新生儿溶血病血清学检查标准操作规程
(一)检验目的
检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。
(二)检验原理
新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。
(三)适用范围
适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。
(四)设备性能参数
参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系
统使用说明书。
(五)器材与试剂
1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。
2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。
(六)标本要求
1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。
2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。
(七)校准步骤
参照血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、OrthoBioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书中的校准要求执行。
’ (八)操作程序
1.产前血清学检查
(1)取夫妇全血标本分别测定ABO血型及RhD血型，具体操作参照《ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程》。
(2)夫妇ABO血型不配合时，做孕妇血清抗体检查。
①IgG抗A(B)或Rh血型抗体效价测定：参照《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。
②中和孕妇血清做交叉试验：用DTT或2-Me破坏母血清中IgM抗体，以此处理后血清与其丈夫细胞做凝聚胺法或IAT的交叉配血试验，如果出现阳性则可能引起HDN。
2.产后血清学检查
(1)ABO新生儿溶血病血型血清学检查。
①母子标本的ABO血型鉴定：分别取产妇、新生儿的洗涤红细胞鉴定ABO血型，具体操作参照《ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程》。
②新生儿标本的三项试验。a.直接抗人球蛋白试验：将新生儿红细胞用生理盐水充分洗涤3遍，最后1遍将上清控干，然后加1滴抗人球蛋白试剂，经血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒，在显微镜下观察结果，有凝集为阳性，无凝集为阴性。也可以采用卡式抗人球法检测。参见《手工抗人球蛋白试验标准操作规程》。b.游离IgG抗体测定：取试管3支，分别标记Ac、Bc、Oc，每管中各加2滴新生儿血清及相应A、B、O型试剂红细胞各1滴，置37℃
水浴30分钟取出，用生理盐水洗涤3次，最后1次控干上清液，然后在各管中加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒，判读结果(表14-2)。
也可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。再取3系抗体筛查细胞检测新生儿血清中是否存在ABO系统以外的不规则抗体，可以使用卡式抗人球法检测。c.放散试验：用生理盐水将新生儿红细胞充分洗涤4-6次，取1体积洗涤后压积红细胞加等体积的生理盐水，置56℃水浴10分钟，其间不断振摇，然后在预温的离心管中在1 760g条件下，离心1分钟，立即将上层红色放散液转移到另一试管中。取上清放散液分成3份，于标有A、B、O的试管中，分别加入相应的A、B、O试剂红细胞各1滴，置37‘C水浴30分钟，用生理盐水洗涤3次，最后1次控干上清，然后在各管中加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒，判读结果(表14-3)。也可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。
③产妇标本的检查：破坏产妇血清(或血浆)做交叉试验：用DTT或2-Me破坏产妇血清(或血浆)中IgM抗体，以此处理后血清分别与新生儿红细胞及与新生儿ABO同型的标准试剂红细胞做凝聚胺法或IAT的交叉试验；产妇血清中ABO 系统以外的抗体筛选：用处理后产妇血清做不规则抗体筛查，可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测；测定产妇血清中IgG抗A(B)效价：母亲是O型，新生儿是A型时，测IgG 抗A的效价，新生儿是B型时，测IgG抗B的效价。方法参照《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。
(2)Rh新生儿溶血病血清学检查
①母子标本的血型鉴定：分别取产妇、新生儿的洗涤红细胞鉴定Rh血型，具体操作参照《RL血型分型试验(试管法)标准操作规程》。
②新生儿标本的三项试验。a.直接抗球蛋白试验：将子细胞用生理盐水充分洗涤3遍，最后1遍将上清液控干，然后加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1 000g 条件下，离心15秒，判读结果，有凝集为阳性，无凝集为阴性。参见《手工抗人球蛋白试验标准操作规程》。b·游离IgG
抗体测定：取试管3只，标记1、2、3号，每管中各加2滴子血清，并分别加入1滴抗筛试剂红细胞悬液，离心看结果，看好结果后，置37℃水浴30分钟取出，用生理盐水洗涤3次，最后1次控干上清液，然后在各管中加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1000g条件下，离心15秒，判读结果。也可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。如果结果为阳性，应鉴定其抗体特异性，用10系细胞或10系细胞以上谱细胞做IAT法或凝聚胺法检测，结合谱细胞反应格局，确定抗体特异性。c.放散试验(乙醚或氯仿放散法)：参照《吸收-放散试验标准操作规程》。
③产妇标本的检查。测定产妇血清与新生儿细胞的交叉反应：用新生儿红细胞与2-Me处理后产妇血清(或血浆)做凝聚胺法或IAT交叉配血试验，以确定母血清中是否存在针对子细胞抗原的IgG抗体。产妇血清中ABO系统以外抗体的检测：用产妇血清(或血浆)做不规则抗体筛查，可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。如果存在ABO系统以外的同种抗体，则测定此抗体的特异性及效价，具体操作参照《不规则抗体筛查试验标准操作规程》和《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。
3.检验结果的输入与确认
(1)启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序。