实验一分子生物学仪器的使用及原理
一、实验目的
1.学习认识分子生物学实验室的仪器设备
2.了解分子生物学仪器设备使用的注意事项
二、主要仪器设备
1.普通离心机
2.无菌操作台
3.高速冷冻离心机
4.PCR仪
5.恒温振荡摇床
6.真空干燥箱
7.恒温水浴锅
8.紫外分光光度计
9.微波炉
10.微量移液器
11.Eppendorf管
12.高压灭菌锅
13.电泳仪
14.凝胶成像系统
15.紫外仪
三、实验报告要求
写出分子生物学主要仪器设备的使用注意事项
实验二：质粒（pEGFP-N1）的提取与酶切
一. 实验目的
1.了解碱裂解法提取质粒的基本原理和主要应用，掌握碱裂解法提取质粒的实验方法和各种试剂在提取过程中的作用。
二. 实验原理
碱裂解法是利用细菌染色体DNA与质粒DNA结构的大小差异来分离质粒DNA的。碱性（pH 12.0～12.5）条件可以破坏碱基配对，宿主和质粒DNA的碱基之间的氢键被破坏。当条件恢复正常时（加入酸性试剂中和），共价闭合环状的质粒DNA会迅速准确地恢复配对，重新形成完全天然的超螺旋分子；而较大的细菌染色体DNA分子则难以复性，会交联形成不溶于水的线团结构，缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀下来，而质粒DNA则留在上清液中，用异丙醇沉淀、70 %乙醇洗涤即可获得质粒DNA。
三. 仪器设备
微量取液器（2 μL；20 μL；200 μL；1 000 μL），tip头，手掌型离心机，1.5 mL 离心管, 恒温水浴，制冰机，超净工作台，恒温培养箱。振荡器，离心机，金属浴，电泳仪，凝胶成像仪。
四．实验试剂
1.溶液Ⅰ：50 mmol/L葡萄糖；20 mmol/L Tris·HCl（pH = 8.0）；10 mmol/L EDTA（pH=8.0），高压蒸汽灭菌（121 ℃，0.105 Mpa）20 min。4 ℃贮存。
2.溶液Ⅱ（现用现配）：0.2 mol/L NaOH；1 g / L SDS。
3.溶液Ⅲ（pH
4.8）：每100 mL溶液中含5 mol/L乙酸钾60 mL；冰乙酸11.5 mL；H2O 28.5 mL。
4.RNase（10 mg / mL），LB液体培养基，氨苄青霉素，异丙醇，70 %（V / V）乙醇，无菌水。
五.实验步骤：
1.提取步骤：
1) 挑取LB固体培养基上生长的单菌落，接种于3-5mlLB（含氨苄）液体培养基中，37℃振荡培养12-14小时。
2) 取上述培养物移入1.5mlep管中，室温以8000r/min离心5分钟，弃上清，再加1.5ml上述培养养物于ep管中，室温以8000r/min再离心5分钟。
3) 弃上清液，将离心管倒置，使液体尽可能流尽。
4) 加溶液Ⅰ100μl，用力弹ep管，使菌体分散均匀；加溶液Ⅱ200μl，颠倒数次混匀（不要剧烈振荡），并将离心ep管放置于冰上5分钟，使细胞膜裂解（溶液Ⅱ为裂解液，故离心管中菌液逐渐变清）。
5) 加入150μl预冷的溶液Ⅲ，将管温和颠倒数次混匀，见白色絮状沉淀，可在冰上放置10分钟。（溶液Ⅲ为中和溶液，此时质粒DNA复性，染色体和蛋白质不可逆变性，形成不可溶复合物，同时K+使SDS-蛋白复合物沉淀。）然后，室温以12000r/min离心5分钟。
6) 抽取上清液于一新微量离心管（ep管）中，加无水乙醇900μl，冰浴20分钟，室温以13000r/min离心10分钟，放入净化工作台用风机吹干，加TE，定容至30μl，再加RNA酶5μl，37℃水浴30分钟。（-20℃保存备用）
酶切步骤：
1) 制胶：1%琼脂糖电泳：琼脂糖0.5克，TBE50毫升放电炉上使之融化，温度降到50摄氏度时加入EB冷凝后倒胶，30分钟后凝固，拔去梳子。
2) 加样：取已转化的感受态细胞溶液10微升，再加5微升上样液。
3) 电泳：电压40V和电流50mA 条件下，50分钟后用紫外灯观察（有无条带），若有条带跑出，进行抽提。
①加TE400微升、酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）400微升，用力弹匀。室温下，12500rpm离心10分钟。观察到液体分三层，取上层液于一新灭菌过的EP管中，再加氯仿400微升，然后室温下，12500rpm离心10分钟。
②取上清液，加无水乙醇900—1000微升、乙酸铵100微升，用力震荡。-20摄氏度下放置1-1.5小时，然后室温下，13000rpm离心5-10分钟。
③弃去上清液，加75%的酒精混匀。室温下，12500rpm离心5分钟。
④弃去上清，把EP管放入净化工作台用风机吹干后，用TE定容至30微升。
4) 酶切：30微升体系取上述液体15微升，加
多组分缓冲液 3微升
BSA 3微升
灭菌超纯水 7微升
HINDIII和BamHI 各1微升
以上操作皆在冰上，操作完后37摄氏度水浴3—4小时。
六、实验结果：
1.质粒提取过程中实验操作的注意事项。
2.质粒酶切过程中实验操作的注意事项。
实验三：PCR基因扩增
一、实验目的：
通过本实验学习PCR反应的基本原理和试验技术。
二、实验原理：
多聚酶链式反应的原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2的n次方倍。
1.变性：加热使模板DNA在高温下（94摄氏度）变性，双链间的氢键断裂而形成两条单链，即变性阶段。
2.退火：使溶液温度降低至50-60摄氏度，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合，即退火阶段。
3.延伸：溶液反应温度升至72摄氏度，耐热的DNA聚合酶以单链DNA为模板，在引物的指导下，利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸，按5’-3’的方向复制出互补的DNA，即引物的延伸阶段。
上述三步为一个循环，即高温变性，低温退火、高温延伸三个阶段。从理论上讲，每经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可以作为下一轮循环的模板，经过25-30个循环后DNA可以扩增10的6次方-10的9次方。典型的PCR反应体系右如下组分组成：DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、两个合成的DNA引物、耐热的Taq聚合酶。
三、试验所需器材和试剂
仪器：
1.PCR热循环仪
2.琼脂糖凝胶电泳系统
材料：
1.DNA模板（1400bp），
2.两个合成的DNA引物，
3.四种dNTP，
4.MgCl2，
5.琼脂糖，
6.DNA 相对分子质量标准，7、吸头，8.小指管。
试剂：
1.10*反应缓冲液；500mmol/L KCL、100mmol/L Tris-cl (PH 8.3)、15mmol/LMgCl2、0.1%的明胶。
2.4*dNTP 各1mmol/l
3.耐热的Taq聚合酶 1U/ul
4.DNA模板 1ng/ul
5.引物（浓度为 10 pmol/ul ）
上游：5'CCCaagcttGATCACTGTCCTTCTGCCAT3'
下游：5'CGggatccCTAGTTGCAGTAGTTCTCCAGC3'
四、实验步骤：
1.在0.5ml的ep管内配制25ul反应体系：
反应物体积（ul）
ddH
O 13.8
2
10*PCR缓冲液 2.5
2.5mmol/ldNTP 2.0
1.2
25mmol/l Mgcl
2
上游引物 1.5
下游引物 1.5
Taq 酶 0.5
2.按下述程序进行扩增
1）94摄氏度预变性 5分钟
2）94摄氏度变性 40秒
3）52摄氏度退火 40秒
4）72摄氏度延伸 40秒
5）重复步骤2）→4） 30次
6）72摄氏度延伸 5分钟
3.琼脂糖凝胶电泳分析PCR结果配制2%的琼脂糖凝胶，取10ul扩增产物电泳。保持电流40mA.电泳结束后，紫外灯下观察电泳结果，并在凝胶成像系统中拍照。
五、实验总结
1.简述PCR反应体系中各组分的作用。
2.如何优化PCR反应中退火温度？
实验四：琼脂糖凝胶电泳检测DNA
一、实验目的：
学会常用的DNA琼脂糖凝胶电泳。
二、实验原理
DNA分子在电场中会向正极方向移动。不同长度的DNA由于受到凝胶介质的阻力不同，表现为不同的迁移率而被分开。
DNA分子在琼脂糖凝胶电泳中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于DNA分子本身的大小和构型。溴乙锭是一种荧光染料，这种扁平分子可以嵌入核酸双链的配对碱基之间，它与DNA的结合几乎没有碱基序列的特异性。在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插于一个溴乙锭分子。与DNA结合的染料在紫外线下呈现橙色荧光。
三、实验试剂和器材
1.质粒DNA （4800bp）
2.配制1L 1*TBE电泳缓冲液（Tris碱 10.8g，硼酸 5.5g， Na2-EDTA 0.93g ，加入dd H2O 定容至1L, pH约8.0）
3.电泳级琼脂糖
4.1mg/ml溴乙锭（终浓度为0.5μg/ml，EB见光易分解，棕色试剂瓶中于4℃条件下保存）
5.6*加样缓冲液（0.25%溴酚蓝，40%蔗糖水溶液）
6.DNA分子量标准(DNA maker)
7.1.5ml离心管装入铝制饭盒（灭菌）
8.移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌）。
四、实验步骤
1.制胶：
1）称取0.4g琼脂糖粉，放入三角瓶，加入50ml 1* TBE电泳缓冲液，放入微波炉中烧开（1min）。注意观察烧瓶中的琼脂糖粉末，待完全熔化后停止微波炉（切不可让胶溶液溢出到微波炉中！）。
2）戴上线手套，从微波炉中取出三角瓶，置桌面上冷却致不烫手（约50-60°C），加入EB使其终浓度为5ug/ml。
2.铺胶：
1）把梳子插到凝胶灌制模具的正确位置后缓缓倒入胶溶液。胶溶液倒至与模具的矮边缘相平即可，不要把胶溶液溢到外面。在桌面上静置10-20分钟待胶完全凝固。（剩下的胶溶液封口后留待以后再熔化使用）。
2）在水平电泳槽中加满1*TBE电泳缓冲液。
3）待胶完全凝固后（15-20分钟），小心拔出梳子。用手指捏住模具两侧的高边缘取出模具和凝胶放入电泳槽中间的平台上，凝胶要没入电泳液中。凝胶上有样品孔的一侧要朝向电泳槽的负极。
3.加样：
1）在凝胶上选择相邻的加样孔。用10ul的吸液头分别将管中的样品加入凝胶的加样孔中（如果需要时，在相邻的加样孔中加入1.5-3ul DNA分子量标准物）。加样时持移液器的手以肘部固定在桌上，用另一只手扶住这只手的手腕，以减少移液器的抖动。看到蓝色的样品吸管尖头伸进加样孔后（不能伸得太深，以免穿破凝胶的底部）缓缓将蓝色的样品压入加样孔中。切不可使蓝色样品流到孔外。
4.电泳：
1）根据电泳槽的长度把电泳仪的电压调至40V(5V/cm)，注意正负电极的位置连接正确。2）打开电源开关，样品将形成一条蓝色的横带向前移动（如果发现蓝色向后移动，立即关
闭电源，调换电极）。
3）电泳将进行约30min左右
5.拍照：蓝色的溴酚蓝迁移到距凝胶边缘1-2cm时，关闭电源。取出模具和凝胶，放入凝胶成像系统中拍照。
五、实验分析与讨论
1.凝胶电泳迁移率的影响因素有哪些？
2.在琼脂糖凝胶电泳过程中操作要注意哪些环节？
六、作图
根据提供图像进行绘制
实验动物学实验报告 一、实验动物：小鼠 二、操作流程：抓取，固定，编号，给药，取血，麻醉，绝育，解剖。 三、具体操作 1、抓取：抓取小鼠时，右手抓住小鼠尾巴，不要过于用力，以免惊吓小鼠。左手从小鼠身体后部向前抓（以免小鼠向后缩咬伤自己），抓住小鼠颈部。固定住小鼠后，将小鼠皮肤往上抓，尽量将小鼠背部皮肤抓住。左手将小鼠腹部朝向自己，把小鼠尾巴用左手无名指和小指夹住，这时小鼠腹部皮肤紧绷，不能动弹。 2、固定：通常使用固定器进行固定。将固定器拧开后，抓住小鼠尾巴，使其钻入固定器中，再将拧下的固定器部分装好，使小鼠尾部露出，再将可旋转的铁片固定住即可进行后续实验。 3、编号：编号方式有两种：①剪脚趾编号：把小鼠腹面朝上，在下的脚趾从左至右依次编为1~10号，剪10号脚趾加1~9号脚趾依次编为11~19号，在上的脚趾依次编为20,30,40,50,60,70,80,90号，其余编号与11~19号类似。②打耳钉编号：耳钉上均有唯一编号，通过使用耳钉钳将耳钉打在小鼠耳朵上即可。实验时通常使用的是第一种方式进行编号，第二种编号通常用于需要长距离运输的动物。 4、给药：常用的给药方式有： ①口服给药：即灌胃。将注射器装入药物溶液，装上灌胃针（灌胃针有直头和弯头两种，区别不大）。如上所述，抓取小鼠后，使其头部朝上，尽量呈一直线，取灌胃针，从小鼠嘴角一侧缓缓插入（保持刻度在自己能看到的位置），顺着小鼠口腔食道的弧度让小鼠将针咽入，灌胃过程中如果遇到阻碍一定要及时拔出灌胃针，不可强行灌胃以免伤及小鼠食道以及肺部。灌胃针顺利进入后基本与小鼠身体呈一条直线，注入适量体积后再顺着食道缓缓取出灌胃针。 ②静脉注射：小鼠尾部有3条静脉和1条动脉，3条静脉非别位于背部，及两侧。静脉注射时一般选取两侧静脉，因为其相对于背部静脉更为清晰饱满。将小鼠固定后，用酒精擦拭其尾部静脉，使其充血，以便注射。之后使注射器针孔处朝上，针与尾部呈约30°扎入尾部后向上轻挑，再向内扎入部分，此过程应该比较顺畅，没有阻碍，若阻碍较大则有可能扎入到了皮肤中。扎入后将活塞向后回抽一点可见到有血回流，则说明成功扎入静脉当中，注射适当体积后迅速拔针，用酒精进行消毒。 5、取血：有断尾取血法和眼眶取血法两种。本次实验使用的是眼眶取血法。抓取小鼠，固定其头部用手指将其上下眼睑分开，露出其眼球并且不能闭上。用玻璃毛细管从其上眼角处扎入眼球后方毛细血管从，使血液顺着毛细管留下，取血完成后快速将毛细管取下。 6、麻醉：抓取老鼠，使其头部朝下，使其腹部脏器向胸腔靠拢，露出腹部空腔，以免刺伤脏器。将注射器竖直扎入靠近后腿部腹腔，刺入之后稍微向前倾斜但不要向前刺入，一般注入0.5mL麻醉剂即可。随后拔出针，方向小鼠，等待几分钟后即可麻醉。 7、绝育：绝育手术是通过剪除雌鼠卵巢或雄鼠输精管来实现的。将麻醉的雌鼠背面朝上，从其胸腔和尾部之间向下三分之一处剪开一个小口，用镊子将其卵巢取出，上面呈现红色斑点的部分即为卵巢，用剪刀将这一部分剪除，然后用缝合针线将其缝合，缝合方法为将针穿过后，将线缠绕镊子两圈再逆时针缠绕两
生理学实验指导 广州中医药大学生理教研室
目录 编写说明 (2) 总论 (3) 一、绪言 (3) 二、常用仪器介绍 (4) 三、生理学实验常用溶液及配制方法 (17) 四、动物实验的基本操作技术 (19) 实验一反射弧分析 (30) 刺激与反应，兴奋与兴奋性 实验二 (30) 实验三 (31) 神经干动作电位的引导 实验四红细胞渗透脆性试验 (34) 实验五红细胞沉降率（血沉）试验 (34) 实验六影响血液凝固的因素 (35) 实验七 ABO血型鉴定 (36) 实验八蛙心兴奋传导系统分析 (37) 期前收缩和代偿间歇 实验九 (38) 实验十蛙心灌流 (41) 实验十一人体心电图、心音图、动脉搏动图同步描记 (43) 实验十二兔减压神经放电 (44) 实验十三蛙肠系膜微循环的观察 (45) 实验十四动脉血压的神经和体液调节 (46) 实验十五呼吸运动的调节 (47) (49) 实验十六、胸内负压的测定 实验十七兔膈肌放电 (49) 实验十八胃肠运动的观察 (51) 实验十九尿生成的影响因素 (52) 实验二十损毁小鼠小脑的观察 (54) 实验二十一小白鼠脊髓半横切的观察 (55) 实验二十二人体脑电观察 (55) 实验二十三自行设计实验 (56)
编写说明 生理学是一门实验性科学。生理实验课是生理学教学中的重要部分。生理 学实验教学除验证课堂讲授的理论内容外，着重培养学生的实验技能，并通过实 验培养学生科学的思维方法和科学的工作态度，提高学生的科学素质。 《生理学实验指导》是根据普通高等教育中医药类规划教材《生理学教学 大纲》而编写的。编写中既注意突出中医特色，也注意遵循科学性、系统性、逻 辑性及内容的先进性等基本原则。实验内容既有人体功能的检测，也有各种动物 实验。实验项目包括了细胞、分子水平；器官、系统水平；整体水平。既有微观 分析，又有宏观综合。实验技术既保留传统的研究方法，更加强电生理技术，尤 其是注重计算机在实验中的应用。为了提高学生综合分析的能力，《指导》还增 加了学生自行设计实验项目。 《指导》的实验项目共23项，教师应根据七年制和五年制本科生理教学计 划，尽量安排实施。 由于时间仓促和水平有限，《指导》若有不足之处，亟盼教师们和同学们提 出宝贵意见。 广州中医药大学生理教研室 2001.12
复习题 1、简述动物实验中3R原则内容及其意义。 Replacement 替代1.尽量使动物一体多用2、用低等动物代替高等动物3、尽量使用高质量动物4、使用恰当的试验设计和统计学方法 Reduction 减少1、用有生命的物体代替动物进行研究2、用数理化方法模拟动物进行研究Refinement 优化1、改善实验设施条件，提高动物实验质量2、改善控制技术，减少对机体的干扰 3R研究的意义 1、作为提升突破技术壁垒能力的载体和具体体现“标尺”，在经济发展和国际贸易中发挥不可替代的重要作用。 2、为科学发展提供了新思路和新方法。 3、体现时代发展、社会进步 2、简述免疫缺陷动物的概念以及生物学特性（主要是裸鼠和联合免疫缺陷鼠）。 指由于先天性遗传突变或用人工方法造成一种或多种免疫系统组成成分缺陷的动物。 一、T淋巴细胞功能缺陷动物：1、裸小鼠（nude mice）：1）被毛生长异常，呈裸体外表。2）无胸腺，仅有胸腺残迹或异常胸腺上皮，不能使T-cell正常分化，导致细胞免疫力低下。幼龄鼠有残存的未分化的上皮细胞。3）B细胞功能正常，NK细胞活力增强。4）繁育能力差，乳腺发育缺损，以雄性纯合子与雌性杂合子繁育。5）T细胞缺陷可通过移植成熟T细胞、胸腺细胞或正常胸腺上皮得到校正。2、裸大鼠(nude rat)：基因符号为rnu，一般特征似裸小鼠。1）发育迟缓，体重为正常大鼠的70%。2）裸大鼠较裸小鼠对多种传染病更敏感。3）比裸小鼠更强壮、寿命更长。4）体型较大，对大范围的外科手术方法较有利。二、联合免疫缺陷动物1、严重联合免疫缺陷小鼠(SCID mice)：突变基因scid位于16号染色体。1）该突变基因造成编码Ig重链和TCR的基因重排异常，抑制B-cell和T-cell前体的正常分化。2）C.B-17Icr为携带来自C57BL/ka小鼠的免疫球蛋白重链Igh-1b等位基因的 BALB/cAnIcr的同源近交系。3）纯合子血清中无免疫球蛋白，淋巴结、胸腺变小，缺乏体液、细胞免疫功能。饲养于SPF环境中。4）通过移植人免疫组织或免疫细胞，可使SCID 小鼠具有人类部分免疫系统，称为SCID-hu小鼠。
《实验动物学》复习题及答案 1、小鼠的给药途径有那些？请演示一下 答：灌胃（ig）：左手将动物固定后，右手持装有灌胃针头的注射器，自口角进针，沿上腭向鼠口腔的后下方插入食管。 皮下注射（sc）：常在背部皮下注射。一手固定动物，另一只手注射给药。 腹腔注射（ip）：左手固定动物，右手持注射器，从下腹部外侧，呈45 度角刺入腹腔，进针约3～5mm。 肌内注射（im）：多注射后肢股部肌肉，如一人单独操作，以左手拇指和食指抓住小鼠头部皮肤，小指、无名指和掌部夹住鼠尾及一侧后肢，右手持注射器刺入后肢肌肉给药 尾静脉注射（iv）：将动物固定，鼠尾巴露在外面，用70%～75%的酒精棉球擦尾部，或将鼠尾浸入45～50℃温水中。待尾部左右静脉扩张后，左手拉着尾，右手进针 2、请演示一下大鼠、小鼠的捉持、固定及灌胃给药 答：（1）小鼠的捉持：捉拿时可先用右手抓住并提起鼠尾，置于实验台或鼠笼上，并稍向后拉；用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳后颈背部的皮肤，将鼠置于左手心中，拉直后肢，以无名指及小指按住鼠尾或小鼠的左后肢即可。 （2）大鼠的捉持：大鼠的捉拿时，可戴上手套。实验者可用右手捉住鼠尾，放在实验台或鼠笼上，并稍向后拉；左手掌面向鼠背，食指和中指压住鼠的头顶，拇指和无名指分别从鼠的两腋下插入，将鼠的两前肢卡住；或拽紧鼠后颈及后背皮肤即可。 （3）灌胃（ig）：左手将动物固定后，右手持装有灌胃针头的注射器，自口角进针，沿上腭向鼠口腔的后下方插入食管。 3、大鼠的给药方法有那些？请演示一下常用的给药方法 答：灌胃（ig）：左手将动物固定后，右手持装有灌胃针头的注射器，自口角进针，沿上腭向鼠口腔的后下方插入食管。 皮下注射（sc）：常在背部皮下注射。一手固定动物，另一只手注射给药。 腹腔注射（ip）：左手固定动物，右手持注射器，从下腹部外侧，呈45 度角刺入腹腔，进针约3～5mm。
实验动物学实验报告 学院： 学号： 姓名 时间： 实验一：小鼠实验
一、实验目的 1、掌握小鼠抓取、固定的基本方法； 2、掌握小鼠的雌雄鉴别方法； 3、掌握小鼠的标记方法； 4、掌握小鼠的基本采血技术； 5、掌握小鼠的常用给药方法； 6、掌握小鼠的解剖方法，熟悉内部脏器的自然位置； 二、实验材料 1、实验动物：每组两只雌鼠，两只雄鼠； 2、实验器械及试剂：鼠笼；小鼠固定器和小鼠固定板；眼科剪；眼科镊；解剖刀；1ml注射器；毛细玻璃管；灌胃针；苦味酸染料；葡萄糖液；2%水合氯醛； 三、实验内容及方法 1、小鼠的抓取和固定 抓取时先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。这种在手中固定方式，能进行实验动物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他实验操作。 2、小鼠的雌雄鉴别 雄鼠的阴囊明显，雄鼠可见阴道开口和五对乳头。幼鼠或仔鼠则主要从外生殖器与肛门的距离判定，近者为雌，远者为雄。另外，雌鼠肛门和生殖器之间有一无毛小沟，而雄鼠则在肛门和生殖器之间长毛。 3、小鼠的标记方法 1）耳孔法 用耳号钳在耳上打洞或者用剪刀在耳边缘剪缺口，左耳为十位，右耳为个位。 2）剪趾法 适用于出生一周以内新生仔鼠； 3）染色法 用毛笔将苦味酸涂在动物的不同部位，注意逆着毛发生长方向刷。
4、小鼠的基本采血 1）剪尾采血 当所需血量很少时采用本法。固定动物并历出鼠尾，将鼠尾在45℃温水中浸泡数分钟，也可用酒精棉球涂擦，使局新血管扩张。将鼠尾擦干，再用刀片剪去1-2mm，让血液滴入盛器或直接用移液器吸取，同时自尾根部向尾尖按摩。取血后，先用棉球压迫止血并立即用6％液体火棉胶涂于尾巴伤口处，使伤口外结一层火棉胶薄膜，保护伤口。也可采用切割尾静脉的方法采血，三根尾势脉可交替切割，并自尾尖向尾根方向切割，每次可取0.2～0.3ml血，切割后用棉球压迫止血。这种采血方法在大鼠进行较好，可以较长的间隔时间连续取血，进行血常规检查。 2）眼眶后静脉丛取血 当需中等量的血液，而又需避免动物死亡时采用此法。用左手固定鼠，尽量捏紧头部皮肤，使头固定，并轻轻向下压迫颈部两侧，引起头部静脉血液回流困难，使眼球充分外突（示眼眶后静脉丛充血），右手持毛细玻璃管，沿内眦眼眶后壁向喉头方向旋转刺入。刺入深度小鼠2～3mm。当感到有阻力时再稍后退，保持水平位，稍加吸引，由于血压的关系，血液即流人玻璃管中。得到所需的血量后，拨出毛细管。若手法恰当，小鼠约可采血0.2～0.3ml。 3）心脏取血 动物仰卧固定在固定板上，剪去心前区部位的被毛，用碘酒酒精消毒皮肤。在左侧第3～4肋间，用左手食指摸到心搏处，右手取连有4～5号针头的注射器，
动物生理学实验设计 班级：09级生物技术本一班 小组成员：李水琴姚燕兵罗泉清龙伟雄 实验设计内容 一、课题名称：静脉注射和口服等量生理盐水对小白鼠尿量的影响 二、实验目的：通过对小白鼠注射和口服等量生理盐水，了解尿液生 成过程，进一步熟悉掌握肾小管的功能。 三、基本原理： 生理盐水对尿液的影响：加大了血液中水的含量,冲淡了血 液,增加人体的排尿量.肾脏为了维持体内水的平衡,通过生 成尿液来实现.尿的生成来源于血浆,通过肾小球的滤过,肾 小管的吸收,肾小管的徘汇和分泌这三个过程来完成.在这 三个过程中,除了生成尿液外,肾脏同时根据体内水分的多 少对尿量进行调节,而保持水的平衡,维持人的正常生活.
四、材料与用品：小白鼠数只、生理盐水200ml、25%氨基甲酸乙酯 溶液、纱布、棉线、注射器、试管、试管夹等五、注意事项： 1．实验前给小白鼠多喂些食物，或用导尿管向小白鼠胃中灌入40—50ml 清水，以增加其基础尿流量； 2．实验中需多次进行耳缘静脉注射，注射时应从耳缘静脉远端开始，逐步移近耳根。手术的创口不宜过大，防止动物的体温下 降，影响实验； 3．输尿管手术的难度较大，应注意防止导管被血凝块堵塞，或被扭曲而阻断尿液的流通。 六、方法与步骤： 1、小白鼠抓取、称重、麻醉：抓取3只体型相近、健康指数大致 一致的小白鼠称重，然后用25%氨基甲酸乙酯溶液（按1g/kg 或4ml/kg用量），从耳缘静脉注入，小白鼠麻醉成功后，使其仰卧并用绳固定在兔台上备用，并标号、记录数据； 2、分别对上述上三只小白鼠进行注射、口服30ml等量生理盐水 和空白对照处理；
3、在胱底部找到并分离两侧输尿管，在输尿管靠近膀胱处用细线 结扎，另穿一细线打松结备用，略等片刻，待输尿管充盈后，提起结扎细线，在管壁上用眼科剪剪一小斜口，从斜口向肾脏方向插入口径适当的预先充满生理盐水的输尿管插管，结扎固定，用试管收集尿液。 4、三小时后，每隔半小时，观察小白鼠尿量变化（滴/分），做 好记录，并绘制成曲线图观察。
名词解释：实验动物（laboratory animal）：指经人工培育，对其携带的微生物、寄生虫进行严格控制，遗传背景明确，可用于科学实验、药品、生物制品的生产和检定及其它科学研究的动物。 实验用动物：是指一切用于实验的动物，除了符合严格要求的实验动物外，还包括家畜和野生动物等。 实验动物与实验用动物：遗传控制不同,微生物控制等级不同,培育的形质和目标不同。 人类疾病的动物模型：是指医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物实验对象和相关材料。 实验动物标准化：遗传质量标准化微生物质量标准化环境标准化营养标准化 按遗传控制标准，实验动物分为：近交系（CH3），突变系（裸鼠），杂交系（F1），封闭群（远交系）（KM小鼠，wister大鼠） 按基因型分：1、同基因型动物（如近交系、F1代） 2、不同基因型动物（如封闭群） 按微生物控制程度分级：普通级，清洁级，SPF级，无菌级（2001年版的国家标准中，大小鼠取消普通级动物，犬、猴只分普通级和SPF级，豚鼠、地鼠和兔仍然分4级） SPF动物定义：除清洁动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原。（屏障环境中饲养，种子群来源于无菌动物或剖腹产动物。饲养管理同清洁动物） 无菌动物的特点：形态学及生理学特点： ①形态学：盲肠肥大（增大5～6倍），肠壁薄，易发肠扭转。心脏、肝脏、脾脏相对较小。 ②生理学: 血中无抗体，巨噬细胞吞噬能力弱。体不能合成维生素B和K。无菌鸡生长较快、无菌豚鼠和无菌兔生长较慢。无菌大小鼠与普通大小鼠生长速度相同。 （3)饲养要求：隔离环境中饲养，种子群来源于剖腹产动物或无菌卵的孵化。由于肠道无菌，饲养困难，应注意添加各种维生素。每2～4周检查一次动物的生活环境和粪便标本。 悉生动物：概念：悉生动物是指在无菌动物体植入已知微生物的动物。又称已知菌动物。植入一种细菌的动物叫单菌动物；植入两种细菌的动物叫双菌动物；植入三种细菌的动物叫三菌动物；植入多种细菌的动物叫多菌动物。（由于肠道接种有利于消化吸收的细菌，故饲养较无菌动物容易，形态学和生理学方面与普通动物无异。） 近交系：经至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先。 特点： 1、其基因纯合度达到98.6%，个体差异小，似同卵双生反应一致重复性好，用少量动物即可获得精确度很高的实验结果，个体相互之间可以接受皮肤、器官移植。 2、隐性基因纯合使许多病态性状得以暴露，可获得大量先天性畸形及先天性疾病的动物模型.如高血压、白障、糖尿病.动物模型。 缺点：出现近交衰退。近交衰退是近交过程中动物群体由于基因分离与纯合发生一系列不利于个体或群体发育的变化和现象。
实验动物学试题及答案 一、填空题 1、实验动物学研究的对象实验动物、动物实验。 2、根据我国实际，实验动物被分为四级，分别是一级为普通动物、二级为清洁动物、三级为SPF动物、四级为无菌动物（包括悉生动物）。国际上公认的标准实验动物是SPF动物，我国公认的标准实验动物是清洁动物。 3、通常称近交系动物为品系，称封闭群动物为品种。 4、实验动物的年龄通常根据体重来判断。 5、裸鼠除全身无毛外，还有裸体和无胸腺，并随年龄增加皮肤变薄，头颈部皮肤皱褶，发育迟缓等特征。 6、药物筛选实验首选动物为小鼠；过敏实验首选动物为豚鼠；发热研究首选动物为家兔；实验外科学首选动物为犬；人类脊髓灰质炎等病的研究最理想的实验动物是非人灵长类动物；做反射弧分析实验常用实验动物是青蛙。 7、实验动物常用给药途径有经口给药、注射给药等。 二、名词解释 1.实验动物：是指经人工饲养、对其携带的微生物、寄生虫实行控制，遗传背景明确或来源清楚的，用于科学研究、教学、生产、鉴定、及其他科学研究的动物。 2.近交系动物：是指至少经过20以上连续全同胞或亲子交配，品系内所有个体都可追溯到其源于第20代或以后代鼠的一对共同祖先的动物群。 3.杂交优势：杂种一代具有较强的生命力，对疾病的抵抗力强，寿命较长，容易饲养，在很大程度上克服了近交衰退现象的优越性。 4.封闭群动物：不以近交形式进行交配，也不引入任何外来血缘，在封闭条件下交配繁殖，从而保持群体的一般遗传特性，又具有杂合性的一个实验动物种群。我国制定的标准作如下定义：以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群，在不从其外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上，称为一个封闭群，或叫远交群。 5.诱发性动物模型：是指使用物理、化学、生物等致病因素作用于动物，造成动物组织、器官或全身一定的损害，出现某些类似人类疾病的功能、代谢或形态性结构方面的病变，即人为地诱发动物产生类似人类疾病的动物模型。 三、问答题
动物实验（小鼠）的一般操作技术 实习日期：2007—11—13 一目的和要求： 通过实际操作，使学生掌握实验的一般操作方法，包括动物的抓去和固定、编号被毛的去除给药途径麻醉采血和处死等方法。 二实习内容： 1 实验动物的抓取 2 实验动物性别的鉴定 3 实验动物编号的标记方法 4实验动物被毛的去除 5 实验动物的给药途径和方法 6 实验动物的麻醉 7实验动物的采血 8 实验动物的处死方法 9 解剖 三实验的方法 1 小鼠的抓取：抓取时先用手将鼠尾提起，放在实验台上，轻轻拉尾，用左手拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈部皮肤，将鼠置于左手中心，用左手无名指和小指按住尾巴和后肢，即可做其他实验操作作用。 2 小鼠性别的鉴定：抓取小鼠后，观察动物肛门与生殖器之间的距离。距离远的为雄性，距离近的为雌性。成熟的雄性小鼠可看到小鼠睾丸的轮廓。 3 小鼠编号的标记方法：用被毛染色法做小鼠编号。用苦味酸（黄色），一般左前肢为1，左侧腹部为2，左后肢为3，头颈部为4，背部为5，尾根部为6，右前肢为7，右腹部为8，右后肢为9。用两种颜色可以染到99。 4 小鼠被毛去除：有剪毛法，拔毛法，剃毛法，用硫化钠脱毛法。 5 给药途径和方法：给药途径有经口灌胃法，经呼吸道吸入，经皮肤吸入和注射给药法。用一支特制的灌胃针进行灌胃，小鼠一般给1.5ml以下。用注射器抽好液体，然后抓取小鼠，针头延侧角通过食管进入胃内，然后将液体注入。 6 小鼠的麻醉：麻药有挥发性的和非挥发性两种。给药途径有吸入性麻醉，注射给药。小鼠一般用腹部麻醉的方法。用水合氯醛300ml／kg，根据小鼠的体重给药0.25ml。抓取小鼠后，使针头和腹部成30度的角，刺入腹腔，回抽若无回血或者肠内容物可以注入。注入麻药5分钟后，小鼠失去知觉。 7 小鼠的采血的方法：有静脉采血法，尾部采血法，眼眶静脉采血法和心脏采血法。将小鼠装入固定盒中，露出尾部，用二甲苯图擦，使尾静脉充盈。用锋利的刀片切断一根尾静脉即可用毛细管采血，也可用细注射器从尾静脉采血。 8 小鼠的处死方法：用颈椎脱臼的方法或者注射过量的麻药使小鼠死亡。 9 解剖：从腹部开始，查看腹部脏器，以肝脏胃脾肾输尿管姨小肠大肠膀胱前列腺性腺顺序。然后再看胸部，看到肺脏心脏胸腺等器官，并在直视的情况下进行了心脏的采血。然后再看颈部的解剖。最后解剖头部。 四讨论和结论： 通过此次实验，我们学到了实验动物的一般操作技术，如抓取和固定、编号被毛的去除给药途径麻醉采血和处死等方法。为以后进入临床进行实验研究做好了初步的准备。
实验二：坐骨神经标本的制作 1、毁坏脑颅----单毁随。保持静止，麻醉蟾蜍，减少痛苦。 2、脑颅+脊髓----双毁随。排除中枢神经对腓肠肌的m 影响。 3、完整的标本：坐骨神经脊柱骨+坐骨神经+腓肠肌+股骨头或胫腓骨头 4、任氏液的作用：它包括钾离子，钙离子、钠离子，氯离子，碳酸氢根和磷酸二氢根等等。 维持其正常生理机能，维持细胞渗透压稳定，保持内环境稳态，相当于机体中的组织液。 5、注意事项：用锌铜弓刺激时神经干要悬空，切勿接触其他物体。如果神经干结扎不好， 通电断电时会引起腓肠肌收缩，需要重新结扎。剥过皮的保本不可和皮肤，赃物接触6、如何保持机能正常：1、金属器械不要碰及、损伤神经或腓肠肌2、保持湿润，常加任氏 液，最好先泡一会. 实验三四：骨骼肌单收缩和收缩特性 1定义： 阈强度或阈刺激，即产生动作电位所需的最小刺激强度，作为衡量组织兴奋性高低的指标。强度小于阈值的刺激，称为阈下刺激；阈下刺激不能引起兴奋或动作电位，但并非对组织细胞不产生任何影响。 最适刺激强度 有了阈刺激也就是刺激导致的电位变化已经达到了阈电位,这样就会有动作电位的产生,从而形成局部电位 因为骨骼肌收缩是许多神经纤维共同作用的结果，当刺激在一定范围内增大时，兴奋的神经纤维增多，多支配的骨骼肌肌纤维也会随之增多，收缩增强 活的神经肌肉组织具有兴奋性，能接受刺激发生兴奋反应。标志单一细胞兴奋性大小的刺激指标一般常用阈值即强度阈值表示，阈值是指在刺激作用时间和强度－时间变化率固定不变的条件下，能引起组织细胞兴奋所需的最小刺激强度，达到这种强度的刺激称为阈刺激。单一细胞的兴奋性是恒定的，但是不同细胞的兴奋性并不相同。因此，对于多细胞的组织来说，在一定范围内，刺激与反应之间表现并非“全或无”的关系。坐骨神经和腓肠肌是多细胞组织，当单个方波电刺激作用于坐骨神经或腓肠肌时，如果刺激强度太小，则不能引起肌肉收缩，只有当刺激强度达到阈值时，才能引起肌肉发生最微弱的收缩，这时引起的肌肉收缩称阈收缩（只有兴奋性高的肌纤维收缩）。以后随着刺激强度的增加，肌肉收缩幅度也相应增大，这种刺激强度超过阈值的刺激称为阈上刺激。当刺激强度增大到某一数值时，肌肉出现最大收缩反应。如再继续增大刺激强度，肌肉的收缩幅度不再增大。这种能使肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度称为最适强度，具有最适强度的刺激称为最大刺激。最大刺激引起的肌肉收缩称最大收缩（所有的肌纤维都收缩）。由此可见，在一定范围内，骨骼肌收缩的大小取决于刺激的强度，这是刺激与组织反应之间的一个普遍规律。 2单收缩 潜伏期、动作电位产生及传导至神经肌肉接头，再到肌纤维 收缩期、 舒张期 3两个刺激：刺激间隔小于单收缩的时程而大于不应期，则出现两个收缩反应的重叠，称为收缩的总和。 4串刺激：当后一收缩发生在前一收缩的收缩期，各自的收缩则完全融合肌肉出现持续的收缩状态，称为完全强直收缩。
竭诚为您提供优质文档/双击可除动物生理学实验报告思考题答案 篇一：动物生理学实验报告 实验日期：年月日室温：大气压： 实验序号：一实验名称：动物生理学实验基础知识介绍 一、实验目的 掌握生理学实验的基本方法和技术，了解是生理学实验设计的基本原则，培养科学的思维方法、实事求是的科学态度和严谨的学风，通过书写实验报告，提高分析、归纳问题及文字表达能力。 二、实验原理 生理学是建立在实验和观察基础上的学科，生理学实验是生理学理论知识的依据与来源。生理学实验方法一般可分为离体实验法和在体实验法两类。在体实验法又可分为急性实验和慢性实验两种。生理学实验仪器一般由刺激系统、探测系统、信号调节系统和记录系统四大部分组成。 三、主要仪器、试剂、材料及装置图 1、手术器械：手术刀、手术剪、手术镊、眼科剪、眼
科镊、毁髓针、止血钳、玻璃分针等2、生理仪器：生物信 息采集系统、刺激器、示波器、传感器、肌槽、蛙心夹等3、试剂：任氏液、台氏液、乙酰胆碱、肾上腺素等 四、实验步骤、现象及记录 1、教师提出生理学实验的要求 2、讲解生理学的常规实验方法 3、展示生理学仪器和器械，并简单讲解用途 五、实验结果及数据处理 六、实验讨论及思考题解答 1、生理学实验的重要性在于何地？生理学实验有什么 具体的要求和规则？ 答：生理学实验的重要性在于学习生理学的实验方法及科学的思维方法，有助于提高学生的实验能力、分析能力、创新能力和科学素养。生理学实验要求：实验前认真预习实验指导，复习相关理论知识；实验中，认真听讲，按要求进行各项实验操作，仔细认真求实的记录实验数据；实验后，整理实验台面，处理实验废弃物和实验动物，检查实验设备及器械，认真分析实验数据，撰写实验报告。 2、生理学实验报告的一般格式、内容和要求是什么？ 答：格式与内容参照楚雄师院化生系化学与生命科学实验室实验报告的标准格式内容。填写实验报告要求数据真实，不允许编造数据，认真分析总结实验中的问题。
2013级专业型硕士研究生《医学实验动物学》考查题 姓名学号专业成绩 一、名词解释 1.AEIR “AEIR”是生命科学研究所必需的四个基本条件。“A”即animal（实验动物）“E”系equipment （设备）“I”为information（信息）“R”是reagent（试剂） 2.3R “3R”，即减少（reduction）、代替(replacement)和优化(refinement)原则。 3.SPF动物 无特定病原体动物( specific pathogen free animal, SPF)指在清洁动物的基础上，要求不携带可能干扰实验的特定病原体和寄生虫如绿脓杆菌等。SPF动物的种群来源于无菌动物，饲养于屏障系统中，实施严格的微生物和寄生虫控制。使用SPF动物，在实验中可以安全可靠地排除动物所携带病原体及特定微生物的干扰。SPF动物作为国际公认的标准实验动物，可适用于所有科研实验。该级动物健康，繁殖率高，自然死亡率低。 4.歪头病 肺支原体可引起化脓性鼻炎和慢性肺炎等呼吸系统疾病；有时并发中耳炎、内耳炎引起实验动物“歪头病”，患鼠头斜于患侧转圈走，提起鼠尾使之倒立，患鼠身体迅速旋转。肺支原体感染生殖道可导致死胎和不育。 5.封闭群动物 又称远交群（out bred stock）动物。按国际实验动物科学委员会的定义，是指以非近亲交配方式繁殖生产的一个种群，在不从外部引入新血缘的条件下，至少连续繁殖4代以上的动物。如昆明种小鼠、SD大鼠等。特点：繁殖率高，重复性差。 二、简答题 1.什么是近交系动物？简述近交系动物的特点。 从一个动物群体中选用血缘比较接近的雌雄个体，即有共同祖先的兄妹、母子、父女进行交配，此种近亲交配的方式称为近交。全同胞兄妹之间或亲代与子代之间连续交配繁殖达到20代以上的动物，称为近交系动物。 近交系动物的特点：㈠基因纯合性（homozygosity），㈡遗传组成的同源性（isogenicity），㈢表现型的一致性（uniformity），㈣对外界因素的敏感性（sensitivity），㈤遗传特征的可辩别性（identifiably），㈥遗传组成独特性（individuality），㈦背景资料可查性，㈧国际分布广泛性 2.“DBA/1fLACA/Lac小鼠”中英文字母、符号和数字的涵义是什么？ DBA为小鼠近交系名称，1表示亚系，f表示代乳，LACA为代乳母鼠的品系，Lac代表培
实验一小鼠的基本实验操作 一、实验目的:通过实际操作,掌握小鼠的一般操作方法,包括小鼠的抓拿、标记、给药(灌 胃、腹腔注射、皮下、肌肉、尾静脉注射)、取血(眶后静脉丛,摘眼球)、脊椎脱臼法处死、大体解剖。 二、实验动物:昆明小鼠2只(1雌1雄) 三、实验步骤 1、抓取与固定,标记 2、去毛 3、给药:消化道、腹腔注射、尾静脉注射 4、取血:眼眶后静脉丛、尾静脉、眼球摘除法、断头法 5、麻醉:氯胺酮腹腔麻醉 6、处死:脊椎脱臼法 7、解剖: 雄性:睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺(在膀胱下方,胶质状,透明) 雌性:双角子宫、卵巢 肾上腺、胆囊、甲状腺、胃、肝脏、脾、肺、肾、心脏、甲状腺 四、实验结果 1、抓取与固定标记: 抓取:抓小鼠的尾根部 固定:抓住小鼠的尾根部,让小鼠在粗糙平面上爬行,后拉尾跟部,右手的拇 指与食指抓住小鼠两耳及其间的颈部皮肤,小指与无名指将尾巴固定在手掌面。并标记: 2、灌胃法:左手抓取小鼠固定后,右手持特制灌胃针,沿一侧口角进针,紧贴咽后壁,头后仰以便伸直消化道,进针2/3后灌生理盐水0、5ml 3、注射给药: 腹腔注射: 从下腹部的两侧进针 ,进针时针与腹部成45°。进针后稍微晃动针,如无粘滞感则可注射药物 尾静脉注射:一人固定小鼠,另一人用左手中指与拇指将尾拉直,食指托住尾部,在尾动脉位置进针注射0、5ml生理盐水。注射完毕拔出针头,用无菌棉球压迫止血。 4、采血 从眼角内侧0、5cm处进针 眼球摘除法:左手抓取用固定小鼠,右手持弯头镊在眼球根部将眼球摘除,头朝下,眼眶内血迅速流出。 5、麻醉: 0、5%氯胺酮腹腔麻醉:本小鼠重22g,按100mg/kg的药量给药,2分钟麻醉成功 6、处死: 脊椎脱臼法:按住头部,将尾根部向后上方以短促的力量拉即可致死 7、解剖: 雄性:寻找到睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺 雌性:双角子宫、卵巢 3、7、2 肾上腺:米粒大小 胰腺:位于胃下方,类似于脂肪组织,浑浊状 3、7、4 ,胆囊:芝麻大小,浅绿色,半透明,
专业班级：学号：姓名：同组人： 实验日期：年月日室温：大气压： 实验序号：一实验名称：动物生理学实验基础知识介绍 一、实验目的 掌握生理学实验的基本方法和技术，了解是生理学实验设计的基本原则，培养科学的思维方法、实事求是的科学态度和严谨的学风，通过书写实验报告，提高分析、归纳问题及文字表达能力。 二、实验原理 生理学是建立在实验和观察基础上的学科，生理学实验是生理学理论知识的依据与来源。生理学实验方法一般可分为离体实验法和在体实验法两类。在体实验法又可分为急性实验和慢性实验两种。生理学实验仪器一般由刺激系统、探测系统、信号调节系统和记录系统四大部分组成。 三、主要仪器、试剂、材料及装置图 1、手术器械：手术刀、手术剪、手术镊、眼科剪、眼科镊、毁髓针、止血钳、玻璃分针等 2、生理仪器：生物信息采集系统、刺激器、示波器、传感器、肌槽、蛙心夹等 3、试剂：任氏液、台氏液、乙酰胆碱、肾上腺素等 四、实验步骤、现象及记录 1、教师提出生理学实验的要求 2、讲解生理学的常规实验方法 3、展示生理学仪器和器械，并简单讲解用途 五、实验结果及数据处理 六、实验讨论及思考题解答 1、生理学实验的重要性在于何地生理学实验有什么具体的要求和规则 答：生理学实验的重要性在于学习生理学的实验方法及科学的思维方法，有助于提高学生的实验能力、分析能力、创新能力和科学素养。生理学实验要求：实验前认真预习实验指导，复习相关理论知识；实验中，认真听讲，按要求进行各项实验操作，仔细认真求实的记录实验数据；实验后，整理实验台面，处理实验废弃物和实验动物，检查实验设备及器械，认真分析实验数据，撰写实验报告。 2、生理学实验报告的一般格式、内容和要求是什么 答：格式与内容参照楚雄师院化生系化学与生命科学实验室实验报告的标准格式内容。填写实验报告要求数据真实，不允许编造数据，认真分析总结实验中的问题。 3、举例5种常用手术器械的名称、持握方法和用途。 4、举例3种生理学实验常用仪器设备的性能和主要用途。
实验动物学重点整理 1大小鼠年龄、体重、寿命的比较数据？ 成年动物的年龄、体重和寿命比较 小鼠大鼠 成年日龄（天）65-90 85-110 成年体重（克）20-28 200-280 平均寿命（年）1-2 2-3 2动物实验的对照类型？ （一）空白对照： 不给任何措施的情况下观察动物自发变化的规律。家兔白细胞数每天上下午有周期性的生物钟变化。 （二）实验对照： 采用与实验组相同操作条件下对照，如给药实验中的溶媒（Nacl），手术，注射以及观察时的抚摩等都可以对动物发生影响。有人报告，针刺犬的人中穴对休克、心脏血液动力学有改变，但采用空白对照（不针刺）不够，应该设有针刺其它部位或穴部的实验对照。 （三）有效（标准）对照： 常用于药物研究。对一新药疗效可用一已知有效药或能引起标准反应药物做对照，可考核实验方法可靠性，又可通过比较，了解新药疗效和特点（普鲁卡因---对皮肤黏膜穿透力弱，用纳塞卡因---穿透力强，作用快、持久）。（四）配对对照： 同一个体不同眼睛比较对照期和实验期差异（左眼试验，右眼对照）；同一种动物后代分成左右两部分进行对照和实验以比较差异，此法可大大减少抽样误差。实验中可用同卵双胎或同窝动物。 （五）组间对照： 将实验对象分成两组或几组比较其差异。这种对照个体差异和抽样误差比较大，可用交叉对照方法以减少误差。观察某药物疗效可用两组犬先分别做一次实验和对照，再相互交换，以原实验组做对照组，原对照组做实验组重复第一次实验，观察疗效或影响，切记检查指标和条件要等同。 （六）历史对照与正常值对照： 此种对照要慎重，similar background ---条件、背景、指标和技术方法相同才进行对比，否则得出不恰当的甚至错误结论。 3转基因动物的概念、制备过程? 转基因动物： 用物理、化学、生物手段将确定外源基因通过生殖细胞或早期胚胎导入动物染色体，其基因组内稳定整合导入外源基因，能遗传给后代的一类动物,使其获得人类需要新功能。 技术程序：
浙江省医学实验动物与动物实验培训班考试试卷和答案（完整） 一、选择题（每题2分，共40分）： 1、《实验动物管理条例》是年经国务院批准，由国家科技部颁布的第2号令，这是我 国政府颁布的一部实验动物管理法规，是全国实验动物工作的法律依据和管理准则。 A、1981年； B、1983 年； C、1986年； D、1988年 2、动物的出现，为分子生物学、特别是人类功能基因组学研究提供了最好的技术平台。 A、转基因； B、无菌和悉生； C、免疫缺陷； D、近交系 3、起源于同一祖先，其下一代个体至少连续经过20代全同胞兄妹交配，品系近交系数达到 98.6%以上的动物是动物。 A、近交系； B、封闭群； C、杂交群； D、重组系 4、除普通动物应排除的病原外，不携带干扰实验和危害动物的病原体的动物是动物。 A、普通级； B、清洁动物； C、无特定病原体； D、无菌 5、在解剖学、血液动力学上，的冠状动脉循环与人类相似；对高胆固醇物质的反应与 人类相似，很容易出现动脉粥祥硬化典型病灶。 A、大鼠； B、猪； C、犬； D、猴 6、C57BL/6J小鼠属于动物。 A、无菌； B、杂交群； C、清洁； D、近交系 7、先天性T淋巴细胞功能缺陷的动物是。 A、裸鼠； B、大鼠； C、新西兰兔； D、Beagle犬 8、最适合筛选抗高血压药物的大鼠是品系。 A、SD； B、Wistar； C、ACI； D、SHR大鼠 9、动物实验时对实验动物的基本要求是。 A、个体间的均一性； B、容易获得； C、遗传的稳定性； D、三者均要求 10、因为患红绿色盲，不能以红绿色作为条件刺激物，进行条件反射实验的动物是。 A、大鼠； B、豚鼠； C、兔； D、犬 11、下列描述错误的是。 A、动物的解剖生理特征和反应随年龄增加而有明显变化； B、一般情况幼年动物比成年动物敏感； C、幼年动物较成年动物反应性稳定； D、年龄与体重成一定的正比关系 12、动物实验适宜的环境湿度为。 A、40％-70％； B、小于40％； C、70％-80％； D、30％-40％ 13、善待动物不仅仅是考虑动物的福利，也是因受虐待的动物。
2012 级应心班《人体解剖生理学》实验内容 一、人体基本组织的观察 （一）实验目的观察并掌握人体四大基本组织的结构特点及功能。 （二）实验材料四大基本组织的永久装片；显微镜 （三）实验要求正确使用显微镜，观察各种组织的基本特征。注：实验前请复习四大基本组织的结构特点和功能。 二、人神经系统的形态观察 （一）实验目的 1. 观察脊髓的形态结，了解脊神经的组成。 2. 观察脑干的的形态结构和脑神经进出脑干的部位，了解脑干中的主要神经核团和纤维束的位置。 3. 观察间脑、小脑和大脑的形态结构，辨认大脑半球的主要沟、回和分叶。 （二）实验材料脊髓模型；脑干模型；人脑模型；脊髓横切片；显微镜 （三）实验要求观察各模型加深对神经系统的认识；正确使用显微镜，观察脊髓横切片。注：实验前请复习神经系统的结构组成和功能。 三、反射弧的分析和脊髓反射的观察 （一）实验目的 1. 通过用脊蛙（去除脑保留脊髓的蛙，成为脊蛙）分析屈肌反射的反射弧的组成部分，探讨反射弧的完整性与反射活动的关系。 2. 观察脊髓的反射活动并研究脊髓反射中枢活动的若干特征。 （二）实验原理 （三）材料与方法 1 材料 1.1 实验动物青蛙 1.2 器材蛙类手术器械 1 套，铁支架，电刺激器，刺激电极，秒表，棉球，纱布，培 养皿 2 个，烧杯 1.3 药品 0.5% 硫酸， 1%硫酸 2 试验方法与步骤 2.1 制备脊髓动物：取青蛙一只，用剪刀横向插入口腔，从鼓膜后缘处剪去颅脑部，保留下颌部分。以棉球压迫创口止血，然后用止血钳夹住下颌，悬挂在铁支架上。 2.2 正常脊髓反射的观察 2.3 搔扒反射：将浸以 0.5%硫酸的小滤纸片一块，贴在青蛙腹部下段的皮肤上，可见四肢向此处搔扒，直到去掉滤纸片为止，之后用清水冲洗皮肤。 2.4 反射时的测定：用培养皿分别盛 0.5%和 1%硫酸溶液，将青蛙左后肢的脚趾尖浸于硫酸溶液中，同时用秒表记录从浸入时起到发生屈腿发射所需的时间，即反射时。观察后立即将该足趾浸入清水中浸洗几次，然后用纱布拭干。按上法重复三次，求其平均值，此值即为反射时。 2.5 将两对电极连接到刺激器 2.6 反射弧的分析 2.6.1 剥去左肢皮肤：在左侧后肢趾关节上方，将皮肤作一环状切口，将足部皮肤剥掉。 2.6.2 1% 硫酸刺激左趾尖，观察腿部活动情况。 2.6.3 1% 硫酸刺激右趾尖，观察腿部活动情况。 2.6.4 1% 硫酸滤纸片贴在左小腿切口上面的皮肤上，观察活动情况。 2.6.5 分离右侧大腿背侧坐骨神经干，两侧结扎，中间剪断，1%硫酸刺激右趾尖，观察腿部活动。 2.6.6 刺激神经两端：以连续方式分别刺激右侧坐骨神经中枢端和外周端，观察腿部反应。 2.6.7 破坏脊髓：以探针捣毁青蛙脊髓后，以连续方式分别刺激右侧坐骨神经中枢端和 外周端，观察腿部反应。 2.6.8 刺激腓肠肌：直接刺激右侧腓肠肌，观察有何反应。
?麻醉注意事项 ?1、麻醉前应正确选用麻醉药品、用药剂量及给药途径。 ?2、密切观察动物麻醉状态及反应，以便准确判断麻醉深度。 ?3、如麻醉较浅，动物出现挣扎或呼吸急促等，需补充麻醉药以维持适当的麻醉。一次补充药量不宜超过原总用药量的五分之一。 ?4、麻醉过程中，应随时保持呼吸道通畅，并注意保温。 ?5、在手术操作复杂、创伤大、实验时间较长或麻醉深度不理想等情况下，可配合局部浸润麻醉或基础麻醉。 ?6、实验中注意液体的输入量及排出量，维持体液平衡，防止酸中毒及肺水肿的发生。 实验一血液的组成 [实验原理] 血液是由液态的血浆和悬浮于血浆中的血细胞组 成。血细胞占全血的体积比称为红细胞 压积，又叫红细胞比容。 要求与思考题 1.血浆与血清有哪些区别？ 血浆与血清的区别是不含纤维蛋白原，某些凝血因子以及血小板释放因子 实验二血红蛋白的测定 [实验原理] 由于血红蛋白的颜色，常随结合的氧量多少而改变，因而不利于比 色，但血红蛋白与稀盐酸作用后，能使亚铁血红素变成不易变色的棕色
的高铁血红蛋白，用水稀释后可与标准比色板比色，从而测得血红蛋白含量。 [注意事项] 1.血液和盐酸作用的时间不可少于10分钟，否则，血红蛋白 不能充分转变成高铁血红蛋白，使结果偏低。 2.加蒸馏水时，开始可以稍多加几滴，随后则不能过快，以 防稀释过头。 3.比色时最好在自然光下，而不应在黄色光下进行，以免影 响结果。 4.整个实验过程中均应注意避免起泡 实验三红细胞的脆性试验 [实验原理] 如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂， 释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞膜对低渗溶液具有一 定的抵抗力，红细胞膜对低渗溶液的抵抗力越大，红细胞在 低渗溶液中越不容易发生溶血，即红细胞渗透脆性越小。 凡上层溶液开始微呈淡红色，而极大部分红细胞下沉，称开始溶血或最小抗力（红细胞的最小抵抗力）。 凡液体呈均匀红色，管底无红细胞下沉，则称完全溶血或最大抗力（红细胞的最大抵抗力） [注意事项]
实验动物学重点
1.实验动物学绪论 2.实验动物质量控制 3.常用实验动物 4.实验动物营养与饲料 5.实验动物环境和设施 6.基因工程动物 7.“3Rs”理论及其研究进展 8.怎样才能作好动物实验 实验动物学绪论 实验动物学：以生物学、动物科学、动物医学、医学,药理学、毒理学等学科为基础，综合发展而形成的一门覆盖 面极广的边缘学科。 实验动物学包括：实验动物，实验动物医学，比较医学，动物实验 实验动物：是指经人工培育的、遗传背景清楚、对其携带微生物和寄生虫实行控制、用于科学实验、教学、检定及 药品、生物制品生产的动物。 实验用动物：实验动物、家畜、野生动物、伴侣动物 概况：实验动物科学内容：实验动物、实验动物医学、比较医学、动物实验 1988年，国家科委发布《实验动物管理条例》 1996年10月，《北京市实验动物管理条例》出台，于2005年1月1日实施 实验动物伦理：是人与实验动物关系的伦理信念、道德态度和行为规范。主要体现在尊重实验动物的价值和权利。 实验动物福利：实验动物的一种康乐状态。在此状态下，其基本需求得到满足，而痛苦被减至最小。 五项基本福利：一，提供适当的清洁饮水和保持健康和精力所需要的食物，使动物不受饥渴之苦 二，提供适当的栖息场所，能够舒适地休息
和睡眠，使动物不受困顿不适之苦 三，做好防疫，预防疾病和给患病动物及时诊治，使动物不受疼痛、伤病之苦 四，保证拥有良好的条件和处置（包括安乐死），使动物不受恐惧和精神上的痛苦 五，提供足够的空间、适当的设施以及与同类动物伙伴在一起，使动物能够自由表达正常的习性 动物实验需要考虑实验动物伦理的几个环节：实验目的确定和必要性评估、实验设计遵循3Rs原则、实验操作过程避免或减轻动物疼痛及恐惧、日常饲养及护理、安乐死 CRO：Contract Research Organization Include: Clinical trial、Preclinical research AAALAC认证（国际实验动物管理评估和认证协会）实验动物学发展趋势：基因修饰技术运用； 实验动物福利与“3Rs”原则； 实验动物商品化及SPF动物广泛应用； 人源化小鼠模型的建立。 实验动物科学发展简史：1909年，Prof. Little 采用近交方法 培育出首个近交系小鼠DBA 1943年，美国Dr. Reynier研制出第一台金属隔离器，饲养无菌 大鼠 1948年，美国成立实验动物管理小组，后又成立实验动物科 学学会（AALAS） 1966年，美国国会批准《实验动物福利法案》 1982年，第一例转基因小鼠问世 实验动物学、比较医学等专业的设立及建立相应培训制度 我国实验动物科学发展概况：1918年，原北平中央防疫处开 3