实验一植物组织培养实验室的构造和功能
一、目的要求：
掌握如何组建植物组织培养实验室，熟悉组培中设计的各种仪器设备和器皿用具。
二、仪器与用具
超净工作台、空调机、蒸馏水发生器、高压灭菌锅、低温冰箱、普通冰箱、电磁炉、各种电子天平、pH仪器等设备，以及各种试验器皿和器械用具等。
三、方法步骤
1.了解组织培养实验室守则以及有关注意事项。
2.掌握仪器设备和器皿用具的名称与用途以及实验室的构造。
3.参观组培实验室的构建情况，包括准备室（化学实验室）、缓冲室、无菌操作室（接种室）和培养室的设计要求，以及内部仪器设备的名称及其作用。
四.实验报告
1.将本次实验内容整理成实验报告
2.设计一个植物组织培养实验室的组建方案。
实验二 MS培养基母液的配制与保存
一、目的要求
通过MS培养基母液的配制与保存，掌握配制与保存培养基母液的基本技能。
二、材料与用具
配制MS培养基所需的药品（见附表）。植物生长调节物质、各类天平、烧杯、容量瓶、蒸馏水、0.1mol/L的NaOH、0.1mol/L的HCl、母液瓶、标签、冰箱等。
三、方法与步骤
1.母液的配制
(将MS母液配置表画在黑板上，举例讲解母液的配制过程，包括称量、溶解、定容三步，再将班级分为五个组进行配制)
2.植物生长调节物质母液的配制
①称量：用微量0.001或0.0001的分析天平或由电子天平准确称取生长素（或细胞分裂素）50mg。
②溶解：生长素（如IAA、IBA、NAA、2、4-D）可用少量的0.1mol/LNaOH溶解，细胞分裂素（如KT、ZT、6-BA）可用0.1mol/L的HCl加热溶解。
③定溶：将溶解的植物生长调节物质倒入50ml容量瓶，用水冲洗小烧杯数次，最后加蒸馏水定容至50ml，配制成浓度为1mg/ml的溶液。
3.母液的保存
①装瓶：将配好的母液分别倒入瓶中，贴好标签，注明培养基名称、母液号、配制倍数（或浓度）以及配制日期。
②储藏：将母液瓶储放在4℃冰箱内备用。
四、实验报告
将本次实验内容整理成实验报告（叙述母液配置过程）。
附表 MS培养基母液配制（单位：mg）
注意：配制前核实各种化学成分的含水量
实验三固体培养基的配制
一、目的要求
通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。
二、材料与用具
MS培养基母液、植物生长调节剂、琼脂、蔗糖、蒸馏水、移液管、量筒、容量瓶、电磁炉、酸度计、0.1mol/LNaOH(HCl)、培养瓶、记号笔等。
三、方法与步骤
1．按母液顺序和规定量，用量筒和移液管提取母液，放入1000ml的容量瓶中，MS1-100ml、MS2-100ml、MS3-10ml、MS4-10ml、MS5-10ml。
2.加入植物生长调节剂，加入的种类与数量，视培养物不同而异，有时也可不加。
3.加入蔗糖若干，溶解定容至1000ml，再放入9g琼脂。
4.调整PH值，经酸度计测试，用0.1mol/LNaOH（HCl）把培养基PH值调整至
5.8-
6.0。
5.在电磁炉上加热溶液，并不断搅拌，使琼脂不断熔化。
6.分装培养基，把配好的培养基分装到50-150ml的培养瓶中，分装后立即加盖封口，用记号笔注明培养基名称。
四、实验内容
配制火鹤培养基：MS+NAA0.2 mg/mL +蔗糖30g+琼脂9g，PH5.8-6.0。
五、实验报告
根据实验内容总结出固体培养基配制的具体过程。
实验四培养基和培养用具的灭菌
一、目的要求
通过对培养基和培养用具的灭菌，掌握高压灭菌和干热灭菌的一般操作技术。
二、材料与用具
培养皿、三角瓶、注有培养基的培养瓶、装有蒸馏水的玻璃瓶、牛皮纸、镊子、剪刀等金属器械、高压灭菌器、烘箱等。
三、方法与步骤
1.高压灭菌锅：
①洗涤
②包扎
③装水（需淹没电热丝）
④灭菌：把需灭菌的物品放入高压灭菌锅内，当压力达120kpa，锅内的温度为121℃时，保持30min。关掉开关，打开放气阀，让灭菌锅自然冷却。
⑤储藏：待灭菌锅内的气体放尽，把物品从灭菌器中取出，培养基要放置在温度低于30℃，没有强光照射的专用柜中备用。
2.干热灭菌
①洗涤
②灭菌：把洗涤干净的玻璃器皿放到烘箱中，在150℃温度下，干热灭菌1h或120℃温度下2h灭菌完毕，待冷却后取出。
四、实验报告
高压灭菌前后应注意哪些事项？
实验五无菌操作技术
一、目的要求
通过在超净工作台上进行无菌操作训练，初步掌握组织培养的无菌操作技术。
二、材料与用具
超净工作台、70%的酒精、95%的酒精、盛有培养基的培养瓶、接种器械（解剖刀、剪刀、镊子等）、酒精等、培养材料（根、茎、叶或种子等）、0.1%的升汞或“84”灭菌液、无菌水等。
三、方法步骤
1.用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室。
2.打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射20min。
3.操作前10min使超净工作台处于工作状态，让过滤室空气吹拂工作台面和四周的台壁。
4.照射20min后，关闭紫外灯。
5.用70%的酒精擦拭工作台和双手。
6.用蘸有70%酒精的纱布擦拭装有培养基的培养器皿，放入工作台。
7.用解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%酒精中，在火焰上灭菌后，放在器械架上。
）中8.把培养材料放进70%的酒精中浸泡30s,再用0.1%的升汞（氯化汞，HgCl
2
浸泡10min,或在“84”灭菌液（经无菌水1：1的稀释）中浸泡10-15min,浸泡时可进行搅动，使植物材料与灭菌剂有良好的接触，然后用无菌水冲洗4-5次。
9.用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到，打开瓶口。
10.取下接种器械，在火焰上灭菌。
11.将灭菌后的培养材料在无菌的培养皿中切割成1×1cm大小，然后放入培养瓶，盖上瓶口。操作期间应经常用70%酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在95%的酒精中浸泡和在火焰上灭菌。
12.接种结束后，清理和关闭超净工作台。
四、实验报告
1.将本次实验内容整理成实验报告。
2.接种一周后，观察接种材料的污染情况，并分析污染原因。
