培养基配方

429

附录A -淡水和海水介质的配方

1.0. 淡水养殖媒体，431

2.0.海洋文化传媒，487

1.1.淡水合成培养基，431

2.1.人造海水媒体，487

1.2.富含天然淡水媒体，476 2.2.丰富的天然海水媒体，501

1.3.土壤-水富集淡水介质，478

2.

3.丰富的天然海水+有机物，521

1.4.富含有机物的淡水媒体，482

2.4.土壤-水富含天然海水介质，524 1.5.用于淡水菌的细菌-真菌测试培养基，485 2.5.海水的细菌-真菌测试介质，527

以下培养基配方和培养方案是文献中不完整的汇编和本卷的贡献者。虽然我们尝试将此信息编辑为方便且一致的格式，但我们并未尝试测试或验证单个配方。即便如此，随后的汇编应证明是对各种广泛使用的藻类培养基的有用指南。培养基配方提供组分及其浓度; 有关更多准备细节，请参阅第2章至第4章。培养基配方适用于培育已建立的藻类菌株; 为了分离或纯化单一生物，营养物质可能需要减少10到10,000倍，这取决于藻类的敏感性（见第6-9章）。对于已建立菌株的传代培养，参见第10章和第11章。其他配方可在网站上找到（见表A.1）

包括天然海水在内的水质非常重要。缩写dH2O通常指蒸馏水，去离子水，蒸馏水/去离子水，Milli-Q水（Millipore Corp.）等。随着培养应用变得更加关键，水的质量也变得更加关键。天然海水（和天然淡水）应从非污染源获得。对于贫营养（开阔海洋）浮游植物，应从开阔的海洋地点获取天然水。溶解化学品时，等待第一个组分溶解后再添加第二个组分。通常需要搅拌（有时是加热）以有效地溶解化学品。在许多情况下，储备溶液的制备不仅方便，而且还必须避免称量非常小的量的错误。应注意最终培养基的pH值。在大多数情况下，如果是需要调节pH，要在灭菌前发生。

表I.主要服务培养集合及其互联网网站上的培养基配方。有关其他培养集合，请参阅：http：//wdcm.nig.ac.jp/hpcc.html。

430

请注意，高压灭菌会将二氧化碳从缺乏碳酸盐稳定缓冲液的介质中排出，这使得介质在从高压灭菌器中取出后立即呈现极性碱性。在这些情况下，在将细胞

接种到培养基中之前，等待大约24小时进行气体平衡。高压灭菌后，天然海水可能会产生沉淀物（见第3章）。一般来说，无机原料应进行高压灭菌并无菌处理。硅酸盐原料最好储存在深色的特氟隆衬里瓶中。如果藻类生长不需要硅酸盐，则可以通过将其留在培养基中来避免潜在的沉淀问题。大多数痕量金属溶液都与EDTA螯合（见第4章）。在制备EDTA缓冲的痕量金属溶液时，在溶解金属之前溶解EDTA。普通维生素（硫胺素·HCl，B1，B12）的储备溶液应在无菌，冷冻安全的容器中分配成小体积，然后冷冻（例如，1-mL Eppendorf管或10-mL聚碳酸酯螺旋盖管）。如果过滤除菌并在高压灭菌后无菌添加，维生素保留更多效力（参见第2,3和5章）。如果首先酸化，可以对储备溶液进行高压灭菌。可以将来自维生素储备溶液的等分试样添加到最终培养基中并进行高压灭菌，通常对藻类生长具有很小的破坏作用。然而，维生素应该是制备培养基时添加的最后一种成分，其他成分应该充分混合。

通常，将配方标准化为1,000（例如，g，mg，mg; 1mL，1L）的因子，并且以1升的量描述储备溶液。但是，通过将组分的量减少10，可以容易地制备100mL的储备溶液。我们计算了最终培养基中每种成分的摩尔浓度，以便在各种培养基之间进行简单比较。此外，大多数储备溶液使用的1 mL数量允许使用传统的无菌玻璃（和一次性塑料）移液器以及带有无菌吸头的1,000mL自动移液器。

介质按照以下概要进行组织，并且在每个标题内，个体培养介质按字母顺序排列。已经列出了已知在培养基中生长的藻类; 偶尔会在配方后列出简单的修改。

431

1.1淡水合成培养基（Freshwater Synthetic Culture Media）

AF6 Medium, Modified

(Kato 1982, Watanabe et al. 2000)

AF-6培养基由Kato（1982）开发用于培养Colacium（Euglenophyceae），但广泛应用于需要微酸性培养基的藻类。通过除去碳酸钙（1.00¥10-4M），加入MES缓冲液，并使用不同的痕量金属混合物，对其进行了修改（Watanabe等人，2000）。它已被用于培养volvocalean藻类（例如，Carteria，Gonium，Chlorogonium，Pandorina，Paulschalzia，Platydorina，Pleodorina，Pteromonas，Pseudocarteria和某些种类的Volvox），黄叶植物Botrydiopsis arrhiza Borzi和Botrydium granulatum（L.）Greville，许多隐孢子虫，甲藻（Perofnium bipes）Stein f。 globosum Lindermann，synurophyte Synura sphagnicola（Korsh。）Korsh。，euglenoids Phacus agilis Skuja，Euglena clara Skuja和E. mutabilis Schmitz，以及绿色纤毛虫Paramecium bursaria。半强度AF-6培养基用于维持淡水鞭毛虫Hemidinium nasutum Stein和Peridinium plonicum Woloszynska（Watanabe等人，2000）。准备库存解决方案。在950mL的dH2O中，首先溶解MES，Fe柠檬酸盐和柠檬酸盐;然后添加原液，使最终体积达到1升。将pH调节至6.6，高压灭菌。

432

微量金属解决溶液（Trace Metals Solution）准备主要储备溶液。加入950mL的dH2O，溶解EDTA，然后分别溶解金属，最后加入1mL的两种原料。

AF6维生素溶液（AF6 Vitamin Solution）

准备主要储备液。向950mL的dH2O中加入并溶解硫胺素·HCl，然后从两种原料中加入1mL。过滤消毒。冷藏或冷冻。

433

Allen’s Cyanidium Medium, Modified

(M. B. Allen 1959, Watanabe et al. 2000)

Mary Belle Allen（1959）开发了这种用于培养Cyanidium caldarium