2. 培养基的灭菌一般多采用高压蒸气灭菌，灭菌压力为0.1Mpa，即 121 ℃，时间为20min，若培养基中含糖成分的含量较高，一般多采用过滤除菌或减压灭菌，灭菌温度为 115 ℃。
3. 对不同的微生物进行斜面接种时，常根据需要采用不同的接种方法，如细菌和放线菌多采用密波状蜿蜒划线，酵母菌多采用中央划线法，用来观察菌种的形态和培养特征；霉菌多用点接法。
4. 显微测微尺主要由目镜测微尺和镜台测微尺组成. 在进行细胞大小测定之前, 目镜测微尺要先进行标定。
5．枯草芽孢杆菌经过革兰氏染色后，菌体部分呈紫色，芽孢颜色为无色。
6．三糖铁高层琼脂斜面中含有的糖主要有葡萄糖、乳糖和蔗糖三种，培养基中加入了指示剂酚红, 它在pH小于6.8时为黄色, 大于8.4时为红色。伤寒沙门氏菌在该培养基里生长时，只能利用葡萄糖产酸，产酸量也小。处于高层琼脂斜面表面的有机酸有的挥发，有的被氧化，很快消失。因此，表面黄色在短时间内也消失了。又因伤寒沙门氏菌分解氨基酸等产生碱性物质，所以高层琼脂斜面表面又转成红色。而底层在比较短的培养时间为黄色。而大肠杆菌在该培养基中生长时，能利用其中所有的糖，培养基上下全为黄色。
7．根据微生物菌种保藏的原理，一般微生物菌种保藏常需满足的条件是：低温、干燥、__缺氧（隔绝空气）。
8．糖发酵实验中加杜氏管的目的是便于观察产气现象。
9. 乳糖胆盐发酵培养基（大肠菌群测定）中加入胆盐的目的是抑制革兰氏阳性菌的生长。
10．革兰氏染色中对染色标本进行固定的目的是：杀死微生物固定细胞结构、防止标本被水冲掉、改变染料对细胞的通透性。
值低，且还原能力强。当某种无毒的染料进入活细胞后，可以被还原脱色；当染料进入死细胞后，这些细胞因无还原能力或还原能力差而被着色。在中性和弱酸性条件下，活的细胞原生质不能被染色剂着色，若着色则表示细胞已经死亡，故可以此来区分活菌和死菌。
方法：取0.05%美蓝液一滴，置载玻片中央，然后取酵母液少许加入美蓝液中混匀，染色2~3分钟，加盖片，于高倍镜下进行观察，并计数已变蓝的细胞（可计5~6个视野的细胞总数）。
计算公式：
3. 简述湿热灭菌比干热灭菌更有效的原因。
答：在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。
4. 简述革兰氏染色的原理和操作步骤。
答：革兰氏染色的机理主要是利用两类细菌的细胞壁成分和结构的不同。革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多的类脂质，而肽聚糖的含量较少。当用乙醇或丙酮脱色时，类脂质被溶解，增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后，又染上复染剂的颜色。而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的含量多且交联度度大，类脂质含量少，经乙醇或丙酮洗脱后，肽聚糖的孔径变小，通透性降低，因此细胞仍保留初染时的颜色。
革兰氏染色的一般过程主要包括制片，固定，结晶紫初染1分钟，碘液媒染，95%乙醇脱色30s，番红复染30s，水洗和镜检等步骤。
内预置适当数量的玻璃珠）内，经充分振荡作成1:10的均匀稀释液。用1ml无菌吸管吸取1:10稀释液1ml，注入含有9ml无菌生理盐水的试管内，振摇试管使管内溶液混均，作成1:100的稀释液。另取1ml无菌吸管，按上项操作依次作10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml无菌吸管。根据食品卫生标准要求或对被检样品污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种乳糖胆盐发酵管3支。
3.乳糖胆盐发酵
将被检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃培养箱内，培养24±2h，如果所有糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，继续进行检验。
4.分离培养
将产气的发酵管的菌液分别划线接种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养箱内，培养18～24h，观察菌落形态，并作革兰氏染色和复发酵证实试验。
5.复发酵证实试验
在伊红美蓝琼脂平板上挑取：①紫红色、具有金属光泽的菌落；②深红色、不带或略带金属光泽的菌落；③淡红色、中心着色较深的菌落。具有以上特征的菌落为可疑菌落，挑取1～2个进行革兰氏染色，同时对应接种到乳糖发酵管内进行复发酵，置36±1℃培养箱培养24±2h，观察产气情况。凡在乳糖发酵管内产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即报告为大肠菌群为阳性。
6.报告
根据复发酵证实试验得到大肠菌群阳性管的管数，查MPN检索表，报告每100ml（或100g）检样中大肠菌群的最可能数。
