接种箱使用规程
1、接种箱必须放在清洁环境中使用。使用前，先用清水擦洗外壁，再用2%来苏尔溶液清洗内壁和接种用具。
2、按甲醛10mL/m3+高锰酸钾7g/m3对接种箱进行熏蒸处理。先将高锰酸钾倒入容器中，再加甲醛，迅速盖好箱盖，利用产生的甲醛气体密闭熏蒸12小时以上。
3、打开箱门通风30分钟，无明显刺激性气味时准备装箱。
4、接种完毕要及时清扫掉落在箱内的培养物和棉球等杂物，擦拭干净接种用具，并用清水擦拭箱内壁，再用甲醛10mL/m3+高锰酸钾7g/m3熏蒸接种箱，以备再用。
接种的无菌操作规程
1、接种前对接种箱进行彻底消毒，并准备好接种工具。
2、操作人员用肥皂或消毒液洗手后装入菌包、菌种、接种工具等必须物品，点燃菇保，立即关闭箱门进行消毒。
3、操作人员工作前换好工作服，并戴口罩，手套。
4、操作人员在接种箱外用75%酒精棉擦拭双手，双手伸进箱内后，再用75%酒精棉球擦拭双手，接种工具及菌种，点燃酒精灯，进行接种。在接种过程中，不能向箱内传递物品，以免造成杂菌污染。
5、酒精灯火焰不可过小，否则会缩小无菌区范围。
6、二级菌种袋口需要用酒精灯火焰无菌区封闭，接种必须在无菌区内进行，注意避免烧伤菌种。
7、接种工具在使用前，应用火焰灼烧灭菌，接种工具需要进入菌袋的部分，不得与未灭菌的物体接触，棉塞塞入袋口的部分拔出后不得与未灭菌的物体接触。 8、接种要做到“轻、快、准”：“轻”指接种动作幅度不要太大，尽量减少空气流动；“快”指接种动作要快，避免菌种和培养料在空气中停留的时间过长；“准”指接种动作要准确到位，接种工具放置有序。
9、接种过程中，不得把手伸出接种箱。
二级种接种操作的具体过程
1、将接种物品搬进接种箱菌包摆在接种箱的左侧（左撇子放在右侧，下面的左右均互换），摆好接种用具，向箱内喷新吉尔灭。
2、将检查好的菌种用消毒液擦拭或喷洒后，放入接种箱内。
3、用菇保熏箱25分钟后，接种。
4、接种前，操作人员戴好口罩、手套，在接种箱外用75%酒精棉擦拭双手，双手伸进接种箱后，再次用75%酒精棉擦拭双手，特别是手指及指尖。
5、接种耙用75%酒精棉擦拭。点燃酒精灯，接种耙在火焰上灼烧灭菌，灼烧长度为略大于一个试管长。
6、右手握住接种耙柄的顶端，取一支试管种用75%酒精棉消毒试管外壁。拔掉棉塞，用火焰灼烧试管口，灼烧时应不断转动管口，将试管口上沾染的少量杂菌烧死。
7、将接种耙伸入到菌种试管内，先接触一下没有长菌种的培养基或内壁，待接种耙冷却后，刮去爬壁的气生菌丝，根据不同菌种选择是否刮去培养基表面的气生菌丝（金针菇的气生菌丝需要刮掉，白灵菇、猴头菇的气生菌丝不能刮掉）。
8、用接种耙将菌种培养基横向切成1cm宽的菌种块，培养基离试管口近的部分由于薄可切的更宽些，一支20mmX200mm规格的试管种可切成8块。然后将接种耙放在试管内，试管
放在试管架上，试管口要在酒精灯的无菌区内。
9、有少许75%酒精棉擦拭接种小钩，再在火焰上灼烧灭菌。将小钩戴在右手中指上，
小钩位于手背侧。小钩不能碰触任何未灭菌的地方，如果碰到则应在火焰上反复灼烧灭菌。
10、左手取菌包，将其紧挨酒精灯放置，左手把住套环，右手拔下棉塞，握在手里，用在火焰上灼烧后的小钩钩出预埋棒（每次拔棉塞前都要灼烧一次），左手拿起试管种用接种耙将刚切好的小菌块再纵向切一刀，分成两块（培养基离试管口近的部分仍横向切），每个菌包接入二次切好的菌块3块。 11、迅速将棉塞过火后塞好。
12、将接好菌种的菌包放在接种箱的右侧。摆时仍注意不能将料挤散。
接种操作注意事项
接种操作的程序中任何环节都很重要，稍有不慎，就会导致失败。以下几个方面要特别注意：1、菌包温度降至30oC以下方可接种，接种箱温度不应超过30oC，高温季节可在一日内气温较低时操作，或采取降温措施。
2、装箱时从筐中取菌包要拿包身，不可提袋口套环装箱，出箱、上架时亦是不可提套环。装、出箱时菌包不能随意磕碰，以免碰散培养料或碰坏菌袋。在箱内摆包时也不要过分挤压，以免使培养料过松无法摇菌上架。
3、酒精灯火焰要高影响酒精灯火焰大小的因素主要是酒精的浓度和灯芯。酒精浓度越高，燃烧越好，所以，要使用95%高浓度的工业酒精。如果灯芯材料太实，塞得又紧，内吸的酒精太少，火就不旺。灯芯最好用棉花捻制，并拔出适当长度。
4、接种物和被接种的容器口要消毒灭菌接种操作前要将试管口用75%酒精棉球擦拭。被接种的袋口一定不可远离酒精灯火焰。
5、一切暴露菌种和基质的操作必须在火焰上方进行菌种和被接种的袋子必须在火焰上方打开，打开后就不能离开火焰，一直到接种操作完成封闭好。因为只有火焰周围很小的范围内的空间才是绝对无菌的。
6、接种工具一定要灼烧彻底接种用的接种耙、接种钩、接种勺等要在火焰上灼烧彻底，并注意工具的长度。接种工具灼烧长度以伸进试管的长度为度，重点是取种接种的部位，以上部分在火焰上方反复灼烧3~5次即可。
7、接种工具灼烧后要冷却火焰灼烧灭菌后若直接切取菌种，温度太高会烫死菌种。 8、接种工具的无菌状态接种工具经火焰灼烧后其接触菌种的部位已达到绝对无菌状态。在其接触菌种前绝对不可碰触任何非无菌状态的物品。一旦碰触一定要重新灭菌。 9、棉塞的无菌状态大包棉塞操作中要保持无菌状态。在操作中将棉塞露在袋子外面的部分用手指夹起，塞入袋内的部分不可碰触，更不可拔下后置于台上。一旦不慎落地，要在火焰上反复灼烧后方可使用。
10、接种完毕后，要及时清理接种箱，排出接种时酒精燃烧放出的废气。
