基因家族分析套路
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WORD版本. 基因家族分析套路(一) 近年来,测序价格的下降,导致越来越多的基因组完成了测序,在数据库中形成了大量的可用资源。如何利用这些资源呢?今天小编带你认识一下不测序也能发文章的思路--全基因组基因家族成员鉴定与分析(现在这一领域可是很热奥);
一、基本分析容 数据库检索与成员鉴定 进化树构建 保守domain和motif分析. 基因结构分析. 转录组或荧光定量表达分析.
二、数据库检索与成员鉴定 1、数据库检索 1)首先了解数据库用法,学会下载你要分析物种的基因组相关数据。一般也就是下面这些数据库了
Brachypodiumdb:.brachypodium.org/ TAIR:.arabidopsis.org/ Rice Genome Annotation Project :rice.plantbiology.msu.edu/. WORD版本.
Phytozome:.phytozome.net/ Ensemble:ensembl.gramene.org/genome_browser/index.html NCBI基因组数据库:.ncbi.nlm.nih.gov/assembly/?term=
2)已鉴定的家族成员获取。 如何获得其他物种已发表某个基因家族的所有成员呢,最简单的就是下载该物种蛋白序列文件(可以从上述数据库中下载),然后按照文章中的ID,找到对应成员。对于没有全基因组鉴定的,可以下列数据库中找:
a. NCBI: nucleotide and protein db. b. EBI: .ebi.ac.uk/. c. UniProtKB:.uniprot.org/uniprot/ 2、比对工具。一般使用blast和hmmer,具体使用命令如下: Local BLAST formatdb–i db.fas–p F/T; blastall–p blastp(orelse) –i known.fas–d db.fas–m 8 –b 2(or else) e 1e-5 –o alignresult.txt.
-b:output two different members in subject sequences (db). WORD版本.
Hmmer (hidden Markov Model) search. Thesame as PSI-BLAST in function. It has a higher sensitivity, but the speed islower.
Command: hmmbuild--informatafaknown.hmmalignknown.fa; hmmsearchknown.hmmdb.fas>align.out. 3、过滤。 Identity: 至少50%. Cover region: 也要超过50%或者蛋白结构域的长度. domain: 必须要有完整的该蛋白家族的。工具pfamdb (pfam.sanger.ac.uk/) 和NCBI Batch CD- search. (.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/bwrpsb/bwrpsb.cgi).
EST 支持 Blast and Hmmer同时检测到 4、通过上述操作获得某家族的所有成员 基因家族分析套路(二) WORD版本.
本次主要讲解在基因家族分析类文章中,进化部分分析的容。主要是进化树的构建与分析。
一、构建进化树的基本步骤 1、多序列比对. Muscle program. 2、Model 选择. 分别针对蛋白序列和核酸序列的模型选择程序。ProtTest program for protein and ModelTest or Jmodetlest for DNA(user.qzone.qq./58001704/blog).
3、算法选择。三种. NJ, ML and BI. 4、软件选择。 MEGA (bootstrap least 1000 replicates), phyML and Mrbayes (user.qzone.qq./58001704/main).
5、进化树修饰. MEGA: view->options and subtree-> draw options. Also can be decorated in word (user.qzone.qq./58001704/main)
二、具体步骤 2.1 多序列比对。一般采用muscle。因为 MUSCLE is one of the best-performing multiple alignment programs according to published benchmark tests, with accuracy and speed that are consistently better than CLUSTALW. WORD版本.
2.2 模型选择。 对于用蛋白序列构建进化树的可以采用下面命令: java -Xmx250m -classpath path/ProtTest.jar prottest.ProtTest -i alignmfile.phy.
运行结果如下图
注意: 1)“.Phy” format. Only allow ten charaters.注意名字不能重复相同。 2)AIC: Akaike Information Criterion framework. 3)Gamma distribution parameter (G): gamma shape. 3)proportion of invariable sites: I.
2.3 构建进化树 WORD版本. WORD版本.
2.3.1 意义: a聚类分析。如亚家族分类。像MAPKKK基因家族通过进化树可以清楚分为 MEKK, Raf and ZIK三个亚家族.
b亲缘关系鉴定。在进化树上位于同一支的往往暗示这亲缘关系很近 c 基因家族复制分析。研究基因家族复制事件(duplication events),两种复制事件类型常采用的标准:
Tandem duplication: Identity and cover region more than 70% and tightly linked (Holub, 2001).
Chromosomal segment duplication: Plant Genome Duplication Database (PGDD: chibba.agtec.uga.edu/duplication/) WORD版本.
2.3.2 进化树。 一般ML树比较准确,但应结合方法,如NJ树,相互验证。 2.3.3 进化部分分析:KaKs计算 2.3.3.1 简单的方法. 可以使用下面的网页PAL2NAL(.bork.embl.de/pal2nal/)
2.3.3.2 标准方法:. a. ParaAT: ParaAT.pl-h test.homologs -n test.cds -a test.pep -p proc –f axt –k -o output
b. KaKs_Calculator –m NG(or else) -i test.axt -o test.axt.kaks c.分歧时间计算:Divergenttime(T) calculation. T=Ks/2λ. λ : mean 5.1-7.1×10-9 . d. Ka/Ks意义: Ka/Ks=1.中性进化。. Ka/Ks<> Ka/Ks>1.正选择。Positively selected genes and produce fitness advantagemutations to evolve new functions. WORD版本.
基因家族分析套路(三) 本节主要讲基因结构分析套路 1、Motif分析
使用软件MEME,命令如下: meme sample.fa -dna –revcomp -nmotifs 10 -mod zoops -minw 6-maxw 50>meme_htmlFormat.html
2、基因结构分布图 可以使用在线GSDS2.0:website:gsds.cbi.pku.edu.cn/
用法如下: WORD版本.
结果展示 3、基因结构常见统计信息:自己excel或写程序统计 a. The number of intron andexon. b. The splicing intronpattern inculding 0,1,2 phase. WORD版本.
c. The marked region. Forexample kinase domain. d. sequence length. e. UTR. 4、启动子分析。 :主要做植物的: bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/
注意事项: a. IE brower. b. Only one sequence for oncesearch and the length was limited in 1000 bp.