基因工程原理复习题思考题
5、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。
同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。
同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。
不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。）
6、连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？
类型：DNA连接酶和RNA连接酶
异同点：
相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点：DNA聚合酶识别脱氧核糖核苷酸，在DNA复制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在转录中起作用。
7、试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。（传说中的网上答案）
1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。
2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。
3、足够多的载体和插入片段是最重要的。
4、平端的连接对于离子浓度很敏感
5、尽可能缩小连接反应的体积
6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好
8、基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？
1）大肠杆菌DNA聚合酶
2）Klenow fragment
3）T7 DNA聚合酶
4）T4 DNA聚合酶
5）修饰过的T7 DNA聚合酶
6）逆转录酶
7）Taq DNA聚合酶
第四章基因克隆的载体系统
1、作为基因工程载体，其应具备哪些条件？
具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；
具有合适的筛选标记；
具有较高的外源DNA的载装能力；
具有多克隆位点（MCS）；
具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。
3、载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？
基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。
4、质粒转化原理，影响转化率的因素有哪些？
A、化学法（CaCl2法)转化原理：是Ca2+与细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构，后者经热脉冲发生收缩作用，使细胞膜出现空隙，质粒或DNA重组分子便可进入细胞内（感受态细胞）。
B、电穿孔转化转化原理：将待转化的质粒或DNA重组连接液加在电穿孔转化仪的样品池中，两极施加高压电场，在强大电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜产生缝隙，质粒或DNA重组分子便可进入细胞内。
影响转化率的主要影响因素:
1）载体本身的性质及其空间构象：超螺旋构象转化率最高；
2）插入片段的大小：插入片段越大，转化效率越低；
3）受体细胞的类型及预处理；
4）转化方法：电击法高于化学法。
5、重组体分子的选择方法主要有哪些？并简单阐述其原理。
从总体上看，重组体分子的选择与鉴定方法基本上可以分为如下几个类型：
（1）基于载体遗传标记检测法
在构建基因工程载体系统时，载体DNA分子上通常携带了一定的选择性遗传标记基因，转化或转染宿主细胞后可以使后者呈现出特殊的表型或遗传学特性，据此可进行转化子或重组子的初步筛选。
（2）基于克隆DNA序列检测法
Southern印迹杂交：根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过与已标记的单链DNA探针的杂交作用以检测这些被转移的DNA 片段。
（3）基于外源基因产物检测法
如果目的基因产物能降解某些药物使菌株呈现出抗性标记，或者基因产物与某些药物作用是显颜色反应，则可根据抗性或颜色直接筛选含目的基因的克隆子。
第五章基因的克隆一般方法
1、基因的克隆方法主要有哪些？并阐述其克隆原理（至少3种，都是书上找的，自选哈，建议必选DD RT-PCR和SSH，原因请看下题）？
1）差减杂交（SH）
通过DNA复性动力学原理富集目的基因序列，并以此构建减数文库的方式来进行目的基因分离克隆的。
2）抑制性差减杂交（SSH）
SSH的核心技术是抑制性PCR，它是一种将检测子cDNA单链标准化步骤和消减杂交步骤结合为一体的技术。其中标准化步骤均等了检测子中的cDNA单链丰度，而消减杂交步骤去除了检测子和驱赶子之间的共同序列，使检测子和驱赶子之间不同的序列得到扩增。
3）差异显示PCR（DD RT-PCR）
利用真核生物mRNA结尾处有POLY（A）结构，在其3`端设计象5`-T11GA样引物，该引物可与mRNA总数的十二分之一结合，从而使这部分基因得到逆转录，同时结合5`端的随机引物（20条10-mer），可以使不同长度的基因得到扩增。
4）DNA代表性差异分析（DNA RDA）
代表性差别分析是通过突变型（驱赶DNA，driver DNA）与野生型（检测DNA，tester DNA）基因组之间的差异来分离和鉴定突变基因的方法。
5）扩增限制性片段长度多样性（AFLP）
基因组DNA经过限制性内切酶消化后，产生粘性末端。使用人工合成的短的双链接头，该接
头一端具有同样的内切酶识别粘性末端，互补连接后成为DNA模板。接头和与接头相邻的酶切片断的几个碱基序列作为引物的结合位点。
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2、简单阐述差异显示PCR克隆基因的原理及其优缺点，有何应用？
主要原理：利用真核生物mRNA结尾处有POLY（A）结构，在其3`端设计象5`-T11GA样引物，该引物可与mRNA总数的十二分之一结合，从而使这部分基因得到逆转录，同时结合5`端的随机引物（20条10-mer），可以使不同长度的基因得到扩增。
优点：
简便、灵敏、高效、省时，能快速显示mRNA的组成。
所需的mRNA量少。
各样本mRNA的差异可同时进行比较。
扩出的cDNA可直接用于测序、文库筛选等。
缺点：
假阳性条带多，对低丰度的基因表达不容易检测。
工作量大。
无法定量研究。
扩出的条带往往是3`端比较短的UTR区的一段序列，提供的信息较少。
利用该技术，目前已有越来越多的差别表达基因得以分离和鉴定，在分子生物学和基因工程研究领域发挥了极大的作用。（P221）
3、抑制性差减杂交的原理与应用。
原理：SSH的核心技术是抑制性PCR，它是一种将检测子cDNA单链标准化步骤和消减杂交步骤结合为一体的技术。其中标准化步骤均等了检测子中的cDNA单链丰度，而消减杂交步骤去除了检测子和驱赶子之间的共同序列，使检测子和驱赶子之间不同的序列得到扩增。
应用：
基因突变体的研究：如基因的表达与不表达；
基因时空表达的研究：如根、茎、叶；
不同处理条件下的基因表达差异：如施肥与不施肥、光照与不光照。
4、酵母双杂交技术、噬菌体表面展示技术的原理。
A．酵母双杂交技术原理：大部分真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分隔开的结构域，一个是DNA特异结合域（DNA-binging domain,BD），一个是转录激活域(transcriptional activation domain,AD)。这两个结构域各具功能，互不影响，但一个完整的、具有激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域，否则无法完成其激活功能。不同来源的激活因子的BD区与AD区结合后则能特异地激活BD结合基因的表达。B．噬菌体表面展示技术原理：当外源DNA片段插入丝状噬菌体基因组的一个外被蛋白基因中时，如果两者读码框结构保持一致，这个外源DNA片段所编码的产物可与此外被蛋白一起以融合蛋白的形式表达，并显示在噬菌体的表面。利用抗此外源基因编码产物（多肽或蛋白）的抗体，通过亲和纯化，就能从大量的噬菌体中富集、分离出含有所要的基因的融合噬菌体。然后，通过基因扩增，得到大量所要的目的基因。
5、T-DNA标签法克隆基因的一般技术路线。
农杆菌侵染植物得到转化苗，筛选出表现某种突变性状的个体。
建立突变体基因组文库及野生型基因组文库.
用T-DNA片段做probe筛选突变体文库，获得阳性克隆。
用获得的阳性克隆筛选野生型基因组文库，获得野生型的阳性克隆。
把阳性克隆转化突变体进行功能互补及进行测序分析。
第七章克隆基因的表达
1、通过比较，分析大肠杆菌表达系统和酵母表达系统各有何优缺点。
大肠杆菌表达外源基因的优势：
全基因组测序，共有4405个开放型阅读框架；
基因克隆表达系统成熟、完善；
繁殖迅速、培养简单、操作方便、遗传稳定；
被FDA批准为安全的基因工程受体生物。
大肠杆菌表达外源基因的劣势：
缺乏对真核生物蛋白质的复性功能；
缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统；
内源性蛋白酶降解空间构象不正确的异源蛋白；
周质内含有种类繁多的内毒素。
甲醇酵母表达系统的优点：
具有强的受严格调控的AOX1启动子
表达蛋白的翻译后的加工和修饰
营养要求低，工业化生产成本低
可高密度发酵
表达蛋白可存在于胞内和胞外
酵母表达系统的缺点：酵母表达蛋白有时会出现蛋白切割问题（这个找不到，百度的）
2、如何提高克隆基因的表达水平？
1）、表达载体的优化设计；
2）、提高目标基因mRNA和目标基因产物的稳定性；
3）、密码子偏爱性；
4）、表达环境条件的优化。
3、克隆基因目的蛋白的表达的形式主要有哪些类型？
表达蛋白按溶解特性通常包括：不溶性蛋白和可溶性蛋白两类，具体包括如下几种结构形态：包涵体型蛋白、融合型蛋白、分泌型蛋白
5、表达载体和基因工程一般克隆载体在元件构成上有何差别？
表达载体：启动子；终止子；核糖体结合位点（SD序列）；筛选标记；复制子（质粒拷贝数）；多克隆位点
克隆载体：筛选标记；复制子（质粒拷贝数）；多克隆位点
第八章植物基因工程
2、外源基因导入植物的方法主要有哪些？
物理方法：电击法、基因枪法(biolistic)、显微注射法、微激光束法
化学方法：PEG介导法、脂质体介导法
生物学方法：农杆菌介导法、花粉管通道法
四．问答题
（一）简答
4．某学生在用EcoR I 切割外源DNA 片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因。
答：盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。
5．在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp 的II 类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么？
答：回文序列是5’-CATATG-3’。
6．下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是II 类酶的识别序列：GAATCG、AAATTT、GATATC、
ACGGCA？为什么？
答：GATATC 和AAATTT，因为它们是回文序列。
7．用Klenow 酶填补的办法可使5' 黏性末端转变成平末端。这种方法常使DNA 上的某些限制酶的识别位点消失。请问，对于下列限制酶，用这种方法处理会不会使它们的识别序列都消失？BamH I (G↓GATCC)、Taq I (T↓CGA)、BssH II (G↓CGCGC)。
答：BssH II 不会。
四、问答题
2．DNA 连接酶的作用特点有哪些？
①连接反应需要在一条DNA 链的3’末端具有一个游离的-OH, 而另一条DNA 链的5’末端具有一个磷酸基团(-P)的情况下，才能发挥其连接DNA 分子的功能作用，而在末端带有5’-羟基和3’-羟基；5’-磷酸和3’-二脱氧核苷基团的两个DNA 片段之间不起连接作用。
②连接反应中需要 ATP 或NAD+ 和Mg2+ 为辅助因子和激活因子；
③ DNA 连接酶不能够连接两条单链的DNA 分子，被连接的DNA 链必须是双螺旋的一部分。
④ DNA 连接酶只封闭双螺旋DNA 骨架上的缺口 (Nick)，即在双链DNA 的某一条链上两个相邻核苷酸之间失去一个磷酸二酯键所出现的单链断裂，而不能封闭双链DNA 的某一条链上失去一个或数个核苷酸所形成的裂口（Gap）。
3．影响DNA 连接酶连接反应的因素主要有哪些？
答：1) 反应温度：最佳反应温度37℃，但黏性末端之间退火形成的氢键结合不稳定，连接黏性末
端的最佳温度，一般认为4～20℃比较合适。
2) DNA 片段末端：不仅要考虑反应体系中DNA 末端的总浓度，还要考虑载体与插入片段的末端浓度的比例。原则上应保证一个DNA 分子的末端有较高的几率与另一 DNA 分子连接，减少同一个分子两个末端之间的自身连接。载体与插入片段 3：1 ~ 1：3。
3) 连接酶浓度：平末端DNA 分子的连接反应，最适酶量大约是1～2 单位；而黏末端DNA 片段间的连接，在同样的条件下，仅为 0.1 单位时，便能得到最佳连接效率。
四、问答题
1．YAC 载体具有什么样的？为什么在克隆大片段时，YAC 具有优越性？
答：（1）功能性DNA 序列:
①来自于酵母的125bp DNA 片段的着丝点序列 (CEN4)。
②来自酵母的自主复制序列 (ARS1)，起始在酵母中的DNA 复制。
③来自酵母的端粒序列，它是 (5-TGTGGGTGTGGTG-3) 的多拷贝重复，它对染色体的复制和
维持是必需的。
④在酵母中进行选择的标记基因，URA3（尿嘧啶生物合成基因）和TRP1（色氨酸合成基因）。寄主是这些基因的营养缺陷性，只有带有这些基因的转化体才能在选择培养基上生活
⑤具有细菌的复制起始点和选择标记基因。YAC 载体通常含有ColE1 的ori 和氨苄青霉素抗性标记基因，可以在大肠杆菌中复制和繁殖，所以它也是一种穿梭载体。
（2）优越性：YAC 能够容纳长达上千kb 的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。
3．举例说明什么是穿梭载体？
答：穿梭载体是含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA 片段的杂种质粒，有两个复制起点和能在两种不同细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主 (来回穿梭)。
5. 什么是YAC？YAC 克隆载体常出现哪些问题？
答：YAC 即酵母人工染色体（Yeast Artificial Chromosome）的缩写，是人工构建的染色体样大容量克隆载体，基本组成有着丝点、能在细菌和酵母中进行复制的复制起始点和选择标记及端粒。最大DNA 克隆片段可达到2000kb。
问题有：(1) YAC 有嵌合现象，一个YAC 中克隆的DNA 片段可能来自两个或多个不同的染色体。在基因组文库中，嵌合体占克隆总数的10％～60％。
(2) YAC 内部有重组现象，插入的DNA 较大，序列发生重排，导致和原来染色体的序列不一致，重组很难检出。
(3) YAC 还有缺失现象，影响YAC 文库的代表性。
(4) YAC 结构和酵母天然染色体结构相似，使用常规方法不易将YAC 和酵母天然染色体分开。
(5) 构建好的YAC 转化原生质化的酵母菌，转化效率低。
(6) 建好库后保存方便，但要筛选某个基因时工作量大
6．什么是 BAC？BAC 载体的组成与优缺点有哪些？
①细菌人工染色体（BAC）是从大肠杆菌F 因子改造构建而来的，能够携带大约300kb 的DNA 插入片段。
②载体具有 F 因子的复制起始点（oriS），可使载体维持每个细胞一个拷贝的水平。
③载体包括有 4 个维持DNA 复制和拷贝数目的基因，repE, parA, parB and parC。
④具有一个抗生素选择标记基因，和 lacZ’基因。在lacZ’基因中组装有一多克隆位点，便于外源片段的插入和蓝白反应筛选克隆子。
⑤插入的 DNA 片段非常稳定，可以在大肠杆菌细胞中维持数百代，而且不易发生重组和从寄主细胞中丢失。
⑥主要缺点是每个细胞中的拷贝数少（1~2 个），使得分离和筛选较为困难。
7．利用pBR322 质粒插入失活分离带有外源DNA 片段的重组克隆的原理是什么？
①外源 DNA 片段插入在pBR322 质粒tetr 基因的编码序列内（BamHI）位点，使该基因失活；
②体外重组反应混合物转化大肠杆菌 ampstets 菌株，并涂布在amp 琼脂平板上，凡获得了pBR322质粒和重组质粒(AmprTets)的寄主细胞都可长成菌落；
③将 amp 琼脂上的菌落原位影印在tet 琼脂平板上生长，对比这两个平板的菌落生长情
况，凡在amp平板上能够生长而在tet 平板上不能生长的菌落，便是属于带有重组体质粒的转化子克隆；挑出这样的阳性克隆，扩增分离带有外源DNA 插入片段的重组体质粒。
8. pUC 质粒利用α-互补作用筛选重组子原理是什么？
答：pUC 系列质粒载体是在pBR322 质粒载体基础上改造来的，它用lacZ’基因取代了pBR322质粒载体上的tetr 基因。lacZ’基因编码β-半乳糖苷酶的N 末端1-63 个氨基酸(α-肽链)的DNA 片段, 在lacZ’基因内组入了一个多克隆位点（MCS），但不影响lacZ’基因的功能。 pUC 载体的宿主（E. coli）携带一个编码β-半乳糖苷酶C 端序列的基因片段, 它们本身用这个基因片段产生的β-半乳糖苷酶片段是无活性的, 但它们可以通过α-互补作用在体内相互弥补, 即两部分产物可以结合形成有活性的β-半乳糖苷酶。当pUC 质粒引入大肠杆菌中，在含有指示剂X-gal 和 IPTG 的诱导培养基上培养时，菌落成蓝色。如果在MCS 插入外源DNA 片段（基因），破坏了lacZ’基因的功能（插入失活），不再产生α-肽链，不能和宿主细胞产生的多肽片段形成有活性的β-半乳糖苷酶，形成的菌落是无(白)色的。因此，根据这种β-半乳糖苷酶的显色反应，便可以检测出含有外源DNA 插入序列的重组体克隆。
9．自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，即使是ColE1 和pSCl01 这两个自然质粒也不尽如人意，通常需要进行改造。请问质粒改造包括哪些基本内容?
答：
基本内容包括：
(1) 删除一些非必要的区段及对宿主有不良影响的区段；削减载体的分子质量，使载体具有更大的容纳外源片段的能力。
(2) 加上易于选择或检测的标记。
(3) 限制性内切核酸酶的酶切位点的改造，便于外源基因插入到载体中的特定位置。
(4) 加上一些调控元件，有利于克隆基因的表达。
(5) 安全性改造，限定载体的宿主范围。
10．质粒制备的基本原理？
答：带有质粒的细菌细胞在SDS 作用下裂解，并在碱性条件下使DNA 变性。调节pH 值至中性时质粒DNA 首先复性，而细菌基因组DNA 不能复性而与SDS-蛋白质形成复合体，可以被离心沉淀除去。上清液中的质粒DNA 分子可被酒精沉淀或其他方法沉淀纯化出来。
四、问答题
1．λ噬菌体DNA 被包装到噬菌体的头部需要哪些基本条件？为什么？
答：①两个cos 位点；②线性DNA；③分子大小在λ噬菌体基因组的75%～105%。
2．为什么野生型的λ噬菌体DNA 不宜作为基因工程载体?
答：(1) 噬菌体DNA 没有容载能力，因为噬菌体的头部对DNA 包装的量是有限制的，不能大于基因组的105％，所以要将λ噬菌体改造成载体，必须削减本身的分子大小；
(2) 野生型的λDNA 对于一些常用的酶都有多个识别和切割位点，不便于克隆；
(3) 没有可供选择的标记；
(4) 野生型的λ噬菌体具有感染性，因此不够安全。
4．λ噬菌体载体具有哪些优点与不足?
答：优点：(1) λ基因组中有1／3 的非必需区可以被置换。改造成载体后，克隆的片段较大(可达20kb)，而质粒载体的克隆片段只有几个kb；
(2) 用噬菌体λDNA 作为载体，即使不进行体外包装，转染的频率也比质粒转化的效率高，
包装后的效率就更高了；
(3) λ可通过溶原化反应整合到寄主染色体上，当不需要外源基因大量表达时，可让它以溶原性存在，若要表达，可通过诱导即可进入裂解途径，释放出大量的噬菌体，得到的重组DNA 的拷贝数就会很多。
缺点：(1) 包装比较麻烦，包装率不稳定，购买包装蛋白的费用高；
(2) 没有质粒的用途广泛。
5．以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组体? 答：改造的置换型噬菌体载体，重组入外源片段之后，总体积不能超过入基因组的105％，不能小于又基因组的75％。以置换型λ噬菌体DNA 作为载体，首先要分离左、右两臂同外源DNA 重组。如果没有外源片段，仅是两臂连接，长度短于久基因组的75％，不能被包λ噬菌体颗粒，就不能感染寄主，也就不能形成噬菌斑。如果插入了外源片段后，总长度超过λ基因组105％后，也不能包入噬菌体颗粒，自然也不能形成噬菌斑。
6．M13 系列载体具有哪些优缺点?
答：M13 克隆系统具有很多优点：
(1) 克隆的片段大：M13 噬菌体的DNA 在包装时不受体积的限制，所以容载能力大。有报道，有些噬菌体颗粒可以包装比野生型丝状噬菌体DNA 长6～7 倍的 DNA(插入片段可达40kb)。
(2)可直接产生单链DNA，这对于DNA 测序、DNA 诱变、制备特异的单链DNA 探针都是十分有用的。
(3) 单链DNA 和双链DNA 都可以转染宿主，并可根据人工加上的选择标记进行筛选。
M13 克隆系列的不足：
(1) 较大的外源片段插入后，在扩增过程中往往不够稳定。一般说，克隆的片段越大，发生丢失的概率越大。
(2) 单链载体分子感染的细胞中，往往是单链和双链混杂，分离双链比较麻烦。
7．黏粒载体具有哪些特点与不足?
答：主要特点有：
①柯斯质粒是含有λ噬菌体 COS 位点的质粒载体。柯斯质粒具有质粒的复制子，进入寄主细胞后能够像质粒一样进行复制，并且能够被氯霉素扩增。
②具有质粒载体的抗生素抗性基因的选择标记和克隆位点。
③插入片段的消化、连接及后来重组克隆的纯化与质粒载体相同。
④具有λ噬菌体的包装和转导特性。与质粒载体转化细菌细胞不同，重组体像λ载体一样，需体外包装后转染细菌。
⑤包装后形成的λ颗粒用来感染大肠杆菌，重组DNA 像λ DNA 一样注入细菌细胞，并以COS位点环化。由于缺乏λ的其他DNA 序列，环化DNA 在细菌体内以质粒一样维持。⑥简化了筛选。载体体积小，承载外源 DNA 片段大。如果载体的分子质量在5kb 的话，得到的转导子几乎排除由载体自连的可能性，因为要被成功包装，至少要7 个分子的载体自连。尽管如此，也是不能被包装的，因为COS 位点太多了。重组体只有达到32-45kb 才能有效包装体外包装，这就提供了对重组体的正向选择。
⑦对转化体的选择是基于载体上的抗生素标记。
⑧感染后形成菌落，而不是噬菌斑。
黏粒载体也有如下不足：
①如果两个黏粒之间有同源序列，可能会发生重组，结果会使被克隆的片段重排或丢失。
②含不同重组 DNA 片段的菌落生长速度不同，会造成同一个平板上菌落大小不一。另外由
于不同大小的插入片段对宿主细胞的作用不同，会造成文库扩增量的比例失调。
③包装过程复杂，包装效率不稳定，代价高。
四、问答题
1．怎样将一个平末端的DNA 片段插入到EcoR I 的限制位点中去？
答：可以化学合成一个连接子（linker），即一段长为lObp 含有EcoR I 识别位点的短的DNA 片段，
然后与待克隆片段两端连接起来，如果用EcoR I 切割这种连接片段，就会产生EcoR I 的单链末端。这种片段就可以插入到任何EcoR I 的限制性核酸内切酶位点中。
2．构建基因组文库时为什么要对基因组DNA 进行部分酶切？（列举至少两条理由）
答：①部分酶切可获得长度适宜的片段（如获得中等长度的酶切片段）；②部分酶切可保证切出的DNA 片段内部依然保留了部分限制酶位点，便于后续的克隆分析。
3．什么是基因组文库(genomic library)？它同遗传学上的基因库有什么不同?
答：基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA 的各种片段的克隆群。
包括下列过程：高分子质量染色体DNA 的制备；体外重组连接；将重组DNA 导入寄主细胞并扩增；筛选。
基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。基因库(gene poo1)是指在进行有性生殖的某一群体中，能进行生殖的个体所含总的遗传信息。在基因组文库的构建中，由于使用的载体不同，分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因组文库、YAC 文库、BAC 文库等。
4．什么是cDNA 文库？同基因组文库有何差别?
答：同mRNA 互补的DNA 称为cDNA。cDNA 文库是以某一生物的总mRNA 为模板，在无细胞系统中，在反转录酶的作用下，首先合成一互补的DNA，即第一链，破坏RNA 模板后，再以第一链为模板合成第二链，得到的双链DNA 称为cDNA。选用适合的载体，将合成的cDNA 重组导入寄主细胞，经筛选得到的cDNA 克隆群称为cDNA 文库。由于cDNA 技术合成的是不含内含子的功能基因，因此是克隆真核生物基因的一种通用方法。
由于细胞内的基因在表达的时间上并非是统一的，具有发育的阶段性和时间性，有些则需要特殊的环境条件。所以，cDNA 文库是不可能构建得十分完全的，也就是说，任何一个cDNA 文库都不可能包含某一生物的全部编码基因。
cDNA 文库与基因组文库的主要差别是：
(1) 基因组文库克隆的是任何基因，包括未知功能的DNA 序列；cDNA 文库克隆的是具有蛋白质产物的结构基因，包括调节基因。
(2) 基因组文库克隆的是全部遗传信息，不受时空影响；cDNA 文库克隆的是不完全的编码DNA 序列，因它受发育和调控因子的影响。
(3) 基因组文库中的编码基因是真实基因，含有内含子和外显子；而cDNA 克隆的是不含内含子的基因。
6．如何使用甲基化酶对克隆DNA 进行保护？有什么意义？
答：在构建基因文库时，可用与接头中限制性内切核酸酶相应的甲基化酶对克隆DNA 先进行甲基化修饰，将插入片段上该酶可能的识别序列先行保护起来。
意义：用这种方法，不仅保护了插入片段的大小不会改变，又有利于插入片段的回收，因为插入片段中特定限制性内切核酸酶的识别位点被保护起来，重组后可以用特定的限制性内切核酸酶将插入片段回收。
8．某一质粒载体具有Tetr 和Kanr 的表型，在Kan 抗性基因内有一Bgl I 的酶切位点。现用Bgl I 切割该载体进行基因克隆，问：①转化后涂皿时应加什么样的抗生素? ②培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型? ③如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体?
提示：①加四环素；
② Tetr Kans 和Tetr Kanr；
③重新点种在含Tet、Kan 和只加Tet 的平板上，选择只在Tet 平板上生长的菌落，即为所
需的重组体。
9．限制性内切核酸酶BamH I 和Pst I 切割某一DNA 序列，结果如下所示。
5’------G↓GATCC-------3’ BamH I ------G GATCC------
3’------CCTAG↑G------5’ ------CCTAG G------
5’------CTGCA↓G------3’ Pst I ------CTGCA G------
3’------G↑ACGTC------5’ ------G ACGTC------
(1) 指出被切割DNA 分子的5’端和3’端；
(2) 如果你将切割后的DNA 同DNA 聚合酶、4 种dNTP 在一起温育，这些DNA 末端会有什么样的变化?
(3) 经过(2)中的反应后，你还能够用T4 DNA 连接酶将BamH I 末端连接起来吗？Pst I 末端呢？(T4 DNA 连接酶能够连接平末端和黏性末端。)
(4) 在(3)中的连接后，能够重新形成BamH I 位点吗？Pst I 位点呢？为什么？
答：(1) 切割后分子的5’和3’端 (如图示)：
(2) 如图所示，BamH I 的末端能够被DNA 聚合酶填补，而Pst I 的末端却不能。这种差异是由DNA聚合酶的作用条件所决定的：dNTP 只加到具有3'-OH 的引物上，并且要有一条保证正确添加的模板链。BamH I 的末端可以满足这些条件，但Pst I 的末端却不能，因其具有隐蔽的5’端，这种末端是不能作为引物的，故不能被填补。
(3) 如图所示，平末端化的BamH I 末端和未被修饰的Pst I 末端二者都能被T4 DNA 连接酶连接。
(4) 连接处理过的末端可以再产生Pst I 的位点，但不会产生BamH I 的位点（画图说明）。切割、填补末端并重新连接，常会产生新的限制酶酶切位点，这些位点对于进一步的操作有时是有用的。
10．从基因组DNA 文库中分离的一段DNA（如下图所示），其中有一编码基因（黑框），图中给出了几种限制性内切核酸酶的作用位点。该图同时给出了用作表达该基因的表达载体，弯曲箭头是启动子的转录方向，并给出了几种酶的作用部位。
请根据此图，回答下列问题：
(1) 给出限制性内切核酸酶Pst I、BamH I、EcoR I、HindH I 和Cla I 所在部位的遗传学名称。
(2) 如果你打算用该表达载体表达DNA 片段中的基因，该片段应如何插入表达载体？
(3) 如果只想表达该基因的一部分，以获得部分表达的蛋白质用于制备抗体，应如何操作?
(4) 如果你需要将整个基因在表达载体中表达，应如何操作？是用单酶切还是双酶切？答：(1) 多接头区域（MCS）,也叫多克隆位点。
(2) 主要是插入的方向问题。因为启动子的转录方向必须与基因的方向一致，所以该DNA 必
须倒转180°插入，即5’端必须紧挨启动子。
(3) 用EcoR I 切割载体和基因组DNA，用连接酶重组后筛选重组体，通过测序确定正确方向的重组体进行蛋白质表达。
(4) 可用Pst I 和Hind III 双酶切割基因组DNA 和表达载体DNA，这种切割可将基因组DNA 片段定向克隆入表达载体。’
四、问答题
1．构建表达载体应注意些什么？
答：(1) 构建表达载体的关键是用于表达克隆序列的启动子类型，如果目的是基因的高效表达，就要选用强的启动子；如果表达产物对寄主细胞有毒性，可选择弱的启动子，最好使用可诱导型启动子，使在一定的条件下表达。
(2)表达载体还应具有以下组成元件：
①携带能在寄主细胞中维持的复制的起始点。
②具有抗生素选择标记或其他选择机制。
③在紧接启动子的下游安排限制性位点，用于插入需表达的基因。
④具有单一的酶切位点来克隆基因，克隆位点应位于准确的位置，以使克隆基因有效表达。
3．插入失活法和插入表达法筛选重组体的主要差别是什么？
答：主要差别是：
(1) 插入失活法是直接根据失活基因的表型变化来筛选重组体。
(2) 插入表达法是根据一个基因的失活引起另一个基因的表达表型来选择。
4．一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉素基因中有识别位点的EcoR I 消化。消化物与酵母DNA 连接后转化对两种抗生素都敏感的E. coli 菌株。
(1) 利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞？
(2) 怎样区分接受了插入酵母DNA 的质粒的克隆？
提示：(1) 选择Ampr 的转化子；
(2) 所需的克隆是Ampr 和Kans。任何能够抗这两种药物的克隆都是自连的非重组质粒。
5．用EcoR I 和Hind III 分别切割同一来源的染色体DNA，并进行克隆。在前者的克隆中筛选到A 基因，但在后者的克隆中未筛选到A 基因，请说明原因。
提示：因为HindH I 的切点位于A 基因内。
7．用一限制性内切核酸酶切割Lac+ Tetr 的质粒载体，已知该酶识别的是4 个碱基序列，并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在lac 基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用DNA 聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化Lac- Tet- 受体菌，筛选Tetr 转化子，问：Lac 的基因型是什么？并说明原因。
提示：基因型是lac—，原因是在该密码子中插入了两个碱基，造成了移码突变，所以Lac 的基因是缺陷的。
10．在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA 而不用基因组DNA? 为什么要在cDNA 前加上细菌的启动子？
答：这是因为细菌没有内含子剪接系统，并且不能识别真核生物的启动子的原因。
11．如何根据下面的应用设计探针？
(1) 假定你分离纯化了一未知功能的蛋白质，需要确定是何种组织和细胞表达这种蛋白质。
(2) 假定你获得了绵羊的胰岛素mRNA，如何进一步从人的cDNA 文库中获得含人胰岛素的克隆并使之在E. coli 中表达?
提示：(1) 首先对该蛋白质进行部分测序，然后根据测得的氨基酸序列设计简并引物。(2) 以该mRNA 为模板反转录，得到cDNA，即可进行标记用作探针。
13．单链RNA 作为探针，具有哪些单链DNA 探针所没有的优点？
答：单链RNA 探针的下列优点是单链DNA 探针所没有的：
(1) RNA／RNA 和RNA／DNA 比DNA／DNA 杂交体具有更高的稳定性。因此，杂交可以在更严格的各件下讲行．杂交后的信号也比较强。
(2) 单链RNA 由于不存在互补双链的竞争性结合，所以杂交效率比较高。
(3) RNA 中不存在重复序列，所以特异性比较高。
(4) 杂交后可用RNase 消化掉未杂交的RNA，因此降低了本底。
四、简答题（每题 6 分,共 24 分）
1. 酵母作为真核基因的高效表达系统有什么优缺点？克服大肠杆菌表达系统的不足，能繁殖快，高密度发酵，可以进行蛋白质翻译后的修饰合加工。缺点：缺乏强有力的启动子，分泌效率差，表达菌株不够稳定，表达质粒易于丢失等例如甲醇酵母系统，利用甲醇作为唯一碳源。乙醇氧化酶将甲醇氧化为甲醛，乙醇氧化酶的启动子是强启动子，编码乙醇氧化酶的基因是 AOX1 合 AOX
2.AOX1 基因的表达受甲醇严格调控，诱导表达水平可达 30％以上。
五、问答题（每题 8 分，共 16 分）。
2. 基因组文库构建的基本步骤是什么？构建基因组文库需要用到哪些载体？
步骤①载体的制备；
②高纯度大分子量基因组 DNA （High molecular weight DNA, HMW DNA）的提取；③ HMW DNA 的部分酶切与脉冲电泳分级分离（PFGE size selection）；
④载体与外源片段的连接与转化或侵染宿主细胞；⑤重组克隆的挑取和保存。
载体的选择：λ噬菌体，YAC,BAC,粘粒等。
基因文库构建的一般步骤：
（1）染色体DNA大片段的制备
①酶切法
②物理切割法
（2）载体与基因组DNA大片段的连接
①粘性末端直接连接
②人工接头法
（3）转导受体
（4）筛选重组子
cDNA：以mRNA为模板合成的互补脱氧核糖核苷酸序列。
cDNA文库：某种生物基因组转录的的全部mRNA经反转录产生的各种cDNA分别与克隆载体重组，贮存在一个受体菌的群体中，这个群体就称为cDNA文库。
cDNA文库与基因组文库的区别在于cDNA文库是有时效性的。
cDNA文库的特点
优点：分离的目的基因可直接用于表达；比DNA文库小的多，容易构建
缺点：只与编码序列有关；不能反映内含子；不能反映启动子、终止子以及与核糖体识别的序列
构建cDNA文库的一般步骤：
（1）总RNA（total RNA）提取
（2）mRNA的分离纯化
①原理：利用mRNA都含有一段polyA尾巴，将mRNA从总RNA（rRNA、tRNA等）中分离纯化。
② mRNA的分离纯化 Column（柱）
（3）cDNA的合成
① cDNA第一链合成
②降解mRNA模板
③ cDNA第二链合成（cDNA 第二链合成的方法有四种，自身引导合成法，置换合成法，引导合成法和引物－衔接头合成法。）
（4）cDNA与载体连接：
（5）噬菌体颗粒的包装及转染或质粒的转化（导入宿主中繁殖）
基因的化学合成：寡核苷酸单链的化学合成；探针的化学合成；连接子和接头的合成；基因的半合成；全长基因化学合成
目的基因的分离：
目的序列已知：一般采用PCR技术或分子杂交技术分离克隆目的基因
目的序列未知：差异表达序列；无差异表达的目的序列，可采用文库筛选法、功能蛋白分离法、序列克隆法
第七章高等动物基因工程
1、基因导入细胞内的方法
物理方法：裸DNA直接注射、电穿孔、显微注射
化学方法：磷酸钙共沉淀、DEAE-葡聚糖法、阳离子脂质体法、阳离子-质粒复合物法
生物学方法——动物病毒载体：腺病毒、 SV40、腺相关病毒、反转录病毒、人牛痘病毒、疱疹病毒等。
反转录病毒（单链RNA病毒）
优点：
A、宿主范围广（几乎所有类型哺乳动物细胞）
B、效率高，可以感染大量的细胞，通常一次可以感染106～107细胞
C、外源DNA在整合时不发生重排，单位点、低拷贝整合（一般不超过5个）
缺点：
A、只感染分裂细胞
B、携带外源基因的长度有限(8kb)
C、载体病毒基因有潜在的致病性，如存在载体与人内源性逆转录病毒（HERV）序列间发生
D、重组而产生有感染能力的人逆转录病毒的潜在危险
简答题 第一章材料结构的基本知识 1、说明结构转变的热力学条件与动力学条件的意义。 答：结构转变的热力学条件决定转变是否可行，是结构转变的推动力，是转变的必要条件；动力学条件决定转变速度的大小，反映转变过程中阻力的大小。 2、说明稳态结构与亚稳态结构之间的关系。 答：稳态结构与亚稳态结构之间的关系：两种状态都是物质存在的状态，材料得到的结构是稳态或亚稳态，取决于转交过程的推动力和阻力(即热力学条件和动力学条件)，阻力小时得到稳态结构，阻力很大时则得到亚稳态结构。稳态结构能量最低，热力学上最稳定，亚稳态结构能量高，热力学上不稳定，但向稳定结构转变速度慢，能保持相对稳定甚至长期存在。但在一定条件下，亚稳态结构向稳态结构转变。 3、说明离子键、共价键、分子键和金属键的特点。 答：离子键、共价键、分子键和金属键都是指固体中原子(离子或分子)间结合方式或作用力。离子键是由电离能很小、易失去电子的金属原子与电子亲合能大的非金属原于相互作用时，产生电子得失而形成的离子固体的结合方式。 共价键是由相邻原子共有其价电子来获得稳态电子结构的结合方式。 分子键是由分子(或原子)中电荷的极化现象所产生的弱引力结合的结合方式。 当大量金属原子的价电子脱离所属原子而形成自由电子时，由金属的正离子与自由电子间的静电引力使金属原子结合起来的方式为金属键。 第二章材料的晶体结构 1、在一个立方晶胞中确定6个表面面心位置的坐标。6个面心构成一个正八面体，指出这个八面体各个表面的晶面指数、各个棱边和对角线的晶向指数。
解八面体中的晶面和晶向指数如图所示。图中A、B、C、D、E、F为立方晶胞中6个表面的面心，由它们构成的正八面体其表面和棱边两两互相平行。 ABF面平行CDE面，其晶面指数为； ABE面平行CDF面，其晶面指数为； ADF面平行BCE面，其晶面指数为； ADE面平行BCF面，其晶面指数为(111)。 棱边，，，，， ，其晶向指数分别为[110]，，[011]，，[101]。 对角线分别为，其晶向指数分别为[100]，[010]，[001] 图八面体中的晶面和晶向指数 2、标出图中ABCD面的晶面指数，并标出AB、BC、AC、BD线的晶向指数。 解：晶面指数： ABCD面在三个坐标轴上的截距分别为3/2a,3a,a, 截距倒数比为 ABCD面的晶面指数为（213） 晶向指数： AB的晶向指数：A、B两点的坐标为 A（0，0，1），B（0，1,2/3） (以a为单位) 则，化简即得AB的晶向指数 同理：BC、AC、BD线的晶向指数分别为，，。
2013-2014 年度第二学期基因工程期末考试 卷型： A 考试时间： 90 分钟满分：100分 一、名词解释（ 3×5） 限制性内切酶 ( 或其它工具酶 ) ：能在特异位点上催化双联 DNA分子断裂，产生相应的限制性 DNA片段 荧光定量 PCR: 所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用 荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法（半定量 PCR: 是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过 mRNA反转录成cDNA，再进行 PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量）星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段 同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端 转基因技术（或转基因动植物等）：就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的 生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。二、填空（ 1×15） 1.Cosmid 实际上是由 cos 位点和质粒构成的杂合载体，也可以说是带有 cos 序列的质粒。 2.超螺旋质粒 DNA、开环质粒 DNA、线状质粒 DNA 在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒>线状质粒 >开环质粒。 3.质粒 DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。 4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。 5.设计引物是一般要求 C+G的比例在 40%-60%，长度在 17-30bp 。 6.BAC 载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。 三、选择题（ 2× 15，实卷应是1×35） 1.基因工程创始人（ D） A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen 2. 迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（ A.既可以作用于双链DNA ，又可以作用于单链 B. 只能作用于单链DNA C）DNA C.只能作用于双链 DNA D.只能作用于 RNA 3.氨苄青霉素的工作原理为（ A ） A. 可以抑制细胞壁肽聚糖的合成 B. 可以抑制核糖体的转位 C. 可以与核糖体 50S 亚基结合并抑制蛋白质合成 D. 可以与核糖体 30S 亚基结合并抑制蛋白质合成 4.反转录酶是一种（ C） A. 依赖C. 依赖DNA的RNA 的DNA聚合酶 DNA聚合酶 B. D. 依赖 依赖 DNA的 RNA聚合酶 RNA的 RNA聚合酶 5.II类限制性内切核酸酶( A ) A．仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供B．限制性识别非甲基化的核苷酸序列 C．有外切核酸酶和甲基化酶活性
基因工程期末试题复习要点整理 基因工程是70年代出现的一门科学，是生物学最具生命力和最引人注目的前沿科学之一，是现代生物技术的代表，是生命科学类专业中的一门重要的专业课。本课程主要介绍基因工程概述、重组DNA基本技术及原理、基因克隆、基因的分离及鉴定、基因工程的表达系统、基因工程的应用等。通过本课程的学习，使学生掌握基因工程技术的基本原理和了解该技术在动物、植物和微生物等方面的应用，为今后从事生物学教学、生物技术研究和产品开发，或进一步的研究生学习科研打下坚实的理论及专业基础。扬州大学试题纸 一、名词解释：共10题，每题2分，共20分。 1. 基因: 是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。 2. 定位克隆: 获取基因在染色体上的位置信息，然后采用各种方法对该基因进行定位和克隆 3. 融合基因: 是指应用DNA体外重组技术构建的一类具有来自两个或两个以上的不同基因核苷酸序列的新型基因。 4. 转化子: 导入外源DNA后获得了新遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞，又称重组体。 5. 人工接头：是人工合成的具有一个或数个特定限制性内切酶识别和切割序列的双股平端DNA短序列。 6. RT-PCR: 是指以mRNA在反转录酶作用下合成cDNA第一链为模板进行的PCR。 7. ORF : 起始于AUG、止于UAA、UGA、UAG的连续的密码子区域，是潜在的编码区。 8. MCS: 指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。 9. gene targeting : 基因工程中利用活细胞染色体DNA可与外源DNA的同源性DNA序列发生重组的性质，来进行定点修饰改造染色体上某一目的基因的技术 10. 5’RACE: 是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到5’端之间未知序列的方法。 四、简答题：共4题，共20分。 1．简述获得目的基因常用的几种方法。（5分）
1.简述口腔颌面部感染的特点 1）. 与外界相通，多腔窦，多细菌，易感染；2）.牙齿的存在，牙源性感染是主要感染来源；3）.筋膜间隙疏松，抗感染能力低，互相交通；4）.血液及淋巴循环丰富，缺少静脉瓣，易扩散。 2.口腔颌面部的解剖特点及其临床意义 答案:①位置显露：易受外伤，易早期发现②血供丰富：抗感染能力强，受伤后出血多，肿胀较明显。③解剖结构复杂：并发症④自然皮纹：手术切口⑤形态功能⑥疾患易波及毗邻器官 3.颌面部创伤的特点 ①口腔颌面部血运丰富：出血多，组织反应性大：血肿水肿窒息；修复和抗感染能力强：清创时间： ②是呼吸道上端，损伤后可影响呼吸：组织水肿、移位、舌后坠、血凝块及分泌物。 应注意保持呼吸道通畅。 ③上接颅腔，易并发颅脑损伤：颅底骨折、脑挫伤 ④下连颈部，常伴有颈部损伤：颈部大血管及神经损伤、颈椎损伤 ⑤窦腔多，易感染：口腔、鼻腔、咽腔、附鼻窦存有大量细菌 ⑥是消化道入口，损伤后影响进食和口腔卫生 ⑦口腔颌面部损伤常累及牙齿：骨折咬合关系二次弹片感染 ⑧常有面部畸形－－美观问题 ⑨可发生特有解剖结构损伤：涎腺、面神经、三叉神经 4.简述智齿冠周炎的病因和临床表现，治疗原则，并发症。【下颌第三磨牙（智齿）冠周炎】。病因：1）第三磨牙阻生；2）、盲袋形成；3）、食物残渣或细菌嵌塞。4）、局部损伤；5）、全身抵抗力下降。 临床表现：急性期：1）患侧磨牙后区肿痛不适，开口活动时加重。2）局部自发性跳痛，可有沿耳颞神经分布区的反射。3）智齿萌出不全，冠周组织红肿、龈缘糜烂甚至冠周脓肿。4）张口受限。5）口臭，龈袋处有咸味分泌物，颌下淋巴结肿痛。6）可有全身中毒症状。 慢性期：仅有局部轻度压痛，不适。 治疗原则：急性期：消炎、镇痛、切开引流、增强全身抵抗力。 慢性期：拔除不可萌出的阻生牙，以防感染再发。 并发症：1）向磨牙后区扩散可出现面颊瘘。2）下颌第一磨牙颊侧粘膜转折脓肿或瘘。3)可出现咬肌间隙感染、翼颌间隙感染、颊间隙感染、颌下间隙感染、口底间隙感染、咽旁间隙感染。 5.良性肿瘤与恶性肿瘤的鉴别： 6.试述轻型阿弗他溃疡的临床表现及发病特点。
材料科学基础考题 I卷 一、名词解释（任选5题，每题4分，共20分） 单位位错；交滑移；滑移系；伪共晶；离异共晶；奥氏体；成分过冷答： 单位位错：柏氏矢量等于单位点阵矢量的位错称为单位位错。 交滑移：两个或多个滑移面沿着某个共同的滑移方向同时或交替滑移，称为交滑移。滑移系：一个滑移面和此面上的一个滑移方向合起来叫做一个滑移系。 伪共晶：在非平衡凝固条件下，某些亚共晶或过共晶成分的合金也能得全部的共晶组织，这种由非共晶成分的合金所得到的共晶组织称为伪共晶。 离异共晶：由于非平衡共晶体数量较少，通常共晶体中的a相依附于初生a相生长，将共晶体中另一相B推到最后凝固的晶界处，从而使共晶体两组成相相间的组织特征消失，这种两相分离的共晶体称为离异共晶。 奥氏体：碳原子溶于丫-Fe形成的固溶体。 成分过冷：在合金的凝固过程中，将界面前沿液体中的实际温度低于由溶质分布所决定的凝固温度时产生的过冷称为成分过冷。 二、选择题（每题2分，共20分） 1. 在体心立方结构中，柏氏矢量为a[110]的位错（A ）分解为a/2[111]+a/2[l11]. （A）不能（B）能（C）可能 2. 原子扩散的驱动力是：（B ） （A）组元的浓度梯度（B）组元的化学势梯度（C）温度梯度 3?凝固的热力学条件为：（D ） （A）形核率（B）系统自由能增加 （C）能量守衡（D）过冷度 4?在TiO2中，当一部分Ti4+还原成Ti3+，为了平衡电荷就出现（A） （A）氧离子空位（B）钛离子空位（C）阳离子空位 5?在三元系浓度三角形中，凡成分位于（ A ）上的合金，它们含有另两个顶角所代表的两 组元含量相等。 （A）通过三角形顶角的中垂线 （B）通过三角形顶角的任一直线 （C）通过三角形顶角与对边成45°的直线 6?有效分配系数k e表示液相的混合程度，其值范围是（B ） （A）1vk e 基因工程 一名词解释 DNA，1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外 来 从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护 自身的 DNA不被讲解。限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。 2、各种限制与修饰系统的比较 Ⅱ型Ⅰ型Ⅲ型 识别位点4~6bp，大多为回文序列二分非对称5~7bp 非对称 切割位点在识别位点中或靠近识别位点无特异性，至少在识别位点外100bp 识别位点下游 24~26bp 简答 1. 何谓 Star activity？简述Star activity的影响因素及克服方法？ 答：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。 pH 引起星星活性的的因素：①高甘油浓度（>5%）；②酶过量（ >100U/μl ）；③低离子强度（ <25mmol/L）；④高(> ；⑤有机溶剂如DMSO （二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等；⑥用其它二价阳离子 星星活性的抑制措施：①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；②保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；③提高离子强度到100 ～ 150mM（在不抑制酶活性的前提下）；④降低反应pH至；⑤使用Mg2+作为二价阳离子。 2. 试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？（影响酶活性的因素？） 答：外因：反应条件、底物纯度（是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当，反应体系的选择、反应时间的长短 内因：星星活性、底物甲基化、底物的构象 3、 DNA末端长度对酶切割的影响 答：限制酶切割 DNA 时，对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的 核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。在设计PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切 割扩增的 PCR产物，应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。一般需加 3 ～4 个碱基对。 4、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？ 答：将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：①在宿主细胞内必须能够自主复制（具 备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA 片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于 筛选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。 5 抗性基因（ Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？ 答：氨苄青霉素抗性基因（ ampr）、四环素抗性基因（tetr ）、氯霉素抗性基因（ Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（ kanr , neor ）以及琥珀突变抑制基因supF 。 ⑴青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。氨苄青霉素抗性Ampr 编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化β - 内酰胺环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。 ⑵四环素与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。 Tetr 编码一个由 399 个氨基酸组成的膜 结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。 6. 何为α - 互补？如何利用α - 互补来筛选插入了外源DNA 的重组质粒？ 答：α - 互补指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β - 半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。α - 互补是基于在两个不同的缺陷β－半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。实现α- 互补主要有两部分组成：LacZ △ M15 ，放在 F 质粒或染色体上，随宿主传代；LacZ' ，放在载体上，作为筛选标记，当在 LacZ' 中插入一个片断后，将不可避免地导致产生无α- 互补能力的β－半乳糖苷酶片断。在诱导物IPTG 和底物 X-gal （同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有活性的β－半乳糖苷酶，不能分解 X-gal ，呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。 7、试简述λ噬菌体的裂解生长状态Lytic growth 和溶原状态 Lysogenic state 两种循环的分化及其调节过程？ 答：裂解生长状态是λ噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代λ噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂 解。溶原状态为λ噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA 中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程：由感染复数 简答题： 1、分析右下图中高耸入云的铁塔之所以牢固的原因？ 答：高塔建造成框架结构增强了抗风能力，塔身上轻下重、上窄下宽增加塔的稳定性，塔身上有许多三角型结构，增加了塔的坚固性。 2、比较拱桥和拉索桥，说说拱桥和拉索桥的优点及设计时要注意的问 题？ 答：拱形桥受到压力时，能把压力向下和向外传递给相邻的部分。因此再设计拱桥时要考虑修建坚固的桥墩以承受拱形受压时产生向下的压力和向外的推力。拉索桥的钢榄能承受巨大的拉力，拉紧的钢缆像梁一样结实。在修建拉索桥是要考虑钢缆承受拉力的能力以及承受钢缆拉力的立柱的坚固性。 3、用什么办法可以使容易变形的支架变得稳固、牢固？ 答：可以通过架梁的方式增加三角形结构，使它变得牢固。 4、为了使汽车能上山，公路总是绕来绕去的盘山而建。这是利用了那种 机械原理？ 答：斜面有省力的作用。盘山公路是一种变形的斜面，通过把路弯来弯去，将上山的公路拉的更长，斜面更平缓，从而使汽车上山更省力。 5、我们为什么可以对各种感觉做出反应？ 答：分布在眼、鼻、耳、舌、肌肉和皮肤等处的传入神经能把各种感觉信号送给中枢神经系统，中枢神经产生的实际信号则通过传出神经送到身体各处，指挥身体对外界的各种刺激做出反应。 6、翘翘板大家一定喜欢玩吧，可是爸爸比我重，我怎样才能把爸爸跷起 来呢？ 答：让爸爸坐的位置离支点近些，我坐的位置离支点远些。 7、请你说说可以用那些方法来改变物体的承受力？ 答：把薄的材料用不同的方式折叠或弯曲，可以提高材料的承受力，由平放改为立放也可以改变物体的承受力。 8、蛋壳具有较大的承受力，你能举例说说它在生活中的运用吗？ 答：薄壳形的屋顶、灯泡、安全帽等都是它的应用。 9、感觉是如何产生的？ 答：分布在眼睛、耳朵、鼻子、舌头等器官的神经将接受到的各种刺激产生 第一章原子排列 本章需掌握的内容： 材料的结合方式：共价键，离子键，金属键，范德瓦尔键，氢键；各种结合键的比较及工程材料结合键的特性； 晶体学基础：晶体的概念，晶体特性（晶体的棱角，均匀性，各向异性，对称性），晶体的应用 空间点阵：等同点，空间点阵，点阵平移矢量，初基胞，复杂晶胞，点阵参数。 晶系与布拉菲点阵：种晶系，14种布拉菲点阵的特点； 晶面、晶向指数：晶面指数的确定及晶面族，晶向指数的确定及晶向族，晶带及晶带定律六方晶系的四轴座标系的晶面、晶向指数确定。 典型纯金属的晶体结构：三种典型的金属晶体结构：fcc、bcc、hcp； 晶胞中原子数、原子半径，配位数与致密度，晶面间距、晶向夹角 晶体中原子堆垛方式，晶体结构中间隙。 了解其它金属的晶体结构：亚金属的晶体结构，镧系金属的晶体结构，同素异构性 了解其它类型的晶体结构：离子键晶体结构：MgO陶瓷及NaCl，共价键晶体结构：SiC陶瓷，As、Sb 非晶态结构：非晶体与晶体的区别，非晶态结构 分子相结构 1. 填空 1. fcc结构的密排方向是_______，密排面是______，密排面的堆垛顺序是_______致密度为___________配位数是________________晶胞中原子数为___________，把原子视为刚性球时，原子的半径是____________；bcc结构的密排方向是_______，密排面是_____________致密度为___________配位数是________________ 晶胞中原子数为___________，原子的半径是____________；hcp结构的密排方向是_______，密排面是______，密排面的堆垛顺序是_______，致密度为___________配位数是________________，晶胞中原子数为 ___________，原子的半径是____________。 2. bcc点阵晶面指数h+k+l=奇数时，其晶面间距公式是________________。 3. Al的点阵常数为0.4049nm，其结构原子体积是________________。 4. 在体心立方晶胞中，体心原子的坐标是_________________。 5. 在fcc晶胞中，八面体间隙中心的坐标是____________。 6. 空间点阵只可能有___________种，铝晶体属于_____________点阵。Al的晶体结构是__________________， -Fe的晶体结构是____________。Cu的晶体结构是_______________， 7点阵常数是指__________________________________________。 8图1是fcc结构的(-1,1,0 )面，其中AB和AC的晶向指数是__________，CD的晶向指数分别 是___________，AC所在晶面指数是--------------------。 基因工程原理复习题思考题 5、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。 同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。 同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。 不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。） 6、连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？ 类型：DNA连接酶和RNA连接酶 异同点： 相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。 不同点：DNA聚合酶识别脱氧核糖核苷酸，在DNA复制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在转录中起作用。 7、试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。（传说中的网上答案） 1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。 2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。 3、足够多的载体和插入片段是最重要的。 4、平端的连接对于离子浓度很敏感 5、尽可能缩小连接反应的体积 6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好 8、基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？ 1）大肠杆菌DNA聚合酶 2）Klenow fragment 3）T7 DNA聚合酶 4）T4 DNA聚合酶 5）修饰过的T7 DNA聚合酶 6）逆转录酶 7）Taq DNA聚合酶 第四章基因克隆的载体系统 1、作为基因工程载体，其应具备哪些条件？ 具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）； 具有合适的筛选标记； 具有较高的外源DNA的载装能力； 具有多克隆位点（MCS）； 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。 3、载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？ 基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。 4、质粒转化原理，影响转化率的因素有哪些？ 科学简答题 1、说说动物有哪些共同的特点？（至少说出4点） 答：都生活在一定的环境里，会运动，需要食物维持生命，会排泄废物，会对外界刺激做出反应，会生长发育，会繁殖后代。 2、我们用什么方法可以让周围的人感受到空气的流动？（至少说出2个方法） （1）对着手吹气，手感觉有点凉； （2）用扇子扇风； （3）先让塑料袋鼓起来，再放开袋口，在袋口的纸飘起来； （4）烟雾的飘动等。 3、我们自己造的纸和平时用的纸有什么不同？在用纸上应注意什么？ 答：自己造的纸和平时所用的纸的区别，如厚薄不同、疏密程度不同，纤维长短不同（光滑程度不同）等。在用纸上应注意：节约用纸，尽量把纸的空白处和正反面都写满。 4、请你说出自己喜欢的某一种树的叶，并描述这片叶的特点。 我喜欢的叶是（如：香樟树）的叶。 这片叶的特点： 1、叶子是绿色的，卵形叶； 2、叶子有香味； 3、果实也是绿色的，圆形，比较小 4、树皮比较粗糙； 5、要你观察一棵大树,你准备从哪几方面来进行?（至少写5个） 答:我准备从大树的树冠、树干、树根、树叶、花、果实等方面来进行观察。 6、请写出你知道的动物的运动方式。（至少写5个） 答：我知道：1、蜗牛用腹足爬行；2、蚯蚓用身体伸缩爬行；3、蚂蚁用脚爬行；4、金鱼用鳍游泳；5、狗用脚行走；6、麻雀用翅膀飞行；（马、猫、猪、人、大象、鲸鱼等等） 7、如果提供给你两种不知名的材料，你打算怎样比较它们的特性？ 答：1、可以用相互刻画来比较它们的硬度，从它们的弯曲程度（折一折、弯一弯）来比较它们的柔韧。用滴水方法来比较它们的吸水性，把它们放入水中来看它们在水中的沉浮。 8、把一双竹筷和一把不锈钢汤匙一起浸入热水中,过一会儿分别用两只手去摸筷子和汤匙.请问:两只手的冷热感觉怎样?请说出你的理由. 答：拿筷子的手感觉有点热,拿汤匙的手感觉热.汤匙是不锈钢做的,金属易传热;竹子不易传热。 Test of Fundamentals of Materials Science 材料科学基础试题库 郑举功编 东华理工大学材料科学与工程系 一、填空题 0001.烧结过程的主要传质机制有_____、_____、_____ 、_____，当烧结分别进行四种传质时，颈部增长x/r 与时 间t 的关系分别是_____、_____、_____ 、_____。 0002.晶体的对称要素中点对称要素种类有_____、_____、_____ 、_____ ，含有平移操作的对称要素种类有_____ 、 _____ 。 0003.晶族、晶系、对称型、结晶学单形、几何单形、布拉菲格子、空间群的数目分别是_____、_____ 、_____ 、 _____ 、_____ 、_____ 。 0004.晶体有两种理想形态，分别是_____和_____。 0005.晶体是指内部质点排列的固体。 0006.以NaCl 晶胞中（001）面心的一个球（Cl- 离子）为例，属于这个球的八面体空隙数为，所以属于这个球的四面体空隙数为。 0007.与非晶体比较晶体具有自限性、、、、和稳定性。 0008. 一个立方晶系晶胞中，一晶面在晶轴X 、Y 、Z 上的截距分别为2a、1/2a 、2/3a，其晶面的晶面指数是。 0009.固体表面粗糙度直接影响液固湿润性，当真实接触角θ时，粗糙度越大，表面接触角，就越容易湿润；当θ，则粗糙度，越不利于湿润。 0010.硼酸盐玻璃中，随着Na2O（R2O）含量的增加，桥氧数，热膨胀系数逐渐下降。当Na2O 含量达到15%—16%时，桥氧又开始，热膨胀系数重新上升，这种反常现象就是硼反常现象。 2+进入到KCl 间隙中而形成0011.晶体结构中的点缺陷类型共分、和三种，CaCl2中Ca 点缺陷的反应式为。 0012.固体质点扩散的推动力是________。 0013.本征扩散是指__________，其扩散系数D＝_________,其扩散活化能由________和_________ 组成。 0014.析晶过程分两个阶段，先______后______。 0015.晶体产生Frankel 缺陷时，晶体体积_________，晶体密度_________；而有Schtty 缺陷时，晶体体积_________, 晶体密度_________。一般说离子晶体中正、负离子半径相差不大时，_________是主要的；两种离子半径相差大 时，_________是主要的。 0016.少量CaCl2 在KCl 中形成固溶体后，实测密度值随Ca2+离子数/K＋离子数比值增加而减少，由此可判断其 缺陷反应式为_________。 0017.Tg 是_________,它与玻璃形成过程的冷却速率有关，同组分熔体快冷时Tg 比慢冷时_________ ,淬冷玻璃比 慢冷玻璃的密度_________,热膨胀系数_________。 0018.同温度下，组成分别为：(1) 0.2Na2O－0.8SiO2 ；(2) 0.1Na2O－0.1CaO－0.8SiO2 ;(3) 0.2CaO－0.8SiO2 的 三种熔体，其粘度大小的顺序为_________。 0019.三T 图中三个T 代表_________, _________,和_________。 0020.粘滞活化能越_________ ,粘度越_________ 。硅酸盐熔体或玻璃的电导主要决定于_________ 。 0021.0.2Na2O-0.8SiO2 组成的熔体，若保持Na2O 含量不变，用CaO 置换部分SiO2 后，电导_________。 0022.在Na2O－SiO2 熔体中加入Al2O3(Na2O/Al2O3<1), 熔体粘度_________。 0023.组成Na2O . 1/2Al2O3 . 2SiO2 的玻璃中氧多面体平均非桥氧数为_________。 0024.在等大球体的最紧密堆积中，六方最紧密堆积与六方格子相对应，立方最紧密堆积与_______ 相对应。0025.在硅酸盐晶体中，硅氧四面体之间如果相连，只能是_________方式相连。 2 2013-2014年度第二学期基因工程期末考试 卷型：A 考试时间：90分钟满分：100分 一、名词解释（3×5） 限制性内切酶(或其它工具酶)：能在特异位点上催化双联DNA分子断裂，产生相应的限制性DNA片段 荧光定量PCR:所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 （半定量PCR:是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过mRNA反转录成cDNA，再进行PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量） 星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段 同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端 转基因技术（或转基因动植物等）：就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。 二、填空（1×15） 1.Cosmid 实际上是由cos 位点和质粒构成的杂合载体，也可以说是带有cos 序列的质粒。 2.超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA 在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒>线状质粒>开环质粒。 3.质粒DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。 4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。 5.设计引物是一般要求C+G的比例在40%-60%，长度在17-30bp 。 6.BAC载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。 三、选择题（2×15，实卷应是1×35） 1.基因工程创始人（D） A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen 2.迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C） A. 既可以作用于双链DNA ，又可以作用于单链DNA B.只能作用于单链DNA C. 只能作用于双链DNA D.只能作用于RNA 3.氨苄青霉素的工作原理为（A ） A.可以抑制细胞壁肽聚糖的合成 B.可以抑制核糖体的转位 C.可以与核糖体50S 亚基结合并抑制蛋白质合成 D.可以与核糖体30S 亚基结合并抑制蛋白质合成 4.反转录酶是一种（C ） A. 依赖DNA的DNA聚合酶 B. 依赖DNA的RNA聚合酶 C. 依赖RNA的DNA聚合酶 D. 依赖RNA的RNA聚合酶 5.II 类限制性内切核酸酶( A ) A．仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 B．限制性识别非甲基化的核苷酸序列 C．有外切核酸酶和甲基化酶活性 四年级下学期科学知识点一、填图。 二、简答题。 1.说一说在我们日常生活中如何做到安全用电？答： （1）不要在电线上晾衣服； （2）不要在电线下放风筝； （3）不要用湿手、湿抹布擦带电设备；（4）不要超负荷用电； （5）不要在孤零零的大树下躲雨； （6）不要在高压线下玩耍； （7）不要贪便宜购买假冒伪劣电器产品。 （8）做实验时，要用干电池做电源； （9）电器的绝缘体老化了要及时更换； （10）发现电器起火，要先却断电源； （11）电器坏了，要找专业的技术人员修； 2.简述植物的果实和种子是怎样形成的？ 答：雄蕊的花粉落到雌蕊的柱头上，在柱头上萌发长出花粉管，花粉管向下延伸到达子房里的胚珠。花粉管中的精子和胚珠里的卵结合，花朵开始凋谢，子房逐渐膨大形成果实，子房里的胚珠形成种子。 3.你的膳食原则是什么？（我们应该怎样讲究营养卫生？） 答： (1)食物多样化，不偏食，不挑食，不然就会因为缺乏某种营养而得 病； (2)进食要适量，吃得不够会导致营养不良，吃得过多会得肥胖等疾 病； (3)膳食营养五搭配：主杂搭配，荤素搭配，粗细搭配，水陆搭配， 多样搭配； (4)每天吃适量的水果蔬菜，每天多喝水； (5)每天吃一些含蛋白质和维生素的食物。 4.面包上长出了什么？像这样的食物还能食用吗？为什么？ 答：（1）面包发霉是因为在它的上面生长了一种生物——霉菌，与其他生物一样，它的生长需要获取营养和适宜的生长环境。 （2）因为霉变的过程中产生的霉菌含有对人体有害的物质，所以发霉变质的食物是绝对不能食用的。 5. 什么是胎生动物？什么是卵生动物？举例说明。 答：（1）用胎生繁殖的动物叫做胎生动物；靠卵繁殖后代的动物叫做卵生动物。 （2）胎生动物：猪、牛、羊、猫、狗 卵生动物：鱼、蛇、青蛙、乌龟、麻雀 6. 如何鉴别矿物的软硬？ A1（fcc）密排面：（100）密排方向：【110】h+k+l全基或全偶衍射 A2（bcc）密排面：（110）密排方向：【111】h+k+l为偶数衍射 A3（hcp）密牌面：（001）密排方向：【100】 2dsinθ=λ 性质、结构成分（研究对象）、合成/制备=效用 1.如何理解点缺陷是一种热力学平衡缺陷？ 随着点缺陷数量增加，熵增加导致自由能下降，但是同时内能增加导致自由能增加，所以有一个平衡浓度，此时有最低的自由能值。 2.何谓位错的应变能。何谓位错的线张力，其估算值为多少。 位错在晶体中引起畸变，使晶体产生畸变能，称之为位错的应变能或位错的能量。 线张力的定义为：位错线增加一个单位长度时，引起晶体能量的增加。 通常用Gb2/2作为位错线张力的估算值。 请问影响合金相结构的因素主要有哪几个。 原子尺寸、晶体结构、电负性、电子浓度。 3.请简要说明：（1）刃型位错周围的原子处于怎样的应力状态（为切应力还是正应力，为拉应力还是压应力）;(2)若有间隙原子存在，则间隙原子更容易存在于位错周围的哪些位置（可以以图示的方式说明）。 (1)刃型位错不仅有正应力同时还有切应力。所有的应力与沿位错线的方向无关，应力场与半原子面左右对称，包含半原子面的晶体受压应力，不包含半原子面的晶体受拉应力。 (2)对正刃型位错，滑移面上方的晶胞体积小于正常晶胞，吸引比基体原子小的置换式溶质原子或空位；滑移面下方的晶胞体积大于正常晶胞，吸引间隙原子和比基体原子大的置换式溶质原子。 4.铁素体钢在拉伸过程中很易出现屈服现象，请问：（1）产生屈服的原因？（2）如何可以消除屈服平台？ 由于碳氮间隙原子钉扎位错，在塑性变形开始阶段需使位错脱离钉扎，从而产生屈服延伸现象；当有足够多的可动位错存在时，或者使间隙原子极少，或者经过预变形后在一段时间内再拉伸。 5.如何提高（或降低）材料的弹性？举例说明，并解释。 选择弹性模量小的材料、或者减小材料的截面积、或者提高材料的屈服强度都可以提高弹性。 6.何谓加工硬化、固溶强化、第二相强化、细晶强化，说明它们与位错的关系 加工硬化：晶体经过变形后，强度、硬度上升，塑性、韧性下降的现象称为加工硬化。随着变形的进行，晶体内位错数目增加，位错产生交互作用，使位错可动性下降，强度上升。 固溶强化：由于溶质原子的存在，导致晶体强度、硬度增加，塑性、韧性下降的现象叫固溶强化。由于溶质原子的存在阻碍或定扎了位错的运动，导致强度的升高。 第二相强化：由于第二相的存在，导致晶体强度、硬度上升，塑性、韧性下降的现象叫第二相强化。由于第二相的存在，导致位错移动困难，从而使强度上升。 细晶强化：由于晶粒细化导致晶体强度、硬度上升，塑性、韧性不下降的现象叫细晶强化。 由于晶粒细化，使晶界数目增加，导致位错开动或运动容易受阻，使强度上升；又由于晶粒细化，使变形更均匀，使应力集中更小，所以，细晶强化在提高强度的同时，并不降低塑性和韧性。 7.说明金属在塑性变形后，其组织和性能将发生怎样的变化 金属塑性变形后，组织变化包括晶粒和亚结构的变化，其中，晶粒被拉长，形成 一、单选 1、第一个实现DNA重组的实验:1972年，美国斯坦福大学医学中心的P.Berg在世界上第一次成功地实现了DNA的体外重组。 2、第一次实现重组体转化成功的实验：1973年，科恩（Coher）和博耶（Boyer）建立的基因工程基本模式。 3、基因工程研究的主要内容：切接转增检。 4、基因工程研究的基本要素：基因、工具酶、载体、受体细胞。 5、DNA在生物体内的存在状态：染色体DNA、病毒DNA（噬菌体DNA）、质粒DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA，有的以线型存在，有的以环状存在。 6、天然DNA提取的步骤：生物材料的准备、裂解细胞、分离抽提DNA。 7、DNA的分离抽提法：酚-氯仿抽提法（常用、经典）。 8、DNA的保存：温度越低越好，同等条件下，温度越低越不容易降解。 9、为了消除在制备RNA过程中RNA酶的污染，应用0.1% DEPC处理过的水配制试剂。 10、人工合成DNA片段的方法有化学合成法和聚合酶链式反应扩增法。 11、紫外分光光度法检测核酸样品的纯度（常用），纯净的核酸溶液的0D260/OD280值应为 1.7~2.0，0D260/OD230值应大于 2.0，如果0D260/OD280小于1.7，可能有蛋白质污染，如果0D260/OD280大于2.0 或0D260/OD230小于2.0时，核酸溶液中可能存在其他干扰物质。12、工具酶就其用途而言可分为三大类：限制性内切酶、连接酶和修饰酶。 13、 14、通常提到的限制性核酸内切酶主要指Ⅱ类酶而言，限制性核酸内切酶的命名：属名+种名。例如：B acillus am ylolique faciens H、 H aemophilus in fluenzae dⅠ→Bam H、Hind 15、限制性内切核酸酶的本质：细菌细胞的限制—修饰系统。 17、常用的酶切方法：单酶切、双酶切和部分酶切。 填空题 1、下颌骨骨折的好发部位在：颏部，下颌角，髁状突，正中联合。 2、牙周炎晚期常表现为：牙周袋形成、牙龈炎症、牙槽骨吸收、牙齿松动 3、保持口腔卫生的主要措施有：漱口、刷牙、洁牙间隙、牙龈按摩、龈上洁治术 4、急性牙髓炎疼痛四大特点：自发性阵发性、夜间痛、温度刺激诱发或加重疼痛、无定位性 5、艾滋病的口腔表现包括：疱疹性口炎、牙龈坏死、念珠菌病、毛状白斑、卡波希肉瘤 6、正常龈沟的深度不超过：2mm 8、哪一解剖结构将腮腺分为深叶和浅叶：面神经 9、在拔除上颌后牙断根时，应注意勿将断根推入上颌窦内。 10、血压高于180/100mmhg，应列为拔牙禁忌症。 11、颌面部外伤引发窒息可分为阻塞性窒息和吸入性窒息两类 12、颌骨骨折常见类型有：闭合型，开放型，混合型等。主要临床表现是咬合紊乱，张口受限和血肿等，骨折片移位可有神经麻木以及全身可有相应症状。 13、对舌缘长期不愈的溃疡，需作（活检）明确诊断，以排除癌肿。 简答题1 15、下颌骨的解剖特点及其临床意义：①下颌骨的正中联合、颏孔区、下颌角、髁突颈等为下颌骨的骨质解剖簿弱部位：当遭遇外力时，这些部位常发生骨折。②血供较差且骨皮质致密，骨髓炎较上颌骨为多。③下颌骨骨折后愈合较上颌骨慢。 16、牙槽后神经阻滞麻醉口内注射方法：①体位②进针点③进针角度和深度。 17、拔牙后出血的处理：①原因②防治③处理：局部止血药，压迫止血→牙槽窝搔刮，填塞，缝合④全身对症处理。 18、牙齿缺失后的不良影响：①咀嚼功能减退②发音功能减退③美观④咬合紊乱等 19.牙又称牙体，由牙冠、牙根、牙颈三部分组成。牙的组织结构：牙釉质、牙本质、牙骨质、牙髓。牙周组织结构：牙槽骨、牙周膜、牙龈。两副天然牙：乳牙和恒牙 20.乳中切牙（6~8）乳侧切牙（8~10）第一乳磨牙（12~16）乳尖牙（16~20）第二乳磨牙（24~30） 21.颌面部淋巴组织：1腮腺淋巴结2下颌上淋巴结3下颌下淋巴结4颏下淋巴结5颈淋巴结 25.颌面缺损的影响：①咀嚼功能；②语言功能；③吞咽功能；④面部容貌；⑤心理精神 26.局部麻醉：常用方法：表面麻醉，浸润麻醉，阻滞麻醉。 并发症：全身：晕厥，过敏反应，中毒；局部：注射区疼痛和水肿，血肿，感染，注射针折断，暂时性面瘫。 27.拔牙的适应症，禁忌症，基本步骤，并发症 （1）适应症：龋齿；牙周病；牙髓坏死；额外牙，错位牙，埋伏牙等导致临近软组织创伤；阻生牙；牙外伤；乳牙；治疗需要的牙，病灶牙。 （2）禁忌症：血管系统疾病，心血管系统疾病，糖尿病，甲状腺功能亢进，肾脏疾病，肝脏疾病，月经及妊娠期，急性炎症期，恶性肿瘤。 （3）基本步骤：分离牙龈，挺松患牙，安放牙钳，拔除患牙，拔牙创的处理，拔牙后的注意事项. （4）并发症：术中：软组织损伤，压根折断，牙槽骨损伤，口腔上颌窦交通；术后：拔牙后出血，拔牙创感染。 27.拔牙创的愈合过程：拔牙后牙槽窝内充满血液，15分钟形成血凝快，24小时成纤维细胞从牙槽骨壁向血凝块内延伸生长，是血块发生机化。1周后完全覆盖创面，牙槽窝内有肉芽组织形成，1~2月牙槽窝即可变平，X片上3~6个月牙槽窝才能出现正常的骨结构。 28.颌面部间隙较多，包括咬肌，翼下颌、下颌下、咽旁、舌下、颏下、颊、眶下、尖牙窝、颞、颞下等间隙。 一、单项选择题(请在每小题的4个备选答案中，选出一个最佳答案， 共10小题；每小题2分，共20分) 1、材料按照使用性能，可分为结构材料和 。 A. 高分子材料； B. 功能材料； C. 金属材料； D. 复合材料。 2、在下列结合键中，不属于一次键的是： A. 离子键； B. 金属键； C. 氢键； D. 共价键。 3、材料的许多性能均与结合键有关，如大多数金属均具有较高的密度是由于： A. 金属元素具有较高的相对原子质量； B. 金属键具有方向性； C. 金属键没有方向性； D.A 和C 。 3、下述晶面指数中，不属于同一晶面族的是： A. (110)； B. (101)； C. (011- ）；D. (100)。 4、 面心立方晶体中，一个晶胞中的原子数目为： A. 2； B. 4； C. 6； D. 14。 5、 体心立方结构晶体的配位数是： A. 8； B.12； C. 4； D. 16。 6、面心立方结构晶体的原子密排面是： A. {111}； B. {110}； C. (100)； D. [111]。 7、立方晶体中（110）和（211）面同属于 晶带 A. [110]； B. [100]； C. [211]； D. [--111]。 6、体心立方结构中原子的最密排晶向族是： A. <100>； B. [111]； C. <111>； D. (111)。 6、如果某一晶体中若干晶面属于某一晶带，则： A. 这些晶面必定是同族晶面； B. 这些晶面必定相互平行； C. 这些晶面上原子排列相同； D. 这些晶面之间的交线相互平行。 7、金属的典型晶体结构有面心立方、体心立方和密排六方三种，它们的晶胞中原子数分别为：A. 4, 2, 6; B. 6, 2, 4; C. 4, 4, 6; D. 2, 4, 6 7、在晶体中形成空位的同时又产生间隙原子，这样的缺陷称为： A. 肖脱基缺陷； B. 弗兰克缺陷； C. 线缺陷； D. 面缺陷 7、两平行螺旋位错，当柏氏矢量同向时，其相互作用力：基因工程考试试题.doc
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