1、金标记：是指当前为临场医学界公认的、最可靠的诊断某种疾病的诊断方法。
2、酶的活力单位：是衡量酶活力大小的尺度，它反映在某一特定条件下，使酶促反应达到某一速度时所需要的酶量，而速度即指单位时间内反应物的变化量。
3、标准品：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，被用于校正仪器或用于评价一种测定方法的物质。
4、透光率/透光度T：透过光的强度It与入射光的强度Io之比，T=It/Io。
5、光的吸收定律（朗伯—比尔定律）：一束平行的单色光通过稀溶液时，溶液的吸光度与溶液浓度及液层厚度的乘积呈正比A=kcl。
6、显色剂：用来使被测物质显色、生成有色化合物的试剂。
7、原子吸收分光光度法：是基于光源发射的待测元素的特征光波通过样品蒸气时，被蒸气中待测元素基态原子吸收，由辐射光波强度的减弱程度以求得样品中待测元素含量的一种分析技术。
8、共振线：电子从基态跃迁能量最低的激发态（第一激发态）时要吸收一定频率的光，当它再回到基态时则发射出同样频率的光（谱线），这种谱线称为共振发射线。使电子从基态跃迁至第
一激发态所产生的吸收谱线称为共振吸收线。
9、峰值吸收系数Ko：如用Kv对波长λo或频率vo来作图，则在波长或频率处有一最大值，称Ko。
10、半宽度Δν：在峰值吸收系数的一半Ko/2处吸收线上两点间的距离。
11、中心频率νo：吸收系统极大值对应的频率称中心频率。
12、荧光光度分析法：有些物质的分子吸收能量后能发生荧光根据所发生荧光的特性及强度，对物质进行定性或定量分析的方法。13、荧光光谱：固定激发光的波长，用单色器将发射的荧光分光，记录每一波长下的荧光强度，以荧光强度为纵坐标，荧光波长为横坐标作图，就可得到物质的荧光光谱。
14、荧光效率Φ：表示物质产生荧光的能力，指激发态分子发射荧光的光子数与基态分子吸收激发光的光子数之比。
15、火焰光度法：是待测元素利用火焰作为激发光进行分析的方法，属原子发射光谱分析一种。
16、电泳技术：利用各种带电粒子电泳速度不同，对物质进行分离，然后对物质进行定性和定量的分析方法。
17、电泳迁移率：指在单位电场强度下，带电粒子的移动速度。
18、电渗作用：液体在电场中对于一个固体支持物的相对移动。
19、电化学分析技术：利用物质的电化学性质（电位、电流、电导或电量等）来测定物质含量的分析方法。
20、电位分析法：利用电极电位和浓度的关系来测定被测物质浓度的一种电化学分析法。21、梯度洗脱：按照事先设置的时间程序改变流动相的流速或组成来达到提高分离度改善分离结果的方法。
22、离心技术：根据颗粒在做匀速圆周运动是受到一个外向的离心力的作用，从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离的目的而发展起来的一种分离技术。
23、沉降速度：在离心力场的作用下，单位时间内物质的运动的距离。
24、层析法：层析法就是一种基于被分离物质的物理、化学和生物学特征的不同，使他们在某种基质中移动速度不同进行分离和分析的方法。
25、自动生化分析仪：是将生物化学分析过程中的取样、加试剂、去干扰物、混合、保温反应、自动监测、数据处理、打印报告以及实验后的清洗等步骤自动化的仪器。
26、酶活力：指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量，即通过测定酶促反应速率来测定。
27、工具酶：在酶学分析中，作为试剂用于测定化合物浓度或酶活力的酶。
28、同工酶：指催化相同的化学反应，但酶分子的分子组成、空间构象、理化性质及生物学性质不同的一组酶。
29、系统误差SE：在相同的条件下，多次测量同一量值时，误差的大小和正负保持不变，或在测量条件改变时按一定规律变化的误差。30、随机误差RE：在同一测试条件下，多次重复测量同一量值时，误差的大小和正负均以不可预知的方法变化着的误差。
31、准确度：是指测量值与真值符合的程度；大小主要取决于系统误差。
32、精密度：指同一标本在一定条件下多次重复测定，各结果间相互符合的程度；大小主要决定于随机误差。
33、决定性方法：指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，测定结果为确定值，与真值最接近。
34、参考方法：指标准度和精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少、系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可忽略不计，有适当的灵敏度、特异性、直线性及较宽的分析范围。
35、常规方法：指方法的性能指标符合临床或其他目的需要，有适当的分析范围而且经济实用。
36、回收-即分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。
37、诊断灵敏度Sen/敏感度/真阳性率TPR：指在患病者中用该诊断试验检查得到阳性结果的百分率；反映诊断试验正确识别患者的能力。=真阳性TP/（真阳性TP+假阴性FN）×100%。
38、诊断特异度Spe/特异性/真阴性率TNR：指在非患病者中应用该诊断试验获得阴性结果的百分比；反映诊断试验正确鉴别非患病者的能力。=真阴性TN/(真阴性TN+假阳性FP)×100%。
39、阳性预测值PPV/+PV：在诊断试验结果为阳性的人数中，真正患病者所占的百分率，即试验结果阳性者属于真病例的概率。真阳性TP/（真阳性TP+假阳性FP）×100%。
40、阴性预测值NPV/-PV：在诊断试验结果为阴性的人数中，非患病者所占的百分率，即试验结果阴性者属于非病例的概率。真阴性TN/（真阴性TN+假阴性FN）×100%。
41、似然比LR：验后概率较之验前概率的符合程度和变化方向取决于诊断试验的特性，表征这种特性的量化指标称似然比。42、分界值/阈值/临界值/鉴别值/指定值：指
划分诊断试验结果正常与异常的界值。
43、室内质量控制IQC：是由实验室的工作人
员采用一系列统计学的方法连续评价本实验
室测定工作是否稳定，判断检验报告是否可发
出的过程。
44、最佳条件下变异OCV：是指实验室在目前
条件下，该项目检测所能达到的最好精密度水
平。
45、常规条件下变异RCV：表示实验室在常规
条件下，该项目检测所能达到的精密度水平。
46、室间质量评价EQA是多家实验室分析同一
样本，由外部独立机构收集、分析和反馈实验
室上报的结果，以评价实验室常规工作质量的
过程。
47、能力比对分析PT：是EQA技术方案之一，
是通过实验室之间的比对判断实验室检测能
力的活动。
48、实验室认可：是由权威性的机构和专业组
织按照一定的标准对实验室或实验室工作人
员进行检查、考核，认可能够开展或胜任某些
工作, 并授予资格的过程。
49、光谱分析技术：是利用各种化学物质具有
吸收、发射、散射光谱谱系的特点对物质进行
定性和定量分析的技术。
50、沉降系数S：颗粒在单位离心力场中粒子
移动的速度。
51、吸收光谱曲线：让不同波长的单色光通过
一定浓度的溶液，测定该溶液对光的吸收程
度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，
由此得到的曲线就是吸收光谱曲线。
52、分配系数：在一定条件下，物质在固定相
和流动相达到平衡时，它在两相中的平均浓度
的比值。
53、电泳：在直流电场中，带电粒子向与其所
带电性相反地电极移动的现象。
54、色谱图：是记录仪的记录笔在等速移动的
记录纸上，记录检测器发射出的电压或电流信
号。
55、离心力：离心力场中的颗粒在一定角速度
下做圆周运动时都会受到一个向外的离心力
作用。
56、动脉化毛细血管血：是指在采血部位用45
度热水热敷，使血液循环加速，血管扩张，局
部毛细血管血液中的pco2,po2值与毛细血管
动脉端的血液中的数值接近，此过程称为毛细
血管动脉化。
57、相比：是指色谱柱中流动相与固定相体积
的比值。
58、抗凝：应用某些物理或化学方法除去或抑
制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称
为抗凝。
59、散射光谱分析法：是主要测定光线通过溶
液混悬颗粒后的光吸收或光散射程度的一类
定量方法。
60、分离度：是定量描述相邻两组分在层析柱
内分离情况的指标。
61、比吸光系数：浓度用百分数表示，液层厚
度用厘米表示，常熟为比吸光系数。
62、医学决定水平：所谓医学决定水平，就是
临床按照不同病情给予不同处理的指标阈值。
63、恒定系统误差：由于某种干扰物质引起的
是测定结果恒定的偏向一方，增高或减少的量
相同的误差，此误差的大小与被测物的浓度无
关，与干扰物的浓度有关。
64、比例系统误差：与被测物浓度有相同百分
比的误差，随被测物浓度的变化而成比例的变
化。
65、检出限：可理解为样品单次检测可达到的
检测相应量对应的分析物量。
66、ROC曲线（受试者工作特征曲线）：将连
续变量设定出多个不同的临界值，然后计算一
系列敏感度和特异度，再以敏感度为纵坐标，
（1-特异度）为横坐标绘制而成的曲线。
67、酶的转换率：单位时间内每个酶分子或每
一活性部位催化的反应次数。
68、终点法：就是借助某种酶作用，使被测定
物质定量的进行转变，在转化完成后，测定底
物，产物或辅酶的物质的变化量。
69、参考值与参考范围的概念：指对某一规定
人群进行抽样测定，由此得到的均数值及分布
范围，它只能作为它所代表人群的判断参考标
准。
70、酶偶联分析法：是应用过量、高度专一的
偶联工具酶，使被测酶反应能继续进行到某一
可直接，连续，简便，准确测定的阶段，间接
地测出第一个酶促反应中待测物的浓度或待
测酶的活力。
71、Trinder反应：过氧化物酶可将双氧水分解
为水和氧，同时使色素原性氧受体4-氨基安替
比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物。
72、火焰光度分析法：是待测元素利用火焰作
为激发光进行分析的方法，属于原子发射光谱
分析的一种。
73、沉降时间：是实际工作中，常常遇到要求
在已有的离心机上把某种溶质从溶液中全部
沉淀分离出来的问题，这就是必须首先知道用
多大转速与多长时间可达到目的。
74、零级反应期：在酶反应的最初阶段里，底
物常处于过量情况下，单位时间内[P]或[S]的变
化量反应速度是恒定的，这段时间称为零级反
应期。
75、一级反应期：随着反应时间的延长，底物
不断消耗，使酶不能被其饱和，[P]和[S]变化曲
线会逐趋平坦，即反应速度下降，这段时间称
为一级反应期。
76、相对保留值：也称为分离因子或选择因子，
是指相邻两种难分离组分的校正保留位的比
值。
1、紫外-可见光分光光度法在有机化合
物中的应用，多数都是建立在π→π*和n→π
*跃迁的基础上。π→π*跃迁与n→π*跃迁的
重要区别①摩尔吸光系数不同：π→π*摩尔
吸光系数在104左右，n→n*跃迁的摩尔吸光
系数小，在10-100范围②溶剂的极性对这两
种跃迁的吸收峰波长影响不同（溶剂效应）：
溶剂极性增加时，π→π*红移，n→π*蓝移。
2、原子吸收分光光度法与紫外可见分
光光度法的比较
本质：原子吸收/分子吸收；谱带：线状光谱/
带状光谱；光源：锐线光源/连续光源；被测
物状态：原子状态原子蒸气/分子状态、溶液；
仪器结构：分光系统在原子化器之后/分光系
统在比色杯之前；温度：高温/常温
3、离子选择性电极的一般作用原理：当电极
置于溶液中时，电极膜与溶液界面的离子交换
和扩散作用，改变两相界面原有电荷分布形成
双电层产生膜电位；因参比电极电位固定，所
以ISE只随溶液中待测离子活度或浓度变化而
变化。
4、简述聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点
1具有分子筛作用，分离效果好
2设备简单，样品用量少，不易扩散，分辨
率高
3不带电荷，几乎没有电渗作用
4可通过控制凝胶浓度来调整凝胶的孔径，
以适合不同分子量样品的分离
5化学稳定性好，由于分子结构中富含酰胺
基，聚丙烯酰胺凝胶是一种稳定的亲水胶体
6机械性强度好，有弹性，无色透明，易观
察，可用检测仪直接测定。
5、高效液相层析法HPLC与气相色谱法GC的
比较
a共同点：①色谱的基本理论一致②定性定量
原理完全一样③自动化程度高
b流动相差别：GC用气体做流动相，气体与样
品分子之间作用力可忽略，载气种类少性质相
近，改变载气对柱效和分离效率影响小；HPLC
以液体做流动相，液体分子与样品分子之间作
用力不可忽略，液体种类多性质差别大，是控
制柱效和分离效率的重要因素之一，使HPLC
除了固定相的选择外增加了一个可供选择的
重要操作参数
c固定相差别
d使用范围更广。GC一般分析沸点500c以下，
相对分子量少于450的物质，而对热稳定性差
易于分解变性及具有生理活性的物质都不能
用升温气化的方法分析。HPLC在室温或接近
室温的条件下工作，可分析沸点在500c以上
相对分子质量在450以上的有机物质，范围远
远超过GC。
E原理和结构差别。
7、如何选择内标物？内标法优缺点。
对内标物的要求是纯度高，结构与待测组分相
似。内标峰要与组分峰靠近但能很好分离，内
标物和被测组分的浓度相接近。
内标法的优点是定量准确测定条件不受操作
条件、进样量及不同操作者进学技术的影响。
缺点是选择合适的内标物较困难，每次需准确
称量内标物和样品增加了色谱分离条件的难
度。
8、何为层析技术？如何分类？
概念：基于物质的物理化学和生物学特征的不
同，在某种介质中的移动速度不同进而对物质
进行分离和分析的技术，即层析技术
分类：①按流动相和固定相的状态分类：液相
层析法、气相层析法②按层析法分离原理分
类：分配层析法、吸附层析法、亲和层析法、
凝胶层析法、离子交换层析法③按操作方式不
同分类：纸层析法、薄膜层析法、薄层层析法、
柱层析法
9、米氏常数在酶学分析中的意义？
km是酶极为重要的动力学参数。意义：1
鉴别酶的最适底物2由于存在km值不同而功
能相同的酶从而发现同工酶3判断细胞内酶的
活性是否受底物抑制4测定不同抑制剂对某个
酶km及Vmax的影响可以区别该抑制剂是竞
争性抑制剂还是非竞争性抑制剂5已知某个酶
的km，可以计算出某个底物浓度时。其反应
速度相当于最大速度的分数6利用工具酶来测
定体液中某一成分的浓度或某一种酶活力时，
可以根据衍生出来的公式计算工具酶所需要
的活力单位7设计适宜的底物浓度。
10、何谓酶活性测定的固定时间法和连续监测
法？各有何优缺点？
固定时间法：测定酶反应开始后某一时间内
产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初
速度的方法。优点：简单因最后测定产物时酶
反应已经终止，故分光光度计可无需保温装
置，显色剂的选择也可以不考虑对酶活力的影
响。缺点：因为不用预实验确定，无法了解酶
作用的这段时间内是否都是零级反应，难保证
测定结果的真实性。
连续监测法：酶反应过程中某一反应产物或
底物的浓度随时间的变化来求出酶反应速度
的方法。优点：可将多点的测定结果连接成线，
很容易找到成直线的区段，可以观察到是否偏
离零级反应可选择线性反应期来计算酶活力，
不需要终止反应。缺点：对仪器要求高，PH
和底物对反应有影响，仪器要恒温。
11、酶偶联测定中常用指示酶？常检测的指示
反应？
利用氧化还原酶反应原理连接到
NAD(P)+-NAD(P)H的反应后直接通过分光光度
法或其他方法测定NAD(P)H的变化量。1、
NAD(P)+或NAD(P)H偶联的脱氢酶及其指示反
应，这类方法基于NADH或NADPH在340nm
处有特征性的吸收峰而NAD+或NADP+在300
和400nm之间没有吸收峰。2、偶联H2O2的
工具酶及其指示反应。反应生成红色醌亚胺化
合物，在500nm处有最大吸收峰2H2O2+酚
+4-AAP→红色醌亚胺化合物+4H2O
12、简述标本溶血对临床生化测定的影响及防
止方法？
影响：使检测项目的结果分析变得更加复
杂，这是在超微量高精度和多指标的检测分析
中显然不可忽视。
方法：注射器和容器要干净，抽血时使用的
针头不要过小，抽血用力不要过大，不要较长
时间使用止血带，不要产生过多泡沫，抽血后
应取下针头再将血液注入容器，混匀抗凝剂时
用力不要过大等
13、溶血对生化试验的干扰机理：一是血细胞
中高浓度组分逸出，使测定结果增高，二是血
细胞成分进入血清后因化学反应而引起其他
物质的浓度改变，三是血红蛋白本身颜色对检
测的光学干扰。
14、系统误差SE
在相同的条件下，多次测量同一量值时，误差
的大小和正负保持不变，或在测量条件改变时
按一定规律变化的误差。①特点：为可测误差；
可纠正；具有单向性，没随机性，不服从正态
分布规律，通过增加测量次数不能消除。②原
因-方法/理论误差、仪器误差、试剂误差、操
作误差。③表现形式：a比例系统误差（线性
系统误差）-与被测物浓度有相同百分比的误
差，随被测物浓度的变化成比例变化；b恒定
系统误差-是由某种干扰物引起的、使测定结果
恒定的偏向一方、增高或减少的量相同的误
差。④纠正方法：减小方法的误差；做空白试
验；使用标准化的试剂和标准品；严格控制实
验条件；注意仪器校正。
15、随机误差RE
在同一测试条件下，多次重复测量同一量值
时，误差的大小和正负均以不可预知的方法变
化着的误差。①特点：数据呈正态分布；不可
预测不易控制；通过增加测量次数可减小；小
误差出现机会多，大误差出现机会较少；分析
步骤越多，此类误差出现机会越大。②原因：
偶然因素③纠正方法：检验人员严格按照操作
规程操作；多次取样；实验前认真检查仪器的
分析性能。
16、临床生化方法学分级的依据是什么？如何
进行分级？各自用途？
根据分析方法的准确度与精密度的不同，将
实验方法分为决定性方法，参考方法和常规方
法。决定性方法：用于发展及评价参考方法和
一级标准品。参考方法：应用于鉴定常规方法，
评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可
以被接受，也用于鉴定二级标准品，为质控血
清定值，评价商品试剂盒等。常规方法：作为
推荐方法。
17、以光度法为例，简述临床生化方法的建立
需考虑的因素
①方法建立原理的确定：根据技术原理和被测
物质的物理化学性质来确定其方法建立的原
理
②方法建立时条件选择：测定颜色产物的吸光
系数—λmax；测定方法适用的浓度范围—选
择直线段浓度范围进行稳定性试验；影响颜色
反应的因素—pH、杂志、反映的温度和时间、
试剂组分浓度
18、各个评价试验
①重复性试验。目的：检测候选方法的随机误
差（精密度）方法：批内重复性试验、天内重
复性试验、天间重复性试验
②回收试验。目的：所谓回收即分析方法正确
测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。
目的是检测候选方法的比例系统误差。方法：
将被分析物的纯品标准液加入病人样品中成
为分析样品院病人样品加入等量的无分析物
的溶剂作为基础样品然后用候选方法测定，两
者测定结果的差值为回收量
③干扰试验。目的：测定候选方法的恒定系统
误差。方法：将可能引起干扰的物质配成一定
浓度的溶液加到病人样品中称为分析样品，原
病人样品加入等量的无干扰物的溶剂作基础
样品然后用候选方法测定，两者之差即干扰值
表示该干扰物引起的误差
④方法比较试验。目的：检测候选方法的系统
分析误差。方法：对一组病人的标本用候选方
法和对比方法同时进行分析测定最后观察两
者之间的差异。数据统计的处理：方法作散
点图、进行直线回归分析、作相关分析、配对
资料t检验
19、何谓临床特异度、灵敏度？都有那些用
途？
临床特异度又称真阴性率，指在非患病者
中，用该诊断试验检查，得到阴性结果的百分
率。用途：1拟诊某患者有某疾病的概率较大
时，便于确诊2拟诊疾病严重且疗效预后均不
好的疾病，以防误诊，尽早解除病人的压力3
拟诊疾病严重且根治方法有较大损害时，需确
诊以免造成患者不必要的损害。
临床灵敏度又称真阳性率，指在患病者中，
用该诊断试验检查，得到阳性结果的百分率。
用途：1拟诊为严重但疗效好的疾病，以防漏
诊2拟诊为有一定治疗效果的恶性肿瘤，以便
早期确诊，及时治疗3存在多种可能疾病的诊
断，可排除某一诊断4普查或定期健康体检能
筛选某一疾病以防漏诊。
20、临床诊断试验技术性能评价和诊断性能评
价的区别？
技术性能评价是评价方法或技术的精密度、准
确性、特异性、分析范围等即方法学评价，其
解决的是方法本身的问题；诊断性能评价是基
于有关流行病学的调查为基础，对某种疾病的
诊断方法进行评价的临床试验。即评价该诊断
试验的临床灵敏度、临床特异性、预测值、似
然比等。
21、全面质量控制
全面质量控制主要包括一）标本分析前的质量
保证：主要内容为①检验人员的培训；实验室
的设置和工作环境；实验仪器的质量保证；检
测方法的选择和评价；实际和标准品的选择与
评价；病人准备；标本的采集处理贮存和转运；
实验室用水。二）分析中的质量控制：主要内
容建立标准化的操作规程；室内质控和结果
分析；登记和填发报表。三）分析后的质量评
估：主要内容送发实验报告；室内质控的数
据管理；参加室间质量评价；病人投诉的调查；
临床信息反馈。
22、室内、室间质量控制的概念、目的
室内质量控制IQC：是由实验室的工作人员采
用一系列统计学的方法连续评价本实验室测
定工作是否稳定，判断检验报告是否可发出的
过程。目的-检测、控制本实验室测定工作的精
密度（监测测定过程是否稳定）并监测其准确
度的改变，以提高常规检测结果的一致性。
室间质量评价EQA：是多家实验室分析同一样
本
目的：通过实验室间的对比，观察各实验室测
定结果的准确性，一致性，并采取一定措施使
各实验室结果趋向一致，，为实验室认可提供
客观依据。
23、简述ROC曲线的制作方法及其主要作用？
ROC曲线的绘制方法：对疾病组和参照组测
定结果进行分析、确定测定值的上下限、组距
及截断点，按选择的组距间隔列累计频数分布
表，计算出所有截断点的敏感性、特异性，以
敏感性为纵坐标代表阳性率，（1-特异性）为
横坐标作图。
ROC曲线的主要作用:选择最佳的诊断界限
值，两种或两种以上不同诊断试验对同种疾病
诊断可靠性的比较。
24、Monica质控图的优点
①制作简单，应用方便②形象直观，又容易
理解和掌握。③Monica质控图采用统一CCV
作为允许误差来确定警告线和最大允许线的
界限值，能将临床生化常规项目的室内控制与
室间质评有机地联系起来，从室内质控图上，
即可基本预测参加室间质评可能获得的变异
指数得分情况，更能充分发挥室内控制与室间
质控二者之间相互补充，相互促进的作用。
1光谱分析技术：指利用各种化学物质（包括
原子、基团、分子及高分子化合物）具有吸收、
发射或散射光谱谱系的特点，对物质进行定性
或定量分析的技术。①分类：根据光谱谱系特
征分为吸收光谱分析、发射光谱分析和散射光
谱分析。②特点：灵敏度高、精密度和准确度
高、选择性较高、仪器设备简单、操作易掌握、
用途广泛等。
2光的本质是不连续的微粒性和连续的波动性
矛盾的对立和统一，即光的波粒二象性。
3可采用钨灯做可见光分光光度计的光源
（350-2500nm）；氢灯可作为紫外分光光度计
的光源（185-400nm）。
4分子能级是电子能级、振动能级和转动能级
之和。
5吸收光谱曲线（吸收光谱）：当一定光源所产
生的电磁波通过液态、气态或固态物质时，物
质的原子或分子对电磁波进行选择性吸收，从
而产生原子吸收光谱或分子吸收光谱；被吸收
的光谱称为该物质的吸收光谱。根据其形状和
λmax可进行定性分析；定量分析用λmax作
测定的波长。
6跃迁所需能量σ→σ*＞n→σ*＞π→π*＞
n→π*。紫外及可见光分光光度法在有机化合
物中的应用，多数都是建立在π→π*和n→π
*跃迁的基础上。π→π*跃迁与n→π*跃迁的
重要区别①摩尔吸光系数不同：π→π*摩尔
吸光系数在104左右，n→n*跃迁的摩尔吸光
系数小，在10-100范围②溶剂的极性对这两
种跃迁的吸收峰波长影响不同（溶剂效应）：
溶剂极性增加时，π→π*红移，n→π*蓝移。
7透光率/透光度T：透过光的强度It与入射光
的强度Io之比，T=It/Io。
光的吸收定律（朗伯—比尔定律）：一束平行
的单色光通过稀溶液时，溶液的吸光度与溶液
浓度及液层厚度的乘积呈正比A=kcl。
8分光光度计都是由光源、单色器、比色杯、
检测器和显示器五大部件组成。
9紫外可见分光光度法常用的单组分定量方法
有吸光系数法、标准曲线法和标准对比法。多
组分定量方法有解联立方程法和双波长分光
光度法。
10显色剂：用来使被测物质显色、生成有色化
合物的试剂。选择原则-入射光波长吸收最大干
扰最小；吸光度0.2-0.8；狭缝宽度为吸收峰半
宽度的1/10。显色反应:将试样中被测组分转变
为在一定波长范围内有吸收或吸收加大的有
色化合物的化学反应。
11原子吸收分光光度法：是基于光源发射的待
测元素的特征光波通过样品蒸气时，被蒸气中
待测元素基态原子吸收，由辐射光波强度的减
弱程度以求得样品中待测元素含量的一种分
析技术。
12共振线：电子从基态跃迁能量最低的激发态
（第一激发态）时要吸收一定频率的光，当它
再回到基态时则发射出同样频率的光（谱线），
这种谱线称为共振发射线。使电子从基态跃迁
至第一激发态所产生的吸收谱线称为共振吸
收线。共振线特点-具特征性、较灵敏。
13峰值吸收系数Ko：如用Kv对波长λo或频
率vo来作图，则在波长或频率处有一最大值，
称Ko。半宽度Δν：在峰值吸收系数的一半
Ko/2处吸收线上两点间的距离。中心频率νo：
吸收系统极大值对应的频率称中心频率。
14原子吸收分析中，发射线宽度主要受热变宽
和自然变宽影响；吸收线宽度主要受热变宽和
压力变宽影响。
15原子吸收分光光度计由光源、原子化器、分
光系统和检测系统四个部分组成。原子吸收定
量分析中，常用的方法是标准曲线法和标准加
入法。
16荧光光度分析法：有些物质的分子吸收能量
后能发生荧光根据所发生荧光的特性及强度，
对物质进行定性或定量分析的方法。
17荧光光谱：固定激发光的波长，用单色器将
发射的荧光分光，记录每一波长下的荧光强
度，以荧光强度为纵坐标，荧光波长为横坐标
作图，就可得到物质的荧光光谱。激发光谱和
荧光光谱的关系是相对称呈镜像关系。
18荧光效率Φ：表示物质产生荧光的能力，指
激发态分子发射荧光的光子数与基态分子吸
收激发光的光子数之比。当Io一定且浓度很稀
时，荧光强度与荧光物质浓度成正比。
19荧光光度法定量分析中，常用的方法是标准
对比法和标准曲线法。
20火焰光度法：是待测元素利用火焰作为激发
光进行分析的方法，属原子发射光谱分析一
种。定量分析依据-在一定条件下，溶液的浓度
和发射光的强度成正比。定量分析方法有标准
曲线法和标准加入法。
21比浊法的突出问题是颗粒的大小对浊度和
浊度曲线有较大影响。因此，在比浊法中必须
力求做到：混悬液中颗粒的大小应尽可能相
同，并易重复；标准管和测定管中颗粒大小也
应力求一致。混悬液在一定时间内，至少在10
分钟内应维持稳定，也就是颗粒应该不易相互
聚集、变大变粗。
1电泳技术：利用各种带电粒子电泳速度不同，
对物质进行分离，然后对物质进行定性和定量
的分析方法。①分类：按照电场强度的不同，
可将电泳技术分为常压电泳和高压电泳。按照
电泳媒介不同，可将电泳技术分为自由电泳和
区带电泳。按分离目的不同，分为分析电泳和
制备电泳。按支持物的装置形式不同，分为水
平电泳和垂直电泳。按缓冲液pH是否均一分
为连续和不连续pH电泳。（区带电泳根据支持
介质的不同又分为滤纸电泳、醋酸纤维素薄膜
电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳）
②特点：凡是带电物质均可应用某一电泳技术
分离，并可进行定性定量分析；分辨率高；可
在常温下进行；样品用量少；操作省时简便；
设备简单。
2电泳迁移率μ指在单位电场强度下，带电粒
子的移动速度；是物质的特征常数；μ=V/E。
①一般来说，粒子所带的净电荷愈多，粒子的
直径愈小、愈接近球形，则在电场中的电泳速
度愈快。②影响因素：与所带电荷成正比，与
其半径及介质粘度系数成反比；还与电场强
度，电泳缓冲液的化学组成、pH值、离子强
度，支持介质的电渗作用和吸附作用，分子的
性质和形状，蒸发有关。
3电渗作用：液体在电场中对于一个固体支持
物的相对移动。
4聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点：具有分子筛作
用，分离效果好；样品用量少，设备简单，不
易扩散，分辨率高；不带电荷，几乎无电渗作
用；可通过控制凝胶浓度控制调节凝胶的孔
径；化学稳定性好；机械强度好，有弹性，无
色透明易观察，可用检测仪直接测定。
5聚丙烯酰胺凝胶的孔径在很大程度上由凝胶
总浓度T和交联度C决定。
6不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率高是因为
它具有浓缩、电荷和分子筛三种效应。
7等电聚焦电泳的优点：分辨率很高（等电点
差0.01pH蛋白质分开）；区带清晰无拖尾；蛋
白质可保持原有活性，分离速度快；电泳结束
后可直接测定蛋白质的等电点。
1电化学分析技术：利用物质的电化学性质（电
位、电流、电导或电量等）来测定物质含量的
分析方法。
2电位分析法：利用电极电位和浓度的关系来
测定被测物质浓度的一种电化学分析法。
3电化学电池两个必备条件-两个电极和电解
质溶液。指示电极是电位随待测离子浓度而变
化，能指示待测离子的浓度的电极。参比电极
是电位恒定，不受试液组成变化的影响的电
极。
4离子选择性电极的一般作用原理：当电极置于溶液中时，电极膜与溶液界面的离子交换和扩散作用，改变两相界面原有电荷分布形成双电层产生膜电位；因参比电极电位固定，所以ISE只随溶液中待测离子活度或浓度变化而变化。
5离子选择性电极分类：分为基本（原）电极和敏化电极。前者分为晶体（膜）电极（分为均相膜电极和非均相膜电极）和非晶体(膜)电极（刚性基质电极和流动载体电极），后者分为气敏电极和酶电极。
6玻璃膜电极属于刚性基质电极。
7离子选择电极分析法的分析仪器：一般由信号发生器，检测器，信号处理器和显示器四部分组成。
7离子选择电极分析法的分析方法有标准曲线法、标准比较法、标准加入法。
1层析技术原理：层析是利用待分离的样品组分在两相中分配的差异而实现分离的；这个过程可以形象地看作是固定相对样品中各组分随流动相移动所产生的流动阻力不同，阻力小的组分跑得快，阻力大的组分跑得慢。经过一段距离后，各组分就可以分开了。
2层析技术分类：按分离原理分为分配层析法、吸附层析法、离子交换、凝胶、亲和层析法；按固定相和流动相所处状态分为气液、气固、液液、液固层析法；按操作形式不同分为纸层析法、薄膜、薄层、柱层析法。
3色谱图中的重要参数：峰高H和区域宽度（峰高H-定量分析依据）；峰宽W/Y；半峰宽W1/2/Y1/2；标准偏差σ；保留值-描述在层析图上位置，定性依据，包括死时间tM、保留时间tR、校正保留时间tR、死体积VRo、保留体积VR、校正保留体积VR`。
4色谱分离中参数：相对保留值α；分配系数K；分配比k`；相比β；塔板数N；分离度R。（k`决定洗出峰位置，分离度与理论塔板数N 的平方成正比；α决定洗出峰位置）
5高效液相层析法HPLC与经典液相色谱法比较异同：同-色谱的基本理论一致；定性定量原理一致；均可用计算机控制色谱操作条件和色谱数据的处理程序，自动化程度高。经典与高效异-原理和结构-常压或减压，高压；流动相区别-气体，液体；固定相-有机物组成的液体固定相，固体吸附剂；适用范围-500℃以下相对分子质量＜450，广；填料颗粒-大，小；柱效-低，高；分析速度-慢，快；色谱柱-只可用一次，可重复使用；在线检测-不能，能。
6梯度洗脱：按照事先设置的时间程序改变流动相的流速或组成来达到提高分离度改善分离结果的方法。包括流量和溶剂梯度洗脱。
7色谱的定量分析①理论依据-在一定操作条件下，被分析物质的质量mi与检测器上产生的响应信号（色谱图上表现为峰面积Ai或峰高hi）成正比（校正因子f,m=fA）。②方法有归一化法；外标法/标准样校正法/标准曲线法；内标法；内加标准法；还有内标标准曲线法、转化定量法、收集定量法等。
1离心技术：根据颗粒在做匀速圆周运动是受到一个外向的离心力的作用，从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离的目的而发展起来的一种分离技术。离心力Fc=mω2r。
2只要相对离心力RCF不变，一个样品可以在不同离心机上获得相同的结果。
3沉降系数S物理意义-颗粒在离心力作用下从静止状态达到极限速度所经过的时间。当生物高分子或亚细胞结构的化学组成或分子量不了解时，常用沉降系数来描述其结构基础，如1.6S、23S和70S核蛋白体RNA等。
4沉降速度：在离心力场的作用下，单位时间内物质的运动的距离。
5离心方法可分为三类：平衡离心法、等密度离心法、经典式沉降平衡离心法。
6差速离心法对时间有严格要求。
1自动生化分析仪：是将生物化学分析过程中的取样、加试剂、去干扰物、混合、保温反应、自动监测、数据处理、打印报告以及实验后的清洗等步骤自动化的仪器。
2自动生化分析仪分类：根据仪器反应装置结构不同，可分为连续流动式、离心式、分立式和干片式。根据仪器的功能及复杂程度，可分为小型、中型、大型及超大型。根据同时可测定项目数量不同，可分为单通道和多通道。根据自动化程度不同，可分为全自动化和半自动化。
3连续流动式自动生化分析仪/管道式分析仪：第一代自动分析仪；结构为样品盘、比例泵、混合器、透析器、恒温器、检测装置等。
4自动生化分析仪常用的分光系统主要有前分光和后分光。全自动生化分析仪多采用后分光。分光装置有干涉滤光片或光栅分光两类。自动生化分析仪多用37℃。
5自动生化分析仪常用分析方法：①终点分析法（平衡法）包括一点终点法、两点终点法/固定时间法、双波长法。②连续监测法：具体方法有两点速率法、多点速率法（最小二阶乘法、多点法、回归法、带速率时间法）。③比浊测定法④均相酶免疫测定法。
6自动生化分析仪参数设置包括样品与试剂量、测定方法、校正方法、反应时间、测定波长、控制因素等。
1米氏方程：V=Vmax[S]/(Km+[S])；米氏常数Km=(k2+k3)/k1。
2 Km是酶极为重要动力学参数，物理意义指ES复合物消失速度(k2+k3)与形成速度k1之比；其数值为酶促反应达到最大反应速度一半时的底物浓度，即V=Vmax/2时，[S]=Km。
（1）意义：①鉴别酶的最适底物：Km可表示酶与作用底物的亲和力-负相关②存在Km值不同而功能相同的酶，从而发现同工酶③判断在细胞内酶的活性是否受底物抑制④测定不同抑制剂对某个酶Km及Vmax的影响，可以区别该抑制剂是竞争性抑制剂还是非竞争性抑制剂⑤已知某个酶的Km，可计算出某一底物浓度时，其反应速度V相当于Vmax的分数⑥利用工具酶来测定体液中某一成分浓度或某一种酶的活力时，可依据米氏方程计算工具酶所需活力单位⑦设计适宜的底物浓度。（2）Km的测定—常用双倒数作图法：1/V=Km/Vmax×1/[S]+1/Vmax；在1/V轴上截距是1/Vmax，在1/[S]轴上截距是-1/Km，斜率Km/Vmax。
3 Vmax不是酶的特征常数。当[S]无限大时，Vmax=k3[E0]，可得k3= Vmax/[E0]；k3(酶的转换率/转换数)为一级速度常数，表示单位时间内每个酶分子或每一活性部位催化的反应次数。单底物反应中，用kcat表示，越大催化效率越高，一般在1-104/s范围。
1酶活力：指在规定条件下单位时间内底物的
减少量或产物的生成量，即通过测定酶促反应
速率来测定。
2酶活力单位：是衡量酶活力大小的尺度，它
反映在某一个特定的条件下，使酶促反应达到
某一速度时所需要的酶量，而速度即指单位时
间内反应物的变化量。三种表达-惯用单位、国
际单位和katal单位。（1IU指在规定条件下每
分钟催化1umol底物转化成产物所需要的酶
量；1katal指规定条件下每秒钟使1mol底物转
化为产物所需的酶量=60×106IU）
3酶促反应时间进程：两期-零级和一级反应
期；三阶段-延滞期、线性期、偏离线性期。酶
浓度[E]与反应产物浓度[P]或底物浓度[S]的变
化成正比。[E]越大，线性范围越短；如果[E]
相同，[E]越小线性反应期也越短。
4酶活力测定方法：原则-在零级反应期测定即
v=Vm=常数，或-[S]或[P]与反应时间t成正比；
反应速度与酶量呈线性关系。按照反应时间可
分为定时法和连续监测法。
5工具酶：在酶学分析中，作为试剂用于测定
化合物浓度或酶活力的酶。常用的指示反应：
NAD(P)+或NAD(P)H偶联的脱氢酶及其指示反
应，偶联H2O2的工具酶及其指示反应。
6酶偶联分析法-用过量、高度专一的偶联工具
酶，使被测酶反应能继续进行到某一直接、连
续、简便、准确测定的阶段，间接地测出第一
个酶促反应中待测物的浓度或待测酶的活力。
7应用酶作为工具可对酶的底物、辅酶、激活
剂或抑制剂进行定量分析，常用方法有终点法
和动力学法。
8酶活性测定最适条件选择：底物、pH值、温
度、辅助因子、样品、空白和对照等。
1同工酶：指催化相同的化学反应，但酶分子
的分子组成、空间构象、理化性质及生物学性
质不同的一组酶。
2同工酶分离鉴定常用方法-电泳法、层析法、
免疫法、动力学法、热失活法。
常用的电泳法有聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚
焦电泳、琼脂糖凝胶电泳、醋酸纤维素薄膜电
泳。电泳测定步骤-区带分离、酶带显示、区带
定量。
1临床生物化学检验常用标本有血液、尿液、
脑脊液、胸水、腹水、浆膜腔积液等。
2溶血对生化试验的干扰机理：一是血细胞中
高浓度组分逸出，使测定结果增高，二是血细
胞成分进入血清后因化学反应而引起其他物
质的浓度改变，三是血红蛋白本身颜色对检测
的光学干扰。
3血清与血浆区别主要在于血清不含有纤维蛋
白原。
4常用防腐剂-浓盐酸、甲苯、冰醋酸和麝香草
酚。
1系统误差SE：在相同的条件下，多次测量同
一量值时，误差的大小和正负保持不变，或在
测量条件改变时按一定规律变化的误差。①特
点：为可测误差；可纠正；具有单向性，没随
机性，不服从正态分布规律，通过增加测量次
数不能消除。②原因-方法/理论误差、仪器误
差、试剂误差、操作误差。③表现形式：a比
例系统误差（线性系统误差）-与被测物浓度有
相同百分比的误差，随被测物浓度的变化成比
例变化；b恒定系统误差-是由某种干扰物引起
的、使测定结果恒定的偏向一方、增高或减少
的量相同的误差。④纠正方法：减小方法的误
差；做空白试验；使用标准化的试剂和标准品；
严格控制实验条件；注意仪器校正。
2随机误差RE：在同一测试条件下，多次重复
测量同一量值时，误差的大小和正负均以不可
预知的方法变化着的误差。①特点：数据呈正
态分布；不可预测不易控制；通过增加测量次
数可减小；小误差出现机会多，大误差出现机
会较少；分析步骤越多，此类误差出现机会越
大。②原因：偶然因素③纠正方法：检验人员
严格按照操作规程操作；多次取样；实验前认
真检查仪器的分析性能。
3准确度：是指测量值与真值符合的程度；大
小主要取决于系统误差。精密度：指同一标本
在一定条件下多次重复测定，各结果间相互符
合的程度；大小主要决定于随机误差。
4根据分析方法的准确度与精密度的不同，将
临床生化实验方法分为决定性方法、参考方
法、常规方法三级。①决定性方法：指准确度
最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有
发现产生误差的原因或在某些方面不够明确
的方法，测定结果为确定值，与真值最接近。
用于发展及评价参考方法和一级标准品。②参
考方法：指标准度和精密度已经充分证实的分
析方法，干扰因素少、系统误差很小，与重复
测定的随机误差相比可忽略不计，有适当的灵
敏度、特异性、直线性及较宽的分析范围。主
要应用于鉴定常规方法，评价其误差大小、干
扰因素，并决定其是否可以被接受；也可用于
鉴定二级标准品；也可用于评价商品试剂盒
等。③常规方法：指方法的性能指标符合临床
或其他目的需要，有适当的分析范围而且经济
实用。可作为推荐方法。
5标准品/参考物分级①一级标准品（原级参考
物）由决定性方法确定；用于发展及评价参考
方法，校正决定性方法，并为二级标准品定值。
②二级标准品（次级标准品）由参考方法定值
或用与一级标准品比较而确定；用于常规方法
的标化，制工作标准，为控制物定值。③控制
物：用参考方法定值；用于质量控制。
6回收-即分析方法正确测定加入常规分析样
品中的纯分析物的能力。回收试验目的：检测
候选方法的比例系统误差，衡量其准确度。
7方法比较试验目的：检测候选方法的系统分
析误差，包括比例和恒定系统误差。设计：对
一组（40-100例）病人的标本用候选方法和对
比方法同时进行分析测定，最后观察两者之间
的差异。统计和分析：做散点图；进行直线
回归分析；作相关分析；配对资料t检验。
1金标准/确诊实验：指当前为临床医学界公认
的、最可靠的诊断某种疾病的诊断方法。
2诊断灵敏度Sen/敏感度/真阳性率TPR：指在
患病者中用该诊断试验检查得到阳性结果的
百分率；反映诊断试验正确识别患者的能力。
=真阳性TP/（真阳性TP+假阴性FN）×100%。
诊断特异度Spe/特异性/真阴性率TNR：指在
非患病者中应用该诊断试验获得阴性结果的
百分比；反映诊断试验正确鉴别非患病者的能
力。=真阴性TN/(真阴性TN+假阳性FP)×
100%。
3阳性预测值PPV/+PV：在诊断试验结果为阳
性的人数中，真正患病者所占的百分率，即试
验结果阳性者属于真病例的概率。真阳性TP/
（真阳性TP+假阳性FP）×100%。流行率越高，
阳性预测值越高；当流行率一定诊断试验特异
性越高，阳性预测值越准确。
阴性预测值NPV/-PV：在诊断试验结果为阴性
的人数中，非患病者所占的百分率，即试验结
果阴性者属于非病例的概率。真阴性TN/（真
阴性TN+假阴性FN）×100%。当流行率一定
诊断试验敏感性越高，则阴性预测值越高。
4似然比LR：验后概率较之验前概率的符合程
度和变化方向取决于诊断试验的特性，表征这
种特性的量化指标称似然比。
5分界值/阈值/临界值/鉴别值/指定值：指划分
诊断试验结果正常与异常的界值。
1全面质量控制主要包括标本分析前的质量保
证、分析中的质量控制和分析后的质量评估三
个主要过程的质控。
2室内质量控制IQC：是由实验室的工作人员
采用一系列统计学的方法连续评价本实验室
测定工作是否稳定，判断检验报告是否可发出
的过程。目的-检测、控制本实验室测定工作的
精密度（监测测定过程是否稳定）并监测其准
确度的改变，以提高常规检测结果的一致性。
3质控品应具有的特征：人血清基质,或尽可能
与人血清基质一致；无传染性；添加剂的数量
少且尽可能纯；成分分布均匀，瓶间差小；冻
干品复溶后成分稳定；实验室的有效期应在一
年以上；合理的成本。
4室内质量控制的主要方法：将质控血清随机
插入日常检验标本中一起测定，将质控血清的
测定结果点在质控图上，当点子落在允许误差
范围之内，一般意味着测定结果良好；若点子
落在允许误差范围之外，提示测定结果有问
题。
5最佳条件下变异OCV：是指实验室在目前条
件下，该项目检测所能达到的最好精密度水
平。常规条件下变异RCV：表示实验室在常规
条件下，该项目检测所能达到的精密度水平。
6质控图：方法-在纵坐标上标出X、X±2S、X
±3S的标志,并将其具体值标在左侧标尺上；
画出均值线(X)、警告线(X±2S)、失控线(X±3S)；
每天将该批号的质控血清按有关规定复溶，然
后随同各项目病人标本的测定同时测定一份，
将测定值点在图上的相应位置，直线将该点与
前一天的点连接；月底计算当月全部质量控制
血清检测结果的X、S和CV，并进行图形分析
和小结，将质量控制图存入质量控制资料档
案。
7质控图异常表现：曲线漂移、趋势性变化、
精密度的变化、失控。
8室间质量评价EQA是多家实验室分析同一样
本，由外部独立机构收集、分析和反馈实验室
上报的结果，以评价实验室常规工作质量的过
程。
9能力比对分析PT：是EQA技术方案之一，是
通过实验室之间的比对判断实验室检测能力
的活动。
10实验室认可：是由权威性的机构和专业组织
按照一定的标准对实验室或实验室工作人员
进行检查、考核，认可能够开展或胜任某些工
作, 并授予资格的过程。
1.方法比较实验如何设计？结果如何进行统计
和分析？
目的：检测候选方法的系统分析误差，包括比
例和恒定系统误差。设计：对40-100例病人
的标本用候选方法和对比方法同时进行分析
测定，最后观察两者之间的差异。统计和分析：
①做散点图—提供研究的初步结果②进行直
线回归分析 y=a+bx；X—对比方法测定结
果， y—候方法的后升值，回归直线的截距a
表恒定误差，回归系数b比例误差③作相关分
析 2.酶偶联测定法中，常用的指示酶有哪些？
常监测的指示反应是什么
乳酸脱氢酶LDH、过氧化物酶POD，NAD(P)+
或NAD(P)H偶联的脱氢酶及其指示反应；偶联
H2O2的工具酶及其指示反应 3.什么是层析
法？层析法是如何分类的
是一种基于被分离物质的物理、化学及生物学
特性的不同，是它们在某种基质中移动速度不
同而进行分离和分析的方法。按分离原理分为
分配层析法、吸附层析法、离子交换、凝胶、
亲和层析法；按固定相和流动相所处状态分为
气液、气固、液液、液固层析法；按操作形式
不同分为纸层析法、薄膜、薄层、柱层析法
4.何谓光谱分析技术？可分哪几类？他有什么
特点？
是指利用各种化学物质（包括原子、基团、分
子以及高分子化合物）具有吸收、发射或散射
光谱浦西的特点，对物质进行定性或定量分析
的技术。
分为吸收光谱分析、发射光谱分析和散射光谱
分析。
灵敏度高、精密度和准确度高、选择性较高、
仪器设备简单、操作易掌握、用途广泛
5.什么是内标法？如何选择内标物
分析时准确称取试样W内含待测组分mi，精
确加入一定量某纯物质ms做内标物，进样并
测出峰面积Ai和As，按公式计算组分i的百分
含量。纯度要高，结构与待测组分相似，内
标峰要与组分峰靠近但能很好分离，内标物和
被测组分的浓度相接近 6.影响荧光强度的因
素有哪些
（1）溶剂：增大溶剂的极性将使电子跃迁的
能量降低，荧光增强（2）溶液的ph值：当荧
光物质本身为弱酸或弱碱时，溶液ph值改变
将对溶液的荧光强度产生较大影响（3）温度：
温度升高，荧光强度降低
7.根据反应时间不同，目前酶活性的测定方法
分哪两类？解释两类方法并对两类方法做出
评价
定时法和连续监测法，定时法是测定酶反应开
始后某一时间内产物或底物浓度的总变化量
来求取酶反应初速度的方法，连续监测法指连
续测定酶反应过程中某一反应产物或底物的
浓度随时间的变化来求出酶反应速度的方法
定时法评价；优点是简单，无需保温装置，显
色剂的选择也可不考虑对酶活力的影响，缺点
是如果不用预实验确定，无法了解酶作用的这
段时间内是否都是零级反应：连续监测法评
价；优点是可动态观测酶促反应进程，容易找
到线性期，结果准确可靠，适合自动化分析仪，
缺点是要求精确控制温度ph值和底物浓度等
反应条件，仪器需要具有恒温装置及自动监测
功能 8.自动生化分析仪常用的分光系统主要
有哪两种？各有何优缺点？目前多采用哪
种？
前分光和后分光。前分光的光路是光源→
分光元件→样品→检测器，前分光一般不可以
进行不同波长项目的不间断检测，通常只能单
项一次测完后，再测第二项：后分光的光路
是光源→样品→分光元件→检测器，即光源光
线直接透过样品，通过光栅，再进行吸光度的
检测。使用后分光技术，可以在同一体系中测
定多种成分。无需移动仪器的任何部分，噪声
低，分析精确度和准确度高，故障少。后分光
可以连续不断检测不同波长的反应，但光强度
过高时可引起血清胆红素降低目前全自动
生化分析仪多采用后分光，半自动生化分析仪
也有少数采用后分光原理
9.试述聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点
1.具有分子筛作用；
2.样品用量少，设备简
单；3.不带电荷，几乎无电渗作用；4.可通过
控制凝胶浓度控制调节凝胶的孔径；5.化学性
质好；6.机械强度好 10.何谓roc曲线？如何绘
制
即受试者工作特征曲线，通过将连续变量设定
出多个不同的临界值，从而计算出一系列敏感
度和特异度，再以敏感度为纵坐标，1-特异度
为横坐标绘制而成
绘制方法：根据专业知识，对疾病组和参照组
测定的结果进行分析，确定测定值的上下限，
组距及截断点，按选择的组距间隔列累积频数
分布表，分别计算所有截断点的敏感性，特异
性和假阴性率（1-spe），以sen为纵坐标，代
表真阴性率，以（1-spe）为横坐标表假阳性率，
绘图成Roc曲线
11.影响朗伯比尔定律的因素有哪些
成立条件：1.入射光为单色光。2.稀溶液影响
因素：1.非单色光的影响。2.溶液本身的物理
化学因素影响。①溶液浓度影响②介质不均影
响③溶液发生化学变化
12.何谓荧光效率？要发生荧光，分子必须具有
怎样的荧光效率
荧光效率：物质产生荧光的能力，指激发态物
质发射荧光的光子数与基态分子吸收激发光
的光子数之比。分子必须有较高的荧光效率才
可发出荧光。
13.高效液相色谱法定量测定主要有哪些方法
归一化法，内标法，外标法，内加标准法
14.全面质量控制过程分那三个阶段？简述其
主要内容
标本分析前的质量保证、分析中的质量控制、
分析后的质量评估
分析前；检验人员的培训、实验室的设置和工
作环境、实验仪器的质量保证、检测方法的选
择和评价、试剂和标准品的选择和评价、病人
准备、标本的采集、处理、储存与转运、实验
室用水等：分析中；建立标准化的操作规程、
室内质控和结果分析、登记和填发报告：分析
后；发送实验报告、室内质控的数据管理、参
加室间质量评价、病人投诉的调查、临床信息
反馈 15.试述π—π和n—π跃迁重要区别
1.摩尔吸光系数不同：π→π*摩尔吸光系数在
104左右，n→n*跃迁的摩尔吸光系数少2.溶
剂的极性对这两种跃迁的吸收峰波长影响不
同（溶剂效应）。溶剂极性增加时，π→π*红
移，n→π*蓝移。 16.电子跃迁类型有哪几类？
为何主要是那两种？
原因：这两种跃迁所需能量较小，吸收的波长
可用紫外及可见分光光度计测定。 17.何谓电
泳迁移率？影响因素有哪些
在单位电场强度下，带电粒子的移动速度称
为电泳迁移率
1.电场强度（常压 2-10V/cm，高压
20-200V/cm）；2.电泳缓冲液①缓冲液的化学组
成②PH4.5-9.0③离子强度；3.支持介质(电渗作
用，吸附作用)；4.分子的性质和形状；5.蒸发
18.比较原子吸收分光光度法和紫外可见分光
光度法比较原子吸收可见紫外本质原子吸
收分子吸收谱带窄带谱线吸收宽带吸收光
源锐线光源连续光源被测物状态
原子蒸气分子状态渗液
仪器结构分光系统在原子化器之后分光系统
在比色杯前测定温度高温常温
19.简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白
质的基本原理
采用两种或两种以上不同凝胶浓度或缓冲液
PH，利用样品的浓缩效应，电泳分离的电荷效
应和分子筛效应进行分离。 20.什么是自动生
化分析仪？按反应装置的不同将其分为哪几
类？哪类最常用
自动生化分析仪是将生物化学分析过程中
的取样、加试剂、去干扰、混合、保温反应、
自动检测、结果计算、数据处理和打印报告，
以及实验后的清洗等步骤自动化的仪器。
根据仪器反应装置结构不同，可分为连续流动
式、离心式（严格讲也属于分立式范畴）、分
立式和干片式。根据仪器的功能及复杂程度，
可分为小型、中型、大型及超大型。根据同时
可测定项目数量不同，可分为单通道和多通
道，单通道每次只能检测一个项目，多通道可
同时检测多个项目。根据自动化程度不同，可
分为全自动化和半自动化。
分立式
21.试述等电聚焦电泳的优点
1.分辨率高；
2.区带清晰；
3.蛋白质可保持原有
活性，分离速度快；4.电泳结束后可直接测定
蛋白质的等电点 22.简述离子选择电极的一般
作用原理
当电极置于溶液中时，电极膜与溶液界面的离
子交换和扩散作用，改变两相界面原有电荷分
布形成双电层产生膜电位；因参比电极电位固
定，所以ISE只随溶液中待测离子活度或浓度
变化而变化
23.临床生化方法学分级的依据是什么？如何
进行分级？各自用途？
分级依据：根据方法的精密度与准确的不
同，分为决定性方法，参考方法，常规方法。
1.决定性方法：用于发展及评价参考方法和一
级标准品。2.参考方法：主要应用于鉴定常规
方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其
是否可以被接受，也用于鉴定二级标准品。3.
常规方法：指方法的性能指标，符合临床或其
他目的的需要，有适当的分析范围，而且经济
实用。用于服务性实验室的常规定量分析。 24.
自动生化分析仪的性能指标有哪些
自动生化分析仪常用性能评价指标有精密度、
波长的准确性和线性、与其他仪器的相关性
等。
精密度包括：批内重复性、总精密度以及与厂
商估计的精密度或临床要求的精密度比较是
否合格。波长的准确性和线性应符合要求。不
同仪器系统的测定结果存在差别，为了取得一
致的结果，有必要进行仪器之间的相关性校
正。 25.离子选择电极分哪几种类型
分为基本点极和敏化电极。其中基本电极又分
为晶体膜电极和非晶体膜电极，前者分为均相
膜电极和非均相膜电极，后者分为刚性基质电
极和流动载体电极；敏化电极分为气敏电极和
酶电极
26.比浊法的突出问题是颗粒大小对浊度曲线
有较大影响，因此，在比浊法中必须力求做到
什么？
1）混悬液中颗粒大小应尽可能相同，并易重
复。标准管和测定管中颗粒大小也应力求一致
2）混悬液在一定时间内至少在10分钟内应维
持稳定，也就是颗粒应该不易相互聚集、变大
变粗 27.简述试剂盒的性能指标的具体内容
准确度、精密度、线性范围、抗干扰作用、灵
敏度、稳定性 28.自动生化分析仪参数设置包
括哪些
样品与试剂量、测定方法、校正方法、反应时
间、测定波长、控制因素等 29.简述离心密度
梯度材料的选择原则
与被分离组分的生物材料不发生反应即完全
惰性，且易与所分离的生物颗粒分开；可达到
要求的密度范围，且在所要求的密度范围内，
渗透压低，ph值和离子强度变化较小；不会对
离心设备发生腐蚀作用；容易钝化，价格便宜
易回收；浓度便于测定；对于超速离心分析工
作来说，他的物理性质和热力学性质应是已知
的
30.线性范围如何测定？造成线性范围变窄的
原因有哪些选择在直线段浓度范围内进行测
定。
31.简述常规方法选择的原则、方法学误差与评
价试验之间的关系
原则：重点考核可靠性和实用性两方面的性能
指标。其中可靠性指标包括方法的精密度、准
确度、特异性及检测能力等。方法评价的实
验是配合检测各种类型的分析误差而设计的。
重复性实验的目的是检测候选方法的随机误
差，即考察候选方法的精密度。回收试验的目
的是检测候选方法的比例系统误差，衡量其准
确度。干扰试验用来检测候选方法的恒定系统
误差。方法比较实验检测候选方法的系统分析
误差，包括比例和恒定系统误差 32.室内质控
的方法有哪些？
常规质控图、Westgard多规则质控法、改良
Monica质控图
33.室内质控的目的是什么？如何设定靶值？
简述L-J质控图的制作方法和结果分析
目的：检测、控制本实验室测定工作的精密度
并检测其准确度的改变，以提高常规检测结果
的一致性
如何设定靶值；以最初20个数据和三至五个
月在控数据汇集的所有数据的累积平均数作
为质控品有效期内的常用靶值
制作方法；在纵坐标上标出x、x+2s、x-2s、x+3s、
x-3s的标志，并将其具体值标在左侧标尺上，
画出均值线（x），警告线（x±2s），失控线（x
±3s）。还应填齐图纸上的各项，此即成为一
张质控“空图”
结果分析；1）正常分布规律2）异常表现；曲
线漂移、趋势性变化、精密度的变化、失控 34.
一个组分的色谱峰可用哪些参数描述？他们
在色谱分析中各有什么意义
基线、峰宽、半峰宽、峰高和峰的保留时间。
峰宽、半峰宽的大小反映了色谱柱或所选的色
谱条件的好坏；保留时间用来描述层析峰在层
析图上的位置；峰高与组分的浓度有关 35.试
述米氏常数在酶学分析中的意义
1）鉴别酶的最适底物2）发现同工酶3）判断
在细胞内酶的活性是否受底物抑制4）测定不
同抑制剂对某个酶Km及Vmax的影响，可以
区别该抑制剂是竞争性抑制剂还是非竞争性
抑制剂5）设计适宜的底物浓度 36.高效液相色
谱仪主要由哪些系统组成？其关键部件是什
么
流动相输送系统、进样系统、色谱分离系统、
检测记录数据处理系统；检测器系统 37.简述
标本溶血对临床生化测定的影响及防治的方
法
使很多指标明显异常。注射器和容器要清洁，
抽血时使用针头不能过小，用力不能过大，控
制止血带的使用时间，抽血后要取下针头将血
液注入容器内，混匀抗凝剂时不要用力过大 38.
如何确定参考值？应用时应注意哪些问题？
参考值指对某一规定人群进行抽样测定得到
的均数值，它的建立包括参考个体、参考总体、
参考样本、准确测定、统计学处理、确定参考
值
注意问题：1）参考值的使用有一定的范围仅
适合于符合参考个体要求的参考人群2）参考
值范围不能盲目的作为正常与疾病的分界点
3）应注意年龄、性别、饮食、药物等因素的
影响
39.何谓临床灵敏度？临床灵敏度高的诊断试
验有哪些用途？
指在患病者中，用该诊断试验检查得到阳性结
果的百分率。 1）拟诊为严重但疗效好的疾病，
以防漏诊2）拟诊为有一定治疗效果的恶性肿
瘤，以便早期确诊及时治疗3）存在多种可能
疾病的诊断，可排除某一诊断4）普查或定期
健康体检，能筛选某一疾病，以防漏诊 40.试
述溶血对生化试验的干扰机理
一是血细胞中高浓度组分逸出，使测定结果增
高，二是血细胞成分进入血清后因化学反应而
引起其他物质的浓度改变，三是血红蛋白本身
颜色对检测的光学干扰。
41.何谓临床特异度？临床特异度高的诊断试
验哟哪些用途？
指在非患病者中应用该诊断试验获得阴性结
果的百分比。 1）拟诊患有某病的概率较大时，
以便确诊2）拟诊疾病严重，疗效与预后均不
好的疾病，以防误诊，尽早解除病人的压力3）
拟诊疾病严重且根治方法具有较大损害时，需
确诊，以免造成病人不必要的损害
42.简述影响检验结果的生物学因素
（一）生理因素对生化检验结果的影响：年龄、
性别、运动、情绪、体位改变、妊娠、生理性
波动（二）饮食和药物的影响 43.酶的国际单
位如何规定？如何根据吸光系数计算酶的活
性单位浓度？规定1IU指在规定条件下，每分
钟催化1umol底物转化为产物所需要的酶量
酶单位/升=（A测定－A对照）*（每一酶单位
规定的保温时间/实际反应保温时间）*V总
*106/L*V标*ε 44.何谓生化检测的基质效
应？该如何避免基质效应的产生
基质效应是指标本中除分析物以外的其它成
分对分析物测定值的影响
减少基质效应的主要措施包括： 1、改进室
间质评样品，使其作用更像新鲜人血清； 2、
改进仪器设计及试剂组成； 3、选择方法
高级动物生化试题 问答题： 1. 简述非编码RNA（non-coding RNA）的种类、结构特点及其主要功能。 非编码RNA的种类结构和功能 1tRNA转运RNA（transfer RNA，tRNA） 结构特征之一是含有较多的修饰成分，核酸中大部分修饰成分是在tRNA中发现的。修饰成分在tRNA分子中的分布是有规律的，但其功能不清楚。5’末端具有G（大部分）或C。3’末端都以ACC的顺序终结。有一个富有鸟嘌呤的环。有一个反密码子环，在这一环的顶端有三个暴露的碱基，称为反密码子（anticodon）.反密码子可以与mRNA链上互补的密码子配对。有一个胸腺嘧啶环。tRNA具有三叶草型二级结构以及“L”型三级结构，tRNA 的不同种类及数量可对蛋白质合成效率进行调节。tRNA负责特异性读取mRNA中包含的遗传信息，并将信息转化成相应氨基酸后连接到多肽链中。 tRNA为每个密码子翻译成氨基酸提供了结合体，同时还准确地将所需氨基酸运送到核糖体上。鉴于tRNA在蛋白质合成中的关键作用，又把tRNA称作第二遗传密码。tRNA还具有其他一些特异功能，例如，在没有核糖体或其他核酸分子参与下，携带氨基酸转移至专一的受体分子，以合成细胞膜或细胞壁组分；作为反转录酶引物参与DNA合成；作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。 2rRNA核糖体RNA（ribosomal RNA, rRNA） 核糖体RNA是细胞中最为丰富的RNA，在活跃分裂的细菌细胞中占80%以上。
他们是核糖体的组分，并直接参与核糖体中蛋白质的合成。核糖体是rRNA 提供了一个核糖体内部的“脚手架”，蛋白质可附着在上面。这种解释很直接很形象，但是低估了rRNA在蛋白质合成中的主动作用。较后续的研究表明，rRNA并非仅仅起到物理支架作用，多种多样的rRNA可起到识别、选择tRNA以及催化肽键形成等多种主动作用。例如：核糖体的功能就是,按照mRNA的指令将氨基酸合成多肽链。而这主要依靠核糖体识别tRNA 并催化肽键形成而实现。可以说核糖体是一个大的核酶( ribozyme)。而核糖体的催化功能主要是由rRNA来完成的,蛋白质并没有直接参与。 3 tmRNA tmRNA主要包括12个螺旋结构和4个“假结”结构，同时还包括一 个可译框架序列的单链RNA结构。tmRNA中H1由5’端和3’端两个末端形成，与tRNA的氨基酸受体臂相似。H1和H2的5’部分之间有一个由10-13nt 形成的环，类似tRNA中的二氢尿嘧啶环，称为“D”环。H3和H4，H6和H7，H8和H9，H10和H11之间分别形成Pk1，pK2，pK3，pK4。H4和H5之间则由一段包含编码标记肽ORF的单链RNA连接。H12由5个碱基对和7nt 形成的环组成，类似tRNA中的TΨC臂和TΨC环，称为“T”环。tmRNA 结构按照功能进行划分可分为tRNA类似域（TLD）和mRNA类似域（MLD），TLD主要包括H1,H2,H12,“D”环和“T”环，MDL则包括ORF和H5，这两部分分别具有类似tRNA和mRNA的功能。tmRNA是一类普遍存在于各种细菌及细胞器（如叶绿体，线粒体）中的稳定小分子RNA。它具有mRNA分子和tRNA分子的双重功能，它在一种特殊的翻译模式——反式翻译模式中发挥重要作用。同时，它与基因的表达调控以及细胞周期的调控等生命过程密切相关，是细菌体内蛋白质合成中起“质量控制”的重要分子之一。识别翻译或读码有误的核糖体，也识别那些延迟停转的核糖体，介导这些有问
实验一基因的PCR扩增技术 一、实验目的与原理简介 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）是体外克隆基因的重要方法，它可在几个小时内使模板分子扩增百万倍以上。因此能用于从微量样品中获得目的基因，同时完成了基因在体外的克隆，是分子生物学及基因工程中极为有用的研究手段。 常规PCR反用于已知DNA序列的扩增，具体可分为三个主要过程：一、变性。通过升高温度使DNA双链模板分子中氢断裂，形成单链DNA分子，温度为94℃，时间1min。二、复性。降低温度使DNA单链分子同引物结合。温度为55℃，时间1min。三、延深。升高温度，在DNA聚合酶最佳活性的条件下在引物3端加入dNTP，实现模板的扩增，温度为72℃，时间2min。同时第一步变性前要在94℃下预变性5分钟，使DNA双链完全解开。经过 25-35个循环之后，在72℃下继续延伸10分钟。 PCR反应包含的七种基本成分： 1）热稳定性DNA聚合酶：Taq DNA聚合酶是最常适用的酶，商品化Taq DNA酶的特异性活性约为80000单位/mg. 2）寡核苷酸引物：寡核苷酸引物的设计是影响PCR扩增反应的效率与特异性的关键因素。 3）脱氧核苷三磷酸（dNTP）：标准的PCR反应体系应包括4种等摩尔浓度的脱氧核苷三磷酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。每种dNTP的浓度一般在200-250μl之间，高浓度的dNTP对扩增反应会起抑制作用，可能是dNTP与Mg2+螯合有关。 4）二价阳离子：一般需要Mg2+来激活热稳定的DNA聚合酶，由于dNTP与寡聚核酸结Mg2+合，因而反应体系中阳离子的浓度一般要超过dNTP和引物来源的磷酸盐基团的摩尔浓度。Mg2+的最佳浓度为1.5mmol/L。 5）维持PH值的缓冲液：用Tris-Cl在室温将PCR缓冲液的PH值调至8.3-8.8之间，标准PCR缓冲液浓度在10mmol/L。在72℃温育时，反应体系的温度将下降1个多单位，致使缓冲液的PH值接近7.2。 6）一价阳离子：标准PCR缓冲液内含有50mmol/L的KCl，它对扩增大于500bp长度的DNA是有益的。 7）模板DNA：含有靶序列的模板DNA可以以单链或双链形式加入到PCR混合液中，闭环DNA的及增效率略低于线性DNA。 学习PCR反应的基本原理和基本技术。 了解引物设计的一般要求。 二、材料和试剂 10Х扩增缓冲液 4种dNTP贮存液（20mmol/L，PH 8.0） Tap DNA 聚合酶 5端引物（20μmol/L）及3端引物（20μmol/L） 模板DNA 琼脂糖凝胶 PCR仪（Bio-Rad公司）移液枪（0.5-10μL 5-50μL）枪头微量移液管 一、实验操作 1）按照以下次序，将各成分加到微量离子管内混合： 10Х扩增缓冲液2.5μl M g2+1.5μl 5端引物1μl
生物化学实验报告 姓名：吴瑞 学号： 3120016004 专业年级： 2012级临床医学（妇幼保健) 组别：第四实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心
一、实验室规则 1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。 2．进入实验室必须穿白大衣。严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。 3．严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。 4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。 5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。 6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。 7．注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。 8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入水槽内，并放水冲走。 9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。 10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。
生物化学技术练习题 一、单选题 1. 血脂测定血液标本的采集应在（） A、餐后4h B、餐后12h C、餐前1h D、可随时采集 2. 铁主要分布于（） A、肌红蛋白 B、血红蛋白 C、含铁酶类 D、铁蛋白 3.免疫球蛋白属于（） A、α1-球蛋白 B、α2-球蛋白 C、β-球蛋白 D、γ-球蛋白 4. 胆红素测定（改良J-G法）加入叠氮钠的作用是（） A、使紫色的偶氮胆红素变为蓝色 B、增加呈色的稳定性 C、破坏剩余的重氮试剂 D、提高显色的灵敏度 5. 原子吸收分光光度法所用的光源是（） A、钨灯 B、氢灯 C、卤钨灯 D、空心阴极灯 6. 核酸探针目前常用的放射性核素标记物是（） A、32P B、3H C、35S D、125I 7. 血清总蛋白测定，目前临床上的常规方法是（） A、凯氏定氮法 B、双缩脲法 C、酚试剂法 D、染料结合法 8. 临床上用于同工酶、血浆脂蛋白分离常用的电泳技术是（） A、PE B、CAE C、AGE D、PAGE 9. 血气酸碱分析标本所用的抗凝剂是（） A、草酸钠 B、枸橼酸钠 C、肝素钠 D、EDTA－Na2 10. 下列哪种物质不是由肾分泌的（） A、肾素 B、促红素 C、前列腺素 D、醛固酮 11. 肾上腺皮质激素的母体是（） A、孕烷 B、雄烷 C、雌烷 D、以上都不是 12. Trinder反应中最常用的色原是（） A、联苯胺 B、邻联茴香胺 C、4-AAP和酚 D、2、4-二氯苯酚 13.正常情况下，运铁蛋白只有多少和血清铁结合（） A、1/4 B、1/3 C、1/2 D、2/3 14.黄疸发生的机制不包括（） A. 胆红素生成过多和肝细胞摄取障碍 B. 肝细胞处理胆红素能力降低 C. 肝细胞对胆红素的排泄增多 D. 胆红素在肝外排泄障碍，逆流入血 15.下列哪一种部件是离心式自动分析仪的特有部件（） A、比例泵 B、稀释器 C、转头 D、透析器 16. V要达到Vmax的90%以上，[S]应为Km的（） A、2倍 B、5倍 C、10倍 D、100倍 17. 国产化学试剂分析纯的符号是（） A、GR B、CP C、LR D、AR 18. 静脉采血的常用部位是（） A、手背静脉 B、肘静脉 C、腘静脉 D、外踝静脉 19.紫外光的波长范围是（） A、200～400nm B、200～700nm C、400～760nm D、500～800nm 20. 聚丙烯酰胺凝胶电泳的英文缩写是（）
生物化學實習 1 緒論 (一) 原理 1. 光依據其波長來分類： (1) 200nm~400nm 短波屬於紫外光 (2) 400nm~700nm 可見光波長 (3) 700nm~900nm 長波屬於近紅外光 2. 光通過溶液時，特定波長的光被吸收，眼睛察覺到的是沒有被吸收的波長。 核黃素會吸收450nm 的光，紅光與黃光會通過溶液而被肉眼所見。
第一單元 生化實驗基本原理及技術 2 圖1-1光譜儀 光譜儀可用來鑑定及定量純或不純的溶液中所含有的特定化合物，主要原理是基於兩個物理定律：1.柏朗定律；2.比爾定律 。 1. 柏朗定律：每單位厚度溶液其吸收入射光的比率為定值，被溶液吸收的入射光量與入射光強度無關。被每單位厚度溶液吸收的入射光比率為定值，每一單位厚度溶液若吸收10%的光，則光經過每一單位厚度溶液時，其強度即減少10%。 I ＝I 0 ? e -αι I ：穿透光強度 I 0：入射光強度 α ：溶液吸光係數 ι：光路徑長度 柏朗定律中以對數為底轉換公式，將吸光係數α轉換成比例常數K → log 10 I 0 / I ＝K ι log 10 I 0 / I ＝ 吸光值(absorbance ；A) 或光密度值(optical density ； OD)
生物化學實習 3 2. 比爾定律：光經過吸光物質所產生的吸光值，與溶液中每單位面積所含的吸光物質數目成比例。 比爾定律描述比例常數K 與待測吸光溶液中溶質的濃度有關。 K ＝εc ε：消光指數 c ：吸光物質濃度 I ＝ I 0? 10-εc ι log 10 I 0 / I ＝ A ＝log 1010εc ι＝ εc ι 當ι（光路徑長度）＝1 cm 時 log 10 I 0 / I ＝ A ＝log 1010εc ＝ εc 特定溶質在特定波長下，消光係數ε為一常數。因此，當吸光物質的濃度變成兩倍，於相同的光路徑下，被吸收的光量也會變成兩倍。 圖1-2 22 μM 溶於0.1M 磷酸鈉，pH 7.06，1公分 光路徑(light path)的條件下測定 波長 吸 光 值
生物化学实验报告 姓名：郭玥 学号： 3120100021 专业年级： 2012级护理本科 组别：第8实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心
【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】 实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法 2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法 3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法 4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法 5、了解柱层析技术 实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。 2、不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别， 可分离纯化各种蛋白质。 3、盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可 使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。蛋白质溶液中加入中性盐后，由 于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃 至消失。中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷 大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。
4、离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆 的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。 5、醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。 它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中 各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电 泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α 2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。 实验材料：人混合血清葡聚糖凝胶（G-25)层析柱 DEAE纤维离子交换层析柱饱和硫酸铵溶液 醋酸铵缓冲溶液 20%磺基水杨酸 1%BaCl 溶液氨基黑染色液 2 漂洗液 pH8.6巴比妥缓冲溶液 电泳仪、电泳槽 实验流程：盐析（粗分离）→葡聚糖凝胶层析（脱盐）→DEAE纤维素离子交换层析（纯化）→醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定） 实验步骤： （一）盐析+凝胶柱层析除盐：
生物化学与分子生物学实验技术 实验安全与实验基本操作 2实验室安全规则 3实验室安全事故案例 ●1995年9月香港科技大学化学系大四学生梁同学因吸入别的同学泼洒的酸 酐而不治身亡。 ●1997年香港科技大学物理系访问学者因未按规定使用通风橱造成他人肺部 伤害而永不被香港各大学录用。 4推行实验室安全规则的目的 1.为了达到研究所研究学习安全之目的。 2.为了满足人性安全感的基本需要。 3.为了人性的尊严─生命是无价的。 4.减少工作中产生灾害，确保全教职工和学生之安全及健康。 5. 保护大家共同的环境。 5安全事故原因分类分析 天灾 占2％ 凡不知、不顾、不理、不能、粗心、迟钝、疲劳、失检、情绪各种内在外在的行为 不安全行为 人为因素 占98% 工作场所中，工作环境、设备设施对人所产生之危险因素 不安全环境 6专业性实验室安全工作守则 ●化学药品的操作 ●放射性物质（另有专门培训） ●废料处理 ●紫外线的接触 ●化学药品溢泼的处理 7实验室常用化学试剂的使用安全 8二甲苯 ●无色液体，有芳香气味，易挥发。用来制造、染料、塑料和药物。属低毒类， 对皮肤和黏膜有刺激作用，高浓度有麻醉作用。神经系统会受损害，还会使肾和肝受时性损伤。
●眼毒性：蒸气会刺激眼睛，液体导致严重刺激，发红肿胀和灼伤。通常影响 是暂时性的。皮肤毒性：产生灼伤感、干燥。可以用微温的缓慢流水冲洗至少20分钟，用无摩擦性的肥皂从皮肤上洗去二甲苯。 ●易燃，有爆炸危险。属于甲类防火危险物质。用二氧化碳或干粉或泡沫灭火 剂，不宜用水。 9三氯甲烷 ●无色透明易挥发液体，有特殊的香甜气味。沸点：61.2℃，医药上用作麻醉 剂。也用作萃取剂和溶剂。 ●有很强的麻醉作用，在光的作用下，能被空气中的氧反应生成氯化氢和剧毒 的光气。通常加入1—2%乙醇，使生成的光气与乙醇作用而生成碳酸乙酯，以消除其毒性。 ●吸入高浓度蒸汽时，开始刺激眼、口腔、鼻孔粘摸，发生流泪、感觉麻醉、 呕吐、痉挛、直到昏睡、不省人事。 ●在空气、水分和光的作用下，酸度增加，因而对金属有强烈的腐蚀性 10乙醚 ●透明、无色、易挥发有芳香刺激性气味的液体。沸点：34.6℃；对人体有麻 醉性能。当吸入含量为3.5%时，30~40分钟就可失去知觉。 ●人体过量吸入，会引起严重的急性中毒。呼气中带醚味，并出现呕吐、出汗、 喷嚏、咳嗽、头痛、记忆力减退、无力、兴奋。 ●微溶于水，易溶于盐酸，能与醇、醚、石油醚、苯、氯仿等有机溶剂混溶。 应储存于阴凉、干燥、通风的低温库房内，库温最好控制在25℃以下。远离热源、火种，避免阳光直射。 ●本品易燃。与强氧化剂反应能起火爆炸。在空气中与氧长期接触或受光照会 生成不稳定的过氧化物，受热能自行着火爆炸。着火时，可用干粉、泡沫、二氧化碳、沙土灭火。用水灭火无效，但可用水保持火场容器冷却。 11乙醇 ●无色有酒味，易挥发的澄清液体。沸点78.5℃：用于溶剂、清洗剂、分析 试剂等。属微毒类，对眼睛黏膜有轻微刺激作用。 ●乙醇可使皮肤发干，长期受大剂量作用时，可使神经系统、消化器官等发生 严重的器质性疾病。 ●易燃，手热或遇明火有燃烧爆炸危险，燃烧时，发出兰色火焰。蒸气能与空 气形成爆炸性混合物，在火场中，受热的容器有爆炸的危险。着火时，用二氧化碳、雾状水、干粉、1211或抗泡沫灭火。用水冷却火场中的容器，驱散蒸气，赶出溢出液体，使其稀释成为不燃性混合物
生化实验五大技术 一.分光光度技术 1.定义:根据物质对不同孩长的光线具有选择性吸收,每种物质都具有其特异的吸收光语。而建立起来的一种定t 、定性分析的技术。 2.基本原理:（图1-1光吸收示意） 透光度T=It/lo 吸光度A=lg(lo/ I1) 朗伯-比尔(lambert-Beeri)定律:A=KLc K 为吸光率，L 为溶液厚度(em), c 为溶液浓度 (mol/L)] 摩尔吸光系数日ε:1摩尔浓度的溶液在厚度为 I.cm 的吸光度。 c=A/ε 3. 定量分析: (1)标准曲线(工作曲线)法 (2) 对比法元-KCLCx (3)计算法: e=A/ε (4)差示分析法(适用于浓度过浓成过稀) (5) 多组分湖合物测定 4.技术分类 分子吸收法&原子吸收法:
可见光(400-760 nm) &紫外光(200~ 40m) &红外光(大于760 nm)分光光度法； 5.应用方向 有机物成分分析&结构分析红外分光光度法测定人体内的微量元囊原子吸收分光光度法 二电脉技术 1.定义:带电荷的供试品在情性支持介质中，在电场的作用下，向其对应的电 极方向按各自的速度进行脉动。使组分分离成族窄的区带，用透宜的检洲方法记录其电泳区带图请或计算其百分含量的方法。 2.基本原理: 球形质点的迁移率与所带电成正比，与其半径及介质粘度成反比。v=Q/6xrη 3.影响电泳迁移率的因素: 电场强度电场强度大，带电质点的迁移率加速 溶液的PH值: 溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移幸越大 溶液的离子强度:电泳液中的高子浓度增加时会引起质点迁移率的降低 电渗:在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗 4:技术分类: 自由电泳(无支持体) 区带电泳(有支持体):法纸电泳(常压及高压)，博层电泳(薄膜及薄板).凝波电泳(琼脂，琼脂糖、淀粉胶、柔丙烁配胶凝胶)等 5. 电泳分析常用方法及其特点: 小分子物质滤纸、纤维素、硅胶薄膜电泳复杂大分子物质凝胶电泳 ⑴醋酸纤维素薄膜电泳 ①这种薄顺对蛋白质样品吸阴性小，消除纸电沫中出现的“拖尾”现象 ②分离理应快，电泳时间短 ③样品用最少: ④经过冰最酸乙醉溶液或其它看明液处理后可使膜透明化有利丁对电泳图潜的光吸收措测店和爱的长期保 ------别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测(胰岛素、游菌酶、胎儿甲种球
生化试验技术 绪论 1．生物体内某一组份，大致可分为五个基本阶段： (1)确定制备物研究目的及建立相应的分析鉴定方法。 (2)制备物物理化学性质稳定性的预备试验。(3)材料处理及抽提方法的选择。 (4)分离纯化方法的摸索。(5)获得制备物以后，均一性的测定。 2 1 2 (1)呈色法；(2)色谱法；(3)光谱法；(4)电泳法；(5)核磁共振波谱法。 (6)其他:如电子显微镜观察。 理化测定方法的最大优点是实验操作简便快速，能及时指导分离制备工作。 3 3．好的分析鉴定方法必须满足以下要求: 1）特异性和专一性强；2）重现性好；3）准确度大；4）灵敏度高；5）手续简便。4．制备物的理化性质及稳定性的预试验是对一个未知物质分离制备实验设计的基础。5．材料的处理： 1）选材：（1）工业生产：材料来源丰富、含量高、成本低； （2）未知物质：只要达到实验目的即可。 2）预处理：保证材料的纯净； 3）组织破碎方法：（1）机械法：组织捣碎机，匀浆器，研钵和研磨、压榨机 （2）物理法：(1)反复冻融法(2)急热骤冷法： (3)超声波处理（3）化学及生物化学法：(1)自溶法(2)酶解法(3)表面活性剂处理⑷溶胀法6．使生物活性物质保持活性，主要措施常有如下几点： 1）采用缓冲液。2）加入保护剂。3）抑制水解酶的破坏 4）一些特殊的措施：引起生物大分子变性的因素，如紫外线、强烈搅拌、过酸过碱、高温、冻结等均应避免，有的还要求提取时无氧等。 第一章 1．蛋白质纯化从原理上分可有哪几种方法？ 1）溶解度不同：如盐析、有机溶剂分级沉淀法； 2）分配系数不同：如分配层析法3）吸附性不同：如吸附层析法； 4）在电场中运动速度不同：如电泳法5）沉降系数或密度不同：如离心法； 6）分子量不同：如凝胶过滤层析法、SDS－PAGE法； 7）生物学特性不同：如亲和层析法； 2．蛋白质分离提取的一般步骤及注意事项？ 蛋白质的分离提取的一般步骤为：一般来说，蛋白质的制备包括以下过程：
生化分离方法：离心、层析、电泳和膜分离等 生化分析方法：重量法、化学法、分光光度法、酶法、色谱法 生化制备方法：生物大分子制备的前处理、分离纯化、浓缩与干燥、超临界流体提取法、萃取与相分离、结晶、样品的保存 生化分离方法，常用的方法有：离心技术、层析技术、电泳技术和膜分离技术等。 1 离心技术 1.1 基本原理 离心技术（centrifugal technique）是根据颗粒在作匀速圆周运动时受到一个外向的离心力的行为而发展起来的一种分离技术。 应用：各种生物样品的分离和制备。如分离收集细胞、细胞器及生物大分子物质；提纯、鉴定生物大分子；分离化学反应的沉淀物。 生物样品悬浮液在离心力作用下使悬浮的微小颗粒以一定速度沉降，从而与溶液分离，其沉降速度与颗粒的质量、大小和密度相关。 相对离心力 离心力因离心半径不同而不同，因此用“相对离心力” （relative centrifugal force，RCF）表示离心力，若RCF值不变，一个样品可在不同的离心机上获得相同的结果。RCF(×g)=1.119×10-5×r×rpm2。 1.2 离心分类 根据离心原理，按照实际工作的需要，设计了许多离心方法，大致可分三类：差速离心法(differential velocity centrifugation)速率区带离心法（rate zonal centrifugation）等密度离心法（isopycnic centrifugation） 1.2.1 差速离心法 利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别，在同一离心条件下，沉降速度不同，通过不断增加相对离心力，使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分部沉淀。 操作过程中一般是在离心后用倾倒的办法把上清液与沉淀分开，然后将上清液加高转速离心，分离出第二部分沉淀，如此往复加高转速，逐级分离出所需要的物质。 差速离心的分辨率不高，沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开，常用于其他分离手段之前的粗制品提取。 关键是选择适合于各分离物的离心力。例如差速离心分离细胞组分 1.2.2 速率区带离心法 速率区带离心法是在离心前于离心管内先预装密度梯度介质（如蔗糖、甘油、CsCl等），将待分离的样品铺一薄层在梯度液的顶部进行离心。 离心后在近旋转轴处（r1）的介质密度最小，离旋转轴最远处（r2）介质的密度最大； 但最大介质密度必须小于样品中粒子的最小密度，即ρP＞ρm。 根据分离的粒子在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内分成一系列区带，达到彼此分离的目的。 梯度液在离心过程中以及离心完毕后，取样时起着支持介质和稳定剂的作用，避免因机械振动而引起已分层的粒子再混合。 由于ρP＞ρm可知S＞0，因此该离心法的离心时间要严格控制。 如果离心时间过长，所有的样品可全部到达离心管底部；离心时间不足，样品还没有有足够的时间使在介质中分离形成区带。 由于此法是一种不完全的沉降，沉降受物质本身大小的影响较大，一般是应用在物质大小相异而密度相同的情况。 常用的梯度液有聚蔗糖（Ficoll）、硅溶胶（例如，Percoll）及蔗糖。 离心时，由于离心力的作用，颗粒离开原样品层，按不同沉降速率向管底沉降。离心一定时间后，沉降的颗粒逐渐分开，形成一系列界面清楚的不连续区带。 沉降系数越大，沉降越快。离心必须在沉降最快的颗粒（大颗粒）到达管底前或刚到达管底时
生物化学实验思考题
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生物化学实验考试试题
细胞破碎 1 常用的细胞破碎的方法有哪些？ 机械法：研磨，高速捣碎机;物理法:反复冻溶,超声波破碎，压榨法；化学与生物化学法:自溶，溶胀法，酶解法，有机溶剂处理。 2 有机溶剂法破碎细胞原理，常用的有机溶剂有哪些? 有机溶剂溶解细胞壁并使之失稳。比如笨、甲苯、氯仿、二甲苯及高级醇等 ３酶法破碎细胞原理:酶分解作用 4反复冻融法破碎细胞原理：通过反复将细胞放在低温下突然冷却和室温下融化达到破壁作用 层析技术 1.什么叫层析技术？ 层析技术是利用混合物中各组分理化性质的差别（分子亲和力、吸附力、分子的形状和大小、分配系数等),使各组分以不同程度分布在两个相，其中一个是固定相，另一个是流动相,从而使各组分以不同速度移动而使其分离的方法。 2、按层析过程的机理，层析法分哪几类？按操作形式不同又分哪三类? 根据分离的原理不同分类,层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。 按操作形式不同又分层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。 3.指出常用层析技术的应用范围。 凝胶层析法:⑴脱盐;⑵用于分离提纯；⑶测定高分子物质的分子量;⑷高分子溶液的浓缩离子交换层析法：主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子 高效液相层析法:⑴液-固吸附层析；⑵液-液分配层析；⑶离子交换层析 ４.ＳeｐhadｅxG-１0０凝胶柱层析分离蛋白质原理是什么? 大小不同的分子经过的路线长短不同而达到分离作用。 ５．用SeｐhａdeｘG2５脱盐时蛋白质和盐哪个先出峰?蛋白质 6．相对分子量为8万和1０万的蛋白质能否在SephadｅxＧ－７5柱中分开？为什么？不能,分子量差距太小。 7．将分子量分别为a(9０000）、b(45０0０）、c（１10 000)的三种蛋白质混合溶液进行凝胶过滤层析,正常情况下,将它们按被洗脱下来的先后排序。ｃ、ａ、ｂ 8.离子交换层析与凝胶过滤哪种分辨率高?离子交换层析较高。 9.如果样品中只有Ala和His(Ala pI=6．0，Ｈis pＩ＝7.6)，在ｐH4条件下，这两种氨基酸那一种与CM(阳离子交换剂)结合的紧密?如果用pH4-7的洗脱液梯度洗脱，那种氨基酸先洗脱出来？Aｌa 10. 柱层析时湿装柱的注意事项有哪些？ 用水灌注、不能有气泡。 11.说说离子交换层析中洗脱液的选择原则
第二章生化实验基本技术 第一节离心分离技术 离心是蛋白质、酶、核酸及细胞亚组分分离的最常用的方法之一，也是生化实验室中常用的分离、纯化的方法。尤其是超速冷冻离心已经成为研究生物大分子实验室中的常用技术方法。离心机(centrifuge)是实施离心技术的装置。离心机的种类很多，按照使用目的，可分为两类，即制备型离心机和分析型离心机。前者主要用于分离生物材料，每次分离样品的容量比较大，后者则主要用于研究纯品大分子物质，包括某些颗粒体如核蛋白体等物质的性质，每次分析的样品容量很小，根据待测物质在离心场中的行为(可用离心机中的光学系统连续地监测)，能推断其纯度、形状和相对分子质量等性质。这两类离心机由于用途不同，故其主要结构也有差异。 一、离心原理 离心技术的主要原理就是将样品放入离心机转头的离心管内，离心机驱动时，样品液就随离心管做匀速圆周运动，于是就产生了一个向外的离心力。由于不同颗粒的质量、密度、大小及形状等彼此各不相同，在同一固定大小的离心场中沉降速度也就不相同，由此便可以得到相互间的分离。 (一)离心力和相对离心力 离心力的单位为g，即重力加速度(980.6cm/S2)，离心力的大小可根据离心时的旋转速度V(r/min 每分钟转数，revolution per minute)和物体离旋转轴中心的距离r(cm)按下式计算：g=r×V2×1.118×10或按下式计算所需的转速：()r 89445 =。 ? V／ g 离心技术是根据微小颗粒物质在离心场中的行为建立并发展起来的。离心机的转头能够以稳定的角速度做圆周运动，从而产生一个强大的辐射向外的离心力场，它赋予处于其中的任何物体一个离心加速度，使之受到一个外向的离心力，其定义为： F = mω2r 式中：F为离心力的强度；m为沉降颗粒的有效质量；ω为离心转子转动的角速度，其单位为rad/s；r为离心半径(cm)，即转子中心轴到沉降颗粒之间的
第一章生命大分子物质的制备 某一骨骼肌的无细胞粗抽提液每毫升含蛋白质32mg，在适宜条件下，10／-l该抽提液以每分钟O．14,umol 的速度催化一个反应。用硫酸铵沉淀法分级分离50ml上述抽提液，将饱和度为20% - 40%的沉淀物重新溶于10ml溶液中，测得其蛋白质含量为50rng/m1’取ioy.i该溶液催化一反应，其速度为每分钟o．65弘mol。试计算纯化倍数和回收率。(2. 97，92.8%) 第二章沉淀法 1．兔肌醛缩酶的p常数与盐析常数（在离子强度为摩尔浓度时）分别为6.30和2. 84。试求硫酸铵浓度分别为2mol/L、3mol/L时的溶解度。(4.2mg/ml，6.03 X10-3 mg/ml) 2．含25%硫酸铵饱和度的细胞色素c溶液150ml，需加多少克硫酸铵或多少毫升饱和硫酸铵溶液，才能使其达55%饱和度? (28. 95g, 100ml) .10．某一蛋白质的盐析范围为饱和硫酸铵30%-60%，试简述具体操作（若有500ml盐析液）。 第三章吸附层析 7. 利用薄层层析如何确定蛋白质的纯度？ 第四章疏水层析 1．疏水作用层析的固定相和流动相与普通吸附层析有何区别？为什么？(P63 , T1) 第五章离子交换层析 1．离子交换剂由哪几部分组成？何为阳离子和阴离子交换剂？ 2．弱酸性和弱碱性的纤维素离子交换剂分别适宜在哪些pH范围内应用？为什么？ 7．影响离子交换剂膨胀度的因子有哪些？其中哪个为关键因子？为什么？ 8．在层析柱中污染杂质后应如何处理？为什么某些亲水性离子交换剂在含乙醇的乙酸盐溶液中可以防止微生物污染？ 9．试设计利用离子交换剂分离一种含等电点分别为4．0、6.0、7.5和9.0的蛋白质合液的方案，并简述理由。并绘制洗脱曲线。 10．梯度溶液的变化速率、交换剂的膨胀程度、装柱的均匀度等因子，对样品的分辨率有何影响？11．梯度溶液的变化速率是受哪些因素控制的？试举例说明如何借助速率变化来提高分离效果？13．用离子交换剂测定蛋白质的等电点时，为什么一定要用强性离子交换剂？
生化实验技术课程学习指南 1．课程内容： 生命科学作为二十一世纪发展最为迅速的学科之一，生物化学技术则是其任何研究进展的技术支撑，是现代生物技术的重要组成部分。生化实验手段不仅推动了本学科的进展，而且被生物其他学科利用，促进了各学科的共同发展。生化实验技术的学习已经成为理解近代生命科学的重要基础之一。 本课程学习分基础实验与综合设计两个渐进式技能训练模块进行，其中基础实验内容主要学习生物化学的基本实验技术，包括验证与分析生化物质的6大主要类型（蛋白质、酶、DNA、糖、脂类、维生素等）和生化代谢过程的基本技术方法。内容涉及生化物质的定性、定量分析测定、电泳鉴定和代谢检测等，即课内完成8个实验项目的操作训练；同时鼓励学生自行设计实验内容，达到教学训练目标。 表1基础实验模块教学内容及技能点
综合设计实验模块内容为选取蛋白质、核酸两大类生化大分子物质提取制备和鉴定实验项目为载体，以生物化学理论为指导，设计综合贯穿生化分离检测实验的经典技术为主线的实验内容，学习生化材料预处理、沉淀技术、膜分离技术、层析技术（凝胶、离子交换、亲和析）、电泳技术、化学检测、光学检测等，以及生化产品分析鉴定的实验技术理论与操作方法。教学课时内完成2个大主题方向的实验内容，即蛋白质分离纯化鉴定、基因组提取纯化与PCR 鉴定。学生可自选各方向一个实验项目设计方案并完成操作训练，也鼓励学生选择大纲外感兴趣的实验项目，如多糖、酶等大分子物
质作为实验对象，同样设计并完成操作，达到教学要求的目标。 表2综合设计实验教学内容及技能、知识点 2．学习方法： 本课程基础实验教学采用全程参与、合作讨论、问题式、滚动式教学方法，实验教学改变书本——课堂——教师为中心的传统教学方法，建立以学生为主体、师生互动、全程参与、合作讨论式的教学形式。基础实验整个过程对学生进行强化及严格训练，每个实验项目从查阅资料、实验准备、实验操作、结果分析等整个实验活
临床生物化学实验原理、分析方法及检测技术 中国中医研究院广安门医院临床检测中心 生物化学实验——是把化学(分析技术)和生物化学(实验反应原理)的方法应用于疾病的诊断、治疗、监控的实验分支。 一个生化实验的最后测定结果应包括四大部分来完成。 一、实验反应原理及分析方法（理论依据） 二、实验检测技术（手段）生化仪的分析技术。 三、质量控制程序（质量保证）室内质控、室间质评、仪器、试剂、人员五要素。 四、临床意义（目的）咨询服务、异常结果的解释。 实验反应原理及分析方法(理论依据) 一个生物化学实验的反应原理设计，首先要找出所检测的化学特性，如测定体液（首先是血液）中酶的含量血液中除少数酶（如凝血溶血酶、铜氧化酶及假性胆碱脂酶等）含量较多外，血液正常生理状况下含量微乎其微。一般每毫升含微微克（Pg）水平，要直接测定如此微量物质是相当困难的。用免疫化学方法可测定全部酶蛋白分子含量（不论其有无活性）而用化学方法测定只能测定酶的催化活性，间接计算出酶的含量。目前利用酶具有催化活性这一特性，在临床上已普遍应用测定酶蛋白，同时还可以测定三大代谢的产物，如糖、脂类、蛋白质、这样也就建立起利用酶促反应的一级反应测定代谢物的方法。一级反应—反应速度与底物浓度成正比，因此只有当酶反应为一级反应时，才能准确测定底物含量，（如测定血糖、总甘油三脂、总胆固醇等）。从此在临床试剂盒的方法中出现了以酶为试剂测定各种代谢产物。 临床化学方法的分类 特别是自动生化仪方法的特点 以往临床化学实验都采用比色法进行各个项目的测定，这是因为比色法具有微量、迅速、准确的优点，特别适合于微量的生物体体液中各项物质测定。 在一般比色法中，手工使用比色计或分光光度计可以测定各种反应溶液的吸光度，但由于很难控制测定时间和反应温度，很难准确记录反应过程中吸光度变化，因此，毫不奇怪在很长一段时间内我们所使用的方法，都是在呈色反应达到完全或者反应达到平衡时，吸光度达到稳定时才进行测定。即所谓平衡法或终点法。 但自从自动生化仪出现后，从根本上改变了上述情况。通过各项先进技术，人们可以精确测定反应的动态过程。并可以准确计算任何一段反应时间内的反应速率，这样大大开阔了临床化学家对方法选择。除经典的终点法外还可以进行动态测定。这样不仅缩短了操作时间，大大提高了工作效率，还可进行一些用常规比色方法不能进行的测定。如测定酶反应的初速 度（V o ）等等。测酶初速度（V o ）只能用分光光度法。 因此，用好自动生化仪一个重要前提必须对自动生化仪可以提供的测试方法类型有所了解。 生化自动分析仪特点： 1 精确测定反应的动态过程； 2 准确计算任何一段反应时间内的反应速率； 3 除经典的终点法外还可以进行动态测定。 分析方法的分类
生化实验技术 一、选择题 1、某蛋白质pI为7.5，在pH6.0的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向为 A、向负极移动 B、向正极移动 C、不运动 D、同时向正极和负极移动 2、进行酶活力测定时 A、底物浓度必须极大于酶浓度 B、酶浓度必须极大于底物浓度， D、酶能提高反应的平衡点 C、与底物浓度无关 3、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳比一般电泳的分辨率高，是因为具有下列哪种效应？ A、浓缩效应 B、电荷效应 C、分子筛效应 D、粘度效应 4、分离鉴定氨基酸的纸层析属于 A、亲和层析 B、吸附层析 C、离子交换层析 D、分配层析 5、下面关于多聚酶链式反应（PCR）的叙述哪一个是不正确的？ A、是Mullis 在1984年发明的一种体外扩增DNA的技术。 B、根据DNA复制的基本原则，反应体系中需要加入RNA聚合酶以合成引物 C、在PCR反应体系中，需要特定引物、四种脱氧核苷酸三磷酸、镁离子等 D、需要模板DNA，即待测的DNA片段 二、是非题（在题后括号内打√或×） 1、蛋白质在小于等电点的pH溶液中，向阳极移动，而在大于等电点的pH溶液中，将向阴极移动。 2、酶的比活力可表示酶纯度。 3、3、提纯酶时，只需求其总活力，就可以知其纯度是否提高了。 三、问答题： 1、盐析法沉淀蛋白质时，往往需要将pH调到蛋白质等电点附近，为什么？ 2、试分别阐述分配层析和吸附层析法分离鉴定氨基酸的原理和操作步骤。 1、3、以DNA的分离纯化为例，阐述生物大分子分离纯化的基本原则原理和注意事项。 4、电泳现象的产生与蛋白质的分子结构有何关系？ 5、在pH6.5的谷氨酸和丙酮酸混合液中，加入适量的新鲜猪肝匀浆后于37℃水浴中保温30分钟，煮沸后蛋白质沉淀，将上清液点在层析滤纸上，用酚水饱和液进行层析，层析结束后用茚三酮显色出现两条带，这两条带各是什么物质：说明原因？ 6、测定酶活力时，应注意哪些事项？为什么？ 7、聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么特点？试述聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质的基本原理和主要操作步骤。 8、如果你从动物肝脏中分离提取到了一种物质，猜测它可能是转氨酶，你怎样确定它是蛋白质？又如何判断它是酶？请简述你的方案。 9、试比较核酸测序和蛋白质测序在方法策略上的异同。 10、阐述核酸、蛋白质一级结构研究和大规模测序的必要性以及对生命科学发展的重大影响。 四、名词解释 吸附层析分配层析分子筛层析离子交换层析亲和层析
生物化学 B 》实验课教学大纲 课程代码：14114 课程英文名称：Biochemistry B 开课对象：生物工程、制药工程，本科（四年制） 学时：25/85 一、课程性质、任务和作用 生物化学是研究微生物、植物、动物及人体化学分子与化学反应的科学，是运用化学的原理在分子水平上解释生命现象的科学。近年来，生物化学与其衍生出的分子生物学的发展突飞猛进，生物化学已越来越成为生物学的共同语言，成为生物学领域的前沿学科。 生物化学不仅是生物学的基础学科，而且也是一门重要的实验性学科，生物化学理论是在科学研究实验基础上高度总结的结论性观点。因此，要掌握生物化学知识，必需要进行生物化学实践。目前生化实验的基础理论与技术手段已广泛地应用于生物学研究的各个领域，生物化学实验技术成为生物学研究的基本技术。 开展生物化学实践课程的教学，可以让生物工程、制药工程专业学生在生化课堂之外亲自动手做实验，以应证并深入了解生化反应的原理，熟悉各种生化研究方法与技术，以培养独立进行研究的能力。最终使学生巩固和加深对生物化学基础理论的理解，掌握生物化学基本技术的操作，培养基本的科研思维和实验数据的整理和分析，为其后续专业课程如酶工程、生化工程、基因工程、生化制药等的学习，以及将来生物工程、制药工程的科学研究打下扎实的基础。即通过本课程的实验教学要达到以下三方面的目的： 1. 培养学生严谨的科学态度，开拓创新的思维能力，实验设计的思维方法，以及规的书写实验报告论文等知识，提高分析问题和解决问题的能力。 2. 掌握基本的生物化学实验方法和技术，通过本课程的严格训练，为学生进一步学习，掌握复杂的综合性的生物化学技术打下扎实的基础。 3. 通过实验，进一步加深对生物化学理论知识的理解。 二、教学目的要求和容 实验一、肝组织中核酸的分离提取与鉴定 [ 教学目的] 1．掌握从动物组织中提取核酸的原理、操作技术及核酸组分的鉴定方法 2. 熟悉离心计的操作使用。 3. 了解核酸的组成。 [ 教学容] 1 ．肝组织中核酸的提取。 2．核酸的水解。 3．核糖、脱氧核糖、嘌呤、磷酸的定性鉴定。 主要仪器 离心机
前言 1.本课程主要讲述了哪些实验技术，其中被称为生化实验室中三大实验技术的是？ 答：层析技术、电泳技术、离心技术、分光光度技术、免疫化学技术。其中层析技术、电泳技术、离心技术是生物学的三大实验技术。 第一章生物化学基本操作与要求 1.洗涤液的种类配置与应用 答：（1）铬酸洗液（称取5g重铬酸钾粉末置于250mL烧杯中，加水5mL，尽量使其溶解，慢慢加入浓硫酸100mL，边加边搅拌。冷却后贮存备用，若颜色变绿，表示洗液已失效。）用于洗涤玻璃器皿。（2）浓盐酸，洗去水垢或某些无机盐沉淀。（3）30%硝酸，洗涤CO2 测定仪器及微量滴管（4）45%尿素，洗涤蛋白制剂、血样（5）有机溶剂，洗涤油脂、脂溶性染料（6）去污粉，一般污染物 2.化学试剂的分级 答： 3.什么是准确度、精密度？ 答：准确度表示实验分析测量值与真实值相接近的程度。误差。精密度是指在相同条件下多次测量结果互相吻合的程度，表现了测定结果的再现性。偏差。 4.如何提高实验的准确度、精密度？ 答：准确度：减少系统误差1.仪器校正2.空白试验3.对照实验；精密度：减少偶然误差 1.平均取样 2.多次取样。 第二章层析技术 1.层析技术及其原理 答：层析技术是一种基于被分离物质的物理、化学、生物学特性的不同，使它们在某种机制中移动速度不同而进行分离和分析的方法。 2.名词：固定相、流动相、分配系数 答：固定相：固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂、凝胶、离子交换剂等）也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附、溶解、交换等作用。 流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体等。 分配系数：是指在一定的条件下，某种组分在固定相和流动相中含量的比值， Kd=固定相中的总量/流动相中的总量。 3.层析法的分类 答：按流动相的形式分：气相色谱法1.气固色谱法2.气液色谱法，液相色谱法1.液固色谱法2.液液色谱法；按固定相的形式分：1.柱层析法2.纸层析法3.薄层层析法。 4.几种主要凝胶的中英文名称、型号、及型号数字代表的含义 答：葡萄糖凝胶（dextran型号Sephadex G-10~200数字代表凝胶的吸水率） 聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide主要型号有Bio-Gel P-2~300,数字代表它们的排阻极限的10-3）琼脂糖凝胶（agarose Sepharose,Bio-Gel A）