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MK8719激活STAT6并促进抗炎型小胶质细胞活化在缺血性脑损伤大鼠中发挥保护作用的研究李怡心;游艳;周杨;彭莉【期刊名称】《重庆医科大学学报》【年(卷),期】2024(49)4【摘要】目的:观察氧连接N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)水解酶抑制剂MK8719在脑缺血损伤大鼠中的作用。
方法:建立大鼠大脑中动脉梗塞模型模拟脑缺血再灌注损伤,通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色评估脑梗死体积,并通过改良的神经损伤评分量表评估大鼠的神经运动障碍减轻,HE和尼式染色用于评估脑损伤后组织改变,组织免疫荧光染色用于评估抗炎型小胶质细胞活化情况。
体外培养BV2小胶质细胞并建立氧糖剥夺/复糖复氧模型模拟缺血缺氧再灌注损伤,Western blotting检测总蛋白及核蛋白中的信号转导及转录激活蛋白6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)、磷酸化STAT6及O-GlcNAc糖基化STAT6表达。
酶联免疫吸附检测(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)评估小胶质细胞释放的炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)量。
结果:MK8719给药组大鼠梗死灶体积减小,神经运动障碍,抗炎型小胶质细胞比例增加;在体外培养的小胶质细胞中,MK8719组的O-GlcNAc糖基化STAT6、磷酸化STAT6及核STAT6表达增加(P<0.001),促炎因子(IL-6及IL-1β)释放减少(P<0.001),抗炎因子(IL-10及TGF-β)释放增加(P<0.001)。
・１４４・【８】ＴＡＬＷＡＬＫＡＲＪＡ，ＫＵＲＴＺＤＭ，ＳＣＨＯＥＮＬＥＢＥＲＳＪ，ｅｔａ１．Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ—ｂａｓｅｄｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓ：ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗａｎｄｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ明．ＣｌｉｎＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＨｅｐａｔｏｌ，２００７，５（１０）：１２１４—１２２０．【９】王宇，贾继东．Ｆｉｂｒｏｓｃａｎ评价肝纤维化进程【Ｊ】－肝脏，２００７，（５）：３３６—３３８．『ｌＯ］ＬＡＭＰＲＯＹＥＡ，ＢＥＬＡＩＣＨＥＪ，ＤＥＬＷＡＩＤＥＪ．ＴｈｅＦｉ—ｂｒｏｓｅａｎ：ａｎｅｗｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅｍｅｔｈｏｄｏｆｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｅｖａｌｕ—ａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＲｅｖＭｅｄＬｉｅｇｅ，２００７，６２：６８－７２．［１１】ＨＡＮＫＨ，ＹＯＯＮＫＴ．Ｎｅｗｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｍｅｔｈｏｄｆｏｒｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓａｎｄｃｉｒｒｈｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００８，５１（１）：１１－１６．［１２】ＤＥＦＲＡＮＣＨＩＳＲ，ＤＥＬＬ＇ＥＲＡＡ，ＰＲＩＭＩＧＮＡＮＩＭ．Ｄｉａｇ－ｎｏｓｉｓａｎｄｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｏｆｐｏｒｔａｌｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］．ＤｉｇＬｉｖｅｒＤｉｓ，２００８，４０（５）：３１２—３１７．【１３１ＪＵＮＧＨＳ，ＫＩＭＹＳ，ＫＷＯＮＯＳ，ｅｔａ１．Ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓｏｆｌｉｖｅｒｓｔｉｆｆ－ｎｅｓｓｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｆｏｒｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｖａｒｉｃｅ￥ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｌｉｖｅｒｃｉｒｒｈｏｓｉｓ［Ｊ］．ＫｏｒｅａｎＪＨｅｐａｔｏｌｃ，２００８。
１４（３）：３４２－３５０．【１４】李林芳，戴琳，张琪，等．瞬时弹性记录仪检测肝纤维化影响因素及稳定性分析【Ｊ】．南京医科大学学报，２００８，２８（４）：５９５－５９７．ＦＯＵＣＨＥＲＪ，ＣＡＳＴＥＲＡＬ，ＢＥＲＮＡＲＤＰＨ，ｅｔａ１．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅａｎｄｆａｃｔｏｒｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｆａｉｌｕｒｅｏｆｌｉｖｅｒｓｔｉｆｆｎｅ８８ｍｅａｓｕｒｅ～ｍｅｎｔｕｓｉｎｇＦｉｂｒｏｓｃａｎｉｎａｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆ２１１４ｅｘａｍｉ—ｎａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＥｕｒＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＨｅｐａｔｏｌ，２００６，１８（４）：４１１—４１２ＣＨＡＮＧＰＥ，ＬＵＩＨＦ，ＣＨＡＵＹＰ，ｅｔａ１．Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｅｖａｌｔ／ａ—ｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙｆｏｒｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎＡｓｉａｎｓ：ｃｏｍｐａ“ｓｏｎｗｉｔｈｌｉｖｅｒｂｉｏｐｓｙａｎｄａｓｐａｒ—ｔａｔｅｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅｐｌａｔｅｌｅｔｒａｔｉｏｉｎｄｅｘ叨．ＡｌｉｍｅｎｔＰｈａｒｍａ—ＣＯｌＴｈｅｒａｐｅｕｔ，２００８。
生命科学仪器 2023年第21卷/第6期研究报告65项目来源:河北省中医药管理局中医药类科研指令性计划课题(2021444)黄芪多糖调控T X N I P /N L R P 3炎症小体对高糖诱导的人视网膜内皮细胞凋亡的作用机制陶雯璇 李君卿 张元坤 张京红(张家口市第四医院,河北张家口075000)摘要 目的探究黄芪多糖调控T X N I P /N L R P 3炎症小体对高糖诱导的人视网膜内皮细胞凋亡的作用机制㊂方法将h R E C s 细胞随机分为C o n t r o l 组㊁H G 组㊁A P S 组和A P S +p c D N A 3.1-T X N I P 组㊂采用C C K-8和流式细胞仪检测细胞存活率和凋亡率;D C F H-D A 荧光探针检测活性氧(R O S)水平;检测细胞中氧化应激和炎症因子水平;蛋白质印迹法检测细胞中T X N I P ㊁N L R P 3㊁I L -1β和ca s p a s e -1蛋白表达㊂结果和C o n t r o l 组相比,H G 组细胞存活率㊁S O D 活性和G S H-P x 含量明显降低,细胞凋亡率㊁R O S 相对荧光强度㊁M D A 含量㊁I L -1β和IL -18含量及细胞中T X -N I P ㊁N L R P 3㊁I L -1β㊁c a s p a s e -1蛋白表达明显增加(P <0.05);和H G 组相比,A P S 组细胞存活率㊁S O D 活性和G S H -P x 含量明显增加,细胞凋亡率㊁R O S 相对荧光强度㊁M D A 含量㊁I L -1β和IL -18含量及细胞中T X N I P ㊁N L R P 3㊁I L -1β㊁c a s p a s e -1蛋白表达明显降低(P <0.05);和A P S 组相比,A P S +p c D N A 3.1-T X N I P 组细胞存活率㊁S O D 活性和G S H-P x 含量明显降低,细胞凋亡率㊁R O S 相对荧光强度㊁M D A 含量㊁I L -1β和IL -18含量及细胞中T X N I P ㊁N L R P 3㊁I L -1β㊁c a s p a s e -1蛋白表达明显增加(P <0.05)㊂结论黄芪多糖可抑制高糖诱导的视网膜内皮细胞凋亡㊁炎症反应和氧化应激损伤,其作用机制可能和抑制T X N I P /N L R P 3通路激活有关㊂关键词 黄芪多糖;高糖诱导的视网膜内皮细胞;凋亡;T X N I P /N L R P 3通路M e c h a n i s m o f a s t r a g a l u s p o l y s a c c h a r i d e m o d u l a t i o n o f T X N I P /N L R P 3i n f l a m m a t o r y ve s i c l e s o n h i g h g l u c o s e -i n d u c e d a p o pt o s i s i n h u m a n r e t i n a l e n d o t h e l i a l c e l l s T a o W e n x u a n L i J u n q i n g Z h a n g Y u a n k u n Z h a n g J i n g h o n g (Z h a n g j i a k o u F o u r t h H o s p i t a l ,Z h a n g ji a k o u 075000,C h i n a )ʌA b s t r a c t ɔO b je c t i v e :T o i n v e s t i g a t e t h e m e c h a n i s m of A s t r ag a l u s p o l y s a c ch a ri d e m o d u l a t i n g T X N I P /N L R P 3i n f l a m m a t o r y v e s i c l e s o n h i g h g l u c o s e -i n d u c e d a p o p t o s i s i n h u m a n r e t i n a l e n d o t h e l i a l c e l l s .M e t h o d s :T h e h R E C s c e l l s w e r e r a n d o m l yd i v i de d i n t o C o n t r o l g r o u p ,H G g r o u p ,A P S g r o u p ,a n d A P S +p c D N A 3.1-T X N I P g r o u p s .C e l l s u r v i v a l a n d a p o pt o s i s w e r e d e t e c t e d b y C C K -8a n d f l o w c y t o m e t r y ,r e s p e c t i v e l y ;r e a c t i v e o x y g e n s p e c i e s (R O S )l e v e l s w e r e d e t e c t e d b y DC F H -D A f l u o r e s c e n t p r o b e ;o x i d a t i v e s t r e s s a n d i n f l a m m a t o r yf a c t o r l e v e l s w e r e d e t e c t e d i n t h e c e l l s ;a n d T X N I P ,N L R P 3,I L -1β,a n d c a s p a s e -1p r o t e i n e x p r e s s i o n w e r e d e t e c t e d i n t h e c e l l s b y p r o t e i n b l o t t i n g .R e s u l t s :C o m p a r e d w i t h t h e C o n -t r o l g r o u p ,t h e c e l l s u r v i v a l r a t e ,S O D a c t i v i t y a n d G S H-P x c o n t e n t w e r e s i g n i f i c a n t l y l o w e r i n t h e H G g r o u p,a n d t h e a p o p t o s i s r a t e ,r e l a t i v e f l u o r e s c e n c e i n t e n s i t y o f R O S ,M D A c o n t e n t ,I L -1βa n d I L -18c o n t e n t ,a n d t h e e x p r e s s i o n o f T X N I P ,N L R P 3,I L -1β,a n d c a s p a s e -1p r o t e i n s i n t h e c e l l s w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d (P <0.05);C o m p a r e d w i t h t h e H G g r o u p ,t h e c e l l s u r v i v a l r a t e ,S O D a c t i v i t y a n d G S H-P x c o n t e n t i n t h e A P S g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d ,a n d t h e a p o p t o s i s r a t e ,r e l a t i v e f l u o r e s c e n c e i n t e n s i t y o f R O S ,M D A c o n t e n t ,I L -1βa n d I L -18c o n t e n t ,a n d c e l l u l a r e x p r e s -s i o n o f T X N I P ,N L R P 3,I L -1β,a n d c a s p a s e -1p r o t e i n s w e r e s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d (P <0.05);C o m p a r e d w i t h t h e A P S g r o u p ,c e l l s u r v i v a l ,S O D a c t i v i t y a n d G S H-P x c o n t e n t w e r e s i g n i f i c a n t l y l o w e r i n t h e A P S +p c D N A 3.1-T X N I P g r o u p ,a n d a p o p t o s i s r a t e ,r e l a t i v e f l u o r e s c e n c e i n t e n s i t y o f R O S ,M D A c o n t e n t ,I L -1βa n d I L -18c o n t e n t ,a n d c e l l u l a r e x -p r e s s i o n o f T X N I P ,N L R P 3,I L -1β,a n d c a s p a s e -1p r o t e i n s w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d (P <0.05).C o n c l u s i o n :A s t r a g a -l u s p o l y s a c c h a r i d e i n h i b i t s h i g h g l u c o s e -i n d u c e d a p o p t o s i s ,i n f l a m m a t o r y r e s p o n s e a n d o x i d a t i v e s t r e s s d a m a ge i n r e t i n a l e n -d o t h e l i a l c e l l s ,a n d i t s m e c h a n i s m of a c t i o n m a y b e r e l a t e d t o t h e i n h i b i t i o n o f T X N I P /N L R P 3p a t h w a y ac t i v a t i o n .ʌK e y wo r d s ɔA s t r a g a l u s p o l y s a c c h a r i d e ;h i g h g l u c o s e -i n d u c e d r e t i n a l e n d o t h e l i a l c e l l s ;a p o p t o s i s ;T X N I P /N L R P 3p a t h -w a y中图分类号:R 45 文献标识码:A D O I :10.11967/2023211213糖尿病视网膜病变(d i a b e t i c r e t i n o p a t h y,D R )是糖尿病常见的一种微血管病变,主要病变为人视网膜内皮细胞(h u m a n r e t i n a l e n d o t h e l i a l c e l l s ,h R E C s)功能障碍,其也是视力丧失的主要原因,影响患者的生活质量[1]㊂D R 发病机制复杂,近年来研究发现[2],慢性视网膜炎症是导致D R 发病的主要因素,当白细胞浸润到视网膜释放炎性递质,通过破坏血-视网膜屏障(b l o o d r e t i n a l b a r r i e r ,B R B )使血管渗漏和新血管形成㊂核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(n u c l e o t i d e -b i n d i n g o l i go m e r i z a t i o n d o -m a i n -l i k e r e c e pt o r p r o t e i n 3,N L R P 3)炎症小体会破坏B R B 参与D R 进程[3];N L R P 3还能通过结合研究报告生命科学仪器 2023年第21卷/第6期66其介质硫氧还蛋白相互作用蛋白(t h i o r e d o x i n -i n -t e r a c t i n g pr o t e i n ,T X N I P )激活N L R P 3炎症小体[4]㊂由此可见,抑制T X N I P /N L R P 3通路激活可能是治疗D R 的新靶点㊂黄芪多糖(a s t r a g a l u s p o l y s a c h a r -i n ,A P S)是黄芪中一种活性最强的有效成分,现代研究证实[5],A P S 具有多种生物学功能,如抗氧化㊁抗炎㊁抗凋亡㊁改善微循环等,但其对D R 的作用及机制报道较少㊂因此,本研究通过D R 体外实验模型,旨探究A P S 能否调控T X N I P /N L R P 3炎症小体影响D R 发生发展㊂1 材料与方法1.1 试剂与仪器 人视网膜内皮细胞(h R E C s)购自中国科学院上海细胞库㊂黄芪多糖(国药准字Z 20040085,天津赛诺制药有限公司,规格250m g/瓶);T X N I P ㊁N L R P 3㊁I L -1β和ca s p a s e -1抗体(英国A n c a m 公司);T X N I P 过表达载体(pc D N A 3.1-T X N I P )(广州瑞博生物公司);细胞活力/毒性(C E L L C O U N T I N G K I T-8,C C K-8)试剂盒㊁氧化应激指标检测试剂盒及炎症因子E L I S A 检测试剂盒(南京健成生物研究所);流式细胞仪检测试剂盒(美国B D 公司);低温高速离心机(型号:M i -c r o 17R ,德国T h e r m o 公司);酶标仪(型号C M a x -P l u s ,美国M o l e c u l a r D e v i c e s 公司);显微镜(型号A E 2000型,美国M o t i c 公司)㊂1.2 细胞培养及分组 将h R E C s 培养于R P M I -1640培养基中,含10%胎牛血清㊁100U /m L 青霉素和链霉素,将培养基置于37ħ㊁5%C O 2的培养箱24h ,收集处于对数期的细胞㊂将h R E C s 细胞随机分为C o n t r o l 组(h R E C s 细胞培养于葡萄糖含量为5m m o l /L 的正常培养基)㊁H G 组(h R E C s 细胞培养于含25m m o l /L 葡糖糖培养基)㊁A P S 组(h R E C s 细胞培养于含25m m o l /L 葡糖糖和300g/L 黄芪多糖培养基[8])和A P S+p c D N A 3.1-T X N I P 组(将h R E C s 细胞转染4μg p c D N A 3.1-T X N I P 质粒,后培养于含25m m o l /L 葡糖糖和300g/L 黄芪多糖培养基),各组细胞均培养48h 后进行后续研究㊂1.3 C C K -8检测细胞增殖能力 将h R E C s 细胞接种于96孔板中,每孔细胞密度为1.5ˑ104个/m L ,培养细胞于37ħ环境及质量分数为5%C O 2的培养箱,分别在培养24h ㊁48h ㊁72h 时将C C K -8溶液(100μL )加入到孔板中,后培养细胞于37ħ环境及质量分数为5%C O 2的培养箱,3.5h 后于酶标仪450n m 处测定酶标仪D O 值㊂该实验重复3次取均值㊂1.4 流式细胞仪检测细胞凋亡 将h R E C s 细胞接种于96孔板中,每孔细胞密度为1.5ˑ104个/m L ,培养细胞于37ħ环境及质量分数为5%C O 2的培养箱24h ,分别将1ˑb i n d i n g bu f f e r ㊁10μL a n n e x i n V 和20μL P I 加入到孔板中培养,后将原有的培养基弃掉,将提前配制好的A n n e x i n V /P I 染液加入到孔板中,常规孵育,将胰蛋白酶裂解液分别加入到孔板的每孔中,裂解细胞呈悬液于流式细胞仪上检测㊂该实验重复3次取均值㊂1.5 2,7-二氯荧光素二乙酸酯(2',7'-D I C H L O -R O F L U O R E S C I N D I A C E T A T E ,D C F H-D A )荧光探针检测活性氧(R E A C T I V E O X Y G E N S P E C I E S,R O S)水平将h R E C s 细胞接种于6孔板中孵育1.5h ,P B S 洗涤细胞后,加入提前用P B S 稀释为10μm o l/L 的D C F H-D A 荧光探针,孵育于37ħ避光的环境中,30m i n 后用P B S 再次洗涤细胞,P B S 重悬收集细胞,通过荧光显微镜观察细胞中R O S 水平㊂该实验重复3次取均值㊂1.6 检测细胞中氧化应激和炎症因子水平 将各组h R E C s 中加入R I P A 裂解细胞,根据试剂盒说明书,分别检测细胞裂解液中S O D ㊁M D A ㊁G S H-P x㊁I L -1β㊁I L -18水平㊂1.7 蛋白质印迹法检测细胞中T X N I P ㊁N L R P 3㊁I L-1β和ca s p a s e -1蛋白表达 用B C A 法测定细胞中总蛋白浓度㊂热水煮沸蛋白样品(终浓度为2μg㊃m L -1)10m i n ,保存于-20ħ环境㊂取蛋白上样50μg ,加入将上样缓冲液后煮沸,将变性的蛋白样品用S D S -P A G E 分离,后转移蛋白样品于P V D F 膜上,加入质量分数为5%的脱脂牛奶(5%)封闭,1h 后用T B S T 溶液清洗P V D F 膜,后加入一抗(1:1000),在4ħ避光环境下孵育一抗过夜;后将H R P标记的二抗(1:5000)加入细胞中,常温孵育2h㊂将E C L 发光液加入细胞显影,曝光后对各组细胞蛋白条带用I m a g e L a b 软件分析㊂1.8 统计学分析 实验数据采用G r a p h p a d p r i a m 8.0软件进行统计学分析㊂数据以均值ʃ标准差(M e a n ʃS D )表示㊂不同组间数据采用重复测量方差和单因素方差(o n e -w a y A N O V A )分析,各组间两两比较采用L S D-t 检验,实验结果以P <0.05表示差异有统计学意义㊂2 结果2.1 各组细胞增殖和凋亡率比较 和C o n t r o l 组相比,H G 组细胞存活率降低,细胞凋亡率增加(t 存活率=10.80,t 凋亡率=13.04,P<0.0001);和H G 组相比,A P S 组细胞存活率增加,细胞凋亡率降低(t 存活率=9.408,t 凋亡率=8.846,P <0.0001);和A P S 组相比,A P S +p c D N A 3.1-T X N I P 组细胞存活率降低,细胞凋亡率增加(t 存活率=8.318,t 凋亡率=8.126,P <0.0001)(图1)㊂2.2 各组细胞R O S 水平比较 H G 组细胞中R O S相对荧光强度高于C o n t r o l 组(t=16.91,P<0.0001);A P S 组细胞中R O S 荧光相对强度低于H G 组(t =12.93,P <0.0001);A P S +p c D N A 3.1-T X N I P 组细胞中R O S 相对荧光强度高于A P S 组(t生命科学仪器 2023年第21卷/第6期研究报告67=12.50,P <0.0001)(图2)㊂A :各组细胞存活率比较;B:流式细胞仪检测细胞凋亡;C :各组细胞凋亡率比较㊂v s C o n t r o l 组*P <0.05;v s H G 组#P <0.05;v s A P S 组әP <0.05㊂图1 各组细胞增殖和凋亡率比较n =6A :D C F H-D A 荧光探针检测细胞中R O S 水平;B :各组细胞中R O S 水平比较㊂和C o n t r o l 组相比*P <0.05;和H G 组相比#P <0.05;和A P S 组相比әP <0.05㊂图2 各组细胞R O S 水平比较n =62.3 各组细胞中氧化应激指标比较 和C o n t r o l 组相比,H G 组细胞中S O D 活性和G S H-P x 含量降低,M D A 含量增加(t S O D =10.78,t G S H-P x=10.87,t M D A =12.38,P <0.0001);和H G 组相比,A P S 组细胞中S O D 活性和G S H-P x 含量增加,M D A 含量降低(t S O D =10.63,t G S H-P x =7.801,t M D A =7.757,P<0.0001);和H G 组相比,A P S+p c D -N A 3.1-T X N I P 组细胞中S O D 活性和G S H-P x含量降低,M D A 含量增加(t S O D =9.362,t G S H-P x =7.549,t M D A =8.571,P <0.0001)(图3)㊂A :细胞中S O D 活性;B :细胞中M D A 含量比较;C :细胞中G S H-P x 含量比较㊂和C o n t r o l 组相比*P <0.05;和H G 组相比#P <0.05;和A P S 组相比әP <0.05㊂图3 各组细胞S O D 活性和M D A ㊁G S H-P x 含量比较n =62.4 各组细胞中炎症因子含量比较 和C o n t r o l 组相比,H G 组细胞中I L -1β和IL -18含量增加(t I L -1β=11.78,t I L -18=13.49,P<0.0001);和H G 组相比A P S 组细胞中I L -1β和IL -18含量均降低(t I L -1β=8.791,t I L -18=9.094,P<0.0001);和A P S 组相比,A P S +p c D N A 3.1-T X N I P 组细胞中I L -1β和IL -18含量增加(t I L -1β=7.832,t I L -18=8.585,P <0.0001)(图4)㊂A :细胞中I L -1β含量比较;B :细胞中I L -18含量比较㊂和C o n t r o l 组相比*P <0.05;和H G 组相比#P <0.05;和A P S 组相比әP <0.05㊂图4 各组细胞中I L -1β和IL -18含量比较n =62.5 各组细胞中T X N I P ㊁N L R P 3㊁I L-1β㊁c a s p a s e -1蛋白表达比较 和C o n t r o l 组相比,H G 组细胞中T X N I P ㊁N L R P 3㊁I L -1β㊁c a s p a s e -1蛋白表达均增加(t T X N I P =11.56,t N L R P 3=9.311,t I L -1β=9.640,t c a s p a s e -1=12.93,P<0.0001);和H G 组相比,A P S 组细胞中TX N I P ㊁N L R P 3㊁I L -1β㊁c a s p a s e -1蛋白均降低(t T X N I P =8.993,t N L R P 3=6.114,t I L -1β=6.020,t c a s p a s e -1=10.47,P<0.0001);和A P S 组相比,A P S +p c D N A 3.1-T X N I P 组细胞中T X N I P ㊁N L R P 3㊁IL -1β㊁c a s p a s e -1蛋白均增加(t T X N I P =9.242,t N L R P 3=6.123,t I L -1β=6.015,t c a s p a s e -1=10.65,P <0.0001)(图5)㊂A :细胞中T X N I P ㊁N L R P 3㊁I L -1β㊁c a s p a s e -1蛋白条带图;B :细胞中T X N I P 蛋白表达比较;C :细胞中N L R P 3蛋白表达比较;D :细胞中I L-1β蛋白表达比较;E :细胞中c a s pa s e -1蛋白表达比较㊂和C o n t r o l 组相比*P <0.05;和H G 组相比#P <0.05;和A P S 组相比әP <0.05㊂图5 各组细胞中T X N I P ㊁N L R P 3㊁I L -1β㊁c a s pa s e -1蛋白表达比较n =63 讨论目前,临床目前常采用激光凝术㊁玻璃体手术等方法治疗D R ,虽能改善患者症状,但由于会损伤视力及使产生不适使患者不易接受㊂因此,探究有效治疗D R 药物对改善患者生活质量尤为重要㊂S u n 等[6]学者研究发现,A P S 治疗糖尿病大鼠,可有效改善心肌组织损伤㊂彭涛等[7]研究证实,A P S 对急性高眼压大鼠视网膜可发挥保护作用㊂赖莉研究报告生命科学仪器 2023年第21卷/第6期68等[8]研究证实,A P S 可通过介导T r a f 6/T A K 1信号通路保护视网膜㊂还有研究发现[9],A P S 可通过抑制多种因素诱导的血管内皮细胞凋亡㊂本研究结果显示,H G 组h R E C s 存活率明显降低,凋亡率明显增加,A P S 干预后,h R E C s 存活率明显增加,凋亡率明显降低,提示A P S 可保护视网膜内皮细胞损伤,对D R 发挥治疗作用㊂闫丰华等[10]研究证实,黄芪多糖可减轻大鼠糖尿病视网膜损伤,从而对视网膜发挥保护作用㊂研究发现[11],高糖环境下视网膜内皮细胞中的氧化应激和D R 发生发展密切相关,当细胞内的氧化平衡状态被破坏,导致细胞过度凋亡,进而影响内皮细胞的功能㊂R O S ㊁S O D ㊁M D A 和G S H-P x指标是检测氧化应激反应的常用标志物㊂本研究结果显示,A P S 可抑制高糖诱导h R E C s 中M D A 含量和R O S 含量,增加S O D 活性和G S H-P x 含量,提示A P S 可提高高糖诱导h R E C s 抗氧化能力,减少氧化损伤㊂汪洋等[12]研究发现,达格列净对人视网膜血管内皮细胞氧化应激和凋亡发挥抑制作用,从而通过减轻细胞损伤保护D R ㊂炎性细胞因子可介导D R 进程,当视网膜炎症和白细胞黏附于D R 微血管时,可对血-视网膜屏障的破坏发挥促进作用㊂研究报道[13],I L-1β在D R 发展中发挥重要作用,而I L -1β的成熟及释放都受到N L R P 3炎症小体的调控㊂N L R P 3炎症小体异常激活可通过活化c a s p a s e -1和I L -1β等效应分子介导机体的炎症和免疫过程㊂Z h e n g 等[14]研究证实,阻断糖尿病视网膜中N L R P 3炎症小体的形成可抑制其损伤㊂由此,N L R P 3炎症小体可能是治疗D R 的重要靶点㊂T X N I P 是硫氧还蛋白的内源性抑制蛋白,当其与硫氧还原蛋白的活性部分结合时,会导致细胞内活性氧化物积累,进而导致机体损伤;T X N I P 还能通过激活N L R P 3炎症小体对炎症发挥促进作用㊂冯梅等[15]通过体内实验发现,富氢水可通过抑制T X N I P /N L R P 3通路的激活降低D R 大鼠视网膜血管通透性,减轻视网膜神经元损伤㊂本研究结果显示,A P S 可抑制高糖诱导h R E C s 中T X N I P ㊁N L R P 3㊁I L -1β㊁c a s p a s e -1蛋白表达,由此猜测,A P S 可能通过抑制T X N I P /N L -R P 3通路的激活减轻高糖诱导h R E C s 凋亡㊁炎症和氧化应激损伤,对视网膜发挥保护作用㊂为了验证这一猜想,本研究采用过表达T X N I P 和A P S 共同干预高糖诱导h R E C s ,结果显示,pc D N A 3.1-T X -N I P 可减弱A P S 对高糖诱导h R E C s 凋亡㊁炎症和氧化应激损伤的抑制作用㊂综上所述,黄芪多糖可抑制高糖诱导的视网膜内皮细胞凋亡㊁炎症反应和氧化应激损伤,其作用机制可能和抑制T X N I P /N L R P 3通路激活有关㊂由于时间和成本等因素,本研究未设置单独的过表达T X N I P 分组或抑制T X N I P 组,可能使本研究结果存在一定局限性,在今后的研究中会增加单独过表达T X N I P 组或敲减T X N I P 组进行对照,进一步证实黄芪多糖能通过调控T X N I P /N L R P 3通路对高糖诱导的视网膜内皮细胞发挥作用,进而为临床治疗糖尿病视网膜病变提供更多的实验依据㊂参考文献[1]Y a o X ,Z h a o Z ,Z h a n g W ,e t a l .S pe c i a l i z e d R e t i n a l E n d o t h e l i a l C e l l s M o d u l a t e B l o o d -R e t i n a B a r r i e r i n D i a b e t i c R e t i n o p a t h y[J ].D i a b e t e s ,2024,73(2):225-236.[2]D h a r m a r a ja n S ,C a r r i l l o C ,Q i Z ,e t a l .R e t i n a l i n f l a m m a t i o n i n m u r i n e m o d e l s o f t y p e 1a n d t y p e 2d i ab e t e s w i t h d i a b e t ic r e t i n o pa -t h y [J ].D i ab e t o l o g i a ,2023,66(11):2170-2185.[3]S i n g h L P ,Y u m n a mc h a T ,S w o r n a l a t a D e v i T .M i t o p h a gi c F l u x D e r e g u l a t i o n ,L ys o s o m a l D e s t a b i l i z a t i o n a n d N L R P 3I n f l a m m a -s o m e A c t i v a t i o n i n D i a b e t i c R e t i n o p a t h y:P o t e n t i a l s o f G e n e T h e r -a p y T a r g e t i n g T X N I P a n d T h e R e d o x S y s t e m [J ].O ph t h a l m o l R e s R e p,2018,3(1):O R R T -126.[4]L i a n L ,L e Z ,W a n g Z ,e t a l .S I R T 1I n h i b i t s H i gh G l u c o s e -I n -d u c e d T X N I P /N L R P 3I n f l a m m a s o m e A c t i v a t i o n a n d C a t a r a c tF o r m a t i o n [J ].I n v e s t O p h t h a l m o l V i s S c i ,2023,64(3):16.[5]J i a n g X ,L i Y ,F u D ,e t a l .C a v e o l i n -1a m e l i o r a t e s a c e t a m i n o -p h e n -a g g r a v a t e d i n f l a m m a t o r y d a m a g e a n d l i p i d d e po s i t i o n i n n o n -a l c o h o l i c f a t t yl i v e r d i s e a s e v i a t h e R O S /T X N I P /N L R P 3p a t h -w a y [J ].I n t I m m u n o ph a r m a c o l ,2023,114:109558.[6]S u n S ,Y a n g S ,Z h a n g N ,e t a l .A s t r a g a l u s p o l ys a c c h a r i d e s a l l e -v i a t e s c a r d i a c h y p e r t r o p h y i n d i a b e t i c c a r d i o m y o p a t h y v i a i n h i b i t i n gt h e B M P 10-m e d i a t e d s i g n a l i n g p a t h w a y [J ].P h yt o m e d i c i n e ,2023,109:154543.[7]彭涛,于丹丹,谢美娜,等.黄芪多糖对高眼压大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响[J ].中国临床药理学杂志,2020,36(10):1344-1346.[8]赖莉,覃晖.黄芪多糖通过T R A F 6/T A K 1信号通路调节视网膜神经节细胞的炎症反应[J ].中国中医眼科杂志,2019,29(6):434-437.[9]王忠庆,蔡帆,诸波,等.黄芪多糖对大鼠缺氧/复氧诱导的心肌细胞自噬及凋亡抑制作用的机制探讨[J ].中国循环杂志,2022,37(2):185-192.[10]闫丰华,焦禄安,郑加军,等.黄芪多糖对糖尿病模型大鼠视网膜病变及血清胱抑素C 的影响[J ].热带医学杂志,2019,19(7):813-816,804.[11]H a y d i n ge r C D ,O l i v e r G F ,A s h a n d e r L M ,e t a l .O x i d a t i v e S t r e s s a n d I t s R e g u l a t i o n i n D i a b e t i c R e t i n o p a t h y[J ].A n t i o x i d a -n t s (B a s e l ),2023,12(8):1649.[12]汪洋,王可,刘宝兰.达格列净对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞凋亡及氧化应激的影响[J ].国际眼科杂志,2022,22(3):378-382.[13]R a m a n K S ,M a t s u b a r a J A.D y s r e gu l a t i o n o f t h e N L R P 3I n f l a m -m a s o m e i n D i a b e t i c R e t i n o p a t h y a n d P o t e n t i a l T h e r a p e u t i c T a r -ge t s [J ].O c u l I m m u n o l I nf l a m m ,2022,30(2):470-478.[14]Z h e ng X ,Wa n J ,T a n G .T h e m e c h a n i s m s o f N L R P 3i n f l a m m a -s o m e /p y r o p t o s i s a c t i v a t i o n a n d t h e i r r o l e i n d i ab e t ic r e t i n o p a t h y.F r o n t I m m u n o l .2023A pr 25;14:1151185.[15]冯梅,江霞,王艳丽,等.富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路及视网膜血管通透性的影响[J ].安徽医药,2022,26(7):1367-1373.。
石见穿多糖抑制人胃癌细胞系MGC-803细胞迁移及其机制的初步研究朱红岩;孙玉国;曲杰;卞永生【摘要】Objective To investigate the effect of Salvia chinensisBenth.Polysaechandes (SBP) on the metastasis ability of human gastric cancer cell line (MGC-803 cells) in vitro, and to explore the action mechanisms of SBP. Methods SBP prepared by extraction of water, the effect of the different concentration of SBP on the experimental metastasis ability of MGC-803 cells was observed by scratch test and Transwell metastasis experiments. The level of IL-8 protein in MGC-803 cells were detected by Western Blotting. Results Compared with control group (no drug), SBP (50 and 100 g/L) inhibited the MGC-803 cells wound, MG-63 cells scratches healed was significantly weakened, number of cells passing through filter membrane would decrease. The level of IL-8 protein in MG-63 cells decreased significantly after treated with SBP and correlation with the concentration of SBP. Conclusion SBP ia able to inhibit the metastasis ability of MGC-803 cells. The action mechanisms of SBP are related to the inhibition of IL-8 protein levels in MGC-803 cells.%目的观察石见穿多糖对人胃癌细胞系MGC-803细胞迁移能力的影响,并探讨其作用机制.方法利用水萃取法制备石见穿多糖,通过划痕实验、Transwell实验观察不同浓度对石见穿多糖同样条件培养下胃癌MGC-803细胞迁移能力的影响,并采用Western blot方法检测不同浓度石见穿多糖对MGC-803细胞内白介素8(IL-8)蛋白表达水平的影响.结果同未加药物对照组相比,经高浓度石见穿多糖(50、100 g/L)处理后,MG-63细胞的划痕愈合能力明显减弱,穿膜细胞的数量显著减少;同时,细胞内IL-8蛋白的表达水平明显降低,并与石见穿多糖的浓度有关.结论石见穿多糖抑制了胃癌MGC-803细胞的迁移能力,其作用与抑制MGC-803细胞内的IL-8蛋白表达水平有关.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2012(009)032【总页数】3页(P5-7)【关键词】石见穿多糖;MGC-803细胞;白介素8;迁移【作者】朱红岩;孙玉国;曲杰;卞永生【作者单位】承德医学院,河北承德,067000;承德医学院,河北承德,067000;承德医学院附属医院,河北承德,067000;河北省保定市第一医院,河北保定,071000【正文语种】中文【中图分类】R730.52石见穿为唇形科植物华鼠尾Salvia chinensis Benth.的全草，味苦、辛，性平，具有清热解毒、活血镇痛的功能。
