2011;31(5)南方医科大学学报（J South Med Univ）
·基础研究·
高糖通过结缔组织生长因子诱导足细胞减少podocalyxin的表达
章俊，李萍华，杨蕾，杜庆生，郭婷婷，汤珣
南方医科大学珠江医院肾内科，广东广州510280
摘要：目的探讨高糖对小鼠足细胞podocalyxin表达的影响及结缔组织生长因子（CTGF）参与其损伤的可能机制。方法构建针对CTGF基因的特异性siRNA质粒并转染至小鼠足细胞。将体外培养的足细胞分为6组(1)正常对照组，正常足细胞其培养基含D-葡萄糖1g/L；(2)等渗对照组，正常足细胞其培养基含D-葡萄糖1g/L，甘露醇3.5g/L；(3)高糖组，正常足细胞其培养基含D-葡萄糖4.5g/L；(4)高糖+空白对照组：足细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养；(5)高糖+阴性对照组：足细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养；(6)高糖+干扰组：足细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后于高糖培养基中培养。Western blot方法检测小鼠足细胞Podocalyxin、CTGF蛋白表达及细胞外信号调节激酶（ERK1/2）磷酸化水平。结果高糖培养足细胞24、48h时均可下调其Podocalyxin蛋白表达量（P<0.05），并可诱导CTGF 蛋白表达增加（P<0.05）。同时高糖可以活化足细胞ERK1/2信号途径，在高糖刺激30min时开始活化，持续活化至24h。
特异性siRNA干扰CTGF合成后，ERK1/2活化减少，并且足细胞Podocalyxin表达升高。结论CTGF是高糖诱导小鼠足细胞损伤的重要介质，可通过ERK1/2途径诱导podocalyxin表达下降，针对CTGF的siRNA能明显改善podocalyxin表达量，为DN的治疗提供新的思路。
关键词：结缔组织生长因子；小分子干扰RNA；糖尿病肾病；足细胞
中图分类号：R34文献标志码：A文章编号：1673-4254（2011）05-0839-05
Connective tissue growth factor mediates high glucose-induced down-regulation of
podocalyxin expression in mouse podocytes
ZHANG Jun,LI Ping-hua,YANG Lei,DU Qing-sheng,GUO Ting-ting,TANG Xun
Department of Nephrology,Zhujiang Hospital,Southern Medical University,Guangzhou510280,China
Abstract:Objective To detect the effect of connective tissue growth factor(CTGF)on podocalyxin expression in mouse potocytes exposed to high glucose in vitro and explore the possible pathway involved.Methods The expression vector carrying a small interfering RNA(siRNA)targeting CTGF was transfected into mouse podocytes cultured in the presence of1g/L glucose(normal control),4.5g/L glucose(high glucose group),1g/L glucose+3.5g/L mannitol (iso-osmolar control group).The changes in the protein expression levels of podocalyxin,CTGF and ERK1/2in the cells in response to the treatments were investigated using Western blotting.Results High glucose exposure for24and 48h resulted in significantly decreased expression of podocalyxin and increased CTGF in the podocytes(P<0.05).
Phosphorylation of ERK1/2occurred as early as30min after the exposure,and the activation was maintained till24h.
Transfection of the cells with siRNA targeting CTGF significantly inhibited these changes.Conclusion CTGF is an important mediator of high glucose-induced potocyte damage and decreases the protein level of podocalyxin by the ERK1/2pathway.CTGF-specific siRNA can alleviate high glucose-induced podocyte injury,suggesting its potential value in treatment of diabetic nephropathy.
Key words:connective tissue growth factors;small interfering RNA;diabetic nephropathy;podocytes
蛋白尿是糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）的主要临床表现之一，也是加重慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）发展的重要因素［1］。足细胞在DN 的发展过程中起重要作用，其损伤后所导致的滤过膜屏障破坏，是蛋白尿形成的重要原因［2-4］。podocalyxin 是位于足突顶膜区带负电荷的跨膜蛋白，其所带的负电荷能排斥同样带负电荷的白蛋白，减少其滤过，还能防止相邻足细胞间足突的黏附，维持足细胞的独特结构，蛋白尿的形成与其表达减少密切相关［5］。结缔组织生长因子（CTGF）是近年来发现与DN肾小球硬化、肾小管间质纤维化相关的一种致病因子。DN肾组织免疫组化显示，CTGF高表达于肾小球足细胞区，提示很可能与足细胞损伤存在必然联系［6］。为探讨CTGF在DN高糖导致足细胞损伤中的作用，本研究以体外培养的小鼠足细胞为模型，观察高糖对其podocalyxin蛋白表达的影响，探讨CTGF参与其损伤的可能机制。
收稿日期：2010-12-23
基金项目：广东省科技计划项目(2007B031503001)；广东省医学科学技术研究基金（B2008115）
作者简介：章俊，主任医师，E-mail：gz163@https://www.doczj.com/doc/0d1817013.html,
通讯作者：汤珣，副主任医师，E-mail:tang_xun@https://www.doczj.com/doc/0d1817013.html,
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南方医科大学学报（J South Med Univ）第31卷
1材料与方法
1.1细胞株与试剂
小鼠永生性足细胞系由美国爱因斯坦大学Peter Mundel教授惠赠；DH5α菌株及空载体质粒pGenesil-1购自武汉晶赛公司；质粒提取试剂盒购自Omegar；转染试剂JetPEITM购自Polyplus；RPMI1640培养基、HRP Western Blot Detection Kit购自Invitrogen；兔抗小鼠podocalyxin，CTGF，ERK1/2抗体购自Abcam。1.2细胞培养
足细胞按Yang等［7］的方法培养。细胞于含10%胎牛血清和50U/mlγ-干扰素的RPMI1640培养液中，在33℃，5%CO2细胞培养孵箱中培养传代，然后转入不含γ-干扰素的10%胎牛血清1640培养液，37℃培养使足细胞分化12~14d后使用。根据不同的实验目的共分6组：正常对照组（含D-葡萄糖1g/L），等渗对照组（含D-葡萄糖1g/L、甘露醇3.5g/L），高糖组（含D-葡萄糖4.5 g/L），高糖+空白对照组（细胞转染空质粒pGenesil-1后培养于含D-葡萄糖4.5g/L的培养基中），高糖+阴性对照组（细胞转染含无关序列的质粒pGenesil/neg后培养于含D-葡萄糖4.5g/L的培养基中），高糖+干扰组（细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒pGenesil/ siRNA-CTGF后培养于含D-葡萄糖4.5g/L的培养基中）。
1.3足细胞转染
细胞种植于6孔板中，每孔约4×105，待细胞融合至80%~90%时开始转染。将转染试剂JetPEITM按9.6μl/孔，质粒按3μg/孔稀释至等体积混合，室温混匀30min后加入六孔板，分别转染24、48及96h，荧光显微镜观测其转染率。
1.4Western blot检测podocalyxin、CTGF蛋白表达及ERK1/2磷酸化水平
裂解细胞后取上清液，BCA(bicinchoninic acid)法进行蛋白定量。上样至SDS-PAGE电泳，电泳分离后转膜、封闭。再先后与兔抗小鼠podocalyxin、CTGF或ERK1/2抗体及羊抗兔多克隆二抗孵育杂交，最后显影、扫描，以目的蛋白条带和β-actin条带积分光密度值的比值代表其蛋白的相对含量，独立实验重复3次。
1.5统计学处理
采用SPSS13.0统计软件包分析，实验数据以均数±标准差表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，两组间比较采用SNK或LSD法。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1荧光显微镜观测转染率
质粒含有编码绿色荧光蛋白的序列，转染后的细胞
在荧光显微镜下显绿色荧光。pGenesil-1，pGenesil/ siRNA-CTGF，pGenesil/neg三组转染细胞24h后均能发射绿色荧光，达50%以上；48h荧光强度最强，阳性率也最高，达到80%左右，96h仍维持在40%以上。不同质粒转染率无差异(图1)。
2.2Western blot测定各组podocalyxin蛋白的表达
正常对照组表达基础水平的podocalyxin蛋白，高糖培养组在24、48h podocalyxin表达均降低（P<0.05），与各自时间点的正常对照组相比，48h比24h减少更甚。高渗对照组与正常对照组相比无明显差异（P> 0.05），对足细胞表达podocalyxin没有影响。高糖+ siCTGF干扰组podocalyxin蛋白表达水平比高糖培养组升高，差异有统计学意义（P<0.05），但仍低于正常对照组。高糖+空质粒对照组及高糖+阴性质粒对照组podocalyxin水平与高糖培养组无明显差异，均显著低于正常对照组（P<0.05，图2，表1）。
2.3Western blot测定各组CTGF蛋白的表达
正常对照组即有基础水平CTGF表达，与之相比，高糖培养组CTGF表达在24、48h时均显著增高（P< 0.05），与各自时间点的正常对照组相比，48h比24h表达更多。高渗对照组与正常对照组相比无明显差异（P>0.05），对足细胞表达CTGF无明显影响。高糖+ siCTGF干扰组CTGF蛋白表达水平比高糖培养组降低（P<0.05），但仍高于正常对照组。高糖+空质粒对照组及高糖+阴性质粒对照组CTGF水平与高糖培养组无明显差异，均显著高于正常对照组（P<0.05，图3，表2）。2.4Western blot测定各组ERK1/2磷酸化水平
高糖刺激足细胞30min时ERK1/2即开始活化，1、12h仍处于高磷酸化状态，且12h活化最明显，并持续活化至24h，但与12h相比有所降低。高渗对照组与正常对照组相比无明显活化（P>0.05）。高糖+siCTGF 干扰组ERK1/2磷酸化水平在各时间点均比高糖培养组下降（P<0.05），但仍高于正常对照组。高糖+空质粒对照组及高糖+阴性质粒对照组ERK1/2磷酸化水平在各时间点上与高糖培养组无明显差异，均显著高于正常对照组（P<0.05，图4，表3)。
3讨论
DN是一种慢性进展性疾病，其突出临床表现是蛋白尿，从早期微量白蛋白尿到终末期大量蛋白尿和肾功能不全。减少蛋白尿可延缓肾损害的进展，因此应作为临床治疗的主要目标，同时蛋白尿的发生机制也是DN 研究的热点之一。Koop等［5］发现，在许多以蛋白尿为主要临床表现的原发性小球疾病及继发性肾损害（如DN、狼疮肾炎）患者的肾组织中，podocalyxin表达低于正常人，表明podocalyxin的表达减少参与了DN蛋白尿的形
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章俊,等.高糖通过结缔组织生长因子诱导足细胞减少podocalyxin 的表达
第5期成。我们也发现，在高糖条件培养下的足细胞，其表达Podocalyxin 较正常组明显减少，表明高糖是DN 时足细
胞损害的重要因素之一。
CTGF 是CCN 蛋白家族的成员之一，属于早期即刻基因家族［8］。研究显示，CTGF 在系膜细胞方面主要与ECM 合成、肾小球硬化有关，在肾小管细胞则与肥大
向间充质转分化（EMT ）、间质纤维化程度密切相关［6,9］
，
而CTGF 与足细胞损伤的关系目前研究甚少。本研究检测了高糖状态下足细胞CTGF 的表达情况，发现高糖能诱导足细胞表达CTGF ，这提示我们CTGF 可能参与了足细胞损伤。为了验证CTGF 是否与高糖导致podocalyxin 表达减少有关，本研究利用siRNA 干扰技术，抑制高糖条件下CTGF 的表达后，其podocalyxin 亦表达增加，表明高糖可通过CTGF 下调足细胞相关蛋白的表达，证实了CTGF 在足细胞损伤中的重要作用。
图1普通光镜及荧光显微镜下观察pGenesil/siRNA-CTGF 转染足细胞的转染率
A1、B1、C1分别为光镜下观察转染24、48、96h 后的细胞；A2、B2、C2分别为荧光显微镜下观察转染24、48、96h 后的细胞
Fig.1Observation of CTGF siRNA-transfected podocytes under light microscope and fluorescence microscope (Original magnification:×400).
A1A2B1B2C1
C2
A
123456B 123456
Podocalyxin
β-antin
图2Western blot 检测podocalyxin 蛋白的表达水平
A:24h;B:48h,泳道1-6依次为正常对照组，高糖组，等渗对照组，高糖+空白对照组，高糖+阴性对照组和高糖+干扰组Fig.2Western blot analysis of the expression of podocalyxin in the podocytes.
分组正常对照高糖等渗对照高糖+空白对照高糖+阴性对照高糖+干扰
24h 0.717±0.008△0.305±0.018*0.744±0.030△0.313±0.010*0.299±0.005*0.452±0.013*△
48h 0.734±0.012△0.239±0.012*0.724±0.011△0.231±0.023*0.247±0.030*0.366±0.037*△
表1podocalyxin 蛋白的相对表达量
Tab.1Relative expression of podocalyxin in the podocytes with different treatments (Mean ±SD ,n =3)与对照组比较,*P <0.05;与高糖组比较,△P <0.05
·
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南方医科大学学报（J South Med Univ ）
第31卷
研究发现，DN 时肾组织细胞内第二信使如丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路处于激活状态，并且与蛋白
尿、肾小球硬化及肾小管纤维化密切相关［9］
。MAPK 家
族是多种致病因子或细胞因子信号在细胞内传递非常重要的一类通路，包括extracellular signal-regulated kinase(ERK)、c-Jun N-terminal kinase (JNK)和p38三
条经典途径［7］。进一步研究证明，MAPK 通路的活化与
足突融合、足细胞损伤和蛋白尿的发生相关［10］，如高糖
能激活p38介导足细胞合成细胞外基质增加［11］，另一种
氧化应激刺激物AOPPs 也可通过ERK 和p38
MAPK
A 1
2
3
4
5
6
B
1
2
3
4
5
6
CTGF β-antin
图3Westernblot 检测CTGF 蛋白的表达水平
A:24h;B:48h,泳道1-6依次为正常对照组，高糖组，等渗对照组，高糖+空白对照组，高糖+阴性对照组，高糖+干扰组Fig.3Western blot analysis of the expression of CTGF in the podocytes.
分组正常对照高糖等渗对照高糖
+空白对照
高糖
+
阴性对照高糖+干扰
24h 0.106±0.004△0.231±0.010*0.106±0.008
△
0.214±0.014*0.220±0.015*0.122±0.011△
48
h
0.121±0.010△0.453±0.017*0.109±0.004
△
0.466±0.013*0.438±0.005*0.149±0.019*△
表2CTGF 蛋白的相对表达量
Tab.2Relative expression of CTGF (Mean ±SD ,n =3)与对照组比较,*P <0.05;与高糖组比较,△P <0.05
A
12345
6
B
1
2
3
4
5
6
C
123456D 123456
p-erk1/2β-actin
p-erk1/2β-actin
图4Westernblot 检测phospho-erk1/2蛋白的表达水平
A:30min;B:1h;C:12h;D:24h,泳道1-6依次为正常对照组，高糖组，等渗对照组，高糖+空白对照组，高糖+阴性对照组，高糖+干扰组
Fig.4Western blot analysis of the expression of phospho-erk1/2in the podocytes.
分组正常对照高糖等渗对照高糖+空白对照高糖+阴性对照高糖+干扰
30min 0.328±0.029△0.608±0.013*0.300±0.045△0.594±0.024*0.582±0.023*
0.394±0.038*△1h 0.343±0.017△0.841±0.044*0.298±0.029△0.879±0.016*0.894±0.008*
0.599±0.045*△12h 0.346±0.016△0.919±0.011*0.325±0.020△0.908±0.018*0.884±0.010*
0.490±0.042*△
24h 0.340±0.016△0.907±0.011*0.339±0.013△0.896±0.007*0.873±0.019*0.444±0.047*△
表3erk1/2磷酸化蛋白的相对表达量
Tab.3Relative expression of CTGF in the podocytes (Mean ±SD ,n =3)与对照组比较,*P <0.05;与高糖组比较,△P <0.05
引起nephrin 及podocin 表达下调，导致尿白蛋白排泄率增加［7］。鉴于上述通路在足细胞损伤中的重要作用，我们采用Western blot 观察了其中一条重要的信号分子ERK1/2的磷酸化水平，发现高糖能在早期（30min ）诱
导ERK1/2活化，并持续至24h ，但24h 较12h 有所回落，这与其它文献所报道的通路活化效应相一致，也进一步验证了ERK1/2在高糖致足细胞损伤中的重要性。
为进一步探讨CTGF 致podocalyxin 表达下调与
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第5期章俊,等.高糖通过结缔组织生长因子诱导足细胞减少podocalyxin的表达
ERK1/2的关系，同样地我们采用了siRNA干扰技术，发现针对CTGF的siRNA能抑制ERK1/2磷酸化，并抑制高糖所诱导的podocalyxin表达下调的效应，说明在高糖刺激下，CTGF活化后通过ERK1/2磷酸化诱导足细胞表达podocalyxin减少。这与以往研究发现ERK1/2作为CTGF的下游通路发挥病理效应的报道相一致［12-15］。同时另有部分文献报道，ERK1/2通路也可诱导CTGF表达增加［16］，因此我们推测CTGF与ERK1/2通路之间可能存在互相促进，相辅相成的效应，但究竟以哪条途径为主，有待更进一步阐明。在后续研究工作中，将通过控制ERK1/2磷酸化，来印证其与CTGF 的关系。
综上所述，本研究证实了CTGF是高糖导致小鼠足细胞podocalyxin蛋白表达损伤的重要介质，其通过磷酸化ERK1/2诱导podocalyxin表达下降。
另外，如前所述CTGF在肾小管上皮细胞可引起细胞肥大及EMT［17］，而足细胞同样也存在肥大及形态改变等异型化改变，因此CTGF是否在足细胞肥大及骨架蛋白表达损伤等病理过程中发挥作用，也待进一步证实。
参考文献：
［1］de Zeeuw D,Remuzzi G,Parving H H,et al.Proteinuria,a target for renoprotection in patients with type2diabetic nephropathy:
Lessons from RENAAL［J］.Kidney Int,2004,65(6):2309–20.［2］Asanuma K,Mundel P.The role of podocytes in glomerular pathobiology［J］.Clin ExpNephrol,2003,7(4):255-9.
［3］Akhtar M,Al Mana H.Molecular basis of proteinuria［J］.Adv Anat Pathol,2004,11(6):304-9.
［4］White KE,Bilous RW,Diabiopsies Study Group.Structural alterations to the podocyte are realated to proteinuriain type2
diabet patients［J］.Nephrol Dial Transplant,2004,19(6):1437-40.［5］Koop K,Eikmans M,Baelde HJ,et al.Expression of Podocyte-associated Molecules in Acquired Human Kidney Diseases［J］.J
Am Soc Nephrol,2003,14(8):2063-71.
［6］Yokoi H,Mukoyama M,Mori K,et al.Overexpression of
connective tissue growth factor in podocytes worsens diabetic
nephropathy in mice［J］.Kidney International,2008,73(4):446-55.［7］Yang L,Liang M,Zhou QG,et al.Advanced oxidation protein products decrease expression of nephrin and podocin in podocytes
via ROS-dependent activation of p38MAPK［J］.Sci China Life
Sci,2010,53(1):68-77.
［8］Kular L,Pakradouni J,Kitabgi P,et al.The CCN family:A new class of inflammation modulators［J］?Biochimie,2011,93(3):
377-88.
［9］Forbes JM,Fukami K,Cooper ME.Diabetic nephropathy:where hemodynamics meets metabolism［J］.Exp Clin Endocrinol
Diabetes,2007,115(2):69-84.
［10］Koshikawa M,Mukoyama M,Mori K,et al.Role of p38Mitogen Activated Protein Kinase Activation in Podocyte Injury and
Proteinuria in Experimental Nephrotic Syndrome［J］.J Am Soc
Nephrol,2005,16(9):2690-701.
［11］Kang SW,Natarajan R,Shahed A,et al.Role of12-lipoxygenase in the stimulation of p38mitogen activated protein kinase and
collagen alpha5(Ⅳ)in experimental diabetic nephropathy and in
glucose-stimulated podocytes［J］.J Am Nephrol2003,14:3178-87.［12］Shimo T,Nakanishi T,Kimura Y,et al.Inhibition of endogenous expression of connective tissue growth factor by its antisense
oligonucleotide and antisense RNA suppresses proliferation and
migration of vascular endothelial cells［J］.J Biochem,1998,124
(1):130-40.
［13］Yosimichi G,Nakanishi T,Nishida T,et al.CTGF/Hcs24induces chondrocyte differentiation through a p38mitogen-activated
protein kinase(p38MAPK),and proliferation through a p44/42
MAPK/extracellular-signal regulated kinase(ERK)［J］.Eur J
Biochem,2001,268(23):6058-65.
［14］刘慧,赵连友,郑强荪,等.结缔组织生长因子诱导大鼠心肌细胞肥大的作用及其与细胞外信号调节激酶1/2的关系［J］.中华高血压杂志,
2006,14(12):984-8.
［15］吴升华,陆超,董玲,等.ERK1/2介导结缔组织生长因子刺激系膜细胞产生MCP-1［J］.免疫学杂志,2006,22(2):168-71.
［16］李永强,肖跃飞,黄海长,等.高糖对足细胞表达结缔组织生长因子及其受体蛋白的调节［J］.北京大学学报:医学版,2006,38（3）:262-5.［17］汤珣,蔡德鸿,曾莉,等.siRNA沉默CTGF表达对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响［J］.广东医学,2010,31（1）:55-8.
（编辑：陈望忠）
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高剂量联合化疗及放疗治疗 、 期非霍奇金淋巴瘤 佟琳如 庞秀英 孙立荣 谷仁凯 我们自1986年5月～1993年12月采用本方案治疗小儿 、 期非霍奇金淋巴瘤(N HL)24例,取得较好疗效。 本组患儿均经病理组织学证实。男17例,女7例;年龄3～12岁,平均816岁。均为初治病例。 期6例, 期18例。其中有骨髓浸润18例;纵膈浸润15例;腹腔弥漫病变7例;胸腔弥漫浸润2例;心包积液2例;腹膜后肿瘤因粘连严重未能切除者1例。病理组织学分型:小淋巴细胞型6例;弥漫型和小裂细胞型各5例;淋巴母细胞型3例;组织细胞型2例;大无裂细胞型1例;未定型2例。治疗前血红蛋白52～120g L,其中<90g L者10例;白细胞(310～9016)×109 L,其中>25×109 L者6例;血小板(40～230)×109 L,其中<100×109 L者7例。 诱导治疗:采用COD P方案+HD2M TX化疗+放疗。COD P即长春新碱(V CR)每次115～210m g m2,每周1次;环磷酰胺(CTX)每次112g m2,每2周1次;正定霉素(DN R)每次60m g m2,每2周1次,与上药交替静滴;泼尼松每日60m g m2,连续口服。第5周开始用大剂量甲氨喋呤(HD2M TX),每次1～2g m2。随后常规用甲酰四氢叶酸钙解救,同时鞘注化疗药物:阿糖胞苷(A ra2C)30m g m2,M TX1215～15m g m2,氟美松2～4m g 次,每1～2周1次,共3次。20例在诱导化疗结束后接受局部扩大野放疗,其中15例纵隔,5例腹部,疗程2～3周,总剂量30～40Gy。12例在用HD2 作者单位:266003青岛医学院附属医院儿科M TX后3～6个月作颅脑放疗,总剂量18～24Gy,在2～3周内完成。同时每周鞘注化疗药物(剂量同上)。 维持治疗:62巯基嘌呤或62巯代鸟嘌呤每天75m g m2,M TX15～30m g m2,每周1次。加强治疗采用V p加CTX(或加DN R),加阿霉素(或加左旋门冬酰胺酶),第1年每月1次,第2年每2个月1次,HD2 M TX每半年1次,共3次。持续完全缓解(CCR)2年停药。 结果:24例经4～11周化疗均获CR,其中14例(58%)在6周内CR。至末次随访时有18例(75%) CCR1年以上。3例已停药2年以上,最长1例无肿瘤生存5年1个月。 毒副作用:主要是骨髓抑制。诱导期发生率为75%。静滴HD2M TX93例次,有15次(16%)白细胞降至2×109 L以下,1例次转氨酶升高,2例次(2%)出现口腔粘膜炎。CTX静滴281例次均有记录,1次(013%)出现轻度出血性膀胱炎,全部患儿均有不同程度的恶心、呕吐、腹部不适和脱发,均未发现心脏、肾脏毒性和因毒性而死亡的病例。 本组在诱导治疗最初4周用较大剂量CTX和DN R,目的是通过冲击疗法,争取在短期内杀灭更多的肿瘤细胞,防止耐药克隆的增长,第5周在骨髓恢复时应用HD2M TX,预防中枢神经系统浸润,随后对原巨大包块者给予局部扩大野放疗,以便更彻底消灭肿瘤残余病变。 (收稿:1995201220 修回:1995203231) (本文编辑:滕淑英) 粒细胞集落刺激因子在急性白血病化疗中的应用 顾龙君 赵惠君 陈 静 汤静燕 近年来由于不断加强化疗的强度和频度,小儿急性白血病(AL)的完全缓解(CR)率和5年CCR率不断提高。然而,由此也导致了感染率的增加。在化疗后使 作者单位:200092上海第二医科大学附属新华医院用重组的人粒细胞集落刺激因子(rhG2CSF,商品名为惠尔血)可明显地缩短骨髓抑制时间,减少和减轻发生严重感染的危险,从而达到强化治疗的目的。现将我院应用rhG2CSF的22例临床疗效报道如下。 对象:1993年10月～1994年3月收治的AL患儿 ? 4 9 1 ?Ch in J Pediatr,M ay1996,V o l34,N o.3
基础知识- 第十五章免疫缺陷病和结缔组织病患儿的护理 一、A1 1、小儿生理性免疫功能低下的时期最主要是 A、学龄期 B、围生期 C、学龄前期 D、青春期 E、婴幼儿期 2、风湿活动的正确判断指标是 A、血沉慢 B、血小板减少 C、黏蛋白降低 D、C-反应蛋白增多 E、血浆白蛋白增高 3、下列关于幼年特发性关节炎的病因说法正确的是 A、病因不清 B、可能与感染有关 C、可能与营养不良有关 D、可能与精神因素有关 E、以上说法均正确 4、儿童时期最长见的风湿性疾病是 A、幼年特发性关节炎 B、红斑狼疮 C、强直性脊柱炎 D、骨性关节炎 E、感染性关节炎 5、目前认为过敏性紫癜与什么有关 A、致敏因素引起的自身免疫反应 B、皮肤抵抗力低 C、遗传因素 D、毛细血管通透性 E、以上说法均正确 6、下列哪种疾病血清补体降低不明显 A、链球菌感染后肾炎 B、系统性红斑狼疮 C、过敏性紫癜 D、膜增生性肾小球肾炎 E、遗传性血管神经性水肿 7、有关川崎病，下列说法哪项不妥 A、病因未明
B、心肌梗塞是主要死因 C、好发于婴幼儿 D、病理改变主要涉及心血管 E、发病男多于女 8、川崎病主要的死亡原因是 A、感染 B、心肌梗死 C、脑血栓 D、高热 E、癫痫 9、一般认为川崎病可能与 A、多种病原感染有关 B、抵抗力低下有关 C、先天性血管畸形有关 D、与小儿皮肤敏感有关 E、以上说法均正确 10、与风湿热发病有关的细菌感染是 A、金黄色葡萄球菌 B、大肠埃希菌 C、A组乙型溶血性链球菌 D、流感嗜血杆菌 E、脑膜炎双球菌 11、川崎病的冠状动脉损害最常发生于起病的 A、10天内 B、1～2个月 C、10～14天 D、14～28天 E、以上都不是 12、对川崎病最具诊断价值的心血管表现是 A、心包积液 B、二尖瓣返流 C、冠状动脉主干扩张 D、冠状动脉瘤 E、冠脉壁超声回声增强 13、诊断皮肤黏膜淋巴结综合征冠状动脉病变最佳检查是 A、超声心动图 B、心电图 C、冠脉造影 D、X线 E、放射线核素
重组人表皮生长因子治疗压疮临床疗效观察 摘要：目的：探讨重组人表皮生长因子治疗压疮的临床效果。方法：将100例压疮患者随机分为观察组（重组人表皮生长因子）50例和对照组（常规换药治疗）50例，观察组在初步清创基础上用重组人表皮生长因子湿敷，再予以敷料包扎；对照组采用5%呋喃西林或1%碘伏纱块湿敷后方纱敷料包扎，比较两组病人的治疗效果。结果：观察组明显缩短压疮创面愈合时间；不同时间创面平均愈合率明显优于对照组，差异均具有统计学意义（P<0.05 ）；结论：使用重组人表皮生长因子创面湿敷治疗，能显著促进创面愈合，缩短愈合时间，且无毒副作用。 关键词：重组人表皮生长因子；压疮；护理 Abstract：objective to Study of recombinant human epidermal growth factor in the treatment of pressure ulcers. methods 100 cases of patients with pressure ulcers were randomly divided into observation group （recombinant human epidermal growth factor）50 cases and control group （conventional dressing therapy）50 cases，observation group on the basis of preliminary debridement with recombinant human epidermal growth factor shi fu，again be dressing
重组人表皮生长因子凝胶（酵母） Chongzu Ren Biaopi Shengzhangyinzi Ningjiao (Jiaomu) Recombinant Human Epidermal Growth Factor Gel（Yeast） 本品系由高效表达人表皮生长因子基因的酵母，经发酵、分离和高度纯化后,加入凝胶基质制成。含适宜稳定剂，防腐剂，不含抗生素。 1 基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2 制造 2.1 工程菌菌种 2.1.1 名称及来源 重组人表皮生长因子工程菌株，系由带有人工合成的人表皮生长因子基因的DNA片段整合到酵母菌染色体基因组中构建而成。 2.1.2 种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 2.1.3 菌种检定 主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。 2.1. 3.1 划种BMG1琼脂平板 应呈典型酵母菌菌落形态，无其他杂菌生长。 2.1. 3.2 染色镜检 在光学显微镜下观察，应形状规则，用次甲兰染色，无死亡细胞。 2.1. 3.3 筛选标志检查 应符合该基因表型特征。 2.1. 3.4 人表皮生长因子表达量 在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。 2.1. 3.5 人表皮生长因子基因稳定性检查 涂BMG1琼脂平板，挑选至少50个克隆，用PCR检测人表皮生长因子基因，阳性率应不低于95％。 2.2 原液 2.2.1 种子液制备 将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。 2.2.2 发酵用培养基 采用适宜的不含任何抗生素的培养基。 2.2.3 种子液接种及发酵培养
结缔组织 一、填空题 1、疏松结缔组织中，能合成分泌基质和纤维的是细胞，脱颗粒后能引起过敏反应的是细胞。 2、疏松结缔组织中，有强大吞噬功能的是______________________细胞，能合成分泌免疫球蛋白的是_______________________细胞。 3、白纤维是指；网状纤维又称。 4、软骨组织的分类是根据所含的不同；透明软骨的纤维成分为，分布于（举一例）。位于椎间盘、耻骨联合的软骨为，含纤维成分 为；弹性软骨含纤维成分为。 5、在长骨骨干的内、外环骨板间，存在和两种结构。 6、红细胞呈形状，无核、无细胞器，胞质内充满。 7、血液有形成分中，体积最大的是细胞，体积最小的是_____________________；数量最多的是______________________细胞，数量最少的是细胞。 二、选择题 1．下列哪种细胞能产生抗体 A．T淋巴细胞B．浆细胞C．B淋巴细胞D．肥大细胞E．成纤维细胞 2．关于疏松结缔组织的特征哪项有错误 A．细胞数量少，细胞外基质多B．细胞外基质包括纤维和基质 C．细胞有极性，分散于细胞为基质中D．基质的化学成分主要是蛋白多糖 3．下列哪种细胞在疏松结缔组织中最常见 A．巨噬细胞B．肥大细胞C．浆细胞D．脂肪细胞E．成纤维细胞 4、新鲜时黄色，H.E染色粉红色，折光性强的纤维是 A 胶原纤维 B 弹性纤维 C 网状纤维 D 神经纤维 E 肌纤维 5、韧性大抗拉力强 A.胶原纤维B弹性纤维C网状纤维D肌原纤维E神经原纤维. 6．具有很强吞噬作用的细胞是 A成纤维细胞B巨噬细胞C未分化间充质细胞D肥大细胞E脂肪细胞 7、HE染色的透明软骨中看不见纤维是由于： A、纤维太少 B基质中不含纤维 C 纤维为嗜银性 D.纤维的嗜色性与基质相同 E.纤维的折光率与基质相同 8、相邻骨细胞突起间有 A 桥粒 B 连接复合体 C 缝隙连接 D 中间连接 E 紧密连接 9．弹性软骨见于 A. 关节盘 B. 椎间盘 C. 耳廓 D. 气管 E. 关节软骨 10、白细胞分类的主要依据是： A 核的形态 B 胞质有无特殊颗粒及嗜色性 C 胞质的嗜色性 D 胞质的嗜色性和核的形态 E 胞质内有无颗粒 11、关于红细胞，下列哪一项是错误的？ Ａ呈双凹圆盘状，中央较薄，周边较厚，直径约为7.5um B 成熟红细胞无核、无细胞器Ｃ红细胞胞质内充满大量的血红蛋白 Ｄ红细胞的细胞膜中一种镶嵌蛋白质，即血型抗原Ａ和血型抗原Ｂ Ｅ红细胞内残留部分核糖体，经甲苯氨蓝染色后呈兰色细网状，此类细胞为网织红细胞。
中国重组人粒细胞集落刺激因子在肿瘤化疗中的临床应用专家共识 (最全版) 恶性肿瘤患者在化疗过程中，中性粒细胞减少是细胞毒类化疗药物主要的剂量限制性毒性，其减少程度和持续时间与患者感染风险增加相关[1,2]。发热性中性粒细胞减少症(febrile neutropenia, FN)通常被定义为中性粒细胞绝对值(absolute neutrophil count, ANC)低于0.5×109/L，或ANC低于1.0×109/L且预计在48 h内将低于0.5×109/L，同时患者单次口内温度≥38.3 ℃或≥38.0 ℃且持续1 h以上，或腋温>38.5 ℃持续1 h以上[3]。患者出现FN后可能导致化疗药物剂量降低或治疗延迟从而降低临床疗效，也可出现严重感染，甚至死亡。还可能会增加诊断和治疗的费用进而导致医疗花费增加。 重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte–colony stimulating factor, rhG–CSF)是一种人工合成的促进中性粒细胞增殖、分化、激活的细胞因子，主要用于细胞毒类化疗药物治疗后出现的中性粒细胞减少症。目前临床上应用的rhG–CSF主要分为每日使用的rhG –CSF和每周期化疗仅使用一次的聚乙二醇rhG–CSF。聚乙二醇rhG–CSF 具有长效特性，由聚乙二醇分子与rhG–CSF共价结合而成，其药效学特性及防治FN相关不良事件发生方面与短效rhG–CSF基本一致[4,5,6,7,8]。 基于循证医学的荟萃分析结果表明，对已经出现发热性中性粒细胞减少症的患者，在使用广谱抗生素的基础上加用rhG–CSF可以显著缩短Ⅳ
结缔组织病患儿的护理 (总分：39.50，做题时间：90分钟) 一、A1型题(总题数：23，分数：23.00) 1.川崎病是指 ?A．风湿热 ?B．儿童类风湿 ?C．皮肤黏膜淋巴结过敏性紫癜 ?D．皮肤黏膜淋巴结综合征 ?E．儿童舞蹈症 （分数：1.00） A. B. C. D. √ E. 解析： 2.关于风湿热的治疗原则错误的是 ?A．卧床休息 ?B．控制感染灶用青霉素不少于2周 ?C．控制急性症状用阿司匹林 ?D．舞蹈症用巴比妥类 ?E．心脏炎用肾上腺素 （分数：1.00） A. B. C. D. E. √ 解析： 3.过敏性紫癜患儿的皮肤紫癜多见于 ?A．头面部 ?B．颈部、上肢 ?C．腹部 ?D．躯干部 ?E．下肢及臀部
（分数：1.00） A. B. C. D. E. √ 解析： 4.9岁女性急性风湿热患儿，心尖区出现舒张期隆隆样杂音时可能是 ?A．二尖瓣狭窄 ?B．发热可致 ?C．二尖瓣关闭不全 ?D．主动脉瓣关闭不全 ?E．有先天性心脏病 （分数：1.00） A. √ B. C. D. E. 解析： 5.关于舞蹈病的临床表现错误的是 ?A．女婴多见 ?B．常有不自主，不协调，无意识的快速运动 ?C．快速运动以面部和四肢为主 ?D．注意力集中时症状加剧，入睡后减轻 （分数：1.00） A. B. C. D. √ 解析： 6.过敏性紫癜多见于 ?A．1岁以内小儿 ?B．2岁以内小儿 ?C．3岁以内小儿
?D．3～6岁小儿 ?E．学龄儿童 （分数：1.00） A. B. C. D. E. √ 解析： 7.关于风湿热的病因叙述正确的是 ?A．是一种病毒性感染 ?B．是一种细菌性感染 ?C．A组乙型溶血型链球菌感染后的变态反应?D．是由草绿色链球菌引起的炎症 ?E．以上均不是 （分数：1.00） A. B. C. √ D. E. 解析： 8.过敏性紫癜的首发症状常是 ?A．皮肤紫癜 ?B．腹痛便血 ?C．恶心呕吐 ?D．关节疼痛肿胀 ?E．血尿 （分数：1.00） A. √ B. C. D. E. 解析：
重组人表皮生长因子对鼻黏膜结构的影响 【摘要】目的：探讨重组人表皮生长因子（rhEGF）对鼻黏膜结构的影响。方法：对21例（42侧）经鼻内窥镜全鼻窦开放术患者进行同体对照实验，一侧直接将人表皮生长因子喷于纱条填于术后窦口鼻道复合体处，另一侧为止血纱条填塞术腔2日后对照，在用药后3天、1周、2周取双侧鼻黏膜进行透视电镜下观察鼻黏膜结构。结果：用药后3天上皮排列不整，细胞间连接松散，表层纤毛紊乱，大量脱落，1周时上皮、表层纤毛明显修复，2周时黏膜基本正常。结论：重组人表皮生长因子对鼻黏膜结构的损坏较小并可促其迅速恢复。 【关键词】重组人表皮生长因子；鼻黏膜；鼻内镜 重组人表皮生长因子（rhEGF）是可调节多类细胞生长的多肽，是极其重要的血管生成因子[1]。其通过控制具有调节上皮化、血管生成和胶原代谢的细胞增生和移行而帮助创面愈合[2]。rhEGF调节障碍将会导致修复延迟，乃至瘢痕的形成[3]。该药物是否会对鼻黏膜产生刺激或损害，以及损害的程度和损害后是否可逆，是该药物在鼻科临床能否应用的关键，本观察则是该药物对鼻黏膜结构的影响情况。 1 资料和方法 1.1 病例选择：选择双侧鼻息肉全鼻窦炎患者21例，男13例，女8例，年龄21~53岁，平均36.28岁，病程1~10年，患者均为初次手术并无明显变态反应病史，每例患者双侧鼻腔病变基本相同，按照鼻息肉慢性鼻窦炎诊疗评定标准（1997，海口）分类：Ⅱ型2期9例，Ⅱ型3期12例。手术前均作副鼻窦CT 扫描。 1.2 药物及使用方法：药品为重组人表皮生长因子（rhEGF），由深圳华生元基因工程发展有限公司提供（批号：19991201）。 21例均采用局麻鼻内窥镜下鼻息肉摘除全鼻窦开放术，术式为Messerklinger 术式，从前至后切除筛窦，再将上颌窦自然口扩大，酌情处理额窦和蝶窦，切除病变组织时尽量保留正常和病变较轻的黏膜，有利于术后功能的恢复，窦口鼻道复合体处经肾上腺素棉片压迫止血后，随机一侧直接将rhEGF喷于纱条填于该处，另一侧为止血纱条填塞术腔2日后对照，12例左侧做对照组，9例右侧做对照组，rhEGF隔日一换，共4~5次后按术后常规清洁处理。 1.3 组织病理学观察：术后用药3天、1周、2周取双侧窦口鼻道复合体处1
结缔组织由细胞和大量细胞间质构成，结缔组织的细胞间质包括液态、胶体状或固态的基质、细丝状的纤维和不断循环更新的组织液，具有重要功能意义。细胞散居于细胞间质内，分布无极性。广义的结缔组织，包括液状的血液、淋巴，松软的固有结缔组织和较坚固的软骨与骨；一般所说的结缔组织仅指固有结缔组织而言。结缔组织在体内广泛分布，具有连接、支持、营养、保护等多种功能。 结缔组织是人和高等动物的基本组织之一。由细胞、纤维和细胞外间质组成。细胞有巨噬细胞、成纤维细胞、浆细胞、肥大细胞等。纤维包括胶原纤维、弹性纤维和网状纤维，主要有联系各组织和器官的作用。基质是略带胶粘性的液质，填充于细胞和纤维之间，为物质代谢交换的媒介。纤维和基质又合称“间质”，是结缔组织中最多的成分。结缔组织具有很强的再生能力，创伤的愈合多通过它的增生而完成。结缔组织又分为疏松结缔组织（如皮下组织）、致密结缔组织（如腱）、脂肪组织等。 它们都起源于胚胎性结缔组织——间充质。在它们的组成成分中除细胞外，还有大量非细胞物质（无定形基质和纤维）。 结缔组织均起源于胚胎时期的间充质（mesenchyme）。间充质由间充质细胞和大量稀薄的无定形基质构成。间充质细胞呈星状，细胞间以突起相互连接成网，核大，核仁明显，胞质弱嗜碱性（图3－1）。间充质细胞分化程度低，在胚胎时期能分化成各种结缔细胞、内皮细胞、平滑肌细胞等。成体结缔组织内仍保留少量未分化的间质细胞。 中文名 结缔组织 外文名 connective tissue 构成 细胞和大量细胞间质 功能 连接、支持、营养、保护 固有组织（connective tissue proper），按其结构 (一)细胞 和功能的不同分为疏松结缔组织、致密结缔组织、脂肪组织和网状组织。 结缔组织疏松组织 疏松结缔组织（loose connective tissue）又称蜂
1 对于Ⅲ-Ⅳ度骨髓抑制，或发热性粒细胞缺乏患者，短效还是长效升白药的起效时间更快，持续时间更长？ 短效重组人粒细胞刺激因子的药代动力学资料显示皮下注射的半衰期为2.5-5.8小时，而长效制剂的的药代动力学资料显示其平均半衰期依据剂量不同而波动于27-47小时之间。且资料显示，常规剂量给予短效制剂1天后嗜中性细胞成熟（不给药状态下一般需要5-7天），从骨髓进入血液，这样似乎短效制剂起效相对迅速。 短效制剂主要由肾小球滤过排出，而长效制剂由于其独特的PEG链上的环氧乙烷单元高度水合形成的环状结构能够避免其蛋白成分被相关酶水解或被巨噬细胞吞噬，同时避免其被肾小球滤过，所以其进入人体后主要由中性粒细胞表面的RHG-CSF受体介导清除，随着外周血中性粒细胞绝对计数（ANC）的升高，血浆中的长效制剂浓度呈现与ANC负相关表现。这样既可以达到持续有效改善白细胞缺乏，同时也能减少ANC过高风险。 在石远凯教授组织的关于聚乙二醇化长效制剂的临床Ⅰ期临床耐受性实验，以及徐兵河教授组织的关于聚乙二醇化长效制剂预防化疗后中性粒细胞减少的多中心随机对照Ⅱ期临床研究中，也得到了支持上述观点的相关结论（分别发表于2006年《癌症》及2016年《中国肿瘤临床与康复》）。 2影响G-CSF疗效的原因有哪些？ 患者的治疗依从性，药物副反应（包括罕见但严重的副反应如脾破裂/毛细血管渗漏综合症等），患者一般体力状态/既往化疗方案及次数/年龄因素（间接反映患者的骨髓储备功能水平）。 对于短效制剂还应当考虑到作为大肠埃希菌的表达产物，其免疫原性和抗原性导致机体产生中和性抗体导致药效减退的因素。
3放疗状态下出现的粒细胞减少，G-CSF如何使用？ 参考ASCO建议，对于致死剂量全身放射治疗或意外全身照射的患者应考虑在终止放射暴露后G-CSF应用治疗（该推荐基于美国放射事故登记中心的辐射急症救援中心的病例观察资料而提出）。 2012年美国放疗协会推荐在大剂量放疗后24-48小时应用长效聚乙二醇化制剂。 而2016年发表的由CSCO联合中国抗淋巴瘤联盟/中国抗癌协会乳腺癌专业委员会/中华医学会血液学分会白血病及淋巴瘤学组/中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会共同做出的《聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子临床应用中国专家共识》明确指出：建议对暴露于≥2GY和/或总粒细胞计数明显减少或预期中性粒细胞计数＜0.5×10~9/L，且持续时间≥7天的患者考虑细胞因子治疗，并推荐开始治疗时间为治疗暴露后24小时。 4长效集落细胞刺激因子会增加病人的经济负担，国内外的背景有何不同？ 1长效制剂目前不在我省医保目录范围，属于全自费药物，在目前国内形势下存在一定不足。 2从改善骨髓抑制状态从而减少并发感染导致非计划性住院治疗方面考虑，在一定程度上节约了医疗资源，减少了患者在并发症治疗方面的经济支出和家庭社会压力。 3截至2016年8月，原研长效聚乙二醇化制剂的核心专利在美国/日本/欧洲及中国均全部到期。随着辉瑞等厂家仿制药进入市场，能否通过竞争模式改善其市场定位及表现有待进一步观察。
外用重组人表皮生长因子 Waiyong Chongzu Ren Biaopi Shengzhangyinzi Recombinant Human Epidermal Growth Factor for External Use 本品系由高效表达人表皮生长因子基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。 1基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2制造 2.1工程菌菌种 2.1.1名称及来源 重组人表皮生长因子工程菌株系由带有人工合成人表皮生长因子基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。 2.1.2种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 2.1.3菌种检定 主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。 2.1. 3.1划种LB琼脂平板 应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。 2.1. 3.2染色镜检 应为典型的革兰阴性杆菌。 2.1. 3.3对抗生素的抗性 应与原始菌种相符。 2.1. 3.4电镜检查（工作种子批可免做） 应为典型大肠杆菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。 2.1. 3.5生化反应 应符合大肠杆菌生物学性状。 2.1. 3.6人表皮生长因子表达量 在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。 2.1. 3.7质粒检查 该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。 2.1. 3.8 目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做） 目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。 2.2原液 2.2.1种子液制备 将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。 2.2.2发酵用培养基 1
粒细胞集落刺激因子在生殖和复发性流产领域中的应用 粒细胞集落刺激因子(G-CSF )最初粒细胞集落刺激因子在生殖和复发性流产领域中的应用主要用于白细胞减少相关的血液疾病，现G-CSF的应用扩展到神经系统、心血管系统、内分泌系统以及生殖系统等领域。近年来的一些研究先后证实G-CSF在生殖医学中，对子宫内膜损伤后的增殖修复过程中具有一定程度的积极促进作用，并能改善部分复发性流产和反复种植失败患者妊娠结局。 一、G-CSF概述 G-CSF是常见的内源性造血生长因子，广泛作用在骨髓微环境，促进骨髓中性粒细胞前体的增殖和分化，动员骨髓中性粒细胞移行到外周血中，促进中性粒细胞的成熟，增强中性粒细胞的功能，刺激分叶核粒细胞增殖、分化，抑制炎症反应、细胞凋亡，抗感染及参与免疫调控。G-CSF体内来源广泛，最早发现其主要来源于造血细胞中的单核巨噬细胞系，后发现非造血细胞中也存在G-CSF及其G-CSF受体的表达，包括血管内皮细胞、间皮细胞、成纤维细胞、血小板等。G-CSF受体也存在于胎盘细胞、滋养细胞和颗粒黄体细胞。有研究发现某些恶性肿瘤也可以分泌G-CSF。正常生理情况下，人体血清中G-CSF的含量很低，但应激情况下可显著增高。 二、G-CSF促进子宫内膜生长修复 子宫内膜表面细胞广布G-CSF受体，而子宫内膜的基质细胞有多种类型。高明霞研究发现，子宫内膜G-CSF可以激发G-CSF受体的表达，促进白介素一1、血管内皮生长因子、白血病抑制因子、肿瘤坏死因子
-a等细胞因子的表达，降低白介素-2的表达，从而促进内膜修复，改善子宫内膜容受性。Salmassi等发现子宫内膜本身就可以分泌少量的G-CSF及表达G-CSF受体；另一方面，G-CSF还可能诱导子宫内膜细胞的抗细胞凋亡蛋白生成，抑制细胞凋亡过程，促进血管重生和修复。 三、G-CSF在生殖及复发性流产中的应用 国外Cavalcante M，Elkin L等对G-CSF的研究表明，G-CSF可促进胚胎的生长及植入，优化胚胎，促进胎盘的生长，增加反复移植失败患者胚胎着床率；调节子宫内膜基质细胞活化数目，促进人卵泡颗粒细胞、胎盘及子宫内膜细胞生长发育，增加子宫内膜的厚度；促进滋养层细胞生长，加快胎盘的代谢；增强孕早期调节性T细胞免疫耐受的发生；体外受精的胚胎培养基中加入G-CSF可增加种植胚胎的存活率；降低35岁以上不孕妇女生化妊娠的发生率，提高大龄女性胚胎着床能力；是子宫内膜重塑过程中子宫环境与胚胎生长同步进行的调节因子；并可抑制化学因素引起的胎儿异常。 四、CSF与恶性肿瘤的相关性： G-CSF并未在临床大规模常规使用可能在于其与肿瘤的相关性。已有报道G-CSF导致不同器官的恶性肿瘤，并且临床预后不佳。但G-CSF 如何导致恶性肿瘤的精确机制仍然未明。 五、G-CSF可以降低孕妇血清CA125 付锦华报道：早孕期CA125升高的患者，每周应用G-CSF至孕12周，约95%的患者CA125都能恢复到正常水平。其可能机制为，G- CSF
易孚(重组人表皮生长因子凝胶) 【药品名称】 商品名称：易孚 通用名称：重组人表皮生长因子凝胶 英文名称：Recombinant Human Epidermal Growth Factor Gel 【成份】 重组人表皮生长因子。 【适应症】 本品适用于皮肤烧烫伤创面(浅Π度至深Ⅱ度烧烫伤创面)、残余创面、供皮区创面及慢性溃疡创面的治疗。 【用法用量】 常规清创后，用生理氯化钠溶液清洗创面，取本品适量，均匀涂于患处。需要包扎者，同时将本品均匀涂于适当大小的内层消毒纱布，覆盖于创面，常规包扎，一日一次或遵医嘱。推荐剂量为每lOOcm2创面使用本品10g(以凝胶重量计)。 【不良反应】 未见严重不良反应。 【禁忌】 对本品过敏者 【注意事项】 本品为无菌包装，用后请即旋紧管口，以防污染。本品无抗菌作用，但不会增加创面感染机会。对感染创面，在进行创面清创的前提下，可考虑联合使用抗菌药物控制感染。对于各种慢性创面，如溃疡、褥疮等，在应用本品前，应先行彻底清创去除坏死组织，有利于本品与
创面肉牙组织的充分接触，提高疗效。当本品的外观、性状发生改变，如出现霉变、变质等现象时，应禁止使用。 【特殊人群用药】 儿童注意事项： 无禁忌。 妊娠与哺乳期注意事项： 尚不明确。 老人注意事项： 无禁忌。 【药物相互作用】 本品遇酒精、碘酒等，可能会使EGF变性，而使活性降低。因此使用酒精、碘酒等消毒后，应再用生理氯化钠溶液清洗创面，然后使用本品。 【药理作用】 1.药理作用：本品为外用重组人表皮生长因子(rhEGF)。可促进动物皮肤创面组织修复过程中的DNA、RNA和羟脯氨酸的合成，加速创面肉芽组织的生成和上皮细胞的增殖，从而缩短创面的愈合时间。 2.毒理研究：(1)重复给药毒性：家兔背部破损皮肤涂抹本品(6g凝胶/次，每日1次，浓度200μg/g，相当于临床用药浓度的20倍)，连续36天，给药局部皮肤及各脏器均未见明显毒性反应。本品较长时间局部应用对愈合后创面的远期影响不清楚。 (2)遗传毒性和生殖毒性：尚无动物研究资料。(3)致癌性：研究文献提示，EGF有促进某些肿瘤细胞生长的作用，但也有一些动物和体外研究文献提示，EGF作为一种具有多种功能的细胞因子，可以抑制某些肿瘤细胞的生长。对于烧伤患者(尤其是较大面积烧伤时)局部较长时间使用本品的影响尚不清楚。临床药代动力学研究结果提示患者烧伤面积达5～10％时，
重组人粒细胞刺激因子注射液使用说明书 （欣粒生?使用说明书） 请仔细阅读说明书并在医生指导下使用 [药品名称] 通用名称：重组人粒细胞刺激因子注射液 商品名称：欣粒生? 英文名称 汉语拼音： [成分]重组人粒细胞刺激因子，辅料为醋酸钠、冰醋酸、甘露醇、聚梨酸酯 [性状] 无色透明液体，。 [适应症] .促进骨髓移植后中性粒细胞计数增加。 .癌症化疗引起的中性粒细胞减少。包括恶性淋巴瘤、小细胞肺癌、胚胎细胞瘤（睾丸肿瘤、卵巢肿瘤等）、神经母细胞瘤等。 .骨髓异常增生综合征伴发的中性粒细胞减少症。 .再生障碍性贫血伴发的中性粒细胞减少症。 .先天性、特发性中性粒细胞减少症。 [规格] μ支、μ支、μ支 [用法用量] .促进骨髓移植后中性粒细胞数增加。 成人及儿童的推荐剂量为μ, 通常自骨髓移植后次日至第五日给予静脉滴注，每日一次。 当中性粒细胞计数上升超过 时,停药,观察病情。 在紧急情况下，无法确定本药的停药指标中性粒细胞数时，可用白细胞的半数来估算中性粒细胞数。 .癌症化疗后引起的中性粒细胞减少症。 .恶性淋巴瘤、肺癌、卵巢癌、睾丸癌和神经母细胞瘤化疗后次日开始给药,成人及儿童推荐剂量为μ,皮下注射,每日一次。化疗后中性粒细胞数降低到(白细胞计数)以下的成人患者和化疗后中性粒细胞数减少到(白细胞计数)以下的儿童患者应给予本品。 经用药后，如果中性粒细胞计数经过最低值时期后增加到(白细胞计数)以上时，应观察病情，同时停用本品。 如皮下注射困难，应改为μ静脉滴注，成人及儿童，每日一次。 .急性白血病 通常在化疗给药结束后（次日以后），骨髓中的幼稚细胞减少到足够低的水平且外周血中无幼稚细胞时，开始给药，成人及儿童推荐剂量为μ，每日一次，皮下或静脉给药（包括静脉点滴）。 紧急情况下，无法确定本药的给药及停药时间的指标中性粒细胞数时，可用白细胞的半数来估算中性粒细胞数。 .骨髓异常增生综合征伴发的中性粒细胞减少症 中性粒细胞计数低于的患者，给予本品μ皮下或静脉滴注，每日一次。 如果中性粒细胞计数超过 ，应减少剂量或终止给药，并观察病情。 .再生障碍性贫血伴发中性粒细胞减少症 【核准日期】 【修改日期】
重组人表皮生长因子生物学活性测定法 （细胞增殖法/MTT比色法） 本法系依据重组人表皮生长因子对小鼠胚胎成纤维细胞（Balb/c3T3细胞）的生长具有刺激作用，Balb/c3T3细胞的生长状况因重组人表皮生长因子生物学活性的不同而异，以此检测重组人表皮生长因子的生物学活性。 试剂： （1）RPMI 1640培养液： RPMI 1640培养基粉末1袋（规格为1L），加水溶解并稀释到1000ml，加青霉素105U/ml（1ml），链霉素105mg/ml(1ml),再加碳酸氢钠2.1g，溶解后，混匀，除菌过滤，4℃保存。 （2）维持培养液: 量取新生牛血清4ml，加RPMI 1640培养液到1000ml。 （3）完全培养液： 量取新生牛血清100ml，加RPMI 1640培养液到1000ml。 （4）PBS： 量取氯化钠8g、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠1.44g、磷酸二氢钾0.24g，加水溶解并稀释到1000ml的溶液，经121℃，15分钟灭菌。
(5)噻唑蓝（MTT）溶液： 取MTT粉末0.10g，加PBS20ml使溶解，经0.22um滤膜过滤除菌。4℃避光保存。 标准品沉沦的制备： 取理组人表皮生长因子标准品按说明书复溶后，用维持培养液稀释至每1ml 含50 IU。在96孔细胞培养板中，做4倍系列稀释，共8个稀释度，每个浓度做2个孔。以上操作在无菌条件下进行。 供试品溶液的制备： 将供试品按标示量复溶后，用维持培养液稀释成每1ml约含50 IU。在96孔板中，做4倍系列稀释，共8个稀释度，每个浓度做2个孔。以上操作在无菌条件下进行。 测定方法： Balb/c3T3细胞株用完全培养液于37℃、5%二氧化碳培养，控制细胞浓度为每1ml含1.0 X 105 --5.0 X 106个细胞，传代后24—36小时用于生物学活性测定。弃去培养瓶中的培养液，消化和收集细胞用完全培养液配成每1ml含5.0 X 104 --8.0 X 104个细胞的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔100ul，于37℃、5%二氧化碳条件下培养。24小时后换成维持培养液。置37℃、5%二氧化碳培
重组人表皮生长因子治疗皮肤擦挫伤疗效观察 发表时间：2012-11-16T17:20:14.700Z 来源：《中外健康文摘》2012年第28期供稿作者：王丽莎胡海花王晓红[导读] 在临床应用中未发现一例瘢痕增生者，值得在美容科推广使用。 王丽莎胡海花王晓红（山东威海市文登中心医院美容科山东威海 264400） 【中图分类号】R【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）28-0269-01 【摘要】目的观察重组人表皮生长因子（Recombinant Human Epidermal Growth Factor dericative,rhEGF)对成人女性面部皮肤擦挫伤的临床治疗效果。方法回顾自2008年9月至2011年8月期间，根据知情同意原则，应用rhEGF治疗面部皮肤擦挫伤的病例42例为观察组，未应用的病例34例为对照组，观察记录两组创面恢复时间及创面恢复情况。结果观察组创面愈合时间平均为10.00±1.53天，对照组创面愈合时间平均为13.15±1.97天，观察组创面愈合时间明显较对照组创面愈合时间短（P≤0.05）。观察组创面愈合后创面颜色较对照组浅，皮肤较光滑。结论 rhEGFT对于促进成人女性面部皮肤擦挫伤的创面愈合、加快组织修复具有较好效果。 【关键词】重组人表皮细胞生长因子创面修复 美容科就诊者较其它科室患者对伤口的愈合质量提出了更高层次的要求，尤其是女性患者往往希望伤痕修复的更接近于原来的正常皮肤。针对这一问题，rhEGFT自进入市场以来，因其具有的高效修复、消除皱纹、抗衰老、淡化色斑、滋润补水等作用备受各方关注。现对自2008年9月至2011年8月期间应用rhEGF治疗面部皮肤擦挫伤的病例创面恢复情况进行总结记录，效果较好，现报告如下： 1 资料和方法 1.1一般资料：本组分为观察组和对照组，观察组42人，均为女性，年龄23～47岁，平均35.05岁。对照组34例，均为女性，年龄20～48岁，平均33.88岁。所有病例均为否认瘢痕体质。所有病例均为面部擦挫伤，挫伤面积观察组1.2cm× 2.0cm～ 3.6cm×7.8cm，对照组1.0cm×1.9cm～2.8cm×8.5cm。 1.2方法 1.2.1 观察组新鲜伤口，清除坏死及污染组织，先用3%过氧化氢做好消毒，再用75%酒精对伤口周围皮肤进行消毒处理，然后应用rhEGF于创面，嘱每日定时涂擦，48小时后给予烤电治疗，指导患者注意饮食，加强营养。 1.2.2 对照组除未应用rhEGF，其余处理与观察组相同。 1.2.3 观察记录两组创面愈合情况，两组创面愈合时间用均数±标准差（`x±s）表示。 2 结果 所有创面均一期愈合，观察组愈合创面较对照组光滑，无色素沉着，无瘙痒感等不适症状。 对两组病例年龄、创面面积及愈合时间进行独立样本t检验，以比较两组年龄、创面面积值和愈合时间均数是否有统计学差异，见表1。 表1 观察组与对照组年龄、创面面积和愈合时间 、 观察组与对照组年龄和创面面积均数差异无统计学意义（P≥0.05）。排除两组年龄与创面面积的差异，两组创面愈合时间均数有统计学意义（P<0.05）。 3 讨论 生长因子在创伤愈合中的作用研究表明，外源性生长因子的增加，可促进细胞有丝分裂活动，增加细胞的分裂与增殖，加速皮肤创伤的修复和愈合。重组表皮生长因子是柔碱性纤维细胞生长因子，对创伤细胞有明显趋向活性，可诱导炎性细胞向创作部位移动和改善创面微循环和组织营养状态，能有效促进新生血管形成和增加肉芽组织数量，从而达到快速促进创面愈合的目的 [1]；人重组表皮生长因子溶液除具有上述作用外，在促进组织和再生作用的同时，还能有效地减少病理性瘢痕的产生[2]。随着分子生物学的研究进展,人们对创面愈合的机制认识也不断深化。愈合能力差除与创面产生原因有关外,还与创面本身修复内环境的改变、内源性生长因子含量低下或受体活性下调等因素有关。生长因子在创伤修复中起着举足轻重的作用。重组人表皮生长因子能促进皮肤创面组织修复过程的DNA、RNA和羟脯氨酸的合成，加速创面肉芽组织的生长和上皮细胞的增殖，从而缩短创面的愈合时间。在临床应用中未发现一例瘢痕增生者，值得在美容科推广使用。 参考文献 [1]许杰，关志广，张治平.重组人表皮细胞生长因子在足部慢性溃疡创面修复中的应用[J].国际医药卫生导报，2006.12（17）：136-137. [2]李泳淼，叶胜捷.重组人表皮生长因子和创愈宁合用治疗热水袋烫伤[J]东南国防医药.2007.9（6）.437-438.
【药品名称】重组人粒细胞集落刺激因子注射液 【英文名称】Recombinant Human Granulocyte Colony Stimulating Factor Injection 【药品别名】 商品名：惠尔血(GRAN) 结构式与分子量：根据已知来源于人类膀胱癌细胞的粒细胞集落刺激因子的基因，通过基因重组产生的含有175个氨基酸残基（C845H1339N223O243S9；分子量：18,798.88）的蛋白质。 主要组成成分：重组人粒细胞集落刺激因子 【性状】 本品为无色澄明液体。 【药理、毒理】 本品为利用基因重组技术生产的人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）。与天然产品相比，生物活性在体内、外基本一致。G-CSF是调节骨髓中粒系造血的主要细胞因子之一，可选择性地作用于粒系造血祖细胞，促进其增殖、分化，并可增加粒系终末分化细胞即外周血中性粒细胞的数目与功能。 【药代动力学】 健康成年男性单次静脉或皮下注射本品1.0(g/kg，其药代动力学参数如下：静脉给药者的半衰期为 1.40小时，AUC为21.6ng(hr/ml；皮下注射者的半衰期为 2.15小时，AUC为11.7ng(hr/ml，生物利用度为0.54。连续6天静点或皮下注射本药后，开始给药日与第6日的血浆中药物浓度无显著性差异，无蓄积现象。 给健康成年男性静点本药3.0(g/kg或皮下注射1.0(g/kg后，测定24小时尿中的药物浓度，结果均在测定界限以下。 【适应症】 1．促进骨髓移植后中性粒细胞计数增加。 2．癌症化疗引起的中性粒细胞减少症。包括恶性淋巴瘤、小细胞肺癌、胚胎细胞瘤（睾丸肿瘤、卵巢肿瘤等）、神经母细胞瘤等。 3．骨髓增生异常综合征伴发的中性粒细胞减少症。 4．再生障碍性贫血伴发的中性粒细胞减少症。 5．先天性、特发性中性粒细胞减少症。 【用法与用量】 1．促进骨髓移植后中性粒细胞计数增加 成人和儿童的推荐剂量为300(g/m2，通常自骨髓移植后次日至第5日给予静脉滴注，每日一次。 当中性粒细胞数上升超过5000/mm3时，停药，观察病情。 在紧急情况下，无法确认本药的停药指标中性粒细胞数时，可用白细胞数的半数来估算中性粒细胞数。 2．癌症化疗后引起的中性粒细胞减少症。 经用药后,如果中性粒细胞计数经过最低值时期后增加到5,000/mm3（WBC：10,000/mm3）以上，应停药,观察病情。 A.恶性淋巴瘤、肺癌、卵巢癌、睾丸癌和神经母细胞瘤化疗后（次日后）开始给药。成人及儿童推荐剂量为50(g/m2,皮下注射，每日一次。化疗后中性粒细胞降到1,000/mm3（WBC：2,000/mm3）以下的成人患者应给予本品。化疗后中性粒细胞计数减少到500/mm3（WBC：1,000/mm3）以下的儿童患者,应皮下注射50(g/m2的本品,每日一次。 如皮下注射困难,应改为100(g/m2静脉滴注（成人及儿童）,每日一次。
执业护士儿科护理学（结缔组织病患儿的护理、常见传染病患儿 的护理）-试卷1 (总分：68.00，做题时间：90分钟) 一、 A2型题(总题数：1，分数：2.00) 1.某女孩，9岁。确诊为风湿热急性期收入院。查体：神志清，面色稍苍白，听诊在安静状态下心率加快，心尖部第一心音低钝，胸片显示心脏扩大。表明该患儿发生了( ) A.心肌炎√ B.心内膜炎 C.心包炎 D.心律失常 E.心动过速 解析： 二、 A3型题(总题数：3，分数：18.00) 患儿，男，10岁。因低热、纳差伴消瘦2个月，腕、指关节肿胀、疼痛20天来诊。查体：病变关节肿胀，功能障碍，不发红。血常规：RBC3．6×10 12／L，Hb100g／L，红细胞沉降率40mm／小时。（分数：8.00） (1).最可能的诊断是( ) A.化脓性关节炎 B.结核性关节炎 C.风湿性关节炎 D.类风湿关节炎√ E.过敏性紫癜性关节炎 解析： (2).对诊断最有帮助的检查是( ) A.白细胞计数与分类 B.类风湿因子 C.x线检查√ D.结核菌素试验 E.关节腔穿刺抽液化验 解析： (3).对该患儿的饮食指导正确的是(> A.高热量、高蛋白、低维生素、易消化饮食 B.高热量、低蛋白、高脂肪、高纤维素饮食 C.低热量、高蛋白、高维生素、易消化饮食 D.高热量、高蛋白、高纤维素、易消化饮食 E.高热量、高蛋白、高维生素、易消化饮食√ 解析： (4).治疗首选的药物是( ) A.肠溶阿司匹林√ B.泼尼松 C.青霉素 D.奈普生 E.羟氯喹 解析：
患儿，7岁。自幼体健。1个月前曾患化脓性扁桃体炎。近2周来发热，最近1周游走性关节疼痛，心前区不适来院就诊。查体：急性病容，面色苍白，腕、肘关节肿、痛，周围皮肤红、热。听诊心尖部有Ⅲ级收缩期杂音。胸片示心脏轻度扩大。血化验结果白细胞总数增多，中性粒细胞比例增高。（分数：6.00） (1).最有可能的诊断为( ) A.病毒性心肌炎 B.败血症 C.风湿热√ D.儿童类风湿病 E.皮肤黏膜淋巴结综合征 解析： (2).该患儿住院后，应卧床休息( ) A.1周 B.2周 C.4周√ D.6周 E.8周 解析： (3).患儿突发心力衰竭，卧床时间需延长至( ) A.1—2周 B.3—4周 C.6—8周 D.心功能恢复后1—2周 E.心功能恢复后3—4周√ 解析： 某患儿被诊断为单纯性过敏性紫癜而收入院。（分数：4.00） (1).针对该患儿的诊断，护士要特别注意观察( ) A.有无大便带血 B.关节肿、痛时间 C.尿量改变 D.皮肤紫癜进展√ E.血压增高程度 解析： (2).入院4h后，患儿突然发生腹痛、恶心、呕吐，医生查体发现脐周轻度压痛，肠鸣音增强。护士重新修订护理计划为( ) A.注意观察脱水症状 B.必要时给止痛药物 C.定时腹部热敷 D.延长卧床休息时间 E.提供无渣流质食物√ 解析： 三、 B1型题(总题数：3，分数：12.00) A．胸部及四肢近端一过性、多发性充血疹B．下肢及臀部颜色紫红、形态各异皮疹C．体温下降同时全身粟粒样皮疹D．向心性分布的多形性皮疹E．躯干及四肢屈侧环形或半环形红斑（分数：4.00） (1).儿童类风湿病出现( ) A. √ B. C. D. E.