Accelerate your genomics and proteomics throughput with KingFisher puri ? cation systems
R
Thermo Scienti ? c KingFisher
全自动磁珠提取纯化系统
新一代的磁珠系统——Thermo Scienti ?
c KingFisher Flex
以无可比拟的速度工作
灵活的配置满足用户的需求
创新的KingFisher专利技术带来了真正的速度——在15-30min 内纯化96个样品，是真正引领市场的自动化仪器。速度的提升，使研究者从繁琐重复的纯化工作中解放出来，使您可以专注于更有意义的工作。同样重要的是，通过KingFisher系统的自动平行样品处理，样品之间的交叉污染和试剂浪费现象被有效消除。
KingFisher Flex主机可以任选一种磁头，从小体积的分析型KF96PCR磁头、到超高产率的KF24DW磁头，满足用户一切的工作需要。使用24道磁头和24孔深孔板，可将工作体积增加至5ml；而使用96道磁头和相应的96孔板，可一次处理96个样品。特别设计的热块与KingFisher耗材底部的完美结合，可以实现±1℃的温度准确性。新的USB接口设计，使得主机与电脑的连接更加方便。
源自KingFisher 96经典设计的KingFisher家族最新产品——KingFisher Flex，是市场上功能最强、通量最高，使用最灵活的磁珠提取纯化平台。KingFisher Flex系统，除了可以使用KingFisher 96所有的三种磁头(KF96DW、KF96、KF96PCR)之外，还可以选择使用最新推出的KF24DW磁头。KF24DW磁头的最大推荐工作体积达到5ml，与之前的KF96DW相比，其效率增加了10倍。新的24道深孔板磁头
KF96DW和KF24DW的全血基因组DNA的提取效率比较。
使用InviMag Blood DNA Kit。
新的图形化人机界面与控制面板
新设计的图形化超大LCD人机界面，可以显示更多的程序信息，运行状态和参数一目了然。多达100个程序的存储空间，辅以直观的图形显示，对不同的应用如DNA、蛋白、细胞、细菌、动物、植物、人、病毒等，进行分类管理，程序切换十分迅速。
增强的控制面板，带四方向键、START/PAUSE/STOP/OK和顺/逆时针键，使程序操作极为简单。系统内置常用的维护工具，包括磁头更换、磁头检查、热块更换等，向导式的操作
使仪器维护更为简便。
KingFisher Flex的图形化用户界面
KingFisher Flex的控制面板
三种不同来源的试剂(Invitek、Agowa和Qiagen)都可成功应用于1ml全血中DNA的纯化
Kit1
Kit2
Kit3
● 生成报告。在程序运行结束后可生成关于此次运行的专门报告，如所用的样本信息，试剂盒信息，详细的程序运行参数等。BindIt软件生成的程序可通过电脑直接运行，也可将程序导入KingFisher Flex的内存后独立运行。
在我们的网站上提供各类经测试优化的应用程序下载，如DNA、RNA、蛋白等。如果您需要开发个性化的磁珠程序，可以和我们联系，我们将用BindIt软件协助您编写程序。
新的BindIt 应用软件
功能强大的BindIt软件是KingFisher Flex的最佳拍档，可帮助用户开发自己的个性化程序。除了KingFisher软件的所有功能外，BindIt软件还提供以下新的特性：
● 用户权限管理。具有14种不同的规则，可灵活的自定义用户。如只具有执行和生成报告权限的操作员，具有最高权限的管理员等。系统已预设四种用户类型。
● 高级程序管理。将程序导入Flex主机时，可按照不同的类型进行分类，如病毒、细菌等。新的程序备份功能，可以从Flex 的主机内存中导出程序进行备份。
● 高级动能混合。磁头不再是传统的一种运动速度，不同速度之间可任意组合，在确保混合效果的同时，保证样品的完整性。磁头的运动次数与停留时间也可自定义，即使粘的液体也能确保实现好的收集效果。
● 磁头更换功能。现在同一个程序也可以实现磁头更换(根据用户建议加入)。从1ml的KF96DW磁头开始工作，到20μI 的KF96PCR磁头洗脱已成为可能。
● 程序优化工具。可对程序中的任一步骤进行单独测试，加速程序优化过程。新的计时器，可方便的计算总的运行时间。
专利的KingFisher 技术原理
KingFisher系列产品是适于分离DNA/RNA、蛋白和细胞的全自动提取纯化系统，专为解决客户现在和未来的所有纯化问题而设计。创新的产品基于专利的KingFisher技术(专利号US 6447729, US 6448092)，通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠，从而实现磁珠/样品的转移，避免了液体处理过程，提高了自动化程度。KingFisher技术的工作原理如下图所示，样品、溶液和磁珠置于微孔板或管中，磁棒表面套有专门的磁套用于保护磁棒避免与样品/溶液/磁珠直接接触。
与自动化系统兼容
KingFisher Flex可与包括机械臂(Robotics)，液体处理系统(Liquid Handling)等在内的自动化设备联用，进一步增加KingFisher Flex的处理通量，满足高通量实验的需求。
KingFisher Flex 与自动化设备整合
工作体积
处理通量磁头
板类型磁套
磁珠大小磁珠回收效率操作界面内部软件加热温度温度准确性计算机接口机械臂兼容外部尺寸(WxDxH)重量
96 通量
24通量20 - 1000 μl 200 - 5000 μl 96个样品/每次运行 24个样品/每次运行KF96DW KF24DW
KF96 KF96PCR
KF 96孔深孔板(50 - 1000 μl ) KF24孔深孔板(200 - 5000 μl )
KF 96孔板(20 - 200 μl )PCR板 (全裙边，20 - 100 μl )
KF96DW磁套 KF24DW磁套KF96磁套KF96PCR磁套
> 1 μm > 95%
图形化用户界面，带START/STOP/PAUSE/OK，四方向键以及顺/逆时针键可存储512个程序室温至+115℃
±1℃, up to +80℃; ±2℃, up to +115℃USB或串口RS-232C 兼容
680 x 600 x 380 mm 28 kg
技术特征
订购信息
KingFisher mL
KingFisher
● 中、小型通量的仪器，可同时处理多达15或24个样品。
● 采用专利的KingFisher技术，通过磁棒转移样品，绝无交叉污染和液体残留。● 速度快，以KingFisher为例，纯化24个样品仅需15-30min。● 专门的动能设计，提高了样品裂解、清洗和洗脱的效率。● 使用专门的塑料耗材，避免样品间的交叉污染。
● 控制面板简洁，通过方向键选择所需的程序，立刻开始你的磁珠实验。● 专门的KingFisher软件可方便的创建、修改和优化磁珠程序。● 体积小巧，仅290x290x310mm大小。
Thermo Scienti ? c KingFisher mL & Thermo Scienti ? c KingFisher——实验室的理想选择
技术特征
工作体积样品通量磁珠回收效率磁头板类型磁套动能洗脱磁珠大小操作界面内部软件计算机接口外部尺寸(WxDxH)重量
20 - 200 μl 24> 99%2x12
特别的KingFisher板1x12形式是，13档速度可选> 1 μm 液晶文字显示可存储8个程序串口RS-232C 290 x 290 x 310 mm 11.5 kg
50 - 1000 μl 15> 95%3x5特别的5联管1x5形式
是，13档速度可选> 1 μm 液晶文字显示可存储8个程序串口RS-232C 290 x 290 x 310 mm 11.5 kg
KingFisher mL
KingFisher
订购信息
基于KingFisher专利技术的KingFisher mL和KingFisher，是小型的磁珠提取纯化系统。KingFisher mL使用特别的五联管和磁套，工作体积50-1000μl ，同时处理15个样品。KingFisher使用专门的KingFisher板，同时处理24个样品，工作体积20-200μl ，特别适合于RNA的纯化。KingFisher mL和KingFisher的共同特点包括：
Magnetic Bead Chromatography ——Thermo Scienti ? c KingFisher 技术应用
几乎在每个实验室，与生物分子相关的分离纯化工作都是十分重要，且必不可少的。尽管有了现代的层析技术，如离子交换层析(IEX, Ion Exchange Chromatography)、亲和层析(AC, Affinity Chromatography)、疏水相互作用层析(HIC, Hydrophobic Interaction Chromatography)等，以及自动化的层析工作站，但要对多个样品进行纯化还是相当困难的，不仅需要选择合适的纯化技术，而且工作量也特别大，很难满足当前飞速发展的“组学”对高通量样品进行纯化的需求。
磁珠技术的产生和发展，很好的解决了纯化自动化的问题。专利的KingFisher技术，通过磁棒转移磁珠的同时转移样品，避免了烦琐的液体处理过程，使得平行的高通量样品纯化成为可能。KF96DW磁头可用于高通量平行的制备小量样品，而大体积的KF24DW磁头可用于高通量制备大量样品。
KingFisher技术所采用的磁珠粒径在0.5-10μm 之间，其内核是铁氧体(Ferrite-based)，表面覆盖高分子惰性材料，如苯乙烯、琼脂糖等。与经典的层析介质相比，磁珠的粒径比常规的介质粒径(40μm )小，因而具有更大的比表面积，而某些具有超顺磁性(Superparamagnetic)的磁珠具有更好的悬浮性能和分散性。根据不同的表面处理与标记，可将磁珠分成各种不同的应用类型：
New TiO 2磷酸化多肽富集磁珠。磁珠表面覆盖有一层TiO 2材料，可以选择性的与磷酸化的氨基酸残基：丝氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)、苏氨酸(Thr)结合，而与酸性的氨基酸残基的非特异性结合最小。与传统的IMAC技术相比，其灵敏度提高了1000倍，富集后磷酸化蛋白的质谱检出限达100 fmol。
New 谷胱甘肽(GSH)磁珠。该磁珠表面包被有琼脂糖，并偶联有谷胱甘肽，可以特异性的与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)结合，因而可用于纯化带有GST标签的重组蛋白。
TALON ?磁珠。TALON磁珠的原理是基于采用Co离子的固定化金属离子亲和技术(IMAC)，可用于纯化带有组氨酸标签(6xHis)的重组蛋白。Protein A和Protein G磁珠。带有Protein A或Protein G基团的磁珠，可广泛应用于IgG的纯化、免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等。
硅质膜磁珠。这是一类最早出现的产品，广泛应用于DNA、RNA的纯化。其原理类似于使用硅质膜的离心柱，磁珠在高盐条件下与核酸结合，而在低盐环境下被洗脱，可用于全血、组织、细菌、病毒、植物等的核酸纯化。反相RPC磁珠。类似于反向层析的原理，可用于多肽的分离纯化。Jimenez等使用KingFisher
96和Dynabead ? RPC 18磁珠仅需20min就可以平行处理96个样品，用于与疾病相关的血清中肽段表达谱的研究。
ChargeSwitch ?磁珠。ChargeSwitch磁珠的原理类似于离子交换技术，磁珠在pH < 6.5的缓冲液中带正电，可与带负电的核酸结合；在pH > 8.5的缓冲液中磁珠带负电，使得之前吸附的核酸从磁珠上释放。ChargeSwitch磁珠可在KingFisher平台上完美使用。
从5mg兔血清中纯化IgG的电泳结果。使用KingFisher 96和Pierce Protein A磁珠
从细菌裂解物中纯化带有GST标签的重组蛋白。使用KingFisher 96和Pierce GSH磁珠。
基因组学
KingFisher磁珠提取纯化平台，非常适合于基因组学的研究。无论提取样本的来源是微生物、动物、植物或是病毒，KingFisher都可以快速的纯化出足够数量的DNA或RNA。高质量的结果可以满足下游应用(如荧光定量PCR)的需要。
畜牧兽医、CDC 的应用
使用专门的KingFisher试剂盒，可高效、高灵敏度地提取H1N1、HIV、HPV病毒、手足口病毒、禽流感病毒(Avian influenza virus)、新城疫病毒(Newcastle disease virus)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus)、立克次体(Coxiella burnetii)等。
KingFisher结合Ambion的MagMAX-96 AI/ND病毒RNA提取试剂盒，应用于禽流感病毒的检测，是获得美国农业部(USDA)认可的高通量方法。提取得到的RNA可以通过ABI公司的Infleuenza A/H5 Kit检测是否含有禽流感病毒，并进一步确认是否是备受关注的H5亚型。
食品安全领域的应用
经过特殊处理的Dynal免疫磁珠可以快速的从食品样品、环境中富集致病菌，如沙门氏菌(Salmonella )、李斯特菌(Listeria )、军团菌(Legionella )、大肠杆菌O157(E.
c o l i O 157)、贾地鞭毛虫(G i a r
d i a c y s t s )和隐孢子虫
(Cryptosporidium oocysts )等。采用磁珠纯化技术可以有效的富集样品中的微生物，减少背景干扰从而提高实验的重复性和准确性，该方法已获美国环保署(EPA)和美国官方分析化学师协会(AOAC)的认可。
临床样品的分子诊断
KingFisher可快速高通量的处理临床样品，提纯的核酸可用于后续的分子诊断，如使用氟尿嘧啶(Fluorouracil, 5-FU)治疗癌症患者前需检测人DPYP基因突变。KingFisher提供了一种高效、高灵敏度的从患者全血中纯化核酸的方案，为DPYP基因的筛查设定了标准。KingFisher同样适合于福尔马林固定石蜡包埋(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE)的组织样品。
法医学的应用
对于法医工作而言，核酸提取的效率和稳定性都是十分重要的。KingFisher与专门的法医样品核酸提取磁珠试剂配合使用，可从不同来源的材料中纯化高质量的DNA，包括干血、
毛发、烟嘴等，最大处理量可达96个样品/每次。
从干血滤纸片、口腔拭子和头发中抽提DNA的结果。
使用KingFisher mL和InviTek法医磁珠试剂盒抽提自1x106 293F细胞的RNA完整性分析结
果(Agilent Bioanalyzer)，纯化产物中包括small RNA(方框区域)。使用KingFisher 96和ChargeSwitch Total RNA Cell Kit。
转基因动物的分型。抽提自小鼠尾巴、耳朵、胚胎干细胞的DNA经PCR扩增的电泳结果。使用KingFisher 96和NucleoMag Tissue Kit。
从禽类咽拭子中提取禽流感病毒RNA,进行荧光定量PCR扩增。使用KingFisher 96和
MagMAX-96 AI/NDViral RNA Isolation Kit。
快速纯化蛋白，即使是脆弱的蛋白复合体
KingFisher可用于纯化各种蛋白，从重组蛋白到治疗用抗体，可以使用各种宿主细胞，如动物细胞、昆虫细胞、酵母、细菌或转基因动物/植物等，常规地纯化抗体/抗原、药物和疫苗。特别的，KingFisher技术是最温和的纯化方法，即使常规柱纯化技术难以得到的复杂而精巧的蛋白复合体，也可以通过KingFisher磁珠提取分离技术完整的纯化得到。
血清中肽段表达谱研究与生物标志物筛选
基于磁珠的色谱分离技术，可以让你以一种简单、有效和可重复的方式每天处理上百的样品。采用基于疏水相互作用的反相RPC磁珠(Reverse Phase Chromatography)可以从血清样品中结合多肽片段，经乙氰洗脱，即可获得高质量的肽段表达谱。通过比较不同条件下肽段表达图谱的差异，寻找潜在的可能血清生物标志物(Biomarker)。
加速噬菌体展示文库的淘洗进程
与传统基于固相微孔板的技术相比，KingFisher技术的优势在于：提供了悬浮式的磁珠，巨大的比表面积可以进行更有效的淘洗(Panning)；转移样品而非液体的方法，使得清洗过程变得非常的简单。全自动的方法易于提升通量，从而显著提高噬菌体展示技术的效率。
从5x106
个血细胞中纯化癌细胞
临床分子诊断——结核分枝杆菌
结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引起的肺结核(Tuberculosis, TB)是世界范围内主要的传染病之一，其中90%的感染者是潜伏的，而一旦发病，死亡率超过50%。因此，结核病初期诊断是十分重要的。传统诊断方法包括萋尼氏染色法(Ziehl-Neelson)、金胺荧光染色法(Auramine fluorescent dye)等。而现代的分子生物学方法，如DNA探针、PCR扩增技术，为从培养液或临床样本中直接、快速、高通量的检测TB提供了新的途径。
德国Braunschweig的分子诊断研究中心，采用专利的KingFishe技术和InviMag细菌DNA提取试剂，进行TB的快速分子诊断，该方法自2005年起开始使用，诊断确诊病例超过300例。
动物疫病分子诊断——牛病毒性腹泻病毒
牛病毒性腹泻病(BVD)，是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的一种极为复杂、有多种临床表现的疾病。该病毒可感染牛、猪、羊、鹿等动物，给畜牧业造成重大的经济损失。
德国政府自2004年开始监控BVDV病毒引起的牲畜感染，2007年通过的BVDV保护条例规定：BVDV病毒是养牛业的必检项目。采用专利的KingFishe技术和InviMag病毒RNA提取试剂，可进行BVDV病毒的快速分子诊断。仅在德国萨克森一地，每年就有20万
头牲畜接受该方法的检测。
结核分支杆菌16S-rRNA荧光定量PCR的扩增结果
高灵敏度检测低至10个拷贝数的BVDV病毒
PI- 1:10
1:100
1:1000
NTC
105
103
10
2
10
1
Genome copies
分离特定的细胞
通过标记特殊抗体的磁珠，KingFisher可以用于分离特定的细胞，如CD34、CD3、CD4等。
应用实例
KingFisher试剂选择指南
https://www.doczj.com/doc/065884873.html,
https://www.doczj.com/doc/065884873.html, （中文）
800-810-5118
注1：以上信息供参考。购买事宜请与当地的试剂供应商联系。注2：InviTek和Qiagen试剂盒已包含KF专用耗材。
注3：相关的KingFisher程序请登陆我们的网站下载，或与当地的技术支持联系。
磁珠法分离纯化DNA原理及其步骤 日期：2012-05-22 来源：互联网 标签：核酸纯化核酸分离磁珠法纯化DNA 摘要: 磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸，从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了磁珠法纯化DNA原理、核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤。 欢度大力神杯之夏，参与BRAND竞猜活动，获赠BRAND产品！ GeneCopoeia：qPCR mix免费试用体验活动开始！ 磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸，从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了磁珠法纯化DNA原理、核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤。 磁珠法纯化DNA原理 磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核酸，其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式。离心磁珠是指磁珠微珠表面包裹了一层可发生离心交换的材料(如DEAE，COOH)等，从而达到吸附核酸目的。不同性质的磁珠微珠所对应的纯化原理是不一致。使用磁珠法来纯化核酸的最大优点就是自动化。磁珠在磁场条件下可以发生聚集或分散，从而可彻底摆脱离心等所需的手工操作流程。Omega拥有全面的磁珠法核酸分离试剂盒，基于这种技术的试剂盒，名称前都有’Mag-Bind’。 核酸分离与纯化的原则 核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。在分离核酸时应遵循以下原则:保证核酸分子一级结构的完整性：排除其他分子污染。 核酸分离与纯化的步骤 大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括了细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤。每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。 1. 细胞裂解:核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来。细胞裂解可通过机械作用、化学作用、酶作用等方法实现。 (1) 机械作用:包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法。这些方法用机械力使细胞破碎,但机械力也可引起核酸链的断裂,因而不适用于高分子量长链核酸的分离。有报道超声裂解法提取的核酸片段长度从< 500bp ～> 20kb 之间,而颗粒匀浆法提取的核酸一般< 10kb。
磁珠法基因组DNA 提取试剂盒(细胞) 样本前处理：细胞用PBS洗两次后，6000rpm/min 离心3min，弃上清，加入500ul Buffer CGP重悬沉淀，12000rpm/min离心1min，弃上清，取沉淀备用。2.裂解结合：在细胞沉淀中，加入500μLBuffer CGL，室温放置5-10min，再加入500μl异丙醇和30ul磁珠悬浮液(MB) （使用前充分重悬），颠倒混匀，室温放置5min（期间不时颠倒混匀）；将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。3.漂洗:(1)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer CGW 0,涡旋振荡5s，重悬磁珠，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体，重复该步骤1次。 (2)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer CGW I,涡旋振荡5s，重悬磁珠,将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。重复该步骤一次，待磁珠完全吸附后吸弃液体（液体一定要弃尽，不然残留会影响下游实验），晾干2min。 实验准备 56°C加热源磁珠用前一定要充分混匀；使用前需在Buffer CGW I中加入相应体积的无水乙醇。 4.洗脱：将离心管从磁力架上取下加入50-100μl Buffer EB ，涡旋振荡结合移液器吹打，充分吹散磁珠（一定要完全吹散磁珠，若未充分重悬会影响DNA 得率），56°C 放置5min（每隔2min振荡混匀重悬磁珠）,置于磁力架上，将上清DNA转移至一新的离心管中，放入-20 °C保存备用，保质期为2 年。 纯度效果评价通过测定洗脱液中DNA的A260来确定RNA产量，通常情况下A260值在0.1～1.0之间数据比较可信。如果不在此范围内，请稀释或浓
c16全自动核酸提取仪操作说明 仪器构造简介： 1 触控屏HID-Pro 320 2 仪器前门 3 样品盘适配器 4 LED指示灯 5 触摸感应器 1 带滤芯的枪头 2 收集管 3 枪头、洗脱管放置架 4 压板 5 样品槽（可直接放置试 剂板或加装适配器后放置 试剂条） 6 传送轨道 7 试剂条适配器
样品架穿孔工具 1 InnuPure接口 2 网络接口 3 USB接口 简易操作说明： 1.插上仪器电源线，打开仪器背部的电源开关，仪器前面LED指示灯显示红色，此时仪器 为待机状态。用手指轻触触摸感应器圆形键一秒钟（注意，不要使劲按），手指拿开后LED指示灯由红色变为绿色，此时仪器为工作状态。 开机后界面如下图所示：
Menu：菜单 Select protocol：选择程序 Tools：工具 Settings：一般设置 2.样品准备和纯化 1)样品盘放入样品架，打开夹板。 2)将试剂板放入样品槽。试剂板上的红线要 与样品槽上的红点对齐。 3)将条管适配器放入样品槽。同样适配器上 的红点要与样品槽上的红点对齐。
4)将试剂条放入样品槽。注意：有“AJ”字样的一头朝向样品盘上刻字的一边。 5)试剂条管放完后，放下压板。 6)放入枪头和收集管。注意：没放试剂条的位 置不要放。 7)将试剂条管第一和第三孔刺穿，可以使用穿 孔工具也可以使用干净的枪头。（“AJ”字样边为第一 孔） 8)将裂解后的样品加入第一孔。（具体操作详见 试剂盒说明） 9)准备好的样品盘放入仪器内，轻推，样品盘 会自动进入。
10) 根据起始样本选择合适的程序，点击开始即可。 11) 纯化完成后样品盘会自动退出，盖子盖好纯化产物放冰箱保存待用。 3. 软件功能介绍 ① 菜单： 设置新用户、设置开机密码等 ② 日期时间： 设置日期 时间 ③ 选择程序： 开始、导入、删除程序 ④ 工具： 自动校正、仪器初始化、磁力测试等仪器自检功能 ⑤ 一般设置： 用户管理、语言、更新等 ⑥ 版本信息
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910114530.1 (22)申请日 2019.02.14 (71)申请人 盈开生物科技(上海)有限公司 地址 201100 上海市闵行区莘福路388号1 幢237室 (72)发明人 谢仁祥 吴应光 (74)专利代理机构 北京盛凡智荣知识产权代理 有限公司 11616 代理人 高志军 (51)Int.Cl. C12M 1/00(2006.01) C12N 15/10(2006.01) (54)发明名称一种基于磁珠法核酸提取的方法及设备(57)摘要本发明公开一种基于磁珠法核酸提取的方法及设备，所述核酸提取的方法包括以下几个步骤：（1）将提取模块上端接一个快换头，再将套管接在提取模块下端，将提取模块的无线充电模块停放在无线充电处充电备用；（2）使用机械臂去取提取模块；（3）将套管伸入样本中，打开提取模块的振动电机，将样本与磁珠混匀，一段时间后使核酸与磁珠尽可能吸附后关闭，然后打开电磁铁，将带有核酸的磁珠吸附在套管表面；（4）将提取模块伸入目标管内，关闭电磁铁，磁珠脱落，再打开振动电机，将磁珠与洗涤液混匀，最后洗脱完成整个核算的提取过程。省去了额外的机械夹爪等设备，小巧轻便，节省了核酸提取的时间，效 率大大提高。权利要求书1页 说明书2页 附图1页CN 109609346 A 2019.04.12 C N 109609346 A
权 利 要 求 书1/1页CN 109609346 A 1.一种基于磁珠法核酸提取的方法及设备，其特征在于，所述核酸提取的设备包括：快换头（1），所述快换头（1）连接机械臂和提取模块（8），所述提取模块（8）包括：上端的无线充电模块（4），所述无线充电模块（4）下方连接电路板（2），所述该电路板（2）下方连接振动电机（5），所述振动电机（5）下方连接电磁铁（3），所述电磁铁（3）外侧套设套管（6）； 所述核酸提取的方法包括以下几个步骤： （1）将提取模块（8）上端接一个快换头（1），再将套管（6）接在提取模块（8）下端，将提取模块（8）的无线充电模块（4）停放在无线充电处充电备用； （2）使用机械臂去取提取模块（8）； （3）将套管（6）伸入样本中，打开提取模块（8）的振动电机（5），将样本与磁珠混匀，一段时间后使核酸与磁珠尽可能吸附后关闭，然后打开电磁铁（3），将带有核酸的磁珠吸附在套管（6）表面； （4）将提取模块（8）伸入目标管内，关闭电磁铁（3），磁珠脱落，再打开振动电机（5），将磁珠与洗涤液混匀，最后洗脱完成整个核算的提取过程。 2
磁珠法核酸分离技术概况 传统的核酸分离技术包含沉淀，离心等过程，这些纯化方法的步骤繁杂、费时长、收率低，接触有毒试剂，很难实现自动化操作；而采用磁性微球做载体进行核酸分离技术就能很好地克服这些缺点，实现样品的快速、高效制备，是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。 一、磁珠法提取核酸简介 磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间之后，再在磁场作用下，使磁性颗粒与液体分开，回收颗粒（即磁珠-DNA 混合物），再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。 磁珠法不需要离心、不需要加入多种试剂，操作简单，符合核酸自动化提取要求，是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。 二、技术路线简易流程 样品裂解—磁珠与待分离DNA特异性结合—磁珠-DNA混合物的洗涤—磁珠与待分离DNA的洗脱分离（即结合-洗涤-洗脱三步）。 细胞裂解后，向裂解液中加入磁珠，当溶液的PH值小于6.5时，磁珠选择性的与优化的DNA结合，此时将吸附有DNA的磁珠置于磁场中，通过缓冲液去除没有被吸附的杂质（蛋白等），然后将磁珠置于PH值8.5的缓冲液中，纯化的DNA即可进入缓冲液中。 三、优点 配合微纳米磁珠核酸提纯试剂，优化样品回收和提纯效果，直接用于后续实验。 1、自动化操作保证了实验结果稳定，避免人工操作引起的差异及错误。 2、自动化操作系统，严格控制孔孔之间污染，避免操作人员的污染和被污染。 四、临床应用 乙肝、丙肝、艾滋病、流行性病毒、感染性疾病等。
下图是国外kingfisher磁珠法核酸提取技术原理图，供参考。
MagDNA TM 磁珠细菌DNA提取试剂盒 ( 磁珠型) 适合：G+,G-细菌，酵母，真菌，乳酸菌，霉菌等 Cat. # 504001（50 preps） 504002（100 preps） 504003（200 preps） Note: for laboratory research use only.
MagDNA TM 磁珠细菌DNA提取试剂盒( 磁珠型) 适用范围： 适用于手动快速提取各种细菌基因组DNA，无需蛋白酶消化，也适用于SPRI-TE；雅培m2000；MagNA Pure LC 2.0 System；BioRobot MDx Workstation；King Fisher（ml)；King Fisher 96 process，ABIgen Magstation等系列核酸提取仪，适合大规模提取！ 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50次100次200次 Lysis Buffer A 室温25ml 50ml 100 ml Solution AB 室温12ml 22ml 44 ml Binding Buffer PQ 室温25ml 50ml 100 ml Wash Buffer B 室温15ml 30ml 60ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 Wash Buffer C 室温10 ml 20ml 30ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇（3倍） Wash Buffer D 室温10 ml 20ml 30ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇（3倍） Elution Buffer E 室温10ml 15ml 25ml MagDNA磁珠室温 1.2ml 1.2ml X 2 1.2ml X 4 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.Lysis Buffer A或者W ash Buffer B低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水 浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 2.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 3.加入MagDNA磁珠前，请漩涡混匀，以免影响浓度的均一性。
磁珠法核酸提取裂解液的作用原理 文章来源：洛阳吉恩特生物科技有限公司 磁珠法核酸提取是以纳米生物磁珠为载体的一种新型核酸提取技术，核酸分子可与磁珠表面的硅羟基发生特异性识别与结合，在外部磁场的作用下发生聚集或分散，彻底摆脱传统核酸提取过程中离心、抽取上清液等手工操作流程，从而实现核酸的自动化提取。广泛应用于临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。 磁珠法核酸提取一般包括裂解、结合、洗涤、洗脱四个主要步骤，每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现，其中裂解环节是决定提取之质量的重中之重，经常也会有老师问到应该如何对裂解液进行优化。那么，我们就来分析一下配置裂解液经常用的试剂及其作用原理。 1、盐酸胍、尿素 盐酸胍在浓度为4-8mol时可断裂氢键，有两种可能机制：1、变性蛋白和盐酸胍、尿素优先结合，形成变性蛋白-变性剂复合物，当复合物被除去，引起N-D 反应平衡向右移动，随着变性剂浓度增加，天然状态的蛋白不断转变为复合物，最终导致蛋白质完全变性；2、盐酸胍、尿素对氨基酸具有增溶作用，能形成氢键，当浓度高时，能破坏水的氢键结构，成为非极性残基的较好溶剂，使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强，盐酸胍、尿素引起的蛋白变性往往是不可逆的。 同时盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂，但并不是一种足够强的变性剂，可以允许完整的RNA从富含RNase的组织中提取出来。高浓度尿素同样可以使蛋白质变性并抑制Rnase活性。 2、异硫氰酸胍 蛋白质变性剂，能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离。在通常使用的蛋白质变性剂中作用最强的是异硫氰酸胍，它们可以使多数蛋白质转换成一种随机的卷曲状态。含有强力的阴离子和阳离子基团，它们可以形成较强的氢键。在还原剂存在的情况下，异硫氰酸胍可以断裂氢键，而去垢剂，如SDS存在的情况下，可以破坏疏水作用。
5个问题让你彻底了解磁珠法全血DNA提取试剂盒 磁珠法全血DNA提取试剂盒是什么？ 生物磁珠是一种新型的功能化固体载体，其表面包被有活性基团，可以与多种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点，在外磁场的作用下可以定向移动和集中，当撤去外磁场后，稍加振荡或抽吸又可均匀分散于液体中，从而使固液相的分离变的十分快捷方便，通过简单的洗脱可以得到纯度很高的靶向物质。 磁珠法全血DNA提取试剂盒采用特殊包被的生物磁珠，通过独特分离作用的缓冲液系统，从全血中分离纯化高质量核酸。磁珠在一定条件下对目的核酸具有很强的亲和力，当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程不涉及有毒试剂，操作环境更加便利，提取的核酸纯度高、质量可靠。使用磁珠法全血DNA提取试剂盒纯化的核酸可适用各种常规模操作，包括酶切、PCR文库建立、分子标记、southern杂交试验。 磁珠法全血DNA提取试剂盒有什么特点？ 1.耗时少：全血DNA提取周期在40分钟左右 2.操作简便：提取过程无需离心 3.无毒无害：试剂中不含有氯仿，酚等有毒物质 4.效果稳定：OD260/OD280均在1.7-2.0之间
5.自动化：可配合国内外各类磁棒式核酸提取仪或核酸提取工作站，实现高通量提取 磁珠法全血DNA提取试剂盒的具体操作是什么？ 1.裂解 取抗凝全血到1.5mLEP管中，加入BufferA、BufferB，混合均匀。然后把EP管置于恒温水箱中温育15～20min。 2.结合 将EP管从温育设备中取出，离心后取上清，加入振荡混匀的磁珠结合液，颠倒混匀。将EP管置于磁力架上进行磁分离，弃废液（吸净管盖及管底残液）。 3.洗涤 ⑴加入洗涤液Ⅰ，点振数次（若有团状或丝状物可增加点振次数及力度），然后磁分离，吸净管盖及管底的残液； ⑵加入洗涤液Ⅱ，点振数次（若有团状或丝状物可增加点振次数及力度），然后磁分离，吸净管盖及管底的残液； ⑶重复步骤⑵一次； ⑷室温下开盖干燥。 4.洗脱 加入洗脱液，放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液至新的EP管中，进行下游实验。 磁珠法全血DNA提取试剂盒优势是什么？ （1）生物磁珠具有小尺寸效应和表面效应，能高效提取
磁珠法拭子基因组DNA提取试剂盒 MagBeads Swab DNA Extraction Kit 【目录号】SDE-5010、SDE-5030、SDE-5100 【运输条件】2~25 C； 【保存条件】磁珠悬浮液2~8 C；蛋白酶K -20 C；其它组分室温; 【试剂盒组成】 【注意事项】 1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害。使用前务必充分混匀； 2. 首次使用试剂盒，请按清洗液2标签提示加入无水乙醇，稀释备用； 3. 蛋白酶K请于-20 C长期保存，避免反复冻融；融化后4C保存，并尽快使用； 4. 为了达到最佳效果，建议使用新鲜拭子样本，或者4C存放少于3天的样本，样本反复 冻融将导致核酸得量严重降低； 5. 如需去除RNA请自备RNase A 溶液（100mg/mL，分散液：10mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH 值8.0 ）； 6. 请务必仔细阅读本试剂盒操作说明书，并严格按照操作步骤完成操作。
【产品简介】 本试剂盒适用于从口腔拭子、宫颈拭子等样本中提取基因组DNA或病毒DNA。试剂盒采用独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对DNA具有极强的特异性亲和力，而当条件改变时，磁珠可逆的释放DNA，从而达到快速分离纯化DNA的目的，并可最大限度的去除蛋白质及其它杂质，从而保证提取DNA 的纯度。所得基因组DNA产物OD260/280比值在1.7~1.9之间，可直接用于酶切、PCR、荧光定量PCR、测序、文库构建等下游实验。本试剂盒可在EP管中进行手动操作，亦可配合核酸提取仪使用，实现高通量操作。 【试剂盒说明】 【自备仪器、耗材和试剂】 仪器自动版 英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、无水乙醇、异丙醇。 手动版 水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、真空干燥箱、无水乙醇、异丙醇、 2.0mL EP管、EP管配套用磁力架。 【仪器自动版操作步骤】 本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，同步可完成32个样本的提取。 1 . 96孔板上样准备 参照下表用量向96孔板各孔位中分别加入相应试剂: 2. 拭子样本裂解 1 ）将拭子棉头或刮头剪下，转移至2.0mL EP管中，加入400卩拭子保存液、20丄蛋白 酶K和200此拭子缓冲液，使溶液完全浸润拭子，涡旋震荡。
磁珠法提取核酸的3种样本处理方法 转自：洛阳吉恩特生物科技有限公司磁珠法核酸提取实验室以生物磁珠为载体提取核酸，所有反应是在液体体系中进行的，但生物样本多种多样，有液体也有固体，或者固液混合体，大多数生物样本在进行核酸提取纯化之前需要进行一定的前处理，液化、富集、除杂等都是常见的前处理方式。 一、液化 将固体样本转化为液体样本是最重要的样本前处理方法，固体样本是很难直接在试剂盒的作用下用于提取核酸的。固体样本跟杂质一样，会严重阻碍磁珠吸附核酸，并且耗损大量的磁珠位点，很难取得良好的提取效果。 常见的固体样本如植物组织、动物组织、泥土、浓痰等。 植物组织和动物组织，可剪取适量的样本，在研钵内快速研磨。研磨时如果需要保护RNA，可以采用液氮研磨的方式。如果不需要提取RNA，也可以加入裂解液或者生理盐水帮助研磨成匀浆状态。 泥土的处理方式主要是通过浸泡。因为从泥土中提取核酸，并非提取泥土本身，而是提取泥土中存在的微生物的核酸。使用生理盐水或者其他适当缓冲液体浸泡泥土，如果是较为干硬致密的泥土，浸泡前可以先碾碎成小颗粒，浸泡过程中可用小棒搅动帮助泥土分散。浸泡一段时间后，将泥浆用三层滤纸过滤，过滤所得的液体，即可用于磁珠法提取。 如浓痰、脓液等固液混合又较为黏腻的生物样本，可以先使用氢氧化钠液体进行碱解液化，再酸中和后，作为液体样本进行磁珠法提取。 以上方法处理固体样本，所得的液体，可能并不完全清澈透明，杂质还是相对较多的，如果必要，使用离心的方式，可以除去更多的杂质，但相对应该控制离心速度在10000r/min以下，否则核酸也会一起随杂质被离心下去。 二、富集 很多时候，用磁珠法提取的核酸都是微量或者痕量的样本，直接使用样本进行操作，所能得到的核酸很少，这就要求下游的检测试剂灵敏度很高，如果检测试剂灵敏度不足，在样本痕量的情况下，很可能检测不出，出现假阴性。所以对于微量样本和痕量样本，可以进行富集前处理。 有些时候，样本属于常量样本，但下游实验需求核酸量大，也需要对样本进
磁珠法核酸提取原理解决方案 说到磁珠法，那我们首先当然必须得了解磁珠，什么是磁珠呢？磁珠是利用一定的组织包被四氧化三铁核心而形成的可以被磁铁吸附的同时有能通过表面包被物吸附（结合）核酸的神奇的小珠子。之所以说他神奇，是因为他的用途很大！它可以实现核酸提取的自动化和高通量化。 磁珠结构： 磁珠一般分为三层结构： 1.最内层：为支持结构，如聚苯乙烯做的内核； 2.中间层：磁层，作用是与磁力架上的磁铁相互吸附，从而分离核酸与反应溶液，材料通常为Fe3O4； 3.最外层：修饰层，一般为带负电的基团； 磁珠法核酸提取原理 在磁珠法的反应体系中，核酸分子（DNA & RNA）会由线性压缩成球状，暴露出核酸骨架上大量的负电基团与反应体系中的阳离子连接，在磁珠最外层负电基团的作用下，形成“阴离子-阳离子-阴离子”的盐桥结构，使核酸分子被特异性地吸附到磁珠表面。而当反应缓冲液被弃除后，加入水性分子，会快速充分水化核酸分子，解除三者之间的离子相互作用，使吸附到磁珠上的核酸分子被纯化出来。 磁珠法核酸提取的优势 磁珠法DNA提取是纳米科技与生物技术的完美结合，具有其它DNA提取方法不可比拟的优势： （1）样本需求量低：微量的材料即可提到高浓度的核酸；
（2）操作简单快速：整个操作流程基本分为五步（裂解、结合、洗涤、干燥、洗脱），全程无需离心操作，大多可在30~60分钟内完成； （3）质量稳定可靠：游离的磁珠与核酸的结合量更大，特异性的结合使得核酸纯度更高，且可通过控制磁珠表面基团来调节核酸回收量； （4）全自动化操作：采用核酸提取仪可实现自动化、高通量操作，可实现几十甚至几百个样品的提取；（5）安全无毒无害：试剂不含酚、氯仿等有毒化学试剂，完全符合现代化环保理念。 磁珠法——其他应用领域 当然，除了用作核酸提取，根据不同的表面处理与标记，还可将磁珠应用到其他的领域 ①.细胞分离（CD4、CD8） 可进一步用于肿瘤检测与诊断等 ②.蛋白、抗体分离（氨基磁珠、羧基磁珠、环氧基磁珠） 可进一步用于疾病的检测与诊断等 磁珠——根据不同的表面处理与标记，可将磁珠分成各种不同的应用类型 磁珠羧基#U0001 MaxBead Protein A #U0084 MaxBead Carboxyl Labeling试剂盒#KA3267 细胞与组织DNA分离试剂盒(磁珠系统) #62500 EpiMag 96孔高通量磁力分离器#Q10002-1
日期：2012-05-22 来源：互联网 标签：核酸纯化核酸分离磁珠法纯化DNA 摘要 : 磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸，从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了磁珠法纯化DNA原理、核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤。 欢度大力神杯之夏，参与BRAND竞猜活动，获赠BRAND产品！ GeneCopoeia：qPCR mix免费试用体验活动开始！ 磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸，从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了磁珠法纯化DNA原理、核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤。 磁珠法纯化DNA原理 磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核酸，其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式。离心磁珠是指磁珠微珠表面包裹了一层可发生离心交换的材料(如DEAE，COOH)等，从而达到吸附核酸目的。不同性质的磁珠微珠所对应的纯化原理是不一致。使用磁珠法来纯化核酸的最大优点就是自动化。磁珠在磁场条件下可以发生聚集或分散，从而可彻底摆脱离心等所需的手工操作流程。Omega拥有全面的磁珠法核酸分离试剂盒，基于这种技术的试剂盒，名称前都有’Mag-Bind’。 核酸分离与纯化的原则 核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。在分离核酸时应遵循以下原则:保证核酸分子一级结构的完整性：排除其他分子污染。 核酸分离与纯化的步骤 大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括了细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤。每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。 1. 细胞裂解:核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来。细胞裂解可通过机械作用、化学作用、酶作用等方法实现。 (1) 机械作用:包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法。这些方法用机械力使细胞破碎,但机械力也可引起核酸链的断裂,因而不适用于高分子量长链核酸的分离。有报道超声裂解法提取的核酸片段长度从< 500bp ～ > 20kb 之间,而颗粒匀浆法提取的核酸一般< 10kb。 (2) 化学作用:在一定的p H 环境和变性条件下,细胞破裂,蛋白质变性沉淀,核酸被释放到水相。上述变性条件可通过加热、加入表面活性剂(SDS、Triton X-100 、Tween 20 、
磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。硅磁（Magnet ic Silic a Partic le）就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核酸，其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式。离心磁珠是指磁珠微珠表面包裹了一层可发生离心交换的材料（如DEAE，COO H）等，从而达到吸附核酸目的。不同性质的磁珠微珠所对应的纯化原理是不一致。使用磁珠法来纯化核酸的最大优点就是自动化。磁珠在磁场条件下可以发生聚集或分散，从而可彻底摆脱离心等所需的手工操作流程。Omega拥有全面的磁珠法核酸分离试剂盒，基于这种技术的试剂盒，名称前都有’Mag-Bind’。 核酸分离与纯化的原则 核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。在分离核酸时应遵循以下原则:保证核酸分子一级结构的完整性;排除其他分子污染。 核酸分离与纯化的步骤 大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括了细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤。每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。 1. 细胞裂解:核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来。细胞裂解可通过机械作用、化学作用、酶作用等方法实现。 (1) 机械作用:包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法。这些方法用机械力使细胞破碎,但机械力也可引起核酸链的断裂,因而不适用于高分子量长 链核酸的分离。有报道超声裂解法提取的核酸片段长度从< 500bp ～> 20kb 之间,而颗粒匀浆法提取的核酸一般< 10kb。 (2) 化学作用:在一定的p H 环境和变性条件下,细胞破裂,蛋白质变性沉淀,核酸被释放到水相。上述变性条件可通过加热、加入表面活性剂(SDS、Triton X-100 、Tween 20 、NP-40 、CTAB、sar-cosyl 、Chelex-100 等) 或强离子剂(异硫氰酸胍、盐酸胍、肌酸胍) 而获得。而p H 环境则由加入的强碱(NaOH) 或缓冲液( TE、STE 等) 提供。在一定的p H 环境下,表面活性剂或强离子剂可使细胞裂解、蛋白质和多糖沉淀,缓冲液中的一些金属离子螯合剂( EDTA 等) 可螯合对核酸酶活性所必须的金属离子Mg2+ 、Ca2+ ,从而抑制核酸酶的活性,保护核酸不被降解。 (3) 酶作用:主要是通过加入溶菌酶或蛋白酶(蛋白酶K、植物蛋白酶或链酶蛋白酶) 以使细胞破裂,核酸释放。蛋白酶还能降解与核酸结合的蛋白质,促进核酸的分离。其中溶菌酶能催化细菌细胞壁的蛋白多糖N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸残基间的β-(1 ,4) 键水解。蛋白酶K能催化水解多种多肽键,其在65 ℃及有EDTA、尿素(1～4mol/ L) 和去污剂(0. 5 %SDS 或1 %Triton X-100) 存在时仍保留酶活性,这有利于提高对高分子量核酸的提取效率。在实际工作中,酶作用、机械作用、化学作用经常联合使用。具体选择哪种或哪几种方法可根据细胞类型、待分离的核酸类型及后续实验目的来确定。 2. 酶处理:在核酸提取过程中,可通过加入适当的酶使不需要的物质降解,以利于核酸的分离与纯化。如在裂解液中加入蛋白酶(蛋白酶K 或链酶蛋白酶) 可以降解蛋白质,灭活核酸酶(DNase 和RNase) ,DNase 和RNase 也用于去除不需要的核酸。
QIAcube技术参数 1、主要用途： 1）可从动物，植物组织，全血中的白细胞组分及以下法医特殊检材中纯化总DNA（基因组DNA和线粒体DNA）：表面和口腔拭子，FTA和Guthrie，体液斑，口香糖，烟蒂，指甲和毛发，纸质材料，小体积血液或唾液，组织，激光显微切割标本，骨头和牙齿，性侵犯样品等； *2）可对性侵犯混合样本进行精子细胞和女性上皮成分全自动化差异洗涤，得到单一男性组分； 3）可对STR产物进行净化，达到纯化和浓缩STR产物的目的，进而大幅度提高毛细管电泳步骤中检测的信噪比。 2、工件条件: 温度：18-28℃，湿度：15-75%，电压：220-240V。 3、技术指标： 1、*基于硅胶膜离心法的全自动样品制备装置。可实现样品裂解、裂解液转移、离心柱清洗、洗脱液回收等实验步骤的全自动操作，无需人工介入； 2、无需专用的自动化试剂盒，只需普通手工试剂盒即可实现自动化； 3、*有专门应用于法医领域的体液和血液、法医案件、FTA及Guthrie卡、表面及口腔拭子等检材纯化程序； 4、*有专门针对性侵犯混合斑检材的全自动化处理程序，无需手工进行女性成分洗涤去除工作； 5、每次可对1-12个样品进行纯化，样品数目可按需设置； 6、内置控制系统，无需电脑； 7、程序的选择和设置通过触摸屏完成； 8、*配备自动裂解模块，具有加热和震荡功能，最高加热温70℃，兼容圆底离心管和锥形底离心管； 9、配备自动离心模块，离心机安全盖可自动开合； 10、配备自动液体转移机械臂，可使用一次性带滤芯枪头进行液体转移；配备离心柱转移机械臂，可对离心柱进行夹放、旋转、丢弃操作； 11、*配备光学感应器和超声液面探测器，能够自动感应检查样品数目、移液枪头数目、移液枪头类型、离心管数目及摆放状态、试剂液面高度等，防止人为摆放错误； 12、预装有各种应用的纯化程序，并可通过网络免费下载不断开发的新程序，使用USB接
A包全自动核酸提取仪技术参数要求如下： 主要技术参数： ★1、移液针数≥8通道。 2、可自动一次性连续处理≥32个样本。单个样品可独立进行处理。 3、针对病毒样本，同时处理1—32个内参样本。 4、配有枪头缺失和凝块感应系统。 ★5、可以从动植物、昆虫、血清、血浆、组织、粪便、培养细胞等样本中纯化病原体（包括细菌和病毒）基因组DNA/RNA、mRNA，可以从痕量样本中纯化基因组DNA； 6、系统具有后处理功能，能按照用户设定程序完成，稀释、分装、配试剂等操作无需手工、避免污染。 7、试剂盒未完全使用，可暂时封存，有效期内仍可正常使用，避免多余试剂的浪费。 8、可兼容多种上样方式，包括1.5/2.0ml离心管、IC毛细管、离心适配器、1—4块96孔板等。 9、可以快速、灵活地对各种格式的样品条形码进行自动识别与纪录，并自动生成信息文件。可以兼容整合进入实验室信息管理系统。 ★10、上样体积最小为10ul。洗脱体积可选择。 11、洗脱方式可分装至1.5/2.0ml离心管、96孔板、毛细管等多种实验室常用耗材中。 12、配有加热位，样本裂解步骤在机内完成。 13、配备有冷却洗脱位，保证纯化得到的核酸不致降解。 一般技术参数： 1.应用程序可永久免费在线升级。 2.内置USB接口以及100M网卡接口，可直接网络连通。 3.高通量组织研磨仪，配以适当的适配器，可以在3分钟同时完成48-192个样本的研磨前处理。可处理样本种类包括动植物、昆虫组织等，研磨频率10-30Hz。 4、有紫外消毒装置，可对全仪器进行消毒杀菌。 5、有防滴液装置，防止液体滴落污染台面；全封闭仪器设计。 6、软件自动计算所需实验试剂的体积。 配置要求： 1.主机一台，电脑一台。 2.样品前处理：高通量组织研磨仪一台；冷冻研磨附件。 B包SPR生物检测仪技术参数要求如下： 主要技术参数： ★1. 检测通道：矩阵式多通道检测，最多可同时检测≥300个以上相互作用。 2. 分析物与探针矩阵作用方式: 分析物与矩阵内所有生物探针同时作用。 3. 检测样品范围：样品无需标记，可检测任何生物大分子，包括核酸、蛋白质、多糖及其他化合物。 ★4. 检测灵敏度：≥8 pg/mm2。 ★5.线性检测范围: 0.05%-10% 反射变化 6. 数据采集方式：实时数据－图像采集，监控动力学曲线；可选择连续或断续收集数据。同时采集所有作用点的图像数据. 7. 检测模式：高敏感度近红外CCD摄像机。 8. 偏振控制模式：S-偏振光反应。 一般技术参数： 1.光源波长：750nm－850nm 2.最小静止样品量：≤8.5μL。 3.最小流动样品量：≤ 95μL。 4.循环样品流速：0-650μL 可调。 5.样品池温度可调：最高≥60°C.
磁珠法总RNA提取试剂盒 MagBeads Total RNA Extraction Kit 【目录号】TRE-5010；TRE-5030；TRE-5100； 【运输条件】2~25℃； 【保存条件】磁珠悬浮液2~8℃；其它组分室温； 【试剂盒组成】 【注意事项】 1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀； 2. 清洗液1使用前请按照瓶身标签描述加入异丙醇，稀释备用； 3. 清洗液2使用前请按照瓶身标签描述加入无水乙醇，稀释备用； 4. 建议使用新鲜或4℃存放少于3天样本进行提取，反复冻融导致核酸得量明显降低； 5. 请仔细阅读本说明书，并严格按照操作步骤完成操作。
磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案 【产品简介】 本试剂盒适用于从植物材料、动物组织、各种微生物、培养细胞等样本中提取总RNA。 试剂盒采用独特分离作用的纳米磁珠和缓冲液体系，磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对核酸具有极强的富集能力，当条件改变时可以可逆的释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。 试剂盒经过磁珠与核酸结合、清洗、洗脱等步骤，最大限度的去除了蛋白质及其它杂质，所得RNA产物纯度优良，可直接应用于酶切、PCR、qPCR、文库构建、测序等各种下游分子生物学实验。 【试剂盒说明】 仪器自动版 英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、EP管离心机、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、EP管、无水乙醇、异丙醇以及氯仿、PBS溶液（1×）。 手动版 水浴锅或金属浴、EP管离心机、涡旋振荡仪、EP管、EP管配套用磁力架、无水乙醇、异丙醇、氯仿、PBS溶液（1×）。 【手动版操作步骤】 1. 样本前处理及裂解 1）贴壁培养细胞 倒弃培养液，用PBS溶液（1×）冲洗一次，按照每10cm2生长细胞中加入1mL的比例加 入裂解液，轻微晃动使裂解液均匀分布于细胞表面，将内含细胞的裂解液转移至EP管中， 涡旋振荡至无明显颗粒物，室温静置5min。 2）悬浮培养细胞 将悬浮培养细胞连同培养液一起转入EP管中，4℃、8,000g离心2min，吸弃上清液，注 意勿破坏细胞沉淀。按照每5~10×106个细胞中加入1mL的比例加入裂解液，涡旋振荡至
磁珠法核酸自动提取仪在分子生物学领域的应用 罗 英 （浙江迪安诊断技术股份有限公司，杭州 ３１００００ ）摘 要 磁珠法核酸自动提取仪可以简单、快速、高效和经济地实现各种标本核酸的自动 提取。本文概述了核酸自动提取仪的原理及分类，磁珠法核酸自动提取仪原理、分类、特点及其在 分子生物学领域的应用。 关键词 磁珠 核酸 ＮＡＴ 核酸自动提取仪 分子生物学 自沃森－克里克的ＤＮＡ双螺旋模型诞生以后， 生物学进入到了一个全新的时代，在生物学界，无论是进行病原微生物的检测、物种鉴定，还是进行物种起源、多样性评估及其亲缘关 系、系统进化等的研究，首先都需要对核酸进行分离纯化，因此对ＤＮＡ的提取成为生物医药领域甚至农林牧渔等领域内所有学科进行科学研究的基础。而能否提取出高质量的核酸则是核酸分子生物学试验中的关键，提取方法的灵敏度、特异性也将直接关系到后续试验的成败［ １］。因此核酸提取是分子生物学的基本方法，也是核酸分析中最关键的方法。科学家们因此开出发了一系列的核酸提取方法，包括经典的酚氯仿抽提法，新发展的硅胶膜吸附法、磁珠分离法等。而随着基因诊断在临床疾病的诊断和监测中发挥着日益重要的作用，基因诊断对 核酸检测赖以完成的前提技术———核酸提取技术提出了新的要求，高效、便捷、环保、大通量、 自动化成为核酸提取技术发展的主流方向。在这种背景下，核酸自动提取仪应运而生，很多公司纷纷推出自己的全核酸自动提取仪器，各种原理的都有，本文将对核酸自动提取仪原理及分类作一概述，重点介绍磁珠法核酸自动提取仪的原理、分类、优势及应用现状。 １ 核酸自动提取仪原理及分类 核酸自动提取仪，又叫核酸自动纯化仪，是一种应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸快速提取工作的仪器。根据其提取原理可分为离心柱法和磁珠法两种。离心柱法全核酸自动提取仪主要采用离心机和自动移液装置相结合的方法，通量一般在１～１２个样本， 操作时间和手工提取差不多， 并不能提高实际工作效率，且价格昂贵，不同型号仪器的耗材也不能通用，仅适合经费充足的大型实验室使用。而磁珠法核酸自动提取仪则是以磁珠为载体，利用磁珠在高盐低ｐＨ值下吸附核酸，在低盐高ｐＨ值下与核酸分离的原理， 再通过移动磁珠或转移液体来实现核酸的整个提取纯化过程。由于其原理的独特性，所以可设计成很多种通量，既可 以单管提取，也可以提取８～９６个样本，且其操作简单快捷，提取９６个样本仅需３０～４５ｍｉｎ ，大大提高了实验效率，且成本低廉，因而可以在不同实验室使用。 根据仪器型号大小又可分为两大类：一类是大型的自动化仪器，一般称为自动液体工作站；另一类是小型的自动化仪器，利用封装好的配套试剂自动完成核酸提取纯化的过程。大型 自动液体工作站， 功能非常强大，可以自动完成液体分液、吸液等工作，甚至可以将扩增、检测等仪器设备整合在一起， 一次性实现标本提取、扩增、检测全自动化操作。提取核酸只是其功能的一个应用，因为其设备成本高昂，运行成本高，不太适合常规实验室使用，一般都应用在一 ２２蚕 学 通 讯 Ｎｅｗｓｌｅｔｔｅｒ ｏｆ Ｓｅｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 第３３卷 第２期２０１３年 ６月
五种核酸自动提取仪的比较 厂家产品名称原理通量及工作效率配套耗材样品混匀模式得率及分析样本裂解单个样品样本是否需要预 方式提取成本处理 (人民币 ) BioTeke IAUTOMAG核酸磁珠法32 通道通用的毫升震荡混匀，底部高于离心柱方组织块直10-15 元不需要提取仪深孔板，可独立控温，紫外法接加入，不 以处理更高灭菌需要预先 容量样品研磨过夜 消化 ABI MAGMAX24 磁珠法24 通道毫升微孔无加热模块，低需要样品20-30 元预消化 5 小时或 板，不能处预先研磨者过夜 理体积大样过夜消化 品，专用耗 材价格昂贵 Eppendorf 5075 VAC 核酸分负压法不96 通道，只配套无加热模块，不负压法易导致需要样品20-30 元预消化 5 小时或
离纯化工作站适合提取Eppendorf 能自动提取组96 孔某些孔预先研磨者过夜 组织，会96 孔板及移织，粘稠样品，液体残留，洗过夜消化 堵液用枪头，所以叫分离纯脱不完全，洗 耗材成本高化工作站，而不脱效率低于离 是提取仪心法和磁珠法 Thermo Kingfisher 只有 8个24 通道（微孔板，容只配套专用加热模块单配，试剂需要手工需要样品20-30 元预消化 5 小时或固定的程量 200ul ）或者 15 通耗材，使用无法全自动提加，裂解需要预先研磨者过夜 序组，只道(微孔管，容量微孔板（酶取全血、组织等借助外部裂过夜消化 能通过电1000ul) ，只能处理少标板）微孔需要蛋白酶 K裂解，提取效果 脑编辑输体积样品，管，耗材成解的样品，所以低于离心柱法 入本太高叫磁珠分选纯 化仪，而不是核 酸自动提取仪， 选配加热模块 价格极高
核算提取仪 北京贝尔生物工程有限公司 PCR室 一．核酸提取技术
精选文库随着近年来分子生物学技术的高速发展，核酸扩增，核酸杂交将成为进行病原菌微生物检测，物种鉴定，物种起源、多样性评估及其亲缘关系、系统计划等常用研究手段之一。这样的分子检测和分子诊断技术在人体健康体检、视频法医等领域中具有至关重要的作用。而在所有的现代分子生物学检测技术首先面临的问题就是如何从样品中快速有效的分离提取所需的基因组核酸，并且大规模高质量的提取核酸分子也成为了一个挑战。 自1869年人类首次发现核酸分为脱氧核当核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），核酸的提取方法包括各种实验材料和试剂都一直在进行着改进，柠檬酸钠、RNase、SDS、硫氰酸胍等先后应用于核酸的提取。现今核酸的提取方法中主要有一些传统的方法比如CTAB法、Trizol法、氯化锂法、以及一些新兴的方法比如旋转离心柱提取法、玻璃粉吸附法、二氧化硅基质法、阴离子交换法、纳米磁珠提取法。总的来讲，不管采用什么样的方式方法进行核酸的提取以及纯化，主要可以分为以下三步： 第一步为利用物理或化学的方式促进细胞破裂，使细胞中的核酸释放出来。 第二步是初步的将核酸与细胞内部的蛋白质、多糖、脂类分离。新兴的方法比如旋转离心柱提取法是利用特定的载体，将释放的核酸吸附在特定的载体上，这种载体有且仅对于核酸具有较强的亲和力和吸附力。 第三步则是将核酸进行最后的洗脱与富集。 虽然具有相通的原理，对比传统的核酸提取法与新兴的核酸提取法，传统的核酸提取技术中包含的沉淀和离心等操作需要用到大量的生物样本，而且传统提取步骤较为繁杂，费时长，效率低下，很难实现自动化以及规模化，大部分方法涉及到有机试剂的使用，对于操作人员具有潜在的威胁，其应用的范围受到了明显的局限。因此，随着时间的推移，传统的从液相系统中分离提取核酸的方式逐步的被以固相吸附物载体为基础的新方法所取代。 二、磁珠核酸提取法 20世纪90年代，磁珠提取核酸的方法是为了适应现代分子生物学检测实验高通量、高灵敏度、自动化的操作需要所打造的方法。该方法是纳米技术与生物 — 2