溃疡、肠癌、白内障、糖尿病、心脏病、关节炎等疾病都有治疗作用。追本溯源，原花青素最重要、最根本的作用是清除体内多余自由基，其他功能应该说都是它的衍生功能。 葡萄籽愿花青素的提取和分离可采用甲醇、乙醇、丙酮等极性较大的溶剂冷浸，提取物用乙酸乙酯等溶剂萃取，萃取物用柱层析法分离，可采用葡聚糖凝胶柱层析、手性吸附柱层析、高效液相层析等。在原花青素中，以低聚原花青素(OPC)特别是二聚体抗氧化性最强，因此低聚原花青素在葡萄籽提取物中的含量已成为产品质量的最关键指标。 1．原花青素的提取 葡萄籽是葡萄酒的副产品，占整粒葡萄的4%～6%。葡萄籽壳中原花青素含量比仁中的要高很多。目前普遍采用先脱脂后提取工艺，脱脂方法对原花青素的提取率和质量会产生影响。脱脂方法有压榨法、溶剂法和超临界C02萃取法等。压榨法因其提取率低，浪费大，现已不多见。溶剂法是目前最常用的方法，所需设备简单，成本低廉，且提取率也可观。另外，用超临界C02萃取，因为没有光和空气的干扰，可以减少在其他提取方法中遇到的聚合度降低的现象。Tipsrisukond等报道，用超临界C02萃取法得到的提取物比用传统方法所得到的抗氧化性高很多，且提取物无须浓缩。但该法对工艺要求较高，目前还不易于推广。 油脂分离之后，一般采用乙醇或丙酮等有机溶剂来对籽壳进行萃取，得到的壳渣经加热脱除溶剂，溶剂可以循环使用。萃取液 经过滤、喷雾干燥，即可得到原花青素粗品。 2．原花青素的提纯 原花青素粗提物的精制可采用溶剂萃取分级、活性炭吸附分离、大孔树脂吸附层析分级等方法。另外还有醋酸铅沉淀法，聚乙烯毗咯烷酮(PVP)吸附法等精制方法，但前者须脱铅，繁琐费时，脱铅不完全还将影响食用；后者价格昂贵，不经济。而溶剂萃取法简便，省时经，是精制葡萄籽中原花青素的较好方法。吸附层析法则可使溶剂洗脱产物纯度提高到90%以上，洗脱物比粗提物更适用于功能性食品和医药。 溶剂分级精制 取一定量粗制原花青素，加入醇水配制成溶液，然后用乙酸乙酯进行分级萃取，比例为1: 3.5（原花青素溶液：乙酸乙酯）。水层则再用正丁醇进行萃取。经测定，乙酸乙酯萃取液
2008年第34卷第8期(总第248期) 111 花青素的提取、分离以及纯化方法研究进展3 孙建霞,张 燕,胡小松,吴继红,廖小军 (中国农业大学,教育部果蔬加工工程研究中心,北京,100083) 摘 要 花青素是一种存在于自然界的水溶性多酚类化合物,现已发现其具有多种功能。有关花青素的提取、分离和纯化研究报道很多,文中就近年来国内外相关方面的研究进展进行了分析。关键词 花青素,提取,分离,纯化 花青素(ant hocyanins )又称花色素,是一类广泛 存在于植物中的水溶性天然色素,多以糖苷的形式存在,也称花色苷。最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红,它于1879年在意大利上市。花青素的结构母核是22苯基苯并吡喃阳离子,属于类黄酮化合物。自然界已知的花青素有22大类,食品中重要的有6类,即矢车菊色素(cyanindin ,Cy )、天竺葵色素(pelargonidin ,Pg )、飞燕草色素(delp hin 2 idin ,Dp )、芍药色素(peonidin ,Pn )、牵牛色素(pet u 2nidin ,Pt )和锦葵色素(malvidin ,Mv )[1],其结构如图1所示。它们在植物可食部分的分布比例分别为50%、12%、12%、12%、7%和7%。花青素广泛存在 于开花植物(被子植物)的花、果实、茎、叶、根器官的 细胞液中,分布于27个科,72个属的植物中[2]。其中尤以葡萄皮、阿龙尼亚苦味果、黑醋栗、草莓、树莓、越橘等含量最为丰富。 图1 食品中几种重要的花青素结构 第一作者:博士研究生(廖小军教授为通讯作者)。 3国家自然科学基金项目(30771511),国家“十一五”支撑计划(2006BAD27B03),国家863计划(2007AA100405)资助 收稿日期:2008-04-24,改回日期:2008-06-13 自然条件下游离的花青素极少见,常与一个或多 个葡萄糖(gluco se )、鼠李糖(rhamnose )、半乳糖(ga 2lactose )、木糖(xylo se )、阿拉伯糖(arabinose )等通过 糖苷键连接形成花青素,花青素中的糖苷基和羟基还可以与一个或几个分子的香豆酸、阿魏酸、咖啡酸、对羟基苯甲酸等芳香酸和脂肪酸通过酯键形成酰基化的花青素[1]。 目前国内外有关花青素的研究主要集中在花青 素资源分布的评价与资源库的建立、花青素的定性与定量方法学研究、花青素的生理活性与功能研究、花青素的高效提取与绿色分离技术研究、花青素的结构稳定性与分子降解机制研究、花青素的应用与产品开发研究6个方面,这些内容的深入研究有利于进一步合理利用与开发自然界中丰富的花青素资源。本文重点就近年来国内外学者对花青素提取、分离和纯化方法的最新研究进行了分析总结。
花青素提取工艺试验 实验仪器材料： 仪器：打浆机、干燥箱、粉碎机、超声波震荡器、培养箱、低温超速离心机、旋转蒸发仪、真空干燥箱、水浴锅、pH试纸 试剂：80%乙醇、山芋粉、蔗糖、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、滤纸、石油醚、0.1%稀盐酸 材料：枸杞、黑曲霉 1.1称取枸杞加入去PH=2离子水中（按比例为1：120g/L），在60℃水浴中浸泡4h，分离样液和样品，（重复2次），样液待用1.2【脱脂处理】将1.1中的样品和样液与石油醚（30-60℃）按1:10g/L混合，浸泡1h后，于旋转蒸发仪中50℃加热回流2h，所得样品溶液，放在打浆机打碎 1.3加入微生物培养液中【固液1:5】(培养液配比: 山芋粉3. 7 5%、蔗糖1 5% 、硝酸铵0. 2%、磷酸二氢钾0. 1%和硫酸镁0. 025% ) , 120 ℃条件下灭菌20min,在超净工作台内接种。黑曲霉与培养液比例为1∶1 000。接种后放入培养箱中培养。温度30℃，pH4.5，培养时间72h 1.4培养后，在培养液中加入40倍pH3.0的80%乙醇，在超声波水浴中50℃提取3h（过滤后重复1-2次） 1.5粗过滤后，低温离心40℃，4000r/min，10min，去沉淀，取离心液 1.6 50℃旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩0.076Mpa
1.7 放入真空干燥箱干燥，得粗品 1.8上述浓缩液再次离心，加入0.1mol/LHcl溶液调pH=4-4.5，离心分离，再次浓缩烘干 精提1 2.1上述粗品，加入温水中溶解 2.2常温下，在微滤机下0.12MPa，进行微滤收集液体 2.3所得滤液再次放入超滤机中过滤，0.1MPa，膜流速1500L/h 2.4取0.5g活化湿AB- 8 树脂和20ml液体常温吸附24h，离心2.5滤液加入60%乙醇洗脱，1-3h左右，后60℃，减压真空88kpa 下蒸馏回收乙醇 2.6所得液体加入一定量石油醚精致萃取，35℃减压浓缩回收，2.7真空干燥称重 方案二 1.1称取样品和样液与石油醚（30-60℃）按1:10ml混合，浸泡1h后，于旋转蒸发仪中50℃加热回流2h，所得样品溶液，干燥滤渣用于色素提取 1.2以料液比为1：40的PH=3的80%乙醇在50℃下浸泡3后，在超声波为40kHZ下，100W,20min，过滤去沉淀，重复1-2次1.3粗过滤后，低温离心40℃，4000r/min，10min，去沉淀，取离心液 1.4 50℃旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩0.076Mpa 1.5 放入真空干燥箱干燥，得粗品
原花青素提取方法的研究进展【摘要】原花青素是一种具有重要生理活性的多酚类化合物。本文综述了天然原花青素的提取方法，其中包括有机溶剂提取、微波提取、超声波提取、超临界CO2萃取以及酶法等，以期为开发利用原花青素提供依据。 【关键词】原花青素；提取方法；研究进展 原花青素（简称PC）是植物界中广泛存在的一大类多酚类化合物。植物化学家通常将从植物中分离得到的一切无色的、在无机酸存在和加热处理下能产生红色的花青素（Cyanidin）的一类多酚化合物统称为原花青素。许多研究表明，原花青素是清除自由基很强的抗氧化剂，其抗氧化、清除自由基的能力是VE的50倍、VC的20倍，它能防治80多种因自由基引起的疾病，包括心脏病、关节炎等，还具有改善人体微循环功能。目前，原花青素已广泛应用于食品、药品、化妆品等领域。全世界对原花青素的研究越来越深入，其中对原花青素提取方法的研究是一大重点。原花青素传统的提取方法是有机溶剂提取法，但这种方法存在着对有效成分损失大、周期长、工序多、提取率不高等缺点，因此近10年来，在植物有效成分的提取方面出现了许多新技术、新方法，如超临界CO2萃取技术、超声波提取技术、微波萃取技术以及酶解技术等。现将原花青素提取方法综述如下。 1原花青素的分类及分布原花青素是一大类多酚化合物的总称，起初统称归于缩合鞣质或黄烷醇类。最简单的原花青素是儿茶素、表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体。此外，还有三聚体、四聚体等直至十聚体。按聚合度的大小，通常将二～四聚体称为低聚体（ProcyanidolicOligomers，简称OPC），将五聚体以上的称为高聚体（ProcyanidolicPolymers，简称PPC）。OPC为水溶性物质（PPC水溶性较差）、极易吸收；OPC消除自由基的能力与分子结构、聚合度有关。二聚体中，因两个单体的构象或键合位置的不同，可有多种异构体，易分离鉴定的8种结构形式分别命名为B1～B8，其中，B1～B4是由C4～C8键合，B5～B8是由C4～C6键合。在各类原花青素中，二聚体分布最广，研究得最多，也是最重要的一类原花青素。三聚体中，也因组成的单体及其相连接碳原子位置的不同形成各种各样的结构并命名为C1、C2等，其中C1在自然界中分布最丰富。研究表明，原花青素主要分布于以下的植物中：葡萄、英国山楂、单子山楂、花生、银杏、日本的罗汉柏、北美的崖柏、土耳其的侧柏、花旗松、白烨树、野生刺葵、番荔枝、野草萄、日本莽草、扁桃、高粱、耳叶番泻、两谷椰子、可可豆、贯叶金丝桃、头状胡枝子、粘胶乳香树、海岸松、洋萎陵菜和大黄等。2提取方法2．1水提取法由于有机溶剂会带来环境污染和产品的有毒有机物残留，人们在大力发展对环境友好的绿色提取技术———水提取法。Masquelier最早从松树皮中用沸水粗提、乙酸乙酯纯化得到原花青素。1998年Duncan和Gilmour发明一种从植物材料（树皮、树叶、葡萄籽、皮、大豆、绿茶）中提取原花青素的方法。将材料粉碎（≤15mm），常压、60～100℃或高压100～125℃条件下采用脱氧热水提取（1min～20h），过滤采用超滤或反渗透或两者连用，浓缩滤液，真空喷雾或冷冻干燥，此法主要是提取分子量≤5000D的水溶性原花青素，得率为0．5％～10．0％之间，通常为6．5％～9．6％（随取样部位的差异而定），分离得到原花青素B1、B3、B6和C2。获得的产物对AAPH引发的亚油酸的氧化有明显抑制作用，1μg／mL能达到70％～79％的抑制率。毒理学检测表明：对于按人体重剂量给药组和100倍人体质量的剂量给药组24h内无毒害和副作用产生，慢性毒理学（5个月）试验也无明显毒、副作用。1999年Karim等人发明了在加压条件下，采用脱氧去离子水提取植物材料中的原花青素。将提取液超滤后，采用疏水性微孔聚合物树脂作填料的柱色谱方法，选用极性洗脱液（乙醇＋水）洗脱，将洗脱液采用反渗透方法除去乙醇，干燥得到原花青素。 选水作为提取剂，浸提耗时长，温度高，容易造成原花青素的损失；同时水的极性较大，